CN101254253A - 三白草木脂素提取物、其制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种木脂素含量高于50％的三白草提取物、其制备方法以及在保肝药品及保健品中的应用，三白草药材经乙醇提取、有机溶剂萃取和一系列的纯化步骤后可得富含木脂素类成分的三白草提取物。

Description

三白草木脂素提取物、其制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及一种三白草木脂素含量至少在50％以上的三白草木脂素提取物、其制备方法及其在保肝药品中的应用。

背景技术

三白草Saururus Chinensis(Lour.)baill是三白草科多年生草本植物，全草入药，具有清热解毒、利尿消肿之功效。主要分布在我国中南、西南地区，四季均可采收，资源丰富。三白草含多种生物活性成分，已从中分离出的有挥发油、黄酮类、木质素类、生物碱类、鞣质类、多糖类等，发现这些成分具有抗炎、去毒、降糖、保肝、利尿等活性。

木脂素是三白草中的主要化学成分之一，也是其中具有保肝和治疗肝炎疾病的主要有效成分。文献(李择友，陈峰，等.三白草的化学成分和药理作用研究进展.中国药房[J].2007，18(6)：473～474)记载，三白草中的木脂素成分有三白脂素(Saucernetin)、奥斯楚拜脂素-5(Austrobailignan-5)、三白脂素-8(Saucernetin-8)、三白脂素-7(Saucernetin-7)、三百草素(Sauchinin)、三白草酮(Sauchinone)、三白草酮A(Sauchinone A)、1’-表三白草酮(1’-epi-sauchinone)、三白草醇A、三白草醇B、三白草醇C(Saucerneol C)、红楠素D(Machilin D)、4-甲氧基红楠素D等木脂素类成分，其中研究表明三白草中的3个非对映木脂素三白草酮、三白草酮A和1’-表三白草酮能显著降级四氯化碳损伤的大鼠肝细胞中谷丙转氨酶(GPT)的分泌，提示具有明显的保肝作用。

在现有技术中，还未有专门富集三白草中木脂素类成分的提取工艺相关研究。

发明内容

为弥补现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种三白草木脂素类提取物，本发明三白草提取物中，木脂素类成分的含量至少在50％以上，优选在70％以上。

本发明的另一目的在意提供一种产品，该产品具有保肝作用，可用用于肝脏疾病如肝炎或肝损伤或肝纤维化等病变。所述产品中含有本发明三白草总木脂素提取物及其制药上可接受的赋形剂。

本发明三白草提取物中，木脂素类成分应含有三白草酮、三白草酮A或表三白草酮，总木脂素含量应在50％以上。

本发明的还一目的在于提供一种制备本发明所述三白草木脂素提取物的制备方法，制备本发明三白草木脂素提取物的不过如下步骤：

(1)三白草药材处理后用50％～95％的选自甲醇、乙醇、丙酮中的一种醇室温或加热回流提取后，提取液减压浓缩，使其含有机溶剂量不高于15％，总体积为原药材量的0.5～1.0倍，浓缩后的提取液室温放置过夜，过滤，取上清液；

(2)上清液减压蒸至无醇味后，以己烷或石油醚萃取脱脂，至萃取液颜色变淡，经萃取后的药液用碱调pH值为9.0-10.0，以有乙酸乙酯继续萃取，合并乙酸乙酯萃取液，

(3)乙酸乙酯萃取液减压浓缩至原体积的1/3后，用pH为3.0-4.5的酸水萃取，弃酸水萃取液，乙酸乙酯层减压浓缩得木脂素含量在50％以上的提取物。

本发明中，乙酸乙酯还可以用氯仿或乙醚代替。所用的碱是指氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾中的任一种，所用的酸水是指稀盐酸水溶液或稀硫酸水溶液。

本发明三白草总木脂素提取物的制备方法还可以进一步包括纯化步骤，所述的纯化步骤是指重结晶、凝胶柱层析、硅胶柱层析或大孔吸附树脂柱层析、聚酰胺吸附柱层析，或者它们的组合、或者将浸膏拌于硅胶或硅藻土中，晾干后有机溶剂回流洗脱。其中所用的有机溶剂可以是氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、正丁醇、乙醇、丁酮、乙醚中的任一种或几种的组合。

本发明中，含有总木脂素含量至少在50％以上的产品是指胶囊剂、片剂或丸剂，将50％以上的木脂素提取物与制药上可接受的药用赋形剂结合，采用常规的制剂方法制得。

本发明所述的产品，既可以是药品，也可以是保健食品。

本发明中，所述的木脂素含量是指木脂素在总提取物中的重量百分比含量。

本发明提取物还可与其它提取物，如黄芪提取物、五味子提取物、丹参提取物等联合使用。

进一步地，本发明的制备方法包括：

三白草药材干燥，粉碎，以50％～95％选自甲醇、乙醇、丙酮中的一种醇室温或加热回流提取后，提取液减压浓缩，使其含有机溶剂量不高于15％，总体积为原药材量的0.5～1.0倍，浓缩后的提取液室温放置过夜，过滤，取上清液，上清液减压蒸至无醇味后，以己烷或石油醚萃取脱脂，至萃取液颜色变淡，经萃取后的药液用碱调pH值为9.0-10.0，以有乙酸乙酯继续萃取，合并乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液减压浓缩至约萃取液的1/3体积，用蒸馏水洗涤2～3次，再用pH为3.0～4.5的酸水(稀盐酸水或稀硫酸水)液萃取3～5次，弃酸水萃取液，乙酸乙酯层再用蒸馏水洗2～3次，弃水洗液，最后将乙酸乙酯层减压浓缩，得总木脂素含量在50％以上的提取物，将此提取物用乙醇重结晶、或者经凝胶柱层析、或者经硅胶柱层析、或者经大孔吸附树脂层析、或者经聚酰胺柱层析、或者将提取物拌入硅胶或硅藻土中，用有机溶剂回流提取拌入提取物的硅胶或硅藻土，可得到木脂素含量在70％以上的提取物。木脂素含量可用紫外分光光度法或高效液相法测定。

三白草中除含木脂素类成分外，尚含有富含多酚羟基或羟基的黄酮或鞣质类酸性成分，含氮原子的生物碱类成分，以及一些低极性的叶绿素类成分，本发明采用不高于15％的醇溶液静置处理，可将一些低极性的叶绿素类成分沉淀除而除去，用己烷或石油醚萃取又可去除一些极性很小的脂溶性成分，采用碱水有机溶剂混合体系萃取和酸水有机溶剂混合体系萃取，可以分别除去一些酸性成分和碱性成分，从而提高提取物中木脂素的含量。

具体实施例

下面的实施例可以进一步说明不发明，但不是以任何方式来限制本发明。

实施例1

三白草药材干燥10kg，粉碎，以10倍量80％选乙醇加热回流提取3次后，过滤合并回流提取液，提取液60℃下减压浓缩，使其含乙醇量约为10％，总体积10L，浓缩后的提取液室温放置过夜，过滤，取上清液，上清液减压蒸至无醇味后，至约8升体积量后，以己烷萃取脱脂，至己烷萃取液颜色变淡，经萃取后的药液用碳酸氢钠调pH值为10.0，以乙酸乙酯继续萃取至乙酸乙酯萃取层颜色变淡，合并乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液减压浓缩至约萃取液的1/3体积，用蒸馏水洗涤3次，再用pH为3.5的盐酸水溶液萃取4次，弃酸水萃取液，乙酸乙酯层再用蒸馏水洗2次，弃水洗液，最后将乙酸乙酯层减压浓缩，得三白草提取物101g，总木脂素含量为52％。

实施例2

将实施例1所得的三白草提取物用150mL的95％的乙醇回流溶解，趁热缓慢加入蒸馏水，边加边充分振摇，至乙醇浓度为约45％时(即当滴入水后有轻微浑浊)，摇匀，密封，室温冷却至室温温度，改放置冰箱中过夜静置，待其析出结晶，过滤，取结晶，得结晶I；母液加压浓缩至干，加入约90mL95％的乙醇回流溶解，缓慢加水重复上述操作进行二次重结晶，得结晶II；合并结晶I、II，得三白草提取物48g，木脂素含量为87％。

实施例3

将实施例1所得的三白草木脂素提取物用尽量少的无水乙醇溶解后，拌入100目硅胶中，所用硅胶为提取物重量的2倍，水浴上蒸干乙醇，拌入提取物的硅胶用乙酸乙醇回流提取2～3次，合并乙酸乙酯回流提取液，减压浓缩，得三白草提取物65g，木脂素含量为73％。

实施例4

药理实施例

本发明木脂素提取物对CCl4诱导肝纤维化大鼠的治疗作用

将40只小鼠随机分为对照组、CCl4模型组、联苯双酯组、本发明提取物组，每组10只。实验室饲养2天后，除对照组及模型组小鼠用蒸馏水0.5ml/鼠灌胃外，其余各组均按剂量灌胃，1次/天，连续1周。末次给药后2h，除对照组小鼠外，均按10ml/kg一次性腹腔注射0.1％CCl4花生油溶剂，禁食不禁水，16h后眼眶取血，离心取血清，测定谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)水平，取肝脏称重，计算肝脏系数。结果见表1，从表1结果可知，木脂素提取物对由CCl4所致大鼠肝损伤的血清GPT、GOT的升高有明显的拮抗作用，提示对CCl4诱导肝纤维化大鼠有治疗作用。

表1药物对CCl4致大鼠慢性肝纤维化的影响

^*：与模型组相比，p＜0.05，^**：与模型组相比，p＜0.01

Claims (9)

1、一种三白草总木脂素提取物，其特征是所述提取物中木脂素的含量高于50％。

2、如权利要求1所述的三白草总木脂素提取物，其特征是所述木脂素含量高于70％。

3、一种具有保肝作用的产品，其特征是含有如权利要求1或2所述的三白草总木脂素提取物和制药上可接受的赋形剂。

4、一种制备如权利要求1或2所述三白草总木脂素提取物的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

(1)三白草药材处理后用50％～95％的选自甲醇、乙醇、丙酮中的一种醇室温或加热回流提取后，提取液减压浓缩，使其含有机溶剂量不高于15％，总体积为原药材量的0.5～1.0倍，浓缩后的提取液室温放置过夜，过滤，取上清液；

(2)上清液减压蒸至无醇味后，以己烷或石油醚萃取脱脂，至萃取液颜色变淡，经萃取后的药液用碱调pH值为9.0-10.0，以有乙酸乙酯继续萃取，合并乙酸乙酯萃取液；

(3)乙酸乙酯萃取液减压浓缩至原体积的1/3后，用pH为3.0-4.5的酸水萃取，弃酸水萃取液，乙酸乙酯层减压浓缩得木脂素含量在50％以上的提取物。

5、如权利要求4所述的方法，其特征是乙酸乙酯还可以用氯仿、乙醚代替。

6、如权利要求4所述的方法，其特征是所述的碱是指氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾中的任一种。

7、如权利要求4所述的方法，其特征是所述的酸水是指稀盐酸水或稀硫酸水。

8、如权利要求4所述的方法，其还可包括进一步的纯化步骤，所述的纯化选自重结晶、凝胶柱层析、硅胶柱层析或大孔吸附树脂柱层析、聚酰胺吸附柱层析，或者它们的组合、或者将浸膏拌于硅胶或硅藻土中，晾干后有机溶剂回流洗脱。

9、如权利要求3所述的产品，其为片剂、胶囊剂或丸剂。