CN101259151A - 不含生物碱和氰苷的西番莲总黄酮和总皂苷的制备工艺 - Google Patents

Abstract

一种不含生物碱和氰苷的西番莲总黄酮和总皂苷的制备工艺，步骤如下：(1)在低于70℃的温度下干燥西番莲茎叶至含水量10～35％，粉碎成粗粉；(2)粗粉用70％以上的低级醇水溶液湿润膨胀，依次用浓度渐低的低级醇水溶液和碱水进行热渗漉；(3)醇浓度高于40％的渗漉液减压回收醇至醇浓度为15～25％，浓缩液碱化至pH11；(4)滤除叶绿素，滤液并入醇浓度低于40％的渗漉液，调pH至5～7，减压蒸除全部醇，进一步调pH至3；(5)过滤，真空干燥，即为西番莲总黄酮；(6)滤液用离子交换树脂法脱盐，透过液加入吸湿剂，喷雾干燥，即得西番莲总皂苷，本发明工艺流程简单，提取率高，有机溶剂用量小，基本不污染环境，产品毒副作用小。

Description

不含生物碱和氰苷的西番莲总黄酮和总皂苷的制备工艺

技术领域：

本发明涉及一种不含生物碱和氰苷的西番莲药用总黄酮和总皂苷提取物及它们的提取制备工艺。

背景技术：

西番莲(Passiflora edulis Sim.)的茎叶提取物用作治疗药物已有几百年的历史。在南美洲，西番莲用作镇静剂、利尿剂、驱虫剂、止泻剂、兴奋剂、滋补药，也用于治疗高血压、绝经综合症和婴儿急腹痛。在印度那加兰邦，西番莲的鲜叶用少量水煮沸，提取液饮用可治疗痢疾和高血压。目前市场上的西番莲提取物主要用于抗焦虑、镇静、治疗失眠、止痛等用途。

西番莲茎叶的主要化学组成包括大量的黄酮尤其是黄酮碳苷、β-卡波林类生物碱、三萜皂苷、α-羟基氰苷等，其中黄酮类成分、生物碱和皂苷可能是其抗焦虑、镇静、改善睡眠、止痛等药理作用的主要活性成分(Behavioural effects of Passiflora incarnata L.and its IndolAlkaloid and Flavonoid Derivatives and Maltol in the Mouse，J.Ethnopharmacol.，1997Jun；57(1)：11-20；Passiflora actinia Hooker extracts and fractions induce catalepsy in mice，J.Ethnopharmacol.，2005；100(3)：306-309)。

β-卡波林类生物碱一直被认为是西番莲提取物抗焦虑、镇静等药理作用的部分活性成分，但长期或过量服用此类生物碱都会对心血管系统和中枢神经系统产生副反应，如室性心律不齐、抑制平滑肌蠕动等。而且异体基因代谢发生变异(如细胞色素P4502D6)的人群对生物碱过敏。所以，为了用药安全，西番莲提取物必须去掉其中的生物碱，但保留了总黄酮部分和总皂苷部分，即：西番莲提取物抗焦虑、镇静等药理作用的主要活性成分，所以其抗焦虑、镇静、镇痉、改善睡眠和止痛的疗效无显著减弱。

尽管西番莲茎叶中的α-羟基氰苷具有止咳的作用，但却因能释放HCN而导致中毒。所以，作为抗焦虑、镇静、镇痉、改善睡眠和止痛的药物，西番莲提取物应去除α-羟基氰苷。

以前的西番莲属植物提取物的制备工艺仅用一种浓度的醇水溶液或水作提取剂，如用较高浓度的醇水溶液提取，叶绿素含量较高，产品的水溶性差；如用较低浓度醇水溶液或水提取，总黄酮的提取率又较低。

发明内容：

本发明的目的是提供一种不含生物碱和氰苷的西番莲总黄酮和总皂苷的制备工艺，依次用梯度浓度的醇水溶液进行提取、沉淀法去除提取的叶绿素和生物碱、分离总黄酮和总皂苷，制备得到不含β-卡波林碱和α-羟基氰苷的西番莲总黄酮和西番莲总皂苷，得到色泽好、水溶性好的药用粉末状提取物。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种不含生物碱和氰苷的西番莲总黄酮和总皂苷的制备工艺，以西番莲茎叶为原料，西番莲茎叶在低于70℃的温度(优选方案常温～65℃)下干燥至含水量10～35％(优选方案15～30％)，粉碎至5～10目，用浓度70％以上(优选方案70～95％)的低级醇(优选甲醇、乙醇、丙醇或它们的混合物)水溶液润湿，使充分吸胀，然后进行渗漉或搅拌提取。

初始提取溶剂选用60～70％的低级醇水溶液，依次用浓度渐低的低级醇水溶液和碱水进行提取，提取温度为50～70℃，醇浓度低于30％的提取溶剂和水用碱(优选NaOH、KOH、Ca(OH)₂或它们的混合物)或碱水溶液调pH至11；碱性条件下提取，可使α-羟基氰苷分解破坏，释放出氨。

醇浓度高于40％的提取液减压回收醇至最后醇浓度为15～25％，控制浓缩温度为45～70℃，浓缩液碱化至pH 11，降温至0～8℃，保持该温度静置过夜，使叶绿素和生物碱沉淀，过滤去除叶绿素和生物碱，用少量pH11的20％醇水溶液洗涤滤饼，洗涤液并入滤液。

除去叶绿素的浓缩液并入醇含量低于40％的提取液，用稀酸(优选稀盐酸、稀硫酸、稀磷酸)调pH至中性(优选pH5～7)，于45～75℃下减压蒸除全部醇，浓缩液进一步用稀酸调pH至3，0～25℃(优选5～20℃)静置过夜，使总黄酮沉淀，过滤，滤饼用少量水洗涤，真空干燥，温度低于70℃(优选55～65℃)，得西番莲总黄酮。

总黄酮滤饼洗涤液并入滤液成为去除叶绿素和总黄酮的浓缩提取液，依次通过阳离子交换树脂柱和阴离子交换树脂柱，或通过离子交换树脂混合床，透过液加入适量吸湿剂(优选糊精、玉米淀粉或它们的混合物)，喷雾干燥，得西番莲总皂苷。

根据本发明制备的西番莲总黄酮含牡荆素和异牡荆素总量为5～70％，β-卡波林生物碱总量低于1ppm；西番莲总皂苷含三萜皂苷总量为1～20％(以柴胡皂苷元计)，β-卡波林生物碱总量低于1ppm。该产品可直接服用，或配制成复方服用。

另外，本发明还涉及用上述产品配制的复方，单制剂含有上述产品1～3000mg和其他可用辅料。

此外，本发明还涉及上述产品或复方用于治疗神经紧张、焦虑、痉挛、失眠、惊厥以及用于止痛。

本发明的优点在于：工艺流程简单，提取率高，有机溶剂用量较少，基本不污染环境；产品不含生物碱和氰苷，极大地降低了毒副作用而基本保留了抗焦虑、镇静、镇痉、改善睡眠、止痛、抗惊厥的药理作用；产品水溶性好。

具体实施方式：

下面结合优选实施例对本发明作进一步描述，但不是对本发明范围的限制。

实施例1

(1)将50kg新鲜西番莲茎叶在60℃鼓风干燥至含水量20％，粉碎成10目，加入80％甲醇拌匀，使充分吸胀；

(2)装入100L的不锈钢夹层渗漉桶中，层层压紧，在原材料上面放一张滤纸，上面铺撒洗净的河沙；

(3)接通夹层水浴，保持渗漉温度为55℃，从渗漉桶上部加入70％甲醇，打开渗漉桶下部阀门，使渗漉液以300ml/min的速度流出；

(4)用150L70％甲醇渗漉结束后，改用150L 50％甲醇渗漉，然后依次用100L pH11的30％甲醇和100L pH11的NaOH水溶液渗漉，保持渗漉液流出速度为300ml/min；

(5)收集70％和50％的甲醇渗漉液，50℃左右减压回收甲醇至醇浓度20％左右，浓缩液用2M NaOH水溶液调pH至11，降温至4℃，保持4℃静置过夜，使叶绿素和生物碱沉淀；

(6)过滤，用少量pH11的20％甲醇洗涤滤饼，洗涤液并入滤液中，再一起并入30％甲醇渗漉液和水渗漉液中，用2M HCl调pH至7，于55℃左右减压蒸除全部醇，至产生大量泡沫；

(7)浓缩渗漉液进一步用2M HCl调pH至3，20℃静置过夜，使总黄酮沉淀；

(8)过滤，用少量20℃纯净水洗涤滤饼，滤饼60℃真空干燥得西番莲总黄酮，洗涤液并入滤液；

(9)滤液依次通过732阳离子交换树脂柱(自装，Φ50×500mm)和717阴离子交换树脂柱(自装，Φ50×500mm)，透过液加入玉米淀粉1kg，混悬液喷雾干燥，进口温度170℃，出口温度80℃，得西番莲总皂苷。

(10)得到约1kg西番莲总黄酮，牡荆素和异牡荆素的总含量为23％，检测不到β-卡波林生物碱；得到约3kg西番莲总皂苷，三萜皂苷总含量为4％(以柴胡皂苷元计)，检测不到β-卡波林生物碱。

实施例2

(1)将100kg新鲜西番莲茎叶在阳光下晾晒干燥至含水量25％，粉碎成5目，加入75％乙醇拌匀，使充分吸胀；

(2)装入250L的不锈钢夹层渗漉桶中，层层压紧，在原材料上面放一张滤纸，上面铺撒洗净的河沙；

(3)接通夹层水浴，保持渗漉温度为60℃，从渗漉桶上部加入65％乙醇，打开渗漉桶下部阀门，使渗漉液以500ml/min的速度流出；

(4)用300L60％乙醇渗漉结束后，改用300L 40％乙醇渗漉，然后依次用200L pH11的20％乙醇和200L pH11的KOH水溶液渗漉，保持渗漉液流出速度为500ml/min；

(5)收集60％和40％的乙醇渗漉液，60℃左右减压回收乙醇至醇浓度20％左右，浓缩液用2M KOH水溶液调pH至11，降温至8℃，保持8℃静置过夜，使叶绿素和生物碱沉淀；

(6)过滤，用少量pH11的20％乙醇洗涤滤饼，洗涤液并入滤液中，再一起并入20％乙醇渗漉液和水渗漉液中，用2M H₂SO₄调pH至6，于65℃左右减压蒸除全部醇，至产生大量泡沫；

(7)浓缩渗漉液进一步用2M H₂SO₄调pH至3，15℃静置过夜，使总黄酮沉淀；

(8)过滤，用少量15℃纯净水洗涤滤饼，滤饼65℃真空干燥得西番莲总黄酮，洗涤液并入滤液；

(9)滤液通过离子交换树脂混合床(YE-101)(自装，Φ100×800mm)，透过液加入糊精2kg溶解，喷雾干燥，进口温度170℃，出口温度80℃，得西番莲总皂苷。

(10)得到约2kg西番莲总黄酮，牡荆素和异牡荆素的总含量约为29％，检测不到β-卡波林生物碱；得到6kg西番莲总皂苷，三萜皂苷总含量约为3％(以柴胡皂苷元计)，检测不到β-卡波林生物碱。

实施例3

(1)将30kg新鲜西番莲茎叶在60℃鼓风干燥至含水量15％，粉碎成5目，加入70％正丙醇拌匀，使充分吸胀；

(2)装入200L的不锈钢中药多功能提取罐中，加入65％正丙醇150L，65℃搅拌提取1.5小时，过滤；

(3)滤渣再加入pH11的30％甲醇120L，65℃搅拌提取1小时，过滤，滤渣再用pH11的Ca(OH)₂水溶液100L，65℃搅拌提取0.5小时，过滤；

(4)65％的正丙醇提取液于70℃左右减压回收甲醇至醇浓度20％左右，浓缩液用饱和Ca(OH)₂水溶液调pH至11，降温至8℃，保持8℃静置过夜，使叶绿素和生物碱沉淀；

(5)过滤，用少量pH11的20％正丙醇洗涤滤饼，洗涤液并入滤液中，再一起并入30％正丙醇提取液和碱水提取液中，用1M H₃PO₄调pH至7，于70℃左右减压蒸除全部醇，至产生大量泡沫；

(7)浓缩液进一步用1M H₃PO₄调pH至3，20℃静置过夜，使总黄酮沉淀；

(8)过滤，用少量20℃纯净水洗涤滤饼，滤饼70℃真空干燥得西番莲总黄酮，洗涤液并入滤液；

(9)滤液依次通过732阳离子交换树脂柱(自装，Φ50×500mm)和717阴离子交换树脂柱(自装，Φ50×500mm)，透过液加入玉米淀粉1kg，混悬液喷雾干燥，进口温度170℃，出口温度80℃，得西番莲总皂苷。

(10)得到约0.7kg西番莲总黄酮，牡荆素和异牡荆素的总含量为21％，检测不到β-卡波林生物碱；得到约2kg西番莲总皂苷，三萜皂苷总含量为5％(以柴胡皂苷元计)，检测不到β-卡波林生物碱。

Claims (11)

1.一种不含生物碱和氰苷的西番莲总黄酮和总皂苷的制备工艺，以西番莲茎叶为原料，其特征在于提取步骤如下

(1)干燥粉碎：将西番莲的茎叶在低于70℃温度下干燥至含水量10～35％，粉碎为粗粉；(2)提取：将粗粉用70％以上的低级醇水溶液湿润，拌匀使其充分吸胀，再依次用不同浓度的醇水溶液和碱水热渗漉或搅拌提取；(3)提取液浓缩：收集醇浓度在40％以上的提取液，减压回收醇至醇浓度为15～25％；(4)除叶绿素：上述浓缩液碱化至pH11，冷冻静置过夜，滤除沉淀；(5)分离总黄酮：滤液并入醇浓度低于40％的渗漉液，用稀酸调pH至中性，减压蒸除醇，进一步调pH至3，在低于25℃的温度下静置过夜，滤取沉淀，温度低于70℃真空干燥得西番莲总黄酮；(6)制备总皂苷：上一步的滤液用离子交换树脂法脱盐，透过液加入吸湿剂，喷雾干燥，得西番莲总皂苷。

2.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于原料在常温至65℃条件下干燥至含水量为15～30％，粉碎为5～10目。

3.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于用于湿润粗粉的醇水溶液浓度为75～95％，初始提取溶剂为60～70％的醇水溶液，依次用浓度渐低的醇水溶液和碱水提取，提取温度为50～70℃，当提取溶剂的醇浓度低于30％时，用碱或碱水溶液调pH至11，碱性条件下提取；所用碱为NaOH、KOH、Ca(OH)₂或它们的混合物。

4.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于所用的低级醇为甲醇、乙醇、丙醇或它们的混合物。

5.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于仅对醇浓度在40％以上的提取液减压回收醇，浓缩温度为45～70℃。

6.根据权利要求1或5所述的制备工艺，其特征在于将醇浓度为15～25％的浓缩液碱化至pH11，降温至0～8℃，静置过夜，过滤去除叶绿素和生物碱，所用碱为NaOH、KOH、Ca(OH)₂或它们的混合物。

7.根据权利要求1或6所述的制备工艺，其特征在于除去叶绿素的浓缩提取液并入醇浓度低于40％的提取液，用稀盐酸、稀硫酸或稀磷酸调pH至5～7，于45～75℃下减压蒸除全部醇，浓缩液进一步用稀酸调pH至3，5～20℃静置过夜，沉淀过滤，55～65℃条件下真空干燥得西番莲总黄酮。

8.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于滤除叶绿素和总黄酮的浓缩提取液依次采用阳离子交换树脂柱和阴离子交换树脂柱脱盐或采用离子交换树脂混合床脱盐，透过液加入糊精、玉米淀粉或它们的混合物等吸湿剂，喷雾干燥，得西番莲总皂苷。

9.根据权利要求1、7、8所述的制备工艺制得的西番莲总黄酮含牡荆素及异牡荆素总量为5～70％、β-卡波林生物碱总量低于1ppm和西番莲总皂苷以柴胡皂苷元计含三萜皂苷总量为1～20％、β-卡波林生物碱总量低于1ppm的药用粉末状提取物。

10.根据权利要求1或9所述产品的复方药，西番莲总黄酮和总皂苷在单制剂中的含量为1～3000mg。

11.权利要求9或10所述的提取物产品作为制备治疗抗焦虑、镇静、镇痉、镇痛、改善睡眠或抗惊厥药物的应用。