CN101284817A

CN101284817A - 制备咪唑基化合物的方法

Info

Publication number: CN101284817A
Application number: CNA200810087095XA
Authority: CN
Inventors: 吴文学; 闫杰; 张海明
Original assignee: Lexicon Genetics Inc
Current assignee: Lexicon Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2007-04-12
Filing date: 2008-04-11
Publication date: 2008-10-15
Anticipated expiration: 2028-04-11
Also published as: NZ579691A; US20080262241A1; AU2008240251A1; JP5398698B2; EP2139864B1; EA017076B1; TW200902502A; KR20100015463A; WO2008128041A3; ZA201006678B; BRPI0810993A2; UY31013A1; JP2010523706A; WO2008128041A2; US8093280B2; EP2139864A2; ECSP099680A; IL201075A0; AR065980A1; CL2008001042A1

Abstract

本发明公开了制备咪唑基化合物的方法。特定化合物由式I表示。

Description

制备咪唑基化合物的方法

本申请要求2007年4月12日提交的美国临时申请60/923,029的优先权，其作为参考被全文并入本文。

技术领域

本发明涉及合成咪唑基化合物的方法。

背景技术

化合物1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮(THI)是焦糖色素III(Carmel Color III)的次要组份，并且据报道降低大鼠中循环淋巴细胞数。已经报道了制备THI的方法。参见例如

U.和Rosdorfer，J.，J.Org.Chem.50：1131-1133(1985)；

等人的美国专利4,567,194；Cliff，M.D.和Pyne，S.G.，Tet.Lett.36(33)：5969-5972(1995)；Cliff，M.D.和Pyne，S.G.，J.Org.Chem.62：1023-1032(1997)。据报道，一个特别的方法以46％的总收率得到THI。参见Halweg，K.M.和Büchi，G.，J.Org.Chem.50：1134-1136，1135(1985)。

最近报道说某些咪唑基化合物是强力的免疫应答抑制剂，并且可用于治疗例如类风湿性关节炎和I型糖尿病等疾病。参见Augeri等人2007年1月25日提交的美国专利申请11/698,253。为了便于它们的试验和使用，期望另外的合成方法。

发明内容

本发明包括制备式I的化合物的方法：

其中：X为任选地被取代的烷基；R₁为任选地被取代的烷基；R₂为氢、卤素、腈、或任选地被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、杂烷基、杂环、烷基杂环、或杂环基烷基；和R₃为氢或任选地被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、杂烷基、杂环、烷基杂环、或杂环基烷基。

本发明还包括提高式I化合物的混合物中主要异构体与次要异构体(主要∶次要)的比例的方法。

本发明还包括制备1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮的方法。

附图说明

通过参考以下附图理解本发明的某些方面：

图1表示(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟和(Z)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟的混合物的¹H NMR光谱。

图2提供代表性的流式细胞术(FACS)点状图，表示对于所有小鼠(n＝3)而言，媒介物对照(VC)、(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟(化合物1)、和THI对胸腺的T细胞组成(CD4+和CD8+)的影响，以及平均值/Sd。

图3提供代表性的FACS点状图，表示媒介物对照(VC)、(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟(化合物1)、和THI对小鼠中CD4+细胞的子集(新近胸腺迁出细胞)的影响。

图4提供代表性的FACS点状图，表示媒介物对照(VC)、(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟(化合物1)、和THI对小鼠中CD8+细胞的子集(新近胸腺迁出细胞)的影响。

图5表示媒介物对照、THI、(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟(化合物1)、和1-(4-甲基-5-((1S，2R，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)噻唑-2-基)乙酮(化合物2)对小鼠全血计数的影响。

图6表示(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟的单次口服剂量给予对小鼠的胶原蛋白诱导的关节炎的影响。

图7表示(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟的单次口服剂量给予对恒河猴的白细胞和淋巴细胞计数的影响。

发明详述

本发明部分地基于制备式I的化合物的新方法的发现。这些化合物包括(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟，其影响1-磷酸鞘氨醇途径，并且被认为可用于治疗疾病，例如类风湿性关节炎和I型糖尿病。参见Augeri等人于2007年1月25日提交的美国专利申请11/698,253。该特别方法最适合于这种化合物的大规模(例如，千克规模)生产。

本发明还基于生产1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮(THI)的新方法的发现。该特别的方法以高收率提供该化合物。

定义

除非另有说明，术语“烯基”是指直链、支链和/或环状的烃，具有2到20(例如，2到10或2到6)个碳原子，并且包括至少一个碳碳双键。代表性的烯基包括乙烯基、烯丙基、1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2，3-二甲基-2-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、1-辛烯基、2-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、2-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、2-癸烯基和3-癸烯基。

除非另有说明，术语“烷氧基”是指-O-烷基基团。烷氧基的实例包括但不限于-OCH₃、-OCH₂CH₃、-O(CH₂)₂CH₃、-O(CH₂)₃CH₃、-O(CH₂)₄CH₃、和-O(CH₂)₅CH₃。术语“低级烷氧基”是指-O-(低级烷基)。

除非另有说明，术语“烷基”是指直链、支链和/或环状的(“环烷基”)烃，具有1到20(例如，1到10或1到4)个碳原子。具有1到4个碳的烷基称为“低级烷基”。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、异己基、庚基、4，4-二甲基戊基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基和十二烷基。环烷基部分可为单环的或多环的，并且其实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、和金刚烷基。烷基的另外的例子具有直链、支链和/或环状部分(例如，1-乙基-4-甲基-环己基)。术语“烷基”包括饱和烃以及烯基和炔基。

除非另有说明，术语“烷基芳基”或“烷基-芳基”是指结合于芳基部分的烷基部分。

除非另有说明，术语“烷基杂芳基”或“烷基-杂芳基”是指结合于杂芳基部分的烷基部分。

除非另有说明，术语“烷基杂环”或“烷基-杂环”是指结合于杂环部分的烷基部分。

除非另有说明，术语“炔基”是指直链、支链和/或环状的烃，具有2到20(例如，2到20或2到6)个碳原子，并且包括至少一个碳-碳三键。代表性的炔基部分包括乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-甲基-1-丁炔基、4-戊炔基、1-己炔基、5-己炔基、1-庚炔基、2-庚炔基、6-庚炔基、1-辛炔基、2-辛炔基、7-辛炔基、1-壬炔基、2-壬炔基、8-壬炔基、1-癸炔基、2-癸炔基、和9-癸炔基。

除非另有说明，术语“芳基”是指由碳和氢原子组成的芳香环或芳香性或部分芳香性环状系统。芳基部分可以包括结合或稠合在一起的多个环。芳基的实例包括但不限于蒽基、薁基、联苯基、芴基、茚满、茚基、萘基、菲基、苯基、1，2，3，4-四氢化萘、和甲苯基。

除非另有说明，术语“芳基烷基”或“芳基-烷基”是指结合于烷基部分的芳基部分。

除非另有说明，术语“E∶Z异构体比例”，当在指化合物的E异构体与其相应的Z异构体的混合物时，是指那些异构体的比例。这种比例可以通过本领域已知的各种方法测定，包括色谱法(例如，HPLC)和光谱法(例如，NMR、拉曼光谱、和红外吸收光谱)。

除非另有说明，术语“卤素”和“卤代”包括氟、氯、溴、和碘。

除非另有说明，术语“杂烷基”是指烷基部分(例如，直链的、支链的或环状的)，其中其碳原子的至少一个已经被杂原子替换(例如，N、O或S)。

除非另有说明，术语“杂芳基”是指其中至少一个碳原子被杂原子(例如，N、O或S)代替的芳基部分。实例包括但不限于吖啶基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并异噻唑基、苯并异噁唑基、苯并喹唑啉基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、呋喃基、咪唑基、吲哚基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、2，3-二氮杂萘基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基(pyrimidinyl)、嘧啶基(pyrimidyl)、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、四唑基、噻唑基、和三嗪基。

除非另有说明，术语“杂芳基烷基”或“杂芳基-烷基”是指结合于烷基部分的杂芳基部分。

除非另有说明，术语“杂环”是指由碳、氢和至少一个杂原子(例如，N、O或S)组成的芳香性、部分芳香性或非芳香性的单环或多环的环或环状系统。杂环可以包括稠合或结合在一起的多个(即，两个或更多个)环。杂环包括杂芳基。实例包括但不限于苯并[1，3]二氧杂环戊烯基、2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂芑基、1，2-二氮杂萘基、呋喃基、乙内酰脲基(hydantoinyl)、吗啉基、氧杂环丁基、环氧乙烷基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢噻吩基、四氢噻喃基、和戊内酰胺基(valerolactamyl)。

除非另有说明，术语“杂环基烷基”或“杂环-烷基”是指结合于烷基部分的杂环部分。

除非另有说明，术语“杂环烷基”是指非芳香族的杂环。

除非另有说明，术语“杂环烷基烷基”或“杂环烷基-烷基”是指结合于烷基部分的杂环烷基部分。

除非另有说明，术语“主要异构体∶次要异构体比例”，在提及化合物的两种异构体—主要异构体(即，以大于50重量％存在的异构体)与其相应的次要异构体(即，以少于50重量％存在的异构体)—的混合物时，是指那些异构体的比例。这种比例可以通过本领域已知的各种方法测定，包括色谱法(例如，HPLC)和光谱法(例如，NMR、拉曼、和红外吸收)。在用于提及包含肟部分的化合物时，术语“主要∶次要异构体比例”是指肟的几何结构。因此，如果包括肟部分的化合物具有另外的立构中心，则该术语是指包括一种构型的肟的非对映异构体与包括另一种构型的肟的非对映异构体的比例。

除非另有说明，术语化合物的“立体异构体富集的组合物”是指所述化合物及其立体异构体的混合物，其包含比其立体异构体更多的所述化合物。例如，(S)-丁-2-醇的立体异构体富集的组合物包括比例为约60/40、70/30、80/20、90/10、95/5和98/2的(S)-丁-2-醇以及(R)-丁-2-醇的混合物。

除非另有说明，术语“立体异构体混合物”包括外消旋混合物以及立体异构体富集的混合物(例如，R/S＝30/70、35/65、40/60、45/55、55/45、60/40、65/35和70/30)。

除非另有说明，术语“立体异构纯”是指组合物包括化合物的一种立体异构体并且基本上不含该化合物的其它立体异构体。例如，具有一个立构中心的化合物的立体异构纯组合物基本上不含该化合物的相反立体异构体。具有二个立构中心的化合物的立体异构纯物基本上不含该化合物的其它非对映异构体。对于具有多个立构中心的化合物，但是其描绘或命名方式为定义了少于其所有的立构中心的立体化学，其立体异构纯的组合物为基本上不含在定义的立体化学的立构中心处具有不同立体化学的该化合物的异构体。例如，“立体异构纯的((1R)-1，2-二氯丙基)苯”是指基本上不含((1S)-1，2-二氯丙基)苯的((1R)-1，2-二氯丙基)苯。

典型的立体异构纯化合物包括超过约80重量％的该化合物的一种立体异构体和少于约20重量％的该化合物的其它立体异构体，超过约90重量％的该化合物的一种立体异构体和少于约10重量％的该化合物的其它立体异构体，超过约95重量％的该化合物的一种立体异构体和少于约5重量％的该化合物的其它立体异构体，超过约95重量％的该化合物的一种立体异构体和少于约5重量％的该化合物的其它立体异构体，或超过约99重量％的该化合物的一种立体异构体和少于约1重量％的该化合物的其它立体异构体。

除非另有说明，术语“取代的”，在描述化学结构或部分时，是指该结构或部分的衍生基团，其中所述结构或部分中的一个或多个其氢原子被化学部分或官能团代替，所述化学部分或官能团例如但不限于醇、醛、烷氧基、烷酰氧基、烷氧基羰基、烯基、烷基(例如，甲基、乙基、丙基、叔丁基)、炔基、烷基羰基氧基(-OC(O)烷基)、酰胺(-C(O)NH-烷基-或-烷基NHC(O)烷基)、脒基(amidinyl)(-C(NH)NH-烷基-或-C(NR)NH₂)、胺(伯胺、仲胺和叔胺，例如烷基氨基、芳基氨基、芳基烷基氨基)、芳酰基、芳基、芳基氧基、偶氮、氨基甲酰基(carbamoyl)(-NHC(O)O-烷基-或-OC(O)NH-烷基)、氨基甲酰基(carbamyl)(例如，CONH₂、以及CONH-烷基、CONH-芳基、和CONH-芳基烷基)、羰基、羧基、羧酸、羧酸酐、羧酰氯、氰基、酯、环氧化物、醚(例如，甲氧基、乙氧基)、胍基、卤代、卤代烷基(例如，-CCl₃、-CF₃、-C(CF₃)₃)、杂烷基、半缩醛、亚胺(伯亚胺和仲亚胺)、异氰酸酯、异硫氰酸酯、酮、腈、硝基、氧代、磷酸二酯、硫化物、胺磺酰基(例如，SO₂NH₂)、砜、磺酰基(包括烷基磺酰基、芳基磺酰基、和芳基烷基磺酰基)、亚砜、硫醇(例如，巯基、硫醚)、和脲(NHCONH-烷基)。

除非另有说明，化合物的“治疗有效量”是化合物的足以在疾病或状况的治疗或应对中提供治疗益处、或延迟与该疾病或状况相关的一种或多种症状或使其最小化的量。化合物的“治疗有效量”是指治疗剂单独或与其它治疗组合，在疾病或状况的治疗或应对中提供治疗性益处的量。术语“治疗有效量”可以包括改善全面治疗、减少或避免疾病或状况的症状或病因、或提高另一种治疗剂的治疗效力的量。

除非另有说明，术语“治疗”考虑了在患者患有所述疾病或病症时发生的行为，其降低该疾病或病症的严重程度、或延迟或减缓该疾病或病症的进展。

除非另有说明，短语“大于X”，在X为数字时，与“X或大于X”具有相同的含义。同样地，短语“大于约X”，在X为数字时，与“约X或大于约X”具有相同的含义。

除非另有说明，短语“小于X”，在X为数字时，与“X或小于X”具有相同的含义。同样地，短语“小于约X”，在X为数字时，与“约X或小于约X”具有相同的含义。

除非另有说明，术语“包括”与“包含”具有相同的含义，并且术语“包括”与“包括但不限于”具有相同的含义。同样地，术语“例如”与术语“例如但不限于”具有相同的含义。

除非另有说明，在一系列名词前面紧相连的一个或多个形容词被认为是修饰每个名词。例如，短语“任选被取代的烷基、芳基、或杂芳基”与“任选被取代的烷基、任选被取代的芳基、或任选被取代的杂芳基”具有相同的含义。

需要指出的是，构成较大化合物的一部分的化学部分在本文中可使用当其作为单个分子存在时通常采用的名称或当其作为取代基时通常采用的名称进行描述。例如，术语“吡啶”和“吡啶基”当用于描述与其它化学部分结合的部分时具有相同含义。因此，两个词语“XOH，其中X是吡啶基”和“XOH，其中X是吡啶”具有相同含义，并且包括吡啶-2-醇、吡啶-3-醇和吡啶-4-醇。

还需要指出的是，如果某一结构或某一结构的一部分的立体化学没有用例如粗体线或虚线表示时，则该结构或该结构的一部分可被解释为包括该结构的所有立体异构体。另外，图中显示的具有不饱和原子价的任何原子被假设为与足够的氢原子结合从而满足原子价。另外，用与一条虚线平行的一条实线描述的化学键，如果原子价允许的话，包括单键和双键(例如芳族)。

合成方法

本发明包括制备式I的化合物的方法：

其中：X为任选地被取代的烷基；R₁为任选地被取代的烷基；R₂为氢、卤素、腈、或任选地被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、杂烷基、杂环、烷基杂环、或杂环基烷基；和R₃为氢或任选地被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、杂烷基、杂环、烷基杂环、或杂环基烷基；所述方法包括：

在足以形成式I化合物的E和Z异构体的混合物的条件下使式II的化合物：

接触式III的化合物：

H₂N-OR₃

III

并且使E和Z异构体的混合物接触强酸。

另一个实施方案包括增加式I化合物的混合物中主要∶次要异构体比例的方法：

其包括：

在足以提供式I化合物的第二混合物的条件下使包括式I化合物的第一混合物的溶液接触强酸，其中：

第一混合物的主要∶次要异构体比例低于第二混合物的主要∶次要异构体比例；X为任选地被取代的烷基；R₁为任选地被取代的烷基；R₂为氢、卤素、腈、或任选地被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、杂烷基、杂环、烷基杂环、或杂环基烷基；和R₃为氢或任选地被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、杂烷基、杂环、烷基杂环、或杂环基烷基。

在本文中公开的各种方法中，化合物(例如，式I、II和/或III的化合物)可作为溶剂化物和/或盐存在或作为溶剂化物和/或盐得到。

在特别的实施方案中，该溶液包括醇(例如，甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇)。

在另一个实施方案中，将溶液加热到大于约30℃(例如，大于约40℃、50℃或60℃)的温度。

在另一个实施方案中，主要∶次要异构体比例从低于约5∶1增加到大于约8∶1。在另一个实施方案中，主要∶次要异构体比例从低于约4∶1增加到大于约10∶1。在另一个实施方案中，主要∶次要异构体比例从低于约3∶1增加到大于约13∶1。

在另一个实施方案中，增加包括第二混合物的溶液的pH。在特定的方法中，pH增加到大于约6.0(例如，大于约7.0或8.0)。

对于本文中公开的各种方法，在适当的情况下，特定的实施方案为使得X为任选地被一个或多个羟基、乙酸根、或卤素部分取代的烷基。

在其它实施方案中，R₂为氢。

在其它实施方案中，R₃为氢。

在其它实施方案中，式I的化合物为式I(a)：

其中：R₄为OR_4A、OC(O)R_4A、N(R_4B)₂、NHC(O)R_4B、氢、或卤素；R₅为OR_5A、OC(O)R_5A、N(R_5B)₂、NHC(O)R_5B、氢、或卤素；R₆为OR_6A、OC(O)R_6A、N(R_6B)₂、NHC(O)R_6B、氢、或卤素；R₇为烷基、CH₂OR_7A、CH₂OC(O)R_7A、CH₂N(R_7B)₂、CH₂NHC(O)R_7B、氢、或卤素；和R_4A、R_5A、R_6A、R_7A、R_4B、R_5B、R_6B和R_7B中每个独立地为氢或任选地被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、杂烷基、杂环、烷基杂环、或杂环基烷基。

在其它实施方案中，式I(a)的化合物为立体异构纯的式I(b)的化合物：

对于结构I(a)和(b)，本发明的特定实施方案为使得R₄、R₅和R₆中的一个或多个为羟基或卤素。在其它实施方案中，R₄、R₅和R₆都是羟基或乙酸根。

强酸的实例包括氢碘酸、氢溴酸、盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、烷基磺酸、或芳烃磺酸。

本发明的特定实施方案表示在如下反应路线1中：

反应路线1

在这些方法中，(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟和(Z)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟的混合物中的E∶Z异构体比例提高。

该方法包括：使包含(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟和(Z)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟的第一混合物的溶液在足以提供(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟和(Z)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟的第二混合物的条件下接触强酸；其中第一混合物的E∶Z异构体比例低于第二混合物的E∶Z异构体比例。

在特定的实施方案中，通过使1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮在足以形成1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟的条件下接触羟胺来制备第一混合物。1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮可以通过使1-氨基-1-脱氧-D-果糖在足以形成1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮的条件下接触2-乙氧基丙烯腈来制备，如以下反应路线2所示：

反应路线2

有利地，本发明提供生产1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮的新方法。

一个实施方案提供制备1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮的方法，其包括：向包括2-乙氧基丙烯腈的溶液中加入第一部分的甲醇钠以提供第一混合物；使第一混合物接触1-氨基-1-脱氧-D-果糖，以提供第二混合物；向第二混合物加入第二部分的甲醇钠，以提供第三混合物；向第三混合物加入乙酸以提供第四混合物；和将第四混合物混合，混合时间和混合温度足以形成1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮。

在特定的方法中，第二混合物保持在大于约5℃的温度(例如，大于约10、15或20℃)。

在另一个实施方案中，第一混合物保持在大于约5℃的温度(例如，大于约10、15或20℃)。

在另一个实施方案中，加入的第一部分甲醇钠为大于约15重量％(例如，大于约20或25重量％)甲醇钠的甲醇溶液。

在另一个实施方案中，加入的第二部分甲醇钠为大于约15重量％(例如，大于约20或25重量％)甲醇钠的甲醇溶液。

在另一个实施方案中，1-氨基-1-脱氧-D-果糖以另外包括其乙酸盐的浆状物形式提供。

在另一个实施方案中，在向第三混合物加入乙酸之前，将其用水稀释。

在另一个实施方案中，将第四混合物加热到大于约30℃(例如，大于约35℃、40℃、45℃、50℃、55℃或60℃)的温度。

在另一个实施方案中，将第四混合物加热少于约5个小时(例如，少于约4、3、或2小时)。

在另一个实施方案中，以大于约50％的收率(例如，大于约55％、60％、65％、70％、75％、或80％)分离1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮。

实施例

通过以下实施例理解本发明的各个方面，但是不用于限制其范围。

实施例1：乙氧基丙烯腈的制备

向具有磁力搅拌棒、带有温度传感器的橡胶隔片、塑料塞、和带有气体鼓泡器的压力平衡加料漏斗的250ml的夹套3口圆底烧瓶中加入溴代乙醛二乙基缩醛(35.33g/179.28mmol)和氯化锡(II)(167.1mg/0.88mmol/0.5mol％)。将悬浮液冷却到3℃。然后在低于15℃的温度在11分钟内加入氰化三甲基甲硅烷(17.69g/178.31mmol)。将混合物在约10℃保持35分钟，然后在约20℃保持至少1.75小时，或直到GC分析显示溴代乙醛二乙基缩醛耗尽。

将上述浅黄色溶液用85ml MTBE稀释。在低于35℃的温度在6分钟内加入二乙胺(19.61g，268.11mmol/1.50当量)。将得到的浓稠浆状物用另外的25ml MTBE稀释。将反应混合物在约25℃搅拌至少1.75小时或直到通过GC分析反应完成。将混合物过滤并将收集的固体用MTBE洗涤(2×30ml)。将合并的滤液真空浓缩(最终真空度：约95托)。得到的粗的乙氧基丙烯腈(17.46g)简单过滤并且真空蒸馏，得到澄清的液体(11.2g，67％收率)。B.p.：46-49℃/31mm Hg.¹H NMR(CDCl₃)4.85(d，J＝3.54Hz，1H)，4.75(d，J＝3.28Hz，1H)，3.73(q，J＝6.99Hz，2H)，1.24(t，J＝6.95Hz，3H).¹³C NMR(CDCl₃)136.58，115.23，101.11，65.54，14.40。

实施例2：1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮的制备

向装备有机械搅拌器、温度控制器的12L三口圆底烧瓶中加入乙氧基丙烯腈(100.0g，1.03mol)和甲醇(HPLC级，1.0L，10X)。在15分钟内向搅拌的上述溶液中加入含甲醇钠的甲醇(25重量％，140.6ml，0.60当量)。将混合物在20℃搅拌至少3小时或直到¹H NMR下使至少95％的乙氧基丙烯腈转化为相应的亚胺酸酯。在15分钟内将上述溶液转移到果糖胺乙酸盐(246.9g，1.0当量，根据Hodge，J.E.；Fisher，B.E.，Methods in Carbohydrate Chemistry 11：99-103(1963)制备)在甲醇(1.0L，10X)中的浆状物中并将混合物在20℃搅拌6小时。在10分钟内向混合物加入另一部分的含甲醇钠的甲醇(25重量％，117.3ml，0.50当量)并将混合物在20℃搅拌另外的16小时。

然后将混合物用水(2.0L，20X)稀释并且用乙酸(118ml，2.0当量)处理。在60℃搅拌1小时之后，将溶液浓缩(50℃，200毫巴-70毫巴)到1.2L的总体积。将浆状物冷却到0℃并且搅拌1小时，然后过滤并将固体用水(100ml，x2)洗涤。收集固体并且在50℃真空干燥，得到196.8g粗产物，为浅黄色固体，然后将其用水(980ml，5X)处理并将得到的浆状物加热至沸腾达15分钟，然后再冷却到0℃并且搅拌另外的1小时。再次将混合物过滤并将固体用水洗涤(100ml，x2)并且在真空烘箱中在50℃干燥到恒重，得到194.8g(82％)标题产物(THI)，为浅黄色固体(KF＝0.4％)。¹H NMR(D₂O w/含一滴DCl的D₂O)7.48(d，J＝2.0Hz，0.9H)，7.19(d，J＝2.0Hz，0.1H)，5.09(s，0.9H)，4.98(s，0.1H)，3.40-3.70(m，4H)，2.53(d，J＝2.4Hz，3H)；¹³C NMR(D₂O w/含一滴DCl的D₂O)185.0，139.4，138.0，119.5，73.0，70.9，65.0，63.2，26.7；MH⁺＝231.2。

实施例3：(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟二水合物的制备

向装备有机械搅拌器、温度控制器和冷凝器的3L三口圆底烧瓶中加入1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮(100.0g，434.4mmol)、羟胺盐酸盐(45.2g，1.5当量)、乙酸钠(53.4g，1.5当量)和甲醇(HPLC级，1.0L，10X)。在搅拌下将上述溶液在65℃加热2小时。

然后在15分钟内向混合物中加入HCl的异丙醇溶液(通过在0℃将92.7ml乙酰氯缓慢加入到200ml异丙醇中新制备的，3.0当量)并将得到的混合物在65℃搅拌3小时。混合物用MeOH稀释(1.0L，10X)并且冷却到室温，通过过滤除去沉淀的氯化钠。固体用甲醇洗涤(100ml，1X)，溶液在40℃真空浓缩直到开始形成固体(约200ml)。然后加入水(1.0L，10X)，在40℃真空除去残余的有机溶剂。进行简单过滤得到澄清的黄色溶液。在室温下向该溶液中慢慢地添加50％的NaOH水溶液，使得混合物的温度不超过40℃，直到pH达到7.2(7.0-7.5)。然后将得到的溶液加热到65℃形成均匀溶液，在65℃(60-70℃)真空浓缩直到溶液达到约500ml(5X)的总体积。然后将混合物缓慢冷却到室温，在0℃搅拌1小时。过滤收集固体，用水洗涤(0℃，100ml，1X x2)，得到白色结晶固体。

向上述的湿固体中加入水(400ml)，得到的混合物在70-80℃加热直到完全溶解。将溶液冷却到室温然后在0℃搅拌1小时，过滤收集固体，并用水洗涤(0℃，100ml，1X x2)，然后在30℃真空干燥过夜，得到99.4g的标题化合物。NMR分析显示该物质包含约3％的Z异构体。

实施例4：无水(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟的制备

将得自实施例3的固体用EtOH打浆(800ml，8X)并且在75℃加热1小时。将得到的混合物冷却到0℃并且在0℃搅拌1小时。通过过滤收集白色固体并且用EtOH洗涤(0℃，100ml，1X，x2)并且在50℃真空干燥到恒重，得到标题化合物。NMR分析显示约2％的Z异构体。¹HNMR(D₂O)7.05(s，1H)，4.83(d，J＝3.6Hz，1H)，3.60-3.80(m，3H)，3.50(dd，J＝11.6，6.8Hz，1H)，2.11(d，J＝4.0Hz，3H)；¹H NMR(D₂O w/含一滴DCl的D₂O)7.30(s，1H)，5.04(s，1H)，3.45-3.75(m，4H)，2.13(s，3H)；¹³CNMR(D₂O w/含一滴DCl的D₂O)143.8，140.9，135.0，116.9，72.5，70.6，64.4，62.7，10.5；MH⁺＝246.1。

实施例5：E∶Z异构体比例的测定

式I化合物的E和Z异构体的相对量可以通过本领域技术人员已知的各种技术测定。例如，通过NMR可以容易地测定(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟和(Z)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟混合物中二者的相对量，如图1所示。

实施例5：测量对小鼠淋巴细胞的影响

通过经口管饲法或在饮用水中的方式给用化合物。对于口服给药实验，将结晶以10mg/ml悬浮在媒介物(例如水)中使化合物悬浮。用单一剂量100mg/kg的化合物(相当于每种化合物的100mpk的游离碱)和仅仅含媒介物的对照对小鼠(129/B6株的杂交第一代)进行管饲，然后送返回它们的笼子中。在剂量给药之后18小时使用异氟烷将小鼠麻醉，收集组织用于如下所述的分析。关于饮用水研究试验，以50mg/L将化合物溶解在含10g/L葡萄糖的酸化水(pH＝2.8)中。使小鼠自由摄取含化合物的水(或作为对照的葡萄糖溶液)达72小时。在72小时末，收集组织用于分析。

如下获得CBC测量数据。使用异氟烷将小鼠麻醉，从眼眶后丛收集血液进入EDTA血液收集管(Capiject-MQK，Terumo Medical Corp.，Elkton，MD)。使用Cell-Dyn 3500(Abbott Diagnostics，Abbott Park，IL)或HemaVet 850(Drew Scientific，Inc.，Oxford，CT)仪器进行自动CBC分析。

如下获得流式细胞术(FACS)测量数据。通过低渗休克将25μl的全血进行溶胞，在2ml的FACS洗涤缓冲液(FWB：PBS/0.1％BSA/0.1％NaN₃/2mM EDTA)中洗涤一次，并在黑暗中使用在50μl FWB稀释的与荧光染料结合的抗体的组合在4℃染色30分钟。染色后，用2ml的FWB洗涤细胞一次，然后将细胞悬浮在300μl FWB中用于收获。

进行脾和胸腺的非无菌摘除的标准程序。通过使组织强迫通过70μm细胞过滤器(Falcon，Becton Dickinson Labware，Bedford，MA)将器官分散为单细胞悬浮液中。对于FACS分析，通过低渗溶胞对RBC进行溶胞，洗涤，使用10μl抗-CD16/CD32(Fc Block^TM，BD-PharMingen，San Diego，CA)(在FWB中以1/10稀释)在4℃培养1×10⁶细胞达15分钟。使用在50-100μl FWB中稀释的与荧光染料结合的抗体的组合直接加入到在Fc Block中的细胞上对细胞染色，在黑暗中在4℃染色30分钟。染色后将细胞用1ml的FWB洗涤一次，并将细胞再悬浮在300μl的FWB中用于收获。除非另作说明，否则所有的抗体购自BD-PharMingen，San Diego，CA。使用FACSCalibur流式细胞仪和CellQuest Pro软件软件(Becton Dickinson Immunocytometry Systems，San Jose，CA)分析样品。

用于胸腺的抗体混合物是：TCRb APC Cy7；CD4 APC；CD8PerCP；CD69 FITC；和CD62L PEl。用于脾和血液的抗体混合物是：B220 PerCP；TCRb APC；CD4 APC Cy7；CD8 PE Cy7；CD69 FITC；和CD62L PE。

实施例6：测量对小鼠S1P水平的影响

使用由Murata，N.，等人在Anal.Biochem.282：115-120(2000)中描述的放射受体结合试验的改进法测量小鼠(129/B6株的杂交第一代)脾中的S1P水平。该方法采用了过度表达Edg-1(一种S1P受体亚型)的HEK293F细胞，并基于在给定样品中标记S1P与未标记S1P的竞争。

用pEFneo S1P受体(Edg-1)-表达载体转染HEK293F细胞，并选择G418抗性细胞克隆。在湿润的空气∶CO₂(19∶1)气氛中在含5％(v/v)FBS的DMEM中在12个微孔板(multiplates)上培养表达Edg-1的HEK293F细胞。在实验前24小时，将培养基改成含有0.1％(w/v)BSA的新鲜DMEM(不含血清)。

给予受试化合物之后十八小时，处死小鼠，取出它们的脾并冷冻。使用已知的方法从冷冻组织获得S1P。例如参见，Yatomi，Y.，等人，FEBS Lett.404：173-174(1997)。具体地，在冰上，以1分钟为间隔，将在1ml的用冰冷却的50mM磷酸盐缓冲液(pH 7.5)(含有1mM EGTA、1mM DTT和Roche完全蛋白酶抑制剂)中的10个小鼠脾均化三次。将所得物质以2500rpm在4℃离心10分钟以除去细胞碎片。然后将上清液以45000rpm在4℃在70Ti旋转器中超离心1小时，以除去与膜结合的蛋白质。弃去上清液，将沉淀再悬浮在最小体积(～1ml)的用冰冷却的50mM磷酸盐缓冲液(pH 7.5)(含有1mM EGTA、1mM DTT和33％甘油，并存在Roche完全蛋白酶抑制剂)中。使用Bradford测定法测量总蛋白质浓度。

将S1P提取到氯仿/KCl/NH₄OH(pH～12)中，保留上面的水相。然后在氯仿/甲醇/HCl(pH＜1)中提取，保留下层的有机相并蒸发得到S1P，其在使用前冷冻保存。临到试验之前，通过超声处理将干燥样品溶解在结合剂缓冲液中，该缓冲液由20mM Tris-HCl(pH 7.5)、100mMNaCl、15mM NaF和0.4％(w/v)BSA组成。

通过放射受体-结合试验，在Edg-1表达细胞上，基于样品中[³³P]S1P与S1P的竞争性结合，测量样品的S1P含量。采用用冰冷却的结合缓冲液将铺满的12个多孔板中的Edg-1表达HEK293F细胞洗涤两次，然后使用含有1nM[³³P]S1P(每孔约18,00dpm)和增加剂量的可靠S1P或者试样的最终体积为0.4ml的相同缓冲液培养。将板在冰上保留30分钟，使用相同的用冰冷却的结合缓冲液洗涤细胞两次以除去未结合的配体。使用由0.1％SDS、0.4％NaOH和2％Na₂CO₃组成的溶液将细胞溶解，通过液体闪烁计数器计数放射性。通过从标准位移曲线外推推定试验孔中的S1P含量。通过将标准曲线获得的值乘以S1P提取回收率和稀释因子来计算初始试验样品中的S1P含量。

实施例7：对小鼠中的淋巴细胞的影响

使用上面描述的方法，确定各种化合物的体内效果。如图2-4所示，当在饮用水中对小鼠(129/B6株的杂交第一代)给予时，THI和(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮肟(化合物1)都减少淋巴细胞从胸腺溢出。

图5表示媒介物对照(饮用水)、THI、(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮肟(化合物1)、和1-(4-甲基-5-((1S，2R，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)噻唑-2-基)乙酮(化合物2)对全血计数的影响。有趣的是，没有观察到化合物2具有由Pyne(WO 97/46543)报告的体内效果。

实施例8：胶原蛋白诱导的关节炎模型

胶原蛋白诱导的关节炎(CIA)是广泛使用的类风湿性关节炎(RA)的模型，类风湿性关节炎是一种由自身免疫性和炎性过程引起的关节疾病。总地参见，Wooley P.H.等人，J.Immunol.135(4)：2443-2451；A.Persidis，Nature Biotechnology 17：726-728；Current Protocols in Immunology(John Wiley & Son，Inc.1996)。早期研究确立了与某些H-2单模标本连接的CIA的反应序位。新近，Campbell和同事在C57BL/129sv(H-2b)小鼠中再次评价了CIA并发现C57B6背景由来的小鼠可以发展成CIA。Campbell I.K等人，Eur.J.Immunol.30：1568-1575(2000)。

在本发明中，通过在4℃搅拌过夜，将注射用胶原蛋白，即，2mg/ml的小鸡胶原蛋白II型(CII)(Sigma)溶于10mM醋酸中。完全弗氏佐剂(CFA)在购买时是制好的(Sigma)。使用玻璃注射器，临在免疫注射前将CII在等体积CFA中乳化。为了对小鼠进行免疫注射，使用玻璃注射器和26G针，在尾巴根部对小鼠皮内注射CII/CFA乳液。每次注射使用CFA和在总体积50μl的CFA中的100μg的小鸡CII。在初次免疫注射之后2周通过相同途径强化免疫注射在CFA中乳化的100μg的CII。

注射胶原蛋白导致小鼠爪垫和关节肿胀，每2-3天检查小鼠的关节炎发病，其通过用卡钳测量后爪爪垫的厚度与视觉评价后腿受影响的关节相组合进行评价。在所述疾病初次发作后的10周跟踪CIA的进展，之后通过关节的组织学评价疾病。如果小鼠在II型胶原蛋白免疫注射150天内没有发展成CIA则认为它们是关节炎阴性的。

通过已确立的视觉评分系统测定小鼠有无关节炎。在小鼠CIA中，可影响到任一个爪或影响到四个爪。炎症在其最高峰时从踝延伸直至趾并且以极度肿胀和发红为特征。一旦出现关节炎，一周检查各爪2到3次。为了评价炎症的严重程度，使用了广泛采用的0到4分的视觉评分系统，其中0＝正常，没有发红和肿胀；1＝发红和轻微肿胀限于爪中部或踝关节或单个趾；2＝发红和轻微的肿胀延伸到踝和爪中部或者在超过一个趾内肿胀；3＝发红和中度肿胀从踝延伸至跖骨关节；和4＝发红和严重肿胀，包括踝、爪和趾。

实施例9：在胶原蛋白诱导的关节炎模型中的效果

在上述模型中使用30只小鼠(129/B6株的杂交第一代)测定(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮肟在CIA模型中的效果。将小鼠随机分成两个盲组，其接受0mpk(媒介物对照)或者100mpk的化合物。媒介物是无菌的蒸馏水。媒介物对照的剂量为10μl/g体重。

剂量给药为经口管饲每天一次。在CIA实验开始前三天开始，并延续整个试验。图6表示化合物对CIA随时间的效果，其中累积分数是前肢和踝得分的总和。

在猴中的效果

通过Covance Research Products Inc.(Alice，TX)研究(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮肟在20只非本土

雄性恒河猴中的作用。使用分别用数字标记的纹身确定每只动物。在剂量给药之前使动物适应约11天，在剂量给药时，认为动物是年轻的成年/适龄成年。

在适应和试验期间，将动物圈养在单独的笼子中，在剂量给药后的至少48小时不将动物搀和，从而监控任何与媒介物和受试物质有关的效果。动物可随意获取未认证的灵长类动物饮食，除了关于剂量给药而特意指出之外。在非禁食期间还酌情提供了水果和其它治疗。随意获取水。

受试化合物在环境条件(近似于室温)下避光保存在有干燥剂的密封容器中。在媒介物对照组中口服给用由Covance提供的蒸馏水。在给药当天制备试验所用的受试物质剂量制剂。对于每个组，称重适当量的受试物和适当体积的蒸馏水。

在剂量给予之前使所有动物禁食一夜并持续到剂量给予后大约4小时。根据剂量给予当天取得的体重计算个体剂量。

通过鼻胃插管给予口服剂量。在撤离管饲用管之前，用大约5ml的水冲刷管，对于血液学分析，收集每只动物剂量给用前(7天)，剂量给用前(3天)，和剂量给用后8、16、24、32和48小时的血液(大约0.5ml)。使用采血当天获得的新鲜样品进行全血血液学试验。

如图7所示，单一口服剂量的(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮肟在剂量给予后的32小时测量时，对猴子的白细胞和淋巴细胞计数具有显著影响。

上面引用的所有文献(例如专利和专利申请)作为参考以全文并入本文。

Claims

1.制备式I化合物的方法：

在足以形成式I化合物的E和Z异构体混合物的条件下使式II的化合物：

接触式III的化合物：

H₂N-OR₃

III；

并且；

使E和Z异构体的混合物接触强酸。

2.权利要求1的方法，其中X为任选地被一个或多个羟基、乙酸根或卤素部分取代的烷基。

3.权利要求1的方法，其中R₂为氢。

4.权利要求1的方法，其中R₃为氢。

5.权利要求1的方法，其中式I化合物由式I(a)表示：

其中：

R₄为OR_4A、OC(O)R_4A、N(R_4B)₂、NHC(O)R_4B、氢、或卤素；

R₅为OR_5A、OC(O)R_5A、N(R_5B)₂、NHC(O)R_5B、氢、或卤素；

R₆为OR_6A、OC(O)R_6A、N(R_6B)₂、NHC(O)R_6B、氢、或卤素；

R₇为烷基、CH₂OR_7A、CH₂OC(O)R_7A、CH₂N(R_7B)₂、CH₂NHC(O)R_7B、氢、或卤素；和

R_4A、R_5A、R_6A、R_7A、R_4B、R_5B、R_6B和R_7B中每个独立地为氢或任选地被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、杂烷基、杂环、烷基杂环、或杂环基烷基。

6.权利要求5的方法，其中式I(a)化合物为立体异构纯的式I(b)化合物：

7.权利要求5的方法，其中R₄、R₅和R₆中的一个或多个为羟基或卤素。

8.权利要求5的方法，其中R₄、R₅和R₆都是羟基或乙酸根。

9.权利要求1的方法，其中强酸为氢碘酸、氢溴酸、盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、烷基磺酸、或芳烃磺酸。

10.提高式I化合物的混合物中主要：次要异构体比例的方法：

该方法包括：

第一混合物的主要：次要异构体比例低于第二混合物的主要：次要异构体比例；

X为任选地被取代的烷基；

R₁为任选地被取代的烷基；

R₂为氢、卤素、腈、或任选地被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、杂烷基、杂环、烷基杂环、或杂环基烷基；和

R₃为氢或任选地被取代的烷基、芳基、烷基芳基、芳基烷基、杂烷基、杂环、烷基杂环、或杂环基烷基。

11.权利要求10的方法，其中式I化合物的制备如下进行：使式II的化合物：

在足以形成式I化合物的条件下接触式III的化合物：

H₂N-OR₃

III。

12.权利要求10的方法，其中X为任选地被一个或多个羟基、乙酸根或卤素部分取代的烷基。

13.权利要求10的方法，其中R₂为氢。

14.权利要求10的方法，其中R₃为氢。

15.权利要求10的方法，其中式I化合物由式I(a)表示：

其中：

R₄为OR_4A、OC(O)R_4A、N(R_4B)₂、NHC(O)R_4B、氢、或卤素；

R₅为OR_5A、OC(O)R_5A、N(R_5B)₂、NHC(O)R_5B、氢、或卤素；

R₆为OR_6A、OC(O)R_6A、N(R_6B)₂、NHC(O)R_6B、氢、或卤素；

16.权利要求15的方法，其中式I(a)化合物为立体异构纯的式I(b)化合物：

17.权利要求15的方法，其中R₄、R₅、R₆中的一个或多个为羟基或卤素。

18.权利要求15的方法，其中R₄、R₅、R₆都是羟基或乙酸根。

19.权利要求10的方法，其中所述溶液包括醇。

20.权利要求19的方法，其中所述醇为甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇。

21.权利要求10的方法，其中强酸为氢碘酸、氢溴酸、盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、烷基磺酸、或芳烃磺酸。

22.权利要求10的方法，其另外包括将溶液加热到大于约30℃(例如，大于约40℃、50℃或60℃)的温度。

23.权利要求10的方法，其中主要∶次要异构体比例从低于约5∶1增加到大于约8∶1。

24.权利要求23的方法，其中主要∶次要异构体比例从低于约4∶1增加到大于约10∶1。

25.权利要求24的方法，其中主要∶次要异构体比例从低于约3∶1增加到大于约13∶1。

26.权利要求10的方法，其另外包括提高包括第二混合物的溶液的pH。

27.权利要求26的方法，其中将pH提高到大于约6.0(例如，大于约7.0或8.0)。

28.提高(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟和(Z)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟的混合物中的E∶Z异构体比例的方法，该方法包括：

使包括(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟和(Z)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟的第一混合物的溶液，在足以提供(E)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟和(Z)-1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟的第二混合物的条件下，接触强酸；

其中第一混合物的E∶Z异构体比例低于第二混合物的E∶Z异构体比例。

29.权利要求28的方法，其中第一混合物的制备通过使1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮在足以形成1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)-乙酮肟的条件下接触羟胺进行。

30.权利要求29的方法，其中1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮的制备通过使1-氨基-1-脱氧-D-果糖在足以形成1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮的条件下接触2-乙氧基丙烯腈进行。

31.权利要求28的方法，其中所述溶液包括醇。

32.权利要求31的方法，其中所述醇为甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇。

33.权利要求28的方法，其中强酸为氢碘酸、氢溴酸、盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、烷基磺酸、或芳烃磺酸。

34.权利要求28的方法，其另外包括在大于约30℃(例如，大于约40℃、50℃或60℃)的温度加热溶液。

35.权利要求28的方法，其中E∶Z异构体比例从低于约5∶1增加到大于约8∶1。

36.权利要求35的方法，其中E∶Z异构体比例从低于约4∶1增加到大于约10∶1。

37.权利要求36的方法，其中E∶Z异构体比例从低于约3∶1增加到大于约13∶1。

38.权利要求28的方法，其另外包括提高包括第二混合物的溶液的pH。

39.权利要求38的方法，其中将pH提高到大于约6.0(例如，大于约7.0或8.0)。

40.制备1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮的方法，其包括：

向包括2-乙氧基丙烯腈的溶液中加入第一部分的甲醇钠，提供第一混合物；

使第一混合物接触1-氨基-1-脱氧-D-果糖，提供第二混合物；

向第二混合物加入第二部分的甲醇钠，提供第三混合物；

向第三混合物加入乙酸，提供第四混合物；和

将第四混合物混合，混合时间和混合温度足以形成1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮；

其中将第二混合物保持在大于约5℃(例如，大于约10℃、15℃或20℃)的温度。

41.权利要求40的方法，其中将第一混合物保持在大于约5℃(例如，大于约10℃、15℃或20℃)的温度。

42.权利要求40的方法，其中第一部分的甲醇钠作为大于约15重量％(例如，大于约20或25重量％)甲醇钠的甲醇溶液被加入。

43.权利要求40的方法，其中第二部分的甲醇钠作为大于约15重量％(例如，大于约20或25重量％)甲醇钠的甲醇溶液被加入。

44.权利要求40的方法，其中1-氨基-1-脱氧-D-果糖以另外包括其乙酸盐的浆状物形式提供。

45.权利要求40的方法，其中在向第三混合物加入乙酸之前将第三混合物用水稀释。

46.权利要求40的方法，其中将第四混合物加热到大于约30℃(例如，大于约35℃、40℃、45℃、50℃、55℃或60℃)的温度。

47.权利要求45的方法，其中将第四混合物加热少于约5个小时(例如，少于约4、3、或2小时)。

48.权利要求40的方法，其中1-(4-((1R，2S，3R)-1，2，3，4-四羟基丁基)-1H-咪唑-2-基)乙酮以大于约50％(例如，大于约55％、60％、65％、70％、75％、或80％)的收率被分离。