CN101252954A - 作为显像剂的酰肼偶联物 - Google Patents

作为显像剂的酰肼偶联物 Download PDF

Info

Publication number
CN101252954A
CN101252954A CNA2006800314144A CN200680031414A CN101252954A CN 101252954 A CN101252954 A CN 101252954A CN A2006800314144 A CNA2006800314144 A CN A2006800314144A CN 200680031414 A CN200680031414 A CN 200680031414A CN 101252954 A CN101252954 A CN 101252954A
Authority
CN
China
Prior art keywords
amino
solution
chemical compound
methyl
dmf
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2006800314144A
Other languages
English (en)
Inventor
T·D·哈里斯
S·P·罗宾逊
R·R·切萨蒂
P·亚拉曼奇利
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bristol Myers Squibb Pharma Co
Original Assignee
Bristol Myers Squibb Pharma Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bristol Myers Squibb Pharma Co filed Critical Bristol Myers Squibb Pharma Co
Publication of CN101252954A publication Critical patent/CN101252954A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/085—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier conjugated systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/0002—General or multifunctional contrast agents, e.g. chelated agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10—Organic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/088—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins conjugates with carriers being peptides, polyamino acids or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C243/00—Compounds containing chains of nitrogen atoms singly-bound to each other, e.g. hydrazines, triazanes
    • C07C243/24—Hydrazines having nitrogen atoms of hydrazine groups acylated by carboxylic acids
    • C07C243/38—Hydrazines having nitrogen atoms of hydrazine groups acylated by carboxylic acids with acylating carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/22—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/14—Radicals substituted by nitrogen atoms, not forming part of a nitro radical
    • C07D209/16—Tryptamines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/81—Amides; Imides
    • C07D213/82—Amides; Imides in position 3
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D257/00—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D257/02—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Apparatus For Radiation Diagnosis (AREA)
  • Magnetic Resonance Imaging Apparatus (AREA)
  • Other In-Based Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Pyrane Compounds (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)

Abstract

本公开涉及诊断剂。更具体地说，本公开涉及用于检测和/或显像和/或监测与冠状动脉斑块、颈动脉斑块、主动脉斑块、动脉血管斑块、动脉瘤、脉管炎及其它的动脉壁疾病有关的病理学异常的化合物、诊断剂、组合物以及试剂盒。另外，本公开涉及检测和/或显像和/或监测在动脉壁的变化，包括扩张性及缩窄性重构，总血管壁面积，内腔大小以及动脉外周长的方法。

Description

作为显像剂的酰肼偶联物
本公开涉及诊断剂。更具体地说，本公开涉及用于检测和/或显像和/或监测与冠状动脉斑块、颈动脉斑块、主动脉斑块、动脉血管斑块、动脉瘤、脉管炎及其它的动脉壁疾病有关的病理学异常的化合物、诊断剂、组合物以及试剂盒。另外，本公开涉及检测和/或显像和/或监测在动脉壁的变化，包括扩张性及缩窄性重构，总血管壁面积，内腔大小以及动脉外周长的方法。
在美国，心血管疾病是导致死亡的主要原因，每年造成一百万以上死亡。在西方国家，动脉粥样硬化是罹患冠心病的主要成因并且是造成非意外死亡的首要原因。在确定动脉粥样硬化及其后果，包括心肌梗塞、心绞痛、器官衰竭及中风的病因学及潜在疗法方面，已经进行了相当的努力。尽管存在这样的努力，但仍存在许多未解答的问题，包括动脉粥样硬化病变如何及何时变得易受损伤且危及生命，干预的最佳时机，以及如何检测及监测病变的发展。
最近二十年，已经基于数种涉及动脉粥样硬化的分子及细胞类型发展出许多放射性示踪剂。通常，放射性标记的蛋白质及血小板作为动脉粥样硬化的显像剂已经显示出一些临床潜力，但是由于差的目标/背景以及目标/血液比值，使得这些试剂用于显像冠状动脉乃至颈动脉病变是不理想的。放射性标记的肽、抗体片段以及代谢示踪剂，如FDG看起来似乎在动脉粥样硬化血栓形成的非侵入性显像方面提供用于核素闪烁扫描技术的新机会。然而，需要一种诊断及监测各种心血管疾病的非侵入性方法。
在本公开的一个方面中，提供一种式(I)的化合物
Figure A20068003141400081
或其药学上可接受的盐，其中
A为D-氨基酸残基或由D-氨基酸残基和第二D-氨基酸组成的肽；
D1和D2独立地选自氢、螯合剂以及显像部分；
L1为连接物；或
L1和D2与它们所连接的氮原子一起形成五-到七-元环；以及
R1和R2独立地选自氢及烷基。
在本公开第一方面的第一个实施方案中，提供一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中D1和D2至少一个为显像部分。在本公开第一方面的第二个实施方案中，所述显像部分包含非金属同位素。在本公开第一方面的第三个实施方案中，所述非金属同位素为14C、13N、18F、123I或125I。
在本公开第一方面的第四个实施方案中，提供一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中L1为选自亚烷基、亚烯基、亚芳基、亚杂烷基(heteroalkylene)、亚芳烷基(arylalkylene)及亚杂环基(heterocyclylene)的连接物。在本公开第一方面的第五个实施方案中，L1为亚烷基。在本公开第一方面的第六个实施方案中，L1为亚芳烷基。
在本公开第一方面的第七个实施方案中，提供一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中A为D-氨基酸残基。在本公开第一方面的第八个实施方案中，A为
Figure A20068003141400091
其中
n为0-6；
Ar为芳基基团；以及
Rx及Ry独立地选自氢、烯基、烷氧基羰基、烷基羰基、烷基、芳基及芳烷基。
在本公开第一方面的第九个实施方案中，n为2，Ar为苯基，以及Rx及Ry为氢。
在本公开第一方面的第十个实施方案中，提供一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中D1和D2中的一个为氢且另一个为螯合剂。在本公开第一方面的第十一个实施方案中，提供一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中D1与D2中的一个为氢且另一个为其中所述化合物进一步包含显像剂的螯合剂。
在本公开第一方面的第十二个实施方案中，提供一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中D1与D2中的一个为氢且另一个为式(II)的螯合剂
Figure A20068003141400101
其中
o、p、q、r、s、t及u各自独立地为1-6。
在本公开第一方面的第十三个实施方案中，o、r、s、t及u各自为1且p及q各自为2。
在本公开第二方面中，提供一种诊断剂，其包含：
a.式(III)的化合物
Figure A20068003141400102
或其药学上可接受的盐，其中
A为D-氨基酸残基或由D-氨基酸残基和第二D-氨基酸组成的肽；
D1和D2独立地选自氢及螯合剂；
L1为连接物；或
L1和D2与它们所连接的氮原子一起形成五-到七-元环；以及
R1和R2独立地选自氢及烷基；以及
b.显像剂。
在本公开第二方面的第一个实施方案中，所述显像剂为产生回声的物质(echogenic substance)、光学指示剂(optical reporter)、硼中子吸收剂、顺磁性金属离子、铁磁性金属、发射γ射线的放射性同位素、发射正电子的放射性同位素或X射线吸收剂。在本公开第二方面的第二个实施方案中，所述显像剂为顺磁性金属离子。在本公开第二方面的第三个实施方案中，所述顺磁性金属离子为Gd(III)。在本公开第二方面的第四个实施方案中，所述显像剂为选自99mTc、95Tc、111In、62Cu、64Cu、67Ga、68Ga及153Gd的发射γ射线的放射性同位素或发射正电子的放射性同位素。在本公开第二方面的第五个实施方案中，所述显像剂为99mTc。在本公开第二方面的第六个实施方案中，所述显像剂为111In。
在本公开第三方面中，提供一种化合物，其为
Figure A20068003141400111
或其药学上可接受的盐。
在本公开第四方面中，提供一种化合物，其为
或其药学上可接受的盐。
在本公开第五方面中，提供一种化合物，其为
或其药学上可接受的盐，其中Ar选自苯基、m-苯磺酸或p-苯磺酸。
在本公开第六方面中，提供一种化合物，其为
Figure A20068003141400122
或其药学上可接受的盐。
在本公开第七方面中，提供一种组合物，其包含：
(a)式(I)的化合物或其药学上可接受的盐；以及
(b)药学上可接受的载体。
在本公开第八方面中，提供一种组合物，其包含：
a.式(III)的化合物
Figure A20068003141400131
或其药学上可接受的盐，其中
A为D-氨基酸残基或由D-氨基酸残基和第二D-氨基酸组成的肽；
D1和D2独立地选自氢及螯合剂；
L1为连接物；或
L1和D2与它们所连接的氮原子一起形成五-到七-元环；以及
R1和R2独立地选自氢及烷基；
b.显像剂；以及
(c)药学上可接受的载体。
在本公开第九方面中，提供一种用于在患者中检测、显像和/或监测在动脉壁的变化，包括扩张性及缩窄性重构，总血管壁面积，内腔大小以及动脉外周长的试剂盒，其包含：
a.式(III)的化合物
Figure A20068003141400132
或其药学上可接受的盐，其中
A为D-氨基酸残基或由D-氨基酸残基和第二D-氨基酸组成的肽；
D1和D2独立地选自氢及螯合剂；
L1为连接物；或
L1和D2与它们所连接的氮原子一起形成五-到七-元环；以及
R1和R2独立地选自氢及烷基；
b.显像剂；
c.药学上可接受的载体；以及
d.用于制备包含用于在患者中检测、显像和/或监测在动脉壁的变化，包括扩张性及缩窄性重构，总血管壁面积，内腔大小以及动脉外周长的诊断剂的组合物的说明书。
在本公开第十方面中，提供一种在患者中检测、显像和/或监测在动脉壁的变化，包括扩张性及缩窄性重构，总血管壁面积，内腔大小以及动脉外周长的方法，其包括以下步骤：
a.将式(I)的化合物给药给患者；以及
b.通过诊断显像技术在患者中获得所述化合物集中部位的影像。
在本公开第十一方面中，提供一种在患者中检测、显像和/或监测在动脉壁的变化，包括扩张性及缩窄性重构，总血管壁面积，内腔大小以及动脉外周长的方法，包括以下步骤：
a.将诊断剂给药给患者，所述诊断剂包含：
i.式(III)的化合物
Figure A20068003141400141
或其药学上可接受的盐，其中
A为D-氨基酸残基或由D-氨基酸残基和第二D-氨基酸组成的肽；
D1和D2独立地选自氢及螯合剂；
L1为连接物；或
L1和D2与它们所连接的氮原子一起形成五-到七-元环；以及
R1和R2独立地选自氢及烷基；以及
ii.显像剂；以及
b.通过诊断显像技术在患者中获得所述化合物集中部位的影像。
本发明的其它方面可以包括在此所公开的实施方案及方面的合适组合。
再者，其它的方面及实施方案可以在本文所提供的说明书中找到。
除非在本文中另外特别注解，以下所列示的术语将具有以下定义。
在有些情况下，任何具体基团中碳原子的数目在描述所述基团之前加以表示。例如，术语“C6-10芳基”表示包含六到十个碳原子的芳基基团，以及术语“C6-10芳基-C1-10烷基”是指经由一到十个碳原子的烷基基团连接到母体分子部分的六到十个碳原子的芳基基团。当这些指示存在时，它们取代本文所包含的所有其它定义。
当在此使用时，单数形式“一(a)”、“一(an)”以及“所述”包括复数参考物，除非上下文清楚地另外规定。
当在此使用时，术语“烯基”是指含有至少一个碳-碳双键的二到十四个碳原子的直链或支链烃。
当在此使用时，术语“亚烯基”是指从含有二到十四个碳原子至少一个碳-碳双键的直链或支链烃得到的二价基团。
当在此使用时，术语“烷氧基”是指经由氧原子连接到母体分子部分的烷基基团。
当在此使用时，术语“烷氧基烷基”是指经由烷基基团连接到母体分子部分的烷氧基基团。
当在此使用时，术语“烷氧基羰基”是指经由羰基基团连接到母体分子部分的烷氧基基团。
当在此使用时，术语“烷基”是指从直链或支链饱和烃得到的基团。
当在此使用时，术语“烷基芳基”是指经由芳基基团连接到母体分子部分的烷基基团。
当在此使用时，术语“烷基羰基”是指经由羰基基团连接到母体分子部分的烷基基团。
当在此使用时，术语“亚烷基”是指从一到十四个碳原子的直链或支链饱和烃得到的二价基团。
当在此使用时，短语“氨基酸残基”意指从含有氨基基团(-NH2)、羧基基团(-COOH)以及任何多种侧基的天然存在的或合成的有机化合物，尤其是具有基本化学式NH2CHRCOOH，并且通过肽键连接在一起从而形成蛋白质或者在代谢中作为化学信使和作为中间体起作用的20种化合物的任一个得到的部分。例如，在化合物X中
Figure A20068003141400161
标记为“A”的分子部分为氨基酸D-亮氨酸的残基。
当在此使用时，术语“辅助配体”及“共配体”是指用来与所述试剂的螯合剂一起完成放射性核素的配位层的配体。对于包含二元配体系统的放射性药物，所述放射性核素配位层包含一或多个来自一或多种试剂的螯合剂以及一或多个辅助配体或共配体，条件是存在总共两种类型的配体或螯合剂。例如，由来自一种试剂的一个螯合剂和两个相同的辅助配体或共配体组成的放射性药物以及包含来自一或两种试剂的两个螯合剂和一个辅助配体或共配体的放射性药物都被认为包含二元配体系统。对于包含三元配体系统的放射性药物，所述放射性核素配位层包含一或多个来自一或多种试剂的螯合剂以及一或多个两种不同类型的辅助配体或共配体，条件是存在总共三种类型的配体或螯合剂。例如，由来自一种试剂的一个螯合剂以及两个不同的辅助配体或共配体组成的放射性药物被认为包含三元配体系统。
可用于制备放射性药物以及在可用于制备所述放射性药物的诊断试剂盒中有用的辅助配体或共配体包含一或多个氧、氮、碳、硫、磷、砷、硒以及碲给体原子。配体可以是放射性药物合成过程中的转移配体以及还在另一放射性药物中用作辅助配体或共配体。配体是否被称为转移或辅助或共配体取决于所述配体是否保留在所述放射性药物中的放射性核素配位层中，这由所述放射性核素以及所述一或多种试剂的螯合剂的配位化学决定。
当在此使用时，术语“芳基”是指苯基基团或者其中一个或多个环为苯基基团的二环稠环体系。二环稠环体系由稠合至单环环烯基基团、单环环烷基基团或另一个苯基基团的苯基基团组成。本发明的芳基基团可以经由所述基团中的任何可取代碳原子连接到母体分子部分。芳基基团的典型例子包括但不限于蒽基、薁基、芴基、茚满基、茚基、萘基、苯基及四氢萘基。
当在此使用时，术语“芳烷基”是指经由烷基基团连接到母体分子部分的芳基基团。
当在此使用时，术语“亚芳烷基”是指二价芳烷基基团，其中一个连接到母体分子部分的连结点在芳基部分上而另一个在烷基部分上。
当在此使用时，术语“亚芳基”是指二价芳基基团。
当在此使用时，术语“抑菌剂”意指在制剂使用之前的储存过程中或在诊断试剂盒用于合成诊断剂之后抑制细菌在制剂中生长的组分。
当在此使用时，术语“缓冲剂”是指用来将反应混合物的pH值保持在约3到约10的物质。
当在此使用时，术语“羰基”是指-C(O)-。
当在此使用时，术语“氰基”是指-CN。
当在此使用时，术语“载体”是指可以与本公开的化合物和/或诊断剂一起给药给患者的辅料或赋形剂，当以足以输送有效量的诊断剂和/或化合物的剂量给药时，其不破坏它们的活性且是无毒的。
当在此使用时，术语“螯合剂”是指经由一或多个给体原子结合至金属离子的分子上的部分或基团。所述螯合剂任选地经由连接物L2连接到母体分子部分。适宜的L2基团的例子包括但不限于-C(O)CH2-Ar-CH2NHC(O)-，其中Ar为亚芳基基团；-C(O)-；-C(O)-Het-NHNHC(O)-，其中Het为亚杂芳基；以及-C(O)-Het-。在本公开的化合物和/或诊断剂的某些实施方案中，所述螯合剂是能够形成产生回声的物质填充的脂质球或微泡的表面活性剂。
在某些其它实施方案中，所述螯合剂具有选自下述化学式的化学式：
Figure A20068003141400181
Figure A20068003141400182
以及
Figure A20068003141400191
其中
每个A1独立地选自-NR19R20、-N(R26)2、-SH、-S(Pg)、-OH、-PR19R20、-P(O)R21R22、-CO2H、连接到母体分子部分的键以及连接到L2的键；
每个A2独立地选自N(R26)、N(R19)、S、O、P(R19)以及-OP(O)(R21)O-；
A3为N；
A4选自OH及OC(＝O)C1-20烷基；
A5是OC(＝O)C1-20烷基；
每个E独立地选自被0-3个R23取代的C1-16亚烷基、被0-3个R23取代的C6-10亚芳基、被0-3个R23取代的C3-10亚环烷基、被0-3个R23取代的杂环基-C1-10亚烷基、被0-3个R23取代的C6-10芳基-C1-10亚烷基、被0-3个R23取代的C1-10烷基-C6-10亚芳基以及被0-3个R23取代的亚杂环基；
E1选自键及E；
每个E2独立地选自被0-3个R23取代的C1-16烷基、被0-3个R23取代的C6-10芳基、被0-3个R23取代的C3-10环烷基、被0-3个R23取代的杂环基-C1-10烷基、被0-3个R23取代的C6-10芳基-C1-10烷基、被0-3个R23取代的C1-10烷基-C6-10芳基以及被0-3个R23取代的杂环基；
E3为被1-3个R32取代的C1-10亚烷基；
Pg为硫醇保护基团；
R19和R20每个独立地选自连接到L2的键、连接到母体分子部分的键、氢、被0-3个R23取代的C1-10烷基、被0-3个R23取代的芳基、被0-3个R23取代的C3-10环烷基、被0-3个R23取代的杂环基-C1-10烷基、被0-3个R23取代的C6-10芳基-C1-10烷基以及被0-3个R23取代的杂环基。
R21和R22每个独立地选自连接到L2的键、连接到母体分子部分的键、-OH、被0-3个R23取代的C1-10烷基、被0-3个R23取代的芳基、被0-3个R23取代的C3-10环烷基、被0-3个R23取代的杂环基-C1-10烷基、被0-3个R23取代的C6-10芳基-C1-10烷基以及被0-3个R23取代的杂环基；
每个R23独立地选自连接到L2的键、连接到母体分子部分的键、＝O、卤代、三氟甲基、氰基、-CO2R24、-C(＝O)R24、-C(＝O)N(R24)2、-CHO、-CH2OR24、-OC(＝O)R24、-OC(＝O)OR24、-OR24、-OC(＝O)N(R24)2、-NR24C(＝O)R24、-NR24C(＝O)OR24、-NR24C(＝O)N(R24)2、-NR24SO2N(R24)2、-NR24SO2R24、-SO3H、-SO2R24、-SR24、-S(＝O)R24、-SO2N(R24)2、-N(R24)2、-NHC(＝S)NHR24、＝NOR24、NO2、-C(＝O)NHOR24、-C(＝O)NHNR24R24、-OCH2CO2H、2-(1-吗啉代)乙氧基、C1-5烷基、C2-4烯基、C3-6环烷基、C3-6环烷基甲基、C2-6烷氧基烷基、被0-2个R24取代的芳基、以及杂环基；
每个R24独立地选自连接到L2的键、连接到母体分子部分的键、氢、C1-6烷基、苯基、苄基以及C1-6烷氧基；
每个R26独立地为连接到金属的配位键或肼保护基团；
每个R32选自R34、＝O、-CO2R33、-C(＝O)R33、-C(＝O)N(R33)2、-CH2OR33、-OR33、-N(R33)2和C2-C4烯基；
每个R33独立地选自R34、氢、C1-C6烷基、苯基、苄基和三氟甲基；以及
R34为连接到L2的键；
其中A1、R19、R20、R21、R22、R23、R24和R34中至少一个为连接到L2或母体分子部分的键。
在本公开的一个实施方案中，所述螯合剂具有以下化学式：
Figure A20068003141400201
其中
A1c为连接到L2的键
A1a、A1b、A1d及A1e每个为-CO2H；
A3a、A3b及A3c每个为N；
Eb及Ec为C2亚烷基；以及
Ea、Ed、Ee、Ef及Eg为CH2。
在本公开的另一个实施方案中，所述螯合剂具有以下化学式：
Figure A20068003141400211
其中：
A3a、A3b、A3c及A3d每个为N；
A1a为连接到L2的键；
A1b、A1c及A1d每个为-CO2H；
Ea、Ec、Eg及Ee每个为CH2；以及
Eb、Ed、Ef及Eh每个为C2亚烷基。
在本公开的另一个实施方案中，所述螯合剂具有以下化学式：
Figure A20068003141400212
其中
A1a为-N(R26)2；
A1b为NHR19；
E为键；
R19为连接到L2的键；以及
每个R26为连接到金属的配位键。
当在此使用时，术语“环烷基”是指具有三个到十四个碳原子及零个杂原子的饱和单环、二环或三环烃环系。环烷基基团的典型例子包括但不限于环丙基、环戊基、双环[3.1.1]庚基以及金刚烷基。
当在此使用时，术语“亚环烷基”是指二价环烷基基团。
当在此使用时，术语“环烷基甲基”是指经由-CH2-基团连接到母体分子部分的环烷基基团。
当在此使用时，术语“诊断剂”是指可以用来检测、显像和/或监测病况、病理性异常和/或疾病的存在和/或发展的化合物。应当理解的是包含显像剂的本发明的所有化合物为诊断剂。例如，其中D1和D2中的一个为显像剂的式(I)化合物为诊断剂。
当在此使用时，术语“诊断显像技术”是指用于检测诊断剂的方法。
当在此使用时，术语“诊断试剂盒”和“试剂盒”是指在一个或多个小瓶中的一组组分，其由实际最终用户在临床或药学场合中使用从而合成诊断剂。所述试剂盒提供了用来合成以及使用所述诊断剂的所有必需的组分(除了那些实际最终用户通常可得到的物质，例如注射用水或盐水)，例如显像剂或其前体的溶液、在所述诊断剂合成期间用于加热的装置、向患者给予所述诊断剂所必需的装置如注射器和挡板(如果需要)以及显像装置。
当在此使用时，短语“给体原子”是指通过化学键直接连接到金属的原子。
当在此使用时，术语“卤代”是指Br、Cl、F或I。
当在此使用时，术语“亚杂烷基”是指其中碳原子的一到七个被选自O、NH及S的杂原子代替的亚烷基基团。
当在此使用时，术语“杂环基”是指含有一个、两个或三个独立地选自氮、氧及硫的杂原子的五-、六-或七-元环。所述五-元环具有零到两个双键以及所述六-及七-元环具有零到三个双键。术语“杂环基”还包括其中所述杂环基环稠合到苯基基团、单环环烯基基团、单环环烷基基团或另一个单环杂环基基团的二环基团。本发明的杂环基基团可以经由所述基团中的碳原子或氮原子连接到母体分子部分。杂环基基团的例子包括但不限于苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、噁唑基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡咯并吡啶基、吡咯基、噻唑基、噻吩基及硫代吗啉基。
当在此使用时，术语“杂环基烷基”是指经由烷基基团连接到母体分子部分的杂环基基团。
当在此使用时，术语“亚杂环基烷基”是指二价杂环基烷基基团，其中连接到母体分子部分的一个连结点在杂环基部分上且另一个在烷基部分上。
当在此使用时，术语“亚杂环基”是指二价杂环基基团。
当在此使用时，术语“显像部分”是指包含显像剂的分子的一个或多个部分。当在此使用时，术语“显像剂”是指在允许用来检测、显像和/或监测病况、病理性异常和/或疾病的存在和/或发展的诊断剂中的元素或官能团。所述显像部分可以包含连接物L3，其将所述显像剂连接到母体分子部分。适宜的L3基团的例子包括直链或支链亚烷基基团、-C(O)-，等等。
显像剂可以为产生回声的物质(液体或气体)、非金属同位素、光学指示剂、硼中子吸收剂、顺磁性金属离子、铁磁性金属、发射γ射线的放射性同位素、发射正电子的放射性同位素或X射线吸收剂。
适宜的产生回声的气体包括六氟化硫或全氟化碳气体，例如，全氟甲烷、全氟乙烷、全氟丙烷、全氟丁烷、全氟环丁烷、全氟戊烷或全氟己烷。
适宜的非金属同位素包括11C、14C、13N、18F、123I、124I及125I。
适宜的光学指示剂包括荧光指示剂(fluorescent reporter)及化学发光基团。
适宜的放射性同位素包括99mTc、95Tc、111In、62Cu、64Cu、67Ga、68Ga及153Gd。在本公开的一个具体实施方案中，适宜的放射性同位素包括99mTc、111In、68Ga、153Gd。
适宜的顺磁性金属离子包括：Gd(III)、Dy(III)、Fe(III)及Mn(II)。
适宜的X-射线吸收剂包括：Re、Sm、Ho、Lu、Pm、Y、Bi、Pd、Gd、La、Au、Au、Yb、Dy、Cu、Rh、Ag及Ir。
当在此使用时，术语“连接物”是指在所述分子的两个其它部分之间用作间隔物的分子的部分。连接物还可以起到本文所描述的其它功能。
当在此使用时，术语“冷冻干燥助剂”意指具有对于冷冻干燥有利的物理性能例如玻璃化转变温度的组分，将其加至所述制剂中从而改善所述制剂的所有组分的组合用于冷冻干燥的物理性能。
当在此使用时，术语“金属药物”意指包含金属的药物。所述金属为在诊断应用中可成像信号的来源以及在放射冶疗应用中细胞毒性放射的来源。
当在此使用时，短语“药学上可接受的”是指那些在合理医学判断范围内，适用于与人类及动物的组织相接触而没有过度毒性、刺激性、变应性应答或其它问题或并发症的，与合理的利益/风险比相匹配的化合物、诊断剂、物质、组合物和/或剂量形式。
本公开的化合物和/或诊断剂可以以药学上可接受的盐的形式存在。当在此使用时，术语“药学上可接受的盐”表示本公开的化合物和/或诊断剂的盐或两性离子形式，其可溶于水或油或者是可分散的，其在合理医学判断范围内，适用于与患者的组织相接触而没有过度毒性、刺激性、变应性应答或者其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相匹配，并且对于它们所预期的用途是有效的。可以在所述化合物和/或诊断剂的最终分离及纯化期间制备所述盐，或者通过将适宜的氮原子与适宜的酸反应来分离所述盐。典型的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐；二葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、均三甲苯基磺酸盐、甲烷磺酸盐、亚萘基磺酸盐(naphthylenesulfonate)、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酯酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、三氯醋酸盐、三氟醋酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对-甲苯磺酸盐及十一烷酸盐。可以用来形成药学上可接受的加成盐的酸的例子包括无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸及磷酸，以及有机酸例如草酸、马来酸、琥珀酸及柠檬酸。
可以在所述化合物和/或诊断剂的最终分离及纯化期间通过使羧基基团与适宜的碱例如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐或者与氨或有机伯、仲或叔胺反应来制备碱性加成盐。所述药学上可接受的盐的阳离子包括锂、钠、钾、钙、镁及铝，以及无毒的季铵阳离子例如铵、四甲铵、四乙铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N，N-二甲苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己胺、普鲁卡因、二苄胺、N，N-二苄基苯乙胺以及N，N’-二苄基乙二胺。其它可用于形成碱加成盐的典型有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、葡甲胺、哌啶及哌嗪。
当在此使用时，术语“放射性药物”是指其中金属为放射性同位素的金属药物。
当在此使用时，术语“试剂”意指能够直接转化为本公开的诊断剂的本公开的化合物。试剂可以直接用于本公开的诊断剂的制备或者可以是本公开的试剂盒中的组分。
当在此使用时，术语“还原剂”是指与放射性核素(其一般作为相对惰性的高氧化态化合物获得)反应从而通过将电子转移至放射性核素而降低其氧化态，由此使其更具反应性的化合物。
当在此使用时，短语“增溶助剂”是改善一种或多种其它组分在制剂所需介质中的溶解度的组分。
当在此使用时，短语“稳定助剂”意指将其加至金属药物中或加至诊断试剂盒中从而使金属药物稳定或者在其必须使用之前延长试剂盒的贮藏期限的组分。稳定助剂可以是抗氧化剂、还原剂或基团清除剂并可以通过与降解其它组分或金属药物的物质反应而提供改善的稳定性。
当在此使用时，术语“稳定的”是指具有允许制备的能力并在一段充分的时间保持其完整性而可用于本文所详述目的的化合物和/或诊断剂。一般地，本公开的化合物和/或诊断剂在40℃或更低温度下在不存在湿气或其它化学反应性条件下至少一周是稳定的。
当在此使用时，术语“无菌的”意指没有病理性微生物或者使用方法从而保持没有病理性微生物。
不对称中心存在于本发明的化合物和/或诊断剂中。取决于手性碳原子周围的取代基的构型，用符号“R”或“S”标明这些中心。应当理解的是本发明包括本发明化合物和/或诊断剂的所有立体化学异构形式，或它们的混合物，除非另外特别声明。化合物和/或诊断剂的单个立体异构体可以从含有手性中心的市场上可买到的起始材料合成制备或通过制备对映异构体产物的混合物且接着通过分离，例如转化为非对映异构体的混合物且接着通过进行分离或重结晶，色谱技术处理，或者将对映异构体直接在手性色谱柱上分离而制备。特定立体化学的起始化合物是市场上可买到的或者可以通过本领域已知的技术制备及拆分。
本公开的某些化合物和/或诊断剂还可以以不同的稳定构象形式存在，其可以是可分离的。归因于关于不对称单键的限制性旋转的扭力不对称现象，例如因为位阻现象或环张力，可以允许不同的构象异构体的分离。本公开包括这些化合物和/或诊断剂的每一种构象异构体及其混合物。
当在任何取代基中或在任何式中任何变量出现多于一次时，其每次出现的定义与其在每次其它出现的定义无关。因此，例如，如果一个基团表示为被0-2个R23取代，那么所述基团可以任选地被至多两个R23取代，而且每次出现的R23独立地选自所规定的可能的R23列表。同样地，举例来说，对于基团-N(R24)2，氮上的两个R24取代基中每一个独立地选自所规定的可能的R24列表。只有当这种组合产生稳定化合物和/或诊断剂时，取代基和/或变量的组合才是允许的。当连接到取代基的键显示跨越连接环中两个原子的键时，则这样的取代基可以键接到环上的任何原子。
当显像剂为放射性同位素时，所述化合物可以进一步包含能够稳定所述放射性同位素的第一辅助配体及第二辅助配体。许多配体可以用作辅助配体或共配体，做出何种选择取决于多种考虑，例如放射性药物合成的简易化、辅助配体的化学和物理性能、形成速率、收率以及所得到的放射性药物的异构形式的数目、将所述辅助配体或共配体对患者给药而不会对所述患者产生不利生理学后果的能力、以及所述配体在冷冻干燥试剂盒制剂中的相容性。辅助配体的电荷及亲油状将影响放射性药物的电荷及亲油状。例如，使用4，5-二羟基-1，3-苯二磺酸盐导致放射性药物带有另外两个阴离子基团，因为所述磺酸盐基团在生理条件下将为阴离子。使用N-烷基取代的3，4-羟基吡啶酮导致放射性药物取决于烷基取代基的大小而具有不同程度的亲油状。
还应当理解的是本公开的化合物和/或诊断剂可以采取溶液中、药物组合物中及体内的多种构象及离子形式。尽管本公开的具体化合物和/或诊断剂的在此描述具有特定的构象及离子形式，但那些化合物和/或诊断剂的其它构象及离子形式可根据那些描述预见并包括。
可用于本公开的药物组合物的药学上可接受的载体、助剂及赋形剂包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、TRIS(三(羟甲基)氨基-甲烷)、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解液如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯基吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇及羊毛脂。
根据本公开，药物组合物可以为无菌可注射制剂形式，例如无菌可注射水性或油状混悬液。可以根据本领域已知的技术用适宜的分散剂或润湿剂及助悬剂配制该混悬液。无菌可注射制剂还可以是无毒且肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或混悬液，例如为1，3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的赋形剂及溶剂中有水、林格氏溶液及等渗氯化钠溶液。此外，通常将无菌的、固定油用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用任何温和的固定油，包括合成单甘油酯或二甘油酯。脂肪酸，例如油酸及其甘油酯衍生物可作为天然的药学可接受油，例如橄榄油或蓖麻油，特别是以它们的聚氧乙烯化形式用于制备可注射制剂。这些油溶液或混悬液还可以包含长链醇稀释剂或分散剂。
在有些情形下，取决于注射的剂量及速率，可以用前药及活化剂使血浆蛋白上的结合位点变成饱和的。这导致蛋白-结合的试剂的减少部分并可损害其半衰期或耐受性以及所述试剂的有效性。在这些情形下，理想的是注射与无菌白蛋白或血浆代替溶液相结合的前药试剂。可选地，可使用含有造影剂并将其与抽入注射器的血液相混合；然后，再将这注射入患者的装置/注射器。
本公开的化合物、诊断剂及药物组合物可以经口地、肠胃外地、通过吸入喷雾、局部地、直肠地、经鼻地、经颊地、经阴道地或者经由植入的储器以含有常规无毒且药学上可接受的载体、助剂及赋形剂的剂量制剂给药。当在此使用时，术语“胃肠外的”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑液内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内(intralesional)及颅内注射或输注技术。
当口服给药时，本公开的药物组合物可以以任何口服可接受的剂量形式给药，包括但不限于胶囊、片剂、水悬剂或溶液剂。在口服应用的片剂的情况下，通常使用的载体包括乳糖及玉米淀粉。一般地，还加入润滑剂，例如硬脂酸镁。对于胶囊剂形式的口服给药，有用的稀释剂包括乳糖及干玉米淀粉。当需要水悬剂用于口服应用时，所述活性成分与乳化及悬浮剂相混合。如果需要，还可以加入一些甜味剂、调味剂或着色剂。
可选地，当以栓剂的形式给药用于直肠给药时，可以通过将所述试剂与适宜的无刺激性的且在室温下为固体而在直肠温度下为液体以及因此将在直肠中融化而释放所述药物的赋形剂相混合来制备本公开的药物组合物。这样的物质包括可可脂、蜂蜡及聚乙二醇。
如以前所注意的，本公开的药物组合物还可以局部给药，尤其是当治疗的目标包括通过局部施用容易接近的区域或器官，包括眼睛、皮肤或下部肠道时。适宜的局部制剂对于所述区域或器官的每个都容易制得。
用于下部肠道的局部施用可以以直肠栓剂制剂(参见上文)或以适宜的灌肠剂制剂实施。还可以使用局部-透过皮肤起作用的贴片。
对于局部施用，可以以包含悬浮或溶解于一或多种载体中的活性组分的适宜软膏剂配制药物组合物。用于本公开的化合物和/或诊断剂局部给药的载体包括但不限于矿物油、液体矿脂、白矿脂、丙二醇、聚环氧乙烷、聚环氧丙烷化合物、乳化蜡及水。可选地，可以以包含悬浮或溶解于一或多种药学上可接受的载体中的活性组分的适宜洗剂或乳膏剂配制药物组合物。适宜的载体包括但不限于矿物油、单硬脂酸失水山梨糖醇酯、聚山梨酸酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡基硬脂基醇、2-辛基十二醇、苄醇及水。
对于眼部应用，可以在等渗的、pH值经调整的无菌盐水中将药物组合物配制为微粒化混悬液，或者一般地，在等渗的、pH值经调整的无菌盐水中配制为溶液，含有或不含防腐剂例如苯扎氯铵。可选地，对于眼部应用，可以在软膏剂例如矿脂中配制药物组合物。
对于通过鼻气雾剂或者吸入剂给药，根据药物制剂领域熟知的技术制备本公开的药物组合物，以及可以制备成盐水中的溶液，使用苄醇或其它适宜的防腐剂、吸收促进剂从而增加生物利用度、碳氟化合物和/或其它常规的增溶或分散剂。
可与载体物质相混合从而制备单一剂量形式的活性成分的量将依赖于所治疗的主体以及给药的具体方式而变化。一般的制剂将包含约5％到约95％的活性化合物(w/w)。典型地，这样的制剂包含约20％到约80％的活性化合物。
对于静脉内及其它类型给药，可接受的剂量范围介于约0.001到约1.0mmol/kg体重，其中活性成分化合物的典型剂量介于约0.001到约0.5mmol/kg体重。更典型的介于约0.01到约0.1mmol/kg，以及活性成分化合物的最典型的剂量介于约0.0001到约0.05mmol/kg。
如有经验的技术人员将理解的，可能需要比以上所叙述的那些更低或更高的剂量。对于任何特定患者的具体给药方案将取决于多种因素，包括所使用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状态、性别、饮食、给药时间、排泄速率、药物组合以及治疗医生的判断。
本公开的另一方面是用于制备诊断剂的诊断试剂盒，所述诊断剂用于检测、显像和/或监测与基质金属蛋白酶活性有关的病理性异常。本公开的诊断试剂盒包含一或多个含有无菌的、无热原的、包含预定量的本公开的试剂以及任选的其它组分例如一或两种辅助配体例如三(羟甲基)甲基甘氨酸及3-[双(3-磺基苯基)膦]苯磺酸(TPPTS)、还原剂、转移配体、缓冲剂、冷冻干燥助剂、稳定助剂、增溶助剂及抑菌剂的制剂的小瓶。
在制剂中包含一或多种任选组分常常将改善实际最终用户合成所述诊断剂的简易性、制造所述试剂盒的简易性、所述试剂盒的保质期或所述显像剂的稳定性及保质期。对于包含含有肼或腙结合部分的试剂的诊断试剂盒，包含一或两种辅助配体是需要的。所述一或多个含有所有或部分所述制剂的小瓶可独立地为无菌溶液或冷冻干燥固体的形式。
本公开的另一方面是用于制备用于诊断心血管病症、传染性疾病、炎性疾病及癌症的诊断剂的诊断试剂盒。本公开的诊断试剂盒包含一或多个含有无菌的、无热原的、含有预定量的本公开中所描述的螯合剂、稳定共配体、还原剂以及任选的其它组分例如缓冲剂、冷冻干燥助剂、稳定助剂、增溶助剂及抑菌剂的制剂的小瓶。
在制剂中包含一或多种任选组分常常将改善实际最终用户合成所述诊断剂的简易性、制造所述试剂盒的简易性、所述试剂盒的保质期或所述显像剂的稳定性及保质期。通过在所述制剂中包含任选的组分而实现所述改善必须是与所述制剂增加的复杂性以及所增加的制备所述试剂盒的成本相当的。所述一或多个含有所有或部分制剂的小瓶可以独立地为无菌溶液或冷冻干燥固体的形式。
可用于制备诊断剂及其试剂盒的缓冲剂包括但不限于磷酸盐、柠檬酸盐、磺基水杨酸盐及乙盐酸。更完整的列表可以在美国药典中找到。
可用于制备诊断剂及其试剂盒的冷冻干燥助剂包括但不限于甘露醇、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、聚蔗糖(Ficoll)及聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。
可用于制备诊断剂及其试剂盒的稳定助剂包括但不限于抗坏血酸、半胱氨酸、单硫代甘油、亚硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、龙胆酸及肌醇。
可用于制备诊断剂及其试剂盒的增溶助剂包括但不限于乙醇、甘油、聚乙二醇、丙二醇、聚氧乙烯单油酸失水山梨醇酯、单油酸失水山梨醇酯、聚山梨酸酯、聚(环氧乙烷)-聚(环氧丙烷)聚(环氧乙烷)嵌段共聚物(Pluronics)及卵磷脂。典型的增溶助剂为聚乙二醇及Pluronics共聚物。
可用于制备诊断剂及其试剂盒的抑菌剂包括但不限于苄醇、苯扎氯铵、氯丁醇及对羟基苯甲酸甲酯、丙酯或丁酯。
诊断试剂盒中的组分还可以用于超过一种的功能。还可以将还原剂用作稳定助剂，还可以将缓冲剂用作转移配体，还可以将冷冻干燥助剂用作转移配体、辅助配体或共配体，等等。
每一组分在所述制剂中的预定量通过多种考虑而确定，即在有些情况下对于那种组分是特定的而在其它情况下依赖于另一组分的量或者任选组分的存在和量。通常，使用将产生所述制剂的预期效果的每一组分的最小量。所述制剂的预期效果为实际最终用户能够合成所述诊断剂并具有高度的确定性，即能够安全地将所述诊断剂注射入患者并将提供关于该患者的疾病状态的诊断信息。
本公开的诊断试剂盒还可以包含书面说明书，实际最终用户按照其来合成所述诊断剂。可以将这些说明书附于一个或多个小瓶或附于其中所述一或多个小瓶被包装用于运输的容器上或者可以作为单独的插入物，称为包装说明书。
以其最终形态以一般包含在一个小瓶中的制剂，作为冷冻干燥固体或水溶液向最终用户提供用作磁共振成像造影剂的X射线造影剂、超声造影剂以及金属药物。当提供时，最终用户用水或盐水重构所述冷冻干燥的固体且抽取患者剂量或者简单地从水溶液制剂中抽取所述剂量。
这些诊断剂，不论用于γ闪烁扫描法、正电子发射断层显像、MRI、超声波或X射线图像增强，都是有用的，特别地，用于检测以及监测心血管疾病随着时间的变化。
可以按照本文所描述的方法制备本公开的化合物和/或诊断剂。通常，通过将C-末端残基的α-胺脱保护并使用所描述的方法通过肽键将下一个经合适保护的氨基酸偶联而延长肽、多肽以及模拟肽。重复该脱保护及偶联步骤直到获得所需的序列。可以以逐步的方式用组成氨基酸进行该偶联，或将片段(两个至数个氨基酸)缩合，或两种方法的组合，或根据最初描述于J.Am.Chem.Soc.，1963，85，2149-2154的方法通过固相肽合成来进行该偶联。
还可以使用自动化合成设备来合成肽、多肽及模拟肽。除前述之外，肽、多肽及模拟肽合成的方法描述于Stewart和Young，Solid PhasePeptide Synthesis，第2版，Pierce Chemical Co.，Rockford，IL(1984)；Gross，Meienhofer，Udenfriend编，The Peptides：Analysis，Synthesis，Biology，Vol.1，2，3，5和9，Academic Press，New York，(1980-1987)；Bodanszky，Peptide Chemistry：A Practical Textbook，Springer-Verlag，New York(1988)；以及Bodanszky等人，The Practice of PeptideSynthesis，Springer-Verlag，New York(1984)中。
在两个氨基酸衍生物之间、氨基酸与肽、多肽或模拟肽之间、两个肽、多肽或模拟肽碎片之间的偶联，或者肽、多肽或模拟肽的环合可以使用标准偶联方法，例如叠氮化物方法、混合碳酸酐(氯甲酸异丁酯)方法、碳二亚胺(二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺、或水溶性碳二亚胺)方法、活性酯(对-硝基苯基酯、N-羟基琥珀酸亚氨酯)方法、Woodward试剂K方法、羰基二咪唑方法、磷试剂例如BOP-Cl、或者氧化还原法来进行。可以通过加入1-羟基苯并三唑或1-羟基-7-偶氮苯并三唑来增强其中一些方法(尤其是所述碳二亚胺)。这些偶联反应可以在溶液(液相)中或在固相，例如聚苯乙烯或适宜的树脂(见后)上进行。
在偶联反应期间，一般将组成氨基酸或氨基酸模拟物的官能团保护从而避免形成不希望的键。可使用的保护基团列于Greene，ProtectiveGroups in Organic Synthesis，John Wiley&Sons，New York(1981)及ThePeptides：Analysis，Synthesis，Biology，Vol.3，Academic Press，New York(1981)中。
可以用能被裂解从而得到羧酸的酯来保护C-末端残基的α-基团。这些保护基团包括：
(1)烷基酯，例如甲基和叔丁基；
(2)芳基酯，例如苄基和取代苄基，或者
(3)能够通过弱碱处理或温和的还原方法裂解的酯，例如三氯乙基及苯甲酰甲基酯。
在固相情形下，将C-末端氨基酸连接到不溶的载体(通常为聚苯乙烯)。这些不溶的载体包含将与羧基基团反应从而形成对于延长条件稳定但之后易于裂解的键的基团。例子包括：肟树脂(DeGrado和Kaiser(1980)J.Org.Chem.45，1295-1300)氯代或溴代甲基树脂、羟甲基树脂及氨甲基树脂。这些树脂中许多是市场上可买到的且已经引入所需要的C-末端氨基酸。
一般地，保护每一氨基酸的α-氨基基团。可以使用本领域已知的任何保护基团。这些的例子有：
(1)酰基类型，例如甲酰基、三氟乙酰基、邻苯二甲酰基和对甲苯磺酰基；
(2)芳族氨基甲酸酯类型，例如苄氧基羰基(Cbz)和取代的苄氧基羰基、1-(对联苯基)-1-甲基乙氧基羰基以及9-芴基-甲氧基羰基(Fmoc)；
(3)脂族氨基甲酸酯类型例如叔丁氧基羰基(Boc)、乙氧基羰基、二异丙基甲氧基羰基以及烯丙氧基羰基；
(4)氨基甲酸环烷基酯类型，例如环戊氧基羰基和金刚烷氧基羰基；
(5)烷基类型，例如三苯基甲基和苄基；
(6)三烷基甲硅烷，例如三甲基甲硅烷；以及
(7)含有硫醇的类型，例如苯基硫代羰基(phenylthiocarbonyl)及二硫琥珀酰基(dithiasuccinoyl)。
典型的α-氨基保护基为Boc或Fmoc。许多经适当保护用于肽合成的氨基酸或氨基酸模拟物衍生物是市场上可买到的。
在下一个氨基酸偶联之前将α-氨基保护基裂解。当使用Boc基团时，选择的方法为三氟乙酸，纯的或在二氯甲烷中，或者在二噁烷中的HCl。然后将所得到的铵盐在偶联之前或在原位用碱性溶液例如含水缓冲液或在二氯甲烷或二甲基甲酰胺中的叔胺中和。当使用Fmoc基团时，选择的试剂为在二甲基甲酰胺中的哌啶或取代哌啶，但可以使用任何仲胺或含水碱性溶液。脱保护在介于0℃与室温之间的温度下进行。
一般地，在制备肽期间使用以上所确定的任何基团将任何带有侧链官能团的氨基酸或氨基酸模拟物进行保护。本领域技术人员将理解这些侧链官能团的合适保护基的选择及使用将取决于氨基酸或氨基酸模拟物以及其它保护基在肽、多肽或模拟肽中的存在。这种保护基的选择是重要的，因为其在脱保护以及α-氨基基团的偶联期间不能被除去。
例如，当选择Boc用于α-胺保护时，以下保护基是可接受的：对于精氨酸为对甲苯磺酰基(tosyl)部分和硝基；对于赖氨酸为苄氧基羰基、取代的苄氧基羰基、对甲苯磺酰基或三氟乙酰基；对于谷氨酸和天冬氨酸为苄基或烷基酯例如环戊基；对于丝氨酸和苏氨酸为苄基醚；对于酪氨酸为苄基醚、取代的苄基醚或2-溴苄氧基羰基；对于半胱氨酸为对甲基苄基、对甲氧基苄基、乙酰氨基甲基、苄基或叔丁基磺酰基；以及色氨酸的吲哚可以保持未保护或者用甲酰基基团保护。
当选择Fmoc用于α-胺保护时，通常基于保护基的叔丁基是可接受的。例如，对于赖氨酸可以使用Boc，对于丝氨酸、苏氨酸及酪氨酸可以使用叔丁基醚，以及对于谷氨酸及天冬氨酸可以使用叔丁基酯。
一旦肽、多肽或模拟肽的延长，或环状肽或模拟肽的延长和环合完成，则去除所有保护基。对于液相合成法，保护基以任何由保护基的选择所决定的方式除去。这些方法是本领域技术人员所熟知的。
当使用固相合成法来合成环状肽或模拟肽时，应当将肽或模拟肽从树脂移去而不同时从可能干扰环合过程的官能团除去保护基。因此，如果肽或模拟肽将在溶液中环合，则需要选择裂解条件以便生成游离的α-羧酸酯及游离的α-氨基基团而不同时去除其它保护基。可选地，可以通过肼解作用将肽或模拟肽从树脂移去，然后通过叠氮化物方法进行偶联。另一种非常便利的方法包括肽或模拟肽在肟树脂上的合成，接着从所述树脂进行分子内亲核取代，这生成环状肽或模拟肽(Tetrahedron Letters，1990，43，6121-6124)。当使用肟树脂时，通常选择Boc保护方案。那么，去除侧链保护基的一般方法通常包括在0℃用含有添加剂例如甲硫醚、苯甲醚、苯甲硫醚或对甲酚的无水HF进行处理。还可以用其它酸性试剂例如三氟甲磺酸/三氟乙酸混合物来完成肽或模拟肽的裂解。
在本公开中所使用的非常见氨基酸可以用本领域技术人员所熟知的标准方法来合成(The Peptides：Analysis，Synthesis，Biology，Vol.5，pp.342-449，Academic Press，New York(1981))。可以使用先前所描述的方法制备N-烷基氨基酸(Cheung等人，Can.J.Chem.，1977，55，906；Freidinger等人，J.Org.Chem.，1982，48，77)。
选择螯合剂从而与为特定应用而选择的金属离子形成稳定的络合物。选择用于诊断放射性药物的螯合剂从而与具有可显像的γ射线或正电子发射的放射性同位素，例如99mTc、95Tc、111In、62Cu、60Cu、64Cu、67Ga、68Ga、86Y形成稳定的络合物。
用于锝、铜和镓同位素的螯合剂选自二胺二硫醇、单胺-单酰胺二硫醇、三酰胺-单硫醇、单胺-二酰胺-单硫醇、二胺二肟及肼。螯合剂通常是具有选自氮、氧和硫的给体原子的四齿的(tetradentate)。硫醇硫原子以及肼可以带有保护基，所述保护基能够在使用所述试剂来合成放射性药物之前或者更经常在所述放射性药物的合成期间原位被替换。
示例性的硫醇保护基包括列于Greene和Wuts，Protective Groups inOrganic Synthesis，John Wiley&Sons，New York(1991)中的那些。可以使用本领域已知的任何硫醇保护基。硫醇保护基的例子包括但不限于以下：乙酰氨基甲基、苯甲酰氨基甲基、1-乙氧基乙基、苯甲酰基及三苯基甲基。
对于肼螯合剂的示例性保护基为腙，其可以是具有选自氢、烷基、芳基及杂环的取代基的醛或酮腙。腙的例子描述于US-A-5,750,088中。
当结合至金属放射性核素时，肼螯合剂被称为肼合(hydrazido)或二氮烯合(diazenido)基团并且作为放射性核素连接至放射性药物的其余部分的连接点。二氮烯合基团可以是末端的(所述基团的仅一个原子连接至放射性核素)或者螯合的。为了具有螯合二氮烯合基团，所述基团的至少一个其它原子还必须连接至放射性核素。连接到金属的原子被称为给体原子。
对于金属例如铟(例如111In)、钇(例如86Y和90Y)以及镧系元素(例如Eu(III)、Gd(III)及Dy(III))的螯合剂选自环状的及非环状的多氨基羧酸酯(polyaminocarboxylates)例如DTPA、DOTA、DO3A、2-苄基-DOTA、α-(2-苯乙基)1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-乙酸-4，7，10-三(甲基乙)酸、2-苄基-环己基二亚乙基三胺五乙酸、2-苄基-6-甲基-DTPA及6，6”-双[N，N，N”，N”-四(羧甲基)氨甲基)-4’-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-2，2′：6′，2″-三吡啶。合成这些市场上买不到的螯合剂的方法可以在J.Chem.Soc.Perkin Trans.，1992，1，1175；Bioconjugate Chem.，1991，2，187；J.Nucl.Med.，1990，31，473；US-A-5,064,956以及US-A-4,859,777中找到。
所述金属离子的配位层包括结合到金属的所有配体或基团。对于过渡金属络合物，为了稳定，其一般具有由大于或等于4的整数和小于或等于8的整数组成的配位数(给体原子的数目)；也就是说，存在4至8个结合至金属的原子并且称其具有完整的配位层。对于镧系或锕系金属络合物，所述金属一般具有由大于或等于4的整数和小于或等于10的整数组成的配位数(给体原子的数目)；也就是说，存在4至10个结合至所述金属的原子并且称其具有完整的配位层。对于稳定的金属药物络合物，所必需的配位数由所述元素的特性、它的氧化态、以及给体原子的类型确定。如果所述螯合剂不提供为通过完成其配位层而稳定所述金属络合物所必需的所有原子，则通过来自其它配体的给体原子来完成所述配位层，所述其它配体被称为辅助配体或共配体，其还可是末端的或螯合的。
许多配体可以用作辅助配体或共配体，做出何种选择取决于多种考虑，例如放射性药物合成的简易化、辅助配体的化学和物理性能、生成率、收率以及所得到的放射性药物的异构形式的数目、将所述辅助配体或共配体对患者给药而不会对所述患者产生不利生理学后果的能力以及配体在冷冻干燥试剂盒制剂中的相容性。辅助配体的电荷及亲油状将影响放射性药物的电荷及亲油状。例如，使用4，5-二羟基-1，3-苯二磺酸盐导致放射性药物带有另外的两个阴离子基团，因为所述磺酸盐基团在生理条件下将是阴离子的。取决于烷基取代基的大小，使用N-烷基取代的3，4-羟基吡啶酮导致放射性药物具有不同程度的亲油状。
本公开的一些锝放射性药物由肼合或二氮烯合螯合剂和辅助配体AL1，或者螯合剂和两种类型的辅助配体AL1和AL2，或者由两个氮及两个硫原子组成的四齿螯合剂组成。辅助配体AL1由两个或更多个硬给体原子例如氧和胺氮(sp3杂化)组成。所述给体原子占据放射性核素金属的配位层中的至少两个位点；辅助配体AL1充当三元配体系统中三个配体之一。辅助配体AL1的例子包括但不限于双氧配体以及官能化的氨基羧酸酯。许多这样的配体可从商业来源获得。
辅助双氧配体包括经由至少两个氧给体原子配位至金属离子的配体。例子包括但不限于：葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、2-羟基异丁酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、甘露醇、葡萄糖二酸盐、麦芽酚、曲酸、2，2-双(羟甲基)丙酸、4，5-二羟基-1，3-苯二磺酸盐或者取代或未取代的1，2-或3，4-羟基吡啶酮。(这些例子中所述配体的名称指的是所述配体的质子化的或者非质子化的形式。)
官能化的氨基羧酸酯包括具有胺氮与氧给体原子的组合的配体。例子包括但不限于：亚氨基二乙酸、2，3-二氨基丙酸、次氮基三乙酸、N，N′-乙二胺双乙酸、N，N，N′-乙二胺三乙酸、羟基乙基乙二胺三乙酸以及N，N′-乙二胺双-羟基苯基甘氨酸。(这些例子中所述配体的名称指的是所述配体的质子化的或者非质子化的形式。)
一系列官能化的氨基羧酸酯公开于US-A-5,350,837，其产生锝标记的肼基修饰的蛋白质的改善形成率。我们已经确定这些氨基羧酸酯中的一些导致本公开的放射性药物的改善收率。辅助配体AL1的例子包括官能化的氨基羧酸酯，其为甘氨酸衍生物；例如，三(羟甲基)甲基甘氨酸(tricine，三(羟基甲基)甲基甘氨酸)。
本公开的锝诊断剂的例子包括肼合或二氮烯合螯合剂以及两种类型的标记为AL1及AL2的辅助配体，或者二胺二硫醇螯合剂。第二种类型的辅助配体AL2包括一或多个选自膦磷、胂砷、亚胺氮(sp2杂化)、硫(sp2杂化)及碳(sp杂化)的软给体原子；具有p-酸性质的原子。配体AL2可以为单齿的(monodentate)、双齿的(bidentate)或三齿的(tridentate)；所述齿数由配体中给体原子的数目限定。US-A-5,744,120及US-A-5,739,789公开了包含一或多个辅助配体或共配体AL2的放射性药物，其较之不包含一或多个辅助配体AL2的放射性药物更为稳定；也就是说，它们具有最少的异构形式，其相对比例不随时间显著变化，并且在稀释时基本上保持完整。
包含膦或胂给体原子的配体AL2为三取代的膦、三取代的胂、四取代的二膦及四取代的二胂。包含亚胺氮的配体AL2为不饱和的或芳族的含氮的5或6-元杂环。包含硫(sp2杂化)给体原子的配体为硫代羰基，并包含C＝S部分。包含碳(sp杂化)给体原子的配体为异腈，其包含CNR部分，其中R为有机基团。许多这样的配体可从商业来源获得。可以如US-A-4,452,774及US-A-4,988,827所述合成异腈。
辅助配体AL2的例子为三取代的膦及不饱和的或芳族的5或6元杂环。
辅助配体AL2可以被烷基、芳基、烷氧基、杂环基、芳烷基、烷芳基及芳烷基芳基基团取代并且可以或不可以带有包含例如氧、氮、磷或硫的杂原子的官能团。这种官能团的例子包括但不限于：羟基、羧基、羧酰胺、硝基、醚、酮、氨基、铵、磺酸酯、磺酰胺、膦酸酯及膦酰胺。可以选择所述官能团来改变所述配体的亲油状和水溶性，这可能影响所述放射性药物的生物学特性，例如改变进入非靶组织、细胞或体液的分布，以及从体内清除的机制和速率。
选择用于磁共振显像造影剂的螯合剂来与顺磁性金属离子，例如Gd(III)、Dy(III)、Fe(III)及Mn(II)形成稳定的络合物，其选自环状的及非环状的多氨基羧酸酯例如DTPA、DOTA、DO3A、2-苄基-DOTA、α-(2-苯乙基)1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-乙酸-4，7，10-三(甲基乙)酸、2-苄基-环己基二亚乙基三胺五乙酸、2-苄基-6-甲基-DTPA及6，6″-双[N，N，N″，N″-四(羧甲基)氨甲基)-4′-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-2，2′：6′，2″-三吡啶。
对于心脏显像方法，从血液的清除速率具有特别的重要性，因为心脏的血液腔比需要显像的疾病病灶要大。对于有效的心脏显像剂，目标与背景的比值(疾病病灶与血液以及疾病病灶与肌肉)一般大于或等于约1.5，典型地，大于或等于约2.0，以及更典型地，甚至更大。本公开的一些药物具有这样的血液清除速率，即其导致在小鼠模型中测得在注射后2小时小于约10％i.d./g，或者在狗模型中测得在注射后2小时小于约0.5％i.d./g。在一个实施方案中，本公开的诊断剂具有这样的血液清除速率，即其导致在小鼠模型中测得在注射后2小时小于约3％i.d./g，或者在狗模型中测得在注射后2小时小于约0.05％i.d./g。
进一步包含肼合或二氮烯合螯合剂单元的含有锝的本公开的诊断剂可以通过在约0℃到约100℃的温度下在水溶液中混合放射性核素的盐、本公开的试剂、辅助配体AL1、辅助配体AL2以及还原剂而容易地加以制备。包含具有两个氮及两个硫原子的四齿的螯合剂的含有锝的本公开的诊断剂可以通过在约0℃到约100℃的温度下在水溶液中混合放射性核素的盐、本公开的试剂以及还原剂而容易地加以制备。
当本公开的试剂中的螯合剂以腙基团存在时，则在与金属放射性核素络合之前，一般首先将其转变为肼，该肼可以被质子化或可以不被质子化。腙基团向肼的转变可以发生在与放射性核素的反应之前，在这种情况下放射性核素以及辅助配体或共配体不与所述试剂结合而与带有螯合剂的试剂的水解形式结合，或者在存在放射性核素的情况下发生，在这种情况下试剂本身与放射性核素以及一或多种辅助配体或共配体结合。在后一种情况下，所述反应混合物的pH值通常为中性或酸性的。
可选地，含有肼合或二氮烯合螯合剂的本公开的诊断剂可以通过首先在约0℃到约100℃的温度下在水溶液中混合放射性核素的盐、辅助配体AL1及还原剂从而生成带有辅助配体AL1的中间体放射性核素络合物，然后加入本公开的试剂及辅助配体AL2并在约0℃到约100℃的温度下进一步反应而加以制备。
可选地，含有肼合或二氮烯合螯合剂的本公开的诊断剂可以通过首先在约0℃到约100℃的温度下在水溶液中混合放射性核素的盐、辅助配体AL1、本公开的试剂以及还原剂从而生成中间体放射性核素络合物，然后加入辅助配体AL2且在约0℃到约100℃的温度下进一步反应而加以制备。
锝放射性核素一般为高锝酸盐或高铼酸盐及药学上可接受的阳离子的化学形式。高锝酸盐形式一般为高锝酸钠，例如得自商业99mTc生产者。用于制备本公开的放射性药物的高锝酸盐的量可以介于约0.1mCi到约1Ci的范围，或更典型地，介于约1到约200mCi。
用于制备本公开的锝诊断试剂的本公开的试剂的量可以介于约0.01μg到约10mg的范围，或更典型地，介于约0.5μg到约200μg。所使用的量将由其它反应物的量及所欲制备的本公开的放射性药物的特性确定。
所使用的辅助配体AL1的量可以介于约0.1mg到约1g的范围，或更典型地，介于约1mg到约100mg。具体放射性药物的确切量是所欲制备的本公开的放射性药物的特性、所使用的方法以及其它反应物的量和特性的函数。过大量的AL1将导致由不具有生物学活性分子的锝标记的AL1组成的副产物或由具有辅助配体AL1但不具有辅助配体AL2的锝标记的生物学活性分子组成的副产物的生成。过少量的AL1将导致其它副产物例如具有辅助配体AL2但不具有所述辅助配体AL1的锝标记的生物学活性分子、或被还原水解的锝或锝胶体。
所使用的辅助配体AL2的量可以介于约0.001mg到约1g的范围，或典型地，介于约0.01mg到约10mg。对于具体放射性药物的确切量是所欲制备的本公开的放射性药物的特性、所使用的方法以及其它反应物的量和特性的函数。过多量的AL2将会导致由不具有生物学活性分子的锝标记的AL2组成的副产品或由具有辅助配体AL2但不具有辅助配体AL1的锝标记的生物学活性分子组成的副产品的生成。
本公开的铟、铜、镓及钇诊断剂可以通过在约0℃到约100℃的温度下在水溶液中混合放射性核素的盐及本公开的试剂而容易地加以制备。这些放射性核素一般作为在无机酸，例如盐酸、硝酸或硫酸中的稀释水溶液得到。将放射性核素与一到约一千当量的溶解于水溶液的本公开的试剂混合。一般地，使用缓冲剂来将反应混合物的pH值保持在约3到约10。
本公开的钆、镝、铁及锰诊断剂可以通过在约0℃到约100℃的温度下在水溶液中混合顺磁性金属离子的盐及本公开的试剂而容易地加以制备。这些顺磁性金属离子一般作为在无机酸，例如盐酸、硝酸或硫酸中的稀释水溶液得到。将顺磁性金属离子与一到约一千当量的溶解于水溶液的本公开的试剂混合。一般地，使用缓冲剂来将反应混合物的pH值保持在约3到约10。
制备的总时间将依赖于金属离子的特性、反应物的特性和量以及用于制备的方法而变化。在约1分钟内或可能需要更多时间，可以完成所述制备，得到大于约80％收率的放射性药物。如果需要或希望更高纯度的金属药物，可以采用本领域技术人员所熟知的众多技术中的任何技术纯化产物，例如液相色谱、固相萃取、溶剂萃取、透析或超滤。
诊断放射性药物通过静脉注射给药，通常在盐水溶液中，以每70kg体重约1到约100mCi的剂量，或者典型地，以约5到约50mCi的剂量。使用已知的方法进行显像。
可以按类似于如US-A-5,155,215；US-A-5,087,440；Magn.Reson.Med.，1986，3，808；Radiology，1988，166，835；及Radiology，1988，166，693中所描述的其它MRI试剂的方式使用包含磁共振成像造影组分的本公开的诊断剂。通常。以每kg体重介于约0.01到约1.0毫摩尔的范围的剂量将造影剂的无菌水溶液向患者静脉内给药。
对于作为X-射线造影剂的应用，本公开的诊断剂通常应该具有约1mM到约5M的重原子浓度，典型地，约0.1M到约2M。通过静脉内注射给药的剂量一般将介于约0.5mmol/kg到约1.5mmol/kg的范围，典型地，介于约0.8mmol/kg到约1.2mmol/kg。使用已知的技术进行显像，典型地，采用X-射线计算机层析成像。
含有超声造影组分的本公开的诊断剂通过以每kg体重约10到约30μL产生回声的气体静脉内注射或通过以约3μL/kg/min的速度输注而给药。可以使用已知的超声波扫描技术进行显像。
本公开的其它特征将在以下示例性实施方案的描述过程中变得显而易见，这些示例性实施方案是提供来解释本公开而并不意欲来限制其。本公开现在将参考以下具体、非限制性实施例进行说明。有机合成领域的技术人员可意识到对于本公开化合物和/或诊断剂还有其它的合成路线。除非另外描述，在此所使用的试剂及中间体是市场上可买到的或可根据标准文献方法制得。
本公开意欲包括具有式(I)的化合物，当通过合成方法或通过代谢方法包括于人类或动物体(体内)内发生的或发生在体外的那些方法制得时。例如，其中A为由D-氨基酸残基及第二D-氨基酸组成的肽的本公开的化合物可以通过以合成方式或在体内裂解较大的序列(例如，由3个氨基酸与D-氨基酸残基组成的肽)来生成。
总则。在Bruker Avance DRX(600MHz)光谱仪上记录1H NMR谱。化学位移以离四甲基甲硅烷的ppm报告，由不完全氘化产生的残余溶剂共振作为内标(CDCl3：δ7.25ppm，C6D6：δ7.16ppm，DMSO-d6：δ2.50ppm)。数据报告如下：化学位移、积分、峰裂数(s＝单峰、d＝双峰、t＝三重峰、q＝四重峰、quin＝五重峰、b或br＝宽峰、m＝多重峰)以及偶合常数。在具有全质子去偶的Bruker Avance DRX(150MHz)上记录13C NMR谱。化学位移以离四甲基甲硅烷的ppm报告，溶剂作为内标(CDCl3：δ77.0ppm，C6D6：δ128.4ppm，DMSO-d6：δ39.5ppm)。在Bruker Avance DRX(565MHz)上记录19F NMR谱；化学位移相对于外标以ppm报告(CCl3F；δ＝0.00ppm)。
与可靠的外消旋物质相比较，通过手性GLC分析(AlltechAssociates Chiralsil-Val柱(25m×0.25mm))确定对映异构体比例。低分辩率质谱在Agilent Technologies 1100系列LC/MS ESI-MS(正模式)上进行。高分辨率质谱在Ionspec Ultima FTMS；ESI-MS(正模式)上进行。
除非另有说明，所有反应在干燥氮气的惰性气氛下在烘箱(150℃)及火焰干燥的玻璃器皿中进行。所指明的温度指的是反应浴的温度，而实验室环境温度为22℃。无水溶剂得自Aldrich并以收到的状态使用其。氨基酸衍生物及氨基酸树脂得自Advanced Chemtech、Novabiochem、Bachem Bioscience、RSP Amino Acids或PepTech AminoAcids。在每个实验中有涉及到某些起始材料制备的附注。4-氰基肉桂酸得自Ryan Scientific。4-(氨基甲基)苯乙酸得自Tyger Scientific。AlexaFluor 350TM琥珀酰亚胺酯从Molecular Probes购得。DOTA三叔丁基酯从Macrocyclics购得。所有其它试剂都以从Aldrich、Fluka、Lancaster或Strem Chemicals获得的状态使用。
缩写
广泛使用的试剂及溶剂的通常被接受的缩写贯穿于本专利使用。使用通常被接受的三字母缩写来描述21种天然氨基酸。其它缩写如下所述。
Ahx＝6-氨基己酸
Aib＝α-氨基异丁酸
Amb＝4-氨基甲基苯甲酸
Bip＝联苯基丙氨酸
DCHA＝N，N-二环己胺
DEA＝二乙胺
DIEA＝二异丙基乙胺
EDC＝1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
EEDQ＝2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉
HBTU＝2-(1H-苯并三氮唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲(uronium)六氟磷酸盐
HOAt＝1-羟基-7-氮杂苯并三唑
HOBt＝1-羟基苯并三唑
Hphe＝高苯丙氨酸
Nal＝萘基丙氨酸
NLeu＝N-亮氨酸
NLys＝N-赖氨酸
Stya＝苯乙烯基丙氨酸
TAEA＝三(2-氨基乙基)胺
TEA＝三乙胺
Tic＝1，2，3，4-四氢异喹啉-3-甲酸
TIS＝三异丙基甲硅烷
TMP＝2，4，6-三甲基吡啶
实施例1
2-((1E)-2-{[5-(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸的合成
Figure A20068003141400421
部分A-N-[(叔丁氧基)羰基氨基]-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺的制备
将Fmoc-6-Ahx-OH(15.0g，42.4mmol)、HBTU(20.9g，55.12mmol，)、HOBt(8.44g，55.12mmol)以及DIEA(18.5mL，106mmol)在200mL DMF中的溶液用肼基甲酸叔丁酯(6.73g，50.8mmol)和DIEA(3.7mL，21.2mmol)在50mL DMF中的溶液处理。根据需要加入另外的DIEA从而保持pH＝10。45分钟后，将所述溶液在减压下浓缩，并将残余物吸收在乙酸乙酯中。将所述溶液用0.1N HCl(2×250mL)、饱和NaHCO3(2×250mL)以及饱和NaCl(150mL)连续洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤，以及浓缩从而得到浅黄色固体状的标题化合物(20.7g，98％)。MS(ESI)：368.3(100，M+H-Boc)。
部分B-6-氨基-N-(叔丁氧基)羰基氨基]己酰胺的制备
Figure A20068003141400431
在室温、氮气下将部分A的产物(1.44g，3.1mmol)用在DMF(4.0mL)中的20％哌啶处理20分钟。将所述溶液在减压下浓缩并将所得到的固体通过以甲醇、100∶3甲醇∶TEA以及100∶6甲醇∶TEA连续洗脱的硅胶快速色谱法纯化，从而得到无色固体状的标题化合物(0.79g，104％)。1H NMR(CDCl3)：δ4.12(bs，2H)，2.80-2.68(m，2H)，2.24(t，J＝7.3 Hz，2H)，1.72-1.60(m，2H)，1.58-1.46(m，2H)，1.45(s，9H)，1.43-1.33(m，2H)。MS(ESI)：246.3(M+H)。
部分C-2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[N-(5-{N-[(叔丁氧基)羰基氨基]氨甲酰基}戊基)氨甲酰基](2-吡啶基)}氨基)乙烯基]苯磺酸钠的制备
将部分B的产物(0.72g，2.9mmol)、2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[(2，5-二氧代吡咯烷基)氧羰基](2-吡啶基)}氨基)乙烯基]苯磺酸钠(根据Bioconjugate Chemistry(1999)，10(5)，808-814中所描述的方法制备，1.29g，2.9mmol)、HOAt(0.40g，2.9mmol)以及DIEA(1.02mL，5.9mmol)在无水DMF(10mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌。2小时后，加入另外的2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[(2，5-二氧代吡咯烷基)氧羰基](2-吡啶基)}氨基)乙烯基苯磺酸钠(0.27g，0.6mmol)和DIEA(0.1mL，0.6mmol)并将该反应搅拌过夜。将所述反应混合物过滤并将滤液浓缩。将所得到的残余物通过以85∶15二氯甲烷∶甲醇洗脱的硅胶快速色谱法纯化，从而得到无色固体状的标题化合物(0.81g，50％，HPLC纯度＞95％)。1H NMR(DMSO-d6)：δ11.32(s，1H)，9.45(s，1H)，9.01(s，1H)，8.63(s，1H)，8.59 (d，J＝2.1Hz，1H)，8.34-8.23(m，1H)，8.08-7.97(m，2H)，7.78 (dd，J＝1.4，7.5Hz，1H)，7.40-7.18(m，3H)，3.28-3.17(m，2H)，2.07(t，J＝7.2 Hz，2H)，1.60-1.45(m，4H)，1.45-1.21(m，11H)。MS(ESI)：449.2(M-Boc+H)。
部分D-2-{(1E)-2-[(5-{N-[5-(N-氨基氨甲酰基)戊基]氨甲酰基}(2-吡啶基))氨基]-2-氮杂乙烯基}苯磺酸的制备
Figure A20068003141400441
在室温、氮气下将部分C的产物(0.37g，0.7mmol)用在二氯甲烷(5mL)中的50％TFA处理10分钟。将所述溶液在减压下浓缩并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Jupiter C18柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的0-27％乙腈以80mL/min的流速进行。将在18.9分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(0.24g，80％)。1H NMR(DMSO-d6)：δ10.75(s，1H)，9.22(s，1H)，8.64-8.54(m，1H)，8.53(d，J＝1.8Hz，1H)，8.29-8.11(m，2H)，7.80(dd，J＝1.9，7.0Hz，1H)，7.47-7.32(m，2H)，7.23(d，J＝9.1Hz，1H)，4.50(bs，3H)，3.26(q，J＝6.4Hz，2H)，2.23(t，J＝7.3 Hz，2H)，1.66-1.45(m，4H)，1.40-1.22(m，2H)。MS(ESI)：449.1(M+H)。
部分E-2-((1E)-2-{[5-(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)-氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸的制备
Figure A20068003141400451
将Fmoc-D-Leu-OH(16.0mg，0.045mmol)、部分D的产物(20.3mg，0.045mmol)以及HOAt(12.1mg，0.090mmol)在无水DMF(1mL)中的溶液用可力丁(37.0μL，0.280mmol)和DIC(13.8μL，0.090mmol)处理，并在室温、氮气下搅拌2小时。然后将哌啶(0.25mL)加至所述反应，且在10分钟之后，将所述反应在减压下浓缩。将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的0-27％乙腈以20 mL/min的流速进行。将在25.4分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(8.6mg，34％，HPLC纯度100％)。1H NMR(DMSO-d6)：δ10.41(s，1H)，10.01(s，1H)，9.24(bs，1H)，8.60(bs，1H)，8.54(s，1H)，8.31-8.16(m，3H)，7.81(dd，J＝1.8，7.2Hz，1H)，7.46-7.37(m，2H)，7.22(d，J＝9.0Hz，1H)，3.78(bs，1H)，3.25(q，J＝6.0Hz，2H)，2.17(t，J＝7.5Hz，2H)，1.78-1.69(m，1H)，1.62-1.49(m，6H)，1.48-1.30(m，2H)，0.94-0.87(m，6H)。MS(ESI)：562.2(100，M+H)，1123.3(15，2M+H)。HRMS：对于C25H35N7O6S(M+H)的计算值：562.2442，测得：562.2434。
实施例2
2-{(1E)-2-氮杂-2-[(5-{N-[5-(N-{2-[(2-甲基丙基)氨基]-乙酰基氨基}-氨甲酰基)戊基]氨甲酰基}(2-吡啶基))氨基]乙烯基}苯磺酸的合成
将Fmoc-NLeu-OH(19.8mg，0.056mmol，通过Kruijtzer，J.A.W.；Hofmeyer，L.J.F；Heerma，W.；Verslius，C.；Liskamp，R.M.J.Chem.Eur.J.1998，8，1570-1580的方法制备)和HOAt(7.6mg，0.056mmol)在无水DMF(0.5mL)中的溶液用可力丁(37.0μL，0.280mmol)和DIC(17.4μL，0.112mmol)处理，并预活化15分钟。加入实施例1D的产物，并将该反应在室温、氮气下搅拌。4小时后，加入另外的实施例1D的产物(25.1mg，0.056mmol)和DIC(17.4μL，0.112mmol)，并将所述反应搅拌另外18小时。在减压下除去溶剂，并将残余物吸收在DMF(0.5mL)中的20％哌啶中。30分钟后，将该反应在减压下浓缩。将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的0-31.5％乙腈以20mL/min的流速进行。将在24.7分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(17.7mg，56％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：562.2(100，M+H)，1123.4(10，2M+H)。HRMS：对于C25H35N7O6S(M+H)的计算值：562.2442，测得：562.2441。
实施例3
N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-6-氨基己酰胺的合成
Figure A20068003141400461
部分A-N-氨基-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141400462
在环境温度、氮气下将实施例1A的产物(19.5g，41.75mmol)用50mL在二氯甲烷中的50％TFA处理30分钟。将所述溶液在减压下浓缩从而得到浅黄色油状物。将所述油状物溶解于30∶70乙腈∶水(150mL)中并冷冻干燥从而得到灰白色固体(18.89g，99％)。1H NMR(CDCl3)：δ10.36(s，1H)，7.89(d，J＝7.3Hz，2H)，7.67(d，J＝7.7Hz，2H)，7.41(t，J＝7.7Hz，2H)，7.33(t，J＝7.3Hz，2H)，7.25(t，J＝6.0Hz，1H)，4.30(d，J＝6.6Hz，2H)，4.20(t，J＝6.6Hz，1H)，2.96(q，J＝6.0Hz，2H)，2.158(t，J＝7.5Hz，2H)，1.51(quin，J＝7.8Hz，2H)，1.39(quin，J＝7.8Hz，2H)，1.26(m，2H)。MS(ESI)：368.2(100，M+H)。
部分B-N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺的制备
Figure A20068003141400471
将Boc-D-Leu-OH(2.99g，12.0mmol)、HBTU(4.55g，12mmol)、HOBt(1.84g，12.0mmol)以及DIEA(5.17mL，40.0mmol)在DMF(25mL)中的溶液在环境温度下搅拌20分钟并用部分A的产物(48.13g，10mmol)以及DIEA(2.86mL，20.0mmol)在DMF(10mL)中的溶液处理。根据需要加入另外的DIEA从而保持pH＝10。6小时后加入另外的HBTU(2.27g，5.00mmol)以及DIEA(1.29mL，10.0mmol)。12小时后，在快速搅拌下将所述溶液缓慢加至4L水中。通过在层状烧结玻璃漏斗(course fritted funnel)上过滤收集所述沉淀，用水洗涤，并在真空干燥器中干燥从而得到无色固体状的标题化合物(5.831g，100％)。1HNMR(DMSO-d6)：δ9.76(s，1H)，9.72(s，1H)，7.89(d，J＝7.5Hz，2H)，7.68(d，J＝7.5Hz，2H)，7.41(t，J＝7.4Hz，2H)，7.33(t，J＝7.4Hz，2H)，7.38-7.32(m，1H)，6.98-6.83(m，1H)，4.29(d，J＝6.9Hz，2H)，4.20(t，J＝6.9Hz，1H)，4.06-3.98(m，1H)，3.00-2.91(m，2H)，2.14-2.03(m，2H)，1.70-1.19(m，18H)，0.93-0.80(m，6H)。MS(ESI)：481.3(100，M+H-Boc)。HRMS：对于C32H45N4O6(M+H)的计算值：581.3334，测得：581.3342。
部分C-N-氨基-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺的制备
Figure A20068003141400472
将部分B的产物(0.405g，0.700mmol)溶解于在DMF(10mL)中的20％哌啶中并在环境温度下在氮气下搅拌30分钟。将所述溶液在减压下浓缩从而得到浅黄色固体。将所述固体通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex C-18 Luna柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的13.5-40.5％乙腈以80mL/min的流速进行。将在15.2分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到灰白色吸湿性固体状的标题化合物(0.289g，81％)。MS(ESI)：359.4(100，M+H)。
将上述固体(0.298g，0.610mmol)在50∶50乙腈∶水(10mL)中的溶液用10g Bio-Rad AG 3-X4离子交换树脂(游离碱形式)处理并温和地混合5分钟。通过倾析除去所述溶液并冷冻干燥从而制得白色非吸湿性粉状标题化合物(0.200g，100％)。1H NMR(CDCl3)：δ5.05(s，1H)，4.23(s，1H)，2.90-2.81(m，2H)，2.35-2.23(m，2H)，1.77-1.39(m，18H)，1.00-0.87(m，6H)。MS(ESI)：359.4(100，M+H)；HRMS：对于C17H35N4O4(M+H)的计算值：359.2653；测得：359.2657。
实施例4
(2R)-N-{2-[4-(氨基甲基)苯基]乙酰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400481
部分A-N-氨基-2-(4-{[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-甲基}苯基)乙酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141400482
将2-(4-{[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]甲基}苯基)乙酸(470mg，1.21mmol)(根据Yu，C.；Taylor，J.W.Tetrahedron Letters，1996，11，1731-1734制备)、HBTU(552mg，1.46mmol)以及DIEA(0.212mL，2.42mmol)在无水DMF(0.5mL)中的溶液在环境温度、氮气下搅拌20分钟，并用肼基甲酸叔丁酯(160mg，1.21mmol)处理。将所述溶液搅拌1小时并在减压下除去溶剂。将所得到的残余物用在二氯甲烷(5mL)中的50％TFA处理并在室温下搅拌30分钟。在减压下除去溶剂并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的27-45％乙腈以20mL/min的流速进行。将在16.3分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(487mg，95％，HPLC纯度100％)。1H NMR(2∶1CD3CN∶D2O)：δ7.80(d，J＝7.8Hz，2H)，7.62(d，J＝7.2Hz，2H)，7.48(br s，0.5H)，7.40(t，J＝7.2Hz，2H)，7.31(t，J＝7.2Hz，2H)，7.20(d，J＝7.8Hz，2H)，7.16(d，J＝7.8Hz，2H)，6.90(br s，0.5H)，4.47(br s，0.5H)，4.35(d，J＝6.6Hz，2H)，4.20(t，J＝6.3Hz，1H)，4.19(s，2H)，3.95(s，2H)，3.51(s，2H)。MS(ESI)：402.3(65，M+H)，803.4(100，M+H)。
部分B-N-氨基-2-(4-{[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-甲基}苯基)乙酰胺，三氟乙酸盐的制备
将Boc-D-Leu-OH(28mg，0.12mmol)、HOAt(16mg，0.12mmol)和TMP(80μL，0.60mmol)在无水DMF(0.5mL)中的溶液用DIC(30mg，0.24mmol)处理。将该反应在环境温度、氮气下搅拌20分钟，并用部分A的产物(48.5mg，0.121mmol)处理。将所述溶液搅拌3小时，并用TAEA(三-(2-氨基乙基)胺，根据J.Org.Chem.(1990)，55(5)，1673-5中描述的方法制备)(0.25mL)处理。将该反应在室温下搅拌30分钟，并在减压下浓缩。将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的9-36％乙腈以20mL/min的流速进行。将在23.9分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(25.7mg，94％，HPLC纯度100％)。1H NMR(CD3CN)：δ8.87(br s，1H)，8.53(br s，1H)，7.80(br s，1H)，7.38(d，J＝8.4Hz，2H)，7.33(d，J＝8.4Hz，2H)，5.68(br s，1H)，4.09(s，2H)，3.54(s，2H)，1.68(m，1H)，1.51(m，2H)，1.40(s，9H)，0.98-0.85(m，6H)。MS(ESI)：785.5(100，2M+H)，3934(90，M+H)；HRMS：对于C20H33N4O4(M+H)的计算值：393.2496；测得：393.2499。手性分析：99.0％D-Leu。
实施例5
(2R)-N-氨基-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400501
部分A-(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-N-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺的制备
Figure A20068003141400502
将Boc-D-Leu-OH(134mg，0.536mmol)、HOAt(73mg，0.54mmol)和TMP(0.87mL，2.7mmol)在无水DMF(2mL)中的溶液用DIC(135mg，1.07mmol)处理并在环境温度、氮气下搅拌20分钟。将所述溶液用肼基甲酸9-芴基甲基酯(136mg，0.536mmol)处理并搅拌5小时。将所述溶液用二氯甲烷(20mL)稀释，用10％柠檬酸(3×20mL)、饱和NaHCO3(20mL)以及饱和NaCl(20mL)连续洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，以及浓缩从而得到粘稠油状的粗制标题化合物(271mg，108％)。MS(ESI)：368.3(95，M+H)，490.2(100，M+Na)。
部分B-(2R)-N-氨基-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物和TAEA(1.6mL)溶解于DMF(1mL)并在室温下搅拌30分钟。在减压下除去DMF并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-45％乙腈以20mL/min的流速进行。将在11.9分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(76.7mg，58％，HPLC纯度100％)。1H NMR(1∶1 CD3CN∶D2O)：δ4.03-3.93(m，1H)，1.63-1.52(M，1H)，1.52-1.49(M，2H)，1.35(s，9H)，0.90-0.81(m，6H)。MS(ESI)：513.3(20，2M+Na)，268.2(100，M+Na)；HRMS：对于C11H23NaN3O3(M+Na)的计算值：268.1632；测得：268.1635。
实施例6
(2R)-N-[3-(2-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酰基氨基]-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400511
将3-{2-[2-(2-{2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]乙氧基}-乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸(ChemBioChem(2002)，3(2-3)，238-242，43.8mg，0.090mmol)、HBTU(41mg，0.11mmol)和DIEA(31μL，0.18mmol)在无水DMF(0.5mL)中的溶液在环境温度、氮气下搅拌20分钟，并用实施例5B的产物(22mg，0.090mmol)处理。将该溶液搅拌2小时并用TAEA(0.15mL)处理。将该反应在室温下搅拌另外30分钟，并在减压下除去DMF。将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-45％乙腈以20mL/min的流速进行。将在14.8分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(30mg，69％，HPLC纯度100％)。1H NMR(CD3CN)δ4.08-3.97(m，1H)，3.69(t，J＝6.3Hz，2H)，3.64(t，J＝5.1Hz，2H)3.62-3.50(m，12H)，3.08(t，J＝3.7Hz，2H)，248(t，J＝6.0Hz，2H)，1.67-1.56(m，1H)，1.56-1.43(m，2H)，1.36(s，9H)，0.91-0.81(m，6H)；13CNMR(CDCl3)：δ173，171，161(q，J＝34.6Hz)，156，116(q，J＝290Hz)，79.9，69.1，69.0，69.0，68.9，68.9，51.2，39.9，38.6，33.3，27.0，23.8，21.7，20.1。MS(ESI)：493.4(100，M+H)；HRMS：对于C22H45N4O8(M+H)的计算值：493.3232；测得：493.3225。
实施例7
(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-N-(肼基羰基氨基)-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400521
将碳酰肼(82mg，0.92mmol)在DMF(1mL)中的溶液滴加至Boc-DLeu-OH(57mg，0.23mmol)和PyBOP(143 mg，0.275 mmol)及DIEA(80μL，0.46mmol)在DMF(1mL)中的溶液中。将该反应在室温、氮气下搅拌3小时并在减压下除去溶剂。将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的9-36％乙腈以20mL/min的流速进行。将在19.5分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(61mg，87％，HPLC纯度100％)。1H NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：
Figure A20068003141400522
8.60(bs，1H)，7.62(bs，1H)，5.62(s，1H)，4.10(s，1H)，1.73-1.62(m，1H)，1.61-1.48(m，2H)，1.42(s，9H)，0.96-0.88(m，6H)；13CNMR(CDCl3)：δ174，160，157，52.9，41.6，28.8，25.4，23.6，22.1。MS(ESI)：607.4(10，2M+H)，248.4(100，M-tBu+H)，204.4(60，M-Boc+H)；HRMS：对于C12H26N5O4(M+H)的计算值：304.1 979；测得：304.1 975。
实施例8
N-[(2R)-2-(二甲基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]-6-氨基己酰胺，双-乙酸盐的合成
Figure A20068003141400523
部分A-N-[(2R)-2-(二甲基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺的制备
将实施例3B的产物(49mg，0.83mmol)在二氯甲烷(2mL)中的50％TFA中的溶液在室温下搅拌20分钟并在减压下浓缩从而得到固体。将该固体吸收在乙腈(1mL)中并用37％甲醛溶液(62μL，8.3mmol)和HOAc(10μL)处理。将该反应在室温、氮气下搅拌1小时并蒸发至干。将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的22.5-49.5％乙腈以20mL/min的流速进行。将在25.1分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(18.5mg，43％，HPLC纯度100％)。1H NMR(CD3CN)δ9.59(s，1H)，8.23(s，1H)，7.84(d，J＝7.8Hz，2H)，7.66(d，J＝7.8Hz，2H)，7.43(t，J＝7.5Hz，2H)，7.35(t，J＝7.5Hz，2H)，5.69(s，1H)，4.33(d，J＝7.2Hz，2H)，4.23(t，J＝7.2Hz，1H)，3.91-3.84(m，1H)，3.08(q，J＝6.6Hz，2H)，2.88(s，6H)，2.21(t，J＝7.5Hz，2H)，1.68-1.43(m，7H)，1.38-1.31(m，2H)，0.91-0.89(m，6H)。MS(ESI)：509.4(100，M+H)。
部分B-N-[(2R)-2-(二甲基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]-6-氨基己酰胺，双-乙酸盐的制备
将部分A的产物溶解于在DMF(2mL)中的20％哌啶中并在室温、氮气下搅拌30分钟。在减压下除去溶剂并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有15mM NH4OAc的0-18％乙腈(pH＝7)以20mL/min的流速进行。将在12.7分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(3.1mg，42％，HPLC纯度100％)。1H NMR(CD3CN∶D2O)δ3.09-3.06(m，1H)，2.88(t，J＝7.5Hz，2H)，2.28(s，6H)，2.22(t，J＝7.2Hz，2H)，1.81(s，6H)，1.65-1.48(m，6H)，1.41-1.32(m，3H)，0.90-0.86(m，6H)；13C NMR(CDCl3)：δ179，174，171，64.6，41.0，39.2，37.0，32.9，26.3，25.1，24.8，24.2，23.0，22.6，21.3。MS(ESI)：287.4(100，M+H)；HRMS：对于C14H31N4O2(M+H)的计算值：287.2442；测得：287.2443。
实施例9
N-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4，N-二甲基戊酰基氨基}-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400541
部分A-N-[(叔丁氧基)-N-甲基羰基氨基]-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺的制备
Figure A20068003141400542
将Fmoc-Ahx-OH(4.84g，13.7mmol)、HOBt(2.72g，17.8mmol)和HBTU(6.75g，17.8mmol)在无水DMF(10mL)中的溶液用DIEA(5.00mL，28.7mmol)处理并在室温下搅拌20分钟。将所述溶液用Boc-N(Me)-NH2(Malachowski，M.P；Tie，C.；Wang，K.；Broadrup R.L。J.Org.Chem.2002，67，8962-8969)处理，并在室温、氮气下搅拌18小时。将该反应用乙酸乙酯(50mL)稀释，用10％柠檬酸(3×50mL)、饱和NaHCO3(2×50mL)以及饱和LiCl(2×25mL)连续洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并在高真空下浓缩从而得到无色固体状的标题化合物(5.257g，80％)。1H NMR(CDCl3)δ7.77(d，J＝7.6Hz，2H)，7.59(d，J＝7.3Hz，2H)，7.41(t，J＝7.4Hz，2H)，7.32(t，J＝7.0Hz，2H)，4.41(d，J＝5.8Hz，2H)，4.23(t，J＝6.7Hz，1H)，3.26-3.15(m，2H)，3.13(s，3H)，2.33-2.22(m，2H)，1.74-1.63(m，2H)，1.52-1.38(m，13H)。MS(ESI)：382.2(100，M-Boc+H)，504.3(15，M+Na)。
部分B-N-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4，N-二甲基戊酰基氨基}-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺的制备
Figure A20068003141400551
将部分A的产物(122.9mg，0.255mmol)溶解于50∶50 TFA∶二氯甲烷(2.0mL)中并在室温下搅拌20分钟且通过使用减压浓缩。将所得到的琥珀色油状物与Boc-Leu-OH(76.4mg，0.306mmol)、HBTU(116.2mg，0.306mmol)和DIEA(0.089mL，0.510mmol)一起溶解于DMF(2.0mL)中。将所述反应溶液在室温、氮气下搅拌3小时。将所述反应用乙酸乙酯(5.0mL)稀释，用0.1N HCl(2×5.0mL)、10％NaHCO3(5.0mL)、水(5.0mL)以及饱和NaCl(5.0mL)连续洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，以及浓缩。将所述粗制产物通过硅胶上的快速色谱法(1∶2戊烷∶乙酸乙酯)纯化从而得到粘稠油状的标题化合物(71.2mg，47％，HPLC纯度100％)。1H NMR(CDCl3)：δ8.84(bs，1H)，7.75(d，J＝7.8Hz，2H)，7.56(d，J＝7.2Hz，2H)，7.39(t，J＝7.5Hz，2H)，7.30(t，J＝7.2Hz，2H)，5.02-4.93(m，1H)，4.85(bs，1H)，4.61-4.51(m，1H)，4.44-4.35(m，2H)，4.25-4.17(m，1H)，3.20(bs，2H)，3.15(s，3H)，2.29-2.20(m，2H)，1.73-1.58(m，3H)，1.58-1.46(m 2H)，1.46-1.34(m，13H)，0.89-0.83(m，6H)；13C NMR(CDCl3)：δ174.24，171.08，156.51，156.29，143.97，141.33，127.67，127.03，125.00，119.97，80.34，66.55，60.39，47.75，47.30，40.91，40.71，35.62，33.94，29.58，28.30，26.24，24.55，22.88，22.01。MS(ESI)：617.4(100，M+Na)，495.3(70，M-Boc+H)；HRMS：对于C33H47N4O6(M+H)的计算值：595.3490；测得：595.3495。
部分C-N-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4，N-二甲基戊酰基氨基}-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141400552
将部分B的产物(35.0mg，0.058mmol)溶解于TAEA(0.22mL，1.471mmol)和DMF(0.5mL)中并在室温、氮气下搅拌30分钟。在减压下除去挥发性物质并将所得到的粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-45％乙腈以20mL/min的流速进行。将在17.7分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(25.9mg，91％，HPLC纯度100％)。1H NMR(CD3CN)：δ9.01(s，1H)，7.20(bs，3H)，5.48(d，J＝8.4Hz，1H)，4.48(bs，1H)，3.02(s，3H)，2.96(bs，2H)，2.24(t，J＝7.2Hz，2H)，1.75-1.58(m，5H)，1.50-1.28(m，13H)，0.89(d，J＝6.6Hz，6H)。MS(ESI)：373.5(100，M+H)；HRMS：对于C18H37N4O4(M+H)的计算值：373.2809；测得：373.2810。手性分析：99.9％L-Leu。
实施例10
2-{4-[(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]-1，4，7，10-四氮杂-7，10-双(羧基甲基)环十二烷基}乙酸的合成
部分A-6-[(叔丁氧基)羰基氨基]-N-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺的制备
Figure A20068003141400562
将Boc-Ahx-OH(1.29g，5.58mmol)、HOBt(1.02g，6.66mmol)、HBTU(2.54g，6.66mmol)和DIEA(2.44mL，14.0mmol)在无水DMF(10mL)中的溶液在环境温度、氮气下搅拌20分钟，并用肼基甲酸9-芴基甲基酯(1.42g，5.58mmol)和DIEA(0.5mL，2.87mmol)处理。将所述溶液搅拌3.5小时，用二氯甲烷(30mL)稀释，用10％柠檬酸(50mL)、饱和NaHCO3(3×50mL)以及饱和NaCl(3×50mL)连续洗涤，用MgSO4干燥，过滤，以及浓缩从而得到黄色油状物。将所述油状物通过以2∶1乙酸乙酯∶己烷洗脱的硅胶快速色谱法纯化从而得到无色固体状的标题化合物(2.061g，79％，HPLC纯度100％)。1H NMR(CDCl3)：δ7.75(d，J＝7.5Hz，2H)，7.58(d，J＝7.4Hz，2H)，7.50(br，1H)，7.39(t，J＝7.4Hz，2H)，7.30(dt，J＝7.0Hz，2H)，6.87(br，1H)，4.63(s，1H)，4.44(d，J＝6.9Hz，2H)，4.24(t，J＝7.1Hz，1H)，3.08(s，2H)，2.23(s，2H)，1.68(m，2H)，1.42(s，9H)，1.47-1.35(m，4H)；13C NMR(CDCl3)：δ172.6，171.2，156.2，143.5，141.3，127.9，127.8，127.1，125.1，124.9，120.0，79.2，68.0，60.4，46.9，40.2，33.8，29.6，28.4，26.0，24.7，21.1，14.2。MS(ESI)：368.4(100，M-Boc+H)。
部分B-6-氨基-N-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141400571
将部分A的产物(0.79g，3.1mmol)用50％TFA/二氯甲烷(12.0mL)在室温、氮气下处理20分钟。将所述溶液在减压下浓缩从而得到黄色油状物(1.38g)。1H NMR(CDCl3)：δ9.18(s，1H)，7.74(d，J＝7.6Hz，2H)，7.52(d，J＝7.6Hz，2H)，7.39(t，J＝7.5Hz，2H)，7.35(br，1H)，7.29(t，J＝7.2Hz，2H)，6.07(br，2H)，4.38(d，J＝7.5Hz，2H)，4.20(t，J＝7.5Hz，1H)，3.05(m，2H)，2.33(m，2H)，1.73(m，4H)，1.48(m，2H)；13C NMR(CDCl3)：δ175.1，160.1，143.0，141.3，128.0，127.2，124.9，120.1，117.8，115.9，114.0，112.1，68.7，46.6，40.5，32.0，27.6，25.1，23.6，14.1。MS(ESI)：368.2(100，M+H)。
部分C-2-(1，4，7，10-四氮杂-4，10-双{[(叔丁基)-氧羰基]-甲基}-7-{[N-(5-{N-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-氨甲酰基}戊基)-氨甲酰基]-甲基}环十二烷基)乙酸叔丁酯的制备
将DOTA三叔丁酯(0.972g，1.70mmol)、HBTU(0.772g，2.04mmol)、HOBt(0.312g，2.04mmol)以及DIEA(0.59mL，5.9mmol)在无水DMF(8.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟。一次性加入部分B的产物(1.38g，1.70mmol)。1小时后加入另外的HBTU(0.772g，2.04mmol)并将该反应搅拌另外3小时。将所述反应混合物用10％柠檬酸(20mL)猝灭并用二氯甲烷(30mL)稀释。将所述水层用二氯甲烷(3×30mL)萃取。将所合并的有机萃取物用10％柠檬酸(30mL)、饱和NaHCO3(3×30mL)以及饱和NaCl(3×30mL)连续洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，以及浓缩从而得到黄色油状物。将所述油状物通过以乙酸乙酯洗脱的硅胶快速色谱法纯化从而得到无色油状的标题化合物(0.746g，48％)。1H NMR(4∶1 CDCl3∶DMSO-d6)：δ7.54(m，2H)，7.41(m，2H)，7.17(m，2H)，7.08(m，2H)，4.15(d，2H)，4.02(m，1H)，2.97(m，2H)，2.68-2.45(m，24H)，2.00(t，2H)，1.44(t，2H)，1.30-1.11(m，31H)。MS(ESI)：461.9(100，M+2H)，922.5(80，M+H)。
部分D-2-{4-[(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)-氨甲酰基]-戊基}氨甲酰基)甲基]-1，4，7，10-四氮杂-7，10-双(羧基甲基)-环十二烷基}-乙酸的制备
Figure A20068003141400581
将Boc-D-Leu-OH(83.0mg，0.330mmol)、HBTU(164mg，0.430mmol)以及DIEA(116μL，0.67mmol)在无水DMF(2mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟。在一单独的烧瓶中，将部分C的产物(307mg，0.330mmol)在DMF(5.0mL)中的20％哌啶中的溶液在室温、氮气下搅拌45分钟，并在减压下浓缩。将所得到的残余物溶解于DMF(5mL)中并加至活化Boc-dLeu-OH的溶液中。1小时后将所述溶液浓缩从而得到黄色粘稠油状物。将该油状物溶解于TFA(2mL)中，用TIS(20μL)处理并在室温、氮气下搅拌1小时。将所述溶液在减压下浓缩并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的0-18％乙腈以20mL/min的流速进行。将在14.4分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(18.2mg，8.5％)。MS(ESI)：645.5(90，M+H)，323.3(100，M+2H)；HRMS：对于C28H53N8O9(M+H)的计算值：645.3930；测得：645.3933。手性分析：99.4％D-Leu。
实施例11
2-(7-{[N-({4-[(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}-1，4，7，10-四氮杂-4，10-双(羧基甲基)环十二烷基)乙酸的合成
Figure A20068003141400591
部分A-N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-6-{2-[4-(氨基甲基)苯基]乙酰基氨基}己酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141400592
将2-(4-{[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]甲基}苯基)乙酸(29.7mg，0.0770mmol)、HBTU(31.7mg，0.0840mmol)和DIEA(24μL，0.14mmol)在无水DMF(0.5mL)中的溶液在环境温度、氮气下搅拌20分钟，并用实施例3的产物(25.0mg，0.070mmol)和DIEA(10μL，0.057mmol)处理。将所述溶液搅拌另外48小时，并用TAEA(0.25mL)处理。将该反应在室温、氮气下搅拌另外20分钟，并在减压下浓缩。将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的13.5-36％乙腈以20mL/min的流速进行。将在19.6分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(16.3mg，46％，HPLC纯度95％)。1H NMR(4∶1CD3CN∶D2O)：δ7.35(d，J＝8.4Hz，2H)，7.31(d，J＝8.4Hz，2H)，4.15(m，1H)，4.05(s，2H)，3.48(s，2H)，3.11(t，J＝6.6Hz，2H)，2.16(t，J＝7.5Hz，2H)，1.68-1.60(m，1H)，1.54-1.51(m，4H)，1.42-1.44(m，2H)，1.38(s，9H)，1.30-1.22(m，2H)，0.89(dd，J＝7.2Hz，6H)。MS(ESI)：506.4(100，M+H)，406.4(10，M-Boc+H)。
部分B-2-(7-{[N-({4-[(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)-氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]苯基}-甲基)氨甲酰基]甲基}-1，4，7，10-四氮杂-4，10-双(羧基甲基)-环十二烷基)乙酸的制备
将DOTA三叔丁酯(10mg，0.017mmol)、HBTU(7.8mg，0.021mmol)和DIEA(6.0μL，0.034mmol)在无水DMF(0.5mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟，并用部分A的产物(8.7mg，0.017mmol)处理。继续搅拌1小时并将所述溶液在减压下浓缩。将残余物溶解于TFA(1mL)中，用TIS(10μL)处理，并搅拌4小时。将所述溶液在减压下浓缩并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的0-18％乙腈以20mL/min的流速进行。将在20.5分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(8.5mg，62％，HPLC纯度96％)。MS(ESI)：793.5(40，M+H)，396.9(100，M+2H)；HRMS：对于C37H62N9O10(M+H)的计算值：792.4620；测得：792.462。
实施例12
2-{7-[(N-{[5-(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}氨甲酰基)甲基]-1，4，7，10-四氮杂-4，10-双(羧基甲基)环十二烷基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400601
部分A-6-{[2-(1，4，7，10-四氮杂-4，7，10-三{[(叔丁基)氧羰基]甲基}环十二烷基)乙酰基氨基]氨基}吡啶-3-甲酸，双-三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141400611
将DOTA三叔丁酯(225mg，0.393mmol)、HOBt(50mg，0.33mmol)和EDC(62mg，0.32mmol)在50∶50二氯甲烷∶乙腈(2.0mL)中的溶液在环境温度、氮气下搅拌5分钟，并用6-肼基烟酸(6-hydrazinictoic acid)(50mg，0.32mmol)处理。将所述溶液搅拌60小时并在减压下浓缩。将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的9-36％乙腈以20mL/min的流速进行。将在32.9分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到灰白色固体状的标题化合物(3.0mg，1.0％)。MS(ESI)：708.4(60，M+H)。
部分B-2-[10-({N-[(5-{N-[5-(N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨甲酰基)戊基]氨甲酰基}(2-吡啶基))氨基]氨甲酰基}甲基)-1，4，7，10-四氮杂-4，7-双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}环十二烷基]乙酸叔丁酯，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141400612
将部分A的产物(3.0mg，3.2μmol)、HBTU(1.8mg，4.8μmol)、DIEA(8.1μL，4.8μmol)和实施例3的产物(2.2mg，4.8μmol)在DMF(0.5mL)中的溶液在环境温度下搅拌1小时。将所述溶液在减压下浓缩并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的9-45％乙腈以20mL/min的流速进行。将在24.7分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(3.0mg，73％)。MS(ESI)：1048.6(60，M+H)。
部分C-2-{7-[(N-{[5-(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)-氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-氨甲酰基)甲基]-1，4，7，10-四氮杂-4，10-双(羧基甲基)环十二烷基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141400621
将部分B的产物(3.0mg，2.4μmol)溶解于75∶25 TFA∶二氯甲烷(1.0mL)中并在环境温度、氮气下搅拌6小时。将所述溶液在减压下浓缩并将残余物溶解于50∶50乙腈∶水(5.0mL)中以及冷冻干燥从而得到棕色固体状的标题化合物(1.0mg，47％)。MS(ESI)：780.4(40，M+H)。
实施例13
N-((2R)-2-{[(4-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}苯基)甲氧基]羰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400622
部分A-(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-N-[4-(羟甲基)-苯基]-4-甲基戊酰胺的制备
Figure A20068003141400623
将Boc-Leu-OH(2.02g，8.10mmol)、4-氨基苄基醇(1.00g，8.10mmol)和EEDQ(221g，8.90mmol)在1∶1甲苯∶乙醇(20mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌4小时。将所述溶液在减压下浓缩并将所得到的残余物通过连续以1∶4乙酸乙酯∶己烷、1∶2乙酸乙酯∶己烷以及1∶1乙酸乙酯∶己烷洗脱的硅胶快速色谱法纯化从而得到无色固体状的标题化合物(2.62g，96％)。1H NMR(CDCl3)：δ8.46(s，1H)，7.49(d，J＝8.3Hz，2H)，7.28(d，J＝8.3Hz，2H)，4.98(s，1H)，4.64(s，2H)，4.27(s，1H)，1.83-1.73(m，2H)，1.70(s，1H)，1.62-1.55(m，1H)，1.47(s，9H)，1.03-0.93(m，6H)。MS(ESI)：237.3(100，M-Boc+H)。HRMS：对于C18H28N2O4(M+H)的计算值：337.2122；测得：337.2118。
部分B-(4-硝基苯氧基)甲酸(4-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}苯基)甲基酯的制备
Figure A20068003141400631
将部分A的产物(1.00g，3.0mmol)和氯甲酸4-硝基苯基酯(0.6g，3.0mmol)在无水二氯甲烷(10mL)中的溶液冷却至0℃，用吡啶(0.4mL，4.9mmol)处理并在环境温度、氮气下搅拌2小时。将所述溶液用二氯甲烷(30mL)稀释，用水(50mL)及饱和NaCl(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，以及在减压下浓缩。将所得到的残余物通过以3∶1乙酸乙酯/己烷洗脱的硅胶快速色谱法纯化从而得到无色结晶固体状的标题化合物(1.02g，68％)。1H NMR(CDCl3)：δ8.48(s，1H)，8.30-8.26(m，2H)，7.57(d，J＝8.4Hz，2H)，7.42-7.36(m，4H)，5.25(s，2H)，4.92(s，1H)，4.24(s，1H)，1.85-1.70(m，2H)，1.62-1.53(m，1H)，148(s，9H)，1.02-0.95(m，6H)；13C NMR(CDCl3)：δ170.9，155.5，152.4，145.4，138.6，129.8，129.7，125.3，121.8，119.9，80.8，70.7，53.8，40.2，28.3，24.8，22.9，21.9。MS(ESI)：524.3(100，M+Na)。HRMS：对于C25H31N3O8(M+H)的计算值：502.2184；测得：502.2183。
部分C-N-((2R)-2-{[(4-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}苯基)甲氧基]羰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的制备
将实施例3，部分B的产物(29.0mg，0.050mmol)溶解于50∶50TFA∶二氯甲烷(2.0mL)中，在室温下搅拌20分钟，并在减压下浓缩从而得到固体。将该固体吸收在无水DMF(0.5mL)中，并用DIEA(17μL，0.10mmol)、部分B的产物(25.0mg，0.050mmol)和HOBt(7.7mg，0.050mmol)处理。将所述反应在室温、氮气下搅拌24小时，用TAEA(0.2mL)处理，并搅拌另外20分钟。将所述溶液在减压下浓缩并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的13.5-36％乙腈以20mL/min的流速进行。将在28.8分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(18mg，58％，HPLC纯度90％)。MS(ESI)：621.5(60，M+H)；HRMS：对于C31H53N6O7(M+H)的计算值：621.3970；测得：621.3977。
实施例14
N-[(2R)-2-({[4-((2S)-2-{(2S)-2-[2-((2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-{4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁基}-4-甲基戊酰基氨基)-乙酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)苯基]甲氧基}-羰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400642
部分A-N-[(2R)-2-({[4-((2S)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)苯基]-甲氧基}羰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]-6-[(芴-9-基甲氧基)-羰基氨基]己酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141400651
将实施例3B的产物(65mg，0.112mmol)溶解于50∶50 TFA∶二氯甲烷(2.0mL)中，在室温下搅拌20分钟，并在减压下浓缩从而得到固体。将所述固体吸收在无水DMF(0.5mL)中并用DIEA(39μL，0.224mmol)、实施例13B的产物(56.0mg，0.112mmol)和HOBt(17mg，0.112mmol)处理。将所述反应在室温、氮气下搅拌24小时，用50∶50 TFA∶二氯甲烷(2.0mL)处理，并在室温下搅拌另外30分钟。在减压下除去所述溶剂并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-54％乙腈以20 mL/min的流速进行。将在33,3分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(58mg，70％，HPLC纯度100％)。1H NMR(CD3CN)δ7.78(d，J＝7.2Hz，2H)，7.60(d，J＝8.4Hz，2H)，7.49(d，J＝8.4Hz，2H)，7.38(t，J＝7.5Hz，2H)，7.34-7.27(m，4H)，5.09-4.93(m，2H)，4.29(d，J＝7.2Hz，2H)，4.24-4.11(m，2H)，3.99(t，J＝7.2Hz，1H)，3.04-2.94(m，2H)，2.21-2.11(m，2H)，1.77-0.99(m，12H)，0.96-0.77(m，12H)。MS(ESI)：743.4(100，M+H)，1485.6(20，2M+H)。
部分B-Fmoc-PL-NLys(Boc)-L-HMPB BHA树脂的制备
使用Irori MacroKan
Figure A20068003141400652
反应容器合成该肽作为肽库的部分。通过用DMF(8mL/MacroKan
Figure A20068003141400653
)洗涤将Fmoc-Leu-HMPB BHA树脂(0.26g/容器，取代水平＝0.54mmol/g)溶胀。进行以下步骤：(步骤1)使用在DMF(8mL/MacroKan)中的20％哌啶持续3分钟除去Fmoc基团，接着第二次处理30分钟。(步骤2)将所述树脂用二氯甲烷(8mL/MacroKan，9×3分钟)和DMF(8mL/MacroKan，3×3分钟)彻底洗涤。(步骤3)将在DMF(6mL/MacroKan)中的Fmoc-NLys(Boc)-OH(5.0摩尔当量)、HOBt(5摩尔当量)、HBTU(5摩尔当量)，以及DIEA(5-10摩尔当量)加至所述反应烧瓶中并使所述反应进行8小时。(步骤4)将所述MacroKans用DMF(8mL/MacroKan，3×3分钟)和二氯甲烷(8mL/MacroKan，9×3分钟)彻底洗涤。(步骤5)移去一部分所述树脂并测定所述反应的完成程度。(步骤6)根据需要重复步骤3-5从而完成偶联反应。重复步骤1-6直到已经得到序列Fmoc-PL-NLys(Boc)-L。部分C-Ac-PL-NLys(Boc)-L-OH的制备
将来自部分B的MacroKan反应容器放置于烧瓶中并通过用DMF(8mL/MarcoKan)洗涤将所述树脂溶胀。使用在DMF(8mL/MacroKan)中的20％哌啶持续3分钟除去Fmoc基团，接着第二次处理30分钟。(步骤2)将所述树脂用二氯甲烷(8mL/MacroKan，9×3分钟)和DMF(8mL/MacroKan，3×3分钟)彻底洗涤。加入乙酸酐(5摩尔当量)、DIEA(5摩尔当量)和DMF(6mL/MacroKan)，并使所述反应进行4小时。将所述MacroKans用DMF(8mL/MacroKan，3×3分钟)和二氯甲烷(8mL/MacroKan，9×3分钟)彻底洗涤并在减压下干燥过夜。
将所述肽-树脂从所述MacroKans移去，放置入烧结玻璃漏斗中，并用在二氯甲烷(3mL)中的1％TFA处理。2分钟后，通过施用压力将所述溶液直接过滤入在甲醇(2mL)中的10％吡啶溶液中。将所述裂解步骤重复九次。将所合并的滤液蒸发至其体积的5％，用水(10mL)稀释，并在冰-水浴中冷却。通过在烧结玻璃漏斗中过滤收集所得到的沉淀，用水洗涤，并在真空下干燥。通过HPLC实现纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的27-54％乙腈进行，从而得到无色固体状的标题化合物(67.7mg，79％)。MS(ESI)：612.5(20，M+H)，512.4(100，M+H-Boc)。
部分D-N-[(2R)-2-({[4-((2S)-2-{(2S)-2-[2-((2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-{4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁基}-4-甲基戊酰基氨基)乙酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)苯基]甲氧基}羰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺的制备
Figure A20068003141400661
将部分C的产物(19mg，0.031mmol)、HOAt(2.8mg，0.021mmol)、TMP(14μL，0.10mmol)和DIC(13μL，0.084mmol)在无水DMF(0.5mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟。加入部分A的产物(24mg，0.033mmol)，并继续搅拌48小时。将所述溶液在减压下浓缩并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有15mMNH4OAc的45-72％乙腈(pH＝7)以20mL/min的流速进行。将在20.8分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(11.4mg，28％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：1236.7(75，M-Boc+H)，1292.7(100，M-44+H)，1336.8(40，M+H)。
部分E-N-[(2R)-2-({[4-((2S)-2-{(2S)-2-[2-((2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-{4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁基}-4-甲基戊酰基氨基)乙酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)苯基]甲氧基}-羰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141400671
将部分D的产物(13.4mg，0.010mmol)在DMF(1.0mL)中的溶液用TAEA(0.2mL)处理并在室温下搅拌20分钟。将所述溶液在减压下浓缩并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-49.5％乙腈以20mL/min的流速进行。将在33.1分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(10.0mg，90％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：1114.7(100，M+H)，507.9(40，2M+H)；HRMS：对于C56H96N11O12(M+H)的计算值：1114.7234；测得：1114.7223。手性分析：75.2％L-Leu。
实施例15
N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-6-(2-溴丙酰基氨基)己酰胺的合成
Figure A20068003141400681
将实施例3，部分B的产物(112mg，0.193mmol)在DMF(1.0mL)中的20％哌啶中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟并在减压下浓缩。将所得到的残余物吸收在DMF(0.8mL)中并用TMP(51μL，0.38mmol)和2-溴丙酰溴(22μL，0.21mmol)处理。10分钟后，将所述溶液浓缩并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的27-49.5％乙腈以20mL/min的流速进行。将在19.1分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(26.6mg，28％，HPLC纯度100％)。1H NMR(CDCl3)δ8.59(s，1H)，8.08(s，1H)，6.60(s，1H)，4.92(d，J＝7.2Hz，1H)，4.41(q，J＝7.2Hz，1H)，4.22(s，1H)，3.31-3.23(m，2H)，2.26(t，J＝7.2Hz，2H)，1.85(d，J＝7.2Hz，3H)，1.73-1.65(m，4H)，1.58-1.49(m，3H)，1.49-1.36(m，11H)，0.98-0.91(m，6H)。MS(ESI)：393.1(100，M-Boc+H)，395.2(90，M-Boc+H)。
实施例16
N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-6-(2-氟丙酰基氨基)己酰胺的合成
Figure A20068003141400682
方法A
将实施例3的产物(9.6mg，0.027mmol)、2-氟丙酸钠(2.5mg，0.027mmol)、HBTU(10mg，0.032mmol)和DIEA(7.7μL，0.54mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌10分钟。在减压下除去所述溶剂并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-45％乙腈以20mL/min的流速进行。将在24.2分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(8.5mg，73％，HPLC纯度100％)。1H NMR(CD3CN)δ9.19(s，1H)，8.50(m，1H)，6.48(s，1H)，5.14-5.05(m，1H)，4.96(dd，J1＝6.8Hz，J2＝49.2Hz，1H)，4.26(s，1H)，3.34-3.22(m，2H)，1.73-1.61(m，4H)，1.59-1.50(m，6H)，1.47-1.34(m，11H)，0.97-0.89(m，6H)。MS(ESI)：455.3(10，M+Na)，333.3(100，M-Boc+H)；HRMS：对于C20H37FN4O5(M+H)的计算值：433.2821；测得：433.2824。
方法B
将KF(3.9μL在水中的0.1mg/μL溶液，0.007mmol)和Kryptofix
Figure A20068003141400691
(5.0mg，0.013mmol)在乙腈(0.5mL)中的溶液在氮气流下蒸发，同时在90℃下温热烧瓶。将该共沸干燥步骤重复5次并将所得到的残余物在高真空下进一步干燥15分钟。将残余物溶解于实施例15的产物(1.1mg，0.0020mmol)在0.25mL无水乙腈中的溶液中。将所述溶液在90℃、氮气下搅拌5分钟。LC/MS分析显示～15％的溴化物转化为标题化合物。
实施例17
N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-6-[(2，5-二硝基苯基)羰基氨基]己酰胺的合成
Figure A20068003141400692
将2，5-二硝基苯甲酸(0.212g，1.00mmol)、草酰氯(96μL，1.1mmol)和DMF(10μL)在二氯甲烷(10mL)中的溶液在环境温度下搅拌45分钟。将所述溶液在减压下浓缩得到黄色油状物(225mg)。将该油状物(80mg，0.344mmol)与实施例3的产物(62mg，0.17mmol)和DIEA(60μL，0.34mmol)一起溶解于二氯甲烷(2.0mL)中。将所述溶液在环境温度下搅拌2小时，并在真空下浓缩从而制得橙色固体。将所述化合物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的27-54％乙腈以20mL/min的流速进行。将在25.0分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到灰白色固体状的标题化合物(25mg，27％)。1H NMR(CDCl3/CD3CN)δ8.38(s，1H)，8.27-8.22(m，2H)，8.01-7.90(m，2H)，7.10(s，1H)，4.98(m，1H)，3.25(q，J＝6.0Hz，2H)，2.10(t，J＝7.2Hz，2H)，1.58-1.23(m，18H)，0.81-0.74(m，6H)。MS(ESI)：451.4(100，M+H-Boc)。
实施例18
N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-6-[(2-氟-5-硝基苯基)羰基氨基]己酰胺的合成
Figure A20068003141400701
将来自实施例17的产物(8.0mg，0.014mmol)、KF(2.5mg，0.044mmol)和Kryptofix(16mg，0.044mmol)在乙腈(1.0mL)中的溶液在氮气流下蒸发，同时在75℃下温热烧瓶。将该共沸干燥步骤重复5次并将所得到的残余物在高真空下进一步干燥15分钟。将残余物溶解于乙腈(1.0mL)中并在85℃下加热5分钟，以及在减压下浓缩从而得到橙色/红色油状物。将所述油状物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的27-54％乙腈以20mL/min的流速进行。将在24.6分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(1.6mg，21％)。1H NMR(CDCl3)δ8.97-8.93(m，1H)，8.70(bs，1H)，8.36-8.31(m，1H)，7.92(bs，1H)，7.29(t，J＝9.9Hz，1H)，6.76(s，1H)，4.80(s，1H)，4.18(s，1H)，3.53-3.47(m，2H)，2.28(t，J＝7.2Hz，2H)，1.78-1.38(m，18H)，0.98-0.86(m，6H)。MS(ESI)：426.2(100，M+H-Boc)。
实施例19
2-[(2-{[(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400711
将实施例3B的产物(116.1mg，0.200mmol)集合入5mL圆底烧瓶中并在22℃下用哌啶在DMF中的溶液(1∶4 v/v，4.00mL)处理。搅拌0.5小时后，在真空下除去所有挥发性物质。将所得到的固体物质吸收在DMF(2.00mL)中并转移至先前制备的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(136mg，0.220mmol)在含有HBTU(83.4mg，0.220mmol)、HOBt(33.7mg，0.220mmol)和i-Pr2NEt(105μL，0.600mmol)的DMF(2.00mmol)中的溶液中。将所得到的溶液在22℃下保持1小时，然后在真空下浓缩并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的50-80％乙腈以20mL/min的流速进行。将在16分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体。将全部物质吸收在CH2Cl2(3.00mL)中并用TFA(750μL，9.74mmol)处理。在22℃下搅拌7小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.1×250mm)上使用梯度为2.0％/min的含有0.1％TFA的0-40％乙腈以20mL/min的流速进行。将在7分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(101mg，0.0928mmol；46.4％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.39(1H，s)，9.99(1H，s)，8.42(1H，t，J＝5.4Hz)，8.19(3H，br s)，4.14(2H，s)，3.77(1H，br s)，3.50(8H，s)，3.36(4H，brt，J＝5.4Hz)，3.11(2H，td，J＝6.8，6.1Hz)，3.04(4H，brt，J＝5.6Hz)，2.16(2H，t，J＝7.4Hz)，1.76-1.71(1H，m)，1.63(4H，m)，1.47-1.42(2H，m)，1.32-1.27(2H，m)，0.92(3H，d，J＝6.5Hz)，0.90(3H，d，J＝6.5Hz)。13C NMR(DMSO-d6，150MHz)δ172.7，170.8，167.6，164.4，54.3，53.9，52.1，49.6，48.6，40.4，38.7，32.9，28.5，25.9，24.6，23.4，22.5，21.9。MS(ESI)：634.4(61.2，M+H)，317.9(100)。
实施例20
N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-苯基丙酰基氨基}-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的合成
将Boc-D-Phe-OH(10mg，0.038mmol)和HOAt(5.2mg，0.038mmol)在干燥DMF(1.00mL)中的溶液依次用可力丁(35μL，0.26mmol)和DIC(5.9μL，0.038mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入实施例3A的产物(18.0mg，37.4μmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌1小时。然后在真空下除去所有挥发性物质并将所得到的油状物用哌啶在DMF中的溶液(1∶4 v/v，1.00mL)处理。将所述溶液搅拌0.5小时，然后在真空下浓缩并将粗残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的5-35％乙腈以20mL/min的流速进行。将在23分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(7.7mg，0.015mmol；40％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)δ9.97(1H，s)，9.83(1H，s)，7.64(3H，br s)，7.31-7.26(4H，m)，7.19(1H，t，J＝7.0Hz)，6.91(1H，d，J＝8.7Hz)，4.23(1H，ddd，J＝10.8，8.9，3.8Hz)，2.99(1H，dd，J＝13.9，3.5Hz)，2.80-2.73(3H，m)，2.14(2H，t，J＝7.3Hz)，1.54(4H，tt，J＝7.6，7.5Hz)，1.33(2H，tt，J＝8.0，7.3Hz)，1.29(9H，s)。MS(ESI)：393.4(100，M+H)。HRMS：对于C20H33N4O4的计算值：393.2496；测得：393.2500。
实施例21
6-氨基-N-{2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-2-甲基丙酰基氨基}己酰胺，三氟乙酸盐的合成
将Boc-Aib-OH(25.0mg，0.123mmol)和HOAt(14.0mg，0.103mmol)在干燥DMF(1.00mL)中的溶液依次用可力丁(75.5μL，0.571mmol)和DIC(16μL，0.102mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入实施例3A的产物(30.0mg，62.3μmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌1.5小时。然后在真空下除去所有挥发性物质，并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的45-75％乙腈以20mL/min的流速进行。将在28分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体，然后用哌啶在DMF中的溶液(1∶4 v/v，1.00mL)处理。将所述溶液搅拌0.5小时，然后在真空下浓缩并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的0-30％乙腈以20mL/min的流速进行。将在17分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(11.4mg，25.6μmol；41.2％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ9.68(1H，br s)，9.38(1H，d，J＝1.7Hz)，7.65(3H，br s)，2.77(2H，tq，J＝7.4，5.7Hz)，2.10(2H，t，J＝7.4Hz)，1.55-1.49(4H，m)，1.37(9H，s)，1.35(6H，s)，1.31(2H，m)。MS(ESI)：331.4(100，M+H)。HRMS：对于C15H31N4O4(M+H)的计算值：331.2340；测得：331.2339。
实施例22
N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-5-[(亚氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基色满-6-基)磺酰基]氨基}甲基)氨基]戊酰基氨基}-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400732
将Boc-D-Arg(Pmc)-OH(66.2mg，0.122mmol)和HOAt(14.0mg，0.103mmol)在干燥DMF(1.00mL)中的溶液依次用可力丁(75.5μL，0.571mmol)和DIC(16.0μL，0.102mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入实施例3A的产物(30.0mg，62.3μmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌1.5小时。然后在真空下除去所有挥发性物质，并将所得到的油状物用哌啶在DMF中的溶液(1∶4 v/v，4.00mL)处理。将所述溶液搅拌0.5小时，然后在真空下浓缩并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的25-55％乙腈以20mL/min的流速进行。将在22分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(25.7mg，32.9μmol；52.7％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ9.80(1H，s)，9.79(1H，s)，7.62(3H，br s)，6.87(1H，d，J＝8.2Hz)，3.94(1H，dt，J＝8.0，7.8Hz)，3.03(2H，m)，2.77(2H，tq，J＝6.1，5.9Hz)，2.59(2H，t，J＝7.5Hz)，2.03(3H，s)，1.78(2H，t，J＝6.8Hz)，1.61-1.44(7H，m)，1.37(9H，s)，1.34-1.30(2H，m)，1.26(3H，s)。MS(ESI)：1335.6(18.5，2M+H)，668.4(100，M+H)。HRMS：对于C31H54N7O7S(M+H)的计算值：668.3800；测得：668.3799。
实施例23
(4R)-4-[N-(6-氨基己酰基氨基)氨甲酰基]-4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁酸叔丁酯，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400741
将Boc-D-Glu(But)-OH(37.2mg，0.123mmol)和HOAt(14.0mg，0.103mmol)在干燥DMF(1.00mL)中的溶液依次用可力丁(75.5μL，0.571mmol)和DIC(16.0μL，0.102mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入实施例3A的产物(30.0mg，62.3μmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌1.5小时。然后在真空下除去所有挥发性物质，并将所得到的油状物用三(2-氨基乙基)胺在DMF中的溶液(1∶4 v/v，4.00mL)处理。将所述溶液搅拌0.5小时，然后在真空下浓缩并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的15-45％乙腈以20mL/min的流速进行。将在17分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(24.3mg，44.6μmol；71.6％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ8.77(1H，s)，8.68(1H，s)，7.32(3H，br s)，5.76(1H，br s)，4.11(1H，br s)，2.96(2H，t，J＝6.8Hz)，2.22(2H，tJ＝6.8Hz)，2.02-1.97(1H，m)，1.85-1.80(1H，m)，1.70(2H，tt，J＝7.6，7.5Hz)，1.65(2H，tt，J＝7.0，6.9Hz)，1.54(2H，m)，1.44(9H，s)，1.42(9H，s)。MS(ESI)：431.3(100，M+H)。
实施例24
6-氨基-N-({[(叔丁氧基)羰基氨基]环戊基}羰基氨基)己酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400751
部分A-N-({[(叔丁氧基)羰基氨基]环戊基}羰基氨基)-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺的制备
Figure A20068003141400752
将1-叔丁氧基羰基氨基环戊烷甲酸(72.0mg，0.314mmol)和HOAt(35.6mg，0.262mmol)在干燥DMF(3.50mL)中的溶液依次用可力丁(193μL，1.46mmol)和DIC(40.2μL，0.257mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入实施例3A的产物(100mg，0.208mmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌3小时。然后在真空下除去所有挥发性物质，并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的40-90％乙腈以20mL/min的流速进行。将在16分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(50.0mg，86.4μmol；41.6％)。1H NMR(C6D6，600MHz)：δ9.50(1H，br s)，8.62(1H，br s)，7.59(2H，d，J＝7.4Hz)，7.50(2H，br d，J＝7.1Hz)，7.23(2H，t，J＝7.3Hz)，7.19(2H，t，J＝7.1Hz)，4.47(2H，br d，J＝5.8Hz)，4.40(1H，br s)，4.05(1H，br s)，2.88(2H，m)，2.45-2.25(2H，m)，2.02-1.69(4H，m)，1.62-1.33(4H，m)，1.43(9H，s)，1.14-1.03(4H，m)。MS(ESI)：601.3(58.5，M+Na)，479.4(100，M-Boc)。HRMS：对于C32H43N4O6(M+H)的计算值：579.3177；测得：579.3180。
部分B-6-氨基-N-({[(叔丁氧基)羰基氨基]环戊基}羰基氨基)己酰胺，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(40.0mg，69.1μmol)用哌啶在DMF中的溶液(1∶4 v/v，1.00mL)处理。将所述溶液保持0.5小时，然后在真空下浓缩并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的5-35％乙腈以20mL/min的流速进行。将在12分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(24.0mg，51.0μmol；73.8％)。1H NMR(C6D6，600MHz)：δ10.29(1H，br s)，9.66(1H，br s)，8.63(3H，br s)，6.69(1H，br s)，2.71(2H，t，J＝7.2Hz)，2.49(2H，dt，J＝13.4，7.5Hz)，2.27(2H，t，J＝7.1Hz)，2.17(2H，br s)，1.67-1.57(8H，m)，1.47(9H，s)，1.29(2H，tt，J＝7.6，7.4Hz)。MS(ESI)：357.4(100，M+H)。HRMS：对于C17H33N4O4的计算值：357.2502(M+H)；测得：357.2491。
实施例25
N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙酰基氨基}-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400761
将Boc-D-Ala-OH(23.2mg，0.123mmol)和HOAt(14.0mg，0.103mmol)在干燥DMF(1.00mL)中的溶液依次用可力丁(75.5μL，0.571mmol)和DIC(16.0μL，0.102mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入实施例3A的产物(30.0mg，62.3μmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌2小时。然后在真空下除去所有挥发性物质，并将所得到的油状物用三(2-氨基乙基)胺在DMF中的溶液(1∶4 v/v，4.00mL)处理。将所述溶液搅拌0.5小时，然后在真空下浓缩并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.5％/min的含有0.1％TFA的0-30％乙腈以20mL/min的流速进行。将在12分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(21.3mg，49.5μmol；79.4％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ9.76(1H，s)，9.73(1H，s)，7.62(3H，br s)，6.90(1H，d，J＝7.4Hz)，4.02(1H，dq，J＝7.2，7.1Hz)，2.77(2H，tq，J＝5.9，5.8Hz)，2.11(2H，t，J＝7.4Hz)，1.55-1.50(4H，m)，1.34-1.29(2H，m)，1.37(9H，s)，1.20(3H，d，J＝7.1Hz)。MS(ESI)：317.4(100，M+H)，261.3(9.5)。HRMS：对于C14H29N4O4的计算值：317.2183；测得：317.2186。
实施例26
(3S)-N-(6-氨基己酰基氨基)-3-[(叔丁氧基)羰基氨基]-5-甲基己酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400771
将Boc-β-高Leu-OH(66.5mg，0.271mmol)和HOAt(36.9mg，0.271mmol)在干燥DMF(3.60mL)中的溶液依次用可力丁(119μL，0.900mmol)和DIC(42.0μL，0.268mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入实施例3A的产物(87.0mg，0.181mmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌2小时。然后在真空下除去所有挥发性物质，并将所得到的油状物用哌啶在DMF中的溶液(1∶4 v/v，3.60mL)处理。将所述溶液保持0.5小时，然后在真空下浓缩并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的5-35％乙腈以20mL/min的流速进行。将在27分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(31.4mg，64.5μmol；35.7％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ9.68(1H，s)，7.68(2H，br s)，6.59(1H，d，J＝8.9Hz)，3.85-3.80(1H，m)，2.77(2H，tq，J＝6.0，5.8Hz)，2.21(2H，ABXX’，JAB＝14.3Hz，JAX＝JBX＝8.3Hz，JAX’＝JBX’＝5.3Hz)，2.11(2H，t，J＝7.4Hz)，1.59-1.49(5H，m)，1.37(9H，s)，1.34-1.29(3H，m)，1.20(1H，ddd，J＝13.3，9.2，3.9Hz)，0.84(3H，d，J＝6.9Hz)，0.83(3H，d，J＝7.0Hz)。13C NMR(DMSO-d6，150MHz)δ170.6，168.8，154.8，77.3，45.5，44.1，42.9，38.5，32.7，28.1(3)，26.6，25.2，24.3，24.2，23.2，21.5。MS(ESI)：373.4(100，M+H)。HRMS：对于C18H37N4O4：373.2809的计算值；测得：373.2808。
实施例27
(2R)-6-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-N-(6-氨基己酰基氨基)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]己酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400781
部分A-(2R)-6-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]己酸，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141400782
将Boc-D-Lys(Fmoc)-OH(260mg，0.555mmol)用哌啶在DMF中的溶液(1∶4 v/v，4.00mL)处理。将所述溶液保持0.5小时，然后在真空下浓缩并在真空歧管上干燥18小时从而确保完全除去过量的哌啶。将所得到的固体物质吸收在DMF(2.00mL)中并转至先前制得的Boc-Leu-OH(193 mg，0.830mmol)在含有HBTU(263 mg，0.694mmol)、HOBt(106 mg，0.692mmol)和i-Pr2NEt(483μL，2.77mmol)的DMF(2.00mL)中的溶液中。将所得到的溶液在22℃下保持1小时，然后在真空下浓缩。将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC18柱(21.2×250mm)上使用梯度为2.0％/min的含有0.1％TFA的35-75％乙腈以20mL/min的流速进行。将在15分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(203mg，0.442μmol；79.6％)。MS(ESI)：482.4(30，M+Na)，460.4(14，M+H)，360(100，M-Boc)。将该物质不经进一步纯化用于后续的步骤。
部分B-(2R)-6-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-N-(6-氨基己酰基氨基)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]己酰胺，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(45.0mg，97.9μmol)和HOAt(12.3mg，90.4μmol)在干燥DMF(2.00mL)中的溶液依次用可力丁(53.9μL，0.408mmol)和DIC(14.1μL，90.1μmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入实施例3A的产物(30.0mg，62.3μmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌3小时。然后在真空下除去所有挥发性物质，并将所得到的油状物用三(2-氨基乙基)胺在DMF中的溶液(1∶4 v/v，2.00mL)处理。将所述溶液保持0.5小时，然后在真空下浓缩并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为2.0％/min的含有0.1％TFA的0-40％乙腈以20mL/min的流速进行。将在20分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(25.3mg，36.1μmol；57.9％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ9.76(1H，br s)，7.72(1H，t，J＝5.5Hz)，7.61(2H，br s)，6.79(1H，d，J＝8.2Hz)，6.71(1H，d，J＝8.0Hz)，3.94-3.89(1H，m)，3.06-2.97(2H，  m)，2.77(2H，td，J＝5.9，5.8Hz)，2.11(2H，t，J＝7.3Hz)，1.55-1.50(2H，m)，1.37(18H，s)，1.43-1.23(13H，m)，0.87(3H，d，J＝6.6Hz)，0.85(3H，d，J＝6.7Hz)。MS(ESI)：587.4(100，M+H)。HRMS：对于C28H55N6O7的计算值：587.4127；测得：587.4122。
实施例28
6-{(2R)-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-N-氨基己酰胺，甲酸盐的合成
Figure A20068003141400801
部分A-6-{(2R)-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-N-[(叔丁氧基)羰基氨基]己酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141400802
在22℃下，向实施例1B的产物(123mg，0.342mmol)在干燥DMF(5.00mL)中的溶液中加入Fmoc-D-Leu-OH(145.0mg，0.410mmol)、HBTU(143mg，0.377mmol)和HOBt(52.0mg，0.340mmol)，接着加入i-Pr2NEt(179μL，1.03mmol)。搅拌1.5小时后，将所述溶液用乙酸乙酯和H2O(每种50mL)稀释，同时转至分液漏斗中。分离所述层并将水层用乙酸乙酯(2×20mL)洗涤。将所合并的乙酸乙酯层连续用0.1N HCl以及NaHCO3和NaCl的饱和溶液(每种30mL)洗涤，然后用MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的浅黄色油状物(～200mg)不经进一步纯化用于后续的步骤。MS(ESI)：603.3(90，M+Na)，581.4(100，M+H)，481.4(94，M-Boc)。
部分B-6-{(2R)-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-N-氨基己酰胺，甲酸盐的制备
在22℃下，将部分A的产物(200mg，0.342μmol)在CH2Cl2(3.00mL)中的溶液用TFA(3.00mL)处理。搅拌0.5小时后，将所述溶液在真空下浓缩并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为2.0％/min的含有0.1％HCO2H的25-75％乙腈以20mL/min的流速进行。将在11分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(99.0mg，0.188mmol；54.9％，经历两步)。1H NMR(C6D6，600MHz)：δ7.76(1H，br s)，7.65(2H，d，J＝7.2Hz)，7.60(2H，d，J＝7.3Hz)，7.25-7.17(4H，m)，4.57(1H，td，J＝8.9，5.5Hz)，4.38(2H，ABqd，JAB＝10.7Hz，Jd＝7.4Hz)，4.14(1H，t，J＝7.3Hz)，3.34-3.19(2H，m)，2.30(1H，t，J＝6.9Hz)，2.17(2H，t，J＝7.3Hz)，1.86(1H，qq，J＝6.9，6.7Hz)，1.82-1.75(2H，m)，1.64(2H，tt，J＝7.6，7.5Hz)，1.51-1.44(2H，m)，1.29(2H，tt，J＝7.6，7.4Hz)，0.99(3H，d，J＝6.4Hz)，0.97(3H，d，J＝6.5Hz)。13C NMR(C6D6，150MHz)δ172.9，172.8，156.8，144.7，144.6，141.6，127.4，125.8，120.2，66.6，54.1，47.7，42.4，39.2，34.0，29.4，26.6，25.3，25.1，23.4，22.2。MS(ESI)：503.4(15.5，M+Na)，481.4(100，M+H)。HRMS：对于C27H37N4O4(M+H)的计算值：481.2 809；测得：481.2811。
实施例29
(2R)-N-{[4-(氨基甲基)苯基]羰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400811
部分A-N-[(叔丁氧基)羰基氨基](4-{[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]甲基}苯基)甲酰胺的制备
Figure A20068003141400812
在22℃下将Fmoc-Amb-OH(1.00g，2.68mmol)在干燥DMF(10.0mL)中的溶液用HBTU(1.22g，3.22mmol)处理，接着用i-Pr2NEt(2.30mL，13.2mmol)和肼基甲酸叔丁酯(354mg，2.68mmol)处理。反应两小时后，在真空下除去所有挥发性物质。将所得到的油状物吸收在乙酸乙酯(50mL)中，用NaHCO3饱和溶液(2×15mL)和NaCl饱和溶液(1×15mL)洗涤，然后用MgSO4干燥，经硅石塞过滤并在真空下浓缩为浅黄色晶状固体(1.20g，2.46mmol，91.9％)。将该物质直接用于后续步骤中。1H NMR(CDCl3，600MHz)：δ9.50(1H，br s)，7.71(1H，br s)，7.40(2H，br d，J＝6.6Hz)，7.31(2H，d，J＝7.5Hz)，7.20(2H，d，J＝7.4Hz)，6.94(2H，t，J＝7.4Hz)，6.90(1H，t，J＝5.9Hz)，6.86-6.84(4H，m)，3.97(2H，d，J＝6.8Hz)，3.87(2H，d，J＝6.0Hz)，3.77(1H，t，J＝6.6Hz)，1.02(9H，s)。MS(ESI)：875.3(100，2M-Boc)，388.2(90，M-Boc)。
部分B-(2R)-N-{[4-(氨基甲基)苯基]羰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的制备
在22℃下将部分A的产物(100mg，0.205mmol)用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1 v/v，2.00mL)处理。0.25小时后，在真空下除去所有挥发性物质，将残余物吸收在干燥DMF(2.00mL)中，然后用可力丁(70.0μL，0.530mmol)处理。将所得到的溶液转至先前制得的Boc-D-Leu-OH(71.0mg，0.307mmol)、HOAt(35.0mg，0.257mmol)、可力丁(190μL，1.44mmol)和DIC(40.1μL，0.256mmol)在干燥DMF(2.0mL)中的溶液中。在22℃下0.5小时后，将另外的1.50当量的活化氨基酸溶液转至所述反应混合物中；然后在4小时内观察游离酰肼的完全耗尽。在真空下浓缩后，将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.2％/min的含有0.1％TFA的50-80％乙腈以20mL/min的流速进行。将在20分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体。随后将所有物质用哌啶在DMF中的溶液(1∶4 v/v，3.00mL)处理。在22℃下搅拌3小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.2％/min的含有0.1％TFA的10-40％乙腈以20mL/min的流速进行。将在20分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(50.7mg，0.103mmol；50.2％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ9.96(1H，br s)，8.19(2H，br s)，7.92(2H，AB，JAB＝8.2Hz)，7.55(2H，AB，JAB＝8.2Hz)，6.92(1H，d，J＝8.2Hz)，4.13-4.09(1H，m)，4.11(2H，s)，1.74-1.70(1H，m)，1.51-1.49(2H，m)，1.39(9H，s)，0.91(3H，d，J＝6.6Hz)，0.89(3H，d，J＝6.5Hz)。13C NMR(DMSO-d6，150MHz)：δ172.1，164.8，156.7，155.2，137.7，132.4，128.7，127.7，77.9，51.3，44.2，41.9，41.6，40.9。MS(ESI)：757.3(100，2M+H)，379.4(38.8，M+H)。HRMS：对于C19H31N4O4的计算值：379.2340；测得：379.2338。
实施例30
(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基-N-(4-哌啶基羰基氨基)戊酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400831
部分A-4-{N-[(叔丁氧基)羰基氨基]氨甲酰基}哌啶甲酸芴-9-基甲基酯的制备
Figure A20068003141400832
将哌啶-1，4-二甲酸单(9H-芴-9-基甲基)酯(500mg，1.42mmol)和HOAt(179mg，1.32mmol)在干燥DMF(10.0mL)中的溶液依次用可力丁(1.10mL，8.32mmol)和DIC(204μL，1.30mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入肼基甲酸叔丁酯(157mg，1.19mmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌16小时。在真空下除去所有挥发性物质，并将所述粗制残余物溶解于乙酸乙酯(70mL)中且用NaHCO3饱和溶液(6×25mL)和NaCl饱和溶液(2×25mL)洗涤，接着用MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的55-80％乙腈以20mL/min的流速进行。将在12分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(541mg，1.16mmol；97.9％)。1HNMR(CDCl3，600MHz)：δ(2.6∶1旋转异构体混合物；关于主要旋转异构体的数据)7.77(2H，d，J＝7.5Hz)，7.57(2H，d，J＝7.4Hz)，7.40(2H，dd，J＝7.4，7.4Hz)，7.32(2H，dd，J＝7.6，7.4Hz)，4.45(2H，br s)，4.40(2H，d，J＝6.8Hz)，4.24(1H，t，J＝6.6Hz)，2.86(2H.brs)，2.35(1H，m)，1.82(3H，br s)，1.66(3H，br s)，1.48(9H，s)。13CNMR(CDCl3，150MHz)：δ(主要旋转异构体)174.2，155.4，144.2，141.6，127.9，127.3，125.1，120.2，82.6，67.6，47.6，43.4，41.0，28.2。MS (ESI)：488.3(100，M+Na)，301.4(16.4)。HRMS：对于C26H32N3O5的计算值：466.2336；测得：466.2337。
部分B-(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基-N-(4-哌啶基羰基氨基)戊酰胺，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(50.0mg，0.107mmol)在22℃下用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1 v/v，1.5mL)处理。0.25小时后，在真空下除去所有挥发性物质，将残余物吸收在干燥DMF(1.00mL)中，然后用可力丁(25.0μL，0.189mmol)处理。将所得到的溶液转移至先前制得的Boc-D-Leu-OH(37.3mg，0.161mmol)、HOAt(18.4mg，0.135mmol)、可力丁(50.0μL，0.378mmol)和DIC(21.0μL，0.134mmol)在干燥DMF(1.00mL)中的溶液中。在22℃下1小时后，在真空下除去所有挥发性物质，并将所述粗制残余物用三(2-氨基乙基)胺在DMF中的溶液(1∶4v/v，4.00mL)处理；在0.5小时内观察完全脱保护。将所得到的溶液浓缩为黄色油状物，将其通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的0-20％乙腈以20mL/min的流速进行。将在18分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(15.3mg，32.5μmol；30.3％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ9.89(1H，s)，9.82(1H，s)，8.39(2H，br s)，6.88(1H，d，J＝8.3Hz)，4.02(1H，ddd，J＝9.9，8.5，5.1Hz)，3.31-3.28(2H，m)，2.91(2H，brt，J＝11.8Hz)，1.87-1.83(2H，m)，1.77-1.62(3H，m)，1.48-1.39(2H，m)，1.37(9H，s)，0.88(3H，d，J＝6.6Hz)，0.85(3H，d，J＝6.6Hz)。MS(ESI)：357.3(100，M+H)，301.4(16.4)。HRMS：对于C17H33N4O4(M+H)的计算值：357.2496；测得：357.2496。
实施例31
2-({2-[(2-{4-[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]哌啶基}-2-氧代乙基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400841
将实施例30B的产物(12.0mg，25.5μmol)一次性加至先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}-氨基)乙基]氨基}乙酸(27.0mg，43.7μmol)在含有HBTU(14.7mg，38.8mmol)、HOBt(5.9mg，38.5mmol)和i-Pr2NEt(29.3μL，0.168mmol)的DMF(1.50mmol)中的溶液中。将所得到的溶液在22℃下保持1小时，然后在真空下浓缩。然后将残余物用TFA在CH2Cl2中的溶液(3∶7 v/v，1.00mL)处理18小时，接着在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的0-20％乙腈以20mL/min的流速进行。将在13分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(10.3mg，9.5μmol；46.4％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.46(1H，br s)，10.13(1H，d，J＝12.7Hz)，8.20(3H，br s)，6.49(1H，s)，4.60(2H，br s)，4.32(1H，br d，J＝13.5Hz)，3.77(1H，t，J＝6.7Hz)，3.67(1H，br d，J＝12.2Hz)，3.67(7H，s)，3.09-3.04(5H，m)，2.77(1H，brt，J＝12.1Hz)，2.54(1H，m)，1.79-1.71(3H，m)，1.66-1.53(3H，m)，1.51-1.44(1H，m)，0.92(3H，d，J＝6.5Hz)，0.90(3H，d，J＝6.5Hz)。MS(ESI)：632.4(78.3，M+H)，518.9(48.4)，316.4(100，M+2H)。HRMS：对于C26H46N7O11的计算值：632.3250；测得：632.3215。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；99.3％D-亮氨酸。
实施例32
N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)-6-((2R)-3-氟-2-羟基丙氧基)己酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400851
部分A-6-{(2R)-2-[(2-甲氧基乙氧基)甲氧基]-3-[(4-甲基苯基)磺酰基氧]丙氧基}己酸甲酯的制备
Figure A20068003141400852
将6-[2-羟基-3-(甲苯-4-磺酰基氧)-丙氧基]己酸甲基酯(1.00g，2.67mmol)(Kazi，A.B.；Hajdu，J.Tetrahedron Lett.1992，33，2291)在干燥CH2Cl2(9.00mL)中的溶液用i-Pr2NEt(1.00mL，5.74mmol)和MEM氯化物(460μL，4.03mmol)处理；在22℃下4小时后注意到完全保护。将所述反应混合物用CH2Cl2(30mL)稀释，然后用NaHCO3饱和溶液(2×15mL)洗涤，接着用H2O(2×15mL)洗涤，然后用MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过硅胶色谱(含有0.5％Et3N的2∶3乙酸乙酯∶己烷；在含有0.5％Et3N的1∶1乙酸乙酯∶己烷中Rf＝0.6)纯化得到无色油状物(0.870g，1.88mmol；70.4％)。1H NMR(CDCl3，600MHz)：δ7.78(2H，AB，J＝8.3Hz)，7.34(2H，AB，J＝8.4Hz)，4.71(2H，ABq，JAB＝7.1Hz)，4.16(1H，dd，J＝10.3，4.2Hz)，4.09(1H，dd，J＝10.4，5.8Hz)，3.94-3.91(1H，m)，3.66-3.65(2H，m)，3.66(3H，s)，3.50(2H，td，J＝4.0，1.6Hz)，3.45(2H，ABqd，JAB＝10.3Hz，Jd＝5.0Hz)，3.39-3.34(2H，m)，3.36(3H，s)，2.44(3H，s)，2,29(2H，t，J＝7.5Hz)，1.61(2H，tt，J＝7.7，7.6Hz)，1.50(2H，tt，J＝7.6，6.6Hz)，1.33-1.28(2H，m)。MS(ESI)：485.3(67.3，M+Na)480.3(100，M+H2O)，375.3(23.3)。
部分B-6-{(2R)-2-[(2-甲氧基乙氧基)甲氧基]-3-[(4-甲基苯基)磺酰基氧]丙氧基}己酸的制备
Figure A20068003141400861
将部分A的产物(250mg，0.540mmol)在THF/H2O(4∶1 v/v 4.00mL)中的溶液用LiOH·H2O(68.0mg，1.63mmol)一次性处理并使其在22℃下搅拌18小时。然后将所述反应混合物的pH用0.1N HCl调节至4-5并将所得到的两相物用乙酸乙酯(50mL)稀释。分离所述层并将乙酸乙酯层用NaCl饱和溶液(50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩为无色油状物(223mg，0.497mmol；92.0％)。将该物质不经进一步纯化用于后续的步骤。1H NMR(DMSO-D6，600MHz)：δ12.0(1H，br s)，7.78 (2H，AB，J＝8.3Hz)，7.49(2H，AB，J＝8.0Hz)，4.62(2H，ABq，JAB＝6.9Hz)，4.09(1H，dd，J＝10.5，3.5Hz)，4.01(1H，dd，J＝10.4，5.5Hz)，3.82(1H，qd，J＝5.5，3.5Hz)，3.53-3.51(2H，m)，3.40(2H，t，J＝4.5Hz)，3.38(1H，dd，J＝10.0，5.4Hz)，3.33(1H，dd，J＝10.2，5.8Hz)，3.28(2H，t，J＝6.5Hz)，3.22(3H，s)，2.42(3H，s)，2.17(2H，t，J＝7.4Hz)，1.46(2H，tt，J＝7.6，7.5Hz)，1.39(2H，tt，J＝7.5，6.6Hz)，1.24-1.19(2H，m)。MS(ESI)：471.2(85.4，M+Na)，466.2(100，M+H2O)，171.4(80.1)，115.4(68.7)。
部分C-4-甲基苯磺酸(2R)-3-[5-(N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨甲酰基)戊基氧]-2-[(2-甲氧基乙氧基)甲氧基]丙基酯的制备
Figure A20068003141400871
将部分B的产物(50.0mg，0.111mmol)和HOAt(15.3mg，0.112mmol)溶解于干燥DMF(1.00mL)中并用可力丁(103μL，0.779mmol)处理，接着用DIC(17.5μL，0.112mmol)处理。在22℃下搅拌5分钟后，一次性加入Boc-D-Leu-NHNH2(27.3mg，0.111mmol)，其通过在热乙醇中用4当量水合肼处理Boc-D-Leu-OMe制得，并将所得到的溶液搅拌过夜。在总计20小时的反应时间之后，在真空下除去所有挥发性物质并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的45-75％乙腈以20mL/min的流速进行。将在15分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(37.9mg，56.1μmol；50.3％)。1H NMR(CDCl3，600MHz)：δ8.66(1H，br s)，7.92(1H，br s)，7.79(2H，AB，JAB＝8.3Hz)，7.34(2H，AB，JAB＝8.0Hz)，4.70(2H，ABq，JAB＝7.1Hz)，4.20(1H，br s)，4.16(1H，dd，J＝10.4，4.2Hz)，4.09(1H，dd，J＝10.3，5.8Hz)，3.92(1H，qd，J＝5.4，4.1Hz)，3.64(2H，t，J＝4.6Hz)，3.49(2H，ddd，J＝5.8，3.5，1.1Hz)，3.45(2H，dd，J＝5.2，4.8Hz)，3.37(2H，m)，3.36(3H，s)，2,44(3H，s)，2.24(2H，t，J＝7.4Hz)，1.69(2H，m)，1.66(2H，tt，J＝7.9，7.5Hz)，1.52(2H，m)，1.43(11H，s)，1.38-1.33(2H，m)。MS(ESI)：698.3(50.4，M+Na)，576.3(100，M-Boc)，500.3(80.1)。HRMS：对于C31H54N3O11S的计算值：676.3474；测得：676.3494。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；99.2％D-亮氨酸。
部分D-6-((2R)-3-氟代-2-羟基丙氧基)己酸甲酯的制备
将KF(35.0mg，0.60mmol)和Kryptofix-222[4，7，13，16，21，24-六氧杂-1，10-二氮杂双环-(8，8，8)二十六烷](226.0mg，0.600mmol)以及无水乙腈(100μL)装入烘干的一英钱管形瓶中。然后将所述溶液在真空下浓缩；使用另外的乙腈(3×100μL)共沸任何残余的水。然后向该残余物中加入6-[2-羟基-3-(甲苯-4-磺酰基氧)-丙氧基]己酸甲基酯3(75.0mg；0.200mmol)在干燥乙腈(200μL)中的溶液。然后将该管形瓶用Teflon螺旋盖密封，加热至140℃并搅拌1小时。冷却至22℃后，将所述溶液在乙酸乙酯与水(每种1mL)之间分配，分离所述层并将水层用乙酸乙酯(2×1mL)洗涤。将所合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，在真空下浓缩并通过硅胶色谱法纯化(在1∶1 Et2O/戊烷中Rf＝0.5；KMnO4)从而得到无色油状物(18.3mg，82.3μmol；41.1％)。1H NMR(CDCl3，600MHz)：δ4.44(2H，dABX，Jd＝47.2Hz，JAB＝9.5Hz，JAX＝4.5 Hz，JBX＝5.4Hz)，4.00(1H，dtt，J＝18.2，5.8，4.5Hz)，3.66(3H，s)，3.52(1H，ddd，J＝9.7，4.5，1.3Hz)，3.49-3.44(3H，m)，2.31(2H，t，J＝7.4Hz)，1.64(2H，tt，J＝7.8，7.7Hz)，1.59(2H，tt，J＝7.2，6.5Hz)，1.40-1.35(2H，m)。19F NMR(CDCl3，565MHz)δ-232.2(1F，td，J＝47.2，18.1Hz)。MS(ESI)：223.3(100，M+H)。
部分E-6-((2R)-3-氟代-2-羟基丙氧基)-N-氨基己酰胺的制备
将部分D的产物(40.0mg，0.180mmol)溶解于绝对乙醇(500μL)中，用水合肼(37.2μL，0.719mmol)处理，然后加热至100℃并保持18小时。冷却至22℃后，将所述反应溶液直接加至硅胶柱上并用含有1％Et3N的9∶1 CH2Cl2/甲醇洗脱从而在浓缩之后得到白色固体(31.3mg，0.141mmol；78.2％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ8.91(1H，br s)，5.11(1H，d，J＝5.3Hz)，4.34(2H，dABX，Jd＝47.7Hz，JAB＝9.5Hz，JAX＝3.5Hz，JBX＝5.5Hz)，4.20(1H，br s)，3.78(1H，dttd，J＝21.5，5.7，5.6，3.5Hz)，3.38-3.35(2H，m)，3.33(2H，dd，J＝5.9，1.5Hz)，3.31(2H，br s)，2.00(2H，t，J＝7.4Hz)，1.51-1.45(4H，m)，1.28-1.22(2H，m)。MS(ESI)：223.3(52.0，M+H)，130.3(100)，122.3(60.0)，120.2(67.0)。
部分F-N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)-6-((2R)-3-氟-2-羟基丙氧基)己酰胺，甲酸盐的制备
Figure A20068003141400891
将Boc-D-Leu-OH(31.2mg，0.135mmol)和HOAt(15.3mg，0.112mmol)在干燥DMF(1.00mL)中的溶液依次用可力丁(59.5μL，0.450mmol)和DIC(17.6μL，0.112mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入部分E的产物(20.0mg，90.0μmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌1小时。然后在真空下除去所有挥发性物质，并将所得到的油状物用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1 v/v，2.00mL)处理。将所述溶液搅拌0.25小时，然后在真空下浓缩并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％HCO2H的0-20％乙腈以20mL/min的流速进行。将在21分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(8.3mg，22μmol；24％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ9.99(1H，s)，5.10(1H，d，J＝5.3Hz)，4.35(2H，dABX，Jd＝47.7 Hz，JAB＝9.5Hz，JAX＝3.6Hz，JBX＝5.5Hz)，3.81-3.75(1H，m)，3.73(1H，dd，J＝7.5，6.8Hz)，3.38(2H，ABqt，JAB＝9.5Hz，Jt＝6.5Hz)，3.34(2H，dd，J＝5.7，1.6Hz)，2.15(2H，t，J＝7.3Hz)，1.76-1.69(1H，m)，1.61-1.47(6H，m)，1.33-1.28(2H，m)，0.92(3H，d，J＝6.5Hz)，0.90(3H，d，J＝6.5Hz)。19F NMR(DMSO-d6，565MHz)δ-230.0(1F，td，J＝47.9，21.6Hz)。MS(ESI)：336.4(100，M+H)。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；99.6％D-亮氨酸。
实施例33
4-甲基苯磺酸2-[5-(N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨甲酰基)戊氧基]乙基酯的合成
Figure A20068003141400901
部分A-6-(2-羟基乙氧基)己酸甲酯的制备
Figure A20068003141400902
将己酸甲酯(2.00g，13.7mmol)(从δ-己内酯新鲜制得，参见：Padwa，A.；Danca，M.，D.Org.Lett.2002，4，715)在干燥CH2Cl2(30.0mL)中的溶液装入配备有干冰冷凝器的100mL圆底烧瓶中。将所述容器冷却至-78℃并将约1.5当量的环氧乙烷压缩入所述溶液中。将所述反应混合物温热至-10℃，然后用BF3·OEt2(520μL，4.10mmol)处理并搅拌0.5小时。然后将所述溶液倾倒入冷的NaCl饱和水溶液中并分离所述层。将所述CH2Cl2层用饱和NaCl(2×20mL)洗涤，然后用MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过硅胶色谱法(1∶1乙酸乙酯∶戊烷；Rf＝0.4)纯化，接着在减压下蒸馏得到无色油状物(530mg，2.79mmol；20.3％)。1H NMR(CDCl3，600MHz)：δ3.70(2H，dd，J＝4.7，4.5Hz)，3.65(3H，s)，3.51(2H，dd，J＝4.7，4.5Hz)，3.46(2H，t，J＝6.5Hz)，2.30(2H，t，J＝7.5Hz)，1.64(2H，tt，J＝7.7，7.5Hz)，1.59(2H，tt，J＝7.5，6.6Hz)，1.40-1.35(2H，m)。13C NMR(CDCl3，150MHz)：δ174.3，72.0，71.2，62.1，51.7，34.2，29.5，25.9，24.9。MS(ESI)：191.2(8.5，M+H)，159.2(100)，141.2(20.1)，129.2(58.0)，115.3(65.9)。
部分B-6-{2-[(4-甲基苯基)磺酰基氧]乙氧基}己酸甲酯的制备
Figure A20068003141400903
将部分A的产物(150mg，0.788mmol)在干燥吡啶(957μL，11.8mmol)中的溶液冷却至0℃并用TsCl(181mg，0.949mmol)一次性处理。搅拌0.5小时后，将所述溶液温热至22℃并搅拌0.25小时从而确保完全的转变。将所述反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释并用5％CuSO4水溶液(5×10mL)洗涤，接着用NaCl饱和溶液(15mL)洗涤。将乙酸乙酯层用MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过硅胶色谱法(1∶2乙酸乙酯∶戊烷；Rf＝0.5)纯化得到无色油状物(171mg，0.496mmol；63.0％)。1H NMR(CDCl3，600MHz)：δ7.79(2H，AB，JAB＝8.3Hz)，7.33(2H，AB，JAB＝8.0Hz)，4.14(2H，dd，J＝4.9，4.8Hz)，3.65(3H，s)，3.59(2H，dd，J＝4.9，4.8Hz)，3.37(2H，t，J＝6.5Hz)，2.44(3H，s)，2.29(2H，t，J＝7.5Hz)，1.60(2H，tt，J＝7.7，7.6Hz)，1.50(2H，tt，J＝7.6，6.6Hz)，1.34-1.29(2H，m)。MS(ESI)：345.2(49.7，M+H)，313.2，(100)，199.2(35.2)。
部分C-(6-{2-[(4-甲基苯基)磺酰基氧]乙氧基}己酸的制备
Figure A20068003141400911
在22℃下，将部分B的产物(150mg，0.436mmol)在THF/H2O(4∶1 v/v 2.00mL)中的溶液用LiOH·H2O(54.8mg，1.31mmol)一次性处理并使其搅拌18小时。然后，将所述反应混合物的pH用0.1N HCl调节至4-5并将所得到的两相物用乙酸乙酯(100mL)稀释。分离所述层并将乙酸乙酯层用NaCl饱和溶液(50mL)洗涤，然后用MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩为无色油状物(143mg，0.432mmol；＞98％)。将该物质直接用于后续步骤。1H NMR(CDCl3，600MHz)：δ7.80(2H，AB，JAB＝8.3Hz)，7.34(2H，AB，JAB＝8.0Hz)，4.15(2H，dd，J＝4.9，4.8Hz)，3.60(2H，dd，J＝4.9，4.8Hz)，3.39(2H，t，J＝6.5Hz)，2.45(3H，s)，2.35(2H，t，J＝7.5Hz)，1.63(2H，tt，J＝7.7，7.5Hz)，1.53(2H，tt，J＝7.5，6.6Hz)，1.38-1.33(2H，m)。MS(ESI)：353.1(12.9，M+Na)，348.2(21.2，M+H2O)，313.2(100，M-H2O)，199.2(67.3)，141.1(30.6)。
部分D-4-甲基苯磺酸2-[5-(N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨甲酰基)戊氧基]乙基酯的制备
Figure A20068003141400921
将部分C的产物(40.0mg，0.121mmol)和HOAt(16.6mg，0.121mmol)溶解于干燥DMF(1.00mL)中并用可力丁(112μL，0.848mmol)处理，接着用DIC(19.0μL，0.121mmol)处理。在22℃下搅拌5分钟后，一次性加入Boc-D-Leu-NHNH2(29.7mg，0.121mmol)并将所得到的溶液搅拌过夜。在总计20小时的反应时间之后，在真空下除去所有挥发性物质并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％HCO2H的45-75％乙腈以20mL/min的流速进行。将在16分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(18.7mg，33.5μmol；27.7％)。1H NMR(CDCl3，600MHz)：δ8.68(1H，br s)，7.90(1H，br s)，7.81(2H，AB，JAB＝8.2Hz)，7.35(2H，AB，JAB＝8.3Hz)，4.85(1H，br s)，4.22(1H，br s)，4.16-4.14(2H，m)，3.62-3.60(2H，m)，3.41(2H，t，J＝6.4Hz)，2.46(3H，s)，2.26(2H，t，J＝7.4Hz)，1.74-1.69(1H，m)，1.68(2H，tt，J＝7.9，7.6Hz)，1.55-1.52(4H，m)，1.45(9H，s)，1.39(2H，tt，J＝7.9，6.8Hz)，0.96(3H，d，J＝6.4Hz)，0.94(3H，d，J＝6.2Hz)。MS(ESI)：580.3(26.8，M+Na)，502.2(72.9，M-t-Bu)，458.3(100，M-Boc)。HRMS：对于C26H44N3O8S(M+H)的计算值：558.2844；测得：558.2842。
实施例34
N-[(N-{1-[N-(1-{N-[(1R)-1-(N-{(1S)-3-甲基-1-[N-(2-甲基丙基)氨甲酰基]丁基}氨甲酰基)-3-甲基丁基]氨甲酰基}(1S)-4-(脒基氨基)丁基)氨甲酰基](1S)-3-苯基丙基}氨甲酰基)甲基](2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400931
部分A-N-{(1R)-3-甲基-1-[N-(2-甲基丙基)氨甲酰基]丁基}(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺的制备
将Boc-D-Leu-NHi-Bu(220mg，0.768mmol)(从Boc-D-Leu-OH和i-BuNH2制得，参见：Okuyama，A.；Naito，K.Leucine derivatives，gelatinase inhibitors，and pharmaceuticals containing them.日本专利10045699 A2，1998)在22℃下用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1 v/v，6.00mL)处理。搅拌0.5小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将残余物吸收在干燥DMF(1.00mL)中，然后转移至先前制得的Boc-Leu-OH(211mg，0.846mmol)、HBTU(306mg，0.806mmol)、HOBt(118mg，0.770mmol)和i-Pr2NEt(535μL，3.07mmol)在干燥DMF(3.00mL)中的溶液中。使用另外量的DMF(2×0.5mL)来定量所述转移。0.75小时后，将所述反应混合物用H2O(100mL)稀释，然后用乙酸乙酯(3×30mL)洗涤。将所合并的有机层用5％柠檬酸水溶液(2×25mL)洗涤，接着用NaHCO3饱和溶液和NaCl饱和溶液(每种25mL)洗涤，然后用MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩为白色固体(297mg，0.743mmol；96.5％)。将该物质直接用于后续步骤。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ7.36(1H，br s)，7.12(1H，br s)，5.57(1H，br s)，4.76(1H，br s)，4.43(1H，br s)，3.15(1H，dt，J＝6.6，6.5Hz)，3.10-3.05(1H，m)，1.89-1.67(6H，m)，1.53-1.44(1H，m)，1.43(9H，s)，0.95(6H，br d，J＝3.8Hz)，0.91(3H，br d，J＝5.7Hz)，0.88(9H，br d，J＝6.6Hz)。13C NMR(DMSO-d6，150MHz)δ173.6，172.2，160.0，79.4，53.9，52.3，47.1，41.8，41.3，28.9，28.4，25.2，25.1，23.1，22.3，22.2，20.3。MS(ESI)：422.4(17.4，M+Na)，400.4(100，M+H)，344.4(63.2)。HRMS：对于C21H42N3O4(M+H)的计算值：400.3170；测得：400.3175。
部分B-Fmoc-R(Pmc)-HMPB BHA树脂的制备
将HMPB-BHA树脂(10.0g，取代水平＝0.61mmol/g)装入200mLAdvanced ChemTech反应容器中并通过用DMF(2×45mL)洗涤将其溶胀。将Fmoc-Arg(Pmc)-OH(12.1g，18.3mmol)在DMF(45.0mL)中的溶液加至所述容器中并将所述混合物振摇0.25小时。加入吡啶(2.22mL，27.5mmol)，接着加入在DMF(45.0mL)中的2，6-二氯苯甲酰氯(2.62mL，18.3mmol)并将所述混合物在22℃下振摇5小时。将所述树脂用DMF、CH2Cl2、甲醇、CH2Cl2以及DMF(每种3×90mL)洗涤，然后用DMF(90.0mL)、吡啶(2.47mL，30.5mmol)和苯甲酰氯(2.12mL，18.3mmol)处理并将所述容器振摇3小时。然后，用DMF、CH2Cl2、甲醇以及CH2Cl2(每种3×90mL)进行最终洗涤并通过富烯-哌啶试验确定所述装载量(0.44mmol/g)。
部分C-Fmoc-PLG～Hphe-R(Pmc)-HMPB BHA树脂的制备
将部分B的Fmoc-Arg(Pmc)-HMPB BHA树脂(2.00g，取代水平＝0.45mmol/g)装入50ml Advanced ChemTech反应容器中。通过用DMF(2×20mL)洗涤将所述树脂溶胀，并进行以下步骤：(步骤1)使用在DMF(20mL)中的20％哌啶持续30分钟除去Fmoc基团。(步骤2)将所述树脂用DMF(3×)、二氯甲烷(3×)、甲醇(3×)、二氯甲烷(3×)、DMF(3×)充分洗涤(20mL体积)。(步骤3)将在10mL DMF和1.5mLDIEA中的Fmoc-Arg(Pmc)-OH(1.44g，3.6mmol)、HOBt(0.551g，3.6mmol)、HBTU(1.36g，3.6mmol)加至所述树脂并使所述反应进行4小时。(步骤4)将所述树脂用DMF(3×)、二氯甲烷(3×)、甲醇(3×)、二氯甲烷(3×)、DMF(3×)充分洗涤(20mL体积)。(步骤5)当通过半定量的茚三酮试验以及定量的苦味酸试验或富烯-哌啶试验评估时，发现所述偶联反应大于95％完成。重复步骤1-5直到已经获得序列PLG～Hphe-R。
部分D-Ac-PLG～Hphe-R(Pmc)-OH的制备
将部分C中制得的肽-树脂用在DMF(20mL)中的20％哌啶处理30分钟，并用DMF(3×)、二氯甲烷(3×)、甲醇(3×)、二氯甲烷(3×)、DMF(3×)充分洗涤(20mL体积)。将所述树脂用乙酸酐(0.666mL，6.6mmol)和DIEA(1.4mL，7.92mmol)在DMF(20mL)中的溶液处理2.0小时，用DMF(3×)、二氯甲烷(3×)、甲醇(3×)和二氯甲烷(3×)充分洗涤(20mL体积)，并在真空下干燥。
将所述肽-树脂装入60mL烧结玻璃漏斗中并用二氯甲烷(2×40mL)洗涤。将所述肽-树脂用5∶1∶94三氟乙酸∶Et3SiH∶二氯甲烷溶液(20mL)处理2分钟。通过施用压力将所述溶液直接过滤入10∶90吡啶∶甲醇溶液(4.0mL)。重复所述裂解步骤八次。将所合并的滤液浓缩从而除去二氯甲烷和甲醇，得到无色油状固体。与水(40mL)一起研磨得到无色干燥固体，通过过滤收集其。将该粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的36-63％乙腈以80mL/min的流速进行。将主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状标题化合物(280mg，34％；HPLC纯度100％)。MS：966.5(100，M+H)，483.8(65，M+2H)；HRMS：对于C45H67N8O10S(M+H)的计算值：911.4695；测得：911.4680。
部分E-N-[(N-{1-[N-(1-{N-[(1R)-1-(N-{(1S)-3-甲基-1-[N-(2-甲基丙基)氨甲酰基]丁基}氨甲酰基)-3-甲基丁基]氨甲酰基}(1S)-4-(脒基氨基)丁基)氨甲酰基](1S)-3-苯基丙基}氨甲酰基)甲基](2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(15.0mg，37.6μmol)在22℃下用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1 v/v，2.00mL)处理。搅拌0.5小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将残余物吸收在干燥DMF(2.00mL)中。将所述溶液依次用部分D的产物(34.2mg，37.5μmol)、HOBt(5.7mg，37μmol)、i-Pr2NEt(26.1μL，0.150mmol)和HBTU(14.2mg，37.4μmol)处理，然后在22℃下搅拌0.75小时。将所得到的溶液在真空下浓缩并将残余物在22℃下用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1 v/v，4.00mL)处理。搅拌1.5小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为2.0％/min的含有0.1％TFA的10-50％乙腈以20mL/min的流速进行。将在23分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(23.0mg，22.1μmol；58.9％)。1H NMR(CDCl3，600MHz)：δ8.80(1H，br d，J＝5.4Hz)，8.67(1H，br s)，8.06(1H，br d，J＝5.0Hz)，7.72(1H，br s)，7.45(1H，d，J＝5.4Hz)，7.38(1H，d，J＝7.5Hz)，7.26(1H，brt，J＝5.8Hz)，7.15-7.05(7H，m)，6.85(2H，br s)，4.27(1H，ddd，J＝11.8，8.4，3.8Hz)，4.18(1H，ddd，J＝9.9，7.5，4.6Hz)，4.13-4.09(2H，m)，4.01(1H，dt，J＝6.5，6.1Hz)，3.93(1H，dt，J＝8.9，5.6Hz)，3.74(1H，dd，J＝15.9，6.7Hz)，3.62(1H，dt，J＝9.4，6.2Hz)，3.57(1H，dd，J＝15.9，4.4Hz)，3.35(1H，dt，J＝9.8，6.8Hz)，3.23-3.17(1H，m)，3.00(1H，ddd，J＝16.0，11.3，5.8Hz)，2.93(1H，dt，J＝6.6，6.6Hz)，2.72-2.67(2H，m)，2.59(1H，ddd，J＝16.0，9.6，6.6Hz)，2.11-1.89(6H，m)，1.99(3H，s)，1.86-1.79(2H，m)，1.66-1.53(12H，m)，0.84(3H，d，J＝6.3Hz)，0.84(3H，d，J＝6.2Hz)，0.79(3H，d，J＝6.2Hz)，0.78 (3H，d，J＝6.4Hz)，0.76(3H，d，J＝6.0Hz)，0.75(3H，d，J＝6.0Hz)，0.73(3H，d，J＝6.7Hz)。MS(ESI)：926.7(100，M+H)，464.0(47.3，M+2H)。HRMS：对于C47H81N11O8的计算值：463.8129(M+2H)；测得：463.8131。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；68.0％L-亮氨酸。
实施例35
N-({N-[1-(N-{1-[N-((1R)-1-{N-[1-(N-{(1S)-3-甲基-1-[N-(2-甲基丙基)氨甲酰基]丁基}氨甲酰基)(1S)-3-甲基丁基]氨甲酰基}-3-甲基丁基)氨甲酰基](1S)-4-(脒基氨基)丁基}氨甲酰基)(1S)-3-苯基丙基]氨甲酰基}甲基)(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-(4-氨基丁基)-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400961
部分A-Ac-PL-NLys(Boc)～Hphe-R(Pmc)-L-OH的制备
将含有Fmoc-PL-NLys(Boc)～Hphe-R(Pmc)-L-HMPB-BHA树脂(根据在实施例14B中发现的方法制备；0.318g，取代水平＝0.44mmol/g)的MacroKan反应容器放置于DMF(10.0mL)中并搅拌3分钟。倾析出DMF并将所述树脂在22℃下用哌啶在DMF中的溶液(1∶4v/v，25.0mL)处理1.5小时。倾析出所述溶液，并将所述树脂用CH2Cl2(9×10mL)和DMF(3×10mL)洗涤，然后用DMF(20.0mL)、i-Pr2NEt(123μL，0.706mmol)和Ac2O(66.0μL，0.700mmol)处理。在22℃下15小时之后，倾析出所述溶液并将所述树脂用DMF(3×10mL)和CH2Cl2(9×10mL)洗涤，然后在减压下干燥。将所述树脂从MacroKan移去并放置于中等孔隙率的烧结玻璃漏斗中。将所述树脂用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶99 v/v，9×10mL)洗涤并收集滤液，在真空下浓缩以及通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.8％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的50-95％乙腈以20mL/min的流速进行。将在17分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为浅黄色粉末(80.0mg，66.9μmol；47.8％)。MS(ESI)：1195.7(100，M+H)，548.4(33.4，M+2H-Boc)。HRMS：对于C60H57N10O13S的计算值：1195.6795；测得：1195.6799。
部分B-N-({N-[1-(N-{1-[N-((1R)-1-{N-[1-(N-{(1S)-3-甲基-1-[N-(2-甲基丙基)氨甲酰基]丁基}氨甲酰基)(1S)-3-甲基丁基]氨甲酰基}-3-甲基丁基)氨甲酰基](1S)-4-(脒基氨基)丁基}氨甲酰基)(1S)-3-苯基丙基]氨甲酰基}甲基)(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-(4-氨基丁基)-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的制备
将实施例34A的产物(15.0mg，37.6μmol)在22℃下用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1 v/v，2.00mL)处理。搅拌0.5小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将残余物吸收在干燥DMF(3.00mL)中。将所述溶液依次用实施例35A的产物(44.8mg，37.5μmol)、HOBt(5.7mg，37μmol)、i-Pr2NEt(26.1μL，0.150mmol)和HBTU(14.2mg，37.4μmol)处理，然后在22℃下搅拌0.75小时。将所得到的溶液在真空下浓缩并将残余物在22℃下用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1 v/v，3.00mL)处理。搅拌2.5小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为2.0％/min的含有0.1％TFA的30-70％乙腈以20mL/min的流速进行。将在10分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(38.0mg，28.4μmol；75.6％)。1H NMR(CDCl3，600MHz)：δ8.16-8.00(3H，m)，7.74-7.60(3H，m)，7.31-7.02(9H，m)，4.34(1H，dt，J＝9.6，5.7Hz)，4.31-4.28(1H，m)，4.25(1H，ddd，J＝10.1，7.8，4.8Hz)，4.22-4.09(3H，m)，4.08-4.03(1H，m)，4.00(1H，dt，J＝10.4，5.8Hz)，3.51-3.23(4H，m)，3.13-3.00(2H，m)，2.90-2.49(12H，m)，2.01-1.85(3H，m)，1.89(3H，s)，1.81-1.41(17H，m)，1.30-1.14(3H，m)，0.83-0.71(30H，m)。MS(ESI)：1110.8(40，M+H)，556.0(100，M+2H)。HRMS：对于C57H101N13O9(M+2H)的计算值：555.8917；测得：555.8918。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；75.1％L-亮氨酸。
实施例36
N-[(2R)-2-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-5-[(亚氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基色满-6-基)磺酰基]氨基}甲基)氨基]戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141400981
部分A-N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141400982
将Boc-D-Leu-OH(77.8mg，0.312mmol)和HOAt(35.6mg，0.262mmol)在干燥DMF(3.00mL)中的溶液依次用可力丁(193μL，1.46mmol)和DIC(40.2μL，0.257mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入实施例3A的产物(100mg，0.208mmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌2小时。然后在真空下除去所有挥发性物质，并将所得到的油状物用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1 v/v，6.00mL)处理。将所述溶液保持0.5小时，然后在真空下浓缩并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.4％/min的含有0.1％TFA的20-55％乙腈以20mL/min的流速进行。将在17分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(37.0mg，62.2μmol；30.0％)。将该物质直接用于后续步骤。
部分B-N-[2-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)(2S)-4-甲基戊酰基氨基]-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141400991
将部分A的产物(35.0mg，58.9μmol)溶解于干燥DMF(3.00mL)中并转移至先前制得的Boc-Leu-OH(22.0mg，88.2μmol)、HOBt(11.3mg，73.8μmol)、i-Pr2NEt(41.0μL，0.235mmol)和HBTU(27.9mg，73.6μmol)在DMF(2.00mL)中的溶液中，然后在22℃下搅拌1小时。将所得到的溶液在真空下浓缩并将残余物在22℃下用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1 v/v，6.00mL)处理。搅拌0.5小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.5％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的30-60％乙腈以20mL/min的流速进行。将在17分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(34.0mg，48.0μmol；81.6％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ9.98(1H，s)，9.73(1H，s)，8.80(1H，d，J＝8.6Hz)，8.09(3H，br s)，7.89(2H，d，J＝7.5Hz)，7.68(2H，d，J＝7.4Hz)，7.41(2H，t，J＝7.4Hz)，7.33(2H，t，J＝7.3Hz)，7.24(1H，t，J＝5.5Hz)，4.48(1H，td，J＝8.6，5.7Hz)，4.29(2H，d，J＝6.9Hz)，4 20(1H，t，J＝6.7Hz)，3.81(1H，br s)，2.96(2H，td，J＝6.4，6.3Hz)，2.11(2H，t，J＝7.3Hz)，1.64-1.48(8H，m)，1.39(2H，tt，J＝7.4，6.8Hz)，1.26(2H，tt，J＝8.0，6.9Hz)，0.90(3H，d，J＝6.4Hz)，0.90(3H，d，J＝6.6Hz)，0.90(3H，d，J＝6.4Hz)，0.85(3H，d，J＝6.5Hz)。MS(ESI)：594.4(100，M+H)。HRMS：对于C33H48N5O5(M+H)的计算值：594.3650；测得：594.3646。
部分C-N-[(2R)-2-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-5-[(亚氨基乙基)氨基]戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的制备
将部分B的产物(21.0mg，29.7μmol)的溶液依次用实施例34D的产物(27.1mg，29.7μmol)、HOBt(4.6mg，0.030mmol)、i-Pr2NEt(26.0μL，0.149mmol)和HBTU(11.3mg，29.8μmol)处理，然后在22℃下搅拌2小时。将所得到的溶液在真空下浓缩并将残余物在22℃下用先前制得的哌啶在DMF中的溶液(1∶4 v/v，10.0mL)处理。搅拌0.5小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.5％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的30-60％乙腈以20mL/min的流速进行。将在21分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(30.0mg，21.8μmol；73.3％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ9.83(1H，br s)，9.72(1H，br s)，8.22(0.5H，d，J＝8.0Hz)，8.18(0.5H，t，J＝5.7Hz)，8.11(0.5H，d，J＝8.2Hz)，8.07-8.01(3H，m)，7.97(0.5H，d，J＝8.0Hz)，7.89-7.83(1H，m)，7.80(0.5H，d，J＝8.3Hz)，7.25(2H，t，J＝7.4Hz)，7.17-7.15(3H，m)，4.38-4.16(7H，m)，3.79(0.5H，dd，J＝16.5，5.5Hz)，3.72-3.69(1.5H，m)，3.49-3.29(2H，m)，3.07-2.99(2H，m)，2.79-2.74(2H，m)，2.61-2.54(3H，m)，2.48(6H，br s)，2.10(2H，t，J＝7.4Hz)，2.03(3H，s)，1.92-1.79(5H，m)，1.77(2H，t，J＝6.9Hz)，1.71-1.37(19H，m)，1.31(2H，tt，J＝8.0，7.4Hz)，1.26(6H，s)，0.87(3H，d，J＝6.5Hz)，0.86(3H，d，J＝6.5Hz)，0.81(3H，d，J＝6.6Hz)，0.81(3H，d，J＝6.6Hz)，0.79(3H，d，J＝6.6Hz)，0.75(3H，d，J＝6.5Hz)。MS(ESI)：1264.7(36.3，M+H)，633.3(100，M+2H)。HRMS：对于C63H102N13O12S的计算值：632.8779；测得：632.8786。
实施例37
N-[(N-{1-[N-(1-{N-[1-(N-{(1R)-3-甲基-1-[N-(4-哌啶基羰基氨基)氨甲酰基]丁基}氨甲酰基)(1S)-3-甲基丁基]氨甲酰基}(1S)-4-[(亚氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基色满-6-基)磺酰基]氨基}甲基)氨基]丁基)氨甲酰基]-(1S)-3-苯基丙基}氨甲酰基)甲基](2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐
Figure A20068003141401011
部分A-4-{N-[(2R)-2-((2S)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]氨甲酰基}哌啶甲酸芴-9-基甲基酯，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401012
在22℃下将实施例30B的产物(70.0mg，0.149mmol)一次性加至先前制得的Fmoc-OSu(55.3mg，0.164mmol)和i-Pr2NEt(78.0μL，0.448mmol)在干燥DMF(3.00mL)中的溶液中。搅拌1小时后，将所述溶液在乙酸乙酯与H2O(每种30mL)之间分配，分离所述层并将水层用乙酸乙酯(15mL)洗涤。将所合并的有机层用5％柠檬酸水溶液(2×15mL)洗涤，接着用NaHCO3饱和溶液和NaCl饱和溶液(每种15mL)洗涤。将所得到的溶液用MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩且将残余物在22℃下用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1 v/v，4.00mL)处理。搅拌0.5小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.5％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的30-60％乙腈以20mL/min的流速进行。将在12分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(73.0mg，0.105mmol；70.8％)。将所有物质溶解于干燥DMF(3.00mL)中并转移至先前制得的Boc-Leu-OH(37.6mg，0.151mmol)、HOBt(19.3mg，0.126mmol)、i-Pr2NEt(70.0μL，0.402mmol)和HBTU(47.8mg，0.126mmol)在DMF(2.00mL)中的溶液中，然后在22℃下搅拌1小时。将所得到的溶液在真空下浓缩并将残余物在22℃下用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1 v/v，6.00mL)处理。搅拌0.5小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.5％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的30-60％乙腈以20mL/min的流速进行。将在15分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(58.0mg，82.2μmol；81.3％)。1HNMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.00(1H，s)，9.81(1H，s)，8.80(1H，d，J＝8.5Hz)，8.11(3H，br s)，7.89(2H，d，J＝7.5Hz)，7.62(2H，d，J＝7.5Hz)，7.42(2H，t，J＝7.4Hz)，7.33(2H，t，J＝7.5Hz)，4.47(1H，td，J＝8.7，5.9Hz)，4.36(2H，br d，J＝6.1Hz)，4.27(1H，t，J＝6.5Hz)，4.00-3.79(3H，m)，2.82(2H，br s)，2.41(1H，tt，J＝11.2，3.8Hz)，1.95(3H，s)，1.65-1.50(8H，m)，1.42-1.37(2H，m)，0.91(3H，d，J＝6.5Hz)，0.90(3H，d，J＝6.4Hz)，0.85(3H，d，J＝6.5Hz)。13C NMR(DMSO-d6，150MHz)：δ172.8，170.2，168.8，157.8(q，J＝151Hz)，154.3，143.9，140.8，127.6，127.1，124.9，120.1，116.9(q，J＝299Hz)，66.5，50.9，49.5，46.7，42.8，41.4，40.3，27.9，24.1，23.6，23.0，22.6，21.8，21.2。MS(ESI)：592.3(100，M+H)。HRMS：对于C33H46N5O5(M+H)的计算值：592.3493；测得：592.3479。
部分B-N-[(N-{1-[N-(1-{N-[1-(N-{(1R)-3-甲基-1-[N-(4-哌啶基羰基氨基)氨甲酰基]丁基}氨甲酰基)(1S)-3-甲基丁基]-氨甲酰基}-(1S)-4-[(亚氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基色满-6-基)磺酰基]氨基}-甲基)-氨基]丁基)氨甲酰基](1S)-3-苯基丙基}-氨甲酰基)-甲基](2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物的溶液(21.0mg，29.7μmol)依次用实施例34D的产物(27.1mg，29.7μmol)、HOBt(4.6mg，0.030mmol)、i-Pr2NEt(26.0μL，0.149mmol)和HBTU(11.3mg，29.8μmol)处理，然后在22℃下搅拌2小时。将所得到的溶液在真空下浓缩并将残余物在22℃下用先前制得的哌啶在DMF中的溶液(1∶4 v/v，10.0mL)处理。搅拌0.5小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.5％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的30-60％乙腈以20mL/min的流速进行。将在21分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(30.0mg，21.8μmol；73.3％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ9.88(1H，s)，9.87(1H，s)，8.56(1H，br d，J＝10.0Hz)，8.29-8.24(1H，m)，8.22(0.5H，d，J＝8.0Hz)，8.18(0.5H，t，J＝5.6Hz)，8.11(0.5H，d，J＝8.1Hz)，8.08-8.01(3H，m)，7.97(0.5H，t，J＝8.0Hz)7.87-7.83(1H，m)，7.80(0.5H，d，J＝8.2Hz)，7.25(2H，dd，J＝7.5，7.4Hz)，7.17-7.13(3H，m)，4.38-4.16(8H，m)，3.79(0.5H，dd，J＝16.4，5.4Hz)，3.72-3.69(2H，m)，3.51-3.28(5H，m)，3.07-2.99(2H，m)，2.94-2.89(2H，m)，2.59-2.53(4H，m)，2.47(6H，br s)，2.03(3H，br s)，1.95(3H，s)，1.92-1.38(30H，m)，1.26(6H，s)，0.87(3H，d，J＝6.2Hz)，0.86(3H，d，J＝6.2Hz)，0.81(3H，d，J＝6.5Hz)，0.81(3H，d，J＝6.6Hz)，0.79(3H，d，J＝6.7Hz)，0.75(3H，d，J＝6.6Hz)。MS(ESI)：1262.7(23.9，M+H)，632.0(100，M+2H)。HRMS：对于C63H101N13O12S(M+2H)的计算值：631.8701；测得：631.8705。
实施例38
2-[(2-{[(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401031
部分A-N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-苯基丙酰基氨基}-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺的制备
Figure A20068003141401032
将Boc-D-Phe-OH(242mg，0.90mmol)、HBTU(342mg，0.90mmol)、HOBt(140mg，0.90mmol)和DIEA(525μL，3.0mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟。将实施例3A的产物(371mg，0.75mmol)一次性加至所述反应中，接着加入DIEA(525μL，3mmol)(pH＝10)。将所述溶液在环境温度下搅拌2.5小时并滴加至水(500mL)中。通过过滤收集所得到的沉淀，用水洗涤，并干燥从而得到灰白色固体(360mg，65％)。MS(ESI)：515.3(100，M+H-Boc)，637.3(10，M+Na)。
部分B-2-[(2-{[(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(307mg，0.5mmol)溶解于20∶80哌啶∶DMF(5.0mL)中并在氮气、室温下搅拌30分钟。将所述溶液在减压下浓缩，再溶解于DMF(1.0mL)中，并加至先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}-氨基)乙基]氨基}乙酸(370mg，0.50mmol)、HBTU(228mg，0.60mmol)、HOBt(92mg，0.60mmol)和DIEA(0.21mL，2.4mmol)在DMF(4mL)中的溶液中。将所述溶液在氮气、环境温度下搅拌30分钟，浓缩，并将所得到的残余物吸收在乙酸乙酯(50mL)中。将所述溶液连续用10％柠檬酸(2×50mL)、0.1N NaOH(2×50mL)和水(50mL)洗涤。将所述有机层干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩从而制得黄色油状物。MS(ESI)：992.7(100，M+H)。
将上述油状物溶解于90∶9∶1 TFA∶二氯甲烷∶TIS(5.0mL)中并在室温、氮气下搅拌3小时。将所述溶液浓缩并将所得到的油状固体通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的0-27％乙腈以80mL/min的流速进行。将在22.6分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到40.2mg(总计6％)的无色固体状标题化合物。MS(ESI)：668.4(60，M+H)，461.2(100，M+H-Leu)。HRMS：对于C29H43FeN7O11(M-2H+Fe)的计算值：721.23645；测得：721.2374；手性分析：98.2％D-Phe。
实施例39
(2R)-N-{[N-(4-氨基丁基)氨甲酰基]甲基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的合成
部分A-2-氨基-N-{4-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]丁基}乙酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401051
将Boc-Gly-OH(175mg，1.0mmol)、HBTU(454mg，1.2mmol)、HOBt(183mg，1.2mmol)和DIEA(0.63mL，3.6mmol)在DMF(2.5mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌15分钟。加入N-(4-氨基丁基)(芴-9-基甲氧基)甲酰胺(346mg，1.0mmol)并将所述溶液在环境温度、氮气下搅拌18小时。将所述溶液浓缩并将残余物吸收在乙酸乙酯(50mL)中。将所述溶液连续用10％柠檬酸(2×50mL)、饱和NaHCO3(2×50mL)和水(50mL)洗涤。将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩从而制得白色粉末(475mg，95％)。MS(ESI)：468.3(100，M+H)。
将部分A的产物溶解于1∶1 TFA∶二氯甲烷(5mL)中并在室温、氮气下搅拌10分钟。将所述溶液浓缩从而得到黄色/棕色油状标题化合物(373mg，100％)。MS(ESI)：368.3(100，M+H)，735.3(10，2M+H)。
部分B-(2R)-N-{[N-(4-氨基丁基)氨甲酰基]甲基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的制备
将Boc-D-Leu-OH(299mg，1.2mmol)、HBTU(909mg，2.4mmol)、HOBt(367mg，2.4mmol)和DIEA(418μL，2.4mmol)在DMF(5mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟并用部分A的产物(364mg，1.0mmol)一次性处理。将所述溶液搅拌30分钟并浓缩。将所得到的残余物溶解于乙酸乙酯(50mL)中并连续用10％柠檬酸(2×50mL)、饱和NaHCO3(2×50mL)和水(50mL)洗涤。将有机相干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩从而得到725mg无色固体。将100mg份的所述固体溶解于1∶1DMF∶TAEA(2.0mL)中并在室温、氮气下搅拌30分钟。在减压下除去DMF并将所述油状固体溶解于水(0.5mL)中。然后将所述溶液通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的9-36％乙腈以80mL/min的流速进行。将集中于21.5分钟处的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状标题化合物(40mg，61％，HPLC纯度100％)1H NMR(CD3CN)：δ7.55(s，1H)，7.35(s，3H)，7.13(s，1H)，5.87(s，1H)，3.96(q，J＝7.2Hz，1H)，3.79(dd，J1＝6.6Hz，J2＝16.8Hz，1H)，3.69(dd，J1＝6.6Hz，J2＝16.8Hz，1H)，3.30-3.21(m，1H)，3.19-3.11(m，1H)，3.00-2.91(m，2H)，1.70-1.62(m，3H)，1.59-1.48(m，4H)，1.42(s，9H)，0.96-0.88(m，6H)。MS(ESI)：3 59.3(60，M+H)。HRMS：对于C17H35N4O4(M+H)的计算值：359.2653；测得：359.2650；手性分析：95.9％D-Leu。
实施例40
N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4，N-二甲基戊酰基氨基}-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401061
部分A-N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4，N-二甲基戊酰基氨基}-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺的制备
Figure A20068003141401062
将实施例9A的产物(194.5mg，0.403mmol)在50∶50 TFA∶二氯甲烷(1.5mL)中的溶液在室温下搅拌0.5小时并在真空下浓缩。将所得到的粘性油状物溶解于DMF(2.0mL)中并用Boc-D-Leu-OH(100mg，0.403mmol)、HBTU(184mg，0.484mmol)和DIEA(0.141mL，0.806mmol)处理。将该溶液在室温、氮气下搅拌3小时，并在真空下除去挥发性物质。将所得到的残余物溶解于乙酸乙酯(20mL)中并连续用10％柠檬酸(20mL)、饱和NaHCO3(20mL)、水(20mL)及饱和NaCl(20mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩。将所述粗制产物通过用1∶2戊烷∶乙酸乙酯洗脱的硅胶快速色谱法纯化从而得到粘性无色油状标题化合物(118mg，49％，HPLC纯度100％)。1H NMR(CDCl3)：δ8.78(bs，1H)，7.77(d，J＝7.8Hz，2H)，7.60(d，J＝7.2Hz，2H)，7.41(t，J＝7.5Hz，2H)，7.23(t，J＝7.5Hz，2H)，4.95(d，J＝7.6Hz，1H)，4.86(bs，1H)，4.60-4.54(m，1H)，4.41(d，J＝7.2Hz，2H)，4.26-4.19(m，1H)。MS(ESI)：495.3(70，M-Boc+H)，617.4(100，M+Na)。
部分B-N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4，N-二甲基戊酰基氨基}-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(117.7mg，0.198mmol)在TAEA(0.35mL，2.341mmol)和DMF(1.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟并在减小的真空下浓缩。将所得到的粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-45％乙腈以20mL/min的流速进行。将在17.7分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状标题化合物(53.6mg，73％，HPLC纯度100％)。1H NMR(1∶1 CD3CN∶D2O)：δ4.51-4.30(m，1H)，2.99(s，3H)，2.87(t，J＝7.5Hz，2H)，2.39-2.27(m，2H)，1.68-1.10(m，18H)，0.94-0.70(m，6H)。MS(ESI)：373.4(100，M+H)；HRMS：对于C18H37N4O4(M+H)的计算值：373.2809；测得：373.2815。
实施例41
2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401071
部分A-2-[(2-{[(N-{[4-(N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨甲酰基)苯基]甲基}氨甲酰基)甲基][2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙基){[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基]乙酸叔丁酯的制备
Figure A20068003141401081
将2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(230mg，0.37mmol)、HBTU(156mg，0.40mmol)和DIEA(140μL，0.80mmol)在DMF(1mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌10分钟，并用实施例29的产物(126mg，0.33mmol)和DIEA(70μL，0.33mmol)(pH＝10)处理。将所述溶液搅拌30分钟，并在减压下浓缩。然后将所得到的粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的45-72％乙腈以80mL/min的流速进行。将集中于21分钟处的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状标题化合物(130mg，40％)1H NMR(DMSO-d6)：δ10.32(s，1H)，9.92(s，1H)，9.01(t，J＝6.0Hz，1H)，7.85(d，J＝8.1Hz，2H)，7.40(d，J＝8.1Hz，2H)，6.89(d，J＝8.4Hz，1H)，4.43(d，J＝6.0Hz，2H)，4.28(s，2H)，4.15-4.08(m，1H)，3.51-3.32(m，12H)，3.09-3.00(m，4H)，1.77-1.68(m，1H)，1.56-1.30(m，38H)，0.95-0.86(m，6H)。MS(ESI)：978.7(100，M+H)。
部分B-2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物在92∶8 TFA∶TIS(8.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌2小时并在减压下浓缩。将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用由以含有0.1％TFA的1.8％乙腈等浓度条件持续10分钟以及80mL/min的流速组成的方法，且接着使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的1.8-28.8％乙腈以80mL/min的流速进行。将主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状标题化合物(75mg，88％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：654.3(100，M+H)，327.6(75，M+2H)。HRMS：对于C28H41FeN7O11(M-2H+Fe)的计算值：707.2208；测得：707.2202；手性分析：99.8％D-Leu。
实施例42
2-({2-[({N-[(4-{[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]甲基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401091
部分A-2-{[2-({[N-({4-[(N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨甲酰基)甲基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基)乙基]{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基}乙酸叔丁酯的制备
Figure A20068003141401092
将2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}-氨基)-乙基]氨基}乙酸(53mg，92μmol)、HBTU(31mg，83μmol)和DIEA(26μL，152μmol)在DMF(1.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌15分钟。将实施例4的产物(30mg，76μmol)加至所述溶液中，继续搅拌30分钟，并在减压下除去挥发性物质。将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的45％-72％乙腈以80mL/min的流速进行。将在24.6分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状标题化合物(33mg，43％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：992.7(100，M+H)。
部分B-2-({2-[({N-[(4-{[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]甲基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分B的产物在92∶8 TFA∶TIS(2.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌2.5小时并在减压下浓缩。将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的1.8-28.8％乙腈以80mL/min的流速进行。将在14.8分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状标题化合物(19mg，95％，HPLC纯度100％)。1H NMR(1∶1吡啶-d5∶DMSO-d6)：δ10.90(s，1H)，9.00(s，1H)，7.54(bs，8H)，7.45-7.33(m，4H)，4.50(d，J＝5.4Hz，2H)，4.20(s，1H)，3.80-3.62(m，12H)，3.16-2.97(m，8H)，2.00-1.76(m，3H)，0.96-0.83(m，6H)。MS(ESI)：668.7(60，M+H)，334.4(100，M+2H)。HRMS：对于C29H46N7O11(M+H)的计算值：668.324982；测得：668.3253；手性分析：99.0％D-Leu。
实施例43
2-[10-({N-[(4-{[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]甲基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基)-1，4，7，10-四氮杂-4，7-双(羧基甲基)环十二烷基]乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401101
部分A-2-(7-{[N-({4-[(N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)-羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨甲酰基)甲基]苯基}-甲基)-氨甲酰基]甲基}-1，4，7，10-四氮杂-4，10-双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}-环十二烷基)乙酸叔丁酯的制备
Figure A20068003141401102
将DOTA(Ot-Bu)3-OH(66mg，115μmol)、HBTU(37mg，100μmol)和DIEA(60μL，342μmol)在DMF(2.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌15分钟。一次性加入实施例4的产物(30mg，76μmol)并将所述溶液搅拌另外15分钟。在减压下除去挥发性物质并将所述粗制物质通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的27-54％乙腈以80mL/min的流速进行。将在约20.8分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状标题化合物(44mg，62％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：947.7(95，M+H)，446.4(100，M+2H)；手性分析：98.7％D-Leu。
部分B-2-[10-({N-[(4-{[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)-氨甲酰基]-甲基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基)-1，4，7，10-四氮杂-4，7-双(羧基甲基)环十二烷基]乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物在92∶8 TFA∶TIS(2.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌3小时并在真空下浓缩。将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的1.8-28.8％乙腈以80mL/min的流速进行。将在14.8分钟洗脱的产物级份冷冻干燥从而得到无色固体状标题化合物(19mg，95％，HPLC纯度100％)。1H NMR(1∶1吡啶-d5∶DMSO-d6)：δ10.89(s，1H)，8.98(s，1H)，7.42-7.34(m，4H)，5.73(bs，7H)，4.50-4.42(m，2H)，4.22-4.16(m，1H)，3.84-3.72(m，6H)，3.72-3.61(m，2H)，3.59-3.50(m，2H)，3.25-2.80(m，16H)，2.00-1.76(m，3H)，0.95-0.86(m，6H)。MS(ESI)：679.5(70，M+H)，340.4(100，M+2H)。HRMS：对于C31H51N8O9(M+H)的计算值：679.3774；测得：679.378；手性分析：99.0％D-Leu。
实施例44
3-({N-[(4-{[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]甲基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基)-7-氨基-4-甲基-2-氧代-2H-色烯-6-磺酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401111
部分A-3-{[N-({4-[(N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨甲酰基)甲基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}-7-氨基-4-甲基-2-氧代-2H-色烯-6-磺酸的制备
Figure A20068003141401121
将实施例4的产物(4.1mg，0.0081mmol)溶解于DMF(2.0mL)中并用足够的DIEA(10μL)处理从而得到pH＝10的溶液。将所述溶液用Alexa Fluor 350TM琥珀酰亚胺酯(5.1mg，0.010mmol)处理并在环境温度、氮气下搅拌30分钟。浓缩得到浅黄色固体，将其通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-45％乙腈以20mL/min的流速进行。将所述产物级份冷冻干燥从而得到无色固体状标题化合物(3.1mg，56％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：1275.3(5，2M-Boc+H)，710.2(15，M+Na)，588.2(100，M-Boc+H)。
部分B-3-({N-[(4-{[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]甲基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基)-7-氨基-4-甲基-2-氧代-2H-色烯-6-磺酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物溶解于50∶50 TFA∶二氯甲烷(3.0mL)中并使其在氮气、环境温度下放置10分钟。除去挥发性物质并将所得到的油状物从50∶50乙腈∶H2O(6.0mL)冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(3.1mg，98％，HPLC纯度99％)。1H NMR(1∶1 CD3CN∶D2O)：δ7.96(s，1H)，7.21(AA’BB’系统的a部分，J＝7.9Hz，2H)，7.17(AA’BB’系统的b部分，J＝7.9Hz，2H)，6.62(s，1H)，4.26(s，2H)，3.62(bs，1H)，3.53(s，4H)，2.30(s，3H)，1.65-1.45(m，3H)，0.90-0.82(m，6H)。MS(ESI)：1175.3(11，2M+H)，588.1(100，M+H)；HRMS：对于C27H34N5O8S(M+H)的计算值：588.2128；测得：588.2125。
实施例45
N-[(N-{1-[N-(1-{N-[4-({N-[(1R)-1-(N-氨基氨甲酰基)-3-甲基丁基]氨甲酰基氧}甲基)苯基]氨甲酰基}(1S)-3-甲基丁基)氨甲酰基](1S)-3-苯基丙基}氨甲酰基)甲基](2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-{4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁基}-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401131
部分A-Fmoc-Hphe-HMPB BHA树脂的制备
将HMPB-BHA树脂(5.00g，取代水平＝0.80mmol/g)放置于200mL Advanced ChemTech反应容器中并通过用DMF(3×50mL)洗涤使其溶胀。将Fmoc-Hphe-OH(4.85g，12.1mmol)在DMF(50.0mL)中的溶液加至该容器中并将所述混合物振摇0.25小时。加入吡啶(1.62mL，20.0mmol)，接着加入在DMF(50.0mL)中的2，6-二氯苯甲酰氯(1.72mL，12.0mmol)并将所述混合物在22℃下振摇8小时。将所述树脂用DMF、CH2Cl2、甲醇、CH2Cl2和DMF(每种3×90mL)洗涤，然后用DMF(50.0mL)、吡啶(1.62mL，20.0mmol)和苯甲酰氯(1.40mL，12.1mmol)处理并将所述容器振摇3小时。然后用DMF、CH2Cl2、甲醇和CH2Cl2(每种3×50mL)进行最终洗涤并通过富烯-哌啶试验确定所述装载量(0.60mmol/g)。
部分B-Fmoc-PL-NLys(Boc)～Hphe-HMPB-BHA树脂的制备
将部分A的Fmoc-Hphe-HMPB BHA树脂(2.00g，取代水平＝0.60mmol/g)放置于100ml Advanced ChemTech反应容器中。通过用DMF(2×30mL)洗涤将所述树脂溶胀，并进行以下步骤：(步骤1)通过暴露于哌啶在DMF中的溶液(1∶4 v/v，30mL)持续0.5小时而除去所述Fmoc基团。(步骤2)将所述树脂用DMF、CH2Cl2、甲醇、CH2Cl2和DMF(每种3×30mL)洗涤。(步骤3)将Fmoc-NLys(Boc)-OH(2.25g，4.80mmol)、HOBt(735mg，4.80mmol)、HBTU(1.82g，4.80mmol)和i-Pr2NEt(2.09mL，12.0mmol)在DMF(30.0mL)中的溶液加至所述树脂并将所述反应容器振摇4小时。(步骤4)将所述树脂用DMF、CH2Cl2、甲醇、CH2Cl2和DMF(每种3×30mL)洗涤。(步骤5)当用过富烯-哌啶试验评估时发现所述偶联反应超过95％完成。分别用Fmoc-Leu-OH和Fmoc-Pro-OH重复步骤1-5，从而完成序列PL-NLys(Boc)～Hphe。
部分C-Ac-PL-NLys(Boc)～Hphe-OH的制备
将部分A的肽-树脂(2.12g)放置于100mL Advanced ChemTech反应容器并通过用DMF(2×30mL)洗涤将其溶胀。将所述树脂用在DMF(30mL)中的20％哌啶处理30分钟从而除去所述Fmoc保护基，接着用DMF(3×)、二氯甲烷(3×)、甲醇(3×)、二氯甲烷(3×)和DMF(3×)洗涤(30ml体积)。加入乙酸酐(0.40mL，4.2mmol)、DIEA(0.74mL，4.2mmol)和DMF(30mL)并将所述混合物温和地搅动2小时。将所述肽-树脂用DMF(3×)、二氯甲烷(3×)、甲醇(3×)和二氯甲烷(3×)洗涤(30mL体积)，并在真空下干燥。将所述肽-树脂放置于烧结玻璃漏斗中并用在二氯甲烷中的1％TFA(12mL)处理2分钟。通过施加氮气压力将所述溶液直接过滤入含有1∶9吡啶：甲醇(2.0mL)的烧瓶中。将所述裂解步骤重复十(10)次。将所合并的滤液浓缩从而得到无色油状固体。将该粗制产物与水(2×25mL)一起研磨并在减压下干燥从而得到干燥固体。将该固体通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的27-54％乙腈以80mL/min的流速进行。将在22.6分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到239.1mg(43％)无色固体状标题化合物，其具有100％HPLC纯度。1H NMR(1∶1 CD3CN∶D2O)：δ8.54(d，J＝7.2Hz，3H)，8.36(br，3H)，8.22(br，3H)，8.14(t，J＝7.2Hz，2H)，8.06(t，6H)，5.72(br，3H)，5.08(s，1H)，4.97(s，1H)，4.85(s，2H)，4.74(t，J＝7.2Hz，2H)，2.53-2.31(m，6H)，2.24(t，3H)，1.66(t，J＝5.4Hz，9H)，1.60(d，J＝6.0Hz，3H)，1.57(d，J＝6.0Hz，3H)，1.58(m，3H)；13C NMR(1∶1 CD3CN+D2O)：δ173.7，168.2，161.8，161.6，157.0，143.9，141.2，137.1，133.6，128.8，128.1，127.5，125.4，120.8，120.3，118.7，117.9，115.9，67.6，66.4，52.7，52.3，46.8，40.6，40.1，24.5，24.2，22.4，22.1，21.3，20.9，0.97，0.83，0.69，0.56，0.42，0.28，0.14。MS(ESI)：660.5(30，M+H)，560.4(100，M+H-Boc)；HRMS：对于C34H54N5O8(M+H)：660.3 967的计算值；测得：660.3964。
部分D-(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-N-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺的制备
Figure A20068003141401151
将Boc-D-Leu-OH(150mg，0.649mmol)、肼基甲酸9-芴基甲基酯(164.9mg，0.649mmol)、HOAt(88.3mg，0.649mmol)和可力丁(428.5μL，3.243mmol)在DMF(1mL)中的溶液用DIC(200.8μL，1.297mmol)处理，并在室温、氮气下搅拌3小时。将所述反应混合物用乙酸乙酯(25mL)稀释，连续用10％柠檬酸(3×25mL)、10％NaHCO3(3×25mL)、水(25mL)及饱和NaCl(25mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并在减压下浓缩从而得到无色固体状的标题化合物(302mg，100％)。1H NMR(CDCl3)：δ 8.21(s，1H)，7.74(d，J＝7.8Hz，2H)，7.57(d，J＝7.8Hz，2H)，7.38(t，J＝7.5Hz，2H)，7.29(t，J＝7.5Hz，2H)，6.79(s，1H)，4.85(s，1H)，4.43(d，J＝7.2Hz，2H)，4.18(s，1H)，3.96(s，1H)，1.72(m，2H)，1.43(s，9H)，1.25(m，1H)，0.94(d，J＝6.6Hz，3H)，0.92(d，J＝6.6Hz，3H)。MS：m/e 368.3[M+H-Boc](35％)，490.2[M+Na](100％)。
部分E-N-(4-{[N-((1R)-1-{N-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]氨甲酰基}-3-甲基丁基)氨甲酰基氧]甲基}苯基)(2S)-2-氨基-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401152
将部分C的产物(65.0mg，0.139mmol)溶解于50∶50 TFA∶二氯甲烷(1.0mL)中并在室温、氮气下搅拌30分钟以及在减压下浓缩。将所得到残余物与DIEA(60μL，0.344mmol)、HOBt(21.3mg，0.139mmol)、和实施例13B的产物(69.7mg，0.139mmol)一起溶解于DMF(0.5mL)中。将所述反应在室温、氮气下搅拌18小时，并在减压下除去所述溶剂。将所得到的残余物溶解于50∶50 TFA∶二氯甲烷(1.0mL)中，在室温、氮气下搅拌20分钟，并在真空下浓缩。将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-45％乙腈以20mL/min的流速进行。将在19.5分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状标题化合物(56.1mg，64％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：1259.4(35，2M+H)，630.3(100，M+H)。
部分F-N-[(N-{1-[N-(1-{N-[4-({N-[(1R)-1-(N-氨基氨甲酰基)-3-甲基丁基]氨甲酰基氧}甲基)苯基]氨甲酰基}(1S)-3-甲基丁基)氨甲酰基](1S)-3-苯基丙基}氨甲酰基)甲基](2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-{4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁基}-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401161
将部分D的产物(19.1mg，0.030mmol)、部分B的产物(20.0mg，0.030mmol)和HOAt(4.1mg，0.030mmol)溶解于DMF(0.6mL)中并用可力丁(20.0μL，0.152mmol)和DIC(4.5μL，0.061mmol)处理。将所述溶液在室温、氮气下搅拌18小时。加入TAEA(0.125mL，0.8mmol)并将所述反应溶液搅拌另外20分钟。在减压下除去挥发性物质，并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC18(2)柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-54％乙腈以20 mL/min的流速进行。将在33.4分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状标题化合物(12.1mg，38％，HPLC纯度100％)。1H NMR(1∶1 CD3CN+D2O)：δ8.25-8.21(m，2H)，8.05-7.97(m，4H)，7.94-7.87(m，3H)，5.84-5.63(m，2H)，5.19-4.89(m，3H)，4.80-4.59(m，2H)，4.28-3.97(m，4H)，3.78-3.66(m，2H)，3.41-3.27(m，2H)，2.88-2.03(m，33H)，1.68-1.46(m，18H)。MS(ESI)：1049.7(100，M+H)；HRMS：对于C54H85N10O11(M+H)的计算值：1049.6394；测得：1049.6366。手性分析：66.6％L-Leu，99.4％L-Hphe。
实施例46
N-[(N-{1-[N-(1-{N-[4-({N-[(1R)-1-(N-氨基氨甲酰基)-3-甲基丁基]氨甲酰基氧}甲基)苯基]氨甲酰基}(1S)-4-[(亚氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基色满-6-基)磺酰基]氨基}甲基)氨基]丁基)氨甲酰基](1 S)-3-苯基丙基}氨甲酰基)甲基](2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺，2，2，2-三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401171
部分A-Fmoc-PLG～Hphe-HMPB-BHA树脂的制备
将实施例45A的Fmoc-Hphe-HMPB BHA树脂(2.00g，取代水平＝0.60mmol/g)放置于100ml Advanced ChemTech反应容器中。通过用DMF(2×30mL)洗涤将所述树脂溶胀，并进行以下步骤：(步骤1)通过暴露于哌啶在DMF中的溶液(1∶4 v/v，30mL)持续0.5小时而除去所述Fmoc基团。(步骤2)将所述树脂用DMF、CH2Cl2、甲醇、CH2Cl2和DMF(每种3×30 mL)洗涤。(步骤3)将Fmoc-Gly-OH(1.43g，4.80mmol)、HOBt(735mg，4.80mmol)、HBTU(1.82g，4.80mmol)和i-Pr2NEt(2.09mL，12.0mmol)在DMF(30.0mL)中的溶液加至所述树脂并将所述反应容器振摇4小时。(步骤4)将所述树脂用DMF、CH2Cl2、甲醇、CH2Cl2和DMF(每种3×30mL)洗涤。(步骤5)当通过富烯-哌啶试验评估时发现所述偶联反应超过95％完成。分别用Fmoc-Leu-OH和Fmoc-Pro-OH重复步骤1-5，从而完成序列PLG～Hphe。
部分B-Ac-PLG～Hphe-OH的制备
将部分A的肽-树脂(0.918g)放置于100mL Advanced ChemTech反应容器中并通过用DMF(2×30mL)洗涤将其溶胀。将所述树脂用在DMF(30mL)中的20％哌啶处理30分钟从而除去所述Fmoc保护，接着用DMF(3×)、二氯甲烷(3×)、甲醇(3×)、二氯甲烷(3×)和DMF(3×)洗涤(30ml体积)。加入乙酸酐(0.40mL，4.2mmol)、DIEA(0.74mL，4.2mmol)和DMF(30mL)并将所述混合物温和地搅动2小时。将所述肽-树脂用DMF(3×)、二氯甲烷(3×)、甲醇(3×)和二氯甲烷(3×)洗涤(30mL体积)，并在真空下干燥。将所述肽-树脂放置于烧结玻璃漏斗中并用在二氯甲烷(12mL)中的1％TFA处理2分钟。通过施加氮气压力将所述溶液直接过滤入含有1∶9吡啶∶甲醇(2.0mL)的烧瓶中。将所述裂解步骤重复十(10)次。将所合并的滤液浓缩从而得到无色油状固体。将该粗制产物与水(2×25mL)一起研磨并在减压下干燥从而得到干燥固体。将该固体通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-45％乙腈以80mL/min的流速进行。将在23.8分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到192.0mg(71％)无色固体状的标题化合物，其具有100％HPLC纯度。1H NMR(1∶1 CD3CN+D2O)：δ7.99(t，J＝7.5Hz，2H)，7.94-7.88(m，3H)，5.11-4.90(m，3H)，4.63-4.51(m，2H)，4.26-4.07(m，2H)，3.42-3.26(m，2H)，3.00-2.77(m，2H)，2.73-2.63(m，4H)，2.61-2.53(m，3H)，2.40-2.22(m，3H)，1.64-1.53(m，6H)；13C NMR(1∶1CD3CN+D2O)：δ173.93，173.59，173.55，172.19，170.18，140.52，140.42，128.03，125.67，59.88，51.86，51.49，47.96，41.84，38.76，32.10，30.84，29.08，24.01，23.89，21.84，21.10，20.08。MS：m/e489.4(100，M+H)。
部分C-(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-N-[4-(羟基甲基)苯基]-5-[(亚氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基色满-6-基)磺酰基]氨基}甲基)氨基]戊酰胺的制备
Figure A20068003141401181
将Boc-Arg(Pmc)-OH(500 mg，0.925 mmol)、p-氨基苄基醇(170.9mg，1.388mmol)和EEDQ(377.4 mg，1.388mmol)在1∶1甲苯∶乙醇(10mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌48小时。在减压下除去挥发性物质。将所得到的残余物溶解于乙酸乙酯(10mL)中，连续用5％NaHCO3(3×20mL)、10％柠檬酸(2×20mL)、水(20mL)及饱和NaCl(20mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并在减压下浓缩从而得到无色固体状标题化合物(550mg，92％)。MS(ESI)：1291.7(20，2M+H)，646.3(100，M+H)；HRMS：对于C32H48N5O7S(M+H)的计算值：646.3269；测得：646.3272。
部分D-(4-硝基苯氧基)甲酸(4-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-5-[(亚氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基色满-6-基)磺酰基]氨基}甲基)氨基]戊酰基氨基}苯基)甲基酯的制备
Figure A20068003141401191
将来自部分C的产物(535mg，0.828mmol)、氯甲酸4-硝基苯基酯(251mg，1.243mmol)和吡啶(105mg，1.325mmol)在二氯甲烷(5.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌18小时。加入另外的氯甲酸4-硝基苯基酯(188mg，0.932mmol)和吡啶(84mg，1.06mmol)并继续搅拌另外1.5。蒸发所述溶剂并将所得到的粗制产物通过以4∶1二氯甲烷∶乙腈且接着以1∶1二氯甲烷∶乙腈洗脱的硅胶快速色谱法纯化。得到无色固体状的标题化合物(424mg，63％，HPLC纯度1 00％)。MS：1621.7(15，2M+H)，811.3(100，M+H)。
部分E-(2R)-2-{[(4-{(2S)-2-氨基-5-[(亚氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基色满-6-基)磺酰基]氨基}甲基)氨基]戊酰基氨基}苯基)甲氧基]羰基氨基}-N-氨基-4-甲基戊酰胺，2，2，2-三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401192
将实施例45C的产物(83mg，0.176mmol)在50∶50 TFA∶二氯甲烷(5.0mL)中的溶液在环境温度、氮气下搅拌20分钟并在减压下浓缩至干。将所得到的琥珀色油状物溶解于DMF(1.0mL)中并用DIEA(70μL，0.402μmol)调节至pH 9。加入实施例46D的产物(95mg，0.117mmol)和HOBt(18mg，0.117mmol)并将所述溶液在室温、氮气下搅拌4小时且在减压下浓缩。将所得到的残余物吸收在30∶70 TFA∶二氯甲烷(5.0mL)中，在室温、氮气下搅拌1小时，并浓缩从而得到油状固体。将该油状残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC18(2)柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-63％乙腈以20 mL/min的流速进行。将在48.8分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(65mg，82％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：1878.9(10，2M+H)，939.5(100，M+H)。
部分F-N-[(N-{1-[N-(1-{N-[4-({N-[(1R)-1-(N-氨基氨甲酰基)-3-甲基丁基]氨甲酰基氧}甲基)苯基]氨甲酰基}(1S)-4-[(亚氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基色满-6-基)磺酰基]氨基}甲基)氨基]丁基)氨甲酰基](1S)-3-苯基丙基}氨甲酰基)甲基](2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺，2，2，2-三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401201
将部分E的产物(25mg，0.027mmol)、部分B的产物(13mg，0.027mmol)、HOAt(4mg，0.027mmol)和可力丁(18μL，0.133mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液用DIC(8.2μL，0.053mmol)处理并在室温、氮气下搅拌18小时。加入另外的部分E的产物(13mg，0.014mmol)并继续搅拌另外18小时。将TAEA(0.1mL，0.8mmol)加至所述反应溶液并在室温、氮气下继续搅拌20分钟。在减压下除去挥发性物质，将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC18(2)柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.45％/min的含有0.1％TFA的36-49.5％乙腈以20mL/min的流速进行。将在29.3分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(7.2mg，23％HPLC纯度100％)。1H NMR(1∶1 CD3CN+D2O)：δ8.21-8.15(m，2H)，8.01-7.94(m，2H)，7.94-7.89(m，2H)，7.86-7.80(m，3H)，5.75(d，J＝12Hz，1H)，5.60(d，J＝12Hz，1H)，5.05-4.87(m，2H)，4.77-4.69(m，1H)，4.59-4.44(m，2H)，4.18-4.00(m，2H)，3.79(bs，2H)，3.35-3.19(m，4H)，3.13(s，3H)，3.11(s，3H)，2.83-2.55(m，11H)，2.54-2.32(m，7H)，2.30-2.07(m，8H)，1.91(s，6H)，1.56-1.42(m，12H)。MS(ESI)：1187.7 (100，M+H)。手性分析：97.0％L-Hphe。
实施例47
2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401211
部分A-(2R)-N-{[4-(氨基甲基)苯基]羰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-苯基丙酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401212
将实施例29A的产物(279mg，0.573mmol)溶解于50∶50 TFA∶二氯甲烷(2.0mL)中，在氮气、环境温度下搅拌20分钟并浓缩至干。将所得到的油状残余物溶解于DMF(1.0mL)中并通过加入DIEA(0.4mL，0.230mmol)调节至pH 9。将所述溶液用Boc-D-Phe-OH(160mg，0.573mmol)、HOBt(105mg，0.687mmol)、HBTU(261mg，0.687mmol)和DIEA(0.15mL，0.086mmol)处理并在室温、氮气下搅拌2小时。将所述溶液用TAEA(0.4mL)处理并继续搅拌2小时。在真空下除去挥发性物质并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的13.5-40.5％乙腈以80 mL/min的流速进行。将在21.4分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(140mg，57％，HPLC纯度100％)。1H NMR(1∶1 CD3CN∶D2O)：δ7.83(AA’BB’四重峰的a部分，J＝8.4Hz，2H)，7.51(AA’BB’四重峰的b部分，J＝8.4Hz，2H)，7.33-7.20(m，5H)，4.43-4.37(m，1H)，4.14(s，2H)，3.22-3.14(m，1H)，2.88-2.76(m，1H)，1.27(s，9H)；13C NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ173.47，168.53，162.70(q，J＝28Hz)，157.38，138.11，137.97，133.14，130.34，130.28，129.55，129.22，127.86，117.69(q，J＝291Hz)，81.45，55.60，43.53，38.55，28.51。MS(ESI)：825.5(100，2M+H)，413.4(65，M+H)，313.4(70，M+H)；HRMS：对于C22H29N4O4(M+H)的计算值：413.2183；测得：413.2186。
部分B-2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(120mg，0.291mmol)、DTPA(180mg，0.291mmol)、HBTU(132mg，0.349mmol)和DIEA(101.4μL，0.582mmol)在无水DMF(2mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟。在减压下除去挥发性物质，并将所得到的残余物溶解于90∶9∶1 TFA∶二氯甲烷∶TIS(2.0mL)中并在室温、氮气下搅拌5小时。将所述溶液浓缩并将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用以下方法进行：以1.8％乙腈、流速80mL/min等浓度持续5分钟，接着以梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的1.8-28.8％乙腈以80mL/min的流速进行。将在20.1分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(90mg，45％，HPLC纯度87％)。MS(ESI)：344.6(100，M+2H))，688.3(95，M+H)；HRMS：对于C31H42N7O11(M+H)的计算值：688.2937；测得：688.2936.手性分析：99.2％D-Hphe。
实施例48
2-({2-[({N-[(2R)-2-氨基-3-(4-苯基苯基)丙酰基氨基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401221
部分A-(2R)-N-氨基-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-(4-苯基苯基)丙酰胺，2，2，2-三氟乙酸的制备
Figure A20068003141401231
将肼基甲酸9-芴基甲基酯(223mg，0.879mmol)、Boc-D-Bip-OH(300mg，0.879mmol)、HBTU(400mg，1.054mmol)和DIEA(0.31mL，1.757mmol)在DMF(3.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌18小时。将所述溶液用TAEA(0.5mL)处理并继续搅拌2小时。在真空下除去挥发性物质并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18(2)柱(41.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的27-54％乙腈以80mL/min的流速进行。将在18.1分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(170mg，92％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：256.4(40，M-Boc+H)，300.3(100，M-t-Bu+H)，378.3(10，M+Na)；HRMS：对于C20H26N3O3(M+H)的计算值：356.1969；测得：356.1968。
部分B-2-({2-[({N-[(2R)-2-氨基-3-(4-苯基苯基)丙酰基氨基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(160mg，0.450mmol)、DTPA(278mg，0.450mmol)和HBTU(205mg，0.540mmol)以及DIEA(157μL，0.900mmol)在无水DMF(2mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌45分钟。在减小的真空下除去所述溶剂并将所得到的残余物溶解于90∶1 0∶2 TFA∶二氯甲烷∶TIS(5.0mL)中。将所述溶液在室温、氮气下搅拌4小时并浓缩为油状固体。将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18(2)柱(41.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的9-36％乙腈以80mL/min的流速进行。将在17.6分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(208mg，73％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：316.3(45，M+2H)，631.3(100，M+H)；HRMS：对于C29H39N6O10(M+H)的计算值：631.2722；测得：631.2729。
实施例49
2-{[2-({[N-(5-{N-[((2S)吡咯烷-2-基)羰基氨基]氨甲酰基}戊基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401241
部分A-(2S)-2-(N-{6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰基氨基}氨甲酰基)吡咯烷甲酸叔丁酯的制备
Figure A20068003141401242
将Boc-Pro-OH(193mg，0.9mmol)、HBTU(342mg，0.9mmol)、HOBt(140mg，0.9mmol)和DIEA(525μL，3mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟。一次性加入实施例3A的产物(360mg，0.75mmol)，接着加入DIEA(525μL，3mmol)从而得到pH＝10的溶液。将所述溶液在室温下搅拌两小时并滴加至水(500mL)中。通过在中等烧结玻璃漏斗(medium fritted funnel)上过滤收集所得到的沉淀，用水(75mL)洗涤，并干燥从而得到灰白色固体状的标题化合物(156mg，31％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：465.2(100，M+H-Boc)，587.3(10，M+Na)。
部分B-2-{[2-({[N-(5-{N-[((2S)吡咯烷-2-基)羰基氨基]氨甲酰基}戊基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(156mg，275μmol)溶解于20∶80哌啶∶DMF(5.0mL)中，在氮气、室温下搅拌30分钟，并在真空下浓缩至干。将残余物溶解于DMF(1.0mL)并用DIEA(400μL，1.80mmol)处理。在一单独的烧瓶中将2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(207mg，330μmol)、HBTU(125mg，330μmol)和DIEA(800μL，3.60mmol)在DMF(4.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌15分钟。将两份DMF溶液合并，搅拌另外30分钟，并在减压下浓缩从而得到黄色油状物。MS(ESI)：942.7(100，M+H)。
将上述油状物溶解于90∶9∶1 TFA∶二氯甲烷∶TIS(5.0mL)中，在室温、氮气下搅拌3小时，并在减压下浓缩从而得到黄色油状物。将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用以下方法进行：以0.9％乙腈、流速80mL/min等浓度持续10分钟，接着以梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的0.9-27.9％乙腈以80mL/min的流速进行。将在16.8分钟洗脱的产物级份冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(75mg，97％，HPLC纯度100％)。1H NMR(DMSO-d6)：δ12.02(bs，4H)，10.35(s，1H)，9.96(s，1H)，9.48(bs，1H)，8.70(bs，1H)，8.42(t，J＝5.7Hz，1H)，4.25-4.19(m，1H)，4.19-4.06(m，2H)，3.68-3.40(m，6H)，3.40-3.30(m，4H)，3.30-3.19(m，2H)，3.19-3.09(m，2H)，3.09-2.97(m，4H)，2.38-2.29(m，1H)，2.15(t，J＝7.5Hz，2H)，1.98-1.85(m，3H)，1.53(quin，J＝7.5Hz，2H)，1.44quin，J＝7.5Hz，2H)，1.34-1.23(m，4H)。MS(ESI)：618.3(100，M+H)，309.7(60，M+2H)。HRMS：对于C25H41FeN7O11的计算值：(M-2H+Fe)：671.2208；测得：671.2202。
实施例50
2-({2-[({N-[(4-{[N-((2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]甲基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401251
部分A-(2R)-N-{2-[4-(氨基甲基)苯基]乙酰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-苯基丙酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401261
将实施例4A的产物(303mg，0.754mmol)、  Boc-D-Phe-OH(200mg，0.754mmol)、HBTU(343mg，0.905mmol)和DIEA(0.263mL，1.508mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌2小时。将所述溶液用TAEA(0.4mL)处理并继续搅拌另外2小时。在真空下除去所述溶剂并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-45％乙腈以80mL/min的流速进行。将在16.9分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(242mg，75％，HPLC纯度93％)。MS (ESI)：427.4(100，M+H)，853.5(60，2M+H)；HRMS：对于的计算值C23H31N4O4(M+H)：427.2340；测得：427.2344。
部分B-2-({2-[({N-[(4-{[N-((2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]甲基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(202mg，0.473mmol)溶解于DMF(2.0mL)中并用2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(293mg，0.473mmol)、HBTU(215mg，0.568mmol)和DIEA(165μL，0.947mmol)处理。将所述溶液在室温、氮气下搅拌45分钟并用乙酸乙酯(40mL)稀释。将所述乙酸乙酯溶液连续用1N NaOH(2×40mL)及饱和NaCl(40mL)洗涤，并在减压下浓缩。将所得到的残余物溶解于90∶1 0∶3 TFA∶二氯甲烷∶TIS(5mL)中并在室温、氮气下搅拌2小时。在减压下除去挥发性物质并将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的1.8-28.8％乙腈以80mL/min的流速进行。将在14.5分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(135mg，41％，HPLC纯度95％)。MS(ESI)：351.9(100，M+2H)，702.4(70，M+H)；HRMS：对于C32H44N7O11(M+H)的计算值：702.3093；测得：702.3092。手性分析：100.0％D-Hphe。
实施例51
2-[(2-{[(N-{5-[N-({(2R)-1-[(叔丁基)氧羰基]吡咯烷-2-基}羰基氨基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401271
部分A-(2R)-2-(N-{6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰基氨基}氨甲酰基)吡咯烷甲酸叔丁酯的制备
Figure A20068003141401272
将Boc-D-Pro-OH(378mg，1.8mmol)、HBTU(682mg，1.8mmol)、HOBt(276mg，1.5mmol)和DIEA(700μL，4.0mmol)在DMF(5mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟。一次性加入实施例3A的产物(360mg，0.75mmol)，接着加入DIEA(700μL，4.0mmol)从而将pH升至10。将所述溶液在环境温度下搅拌2小时并在减压下浓缩。将残余物溶解于乙酸乙酯(500mL)中并连续用10％柠檬酸(500mL)、饱和NaHCO3(500mL)及饱和NaCl(500mL)洗涤。将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩从而得到灰白色固体状的标题化合物(760mg，84％)。MS(ESI)：465.2(100，M+H-Boc)，587.3(10，M+Na)。
部分B-2-[(2-{[(N-{5-[N-({(2R)-1-[(叔丁基)氧羰基]吡咯烷-2-基}羰基氨基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的制备
将在20∶80哌啶∶DMF(5.0mL)中的部分A的产物(282mg，0.5mmol)在氮气、室温下搅拌30分钟并在减压下浓缩。将残余物溶解于DMF(1.0mL)中并用DIEA(100μL，0.6mmol)处理从而得到pH 10的溶液。在一单独的烧瓶中将2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(370mg，0.5mmol)、HBTU(189mg，0.5mmol)和DIEA(210μL，2.4mmol)在DMF(4.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌15分钟。将两份DMF溶液合并，使其在环境温度、氮气下放置1小时，并在减压下浓缩。将所述粗制产物溶解于乙酸乙酯(500mL)中并连续用10％柠檬酸(2×50mL)、1 N NaOH(2×50mL)及饱和NaCl(50mL)洗涤。将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩从而得到黄色油状物。MS(ESI)：942.7(100，M+H)。
将上述油状物溶解于90∶9∶1 TFA∶二氯甲烷∶TIS(5mL)中，在室温、氮气下搅拌3小时，并在减压下浓缩。将所述产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用以下方法进行：以0.9％乙腈、流速80mL/min等浓度持续10分钟，接着以梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的0.9-27.9％乙腈以80mL/min的流速进行。将在16.8分钟洗脱的产物级份冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(111mg，36％，HPLC纯度100％)。1H NMR(DMSO-d6)：δ12.05(bs，4H)，10.36(s，1H)，9.96(s，1H)，9.50(bs，1H)，8.70(bs，1H)，8.43(t，J＝5.7Hz，1H)，4.26-4.19(m，1H)，4.19-4.12(m，2H)，3.68-3.43(m，6H)，3.40-3.30(m，4H)，3.30-3.19(m，2H)，3.19-3.09(m，2H)，3.09-2.98(m，4H)，2.38-2.30(m，1H)，2.15(t，J＝7.5Hz，2H)，1.98-1.87(m，3H)，1.53quin，J＝7.5Hz，2H)，1.44quin，J＝7.5Hz，2H)，1.35-1.23(m，4H)。MS(ESI)：618.5(100，M+H)；309.8(60，M+2H)。HRMS：对于C25H41FeN7O11(M-2H+Fe)的计算值：671.2208；测得：671.2204。
实施例52
2-{[2-({[N-(5-{N-[(2R)-2-氨基-3-(苯基甲氧基)丙酰基氨基]氨甲酰基}戊基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401291
部分A-N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-(苯基甲氧基)丙酰基氨基}-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的制备
将实施例3A的产物(311mg，0.847mmol)、Boc-D-Ser(Bzl)-OH(250mg，0.847mmol)、HBTU(385mg，1.016mmol)和DIEA(0.30mL，1.693mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌45分钟。将所述溶液用TAEA(0.5mL)处理并继续搅拌另外2小时。将所述溶液在真空下浓缩并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-45％乙腈以80mL/min的流速进行。将在18.5分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(75mg，21％，HPLC纯度95％)。MS(ESI)：423.3(100，M+H)；HRMS：对于C21H35N4O5(M+H)的计算值：423.2602；测得：423.2602。部分B-2-{[2-({[N-(5-{N-[(2R)-2-氨基-3-(苯基甲氧基)丙酰基氨基]氨甲酰基}戊基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(70mg，0.166mmol)溶解于DMF(2.0mL)中并用2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(102mg，0.166mmol)、HBTU(75mg，0.199mmol)和TEA(46μL，0.331mmol)处理。将所述溶液在室温、氮气下搅拌45分钟并用乙酸乙酯(40mL)稀释。将所得到的溶液连续用1 N NaOH(2×40mL)及饱和NaCl(40mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩。将所得到的残余物溶解于90∶10∶3 TFA∶二氯甲烷∶TIS(5.0mL)中并在室温、氮气下搅拌3小时。在减压下除去挥发性物质并将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的1.8-19.8％乙腈以80mL/min的流速进行。将在17.7分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(78mg，67％，HPLC纯度100％)。1H NMR(1∶1 CD3CN∶D2O)：δ7.92-7.85(m，5H)，5.10(q，J＝10.8Hz，2H)，4.77(t，J＝4.8Hz，1H)，4.43-4.33(m，4H)，4.20(s，8H)，3.80-3.65(m，10H)，2.78(t，J＝7.5Hz，2H)，2.10quin，J＝7.5Hz，2H)，2.01quin，J＝7.5Hz，2H)，1.83quin，J＝7.5Hz，2H)；13C NMR(1∶1 CD3CN∶D2O)：δ176.24，173.92，168.41，168.00，162.10(q，J＝34.5Hz)，138.65，130.21，129.76，129.68，118.21(q，J＝29 1Hz)，74.78，68.99，56.82，56.45，53.65，53.61，51.95，40.78，34.74，29.62，27.24，26.06。MS(ESI)：349.8(199，M+2H)，698.4(80，M+H)；HRMS：对于C30H48N7O12(M+H)的计算值：698.3355；测得：698.3358。
实施例53
2-{[2-({[N-(5-{N-[(2S)-2-氨基-3-(苯基甲硫基)丙酰基氨基]氨甲酰基}戊基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401301
部分A-N-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-(苯基甲硫基)丙酰基氨基}-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401311
将实施例3A的产物(295mg，0.803mmol)、Boc-D-Cys(Bzl)-OH(250mg，0.803mmol)、HBTU(365mg，0.963mmol)和DIEA(0.28mL，1.606mmol)在DMF(2mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌4小时。将所述溶液用TAEA(0.5mL)处理并继续搅拌另外40分钟。将所述溶液在真空下浓缩并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-45％乙腈以80mL/min的流速进行。将在24.4分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(224mg，64％，HPLC纯度95％)。MS(ESI)：439.2(100，M+H)；HRMS：对于C21H35N4O4S(M+H)的计算值：439.23 74；测得：439.2375。
部分B-2-{[2-({[N-(5-{N-[(2S)-2-氨基-3-(苯基甲硫基)丙酰基氨基]氨甲酰基}戊基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(214mg，0.456mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液用2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(301mg，0.456mmol)、HBTU(222mg，0.547mmol)和DIEA(127μL，0.912mmol)处理，并在室温、氮气下搅拌45分钟。将所述反应用乙酸乙酯(40mL)稀释，连续用1 N NaOH(2×40mL)及饱和NaCl(40mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩。将所得到的残余物溶解于90∶10∶3 TFA∶二氯甲烷∶TIS(5.0mL)中并在室温、氮气下搅拌3小时。在减压下除去挥发性物质并将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的1.8-28.8％乙腈以80mL/min的流速进行。将在19.6分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(204mg，59％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：357.9(100，M+2H)，714.4(70，M+H)；HRMS：对于C30H48N7O11S(M+H)的计算值：714.3127；测得：714.3126。手性分析：97.0％D-Cys(Bzl)。
实施例54
2-[(2-{[(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-4-苯基丁酰基氨基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的合成
将Boc-D-Hphe-OH(502mg，1.8mmol)、HBTU(568mg，1.5mmol)、HOBt (230mg，1.5mmol)和DIEA(750μL，4.28mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟。加入实施例3A的产物(720mg，1.5mmol)，接着加入DIEA(750μL，4.28mmol)从而将pH升至10。
将所述溶液在环境温度、氮气下搅拌18小时并在减压下浓缩。将所得到的残余物溶解于乙酸乙酯(50mL)中并连续用10％柠檬酸(2×50mL)、饱和NaHCO3(2×50mL)及饱和NaCl(50mL)洗涤。将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩从而得到黄色油状物(715mg)。MS(ESI)：529.3(100，M+H-Boc)。
将上述油状物(315mg)溶解于50∶50 DEA∶乙腈(2.0mL)中，在环境温度下搅拌30分钟，并在减压下浓缩。将残余物溶解于DMF(1.0mL)并用DIEA(200μL，1.2mmol)处理从而得到pH 10的溶液。在一单独的烧瓶中将2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(370mg，0.5mmol)、HBTU(208mg，0.55mmol)和DIEA(200μL，1.2mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌15分钟。将两份DMF溶液合并，在环境温度下搅拌2小时，并在减压下浓缩。将所得到的粗制产物溶解于乙酸乙酯(50mL)，并将所述溶液连续用10％柠檬酸(2×50mL)、饱和NaHCO3(2×50mL)及饱和NaCl(50mL)洗涤。
将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩从而得到黄色油状物。MS(ESI)：1006.5(100，M+H)。
将上述油状物溶解于90∶9∶1 TFA∶二氯甲烷∶TIS(5.0mL)中并在室温、氮气下搅拌4小时。在减压下除去挥发性物质。将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用以下方法进行：以0.9％乙腈、流速80mL/min等浓度持续10分钟，接着以梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的0.9-27.9％乙腈以80mL/min的流速进行。将在29.5分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(129mg，38％，HPLC纯度100％)1HNMR(DMSO-d6)：δ12.05(bs，4H)，10.35(s，1H)，9.98(s，1H)，8.47-23(m，4H)，7.32(t，J＝7.5Hz，2H)，7.24-7.18(m，3H)，4.14(s，2H)，3.92(s，1H)，3.70-3.40(m，8H)，3.40-3.23(m，4H)，3.11(q，J＝6.6Hz，2H)，3.04(t，J＝5.7Hz，4H)，2.77-2.64(m，2H)，2.17(t，J＝7.5Hz，2H)，2.08-1.97(m，2H)，1.55quin，J＝7.5Hz，2H)，1.45quin，J＝7.5Hz，2H)，1.31quin，J＝7/5Hz，2H)。MS(ESI)：682.3(95，M+H)；341.9(100，M+2H)。HRMS：对于C30H45FeN7O11(M-2H+Fe)的计算值：735.2521；测得：735.2519。
实施例55
2-[(2-{[(N-{[4-({N-[(2R)-2-氨基-3-(4-乙氧基苯基)丙酰基氨基]氨甲酰基}甲基)苯基]甲基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的合成
将Boc-D-Tyr(OEt)-OH(557mg，1.8mmol)、HBTU(568mg，1.5mmol)、HOBt(230mg，1.5mmol)和DIEA(750μL，4.28mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟。将所述溶液用实施例4A的产物(602mg，1.5mmol)处理，接着用DIEA(750μL，4.28mmol)处理并继续搅拌18小时。将所述溶液在减压下浓缩并将残余物溶解于乙酸乙酯(50mL)。将所述乙酸乙酯溶液用10％柠檬酸(2×50mL)、饱和NaHCO3(2×50mL)及饱和NaCl(50mL)洗涤。将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩从而得到黄色油状物(285mg)。MS(ESI)：593.4(100，M+H-Boc)。
使上述油状物(275mg)在50∶50 DEA∶乙腈(5.0mL)中的溶液在氮气、室温下放置30分钟并在真空下浓缩。将所得到的残余物吸收在DMF(1.0mL)中并用DIEA(150μL，1.0mmol)处理。在一单独的烧瓶中将2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(295mg，0.48mmol)、HBTU(168mg，0.44mmol)、HOBt(67mg，0.44mmol)和DIEA(150μL，1.0mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌15分钟。将两份DMF溶液合并并搅拌另外2小时。将所述溶液浓缩并将残余物再溶解于乙酸乙酯(50mL)。将所述乙酸乙酯溶液用1N NaOH(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩从而得到黄色-橙色油状物。MS(ESI)：1070.5(100，M+H)。
将上述油状物溶解于90∶8∶2 TFA∶二氯甲烷∶TIS(10mL)中，在室温、氮气下搅拌4小时，并在真空下浓缩。将所得到的粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用以下方法进行：以0.9％乙腈、流速80mL/min等浓度持续10分钟，在以0.9％乙腈10分钟后接着以梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的0.9-27.9％乙腈以80mL/min的流速进行。将在35分钟洗脱的产物级份冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(52mg，14％，HPLC纯度100％)。1H NMR(DMSO-d6)：δ12.05(bs，4H)，10.58(s，1H)，10.41(s，1H)，8.91(s，1H)，8.18(bs，3H)，7.30-7.15(m，6H)，6.87(d，J＝8.4Hz，2H)，4.33(d，J＝5.4Hz，2H)，4.23(s，1H)，4.00(q，J＝6.9Hz，2H)，3.74-3.43(m，12H)，3.43-3.26(m，4H)，3.10-2.97(m，5H)，2.94-2.87(m，1H)，1.31(t，J＝6.9Hz，3H)。MS(ESI)：746.4(100，M+H)；373.8(100，M+H)。HRMS：对于C34H45FeN7O12(M+2H-Fe)的计算值：799.2470；测得：799.2462。
实施例56
2-({2-[({N-[(4-{[N-((2R)-2-氨基-3-环己基丙酰基氨基)氨甲酰基]甲基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401351
部分A-(2R)-N-{2-[4-(氨基甲基)苯基]乙酰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-环己基丙酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401352
在分液漏斗中将Boc-D-Cha-OH的DCHA盐(337mg，0.744mmol)悬浮于乙酸乙酯(20mL)中并用冰-冷2M H2SO4(1.0mL)洗涤。将乙酸乙酯层移去并放在一旁。将水层用冰水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将所合并的乙酸乙酯层用水(2×20mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并在减压且在不超过40℃下浓缩从而得到无色粘性固体(179mg，收率90％)。将该固体吸收在DMF(2.0mL)中并用实施例4A的产物(265mg，0.660mmol)、HBTU(300mg，0.792mmol)以及足够的DIEA处理从而得到pH＝8的溶液。将所述溶液在室温、氮气下搅拌2小时，用TAEA(0.5mL)处理，并搅拌另外一小时。在真空下除去挥发性物质并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的1 8-45％乙腈以80mL/min的流速进行。将在22.0分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(155mg，54％，HPLC纯度93％)。MS(ESI)：433.5(100，M+H)，865.7(60，2M+H)；HRMS：对于C23H37N4O4(M+H)的计算值：433.2809；测得：433.2806。
部分B-2-({2-[({N-[(4-{[N-((2R)-2-氨基-3-环己基丙酰基氨基)氨甲酰基]甲基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(140mg，0.324mmol)溶解于DMF(2.0mL)中并用2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(200mg，0.324mmol)、HBTU(147mg，0.388mmol)和DIEA(113μL，0.647mmol)处理。将所得到的溶液在室温、氮气下搅拌4小时，用乙酸乙酯(40mL)稀释。将所述溶液连续用0.5N NaOH(2×40mL)及饱和NaCl(40mL)洗涤，并浓缩。将所得到的油状固体溶解于90∶1 0∶3 TFA∶二氯甲烷∶TIS(5.0mL)，在室温、氮气下搅拌2小时并在真空下浓缩。将所得到的粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的6.3-24.3％乙腈以80mL/min的流速进行。将在16.1分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(151mg，66％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：354.9(100，M+2H)，708.5(60，M+H)；HRMS：对于C32H47FeN7O11(M+Fe-2H)的计算值：761.2677；测得：761.2679.手性分析：99.8％D-Cha。
实施例57
2-({2-[({N-[(4-{2-[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]乙基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401361
部分A-3-(4-{[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]甲基}苯基)丙酸的制备
将3-[4-(氨基甲基)苯基]丙酸(12.1g，0.0302mol)，根据Loeffler和Mar的方法(J.Med.Chem.1975，18，287-292)制得，溶解于5％Na2CO3(125mL)、水(125mL)和丙酮(300mL)的溶液中，并用Fmoc-OSu(12.2g，0.0362mol)处理。将所得到的溶液在环境温度下搅拌2小时并使用5 N HCl将pH调节至4-5。将所述混合物减少约一半导致形成大量无色固体沉淀。通过过滤收集该固体，用水洗涤，并干燥。从水中重结晶得到无色固体状的标题化合物，MP 164.5-166℃(4.927g，41％，HPLC纯度＝98％)。1H NMR(DMSO-d6)：δ7.89(d，J＝7.2Hz，2H)，7.78(t，J＝6.0Hz，1H)，7.70(d，J＝7.2Hz，2H)，7.42(t，J＝7.5Hz，2H)，7.34(t，J＝7.5Hz，2H)，7.16(AA’BB’四重峰的a部分，J＝7.8Hz，2H)，7.13(AA’BB’四重峰的b部分，J＝7.8Hz，2H)，4.34(d，J＝6.7Hz，2H)，4.22(t，J＝6.7Hz，1H)，4.14(d，J＝6.0Hz，2H)，2.80(t，J＝7.5Hz，2H)，2.52(t，J＝7.5Hz，2H)；13C NMR(DMSO-d6)：δ173.64，156.26，143.84，140.70，139.31，137.33，128.04，127.35，126.98，125.19，120.03，65.25，46.78，43.46，35.23，29.94。MS(ESI)：402.2(100，M+H)。HRMS：对于C25H24NO4(M+H)的计算值：402.1700；测得：402.1696。
部分B-N-氨基-3-(4-{[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]甲基}苯基)丙酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401371
将部分A的产物(3.0g，0.007mol)、肼基甲酸叔丁酯(1.0g，0.007mol)、HBTU(3.4g，0.009mmol)和DIEA(2.6mL，0.015mmol)的溶液在室温、氮气下搅拌2小时。将该反应用乙酸乙酯(100mL)稀释，连续用10％柠檬酸(3×100mL)、0.5N NaOH(3×100mL)及饱和NaCl(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩。将所得到的固体溶解于20mL TFA∶二氯甲烷(50∶50)中并在室温下搅拌30分钟。在减小的真空下除去挥发性物质并将所得到的粗制产物吸收在60∶40乙腈∶水(100mL)中并冷冻干燥从而得到黄色固体状的标题化合物(4.238g，107％，HPLC纯度95％)。1H NMR(DMF-d7)：δ7.94(d，J＝7.2Hz，2H)，7.80(t，J＝6.0Hz，1H)，7.75(t，J＝7.2Hz，2H)，7.45(t，J＝7.5Hz，2H)，7.35(t，J＝7.5Hz，2H)，7.25(AA’BB’四重峰的a部分，J＝8.4Hz，2H)，7.20(AA’BB’四重峰的b部分，J＝8.4Hz，2H)，4.36(d，J＝7.2Hz，2H)，4.31(d，J＝6.0Hz，2H)，4.28(t，J＝7.2Hz，1H)，2.56(t，J＝7.8Hz，2H)，在2.92在溶剂峰下残存亚甲基；13C NMR(DMF-d7)：δ171.62，159.58(d，J＝34.3Hz)，157.08，144.67，141.53，140.14，138.17，128.59，128.02，127.65，127.43，125.66，120.41，119.29(q，J＝252.7Hz)，66.38，47.57，44.34，30.96。MS(ESI)：416.2(100，M+H)。HRMS：对于C25H26N3O3(M+H)的计算值：416.1969；测得：416.1969。
部分C-(2R)-N-{3-[4-(氨基甲基)苯基]丙酰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的制备
将Boc-D-Leu-OH(200mg，0.865mmol)、部分B的产物(359mg，0.865mmol)、HBTU(394mg，1.038mmol)和DIEA(0.301mL，1.729mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌2小时。将所述溶液用TAEA(0.50mL)处理并继续搅拌1小时。在真空下除去挥发性物质并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18(2)柱(41.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-45％乙腈以80mL/min的流速进行。将在15.6分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(246mg，70％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：407.4(100，M+H)；HRMS：对于C21H35N4O4[M+H]的计算值：407.2653，测得：407.2647。
部分D-2-({2-[({N-[(4-{2-[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]乙基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401391
将DTPA(304mg，0.492mmol)、部分C的产物(200mg，0.492mmol)、HBTU(224mg，0.590mmol)和DIEA(足够使pH到10)在DMF(2.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌4小时。将所述反应用乙酸乙酯(40mL)稀释，连续用0.5N NaOH(2×40mL)及饱和NaCl(40mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并在真空下浓缩。将所得到的残余物溶解于90∶10∶3TFA∶二氯甲烷∶TIS(5.0mL)中并在室温、氮气下搅拌2小时。在真空下除去挥发性物质并将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的1.8-19.8％乙腈以80mL/min的流速进行。将在16.4分钟洗脱的主要产物级份冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(185mg，55％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：682.3(50，M+H)，341.9(100，M+2H)。HRMS：对于C30H45FeN7O11(M+Fe-2H)的计算值：7352521；测得：735.2519；手性分析：99.6％D-Leu。
实施例58
2-[(2-{[(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-3-咪唑-4-基丙酰基氨基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401392
部分A-N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-咪唑-4-基丙酰基氨基}-6-氨基己酰胺，乙酸盐的制备
Figure A20068003141401401
将Boc-D-Hi s-OH(220mg，0.862mmol)、实施例3A的产物(316.7mg，0.862mmol)、HBTU(392mg，1.034mmol)和DIEA(0.300mL，1.724mmol)在DMF(10mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌2小时。将所述溶液用TAEA(0.5mL)处理并搅拌另外2小时。将所述溶液在真空下浓缩并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C 18(2)柱(41.4×250mm)上使用以下方法进行：以1.8％乙腈、流速80mL/min等浓度持续10分钟，接着以梯度为0.9％/min的含有15mM NH4OAc(pH 7)的1.8-28.8％乙腈以80mL/min的流速进行。将在22.4分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(39mg，10％，HPLC纯度95％)。1H NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ7.84(s，1H)，6.98(s，1H)，4.39-4.23(m，1H)，3.10-3.02(m，1H)，2.92-2.82(m，3H)，2.23(t，J＝7.2Hz，2H)，1.83(s，3H)，1.62-1.51(m，4H)，1.37-1.25(m，11H)；13C NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ179.84，175.52，172.88，157.41，136.01，132.57，118.42，81.70，54.00，40.23，34.03，29.72，28.53，27.35，26.09，25.27，23.62。MS(ESI)：383.4(100，M+H)，283.4(25，M-Boc+H)。
部分B-2-({2-[({N-[5-(N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-咪唑-4-基丙酰基氨基}氨甲酰基)戊基]氨甲酰基}甲基)[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基]乙基}{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙酸叔丁酯的制备
将2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(根据Journal of Organic Chemistry  (1993)，58(5)，1151-8中所描述的方法制得，71mg，0.115mmol)、部分A的产物(44mg，0.115mmol)和HBTU(52mg，0.137mmol)以及可力丁(30μL，0.229mmol)在无水DMF(2mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌2小时。在减压下除去所述溶剂并将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C 18(2)柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的27-54％乙腈以20mL/min的流速进行。将在26.4分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(30mg，27％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：982.7(40，M+H)，492.0(100，M+2H)；HRMS：对于C47H84N9O13(M+H)的计算值：982.6183；测得：982.6188。
部分C-2-[(2-{[(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-3-咪唑-4-基丙酰基氨基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分B的产物(28mg，0.029mmol)在90∶10∶3TFA∶二氯甲烷∶TIS(5.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌3小时并浓缩从而得到油状固体。将所述固体从50∶50乙腈∶H2O(5.0mL)冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(14mg，75％，HPLC纯度90％)。MS(ESI)：658.3(70，M+H)，329.7(100，M+2H)；HRMS：对于C26H44N9O11(M+H)的计算值：658.3155；测得：658.3154。
实施例59
2-[(2-{[(N-{[4-({N-[(2S)-2-氨基-3-(苯基甲硫基)丙酰基氨基]氨甲酰基}甲基)苯基]甲基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401411
部分A-(2S)-N-{2-[4-(氨基甲基)苯基]乙酰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-(苯基甲硫基)丙酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401421
将Boc-D-Cys(Bzl)-OH(250mg，0.803mmol)、实施例4A的产物(322mg，0.803mmol)、HBTU(365mg，0.963mmol)和DIEA(0.280mL，1.606mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20小时。将所述溶液用TAEA(0.5mL)处理并继续搅拌另外40分钟。在真空下除去挥发性物质并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-45％乙腈以80mL/min的流速进行。将在22.8分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(151mg)。1H NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ7.37-7.27(m，8H)，7.25-7.20(m，1H)，4.25(bs，1H)，4.05(s，2H)，3.72(s，2H)，3.58(s，2H)，2.90-2.81(m，1H)，2.78-2.61(m，1H)，1.37(s，9H)。MS(ESI)：473.4(100，M+H)；HRMS对于C24H33N4O4S(M+H)的计算值：473.2217；测得：473.2219。
部分B-2-[(2-{[(N-{[4-({N-[(2S)-2-氨基-3-(苯基甲硫基)丙酰基氨基]氨甲酰基}甲基)苯基]甲基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(128mg，0.292mmol)与2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(180mg，0.292mmol)、HBTU(133mg，0.350mmol)和DIEA(102μL，0.584mmol)一起溶解于DMF(2mL)中。将所得到的溶液在室温、氮气下搅拌45分钟并用乙酸乙酯(40mL)稀释。将所述乙酸乙酯溶液连续用1N NaOH(2×40mL)及饱和NaCl(40mL)洗涤，并在减压下浓缩。将所得到的残余物溶解于90∶10∶3TFA∶二氯甲烷∶TIS (5.0mL)中并在室温、氮气下搅拌5小时。在减压下除去挥发性物质并将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的6.3-24.3％乙腈以80mL/min的流速进行。将在18.0分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(142mg，65％，HPLC纯度96％)。1H NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ7.32-7.21(m，9H)，4.33(s，2H)，4.09(t，J＝6.6Hz，1H)，3.93(s，2H)，3.78(d，J＝7.2Hz，1H)，3.74(d，J＝7.2Hz，1H)，3.62(s，8H)，3.56(s，2H)，3.22(t，J＝5.4Hz，4H)，3.15(t，J＝5.4Hz，4H)，2.95(dd，abc系统的Hb，Jab＝Jac＝6.6Hz，Jbc＝8.1Hz，1H)，2.88(dd，abc系统的Hc，Jab＝Jac＝6.6Hz，Jbc＝8.1Hz，1H)；13C NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ173.39，173.14，168.10，167.90，162.51(q，J＝34.8Hz)，138.50，137.91，134.45，130.63，130.04，129.83，128.95，128.52，117.64(q，J＝290Hz)，56.18，55.92，53.30，52.18，51.39，43.76，40.69，36.79，32.72。MS(ESI)：748.3(88，M+H)，374.9(100，M+2H)；HRMS：对于C33H43FeN7O11S(M+Fe-2H)的计算值：801.2085；测得：801.2079；手性分析：97.9％D-Cys(Bzl)。
实施例60
2-({2-[({N-[(4-{2-[N-((2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]乙基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401431
部分A-(2R)-N-{3-[4-(氨基甲基)苯基]丙酰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-苯基丙酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401432
将Boc-D-Phe-OH(250mg，0.942mmol)、实施例57B的产物(392mg，0.942mmol)和DIEA(0.328mL，1.885mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液用HBTU(429mg，1.131mmol)处理并在室温、氮气下搅拌20小时。将所述溶液用TAEA(0.5mL)处理并继续搅拌另外40分钟。在真空下除去所述溶剂并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C 18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-40.5％乙腈以80mL/min的流速进行。将在18.1分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(250mg，60％，HPLC纯度95％)。MS(ESI)：441.4(100，M+H)；HRMS对于C24H33N4O4(M+H)的计算值：441.2496；测得：441.2497。
部分B-2-({2-[({N-[(4-{2-[N-((2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]乙基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的制备
将2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(292mg，0.472mmol)、部分A的产物(208mg，0.472mmol)和DIEA(164μL，0.944mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液用HBTU(215mg，0.567mmol)处理并在室温、氮气下搅拌45分钟。将所述反应混合物用乙酸乙酯(40mL)稀释，连续用0.5N NaOH(2×40mL)及饱和NaCl洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩。在真空下除去溶剂并将所得到的残余物溶解于90∶10∶3TFA∶二氯甲烷∶TIS(5.0mL)中且在室温、氮气下搅拌5小时。在真空下除去挥发性物质并将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C 18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的1.8-19.8％乙腈以80mL/min的流速进行。将在16.1分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(232mg，69％，HPLC纯度96％)。1H NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ7.36-7.27(m，3H)，7.26-7.23(m，2H)，7.21-7.15(m，4H)，4.32(s，2H)，3.97(s，2H)，3.61(s，8H)，3.25(t，J＝6.0Hz，4H)，3.19-3.08(m 6H)，2.84(t，J＝7.8Hz，2H)，2.53-2.46(m，2H)，(丢失的次甲基在HOD峰下)；13C NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ174.58，173.65，168.82，167.47，162.42(q，J＝34.8Hz)，140.79，136.82，134.64，130.59，130.09，129.65，128.92，128.80，117.60(q，J＝291Hz)，56.05，55.80，54.22，53.54，51.18，43.79，37.64，35.82，31.33。MS(ESI)：716.4(82，M+H)，358.8(100，M+2H)；HRMS：对于C33H43FeN7O11(M+Fe-2H)的计算值：769.2364；测得：769.2367。手性分析：100.0％D-Phe。
实施例61
2-{[2-({[N-(5-{N-[(2R)-2-氨基-3-(4-苯基苯基)丙酰基氨基]氨甲酰基}戊基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401451
部分A-N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-(4-苯基苯基)丙酰基氨基}-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺的制备
Figure A20068003141401452
将Boc-D-Bip-OH(409mg，1.2mmol)、HBTU(417mg，1.1mmol)、HOBt(168mg，1.1mmol)和DIEA(350μL，2.0mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟。一次性加入实施例3A的产物(481mg，1.0mmol)，接着加入DIEA(350μL，2.0mmol)从而将pH升至10。将所述溶液在环境温度下搅拌18小时，并在真空下除去挥发性物质。将所得到的残余物与乙酸乙酯(50mL)一起研磨得到无色固体，将其通过过滤收集并干燥从而得到标题化合物(814mg，98％，HPLC纯度100％)。1H NMR(DMSO-d6)：δ9.99(s，1H)，9.84(s，1H)，7.89(d，J＝7.2Hz，2H)，7.69(d，J＝7.8Hz，2H)，7.64(d，J＝7.2Hz，2H)，7.57(d，J＝7.8Hz，2H)，7.48-7.36(m，6H)，7.36-7.29(m，3H)，724(t，J＝5.4Hz，1H)，6.95(d，J＝8.4Hz，1H)，4.32-4.24(m，3H)，4.21(t，J＝6.9Hz，1H)，3.05(d，J＝10.2Hz，1H)，2.98(q，J＝6.4Hz，2H)，2.82(t，J＝12.3Hz，1H)，2.14(t，J＝7.2Hz，2H)，1.53(t，J＝7.2Hz 2H)，1.41(t，J＝7.2Hz，2H)，1.36-1.12(m，11H)。MS(ESI)：591.3(100，M+H-Boc)，713.3(20，M+H)。HRMS：对于C41H47FeN4O6(M+H)的计算值：691.3496；测得：691.3493。
部分B-2-{[2-({[N-(5-{N-[(2R)-2-氨基-3-(4-苯基苯基)丙酰基氨基]氨甲酰基}戊基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(203mg，0.30mmol)溶解于50∶50DEA∶乙腈(5.0mL)并在氮气、室温下搅拌30分钟。将所述溶液浓缩并将残余物溶解于DMF(1.0mL)。在一单独的烧瓶中将2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(222mg，0.36mmol)、HBTU(125mg，0.33mmol)和DIEA(100μL，0.60mmol)在DMF中的溶液(2.0mL)在室温、氮气下搅拌15分钟。将两份DMF溶液合并并继续搅拌另外18小时。通过使用减压除去挥发性物质并将所得到的油状固体吸收在乙酸乙酯(50mL)中。将所述乙酸乙酯溶液连续用10％柠檬酸(2×50mL)、饱和NaHCO3(2×50mL)及饱和NaCl(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩从而得到黄色油状物。MS(ESI)：1086.6(100，M+H)。
将上述油状物溶解于90∶8∶2TFA∶二氯甲烷∶TIS(10mL)，在室温、氮气下搅拌3小时，并在真空下浓缩至干。将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的9-36％乙腈以80mL/min的流速进行。将在约21分钟洗脱的主要产物级份冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(108mg，49％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：744.5(95，M+H)，372.9(100，2M+H)。HRMS：对于C35H47FeN7O11(M-2H+Fe)的计算值：797.2678；测得：797.2687。
实施例62
2-{[2-({[N-(5-{N-[(4-{[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]甲基}苯基)甲基]氨甲酰基}戊基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401471
部分A-N-({4-[(N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨甲酰基)甲基]苯基}甲基)-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺的制备
Figure A20068003141401472
将Boc-D-Leu-OH(1.197g，4.8mmol)、HBTU(1.669g，4.4mmol)、HOBt(0.679g，4.4mmol)和DIEA(750μL，4.4mmol)在DMF(15mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌30分钟。将实施例4A的产物(1.057g，2.0mmol)一次性加至所述反应，接着加入DIEA(750μL，4.4mmol)从而得到pH 10的溶液。将所述溶液搅拌另外5小时并滴加至水(500mL)中。将所得到的沉淀通过过滤收集并干燥从而得到灰白色固体(940mg，76％，HPLC纯度85％)。MS(ESI)：515.2(100，M+H/-Boc)，632.3(45，M+H)；手性分析：99.5％D-Leu。
将上述固体(203mg，0.30mmol)溶解于50∶50DEA∶乙腈(2.0mL)中并在氮气、室温下搅拌30分钟。将所述溶液在真空下浓缩并将残余物溶解于DMF(1.0mL)和DIEA(150μL，0.9mmol)。在一单独的烧瓶中将Fmoc-6-Ahx-OH(212mg，0.60mmol)、HBTU(208mg，0.55mmol)和DIEA(200μL，1.20mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌15分钟。将两份DMF溶液合并并搅拌另外18小时。将所述溶液浓缩并将残余物与乙酸乙酯(50mL)一起研磨从而得到灰白色固体(100mg，46％，HPLC纯度95％)。MS(ESI)：628.3(100，M+H-Boc)，750.3(35，M+Na)。HRMS：对于C41H54N5O7(M+H-Boc)的计算值：628.3493；测得：628.3497；手性分析：99.7％D-Leu。
部分B-2-{[2-({[N-(5-{N-[(4-{[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]甲基}苯基)甲基]氨甲酰基}戊基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(73mg，0.10mmol)溶解于50∶50DEA∶乙腈(3.0mL)中并在氮气、环境温度下搅拌30分钟。将所述溶液在真空下浓缩并将残余物再溶解于DMF(1.0mL)中。在一单独的烧瓶中将2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(74mg，0.12mmol)、HBTU(42mg，0.11mmol)和DIEA(50μL，0.30mmol)在DMF(1.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌15分钟。将两份DMF溶液合并并搅拌另外18小时。将所述溶液浓缩并将所述粗制产物溶解于乙酸乙酯(50mL)。将所述乙酸乙酯溶液连续用10％柠檬酸(2×50mL)、饱和NaHCO3(2×50mL)及饱和NaCl(50mL)洗涤。将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩从而制得黄色油状物。MS(ESI)：1105.6(50，M+H)。
将上述油状物溶解于90∶8∶2TFA∶二氯甲烷∶TIS(10mL)中并在室温、氮气下搅拌3小时。使用减压除去挥发性物质。将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用以下方法进行：以0.9％乙腈、流速80mL/min等浓度持续10分钟，接着以梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的0.9-27.9％乙腈以80mL/min的流速进行。将在约29分钟洗脱的产物级份冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(26mg，33％，HPLC纯度85％)。MS(ESI)：628.3(100，M+H-Boc)，750.3(35，M+Na)。HRMS：对于C35H54FeN8O12(M-2H-Fe)的计算值：834.3205；测得：834.3214；手性分析：95.9％D-Leu。
实施例63
2-{[2-({[N-({4-[(N-{(2R)-2-氨基-3-[4-(三氟甲基)苯基]丙酰基氨基}氨甲酰基)甲基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401481
将Boc-D-Phe(CF3)-OH(466mg，1.4mmol)、HBTU(492mg，1.3mmol)、HOBt(203mg，1.3mmol)和DIEA(435μL，2.5mmol)在DMF(6.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌30分钟。将实施例4A的产物(515mg，1.0mmol)一次性加至所述反应，接着加入DIEA(400μL，2.3mmol)从而得到pH 10的溶液。将所述溶液搅拌另外5小时并在搅拌下滴加至水(500mL)中。通过过滤收集所得到的沉淀并干燥从而得到浅黄色固体(293mg)。MS(ESI)：617.3(35，M+H-Boc)，739.2(20，M+Na)。
将上述固体(179mg，0.25mmol)溶解于50∶50DEA∶乙腈(5.0mL)中并使其在氮气、环境温度下放置30分钟。将所述溶液浓缩并将所得到的油状残余物与环己烷(3×30mL)一起研磨。通过真空过滤收集所得到的固体并干燥从而得到可流动黄色粉末。将该粉末一次性加至先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(185mg，0.30mmol)、HBTU(104mg，0.28mmol)和DIEA(175μL，1.0mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液中。将所述溶液在室温、氮气下搅拌1小时，并在减压下除去挥发性物质。将所得到的油状固体溶解于乙酸乙酯(50mL)并用1N NaOH(50mL)洗涤。将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩从而得到橙色油状物。MS(ESI)：1094.4(100，M+H)。
将上述油状物溶解于90∶8∶2TFA∶二氯甲烷∶TIS(10mL)中，在室温、氮气下搅拌6小时，并在减压下浓缩。将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的9-36％乙腈以80mL/min的流速进行。将在16.8分钟洗脱的产物级份冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(48mg，25％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：770.4(75，M+H)，385.8(100，M+2H)。HRMS：对于C33H40F3FeN7O11(M-2H+Fe)的计算值：823.2082；测得：823.2088。
实施例64
2-[(2-{[(N-{[4-({N-[((3R)(3-1，2，3，4-四氢异喹啉基))羰基氨基]氨甲酰基}甲基)苯基]甲基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401501
部分A-(3R)-3-{N-[2-(4-{[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]甲基}苯基)乙酰基氨基]氨甲酰基}-1，2，3，4-四氢异喹啉-2-甲酸叔丁酯的制备
Figure A20068003141401502
将Boc-D-Tic-OH(333mg，1.2mmol)、HBTU(417mg，1.1mmol)、HOBt(168mg，1.1mmol)和DIEA(300μL，1.7mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌30分钟。将实施例4A的产物(515mg，1.0mmol)加至所述反应，接着加入DIEA(300μL，1.7mmol)从而得到pH 10的溶液。将所述溶液搅拌另外2小时，并在搅拌下滴加至水(500mL)中。通过过滤收集所得到的沉淀并干燥从而得到灰白色固体状的标题化合物(571mg，86％，HPLC纯度95％)。MS(ESI)：561.3(70，M+H-Boc)，683.3(30，M+Na)。
部分B-2-[(2-{[(N-{[4-({N-[((3R)(3-1，2，3，4-四氢异喹啉基))羰基氨基]氨甲酰基}甲基)苯基]甲基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(330mg，0.50mmol)溶解于50∶50 DEA∶乙腈(4.0mL)中，在氮气、室温下搅拌30分钟，并浓缩。将所得到的固体与环己烷(3×30mL)一起研磨，并通过过滤收集所得到的固体且干燥从而得到黄色细粉末。将该固体加至先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(370mg，0.60mmol)、HBTU(208mg，0.55mmol)、HOBt(84mg，0.55mmol)和DIEA(350μL，2.0mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液中并将所得到的溶液在室温、氮气下搅拌1小时。在减压下除去挥发性物质，并将残余物溶解于乙酸乙酯(50mL)。将所述乙酸乙酯溶液连续用10％柠檬酸(2×50mL)、0.1N NaOH(2×50mL)及饱和NaCl(50mL)洗涤。将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩从而得到黄色油状物。MS(ESI)：1038.5(100，M+H)。
将上述油状物溶解于90∶8∶2TFA∶二氯甲烷∶TIS(10mL)中，在室温、氮气下搅拌6小时，并在减压下浓缩。将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用以下方法进行：以0.9％乙腈、流速80mL/min等浓度持续10分钟，接着以梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的0.9-27％乙腈以80mL/min的流速进行。将所述主要产物级份冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(39mg，11％，HPLC纯度90％)。1H NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ7.31-7.15(m，8H)，4.45-4.23(m，5H)，3.86(s，2H)，3.68-3.60(m，8H)，3.58(s，2H)，3.37-3.12(m，10H)；13C NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ173.37，173.07，169.09，168.53，138.04，134.52，131.07，130.72，129.96，129.38，129.06，128.62，128.32，127.72，56.47，56.22，54.85，53.07，51.79，45.22，43.82，40.83，30.15。MS(ESI)：714.3(20，M+H)，357.9(100，M+2H)。HRMS：对于C33H41FeN7O11(M-2H+Fe)的计算值：767.2208：测得：767.2203。
实施例65
2-({2-[({n-[(4-{N-[(2S)-2-氨基-3-(苯基甲硫基)丙酰基氨基]氨甲酰基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的合成
部分A-(2S)-N-{[4-(氨基甲基)苯基]羰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-(苯基甲硫基)丙酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401521
将实施例29B  的中间产物(445mg，1.148mmol)、Boc-D-Cys(Bzl)-OH(250mg，0.803mmol)和DIEA(0.30mL，1.693mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液用HBTU(365mg，0.963mmol)处理并在室温、氮气下搅拌18小时。将所述溶液用TAEA(0.4mL)处理并继续搅拌另外45分钟。在真空下除去挥发性物质并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-45％乙腈以80mL/min的流速进行。将在21.1分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(148mg，40％HPLC纯度90％)。MS(ESI)：917.5(100，2M+H)，459.3(50，M+H)，359.2(70，M+H-Boc)；HRMS对于C23H31N4O4S的计算值：481.1880；测得：481.1886。
部分B-2-({2-[({N-[(4-{N-[(2S)-2-氨基-3-(苯基甲硫基)丙酰基氨基]氨甲酰基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的制备
将2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(175mg，0.283mmol)、部分A的产物(130mg，0.283mmol)和DIEA(99μL，0.331mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液用HBTU(129mg，0.340mmol)处理并在室温、氮气下搅拌45分钟。将所述反应用乙酸乙酯(100mL)稀释，连续用1N NaOH(3×100mL)及饱和NaCl(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩。将所得到的残余物溶解于90∶10∶3TFA∶二氯甲烷∶TIS(15mL)中并将所述溶液在室温、氮气下搅拌5小时。将所述溶液在减压下浓缩并将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C 18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的1.8-28.8％乙腈以80mL/min的流速进行。将在17.7分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(140mg，67％，HPLC纯度100％)。1H NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ7.77(d，J＝7.8Hz，2H)，7.40(d，J＝7.8Hz，2H)，7.38-7.31(m，4H)，7.29-7.25(m，1H)，4.42(s，2H)，3.91(s，2H)，3.84(d，J＝13.8Hz，1H)，3.81(d，J＝13.8Hz，1H)，3.64(s，8H)，3.23-3.13(s，8H)，3.03(dd，abc系统的Hb，Jab＝Jac＝6.0Hz，Jbc＝14Hz，1H)，2.94(dd，abc系统的Hc，Jab＝Jac＝6.0Hz，Jbc＝14Hz，1H)，(丢失的次甲基在HOD峰下)；13C NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ173.07，168.90，168.58，168.42，162.50(q，J＝34.4Hz)，144.09，138.55，131.16，130.07，129.84，128.97，128.85，128.52，117.66(q，J＝291Hz)，56.26，55.97，52.99，52.25，51.59，43.70，36.80，32.82。MS(ESI)：734.3(100，M+H)，367.1(80，M+2H)；HRMS：对于C32H41FeN7O11S(M+Fe-2H)的计算值：787.1929；测得：787.1938。
实施例66
2-({2-[({N-[(4-{2-[N-((2R)-2-氨基-4-苯基丁酰基氨基)氨甲酰基]乙基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的合成
将Boc-D-Hphe-OH(334mg，1.2mmol)、HBTU(417mg，1.1mmol)、HOBt(168mg，1.1mmol)和DIEA(700μL，4.0mmol)在DMF(5mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟。将所述溶液用实施例57B的产物(529mg，1.0mmol)处理，接着用DIEA(650μL，3.7mmol)处理从而得到pH 10溶液。继续搅拌1小时并在减压下除去挥发性物质。将所得到的残余物溶解于乙酸乙酯(50mL)并连续用10％柠檬酸(2×50mL)、0.1N NaOH(2×50mL)及饱和NaCl(50mL)洗涤。将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩从而得到灰白色固体(628mg)。MS(ESI)：577.2(100，M+H-Boc)，699.2(10，M+Na)。
将上述固体溶解于50∶50DEA∶乙腈(4.0mL)中并在氮气、室温下搅拌30分钟。将所述溶液浓缩并将所得到的残余物与环己烷(3×30mL)一起研磨导致黄色固体形成。将该固体加至先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(370mg，0.60mmol)、HBTU(208mg，0.55mmol)、HOBt(84mg，0.55mmol)和DIEA(350μL，2.0mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液，并继续搅拌另外30分钟。将所述溶液在减压下浓缩并将残余物溶解于乙酸乙酯(50mL)。将所述溶液连续用10％柠檬酸(2×50mL)、0.1N NaOH(2×50mL)及饱和NaCl(50mL)洗涤。将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)并浓缩从而得到黄色油状物。MS(ESI)：1054.6(100，M+H)。
将上述油状物溶解于90∶9∶1TFA∶二氯甲烷∶TIS(5.0mL)中并在室温、氮气下搅拌8小时，并在40℃下搅拌另外2小时。在减压下除去挥发性物质并将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C 18(2)柱(41.4×250mm)上使用以下方法进行：以09％乙腈、流速80mL/min等浓度持续10分钟，接着以梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的0.9-27.9％乙腈以80mL/min的流速进行。将在29.5分钟洗脱的产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(46mg，12％，HPLC纯度100％)。1H NMR(9∶1CD3CN∶D2O)：δ7.33-7.28(m，2H)，7.26-7.16(m，7H)，4.36(s，2H)，4.18(s，2H)，3.52(s，8H)，3.34(t，J＝5.7Hz，4H)，3.09(t，J＝5.7Hz，4H)，2.90(t，J＝7.8Hz，2H)，2.77-2.66(m，2H)，2.55(t，J＝7.8Hz，2H)，2.11(q，J＝7.8Hz，2H)；13C NMR(9∶1CD3CN∶D2O)：δ174.34，173.77，169.11，166.08，161.37(q，J＝34.6Hz)，141.46，141.05，137.04，129.73，129.47，128.81，127.48，117.48(q，J＝240.0Hz)，55.97，55.48，54.42，53.06，50.48，43.83，35.98，33.78，31.46。MS(ESI)：730.3(60，M+H)；365.7(100，M+2H)。HRMS：对于C34H45FeN7O11(M-2H+Fe)的计算值：783.2521；测得：783.2517；手性分析：99.5％D-Hphe。
实施例67
2-[(2-[[(N-{[4-(2-{N-[(2S)-2-氨基-3-(苯基甲硫基)丙酰基氨基]氨甲酰基}乙基)苯基]甲基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401551
部分A-(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-N-[3-(4-{[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]甲基}苯基)丙酰基氨基]-3-(苯基甲硫基)丙酰胺的制备
Figure A20068003141401552
将Boc-D-Cys(Bzl)-OH(374mg，1.2mmol)、HBTU(417mg，1.1mmol)、HOBt(168mg，1.1mmol)和DIEA(700μL，4.0mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟。将所述溶液用实施例57B的产物(529mg，1.0mmol)和DIEA(600μL，3.4mmol)处理从而得到pH 10溶液。将所述溶液搅拌另外18小时并在减压下浓缩。将所得到的残余物溶解于乙酸乙酯(50mL)并连续用10％柠檬酸(2×50mL)、0.1N NaOH(2×50mL)及饱和NaCl(50mL)洗涤。将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)并浓缩从而得到灰白色固体(607mg)。MS(ESI)：609.2(100，M+H-Boc)，726.2(5，M+NH4)。
部分B-2-[(2-{[(N-{[4-(2-{N-[(2S)-2-氨基-3-(苯基甲硫基)丙酰基氨基]氨甲酰基}乙基)苯基]甲基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的制备
将上述固体溶解于50∶50DEA∶乙腈(4.0mL)中，在氮气、室温下搅拌30分钟并浓缩从而得到黄色油状固体。将所述固体与环己烷(3×30mL)一起研磨并通过过滤收集所得到的固体并干燥从而得到黄色细粉末。将该粉末加至先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(370mg，0.60mmol)、HBTU(208mg，0.55mmol)、HOBt(84mg，0.55mmol)和DIEA(350μL，2.0mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液，并在室温、氮气下搅拌30分钟。在真空下除去挥发性物质并将所得到的油状固体溶解于乙酸乙酯(50mL)。将所述乙酸乙酯溶液连续用10％柠檬酸(2×50mL)、0.1N NaOH(2×50mL)及饱和NaCl(50mL)洗涤。将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)并浓缩从而得到黄色油状物。MS(ESI)：1086.5(100，M+H)。
将上述油状物在90∶9∶1TFA∶二氯甲烷∶TIS(5.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌8小时，然后在40℃下搅拌2小时。将所述溶液在减压下浓缩并将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C 18(2)柱(41.4×250mm)上使用以下方法进行：以0.9％乙腈、流速80mL/min等浓度持续10分钟，接着以梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的0.9-27.9％乙腈以80mL/min的流速进行。将在29.5分钟洗脱的产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(46mg，12％，HPLC纯度100％)。1H NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ7.34-7.30(m，4H)，7.29-7.23(m，1H)，7.20-7.15(m，4H)，4.31(s，2H)，4.09(t，J＝6.9Hz，1H)，3.95(s，2H)，3.76(q，J＝11.6Hz，2H)，3.62(s，8H)，3.24(t，J＝6.0Hz，4H)，3.15(t，J＝6.0Hz，4H)，3.00-2.83(m，4H)，2.53(t，J＝7.8Hz，2H)；13C NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ174.98，174.08，168.63，168.18，163.06(q，J＝34.6Hz)，141.34，139.08，137.39，130.60，130.38，130.21，129.35，129.07，118.19(q，J＝290.9Hz)，56.66，56.40，53.99，52.74，51.83，44.34，37.35，36.39，33.28，31.89。MS(ESI)：762.2(100，M+H)，381.7(90，M+2H)。HRMS：对于C34H45FeN7O11S(M-2H+Fe)的计算值：815.2242；测得：815.2243。
实施例68
2-{[2-({[N-(5-{N-[(4-{2-[N-((2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]乙基}苯基)甲基]氨甲酰基}戊基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401571
部分A-N-({4-[2-(N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-苯基丙酰基氨基}氨甲酰基)乙基]苯基}甲基)-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺的制备
Figure A20068003141401572
将Boc-d-Phe-OH(477mg，1.80mmol)、实施例57B的产物(622mg，1.5mmol)和DIEA(0.80mL，4.60mmol)在DMF(4.0mL)中的溶液用HBTU(682mg，1.8mmol)处理并在环境温度、氮气下搅拌2小时。将所述溶液在减压下浓缩并将所得到的粘稠琥珀色油状物溶解于乙酸乙酯(400mL)并连续用水(100mL)、10％柠檬酸(100mL)、0.5NNaOH(2×100mL)、水(100mL)及饱和NaCl(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩从而得到灰白色固体(1.45g)。MS(ESI)：685.2(6，M+Na)，563.3(100，M+H-Boc)。
将上述固体溶解于1∶4哌啶∶DMF(5.0mL)并在环境温度、氮气下搅拌30分钟。将所述溶液在减压下浓缩并将所得到的残余物与环己烷(2×50mL)一起研磨并干燥从而得到褐色固体(799mg)。MS(ESI)：441.2(100，M+H)。
将上述固体(790mg)和DIEA(0.291mL，1.70mmol)溶解于DMF(5.0mL)中。在一单独的烧瓶中将实施例3A的产物(635mg，1.80mmol)和DIEA(0.873mL，5.10mmol)在DMF(4.0mL)中的溶液用HBTU(644mg，1.70mmol)处理并在环境温度、氮气下搅拌20分钟。将两份DMF溶液合并并继续搅拌另外2小时。将所述溶液浓缩至干从而得到油状褐色固体。从热乙腈中重结晶得到灰白色固体(493mg，42％，HPLC纯度85％)。1H NMR(DMSO-d6)：δ10.02((s，1H)，9.91(s，1H)，8.23(t，J＝6.0Hz，1H)，7.88(d，J＝7.8Hz，2H)，7.68(d，J＝7.2Hz，2H)，7.41(t，J＝7.5Hz，2H)，7.36-7.21(m，7H)，7.21-7.08(m，5H)，6.93(d，J＝8.4Hz，1H)，4.29(d，J＝7.2Hz，2H)，4.26-4.14(m，4H)，3.02-2.91(m，3H)，2.81(t，J＝7.8Hz，2H)，2.79-2.68(m，1H)，2.43(t，J＝7.8Hz，2H)，2.12(t，J＝7.2Hz，2H)，1.51(t，J＝7.2Hz，2H)，1.40(t，J＝7.2Hz，2H)，1.34-1.10(m，11H)。MS(ESI)：798.3(7，M+Na)，776.3(10，M+H)，676.3(100，M+H-Boc)。
部分B-2-{[2-({[N-(5-{N-[(4-{2-[N-((2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]乙基}苯基)甲基]氨甲酰基}戊基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备将部分A的产物(484mg，0.624mmol)溶解于1∶4哌啶∶DMF(15mL)中并在环境温度、氮气下搅拌45分钟。在减压下除去挥发性物质并将所得到的残余物与环己烷(3×25mL)一起研磨从而得到灰白色固体(324mg)。MS(ESI)：554.2(100，M+H)。
将上述固体(111mg，0.20mmol)和DIEA(35μL，0.20mmol)溶解于DMF(3.0mL)。在一单独的烧瓶中将2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(148mg，0.24mmol)和DIEA(70μL，0.40mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液用HBTU(83mg，0.22mmol)处理并在环境温度、氮气下搅拌10分钟。将两份DMF溶液合并并继续搅拌3小时。在减压下除去挥发性物质从而得到粘稠琥珀色油状物。将该油状物吸收在CHCl3(75mL)中，连续用0.5N NaOH(25mL)、水(25mL)及饱和NaCl(25mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩从而得到粘稠油状物。将该油状物溶解于90∶7∶3TFA∶二氯甲烷∶TIS(10mL)并在50℃、氮气下加热2小时。将所述溶液在减压下浓缩并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的4.5-31.5％乙腈以80mL/min的流速进行。将在24分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(145mg，77％，HPLC纯度99％)。1H NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ7.35-7.27(m，3H)，7.23(d，J＝7.2Hz，2H)，7.20-7.13(m.4H)，4.23(s，2H)，4.18-4.12(m，1H)，3.92(s，2H)，3.65(s，8H)，3.26(t，J＝6.0Hz，2H)，3.20-3.07(m，4H)，2.84(t，J＝7.8Hz，2H)，2.54-2.47(m，2H)，2.18(t，J＝7.5Hz，2H)，1.53quin，J＝7.8Hz，2H)，1.45quin，J＝7.5Hz，2H)，1.25quin，J＝7.5Hz，2H)；13C NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ176.47，174.54，173.68，168.78，167.15，162.29(q，J＝35.0Hz)，140.48，137.56，134.65，130.59，130.08，129.54，128.90，128.56，117.51(q，J＝290Hz)，55.96，55.70，54.22，53.50，51.09，43.45，40.26，37.64，36.66，35.88，31.34，29.11，26.84，26.11。MS(ESI)：829.5(50，M+H)，415.4(100，M+2H)；HRMS：对于C39H54FeN8O12(M+Fe-2H)的计算值：882.3205；测得：882.3199。
实施例69
2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-3-萘基丙酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401591
部分A-(2R)-N-{[4-(氨基甲基)苯基]羰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-萘基丙酰胺，2，2，2-三氟乙酸的制备
将实施例29B的中间产物(439mg，1.134mmol)、Boc-D-1-Nal-OH(250mg，0.793mmol)和DIEA(0.276mL，1.585mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液用HBTU(361mg，0.951mmol)处理并在室温、氮气下搅拌18小时。将所述溶液用TAEA(0.5mL)处理并继续搅拌另外45分钟。在真空下除去挥发性物质并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的18-45％乙腈以80mL/min的流速进行。将在22.4分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(193mg，53％，HPLC纯度90％)。MS(ESI)：925.5(95，2M+H)，463.4(100，M+H)；HRMS对于C26H31N4O4(M+H)的计算值：463.2340；测得：463.2337。
部分B-2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-3-萘基丙酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
将2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(191mg，0.309mmol)、部分A的产物(143mg，0.309mmol)和DIEA(107μL，0.608mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液用HBTU(141mg，0.547mmol)处理并在室温、氮气下搅拌45分钟。将所述反应用乙酸乙酯(80mL)稀释，连续用1N NaOH(2×80mL)及饱和NaCl(80mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩。将所得到的残余物溶解于90∶10∶3TFA∶二氯甲烷∶TIS (10mL)中并将所述溶液在室温、氮气下搅拌5小时。将所述溶液在减压下浓缩并将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C 18(2)柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的6.3-24.3％乙腈以20mL/min的流速进行。将在18.5分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(180mg，79％，HPLC纯度93％)。1H NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ8.72(d，J＝8.4Hz，1H)，8.56(d，J＝7.8Hz，1H)，8.50(d，J＝7.8Hz，1H)，8.32(d，AA′BB′系统的AA′部分，J＝8.4Hzm 2H)，8.25-8.20(m，1H)，8.19-8.15(m，1H)，8.11-8.04(m，1H)，7.99，(d，AA′BB′系统的BB′部分，J＝8.4Hz，2H)，5.02(s，2H)，4.97(t，J＝7.5Hz，1H)，4.48(s，2H)，4.33-4.21(m，10H)，3.80(s，8H)；13C NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ172.86，169.08，168.99，168.89，162.70(q，J＝34.6Hz)，144.09，134.96，132.49，131.10，130.70，130.05，129.82，129.77，128.96，128.82，127.98，127.31，126.88，124.23，117.52(q，J＝290Hz)，56.38，56.08，53.49，52.83，51.78，43.70，34.78。MS(ESI)：738.3(50，M+H)，369.8(100，M+2H)；HRMS：对于C35H41FeN7O11(M+Fe-2H)的计算值：791.2208；测得：791.2210。
实施例70
2-({2-[({N-[(4-{2-[N-((2R)-2-氨基-3-吲哚-3-基丙酰基氨基)氨甲酰基]乙基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401611
部分A-2-{[2-({[N-({4-[2-(N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-吲哚-3-基丙酰基氨基}氨甲酰基)乙基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基)乙基]{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基}乙酸叔丁酯的制备
将Boc-D-Trp-OH(120mg，0.394mmol)、实施例57B的产物(164mg，0.394mmol)和DIEA(0.137mL，0.789mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液用HBTU(179mg，0.473mmol)处理并在室温、氮气下搅拌20小时。将所述反应溶液用乙酸乙酯(100mL)稀释，连续用10％柠檬酸(3×100mL)、1N NaOH (3×100)及饱和NaCl(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并在减压下浓缩。将所得到的残余物溶解于50∶50 DEA∶乙腈(50mL)中并将所述溶液在室温、氮气下搅拌45分钟。在真空下除去挥发性物质并将所得到的残余物用环己烷(3×25mL)研磨从而得到无色固体(158mg)。MS(ESI)：480.4(100，M+H)。
将上述固体(158mg，0.329mmol)、2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(244mg，0.395mmol)和DIEA(115μL，0.659mmol)在DMF (2.0mL)中的溶液用HBTU(150mg，0.395mmol)处理并将所述溶液在室温、氮气下搅拌18小时。将所述反应用乙酸乙酯(100mL)稀释，连续用1N NaOH(3×100mL)及饱和NaCl(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并在减小的真空下浓缩。在减压下除去挥发性物质并将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC 18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的45-72％乙腈以80mL/min的流速进行。将在21.9分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(140mg，39％，HPLC纯度92％)。MS(ESI)：1079.7(100，M+H)，490.5(30，M-Boc+2H)；HRMS对于C56H87N8O13(M+H)的计算值：1079.6387；测得：1079.6372。
部分B-2-({2-[({N-[(4-{2-[N-((2R)-2-氨基-3-吲哚-3-基丙酰基氨基)氨甲酰基]乙基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(110mg，0.102mmol)在80∶10∶10TFA∶二氯甲烷∶TIS(20mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌4小时。在真空下除去所述溶剂后，将所述粗制物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18(2)柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的1.8-28.8％乙腈以20mL/min的流速进行。将在25.8分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(44mg，57％，HPLC纯度94％)。1H NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ7.57(d，J＝7.8Hz，1H)，7.42(d，J＝8.4Hz，1H)，7.22(s，1H)，7.21-7.12(m，5H)，7.07(t，J＝7.8Hz，1H)，4.31(s，2H)，次甲基信号在HOD峰下，3.85(s，2H)，3.63(s，8H)，3.35(dd，AXY系统的X部分，Jax＝7.5Hz，Jxy＝14Hz，1H)，3.26(dd，AXY系统的Y部分，Jay＝7.5Hz，Jxy＝14Hz，1H)，3.22-3.12(m，8H)，2.84(t，J＝7.5Hz，2H)，2.50(t，J＝7.5Hz，2H)；13C NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ174.56，173.00，169.27，168.36，162.59(q，J＝34.5Hz)，140.74，137.39，136.91，129.65，128.80，127.79，126.30，122.99，120.45，119.22，117.67(q，J＝291Hz)，112.86，107.13，5635，5607，5344，52.99，51.66，43.74，3582，3134，2781。MS(ESI)：755.4(70，M+H)，378.3(100，M+2H)；HRMS：对于C35H44FeN8O11(M+Fe-2H)的计算值：808.2473；测得：808.2479。
实施例71
2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-5-苯基戊酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
部分A-2-[(2-{[(N-{[4-(N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-5-苯基戊酰基氨基}氨甲酰基)苯基]甲基}氨甲酰基)甲基][2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙基){[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基]乙酸叔丁酯的制备
Figure A20068003141401632
将(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-5-苯基戊酸的DCHA盐(668mg，1.4mmol)悬浮在乙酸乙酯(50mL)中，用冰-冷的2M H2SO4(1.2当量)和冰-冷的水(20mL)处理，并振摇直到固体溶液。将水层用另外的乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将所合并的乙酸乙酯层用水(2×20m L)洗涤，干燥(MgSO4)，并在真空、温度不超过40℃下浓缩从而得到油状无色固体。将该固体、HBTU(492mg，1.3mmol)、HOBt(195mg，1.3mmol)和DIEA(1.4mL，5.9mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟并一次性用实施例57B的产物(644mg)处理。继续搅拌另外20小时并在减压下除去挥发性物质。将所得到的残余物溶解于乙酸乙酯(100mL)并连续用10％柠檬酸(2×100mL)、0.3N NaOH(2×100mL)及饱和NaCl(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩从而得到黄色油状物(240mg)。MS(ESI)：685.2(10，M+Na)563.3(100，M+H-Boc)。
将上述固体溶解于50∶50DEA∶乙腈(4.0mL)中，并在氮气、室温下搅拌45分钟且浓缩从而得到黄色油状固体。将所述油状固体与环己烷(3×30mL)一起研磨并通过过滤收集所得到的固体且干燥从而得到黄色细粉末(160mg)。将上述固体(125mg，0.284mmol)、2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(175mg，0.284mmol)和DIEA(99μL，0.567mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液用HBTU(129mg，0.340mmol)处理，并在室温、氮气下搅拌18小时。将所述反应溶液用乙酸乙酯(100mL)稀释，连续用1N NaOH(3×100mL)及饱和NaCl(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并在减小的真空下浓缩。将所述溶液浓缩并将所述粗制物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC 18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的49.5-76.5％乙腈以80mL/min的流速进行。将在23.0分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(67mg，23％HPLC纯度90％)。MS(ESI)：1040.4(100，M+H)。
部分B-2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-5-苯基戊酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(67mg，0.064mmol)溶解于80∶10∶10TFA∶二氯甲烷∶TIS(20m L)中并在室温、氮气下搅拌4小时。在真空下除去挥发性物质并将所述粗制物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18(2)柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的1.8-28.8％乙腈以20mL/min的流速进行。将在23.3分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(26mg，56％，HPLC纯度97％)。1H NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ8.26(d，AA′BB′系统的AA′部分，J＝8.4Hz，2H)，7.91(d，AA′BB′系统的BB′部分，J＝8.4Hz，2H)，7.79(t，J＝7.2Hz，2H)，7.73(d，J＝6.6Hz，2H)，7.69(t，J＝6.6Hz，1H)，4.92(s，2H)，4.51(t，J＝6.6Hz，1H)，4.40(s，2H)，4.16(s，8H)，3.70(s，8H)，3.19-3.11(m，2H)，2.39(q，J＝6.6Hz，2H)；13C NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ172.97，169.86，168.97，168.75，162.57(q，J＝34.0Hz)，144.05，142.67，131.24，129.56，129.50，128.94，128.86，127.10，117.67(q，J＝291Hz)，56.34，56.04，53.07，52.92，51.71，43.72，35.62，31.48，26.94。MS(ESI)：716.4(65，M+H)，358.8(100，M+2H)；HRMS：对于C33H43FeN7O11(M+Fe-2H)的计算值：769.2364；测得：769.2368。
实施例72
[H-D-Cys(Bzl)-Apph]2EDTA[氨基丙氧基乙氧基乙氧基丙基胺-DTPA]2，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401651
部分A-2-{{[N-({4-[2-(N-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-(苯基甲硫基)丙酰基氨基}氨甲酰基)乙基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}[2-({[N-({4-[2-(N-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-(苯基甲硫基)丙酰基氨基}氨甲酰基)乙基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}(羧基甲基)氨基)乙基]氨基}乙酸的制备
Figure A20068003141401661
将实施例67A的产物(160mg，0.263mmol)溶解于1∶4哌啶∶DMF(25mL)并在环境温度、氮气下搅拌30分钟。在真空下除去挥发性物质并将所述油状残余物与乙醚(2×25mL)一起研磨从而得到稍微油状的黄色固体(151mg)。将该固体和DIEA(46μL，0.263mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液用EDTA二酐(35mg，0.136mmol)处理并在环境温度、氮气下搅拌4小时。将所述溶液浓缩并将所得到的残余物与乙醚(2×2.0mL)一起研磨从而得到灰白色固体(129mg)。将该固体从60∶40乙腈∶H2O(6.0mL)中重结晶从而得到无色固体状标题化合物(64mg，39.6％，HPLC纯度94％)。MS(ESI)：1229.4(100，M+H)，515.3(38，M+2H)。
部分B-2-{[2-({[N-(3-{2-[2-(3-氨基丙氧基)乙氧基]乙氧基}丙基)氨甲酰基]甲基}[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基)乙基]{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基}乙酸叔丁酯的制备
Figure A20068003141401662
将2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(494mg，0.800mmol)和DIEA(0.42mL，2.40mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液在环境温度、氮气下搅拌15分钟，并用N-(3-{2-[2-(3-氨基丙氧基)乙氧基]乙氧基}丙基)(苯基甲氧基)甲酰胺(283mg，0.800mmol)在DMF(4.0mL)中的溶液处理。将所得到的溶液搅拌8小时并在减压下浓缩为粘稠琥珀色油状物。将该油状物吸收在CHCl3(75mL)中并连续用10％柠檬酸(35mL)、0.5N NaOH(25mL)和水(25mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩从而得到粘稠琥珀色油状物(776mg)。MS(ESI)：954.5(100，M+H)。
将上述油状物溶解于绝对乙醇(75mL)中并在帕尔(Parr)装置上、在60psi的压力下以10％Pd/C(200mg)氢化。6小时后，将反应混合物经Celite
Figure A20068003141401671
过滤，并将滤液浓缩从而得到琥珀色油状的标题化合物(680mg)。MS(ESI)：820.5(100，M+H)；HRMS：对于C40H78N5O12(M+H)的计算值：820.5642；测得：820.5636。
部分C-[H-D-Cys(Bzl)-Apph]2EDTA[氨基丙氧基乙氧基乙氧基丙基胺-DTPA]2，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(63mg，0.0513mmol)、部分B的产物(131mg，0.160mmol)和DIEA(66μL，0.372mmol)在DMF(12mL)中的溶液用HBTU(57mg，0.150mmol)处理并在环境温度、氮气下搅拌6h。将所述溶液在减压下浓缩并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的54-81％乙腈以20mL/min的流速进行。将从19到26分钟洗脱为宽峰的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体(47mg)。
将上述固体溶解于95∶3∶2TFA∶二氯甲烷∶TIS(4.0mL)中并在50℃、氮气下加热1小时。将所述溶液在减压下浓缩并将所得到的粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.6％/min的含有0.1％TFA的9-27％乙腈以20mL/min的流速进行。将在22.8分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(24mg，19％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：1092.9(35，M+2H)，729.0(100，M+3H)，546.8(10，M+4H)；HRMS对于C98H147Fe2N20O32S2(M+2Fe-3H)的计算值：763.9538；测得：763.9545。
实施例73
2-{[2-({[N-({4-[N-((4E)(2R)-2-氨基-5-苯基戊-4-烯酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401681
在分液漏斗中将Boc-D-Stya-OH的DCHA盐(406mg，0.859mmol)悬浮在乙酸乙酯(20mL)中，用冰-冷2M H2SO4(1.0mL)和冰-冷水(10mL)处理，并振摇直到固体溶解。将水层用另外的乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将所合并的乙酸乙酯层用水(2×20mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并在真空、不超过40℃的温度下浓缩从而得到油状无色固体(233mg)。将上述固体、实施例29B的中间产物(443mg，1.14mmol)和DIEA(0.279mL，1.60mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液用HBTU(364mg，0.960mmol)处理并在室温、氮气下搅拌1小时。将所述反应溶液用乙酸乙酯(75mL)稀释，连续用10％柠檬酸(3×50mL)、1N NaOH(3×50mL)及饱和NaCl(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩。将所得到的残余物溶解于50∶50DEA∶乙腈(50mL)中并在室温、氮气下搅拌45分钟。在真空下除去挥发性物质并将所得到的残余物与环己烷(3×50mL)一起研磨从而得到无色固体(251mg)。MS(ESI)：877.5(100，2M+H)，439.4(90，M+H)。
将上述固体(200mg，0.456mmol)、2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(338mg，0.547mmol)和DIEA(159μL，0.912mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液用HBTU(208mg，0.547mmol)处理并在室温、氮气下搅拌1小时。将反应混合物用乙酸乙酯(40mL)稀释，连续用10％柠檬酸(3×50mL)、0.5N NaOH(3×40mL)及饱和NaCl(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并在减小的真空下浓缩。将所得到的残余物溶解于90∶10∶3TFA∶二氯甲烷∶TIS(5mL)并在室温、氮气下搅拌5小时。在减压下除去挥发性物质并将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的1.8-28.8％乙腈以80mL/min的流速进行。将在21.1分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状的标题化合物(86mg，26％，HPLC纯度96％)。1H NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ7.76(d，AA′BB′系统的AA′部分，J＝8.4Hz，2H)，7.42(d，AA′BB′系统的AA′部分，J＝7.8Hz，2H)，7.40(d，AA′BB′系统BB′的部分，J＝8.4Hz，2H)，7.35-7.27(m，2H)，7.25(t，J＝7.2Hz，1H)，6.63(d，J＝15.6Hz，1H)，6.20(重叠的d和t，AMX系统的M部分，Jam＝15.6Hz，Jmx＝7.8Hz，1H)，4.41(s，2H)，丢失的次甲基在HOD峰下，3.80(s，2H)，3.67(s，8H)，3.24-3.10(m，8H)，2.85-2.76(m，2H)；13C NMR(1∶1CD3CN∶D2O)：δ172.50，169.39，169.28，169.03，162.65(q，J＝35.0Hz)，144.13，137.62，136.66，131.25，129.80，129.04，128.60，128.88，127.54，122.33，117.75(q，J＝291Hz)，56.57，56.26，5283，52.53，52.05，43.68，35.35。MS (ESI)：714.3(90，M+H)，357.8(100，M+2H)；HRMS：对于C33H41FeN7O11(M+Fe-2H)的计算值：767.2208；测得：767.2206。
实施例74
N-((2R)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-(4-氨基丁基)-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-6-(乙酰基氨基)己酰胺，三氟乙酸盐的合成
部分A-Ac-PL-NLys(Boc)-LL-OH的制备
使用实施例14，部分B和C的方法来制备标题化合物。Fmoc-Leu-HMPB BHA树脂(0.260g，取代水平＝0.54mmol/g)得到无色固体状的标题化合物(63.6mg，63％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：725.4(70，M+H)，625.3(100，M+H-Boc)；HRMS：对于C36H65N6O9(M+H)的计算值：725.4808；测得：725.4809。
部分B-N-[(2S)-2-((2S)-2-{(2S)-2-[2-((2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-{4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁基}-4-甲基戊酰基氨基)乙酰基-氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的制备
将实施例34D的产物(10.0mg，13.8μmol)在含有HOBt(2.1mg，13.7μmol)、i-Pr2NEt(15.4μL，88.4μmol)和HBTU(5.1mg，13.4μmol)的DMF(1.00mL)中的溶液转移至部分36A的产物(11.0mg，18.4μmol)和i-Pr2NEt(15.4μL，88.4μmol)在DMF(1.00mL)中的溶液中。在22℃下1小时后，将所述溶液在真空下浓缩并用哌啶在DMF中的溶液(1∶4v/v，2.00mL)处理且搅拌0.5小时。在真空下除去所有挥发性物质并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.5％/min的含有0.1％TFA的30-60％乙腈以20mL/min的流速进行。将在21分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(8.8mg，8.2μmol，59％)。
实施例75
N-[(N-{1-[N-(1-{N-[(1R)-1-(N-{(1S)-1-[N-(2-{4-[(乙酰基氨基)甲基]苯基}乙酰基氨基)氨甲酰基]-3-甲基丁基}氨甲酰基)-3-甲基丁基]氨甲酰基}(1S)-3-甲基丁基)氨甲酰基](1S)-3-苯基丙基}氨甲酰基)甲基](2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-(4-氨基丁基)-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401701
部分A-Fmoc-PL-NLys(Boc)～Hphe-L-HMPB-BHA树脂的制备
将Fmoc-Leu-HMPB BHA树脂(4.37g，取代水平＝0.51mmol/g)放置于200ml Advanced ChemTech反应容器中。通过用DMF(2×50mL)洗涤将所述树脂溶胀，并进行以下步骤：(步骤1)通过暴露于哌啶在DMF中的溶液(1∶4v/v，50mL)持续0.5小时而除去Fmoc基团。(步骤2)将所述树脂用DMF、CH2Cl2、甲醇、CH2Cl2和DMF(每种3×50mL)洗涤。(步骤3)将Fmoc-Hphe-OH(2.68g，6.69mmol)、HOBt(1.02g，6.69mmol)、HBTU(2.54g，6.69mmol)和i-Pr2NEt(3.88mL，22.3mmol)在DMF (50.0mL)中的溶液加至所述树脂并将所述反应容器振摇4小时。(步骤4)将所述树脂用DMF、CH2Cl2、甲醇、CH2Cl2和DMF(每种3×50mL)洗涤。(步骤5)当通过富烯-哌啶试验评估时发现所述偶联反应超过95％完成。分别用Fmoc-NLys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH和Fmoc-Pro-OH重复步骤1-5，从而完成序列PL-NLys(Boc)～Hphe-Leu。
部分B-Ac-PL-NLys(Boc)～Hphe-L-OH的制备
将部分A中制得的肽-树脂用哌啶在DMF中的溶液(1∶4v/v，20mL)处理0.5小时，然后用DMF、CH2Cl2、甲醇、CH2Cl2和DMF(每种3×20mL)洗涤。将所述树脂用Ac2O(632μL，6.69mmol)和i-Pr2NEt1.55mL，8.91mmol)在DMF(20mL)中的溶液处理，振摇2小时，然后用DMF、CH2Cl2、甲醇和CH2Cl2(每种3×20mL)洗涤。将所述树脂转移至60mL中等孔隙率的烧结玻璃漏斗中，用CH2Cl2(20mL)洗涤，然后用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶99v/v，9×20mL)处理。通过施加压力将所述混悬液直接过滤入吡啶在甲醇中的溶液(1∶9v/v，10.0mL)中。将滤液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(41.2×250mm)上使用梯度为1.2％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的40-70％乙腈以80mL/min的流速进行。将在16分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(553mg，0.715mmol；32.1％)。MS(ESI)：795.6(11.1，M+Na)，773.6(41.6，M+H)，673.5(100，M-Boc)。HRMS：对于C40H65N6O9的计算值：773.4808；测得：773.4815。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；99.5％L-亮氨酸。
部分C-N-({N-[1-(N-{1-[N-(1-{N-[(1R)-1-(N-{2-[4-(氨基甲基)苯基]乙酰基氨基}氨甲酰基)-3-甲基丁基]氨甲酰基}(1S)-3-甲基丁基)氨甲酰基](1S)-3-甲基丁基}氨甲酰基)(1S)-3-苯基丙基]氨甲酰基}-甲基)(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-{4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁基}-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401721
将Boc-Leu-DLeu-OH(53.4mg，0.155mmol)(Abdel-Magid，A.F.；Eggmann，U.；Maryanoff，C.A.；Thaler，A；Villani，F J.Process forthe Preparation of KL-4Pulmonary Polypeptide Surfactant.U.S.专利申请2,147,302，2002)用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1v/v，2.00mL)处理，搅拌0.5小时，然后在真空下浓缩。将残余物再溶解于DMF(2.00mL)，然后用i-Pr2NEt(54.0μL，0.310mmol)处理并转移至先前制得的部分B的产物(120mg，0.155mmol)在含有HOBt(23.8mg，0.155mmol)、HBTU(58.8mg，0.155mmol)和i-Pr2NEt(108μL，0.620mmol)的DMF(5.00mL)中的溶液中。在22℃下2小时后，将所述溶液浓缩并将所述粗制油状物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C 18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.2％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的40-75％乙腈以20mL/min的流速进行。将在24分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(50.0mg，50.0μmol；32.3％)；还分离后来洗脱的非对映异构体，合并得到94.0mg(94.1μL，60.7％)。通过手性GLC分析确定所需物质的光学纯度；76.8％L-亮氨酸。
将七肽(septapeptide)(22.0mg，22.0μmol)和HOAt(2.75mg，20.0μmol)在干燥DMF(2.00mL)中的溶液依次用可力丁(16.9μL，128μmol)和DIC(3.1μL，20.0μmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入部分4A的产物(9.4mg，18μmol)；使用另外的DMF(2×0.50mL)来冲洗所述反应容器的侧面。在22℃下22小时后，加入第二份DIC(3.1μL，20.0μmol)和部分4A(9.4mg，18μmol)并继续搅拌另外22小时。当所述肽完全耗尽时，然后在真空下除去所有挥发性物质并将所得到的油状物用哌啶在DMF中的溶液(1∶4v/v，2.00mL)处理。将所述溶液搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为2.0％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的20-60％乙腈以20mL/min的流速进行。将在22分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(7.0mg，5.5μmol；24.9％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ(3∶2旋转异构体的混合物)10.08(1H，s)，9.95(0.6H，s)，9.94(0.4H，s)，8.34-8.29(1H，m)，8.18(0.6H，d，J＝8.0Hz)，8.08(3H，br s)，8.26-7.98(1.6H，m)，7.95(0.6H，d，J＝9.5Hz)，7.91-7.87(2H，m)，7.84(0.4H，d，J＝7.8Hz)，7.37(2H，AB，JAB＝8.0Hz)，7.33(2H，AB，JAB＝8.1Hz)，7.26(2H，dd，J＝7.6，7.5Hz)，7.19-7.15(3H，m)，6.78(0.6H，br s)，6.72(0.4H，br s)，6.49(1H，br s)，4.78(0.6H，br s)，4.69(0.6H，br s)4.58(0.6H，br s)，4.53(0.6H，br s)，4.46-4.42(1.4H，m)，4.37-4.27(5.6H，m)，4.13(1H，d，J＝15.2Hz)，4.02-3.99(2.6H，m)，3.90(0.4H，d，J＝17.2Hz)，3.86(0.6H，d，J＝17.2Hz)，3.75(0.4H，d，J＝16.1Hz)，3.71(0.6H，d，J＝15.9Hz)，3.52-3.36(4H，m)，3.47(2H，s)，2.92(1H，br s)，2.87(1H，dd，J＝6.5，6.2Hz)，2.58-2.53(2H，m)，2.24-2.11(1H，m)，1.98-1.73(11H，m)，1.57(7H，br s)，1.48-1.36(11H，m)，1.36(9H，s)，1.30-1.24(1H，m)，0.89-0.71(24H，m)。MS(ESI)：1160.8(100，M+H)，531.0(59.4)。HRMS：对于C61H98N11O11的计算值：1160.7442；测得：1160.7458。通过手性GLC分析确定所需物质的光学纯度；77.1％L-亮氨酸。
实施例76
N-{[N-(1-{N-[1-(N-{(1R)-1-[N-((1S)-1-{N-[(1-乙酰基(4-哌啶基))羰基氨基]氨甲酰基}-3-甲基丁基)氨甲酰基]-3-甲基丁基}氨甲酰基)(1S)-3-甲基丁基]氨甲酰基}(1S)-3-苯基丙基)氨甲酰基]甲基}(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-(4-氨基丁基)-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401731
将来自实施例75C的七肽(22.0mg，22.0μmol)和HOAt(2.75mg，20.0μmol)在干燥DMF(2.00mL)中的溶液依次用可力丁(16.9μL，128μmol)和DIC(3.1μL，20.0μmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1v/v)将部分30A的产物脱保护并将所得到的盐(8.8mg，18.4μmol)一次性加至预先活化的溶液中；使用另外的DMF(2×0.50mL)冲洗所述反应容器的侧面。在22℃下2.5小时后，加入第二份DIC(3.1μL，20.0μmol)和酰肼(8.8mg，18.4μmol)并继续搅拌另外24h；在26小时时间点时进行第三次加入。另外18小时后，然后在真空下除去所有挥发性物质并将所得到的油状物用哌啶在DMF中的溶液(1∶4v/v，2.00mL)处理。将所述溶液搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为2.0％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的20-60％乙腈以20mL/min的流速进行。将在22分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(15.5mg，12.5μmol；56.8％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：
Figure A20068003141401741
(2∶1旋转异构体的混合物)9.90(0.6H，s)，9.88(1.4H，s)，8.50(1H，br s)，8.34-8.29(1H，m)，8.25-8.17(1.5H，m)，8.03(1.2H，m)，7.96(0.6H，dd，J＝8.5，8.2Hz)，7.92-7.83(2H，m)，7.26(2H，dd，J＝7.6，7.4Hz)，7.18-7.15(3H，m)，6.78(0.5H，br s)，6.72(0.5H，br s)，6.49(0.5H，br s)，4.77(0.4H，br s)，4.68(0.4H，br s)，4.59(0.4H，br s)，4.52(0.4H，br s)，4.47-4.41(1H，m)，4.37-4.27(4.6H，m)，4.13(0.7H，d，J＝16.0Hz)，3.90(0.4H，d，J＝17.3Hz)，3.86(0.4H，d，J＝17.4Hz)，3.75(0.4H，d，J＝15.8Hz)，3.70(0.4H，d，J＝15.9Hz)，3.51-3.28(20H，m)，2.94-2.86(4H，m)，2.59-2.53(1.7H，m)，2.20-2.10(0.7H，m)，1.97-1.70(12.6H，m)，1.61-1.53(5.7H，m)，1.50-1.36(9H，s)，1.36(9H，s)，1.30-1.24(1.4H，m)，0.89-0.71(24H，m)。MS(ESI)：1124.8(100，M+H)，513.0(70.6)。HRMS：对于C58H98N11O11的计算值：1124.7442；测得：1124.7440。通过手性GLC分析确定所需物质的光学纯度；74.3％L-亮氨酸。
实施例77
N-[(2R)-3-(4-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-(4-氨基丁基)-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}苯基)-2-氨基丙酰基氨基]-6-(乙酰基氨基)己酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401751
部分A-(2R)-3-[4-((2S)-2-{(2S)-2-[2-((2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-{4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁基}-4-甲基戊酰基氨基)乙酰基氨基]-4-苯基丁酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)苯基]-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙酸的制备
Figure A20068003141401752
将实施例75B的产物(76.3mg，98.7μmol)、HOBt(15.9mg，0.104mmol)、i-Pr2NEt(69.0μL，0.396mmol)和HBTU(39.4mg，0.104mmol)在DMF(3.00mL)中的溶液用Boc-DPhe(4-NH2)-OH·TFA(35.0mg，88.8μmol)和i-Pr2NEt(17.0μL，97.6μmol)在DMF(1.00mL)中的溶液处理。在22℃下搅拌6小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.83％/min的含有0.1％HCO2H和10％H2O的45-70％乙腈以20mL/min的流速进行。将在25分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(4.0mg，3.9μmol；3.9％)；还分离后来洗脱的非对映异构体，合并得到8.0mg(7.7μL，7.8％)。MS(ESI)：1057.7(26.9，M+Na)，1035.6(33.7，M+H)，935.7(100，M-Boc)。将经纯化的物质直接用于后续步骤。
部分B-N-{(2R)-3-[4-((2S)-2-{(2S)-2-[2-((2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-{4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁基}-4-甲基戊酰基氨基)-乙酰基氨基]-4-苯基丁酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)苯基]-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙酰基氨基}-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(11.0mg，10.6μmol)和HOAt(1.3mg，9.5μmol)在DMF(1.00mL)中的溶液依次用可力丁(8.2μL，6.2μmol)和DIC(1.5μL，9.7μmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入实施例3A的产物(4.3mg，8.9μmol)；使用另外的DMF(2×0.50mL)来冲洗所述反应容器的侧面。在22℃下6小时后，加入另外的DIC(1.4μL，8.9μmol)和酰肼(4.3mg，8.9μmol)。在22℃下另外16小时后，然后在真空下除去所有挥发性物质，并将所得到的油状物用哌啶在DMF中的溶液(1∶4v/v，2.50mL)处理。将所述溶液保持0.5小时，然后在真空下浓缩并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为2.0％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的20-60％乙腈以20mL/min的流速进行。将在22分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(7.0mg，5.5μmol；51.6％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ(1∶1旋转异构体的混合物)9.93(1H，s)，9.81(1H，s)，8.33(0.4H，dd，J＝8.3，8.1Hz)，8.28(0.4H，dd，J＝8.0，5.1Hz)，8.18(0.4H，d，J＝7.5Hz)，8.03-7.96(1.5H，m)，7.61(3H，br s)，7.49(2H，br d，J＝7.9Hz)，7.27-7.24(2H，m)，7.20(2H，br d，J＝8.0Hz)，7.18-7.15(3H，m)，6.84(0.6H，d，J＝8.6Hz)，6.77(0.4H，br s)，6.71(0.4H，br s)，6.48(1.4H，s)，4.79-4.75(0.2H，m)，4.71-4.67(0.3H，m)，4.62-4.58(0.2H，br s)，4.56-4.52(0.3H，br s)，4.47-4.42(2H，m)，4.34(0.5H，dt，J＝8.4，2.9Hz)，4.21-4.17(0.3H，m)，4.15(0.3H，d，J＝16.0Hz)，4.10(0.4H，d，J＝15.8Hz)，3.92(0.2H，d，J＝17.7Hz)，3.88(0.3H，d，J＝17.6Hz)，3.77(0.5H，d，J＝15.5Hz)，3.51-3.33(3H，m)，3.09-2.98(0.6H，m)，2.93-2.86(3H，m)，2.80-2.75(2H，m)，2.70(1H，dd，J＝12.4，11.9Hz)，2.59-2.55(2H，m)，2.14(2H，t，J＝7.3Hz)，1.98-1.89(3.6H，m)，1.87-1.70(5.6H，m)，1.67-1.46(10.6H，m)，1.41-1.25(15H，m)，1.28(9H，s)，0.93-0.85(9H，m)，0.83(0.7H，d，J＝6.2Hz)，0.82(0.7H，d，J＝6.6Hz)，0.77(0.7H，d，J＝6.2Hz)，0.76(0.7H，d，J＝6.5Hz)。MS(ESI)：1162.8(100，M+H)，532.0(52.2)。HRMS：对于C60H96N11O12的计算值：1162.7234；测得：1162.7245。
实施例78
N-[(2R)-2-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-(4-氨基丁基)-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]-6-(乙酰基氨基)己酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401771
部分A-N-[2-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)(2S)-4-甲基戊酰基氨基]-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401772
将实施例36B的产物(103mg，0.146mmol)溶解于干燥DMF(1.00mL)中并转移至先前制得的Boc-Leu-OH(40.4mg，0.175mmol)、HOBt(24.7mg，0.161mmol)、i-Pr2NEt(178μL，1.02mmol)和HBTU(60.8mg，0.160mmol)在DMF(3.00mL)中的溶液中，然后在22℃下搅拌2小时。将所得到的溶液在真空下浓缩并将残余物在22℃下用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1v/v，2.00mL)处理。搅拌0.5小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的15-45％乙腈以20mL/min的流速进行。将在33分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(23.0mg，28.0μmol；19.2％)。MS(ESI)：707.6(100，M+H)。
部分B-N-{(2R)-2-[(2S)-2-((2S)-2-{(2S)-2-[2-((2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-{4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁基}-4-甲基戊酰基氨基)乙酰基-氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐
将实施例14C的产物(20.8mg，34.0μmol)在含有HOBt(4.8mg，31μmol)、i-Pr2NEt(34.5μL，0.198mmol)和HBTU(11.8mg，31.1μmol)的DMF(2.00mL)中的溶液用A的产物(20.0mg，24.4μmol)处理，然后在22℃下搅拌2小时。将所得到的溶液在真空下浓缩并将残余物在22℃下用先前制得的哌啶在DMF中的溶液(1∶4v/v，2.00mL)处理。搅拌0.5小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的22-52％乙腈以20mL/min的流速进行。将在25分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(16.8mg，14.1μmol；57.8％)。MS(ESI)：1264.7(36.3，M+H)，1078.8(100，M+H)，490.0(45.3)。
实施例79
N-[4-((2R)-2-{N-[6-(乙酰基氨基)己酰基氨基]氨甲酰基}-2-氨基乙基)苯基](2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-6-(脒基氨基)己酰胺，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401781
部分A-(2R)-3-(4-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-6-[(亚氨基乙基)氨基]己酰基氨基}苯基)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙酸的制备
Figure A20068003141401782
将实施例34D的产物(1.00×102mg，0.110mmol)、HOBt(15.5mg，0.101mmol)、i-Pr2NEt(128.0μL，0.734mmol)和HBTU(38.3mg，0.101mmol)在DMF(5.00mL)中的溶液用Boc-DPhe(4-NH2)-OH·TFA(36.2mg，91.8μmol)处理，接着用i-Pr2NEt(48.0μL，0.275mmol)处理。在22℃下搅拌24小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(41.2×250mm)上使用梯度为1.2％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的40-75％乙腈以80mL/min的流速进行。将在24分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(17.0mg，14.5μmol；15.8％)。MS(ESI)：1195.7(12.1，M+Na)，1173.6(100，M+H)，537.5(45.2)。将经纯化的物质直接用于后续步骤。部分B-N-(4-{(2R)-2-氨基-2-[N-(6-氨基己酰基氨基)氨甲酰基]-乙基}苯基)(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-6-[(亚氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基色满-6-基)磺酰基]氨基}甲基)氨基]己酰胺，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(17.0mg，14.5μmol)和HOAt(1.8mg，13.1μmol)在DMF(2.00mL)中的溶液依次用可力丁(12.0μL，90.8μmol)和DIC(2.2μL，14.2μmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入实施例3A的产物(6.1mg，12.7μmol)；使用另外的DMF(2×0.50mL)来冲洗所述反应容器的侧面。在22℃下6小时后，加入另外的DIC(2.2μL，14.2μmol)和HOAt(1.8mg，13.1μmol)。在22℃下另外16小时后，在真空下除去所有挥发性物质，并将所得到的油状物用哌啶在DMF中的溶液(1∶4v/v，2.00mL)处理。将所述溶液保持0.5小时，然后在真空下浓缩并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.3％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的10-50％乙腈以20mL/min的流速进行。将在27分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(4.0mg，2.8μmol；22.3％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ9.95(1H，s)，9.84(1H，m)，8.25-8.20(1H，m)，8.08-8.01(2H，m)，7.92(1H，dd，J＝13.9，7.7Hz)，7.62(3H，br s)，7.52-7.48(2H，m)，7.27-7.20(4H，m)，7.17-7.15(3H，m)，6.88(1H，t，J＝8.9Hz)，6.68(1H，br s)，6.36(2H，br s)，4.39-4.30(3H，m)，4.24(1H，dd，J＝8.3，3.0Hz)，4.20-4.15(2H，m)，3.49-3.28(3H，m)，3.10-3.01(2H，m)，2.95-2.91(1H，m)，2.80-2.68(3H，m)，2.62-2.52(4H，m)，2.46-2.44(6H，m)，2.13(2H，dd，J＝6.9，6.7Hz)，2.01-1.94(6H，m)，1.85-1.70(7H，m)，1.63-1.38(9H，m)，1.34-1.28(9H，m)，1.25(3H，s)，1.24(3H，s)，0.86-0.80(6H，m)。MS(ESI)：1300.7(25.1，M+H)，651.0(100，M+2H)。HRMS：对于C65H98N13O13S的计算值：1300.7122；测得：1300.7099。
实施例80
N-((2R)-2-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的合成
将实施例36B的产物(25.0mg，.42.1μmol)在DMF(2.00mL)中的溶液用i-Pr2NEt(50.0μL，0.287mmol)处理，接着用Boc2O(11.7mg，53.6μL)处理。在22℃下1小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将残余物用先前制得的哌啶在DMF中的溶液(1∶4v/v，2.00mL)处理。将所述溶液保持0.5小时，然后在真空下浓缩并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的15-45％乙腈以20mL/min的流速进行。将在24分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(4.0mg，6.8μmol；16.2％)。MS(ESI)：472.4(100，M+H)。
实施例81
2-{[2-({[N-(5-{N-[(氨基环戊基)羰基氨基]氨甲酰基}戊基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401802
将实施例24B的产物(194mg，0.412mmol)一次性加至先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(312mg，0.505mmol)在含有HBTU(172mg，0.453mmol)、HOBt(69.0mg，0.450mmol)和i-Pr2NEt(287μL，1.65mmol)的DMF(10.0mL)中的溶液中。将所得到的溶液在22℃下保持0.6小时，然后在真空下浓缩并将残余物用Et3SiH在CH2Cl2中的溶液(9∶1v/v，400μL)处理，接着用TFA(3.60mL，46.7mmol)处理。在22℃下搅拌3小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的0-20％乙腈以20mL/min的流速进行。将在2.5分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(116mg，0.107mmol；26.0％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ9.94(1H，br  s)，9.82(1H，s)，8.43(1H，br t，J＝4.5Hz)，8.37(2H，br s)，8.21(2H，br s)，4.12(2H，br s)，3.50(8H，s)，3.34(5H，br s)，3.11(2H，td，J＝6.9，6.2Hz)，3.03(4H，br t，J＝5.5Hz)，2.23-2.18(2H，m)，2.15(2H，t，J＝7.3Hz)，1.91-1.80(6H，m)，1.54(2H，tt，J＝7.5，7.5Hz)，1.44(2H，tt，J＝7.3，7.3Hz)，1.34-1.28(2H，m)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：δ172.7，171.4，171.4，157.7(q，J＝30.9Hz)，117.2(q，J＝300Hz)，65.2，54.3，52.2，48.7，40.1，38.7，36.2，33.0，28.5，24.6，24.2。MS(ESI)：632.4(50.9，M+H)，316.9(100，M+2H)。HRMS：对于C26H43FeN7O11的计算值：685.2365；测得：685.2354。
实施例82
2-{[2-({[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401811
将新鲜制得的Boc-D-Leu-NHNH2(200mg，0.557mmol)一次性加至先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}-氨基)乙基]氨基}乙酸(416mg，0.673mmol)在含有HBTU(233mg，0.614mmol)、HOBt(94.0mg，0.614mmol)和i-Pr2NEt(388μL，2.23mmol)的DMF(10.0mL)中的溶液中。将所得到的溶液在22℃下保持0.6小时，然后在真空下浓缩并将残余物用Et3SiH在CH2Cl2中的溶液(9∶1v/v，400μL)处理，接着用TFA(3.60mL，46.7mmol)处理。在22℃下搅拌3小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的0-20％乙腈以20mL/min的流速进行。将在4.0分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(104mg，0.106mmol；19.1％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.82(2H，br s)，8.29(3H，br s)，4.28(2H，ABq，JAB＝15.7Hz)，3.84(1H，br s)，3.53(8H，s)，3.37(4H，br t，J＝5.4Hz)，3.08(4H，br t，J＝5.9Hz)，1.77-1.71(1H，m)，1.60(2H，ABqdd，JAB＝14.1Hz，Jdd＝7.3，7.0Hz)，0.93(3H，d，J＝6.5Hz)，0.91(3H，d，J＝6.5Hz)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：δ172.6，167.6，163.7，157.8(q，J＝31.7Hz)，116.9(q，J＝299Hz)，54.3，52.2，52.1，49.6，48.7，40.3，23.4，22.4，21.9。MS(ESI)：521.3(100，M+H)，261.4(79.4，M+2H)。HRMS：对于C20H34FeN6O10的计算值：574.1680；测得：574.1678。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；99.3％D-亮氨酸。
实施例83
N-[(2R)-3-(4-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}苯基)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙酰基氨基]-6-氨基己酰胺，甲酸盐的合成
Figure A20068003141401821
部分A-(2R)-3-(4-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}苯基)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙酸的制备
Figure A20068003141401822
将Boc-LLeu-OH(651mg，2.61mmol)和HOBt(352mg，2.30mmol)在干燥DMF(10.0mL)中的溶液依次用HBTU(872mg，2.30mmol)和i-Pr2NEt (1.46mL，15.2mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。然后经历5分钟滴加Boc-DPhe(4-NH2)-OH(587mg，2.09mmol)在干燥DMF(8.00mL)中的溶液；使用另外的DMF(2×1.00mL)来定量所述转移。在22℃下1.5小时后，将所述溶液在真空下浓缩并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(41.2×250mm)上使用梯度为1.8％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的50-95％乙腈以80mL/min的流速进行。将在12分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(302mg，0.612mmol；29.2％)。MS(ESI)：1009.6(20.9，2M+H)，887.5(100)，516.4(31.9，M+Na)。HRMS：对于C25H39N3O7Na的计算值：516.2680；测得：516.2679。
部分B-N-[(2R)-3-(4-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}苯基)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙酰基氨基]-6-氨基己酰胺，甲酸盐的制备
将部分A的产物(77.0mg，0.156mmol)和HOAt(17.8mg，0.130mmol)在干燥DMF(3.00mL)中的溶液依次用可力丁(126μL，0.955mmol)和DIC(2.0×101μL，0.13mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入实施例3A的产物(50.1mg，0.104mmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌5小时；使用另外的DMF(2×1.00mL)来洗涤所述反应容器的侧面。然后在真空下除去所有挥发性物质并将所得到的油状物用哌啶在DMF中的溶液(1∶4v/v，4.00mL)处理。将所述溶液搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩并将所述粗制残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.3％/min的含有0.1％HCO2H和10％H2O的20-60％乙腈以20mL/min的流速进行。将在14分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(20.0mg，30.0μmol；28.8％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：9.94(1H，s)，9.82(1H，d，J＝6.0Hz)，7.64(3H，br s)，7.48(2H，AB，JAB＝8.3Hz)，7.21(2H，AB，JAB＝8.4Hz)，6.95(1H，br d，J＝7.8Hz)，6.85(1H，br d，J＝8.7Hz)，4.19(1H，br s)，4.11(1H，br s)，2.93(1H，dd，J＝13.8，3.3Hz)，2.77(2H，br s)，2.70(1H，dd，J＝13.2，11.1Hz)，2.13(2H，dd，J＝7.4，7.2Hz)，1.63(1H，br s)，1.56-1.48(5H，m)，1.37(9H，s)，1.35-1.25(2H，m)，1.29(9H，s)，0.89(3H，d，J＝6.6Hz)，0.88(3H，d，J＝6.6Hz)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：
Figure A20068003141401841
171.5，170.7(2)，155.4，155.1，137.3，132.7，129.4，118.9，78.0，54.3，53.5，40.7，38.7，37.0，32.8，28.2，28.1，26.7，25.3，24.4，24.3，22.9，21.6。MS(ESI)：621.5(100，M+H)。HRMS：对于C31H53N6O7的计算值：621.3970；测得：621.3900。
实施例84
2-[10-(2-{4-[N-((2R)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]哌啶基}-2-氧代乙基)-1，4，7，10-四氮杂-4，7-双(羧基甲基)环十二烷基]乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401842
将实施例30B的产物(30.0mg，63.8μmol)和i-Pr2NEt(11μL，63μmol)在干燥DMF(1.00mL)中的溶液转移至先前制得的(4，7，10-三-叔丁氧基羰基甲基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基)乙酸(47.5mg，82.9μmol)在含有HBTU(26.6mg，70.1μmol)、HOBt(10.7mg，69.9μmol)和i-Pr2NEt(44μL，0.25mmol)的DMF(3.00mL)中的溶液中；使用另外的DMF(2×0.50mL)来定量所述转移。将所得到的溶液在22℃下保持3小时，然后在真空下浓缩并将残余物用Et3SiH在TFA中的溶液(9∶1v/v，3.30mL)处理。在22℃下搅拌2.5小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.67％/min的含有0.1％TFA的0-20％乙腈以20mL/min的流速进行。将在5.5分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(65.0mg，53.6μmol；84.0％)。MS(ESI)：643.3(65.2，M+H)，530.3(36.0)，322.3(100，M+2H)，265.7(49.7)。HRMS：对于C28H51N8O9的计算值：643.3774；测得：643.3763。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；99.8％D-亮氨酸。
实施例85
N-{(1R)-3-甲基-1-[N-(4-哌啶基羰基氨基)氨甲酰基]-丁基}(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的合成
将Boc-Leu-D-Leu-OH(51.7mg，0.150mmol)和HOAt(17.1mg，0125mmol)在干燥DMF(3.00mL)中的溶液依次用可力丁(92.5μL，0.700mmol)和DIC (19.4μL，0.125mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1v/v)将实施例30A的产物脱保护并将所得到的盐(48.1mg，0.100mmol)一次性加至预先活化的溶液中；使用另外的DMF (0.50mL)洗涤所述反应容器的侧面。在22℃下2.5小时后，在真空下除去所有挥发性物质，并将所述粗制残余物用三(2-氨基乙基)胺在DMF中的溶液(1∶4v/v，2.50mL)处理；在0.5小时内观察到完全的脱保护。将所得到的溶液浓缩并将所述粗制黄色油状物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的10-40％乙腈以20mL/min的流速进行。将在15分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(23.0mg，39.4μmol；39.3％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ9.87(1H，s)，9.78(1H，s)，8.44(1H，br s)，8.21(1H，br s)，8.00(1H，d，J＝8.4Hz)，7.70(1H，br s)，6.91(1H，d，J＝7.5Hz)，4.34(1H，ddd，J＝9.1，5.8，5.7Hz)，3.96(1H，ddd，J＝8.0，7.8，7.0Hz)，2.92(3H，br s)，2.61(1H，dd，J＝6.2，5.5Hz)，1.85(2H，dt，J＝14.2，3.4Hz)，1.77-1.70(2H，m)，1.64-1.45(4H，m)，1.40-1.37(2H，m)，1.36(9H，s)，0.88(3H，d，J＝6.8Hz)，0.87(3H，d，J＝6.7Hz)，0.85(3H，d，J＝6.6Hz)，0.82(3H，d，J＝6.5Hz)。MS(ESI)：470.4(100，M+H)。HRMS：对于C23H44N5O5的计算值：470.3337；测得：470.3341。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；51.2％L-亮氨酸。
实施例86
2-[(2-{[(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-3-甲基丁酰基氨基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401861
部分A-N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-甲基丁酰基氨基}-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141401862
将Boc-D-Val-OH(338mg，1.56mmol)和HOAt(178mg，1.30mmol)在干燥DMF(5.00mL)中的溶液依次用可力丁(963μL，7.29mmol)和DIC(5.00×102μL，1.04mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入实施例3A的产物(2.00×102mg，0.415mmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌1小时。然后在真空下除去所有挥发性物质并将所得到的油状物用哌啶在DMF中的溶液(1∶4v/v，5.00mL)处理。将所述溶液搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩并将所述粗制残余物再悬浮在乙腈/H2O(1∶1v/v；10.0mL)中，过滤并冷冻干燥为白色固体。将由此得到的粗制物质通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(41.2×250mm)上使用梯度为0.83％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的10-35％乙腈以80mL/min的流速进行。将在16分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(233mg，0.508mmol；48.9％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ9.76(1H，s)，9.72(1H，s)，7.65(3H，br s)，6.66(1H，d，J＝9.0Hz)，3.81(1H，dd，J＝8.4，7.9Hz)，2.80-2.74(2H，m)，2.11(2H，t，J＝7.3Hz)，1.93-1.87(1H，m)，1.56-1.50(4H，m)，1.38(9H，s)，1.34-1.29(2H，m)，0.91(3H，d，J＝6.8Hz)，0.86(3H，d，J＝6.7Hz)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：170.7，170.2，157.8(q，J＝32.2Hz)，155.2，116.8(q，J＝299Hz)，77.9，58.2，38.7，32.8，30.4，28.1，26.7，25.3，24.3，19.1，18.3。MS(ESI)：345.4(100，M+H)。HRMS：对于C16H33N4O4的计算值：345.2496；测得：345.2493。部分B-2-[(2-{[(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-3-甲基丁酰基氨基)-氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)-(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(2.00×102mg，0.436mmol)一次性加至先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(323mg，0.523mmol)在含有HBTU(182mg，0.480mmol)、HOBt(73.5mg，0.480mmol)和i-Pr2NEt(303μL，1.74mmol)的DMF(7.00mL)中的溶液中；使用另外的DMF(2×1.50mL)来洗涤所述反应容器的侧面。将所得到的溶液在22℃下保持0.6小时，然后在真空下浓缩并将残余物用Et3SiH在CH2Cl2中的溶液(9∶1v/v，400μL)处理，接着用TFA(3.60mL，46.7mmol)处理。在22℃下搅拌2.5小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的0-20％乙腈以20mL/min的流速进行。将在8.0分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(236mg，0.219mmol；50.3％)。MS(ESI)：620.4(87.4，M+H)，310.9(100，M+2H)。HRMS：对于C25H43FeN7O11的计算值：673.2365；测得：673.2370。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；100.0％D-缬氨酸。
实施例87
2-{[2-({[N-((2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401871
部分A-(2R)-N-氨基-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-苯基丙酰胺的制备
Figure A20068003141401872
经历15分钟将Boc-DPhe-OMe(6.00g，21.5mmol)在水合肼(15.0mL，309mmol)中的混悬液缓慢温热至70℃。当完全溶解时，将所述温度保持18小时，在此期间生成白色沉淀。将所得到的混悬液冷却至22℃，用甲醇(50mL)稀释并在真空下浓缩。将由此得到的白色固体再溶解于热乙酸乙酯中从而消耗过量的肼；冷却时形成乙酰肼的重白色沉淀，将其随后通过过滤除去。将滤液用NaHCO3的饱和溶液(3×50mL)和NaCl(2×50mL)的饱和溶液洗涤，然后以MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩为白色固体(4.20g，15.0mmol；70.0％)。将所述产物不经进一步纯化用于后续步骤。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ9.09(1H，s)，7.27-7.17(5H，m)，6.86(1H.br d，J＝8.7Hz)，4.20(2H，brs)，4.11(1H，ddd，J＝9.8，8.9，4.8Hz)，2.87(1H，dd，J＝13.7，4.7Hz)，2.74(1H，dd，J＝13.5，10.2Hz)，1.29(9H，s)。MS(ESI)：180.1(86.8，M-Boc)，163.1(100)。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；98.5％D-苯丙氨酸。
部分B-2-{[2-({[N-((2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基]-(羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(142mg，0.508mmol)一次性加至先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(383mg，0.620mmol)在含有HBTU(212mg，0.559mmol)、HOBt(86.0mg，0.562mmol)和i-Pr2NEt(353μL，2.03mmol)的DMF(7.00mL)中的溶液中；使用另外的DMF(2×1.50mL)来洗涤所述反应容器的侧面。将所得到的溶液在22℃下保持0.6小时，然后在真空下浓缩并将残余物用Et3SiH在CH2Cl2中的溶液(9∶1v/v，400μL)处理，接着用TFA(3.60mL，46.7mmol)处理。在22℃下搅拌2.5小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的0-20％乙腈以20mL/min的流速进行。将在8.0分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(277mg，0.274mmol；53.9％)。MS(ESI)：555.3，(100，M+H)，278.3(47.0，M+2H)。HRMS：对于C23H32FeN6O10的计算值：608.1524；测得：608.1516。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；99.0％D-苯丙氨酸。
实施例88
2-{[2-({[N-(5-{N-[(2R)-2-氨基-3-(4-氨基苯基)丙酰基氨基]氨甲酰基}戊基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
部分A-N-((2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-{4-[(叔丁氧基)羰基氨基]苯基}丙酰基氨基)-6-氨基己酰胺的制备
Figure A20068003141401892
将Boc-DPhe(4-NHBoc)-OH(96.6mg，0.254mmol)和HOBt(35.0mg，0.229mmol)在干燥DMF(3.00mL)中的溶液依次用HBTU(88.0mg，0.232mmol)和i-Pr2NEt(1.60×102μL，0.919mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入实施例3A的产物(111mg，0.231mmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌1小时。将由此得到的粗制反应混合物在乙酸乙酯(50mL)与10％柠檬酸水溶液(10mL)之间分配，分离所述层并将乙酸乙酯层用10％柠檬酸水溶液(2×10mL)、饱和NaHCO3(3×10mL)及饱和NaCl(10mL)洗涤。将所得到的乙酸乙酯溶液以MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩为白色泡沫状物，将其用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，4.00mL)处理。将所述溶液搅拌1.5小时，然后在真空下浓缩为白色泡沫状物，将其不经进一步纯化用于后续步骤。部分B-2-{[2-({N-(5-{N-[(2R)-2-氨基-3-(4-氨基苯基)丙酰基氨基]氨甲酰基}戊基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)-氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(157mg，0.254mmol)在含有HBTU(96.0mg，0.253mmol)、HOBt(39.0mg，0.255mmol)和Et3N(128μL，0.918mmol)的乙腈(2.00mL)中的溶液转移至部分A的产物(117mg，0.231mmol)在乙腈(2.00mL)中的溶液中；使用另外的乙腈(2×1.50mL)来定量所述转移。将所得到的溶液在22℃下保持0.6小时，然后在真空下浓缩并将残余物用Et3SiH在CH2Cl2中的溶液(4∶1v/v，200μL)处理，接着用TFA(1.80mL，23.4mmol)处理。在22℃下搅拌2小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的0-20％乙腈以20mL/min的流速进行。将在7.0分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(75.0mg，65.9μmol；28.6％)。MS(ESI)：683.4(81.8，M+H)，342(100，M+2H)。HRMS：对于C29H44FeN8O11的计算值：736.2474；测得：736.2462。
实施例89
2-[(2-{[(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-3-环己基丙酰基氨基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401901
部分A-N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-环己基丙酰基氨基}-6-氨基己酰胺的制备
Figure A20068003141401902
将Boc-DCha-OH·DCHA(566mg，1.25mmol)和HOBt(175mg，1.14mmol)在干燥DMF(8.00mL)中的溶液依次用HBTU(432mg，1.14mmol)和i-Pr2NEt (725μL，4.16mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入实施例3A的产物(500mg，1.04mmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌0.5小时；使用另外的DMF(2×1.00mL)洗涤所述反应容器的侧面。将由此得到的粗制反应混合物在乙酸乙酯(150mL)与10％柠檬酸水溶液(15mL)之间分配，分离所述层并将乙酸乙酯层用10％柠檬酸水溶液(2×15mL)、饱和NaHCO3(3×15mL)及饱和NaCl(15mL)洗涤。将所得到的乙酸乙酯溶液进一步用1M KHSO4(2×15mL)、H2O(15mL)及饱和NaCl(15mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的油状物用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，10.0mL)处理，搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩。将所得到的油状物直接用于后续步骤。
部分B-2-[(2-{[(N-{5-[N-((2R)-2-氨基-3-环己基丙酰基氨基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)-氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的制备
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(704mg，1.14mmol)在含有HBTU(432mg，1.04mmol)、HOBt(175mg，1.14mmol)和Et3N(741μL，5.32mmol)的乙腈(5.00mL)中的溶液转移至部分A的产物(414mg，1.04mmol)在乙腈(2.00mL)中的溶液中；使用另外的乙腈(2×1.50mL)来定量所述转移。将所得到的溶液在22℃下保持0.6小时，然后在真空下浓缩。将残余物再溶解于乙酸乙酯(150mL)中，用NaHCO3的饱和溶液(3×15mL)和NaCl的饱和溶液(15m L)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所述粗制油状物用Et3SiH在CH2Cl2中的溶液(4∶1v/v，400μL)处理，接着用TFA(3.60mL，46.7mmol)处理。在22℃下搅拌2小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.1％/min的含有0.1％TFA的0-40％乙腈以20mL/min的流速进行。将在17分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(393mg，0.348mmol；33.5％)。MS(ESI)：674.5(100，M+H)，337.9(42.4，M+2H)。HRMS：对于C29H49FeN7O11的计算值：727.2834；测得：727.2836。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；99.8％D-环己基丙氨酸。
实施例90
2-({2-[({N-[(4-{N-[(氨基环戊基)羰基氨基]氨甲酰基}苯基)甲基]氨甲酰基}-甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401921
部分A-N-{[4-(氨基甲基)苯基]羰基氨基}{[(叔丁氧基)羰基氨基]环戊基}甲酰胺的制备
Figure A20068003141401922
将叔丁氧基羰基氨基环戊烷甲酸(2.00×102mg，0.872mmol)和HOBt(122mg，0.797mmol)在干燥DMF(5.00mL)中的溶液依次用HBTU(303mg，0.799mmol)和i-Pr2NEt(507μL，2.91mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1v/v)将实施例29A的产物脱保护并将所得到的盐(365mg，728mmol)一次性加至预先活化的溶液中；使用另外的DMF(2×1.00mL)来冲洗所述反应容器的侧面。在22℃下0.5小时后，将所述粗制反应混合物在乙酸乙酯(150mL)与10％柠檬酸水溶液(15mL)之间分配，分离所述层，并将乙酸乙酯层用10％柠檬酸水溶液(2×15mL)、饱和NaHCO3(3×15mL)、1N NaOH(2×15mL)及饱和NaCl(15mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩。将所得到的油状物用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，6.00mL)处理，搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩。将所得到的油状物直接用于后续步骤。
部分B-2-({2-[({N-[(4-{N-[(氨基环戊基)羰基氨基]氨甲酰基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的制备
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(449mg，0.727mmol)在含有HBTU(276mg，0.728mmol)、HOBt(111mg，0.725mmol)和Et3N(365μL，2.62mmol)的乙腈(5.00mL)中的溶液转移至部分A的产物(274mg，0.728mmol)在乙腈(2.00mL)中的溶液中；使用另外的乙腈(2×1.50mL)来定量所述转移。将所得到的溶液在22℃下保持0.6小时，然后在真空下浓缩并将残余物用Et3SiH在CH2Cl2中的溶液(4∶1v/v，1.00mL)处理，接着用TFA(9.00mL，117mmol)处理。在22℃下搅拌2小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的0-20％乙腈以20mL/min的流速进行。将在9.0分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(213mg，0.192mmol；26.4％)。MS(ESI)：652.3(79.4，M+H)，326.3(100，M+2H)。HRMS：对于C28H39FeN7O11的计算值：705.2052；测得：705.2038。
实施例91
2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-3-环己基丙酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401931
部分A-(2R)-N-{[4-(氨基甲基)苯基]羰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-环己基丙酰胺的制备
Figure A20068003141401932
将Boc-DCha-OH·DCHA(272mg，0.601mmol)和HOBt(84.0mg，0.549mmol)在干燥乙腈(5.00mL)中的溶液依次用HBTU(209mg，0.551mmol)和Et3N(278μL，1.99mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。将实施例29A的产物用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1v/v)脱保护并将所得到的盐(251mg，0.501mmol)一次性加至预先活化的溶液中；需要接着加入DMF(4.00mL)从而保持均相的反应混合物。在22℃下0.5小时后，将所述粗制反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用10％柠檬酸水溶液(2×10mL)、1M KHSO4(2×10mL)、饱和NaHCO3(3×15mL)及饱和NaCl(15mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的油状物用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，5.00mL)洗涤，搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩。将所得到的油状物直接用于后续步骤。
部分B-2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-3-环己基丙酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(408mg，0.660mmol)在含有HBTU(251mg，0.662mmol)、HOBt(101mg，0.660mmol)和Et3N(278μL，1.99mmol)的乙腈(4.00mL)中的溶液转移至部分A的产物(209mg，0.501mmol)在乙腈(3.00mL)中的溶液中；使用另外的乙腈(2×0.50mL)来定量所述转移。将所得到的溶液在22℃下保持0.5小时，然后在真空下浓缩。将残余物再溶解于乙酸乙酯(100mL)中，用NaHCO3的饱和溶液(3×10mL)和NaCl的饱和溶液(10mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所述粗制油状物用Et3SiH在CH2Cl2中的溶液(4∶1v/v，1.00mL)处理，接着用TFA(9.00mL，117mmol)处理。在22℃下搅拌2小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的0-20％乙腈以20mL/min的流速进行。将在20分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(187mg，0.162mmol；32.5％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.55(1H，s)，10.52(1H，s)，9.03(1H，t，J＝5.9Hz)，8.27(3H，br s)，7.87(2H，AA’XX’，JAX＝8.3Hz，JAA’＝1.9Hz)，7.42(2H，AX，JAX＝8.4Hz)，4.44(2H，d，J＝5.8Hz)，4.31(2H，s)，3.91(1H，br s)，3.52(8H，s)，3.40(4H，t，J＝5.8Hz)，3.07(4H，t，J＝5.9Hz)，1.79-1.74(2H，m)，1.71-1.59(5H，m)，1.51(1H，br s)，1.27-1.11(3H，m)，0.91(2H，ABqt，JAB＝12.5Hz，Jt＝3.4Hz)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：δ172.6，168.4，165.1，164.9，157.9(q，J＝32.8Hz)，142.5，130.8，127.6，127.1，116.6(q，J＝303Hz)，54.3，53.8，52.2，49.1，48.7，42.0，32.7，32.3，32.0，25.8，25.4，25.3。MS(ESI)：694.4(94.0，M+H)，347.8(M+2H)。HRMS：对于C31H48N7O11的计算值：694.3406；测得：694.3407。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；94.2％D-环己基丙氨酸。
实施例92
2-({2-[(2-{4-[N-((2R)-2-氨基-3-环己基丙酰基氨基)氨甲酰基]哌啶基}-2-氧代乙基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401951
部分A-(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-环己基-N-(4-哌啶基羰基氨基)丙酰胺的制备
将Boc-DCha-OH·DCHA (272mg，0.601mmol)和HOBt (84.0mg，0549mmol)在干燥乙腈(5.00mL)中的溶液依次用HBTU (209mg，0.551mmol)和Et3N(278μL，1.99mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。将实施例30A的产物用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1v/v)脱保护并将所得到的盐(2.40×102mg，0.501mmol)一次性加至预先活化的溶液中。在22℃下0.5小时后，将所述粗制反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用10％柠檬酸水溶液(2×10mL)、1M KHSO4(2×10mL)、饱和NaHCO3(3×15mL)及饱和NaCl(15mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的油状物用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，5.00mL)处理，搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩。将所得到的油状物直接用于后续步骤。
部分B-2-({2-[(2-{4-[N-((2R)-2-氨基-3-环己基丙酰基氨基)氨甲酰基]哌啶基}-2-氧代乙基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的制备
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(3.40×102mg，0.550mmol)在含有HBTU(209mg，0.551mmol)、HOBt(84.0mg，0.549mmol)和Et3N(278μL，1.99mmol)的乙腈(4.00mL)中的溶液转移至部分A的产物(198mg，0.501mmol)在乙腈(3.00mL)中的溶液中；使用另外的乙腈(2×0.50mL)来定量所述转移。将所得到的溶液在22℃下保持0.5小时，然后在真空下浓缩。将残余物再溶解于乙酸乙酯(100mL)，用NaHCO3的饱和溶液(3×10mL)和NaCl的饱和溶液(10mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所述粗制油状物用Et3SiH在CH2Cl2中的溶液(4∶1v/v，1.00mL)处理，接着用TFA(9.00mL，117mmol)处理。在22℃下搅拌2小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的0-20％乙腈以20mL/min的流速进行。将在18分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(145mg，0.129mmol；25.7％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.44(1H，d，J＝9.1Hz)，10.13(1H，J＝10.5Hz)，8.22(3H，br s)，4.67(2H，AB，JAB＝16.1Hz)，4.32(1H，br d，J＝12.6Hz)，3.82(1H，br s)，3.64(1H，br d，J＝12.5Hz)，3.48(8H，s)，3.36(4H，br s)，3.06(5H，br t，J＝5.5Hz)，2.77(1H，dd，J＝12.1，11.4Hz)，2.55(1H，br s)，1.79-1.41(13H，m)，1.23-1.08(3H，m)，0.90-0.84(2H，m)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：δ172.7，172.5，167.8，163.2，157.9(q，J＝33.2Hz)，116.5(q，J＝297Hz)，54.2，52.4，49.0，48.8，43.4，40.9，38.8，32.6，32.3，32.0，28.0，27.7，25.8，25.5，25.3。MS(ESI)：672.3(88.9，M+H)，336.8(100，M+2H)。HRMS：对于C29H50N7O11的计算值：672.3563；测得：672.3565。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；91.2％D-环己基丙氨酸。
实施例93
2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-3-甲基丁酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
部分A-(2R)-N-{[4-(氨基甲基)苯基]羰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-甲基丁酰胺的制备
Figure A20068003141401972
将Boc-DVal-OH(1.30×102mg，0.598mmol)和HOBt(84.0mg，0.549mmol)在干燥DMF(5.00mL)中的溶液依次用HBTU(209mg，0.551mmol)和Et3N(278μL，1.99mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。将实施例29A的产物用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1v/v)脱保护并将所得到的盐(251mg，0.501mmol)一次性加至预先活化的溶液中。在22℃下0.5小时后，将所述粗制反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用10％柠檬酸水溶液(2×30mL)、饱和NaHCO3(3×30mL)、1N NaOH (30mL)及饱和NaCl(30mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的油状物用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，5.00mL)处理，搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩。将所得到的油状物直接用于后续步骤。
部分B-2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-3-甲基丁酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(3.40×102mg，0.550mmol)在含有HBTU(209mg，0.551mmol)、HOBt(84.0mg，0.549mmol)和Et3N(278μL，1.99mmol)的乙腈(4.00mL)中的溶液转移至部分A的产物(182mg，0.501mmol)在乙腈(3.00mL)中的溶液中；使用另外的乙腈(2×0.50mL)来定量所述转移。将所得到的溶液在22℃下保持0.5小时，然后在真空下浓缩。将所述粗制油状物用Et3SiH在CH2Cl2中的溶液(4∶1v/v，1.00mL)处理，接着用TFA(9.00mL，117mmol)处理。在22℃下搅拌2小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的0-20％乙腈以20mL/min的流速进行。将在12分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(1.0×101mg，9.1μmol；1.8％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.54(1H，s)，10.41(1H，s)，8.99(1H，br t，J＝5.8Hz)，8.19(3H，br s)，7.87(2H，AB，JAB＝8.3Hz)，7.42(2H，AB，JAB＝8.3Hz)，4.44(2H，d，J＝5.8Hz)，4.29(2H，br s)，3.70(1H，br s)，3.51(8H，s)，3.38(4H，br s)，3.06(4H，br t，J＝4.9Hz)，2.20-2.14(1H，m)，1.05(3H，d，J＝6.9Hz)，1.04(3H，d，J＝6.9Hz)。MS(ESI)：662.3(9.7，M+Na)，640.4(31.0，M+H)，320.9(100，M+H)。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；99.6％D-缬氨酸。
实施例94
2-({2-[(2-{4-[N-((2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]哌啶基}-2-氧代乙基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141401981
部分A-(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-苯基-N-(4-哌啶基羰基氨基)丙酰胺的制备
将Boc-DPhe-OH(332mg，1.25mmol)和HOBt(177mg，1.16mmol)在干燥DMF(5.00mL)中的溶液依次用HBTU(435mg，1.15mmol)和i-Pr2NEt(727μL，4.17mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1v/v)将实施例30A的产物脱保护并将所得到的盐(5.00×102mg，1.04mmol)一次性加至预先活化的溶液中。在22℃下2小时后，将所述粗制反应混合物用乙酸乙酯(125mL)稀释，用10％柠檬酸水溶液(5×5mL)、饱和NaHCO3(5×5mL)及饱和NaCl(2×5mL)洗涤，然后以MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的固体用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，10.0mL)处理，搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩。将所得到的固体直接用于后续步骤。
部分B-2-({2-[(2-{4-[N-((2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]哌啶基}-2-氧代乙基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}-氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的制备
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(348mg，0.563mmol)在含有HBTU(214mg，0.564mmol)和Et3N(285μL，2.04mmol)的DMF(5.00mL)中的溶液转移至含有部分A的产物(2.00×102mg，0.512mmol)的烧瓶中。将所得到的溶液在22℃下保持1小时，然后在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.8％/min的含有0.1％TFA的50-85％乙腈以20mL/min的流速进行。将在19分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体。然后使用TFA/CH2Cl2/Et3SiH(90∶8∶2v/v，2.50m L)进行完全脱保护。在22℃下3小时后，将所述溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的0-20％乙腈以20mL/min的流速进行。将在11分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(212.5mg，0.189mmol；37.0％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.10(1H，br s)，7.31(2H，dd，J＝7.4，7.0Hz)，7.28(2H，dd，J＝6.6，1.7Hz)，7.25(1H，tt，J＝7.0，1.6Hz)，4.30(1H，br d，J＝12.4Hz)，3.97(1H，br d，J＝12.5Hz)，3.84(1H，dd，J＝8.0，5.3Hz)，3.73(1H，s)，3.67(2H，ABqd，JAB＝13.7Hz，Jd＝6.2Hz)，3.37(8H，s)，3.08(1H，dd，J＝13.9，5.2Hz)，3.01(1H，br t，J＝12.3Hz)，2.88-2.77(9H，m)，2.64(1H，br t，J＝12.5Hz)，1.71(2H，br s)，1.62-1.56(1H，m)，1.49-1.41(1H，m)。MS(ESI)：666.4(39.3，M+H)，333.8(100，M+2H)。HRMS：对于C29H43N7O11Na的计算值：688.2913；测得：688.2908。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；98.6％D-苯丙氨酸。
实施例95
2-[(2-{[(N-{5-[N-((2R)-2-氨基己酰基氨基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141402001
部分A-(2R)-N-(6-氨基己酰基氨基)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]己酰胺的制备
将Boc-DNle-OH(139mg，0.601mmol)和HOBt(84.0mg，0.549mmol)在干燥DMF (5.00mL)中的溶液依次用HBTU(209mg，0.551mmol)和Et3N(278μL，1.99mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。一次性加入实施例3A的产物(241mg，0.501mmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌0.5小时。将由此得到的粗制反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用10％柠檬酸水溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3(3×20mL)、1N NaOH(20mL)及饱和NaCl(20mL)洗涤，以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的粗制物质用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，10.0mL)处理，搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩。将所得到的油状物直接用于后续步骤。
部分B-2-[(2-{[(N-{5-[N-((2R)-2-氨基己酰基氨基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]-乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的制备
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(3.40×102mg，0.550mmol)在含有HBTU(209mg，0.551mmol)、HOBt(84.0mg，0.549mmol)和Et3N(278μL，1.99mmol)的乙腈(4.00mL)中的溶液转移至部分A的产物(179mg，0.501mmol)在乙腈(3.00mL)中的溶液中；使用另外的乙腈(2×0.50mL)来定量所述转移。将所得到的溶液在22℃下保持0.5小时，然后在真空下浓缩。将所述粗制油状物用Et3SiH在CH2Cl2中的溶液(4∶1v/v，1.00mL)处理，接着用TFA(9.00mL，117mmol)处理。在22℃下搅拌2小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexLuna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％HCO2H的0-20％乙腈以20mL/min的流速进行。将在5.0分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(1.00×102mg，91.8μmol；18.3％)；收率基于在含有0.1％TFA的乙腈/H2O(1∶1，v/v)中重复冷冻干燥后的TFA盐。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.07(1H，br s)，8.02(1H，t，J＝5.7Hz)，3.77(1H，t，J＝6.3Hz)，3.40(8H，br s)，3.17(2H，br s)，3.07(2H，td，J＝6.6，6.4Hz)，2.82(4H，brt，J＝6.3Hz)，2.70(4H，br t，J＝6.1Hz)，2.16(2H，t，J＝7.3Hz)，1.72(2H，dt，J＝7.9，7.2Hz)，1.53(2H，tt，J＝7.4，7.4Hz)，1.43(2H，tt，J＝7.2，7.2Hz)，1.38-1.25(6H，m)，0.87(3H，t，J＝7.2Hz)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：δ172.2，171.0，169.3，167.5，56.8，55.7，52.0，51.1，51.0，38.2，32.9，30.9，28.7，26.0，25.7，24.7，21.7，13.6。MS(ESI)：634.4(73.1，M+H)，317.9(100，M+2H)。HRMS：对于C26H48N7O11的计算值：634.3406；测得：634.3412。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；97.7％D-正亮氨酸。
实施例96
2-[(2-{[2-(4-{[N-((2S)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]甲基}哌啶基)-2-氧代乙基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，甲酸盐的合成
Figure A20068003141402021
部分A-4-[(N-氨基氨甲酰基)甲基]-哌啶甲酸芴-9-基甲基酯，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141402022
将2-{1-[(芴-9-基甲基)氧羰基]-4-哌啶基}乙酸(2.01g，5.50mmol)在干燥DMF(10.0mL)中的溶液依次用HBTU(2.08g，5.48mmol)和i-Pr2NEt(1.74mL，9.99mmol)处理，然后在22℃下搅拌3分钟。一次性加入肼基甲酸叔丁酯(0.660g，4.99mmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌1小时。将所述粗制反应混合物用乙酸乙酯(250mL)稀释，用10％柠檬酸水溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3(3×20mL)及饱和NaCl(2×20mL)洗涤，然后以MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的固体溶解于CH2Cl2(5.00mL)并用TFA(5.00mL，64.9mmol)处理。在22℃下1小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将残余物再溶解于乙腈/H2O(1∶1v/v)中，然后冷冻干燥为灰白色固体，将其不经进一步纯化用于后续步骤。
部分B-(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基-N-(2-(4-哌啶基)乙酰基氨基)戊酰胺的制备
Figure A20068003141402023
将部分A的产物(3.00×102mg，0.608mmol)在含有i-Pr2NEt(318μL，1.82mmol)的DMF(1.00mL)中的溶液转移至先前制得的Boc-DLeu-OH(155mg，0.670mmol)和HOBt(103mg，0.673mmol)在含有HBTU(254mg，0.670mmol)和i-Pr2NEt(212μL，1.22mmol)的干燥DMF(2.00mL)中的溶液中。在22℃下0.5小时后，将所述粗制反应混合物用乙酸乙酯(80mL)稀释，用10％柠檬酸水溶液(5×5mL)、饱和NaHCO3(5×5mL)及饱和NaCl(2×10mL)洗涤，然后以MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的油状物用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，3.00mL)处理，搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩。将所得到的固体直接用于后续步骤。
部分C-2-[(2-{[2-(4-{[N-((2S)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨甲酰基]甲基}哌啶基)-2-氧代乙基]{2-[双(羧基甲基)氨基]-乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，甲酸盐的制备
Figure A20068003141402031
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(352mg，0.570mmol)在含有HBTU(216mg，0.569mmol)和Et3N(217μL，1.56mmol)的乙腈(3.00mL)中的溶液转移至含有部分B的产物(192mg，0.518mmol)的烧瓶中。将所得到的溶液在22℃下保持0.25小时，然后在真空下浓缩。然后使用TFA/CH2Cl2/Et3SiH(90∶8∶2v/v，3.00mL)进行完全脱保护。在22℃下2.5小时后，将所述溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％HCO2H的0-20％乙腈以20mL/min的流速进行。将在9.5分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(48.0mg，54.8μmol；10.6％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.08(1H，br s)，4.27(1H，br d，J＝12.5Hz)，3.93(1H，br s)，3.71(1H，t，J＝7.3Hz)，3.65(1H，d，J＝15.1Hz)，3.47(1H，dd，J＝15.1，9.3Hz)，3.36(8H，s)，2.96-2.92(1H，m)，2.82(3H，br t，J＝6.5Hz)，2.80-2.66(3H，m)，2.57-2.52(1H，m)，2.13(2H，br d，J＝6.4Hz)，1.90(1H，br s)，1.76-1.65(2H，m)，1.59(1H，tt，J＝6.9，6.9Hz)，1.52(1H，tt，J＝7.6，6.6Hz)，1.24-1.03(2H，m)，0.92(3H，d，J＝6.5Hz)，0.90(3H，d，J＝6.6Hz)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：
Figure A20068003141402041
172.7，169.6，168.5，167.1，56.9，51.3，50.7，49.9，44.6，41.1，40.8，40.1，32.8，30.9，23.5，22.5，21.9。MS(ESI)：646.4(100，M+H)，323.9(952.，M+2H)。HRMS：对于C27H45FeN7O11的计算值：699.2521；测得：699.2522。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；99.1％D-亮氨酸。
实施例97
2-[(2-{[2-(4-{[N-((2S)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]甲基}哌啶基)-2-氧代乙基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，甲酸盐的合成
部分A-(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-苯基-N-(2-(4-哌啶基)乙酰基氨基)丙酰胺的制备
Figure A20068003141402043
将实施例96A的产物(3.00×102mg，0.608mmol)在含有i-Pr2NEt(318μL，1.82mmol)的DMF(1.00mL)中的溶液转移至先前制得的Boc-DPhe-OH(177mg，0.667mmol)和HOBt(103mg，0.673mmol)在含有HBTU(254mg，0.670mmol)和i-Pr2NEt(212μL，1.22mmol)的干燥DMF(2.00mL)中的溶液中。在22℃下0.5小时后，将所述粗制反应混合物用乙酸乙酯(80mL)稀释，用10％柠檬酸水溶液(5×5mL)、饱和NaHCO3(5×5mL)及饱和NaCl(2×10mL)洗涤，然后以MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的油状物用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，3.00mL)处理，搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩。将所得到的固体直接用于后续步骤。
部分B-2-[(2-{[2-(4-{[N-((2S)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]甲基}哌啶基)-2-氧代乙基]{2-[双(羧基甲基)-氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，甲酸盐的制备
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(353mg，0.571mmol)在含有HBTU(216mg，0.569mmol)和Et3N(217μL，1.56mmol)的乙腈(3.00mL)中的溶液转移至含有部分A的产物(2.10×102mg，0.519mmol)的烧瓶中。将所得到的溶液在22℃下保持0.25小时，然后在真空下浓缩。然后使用TFA/CH2Cl2/Et3SiH(90∶8∶2v/v，3.00mL)进行完全脱保护。在22℃下2.5小时后，将所述溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％HCO2H的0-20％乙腈以20mL/min的流速进行。将在12分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(103mg，0.119mmol；23.0％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.08(1H，br s)，7.34-7.29(4H，m)，7.28-7.25(1H，m)，4.29(1H，br d，J＝13.1Hz)，3.93(1H，br t，J＝6.5Hz)，3.87(1H，br d，J＝13.0Hz)，3.79(1H，br d，J＝14.9Hz)，3.68(1H，br d，J＝14.2Hz)，3.38(8H，s)，3.11(1H，dd，J＝14.0，5.1Hz)，2.95(1H，brt，J＝12.2Hz)，2.90(1H，dd，J＝14.0，8.0Hz)，2.85(8H，br s)，2.56(1H，br t，J＝12.2Hz)，2.14(2H，br d，J＝6.6Hz)，1.92(1H，br s)，1.69(2H，br d，J＝11.7Hz)，1.24-1.03(2H，m)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：
Figure A20068003141402051
172.7，169.5，168.2，166.6，135.6，129.5，128.4，126.9，56.2，54.5，52.9，51.5，50.5，44.5，38.0，32.9，31.6，30.9。MS(ESI)：680.3(100，M+H)，340.9(98.2，M+2H)。HRMS：对于C30H43FeN7O11的计算值：733.2364；测得：733.2360。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；99.3％D-苯丙氨酸。
实施例98
2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-4-苯基丁酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141402061
部分A-(2R)-N-氨基-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-苯基丁酰胺的制备
Figure A20068003141402062
在22℃下将H-D-Hphe-OH(44.0g，245mmol)在1∶1H2O/t-BuOH(350mL)中的溶液用粉状NaOH(10.8g，270mmol)处理，接着经历10分钟以三等份用Boc2O(58.9g，270mmol)处理。将所得到的混悬液搅拌16小时，然后用H2O(300mL)稀释并用Et2O(3×200mL)洗涤。将剩余的水溶液用AcOH酸化(pH 5)，然后用乙酸乙酯(3×250mL)洗涤。注意：在所述乙酸乙酯洗涤期间，将另外的AcOH加至所述水层从而保持pH。将所合并的有机萃取物用H2O(250mL)及饱和NaCl(250mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩为白色固体(47.7g，171mmol)。将最初的Et2O洗涤物用含水AcOH酸化从而沉淀未反应的氨基酸(6.8g，38mmol)。使用上述萃取方法从所述滤液回收另外的Boc-保护的物质(8.51g，30.4mmol)；合并得到56.2g(201mmol，82.0％)。将所述产物不经进一步纯化用于后续反应。
在22℃下经历10分钟将所述Boc-D-Hphe-OH(47.7g，171mmol)在3∶1CH2Cl2/甲醇(400mL)中的溶液用滴加的(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(205mmol；103mL在Et2O中的2.0M溶液)处理。将所得到的黄色溶液搅拌另外15分钟，然后在真空下浓缩。将所述粗制物质再溶解于甲醇(171mL)中并在22℃下用水合肼(33.2mL，684mmol)处理。5小时后，完成酰肼的形成。在真空下除去所有挥发性物质并将所述粗制物质从热乙酸乙酯重结晶从而得到白色粉末(45.6g，155mmol，91.0％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ9.01(1H，s)，7.27(2H，dd，J＝7.6，7.5Hz)，7.18-7.16(3H，m)，6.94(1H，d，J＝8.2Hz)，4.20(2H，br s)，3.89(1H，ddd，J＝8.8，5.5，5.0Hz)，2.60(1H，ddd，J＝15.1，10.5，5.2Hz)，2.52-2.47(1H，m)，1.86-1.74(2H，m)，1.39(9H，s)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：δ171.2，155.2，141.4，128.2(2)，125.7，77.9，52.7，34.0，31.6，28.2。MS (ESI)：238.4(100，M-t-Bu)，194.4(67.0，M-Boc)，177.4(27.7)。HRMS：对于C11H16N3O3的计算值：238.1186；测得：238.1186。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度(99.8％D-高苯丙氨酸)。
部分B-(2R)-N-{[4-(氨基甲基)苯基]羰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-苯基丁酰胺的制备
Figure A20068003141402071
将Boc-D-Hphe-OH(182mg，0.652mmol)和HOBt(84.0mg，0.549mmol)在干燥DMF(5.00mL)中的溶液依次用HBTU(209mg，0.551mmol)和i-Pr2NEt(349μL，2.00mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。将实施例29A的产物用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1v/v)脱保护并将所得到的盐(251mg，0.501mmol)一次性加至预先活化的溶液中，接着加入i-Pr2NEt(80μL，0.459mmol)；使用另外的DMF(2×1.00mL)来冲洗所述反应容器的侧面。在22℃下0.5小时后，将所述粗制反应混合物在乙酸乙酯与10％柠檬酸水溶液(每种50mL)之间分配并将所述层分离。将乙酸乙酯层用10％柠檬酸水溶液(2×25mL)、饱和NaHCO3(3×25mL)、H2O(25mL)及饱和NaCl(25mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的油状物用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，6.00mL)处理，搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩。将所述粗制产物直接用于后续步骤。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ7.82(2H，AB，JAB＝8.3Hz)，7.43(2H，AB，JAB＝8.0Hz)，7.29(2H，dd，J＝7.7，7.4Hz)，7.23(2H，d，J＝7.1Hz)，7.19(1H，dd，J＝7.3，7.3Hz)，7.07(1H，br d，J＝8.1Hz)，4.08(1H，ddd，J＝8.1，6.1，5.3Hz)，3.77(2H，s)，2.75-2.65(2H，m)，2.01-1.95(1H，m)，1.91-1.84(1H，m)，1.41(9H，s)。MS(ESI)：853.4(100，2M+H)，427.4(100，M+H)，371.3(50.2，M-t-Bu)，327.4(88.9)。
部分C-2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-4-苯基丁酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141402081
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(309mg，0.500mmol)在含有HBTU(1.90×102mg，0.501mmol)、HOBt(77.0mg，0.503mmol)和Et3N(279μL，2.00mmol)的乙腈(5.00mL)中的溶液转移至部分B的产物(213mg，0.501mmol)在乙腈(2.00mL)中的溶液中；使用另外的乙腈(2×0.50mL)来定量所述转移。将所得到的溶液在22℃下保持0.5小时，然后在真空下浓缩。将残余物再溶解于乙酸乙酯(50mL)，用10％柠檬酸水溶液(3×25mL)、饱和NaHCO3(3×25mL)及饱和NaCl(25mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所述粗制油状物用Et3SiH在CH2Cl2中的溶液(4∶1v/v，1.00mL)处理，接着用TFA(9.00mL，117mmol)处理。在22℃下搅拌2小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％HCO2H的0-30％乙腈以20mL/min的流速进行。将在19分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(83.0mg，93.7μmol；18.7％)；为了表征的一致性，在含有0.1％TFA的乙腈/H2O(1∶1v/v)中重复冷冻干燥后制备所述TFA盐。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.57(1H，s)，10.53(1H，s)，9.02(1H，t，J＝5.8Hz)，8.39(3H，br s)，7.88(2H，AB，JAB＝8.3Hz)，7.43(2H，AB，JAB＝8.3Hz)，7.33(2H，dd，J＝7.6，7.1Hz)，7.24(3H，m)，4.44(2H，d，J＝5.6Hz)，4.31(2H，s)，4.03(1H，br s)，3.52(8H，s)，3.40(4H，br t，J＝5.5Hz)，3.07(4H，br t，J＝5.6Hz)，2.83-2.73(2H，m)，2.14-2.07(2H，m)。13CNMR(DMSO-d6，151MHz)：δ172.7，167.9，165.3，164.9，157.9(q，J＝32.3Hz)，142.6，140.6，130.8，128.5，128.1，127.7，127.2，126.1，116.7(q，J＝298Hz)，54.3，53.8，52.2，51.2，48.6，42.0，33.3，30.0。MS(ESI)：662.3(9.7，M+Na)，640.4(31.0，M+H)，320.9(100，M+H)。HRMS：对于C32H41FeN7O11的计算值：755.2208；测得：755.2200。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；99.7％D-高苯丙氨酸。
实施例99
2-({2-[({N-[(4-{N-[(2R)-2-氨基-3-(2，3，4，5，6-五氟苯基)丙酰基氨基]氨甲酰基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，甲酸盐的合成
Figure A20068003141402091
部分A-(2R)-N-{[4-(氨基甲基)苯基]羰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-(2，3，4，5，6-五氟苯基)丙酰胺的制备
Figure A20068003141402092
将Boc-DPhe(F5)-OH(231mg，0.650mmol)和HOBt(84.0mg，0.549mmol)在干燥DMF(3.00mL)中的溶液依次用HBTU(209mg，0.551mmol)和i-Pr2NEt(349μL，2.00mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。将实施例29A的产物用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1v/v)脱保护并将所得到的盐(251mg，0.501mmol)一次性加至预先活化的溶液中，接着加入i-Pr2NEt(80.0μL，0.459mmol)；使用另外的DMF(2×1.00mL)来洗涤所述反应容器的侧面。在22℃下0.5小时后，将所述粗制反应混合物在乙酸乙酯与10％柠檬酸水溶液(每种50mL)之间分配并分离所述层。将乙酸乙酯层用10％柠檬酸水溶液(2×25mL)、饱和NaHCO3(3×25mL)、H2O(25mL)及饱和NaCl(25mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的油状物用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，6.00mL)处理，搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩。将所述粗制物质直接用于后续步骤。
部分B-2-({2-[({N-[(4-{N-[(2R)-2-氨基-3-(2，3，4，5，6-五氟苯基)丙酰基氨基]氨甲酰基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，甲酸盐的制备
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(309mg，0.500mmol)在含有HBTU(1.90×102mg，0.501mmol)、HOBt(77.0mg，0.503mmol)和Et3N(279μL，2.00mmol)的乙腈(5.00mL)中的溶液转移至部分A的产物(251mg，0.501mmol)在乙腈(2.00mL)中的溶液中；使用另外的乙腈(2×0.50mL)来定量所述转移。将所得到的溶液在22℃下保持0.5小时，然后在真空下浓缩。将残余物再溶解于乙酸乙酯(50mL)，用10％柠檬酸水溶液(3×25mL)、饱和NaHCO3(3×25mL)及饱和NaCl(25mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所述粗制油状物用Et3SiH在CH2Cl2中的溶液(4∶1v/v，1.00mL)处理，接着用TFA(9.00mL，117mmol)处理。在22℃下搅拌2小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％HCO2H的0-30％乙腈以20mL/min的流速进行。将在19分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(1.00×102mg，0.104mmol；20.8％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.43(1H，brs)，8.68(1H，t，J＝6.2Hz)，7.79(2H，AB，JAB＝8.2Hz)，7.36(2H，AB，JAB＝8.2Hz)，4.36(2H，br d，J＝6.0Hz)，3.69(1H，br t，J＝7.4Hz)，3.38(8H，s)，3.24(2H，s)，3.08(1H，dd，J＝13.7，7.0Hz)，2.93(1H，dd，J＝13.4，8.1Hz)，2.80(4H，br t，J＝6.4Hz)，2.68(4H，brt，J＝6.3Hz)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：δ172.5，170.6，170.3，165.1，145.1(d，J＝246Hz)，143.9，139.2(d，J＝249Hz)，136.8(d，J＝245Hz)，130.7，127.5，126.9，111.2(t，J＝15.9Hz)，56.8，55.7，52.3，52.0，51.3，41.7，27.1。MS(ESI)：778.3(51.0，M+H)，389.7(100，M+2H)。HRMS：对于C31H34F5FeN7O11的计算值：831.1580；测得：831.1568。
实施例100
2-[(2-{[(N-{[4-(N-{(2R)-2-氨基-3-[4-(苯基羰基氨基)苯基]丙酰基氨基}氨甲酰基)苯基]甲基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的合成
部分A-(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-[4-(苯基羰基氨基)苯基]丙酸的制备
Figure A20068003141402112
将Boc-DPhe(4-NH2)-OH·TFA(182mg，0.462mmol)和Et3N(212μL，1.52mmol)在干燥CH2Cl2(4.00mL)中的溶液在22℃下经历10分钟用滴加的苯甲酰氯溶液(0.510mmol；1.00mL在CH2Cl2中的0.51M溶液)处理。将所得到的溶液加热至回流并保持3.5小时。当冷却至22℃时，将所得到的溶液用CH2Cl2(15mL)稀释，用2.5M HCl(2×20mL)、H2O(2×20mL)及饱和NaCl(20mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩为白色固体(48.0mg，0.125mmol；27.0％)；少量的苯甲酸污染该物质。
部分B-(2R)-N-{[4-(氨基甲基)苯基]羰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-[4-(苯基羰基氨基)苯基]丙酰胺，甲酸盐的制备
Figure A20068003141402121
将部分A(48.0mg，0.125mmol)和HOBt(19.0mg，0.124mmol)在干燥DMF(3.00mL)中的溶液依次用HBTU(47.0mg，0.124mmol)和i-Pr2NEt (88.0μL，0.505mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。将实施例29A的产物用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1v/v)脱保护并将所得到的盐(82.0mg，0.164mmol)一次性加至预先活化的溶液中。在22℃下0.5小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将所得到的油状物用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，6.00mL)处理。将所得到的溶液在22℃下搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.88％/min的含有0.1％HCO2H的10-45％乙腈以20mL/min的流速进行。将在25分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(24.0mg，41.5μmol；33.3％)。
部分C-2-[(2-{[(N-{[4-(N-{(2R)-2-氨基-3-[4-(苯基羰基氨基)苯基]丙酰基氨基}氨甲酰基)苯基]甲基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，甲酸盐的制备
Figure A20068003141402122
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(46.0mg，74.5μmol)在含有HBTU(28.0mg，73.8μmol)、HOBt(11.0mg，71.8μmol)和Et3N(41.0μL，0.294mmol)的乙腈(1.50mL)中的溶液用部分B的产物(42.8mg，74.0μmol)在乙腈(1.50mL)中的溶液处理。将所得到的溶液在22℃下保持0.5小时，然后在真空下浓缩。将残余物再溶解于乙酸乙酯(45mL)，用10％柠檬酸水溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3(3×20mL)及饱和NaCl(20mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所述粗制油状物用Et3SiH在CH2Cl2中的溶液(4∶1v/v，250μL)处理，接着用TFA(2.30mL，29.9mmol)处理。在22℃下搅拌1.5小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％HCO2H的0-30％乙腈以20mL/min的流速进行。将在24分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(28.0mg，28.3μmol；38.2％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.25(1H，br s)，8.68(1H，t，J＝6.2Hz)，7.96(2H，AB，JAB＝7.1Hz)，7.84(2H，AB，JAB＝8.2Hz)，7.74(2H，AB，JAB＝8.4Hz)，7.59(1H，tt，J＝7.3，1.2Hz)，7.53(2H，dd，J＝7.7，7.2Hz)，7.38(2H，AB，JAB＝8.2Hz)，7.32(2H，AB，JAB＝8.3Hz)，4.36(2H，br d，J＝6.1Hz)，3.97(1H，br s)，3.36(8H，s)，3.18(2H，s)，3.18-3.15(1H，m)，2.94(1H，dd，J＝13.9，7.8Hz)，2.81(4H，br t，J＝6.5Hz)，2.64(4H，br t，J＝6.4Hz)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：δ172.5，170.6，169.2，165.5，165.4，143.8，138.0，134.9，131.5，130.8，130.7，129.8，128.3，127.6，127.5，127.0，120.3，57.3，56.6，53.2，52.3，51.4，41.7，37.8。MS(ESI)：807.3(81.1，M+H)，404.3(100，M+2H)。HRMS：对于C38H44FeN8O12的计算值：860.2423；测得：860.2420。
实施例101
2-[(2-{[(N-{[4-(N-{(2R)-2-氨基-3-[4-(苯基甲氧基)苯基]丙酰基氨基}氨甲酰基)苯基]甲基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141402131
部分A-(2R)-N-{[4-(氨基甲基)苯基]羰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-[4-(苯基甲氧基)苯基]丙酰胺的制备
Figure A20068003141402141
将Boc-DTyr(Bn)-OH(241mg，0.649mmol)和HOBt(84.0mg，0.549mmol)在干燥DMF(3.00mL)中的溶液依次用HBTU(209mg，0.551mmol)和i-Pr2NEt(349μL，2.00mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。将实施例29A的产物用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1v/v)脱保护并将所得到的盐(251mg，0.501mmol)一次性加至预先活化的溶液中，接着加入i-Pr2NEt(80.0μL，0.459mmol)；使用另外的DMF(2×1.00mL)来洗涤所述反应容器的侧面。在22℃下0.5小时后，将所述粗制反应混合物在乙酸乙酯与10％柠檬酸水溶液(每种50mL)之间分配并分离所述层。将乙酸乙酯层用10％柠檬酸水溶液(2×25mL)、饱和NaHCO3(3×25mL)及饱和NaCl(25mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的固体用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，6.00mL)处理，搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩。将所述粗制物质直接用于后续步骤。
部分B-2-[(2-{[(N-{[4-(N-{(2R)-2-氨基-3-[4-(苯基甲氧基)苯基]丙酰基氨基}氨甲酰基)苯基]甲基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的制备
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(309mg，0.500mmol)在含有HBTU(1.90×102mg，0.501mmol)、HOBt(77.0mg，0.503mmol)和Et3N(279μL，2.00mmol)的乙腈(5.00mL)中的溶液转移至部分A的产物(2.60×102mg，0.501mmol)在乙腈(2.00mL)中的溶液中；使用另外的乙腈(2×0.50mL)来定量所述转移。将所得到的溶液在22℃下保持0.5小时，然后在真空下浓缩。将残余物再溶解于乙酸乙酯(50mL)，用10％柠檬酸水溶液(3×25mL)、饱和NaHCO3(3×25mL)及饱和NaCl(25mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所述粗制油状物用Et3SiH在CH2Cl2中的溶液(4∶1v/v，1.00mL)处理，接着用TFA(9.00mL，117mmol)处理。在22℃下搅拌2小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.86％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的5-35％乙腈以20mL/min的流速进行。将在27分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(66.0mg，52.8μmol；10.5％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.61(1H，s)，9.02(1H，br t，J＝5.6Hz)，8.21(3H，br s)，7.89(2H，AB，JAB＝8.2Hz)，7.45(2H，AB，JAB＝7.4Hz)，7.43(2H，AB，JAB＝8.3Hz)，7.40(2H，dd，J＝7.7，7.3Hz)，7.33(1H，dd，J＝7.3，7.2Hz)，7.29(2H，AB，JAB＝8.4Hz)，7.00(2H，AB，JAB＝8.5Hz)，5.10(2H，s)，4.44(2H，br d，J＝5.5Hz)，.4.30(2H，br s)，4.10(1H，br s)，3.52(8H，s)，3.40(4H，br t，J＝5.6Hz)，3.18(1H，dd，J＝14.0，4.3Hz)，3.07(4H，br t，J＝5.8Hz)，2.98(1H，dd，J＝14.1，8.2Hz)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：δ172.7，167.5，165.1，164.9，157.8(q，J＝32.0Hz)，157.7，142.6，137.1，130.8，128.4，127.8，127.7，127.6，127.1，126.5，117.8，114.9，69.2，54.3，53.9，52.5，52.2，48.7，42.0，36.3。MS(ESI)：794.3(68.6，M+H)，541.2(23.9)，397.7(100，M+2H)。HRMS：对于C38H45FeN7O12的计算值：847.2470；测得：847.2469。
实施例102
2-({2-[({N-[(4-{N-[(2-氨基茚满-2-基)羰基氨基]氨甲酰基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141402151
部分A-N-{[4-(氨基甲基)苯基]羰基氨基}{2-[(叔丁氧基)羰基氨基]茚满-2-基}甲酰胺的制备
Figure A20068003141402161
将N-Boc-2-氨基-茚满-2-甲酸(166mg，0.599mmol)和HOBt(84.0mg，0.549mmol)在干燥DMF(8.00mL)中的溶液依次用HBTU(209mg，0.551mmol)和i-Pr2NEt(349μL，2.00mmol)处理，然后在22℃下搅拌5分钟。将实施例29A的产物用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1v/v)脱保护并将所得到的盐(251mg，0.501mmol)一次性加至所述预先活化的溶液中；使用另外的DMF(2×1.00mL)来洗涤所述反应容器的侧面。在22℃下0.5小时后，将所述粗制反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用10％柠檬酸水溶液(3×30mL)、饱和NaHCO3(3×30mL)及饱和NaCl(30mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的油状物用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，10.0mL)处理，搅拌0.5小时，然后在真空下浓缩。将所述粗制物质直接用于后续步骤。部分B-2-({2-[({N-[(4-{N-[(2-氨基茚满-2-基)羰基氨基]氨甲酰基}苯基)甲基]氨甲酰基}甲基){2-[双(羧基甲基)-氨基]乙基}氨基]乙基}(羧基甲基)氨基)乙酸，三氟乙酸盐的制备
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(309mg，0.500mmol)在含有HBTU(1.90×102mg，0.501mmol)、HOBt(77.0mg，0.503mmol)和Et3N(279μL，2.00mmol)的乙腈(6.00mL)中的溶液转移至部分A的产物(2.60×102mg，0.501mmol)在乙腈(400mL)中的溶液中。将所得到的溶液在22℃下保持0.5小时，然后在真空下浓缩。将残余物再溶解于乙酸乙酯(100mL)，用10％柠檬酸水溶液(3×30mL)、饱和NaHCO3(3×30mL)及饱和NaCl(30mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所述粗制油状物用Et3SiH在CH2Cl2中的溶液(1∶1v/v，2.00mL)处理，接着用TFA(8.00m L，104mmol)处理。在22℃下搅拌2小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.86％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的5-35％乙腈以20mL/min的流速进行。将在10分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(187mg，0.162mmol；32.3％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.53(1H，s)，10.47(1H，s)，9.02(1H，br t，J＝5.7Hz)，8.54(2H，br s)，7.86(2H，AB，JAB＝8.2Hz)，7.42(2H，AB，JAB＝8.4Hz)，7.39(2H，dd，J＝5.3，3.3Hz)，7.31(2H，dd，J＝5.5，3.2Hz)，4.44(2H，br d，J＝5.4Hz)，4.30(2H，br s)，3.79(2H，AB，JAB＝17.5Hz)，3.52(8H，s)，3.40(4H，br t，J＝5.4Hz)，3.31(2H，AB，JAB＝17.6Hz)，3.07(4H，br t，J＝5.4Hz)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：δ172.7，171.0，165.4，164.9，157.9(q，J＝33.1Hz)，142.6，138.5，130.8，127.6，127.4，127.2，124.8，116.6(q，J＝297Hz)，64.1，54.3，53.9，52.2，48.7，43.0，.42.0。MS(ESI)：700.3(100，M+H)，541.2(82.3)，350.6(91.8，M+2H)。HRMS：对于C32H39FeN7O11的计算值：753.2052；测得：753.2037。
实施例103
2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-3-吲哚-3-基丙酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141402171
部分A-(2R)-N-{[4-(氨基甲基)苯基]羰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-吲哚-3-基丙酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141402172
将实施例29A的产物用TFA在CH2Cl2中的溶液(1∶1v/v)脱保护并将所得到的盐(251mg，0.501mmol)溶解于DMF(10.0mL)中且依次用Boc-DTrp-OH(183mg，0.601mmol)、HOBt(84.0mg，0.549mmol)、HBTU(209mg，0.551mmol)和i-Pr2NEt(349μL，2.00mmol)处理。在22℃下0.5小时后，将所述粗制反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用10％柠檬酸水溶液(3×30mL)、饱和NaHCO3(3×30mL)及饱和NaCl(30mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的油状物用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，10.0mL)处理，搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.2％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的15-50％乙腈以20mL/min的流速进行。将在17分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(236mg，0.347mmol；69.4％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.82(1H，s)，10.49(1H，s)，10.18(1H，s)，8.27(3H，br s)，7.95(2H，AB，JAB＝8.2Hz)，7.69(1H，d，J＝7.9Hz)，7.57(2H，AB，JAB＝8.1Hz)，7.33(1H，d，J＝8.1Hz)，7.23(1H，d，J＝2.0Hz)，7.07(1H，dd，J＝7.3，7.3Hz)，6.99(1H，dd，J＝7.5，7.2Hz)，6.82(1H，d，J＝8.4Hz)，4.36(1H，td，J＝9.8，4.1Hz)，4.12(2H，br d，J＝4.5Hz)，3.19(1H，dd，J＝14.5，3.7Hz)，2.97(1H，dd，J＝14.6，10.2Hz)，1.31(9H，s)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：δ171.6，164.8，157.9(q，J＝32.0Hz)，155.1，137.6，136.0，132.5，128.7，127.7，127.3，123.8，120.8，118.5，118.1，116.9(q，J＝299Hz)，111.2，110.0，77.9，53.6，41.9，28.1。MS(ESI)：903.5(66.9，2M+H)，452.3(100，M+H)，396.2(30.0，M-t-Bu)，352.3(32.7，M-Boc)。HRMS：对于C24H30N5O4的计算值：452.2292；测得：452.2298。
部分B-2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-3-吲哚-3-基丙酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)-氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(225mg，0.364mmol)在含有HBTU(132mg，0.348mmol)、HOBt(53.0mg，0.346mmol)和Et3N(185μL，1.33mmol)的乙腈(4.00mL)中的溶液转移至部分A的产物(225mg，0.331mmol)在乙腈(2.00mL)中的溶液中。将所得到的溶液在22℃下保持0.5小时，然后在真空下浓缩。将残余物再溶解于乙酸乙酯(100mL)，用10％柠檬酸水溶液(3×30mL)、饱和NaHCO3(3×30mL)及饱和NaCl(30mL)洗涤，然后以Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所述粗制油状物用Et3SiH在CH2Cl2中的溶液(1∶1v/v，2.00mL)处理，接着用TFA(8.00mL，104mmol)处理。在22℃下搅拌2小时后，将所得到的溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.8％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的5-25％乙腈以20mL/min的流速进行。将在21分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(124mg，0.105mmol；31.7％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ11.06(1H，s)，10.75(1H，s)，10.65(1H，s)，9.03(1H，br t，J＝5.8Hz)，8.18(3H，br s)，7.90(2H，AB，JAB＝8.2Hz)，7.78(1H，d，J＝7.9Hz)，7.44(2H，AB，JAB＝8.3Hz)，7.39(1H，d，J＝8.1Hz)，7.33(1H，d，J＝2.2Hz)，7.12(1H，td，J＝7.0，1.1Hz)，7.05(1H，td，J＝7.0，0.9Hz)，4.45(2H，br d，J＝5.8Hz)，4.31(2H，s)，4.13(1H，br s)，3.52(8H，s)，3.41(4H，br t，J＝6.0Hz)，3.38(1H，dd，J＝15.0，4.6Hz)，3.16(1H，dd，J＝15.0，8.9Hz)，3.07(4H，br t，J＝5.9Hz)。13C NMR (DMSO-d6，151MHz)：δ172.7，167.9，165.1，164.9，157.9(q，J＝32.7Hz)，142.6，136.3，130.8，127.7，127.2，127.0，125.2，121.2，118.5，118.4，116.7(q，J＝298Hz)，111.5，106.5，54.3，53.9，52.2，51.6，48.7，42.0，27.7。MS(ESI)：727.2(83.7，M+H)，541.3(21.0)，364.2(61.9，M+2H)，355.7(100)。HRMS：对于C33H40FeN8O11的计算值：780.2161；测得：780.2167。
实施例104
2-{[2-({[N-(4-{4-[N-((2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]苯基}丁基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141402191
部分A-4-[4-(1，3-二氧代异二氢吲哚-2-基)丁基]苯甲酸甲酯的制备
Figure A20068003141402201
将4-(4-羟基丁基)苯甲酸甲酯(2.10g，10.1mmol)(Taylor，E.C.；Harrington，P. M.J.Org.Chem.1990，55，3222)、邻苯二甲酰亚胺(1.56g，10.6mmol)和PPh3(2.78g，10.6mmol)在THF(40.0mL)中的溶液在0℃下经历0.25小时用滴加的偶氮二甲酸二异丙酯(1.95mL，9.90mmol)处理。经历3小时将所得到的溶液缓慢温热至22℃，然后在真空下浓缩并用Et2O(75mL)处理从而引起Ph3P(O)的沉淀。在真空下除去Et2O并将所得到的固体通过硅胶色谱法(1∶3乙酸乙酯/戊烷)纯化从而得到白色固体(2.40g，7.11mmol；71.8％)。应注意到经纯化的产物含有未反应的邻苯二甲酰亚胺(～10％w/w)。1H NMR(CDCl3，600MHz)：δ7.94(2H，AA’XX’，JAX＝8.3Hz，JAA’＝1.9Hz)，7.85(2H，dd，J＝5.4，3.0Hz)，7.72(2H，dd，J＝5.5，3.0Hz)，7.24(2H，AA’XX’，JAX＝8.4Hz，JXX’＝1.9Hz)，3.90(3H，s)，3.73(2H，t，J＝6.9Hz)，2.72(2H，t，J＝7.2Hz)，1.77-1.67(4H，m)。13C NMR(CDCl3，151MHz)：δ168.4，167.1，147.5，133.9，132.1，129.7，128.4，127.9，123.2，51.9，37.6，35.3，28.2，28.1。MS(ESI)：360.2(50.1，M+Na)，338.1(9.8，M+H)，306.2(100，M-甲醇)。
部分B-2-{N-[4-(4-羧基苯基)丁基]氨甲酰基}苯甲酸的制备
Figure A20068003141402202
将部分A的产物(1.00g，2.96mmol)在THF/H2O(4∶1v/v，15.0mL)中的溶液在22℃下用LiOH·H2O(0.500g，11.9mmol)一次性处理。将所得到的溶液搅拌16小时，然后用0.5M HCl(pH＝4-5)酸化。将所得到的混悬液用乙酸乙酯(50mL)稀释，用5％柠檬酸水溶液及饱和NaCl(每种2×25m L)洗涤，然后使用烧结玻璃漏斗过滤。将由此得到的白色粉末放置一旁，同时将滤液用MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩从而得到白色粉末；将所收集的固体合并(957mg，2.80mmol；94.6％)。1H NMR(CDCl3，600MHz)：δ7.43(2H，AA’XX’，JAX＝8.2Hz，JAA’＝1.8Hz)，7.39(1H，dd，J＝7.7，1.2Hz)，7.37(1H，brt，J＝5.8Hz)，7.04(1H，td，J＝7.5，1.4Hz)，6.97(1H，td，J＝7.6，1.3Hz)，6.94(1H，dd，J＝7.5，1.3Hz)，6.80(2H，AA’XX’，JXX＝8.3Hz，JXX’＝1.8Hz)，2.88(2H，td，J＝7.0，5.8Hz)，2.24(2H，t，J＝7.6Hz)，1.28-1.23(2H，m)，1.18-1.13(2H，m)。MS(ESI)：342.2(88.5，M+H)，324.2(100，M-H2O)。
部分C-(2R)-N-{[4-(4-氨基丁基)苯基]羰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-苯基丙酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141402211
将部分B的产物(183.mg，0.536mmol)在含有HBTU(447mg，1.18mmol)、HOBt(182mg，1.19mmol)和Et3N(299μL，2.15mmol)的DMF(10.0mL)中的溶液在22℃下用实施例87A的产物(329mg，1.18mmol)一次性处理。0.25小时后，将所述溶液用乙酸乙酯(200mL)稀释，用5％柠檬酸水溶液(5×10mL)、0.5M NaOH(5×10mL)及饱和NaCl(2×10mL)洗涤，然后用MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的油状物直接用水合肼(15.0mL，309mmol)处理，在22℃下搅拌0.5小时，然后用乙酸乙酯(125mL)稀释并转移至分液漏斗中。将乙酸乙酯层用NaHCO3饱和溶液(3×5mL)和NaCl饱和溶液(2×5mL)洗涤，然后以MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的固体通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(41.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的20-50％乙腈以80mL/min的流速进行。将在20分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(93.7mg，0.165mmol；30.7％)。MS(ESI)：909.45(37.4，M+2H)，455.3(100，M+H)，399.2(18.8，M-t-Bu)，355.2(64.0，M-Boc)。部分D-2-{[2-({[N-(4-{4-[N-((2R)-2-氨基-3-苯基丙酰基氨基)氨甲酰基]苯基}丁基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141402221
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(80.5mg，0.130mmol)在含有HBTU(49.3mg，0.130mmol)和Et3N(36.3μL，0.260mmol)的DMF(3.00mL)中的溶液用部分C的产物(74.0mg，0.130mmol)一次性处理。将所得到的溶液在22℃下保持0.75小时，然后在真空下浓缩。将残余物再溶解于乙酸乙酯(100mL)，用5％柠檬酸水溶液(5×10mL)、0.5M NaOH(5×10mL)及饱和NaCl(2×10mL)洗涤，然后用MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。然后使用TFA/CH2Cl2/Et3SiH(90∶8∶2v/v，3.00mL)进行完全脱保护。在22℃下1.5小时后，将所述溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的0-30％乙腈以20mL/min的流速进行。将在23分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(90.3mg，76.1μmol；58.5％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.62(1H，s)，10.56(1H，s)，8.46(1H，br t，J＝5.3Hz)，8.26(3H，br s)，7.84(2H，AB，JAB＝8.1Hz)，7.37-7.34(6H，m)，7.32-7.30(1H，m)，4.16(3H，br s)，3.50(8H，s)，3.37(4H，br t，J＝5.6Hz)，3.25(1H，br d，J＝12.5Hz)，3.16(2H，td，J＝6.4，6.0Hz)，3.04(4H，br t，J＝5.7Hz)，2.67(2H，t，J＝7.6Hz)，1.62(2H，tt，J＝7.5，7.3Hz)，1.46(2H，tt，J＝7.4，7.3Hz)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：δ172.7，167.5，165.3，164.4，157.9(q，J＝32.5Hz)，146.5，134.5，129.7，129.6，128.6，128.4，127.6，127.2，116.7(q，J＝298Hz)，54.3，53.8，52.3，52.1，48.6，38.5，37.1，34.5，28.4，27.9。MS(ESI)：730.4(61.4，M+H)，365.8(100，M+2H)。HRMS：对于C34H45FeN7O11的计算值：783.2521；测得：782.2514。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；99.0％D-苯丙氨酸。
实施例105
2-{[2-({[N-({3-[N-((2R)-2-氨基-4-苯基丁酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141402231
部分A-N-氨基(3-{[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]甲基}苯基)甲酰胺，三氟乙酸盐的制备
将3-{[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]甲基}苯甲酸(2.50g，6.96mmol)在干燥DMF(15.0mL)中的溶液依次用HBTU(2.51g，6.62mmol)和可力丁(2.50mL，18.9mmol)处理，然后在22℃下搅拌3分钟。一次性加入肼基甲酸叔丁酯(0.840g，6.36mmol)并将所得到的溶液在22℃下搅拌0.5小时。将所述粗制反应混合物用乙酸乙酯(350mL)稀释，用10％柠檬酸水溶液(5×10mL)、0.5M NaOH(5×10mL)及饱和NaCl(2×20mL)洗涤，然后以MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的固体溶解于CH2Cl2(15.0mL)并用TFA(15.0mL，0.190mol)处理。在22℃下0.5小时后，在真空下除去所有挥发性物质并将残余物再溶解于乙腈/H2O(1∶1v/v)中，然后冷冻干燥为灰白色固体，将其不经进一步纯化用于后续步骤。
部分B-(2R)-N-{[3-(氨基甲基)苯基]羰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-苯基丁酰胺的制备
Figure A20068003141402241
将Boc-D-Hphe-OH(159mg，0.569mmol)在含有HBTU(206mg，0.543mmol)、HOBt(83.9mg，0.548mmol)和i-Pr2NEt(181μL，1.04mmol)的DMF(5.00mL)中的溶液用部分A的产物(2.60×102mg，0.518mmol)一次性处理。在22℃下0.5小时后，将所述粗制反应混合物用乙酸乙酯(125mL)稀释，用5％柠檬酸水溶液(5×10mL)、0.5MNaOH(5×10mL)及饱和NaCl(2×10mL)洗涤，然后以MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的油状物用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，10.0mL)处理，搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩。将所得到的固体直接用于后续步骤。
部分C-2-{[2-({[N-({3-[N-((2R)-2-氨基-4-苯基丁酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)-氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(327mg，0.529mmol)在含有HBTU(201mg，0.530mmol)和Et3N(141μL，1.01mmol)的DMF(5.00mL)中的溶液用部分B的产物(215mg，0.504mmol)处理。在22℃下0.25小时后，将所述粗制反应混合物用乙酸乙酯(125mL)稀释，用5％柠檬酸水溶液(5×10m L)、0.5MNaOH(5×10mL)及饱和NaCl (2×10mL)洗涤，然后以MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。然后使用TFA/CH2Cl2/Et3SiH(90∶8∶2v/v，5.00mL)进行完全脱保护。在22℃下1.5小时后，将所述溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的10-35％乙腈以20mL/min的流速进行。将在12分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(206.3mg，0.178mmol；35.3％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.61(1H，s)，10.57(1H，s)，9.02(1H，br t，J＝5.7Hz)，8.39(3H，br s)，7.84(1H，br s)，7.81(1H，dt，J＝7.3，1.7Hz)，7.53(1H，dt，J＝7.7，1.6Hz)，7.50(1H，dd，J＝7.7，7.3Hz)，7.34(2H，dd，J＝8.2，6.9Hz)，7.24(2H，d，J＝8.0Hz)，7.23(1H，tt，J＝7.0，1.3Hz)，4.43(2H，br d，J＝5.7Hz)，4.27(2H，s)，4.03(1H，br s)，3.51(8H，s)，3.40(4H，br t，J＝5.6Hz)，3.06(4H，br t，J＝5.8Hz)，2.83-2.73(2H，m)，2.14-2.06(2H，m)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：δ172.6，167.8，165.4，164.8，157.8(q，J＝32.0Hz)，140.6，138.8，132.2，130.8，128.6，128.5，128.0，126.9，126.1，126.0，116.9(q，J＝299Hz)，54.3，53.9，52.2，51.1，48.6，42.2，33.3，29.9。MS(ESI)：072.2(100，M+H)，351.7(79.0，M+2H)。HRMS：对于C32H41FeN7O11的计算值：755.2208；测得：755.2216。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；98.0％D-高苯丙氨酸。
实施例106
2-[(2-{[(N-{5-[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-4-苯基丁酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141402251
部分A-(2R)-N-{[4-(氨基甲基)苯基]羰基氨基}-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-苯基丁酰胺的制备
Figure A20068003141402252
将Boc-D-Hphe-OH(159mg，0.569mmol)在含有HBTU(205mg，0.540mmol)、HOBt(83.5mg，0.545mmol)和i-Pr2NEt(1.80×102μL，1.03mmol)的DMF(5.00mL)中的溶液用实施例29A的产物(2.00×102mg，0.516mmol)一次性处理。在22℃下0.75小时后，将所述粗制反应混合物用乙酸乙酯(125mL)稀释，用5％柠檬酸水溶液(5×10mL)、0.5M NaOH(5×10mL)及饱和NaCl(2×10mL)洗涤，然后以MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的油状物用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，10.0mL)处理，搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩。将所得到的固体直接用于后续步骤。
部分B-N-{[4-(N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-苯基丁酰基氨基}-氨甲酰基)苯基]甲基}-6-氨基己酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141402261
将实施例3A的产物(201mg，0.569mmol)在含有HBTU(206mg，0.543mmol)和i-Pr2NEt(180μL，1.03mmol)的DMF(5.00mL)中的溶液用实施例98B的产物(2.20×102mg，0.516mmol)一次性处理。在22℃下0.75小时后，将所述粗制反应混合物用乙酸乙酯(125mL)稀释，用5％柠檬酸水溶液(5×10mL)、0.5M NaOH(5×10mL)及饱和NaCl(2×10mL)洗涤，然后以MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将所得到的油状物用Et2NH在乙腈中的溶液(1∶1v/v，10.0mL)处理，搅拌0.3小时，然后在真空下浓缩。将所得到的固体通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA和10％H2O的10-35％乙腈以20mL/min的流速进行。将在18分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(126mg，0.193mmol；37.5％)。
部分C-2-[(2-{[(N-{5-[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-4-苯基丁酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]戊基}氨甲酰基)甲基]{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基}乙基)(羧基甲基)氨基]乙酸，三氟乙酸盐的制备
Figure A20068003141402271
将先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)-乙基]氨基}乙酸(119mg，0.193mmol)在含有HBTU(73.1mg，0.193mmol)和Et3N(51.2δL，0.367mmol)的DMF(4.00mL)中的溶液用部分B的产物(1.20×102mg，0.184mmol)处理。在22℃下0.25小时后，将所述粗制反应混合物用乙酸乙酯(125mL)稀释，用5％柠檬酸水溶液(5×10mL)、0.5M NaOH(5×10mL)及饱和NaCl(2×10mL)洗涤，然后以MgSO4干燥，过滤并在真空下浓缩。然后使用TFA/CH2Cl2/Et3SiH(90∶8∶2v/v，4.00mL)进行完全脱保护。在22℃下1.5小时后，将所述溶液在真空下浓缩并通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/min的含有0.1％TFA的10-35％乙腈以20mL/min的流速进行。将在14分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥为白色固体(131mg，0.103mmol；56.1％)。1H NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.55(1H，s)，10.52(1H，s)，8.43(1H，br t，J＝5.4Hz)，8.38(3H，br s)，7.85(2H，AB，JAB＝8.2Hz)，7.37(2H，AB，JAB＝8.3 Hz)，7.33(2H，dd，J＝7.7，7.5Hz)，7.24(2H，d，J＝7.6Hz)，7.24-7.22(1H，m)，4.33(2H，br d，J＝5.8Hz)，4.16(2H，s)，4.02(1H，br s)，3.50(8H，s)，3.37(4H，br t，J＝5.6Hz)，3.12(2H，td，J＝6.8，6.0Hz)，3.04(4H，br t，J＝5.6Hz)，2.83-2.72(2H，m)，2.16(2H，t，J＝7.5Hz)，2.13-2.07(2H，m)，1.54(2H，tt，J＝7.7，7.5Hz)，1.45(2H，tt，J＝7.4，7.0Hz)。13C NMR(DMSO-d6，151MHz)：δ172.6，172.1，167.8，165.3，164.3，157.9(q，J＝33.1Hz)，144.0，140.6，130.5，128.5，128.0，127.5，127.0，126.1，116.5(q，J＝297Hz)，54.3，53.9，52.2，51.2，48.6，41.7，38.6，35.1，33.2，29.9，28.4，26.0，24.8。MS(ESI)：815.3(56.9，M+H)，654.2(19.5)，408.2(100，M+2H)。HRMS：对于C38H52FeN8O12的计算值：868.3049；测得：868.3038。通过手性GLC分析确定所述产物的光学纯度；98.6％D-高苯丙氨酸。
实施例107
2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-3-(2-萘基)丙酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
部分A-2-[(2-{[(N-{[4-(N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-3-(2-萘基)丙酰基氨基}氨甲酰基)苯基]甲基}氨甲酰基)甲基][2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙基){[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基]乙酸叔丁酯的制备
Figure A20068003141402282
将Boc-D-2-Nal-OH(250mg，0.793mmol)、实施例29B的中间产物(439mg，1.134mmol)和DIEA(0.276mL，1.585mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液用HBTU(361mg，0.951mmol)处理并在室温、氮气下搅拌18小时。将所述反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，连续用10％柠檬酸(3×100mL)、1N NaOH(3×100mL)及饱和NaCl(100mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，并在减压下浓缩。将所得到的残余物吸收在50∶50TEA∶乙腈(50mL)中并在室温、氮气下搅拌45分钟。在真空下除去挥发性物质并将所得到的残余物与环己烷(3×25mL)一起研磨从而得到无色固体(244mg)。MS(ESI)：925.5(95，2M+H)，463.4(100，M+H)。
将上述固体(244mg，0.528mmol)、2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(391mg，0.633mmol)和DIEA(184μL，1.055mmol)在DMF(2.0mL)中的溶液用HBTU(240mg，0.633mmol)处理并在室温、氮气下搅拌45分钟。将所述反应用乙酸乙酯(80mL)稀释，连续用10％柠檬酸(3×50mL)、1N NaOH(3×50mL)及饱和NaCl(80mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并在减小的真空下浓缩。将所得到的粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的45-72％乙腈以80mL/min的流速进行。将在26.6分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状标题化合物(220mg，39％，HPLC纯度90％)。MS(ESI)：1062.6(100，M+H)，453.9(10，M-Boc-tBu+2H)。
部分B-2-{[2-({[N-({4-[N-((2R)-2-氨基-3-(2-萘基)丙酰基氨基)氨甲酰基]苯基}甲基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分A的产物(60mg，0.056mmol)溶解于90∶10∶3TFA∶二氯甲烷∶TIS(10mL)中并在室温、氮气下搅拌4小时。将所述溶液浓缩并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex LunaC18(2)柱(21.2×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的1.8-28.8％乙腈以20mL/min的流速进行。将在25.6分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状标题化合物(30mg，71％，HPLC纯度96％)。1H NMR(DMSO-d6)：δ7.91-7.85(m，3H)，7.81(s，1H)，7.73(d，AA′BB′系统的AA′部分，J＝8.4Hz，2H)，7.53-7.47(m，2H)，7.47-7.42(m，1H)，7.39(d，AA′BB′系统的BB′部分，J＝8.4Hz，2H)，4.40(s，2H)，4.36(t，AXY系统的A部分，J＝7.8Hz，1H)，3.82(s，2H)，3.66(s，8H)，3.41(dd，AXY系统的X部分，Jax＝7.8Hz，Jxy＝15Hz，1H)，3.33(dd，AXY系统的Y部分，Jax＝7.8Hz，Jxy＝15Hz，1H)，3.23-3.13(m，8H)；13C NMR(1∶1CD3C∶D2O)：δ173.31，169.10，168.92，168.31，162.35(q，J＝34.4Hz)，144.10，134.47，133.76，132.41，131.27，129.80，128.99，128.87，128.74，128.39，127.60，127.41，56.31，55.97，54.26，53.22，51.47，43.73，37.88。MS(ESI)：738.3(100，M+H)，369.9(40，M+2H)；HRMS：对于C35H41FeN7O11的计算值(M+Fe-2H)：791.2208；测得：791.2216。
实施例108
2-{[2-({[N-(2-{2-[(N-{(1R)-1-[N-((2R)-2-氨基-4-苯基丁酰基氨基)氨甲酰基]-2-苯基乙基}氨甲酰基)甲氧基]乙氧基}乙基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的合成
Figure A20068003141402301
部分A-2-[(2-{[(N-{2-[2-({N-[(1R)-1-(N-{(2R)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-苯基丁酰基氨基}氨甲酰基)-2-苯基乙基]氨甲酰基}甲氧基)乙氧基]乙基}氨甲酰基)甲基][2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙基){[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基]乙酸叔丁酯的制备
Figure A20068003141402302
将Fmoc-Phe-OH(697mg，1.80mmol)、HBTU(625mg，1.65mmol)、HOBt(253g，1.65mmol)和DIEA(650μL，3.73mmol)在DMF(10mL)中的溶液在室温、氮气下搅拌20分钟。将所述溶液用实施例98A的产物(440mg，1.50mmol，60％纯)和足够的DIEA(350μL，2.00mmol)处理从而将所述pH升至10。将所述溶液搅拌另外18小时并在真空下浓缩。所得到的残余物溶解于乙酸乙酯(50mL)并连续用10％柠檬酸(2×50mL)、1N NaOH(2×50mL)及饱和NaCl(50mL)洗涤。将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)并浓缩从而得到浅棕色固体(340mg)。MS(ESI)：563.3(100，M-Boc+H)，685.3(10，M+Na)。
将上述固体在50∶50DEA∶乙腈中的溶液在氮气、室温下搅拌30分钟并使用减压来浓缩。将所得到的固体残余物与环己烷(3×30mL)一起研磨并通过真空过滤收集从而得到黄色细粉末。将该固体加至先前制得的2-(2-{2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酸(286mg，0.90mmol)、HBTU(286mg，0.76mmol)、HOBt(32mg，0.21mmol)和DIEA(250μL，1.50mmol)在DMF(6.0mL)中的溶液并将所述溶液在室温、氮气下搅拌20小时。使用减压将所述溶液浓缩并将所得到的油状混合物溶解于乙酸乙酯(50mL)。将所述溶液连续用10％柠檬酸(50mL)、1N NaOH(50mL)及饱和NaCl(50mL)洗涤。将乙酸乙酯层干燥(MgSO4)并浓缩从而得到褐色固体(230mg)。MS(ESI)：708.3(100，M+H-Boc)，830.4(5，M+Na)。
将上述固体(202mg，0.250mmol)溶解于50∶50DEA∶乙腈(1.0mL)中并在氮气、室温下搅拌30分钟。将所述溶液浓缩并将所得到的固体与环己烷(3×30mL)一起研磨从而得到黄色细粉末。将该固体加至先前制得的2-{双[2-(双{[(叔丁基)氧羰基]甲基}氨基)乙基]氨基}乙酸(185mg，0.300mmol)、HBTU(104mg，0.275mmol)和DIEA(174μL，1.00mmol)在DMF(1.0mL)中的溶液中并在室温、氮气下继续搅拌18小时。在减压下除去挥发性物质并将所得到的残余物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的45-72％乙腈以80mL/min的流速进行。将在27.0分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色粉末状标题化合物(32mg，11％，HPLC纯度100％)。MS(ESI)：1185.5(100，M+H)。部分B-2-{[2-({[N-(2-{2-[(N-{(1R)-1-[N-((2R)-2-氨基-4-苯基丁酰基氨基)氨甲酰基]-2-苯基乙基}氨甲酰基)甲氧基]乙氧基}乙基)氨甲酰基]甲基}{2-[双(羧基甲基)氨基]乙基}氨基)乙基](羧基甲基)氨基}乙酸，三氟乙酸盐的制备
将部分B的产物(32.0mg，0.027mmol)溶解于90∶7∶3TFA∶二氯甲烷∶TIS(5.0mL)中，在室温、氮气下搅拌3小时，并在减压下浓缩。将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用梯度为0.9％/min的含有0.1％TFA的9-36％乙腈以80mL/min的流速进行。将在18分钟洗脱的产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状标题化合物(24mg，91％，HPLC纯度90％)。MS(ESI)：861.3(40，M+H)，431.3(100，M+2H)。HRMS：对于C39H54FeN8O14的计算值(M-2H+Fe)：914.3103；测得：914.3111；手性分析：99.7％D-Hphe，97.3％L-Phe。
实施例109-117
络合物[157Gd(H-D-氨基酸-酰肼-DTPA)]的合成
H-D-氨基酸酰肼
Figure A20068003141402321
按如下制备实施例114：将实施例19的产物(3.97g，3.64mmol)在Milli-Q H2O(18.2mL)中的溶液在22℃下用GdCl3(1.44g，5.46mmol)一次性处理。将所述溶液的pH用NaOH水溶液(25mmol)调节至～7；使用pH 7的流动相进行所述反应混合物的直接HPLC分析显示络合完全。将所述反应混合物直接通过HPLC纯化，所述HPLC在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上使用梯度为1.0％/分钟的0-20％乙腈以20m L/min的流速；使用15mM NH4Oac作为含水组分进行。将在12分钟洗脱的主要产物峰冷冻干燥从而得到无色固体状标题化合物(3.01g，3.82mmol；＞98％)。以类似的方式制备剩余的实施例。收率和表征数据示于表1中。
表1.实施例109-117的表征数据
  实施例#   起始配体   收率(％) LRMS(ESI)   HRMS(计算值；测量值)
109 50 51   857.3(85，M+H)，429.2(100，M+2H)   C32H41GdN7O11：857.2100；857.2098
110 53 61   869.2(100，M+H)，435.1(60，M+2H) na
111 57 71   837.2(100，M+H)，419.2(75，M+2H)   C30H45GdN7O11：837.2413；837.2419
112 62 75   934.2(100，M+H)，468.5(85，M+2H)   C35H54GdN8O12：936.3097；936.311
113 69 75   893.3(75，M+H)，447.2(100，M+2H)   C35H41GdN7O11：893.2100；893.2091
114 19 ＞98   789.3(100，M+H)，394.9(36.6，M+2H)   C26H45GdN7O11：789.2413；789.2418
115 91 89.5   849.1(47.0，M+H)，696.2(34.6)，447.4(100)，425.2(59.8，M+2H)   C31H44GdN7O11：849.2413；849.2397
116 98 ＞98   857.0(100，M+H)，696.1(28.3)，428.9(48，M+2H)   C32H41GdN7O11：857.2100；857.2108
117 103 53.0   881.1(100，M+H)，441.4(51.2，M+2H)   C33h40GdN8O11：882.2052；882.2037
实施例118和119
络合物[99mTc(H-D-氨基酸-酰肼-HYNIC)(N-三(羟甲基)甲基甘氨酸)(TPPTS)]的合成
Figure A20068003141402341
向含有TPPTS(4.48mg)、N-三(羟甲基)甲基甘氨酸(6.3mg)、甘露醇(40mg)、pH 4.8的琥珀酸缓冲液和0.1％Pluronic F-64表面活性剂的经铅屏蔽、冷冻干燥的管形瓶中加入注射用无菌水(1.1mL)、在去离子水或50％含水乙醇(0.2mL)中的合适H-D-氨基酸-酰肼-HYNIC-偶联物(20μg)和在盐水(0.2mL)中的99mTcO4 -(50±5mCi)。将重构的试剂盒在95℃水浴中加热10分钟，并允许在室温下冷却5分钟。通过HPLC分析所述反应混合物的样品。RCP结果列于表2中。HPLC方法
检测器：INUSβ-Ram，UV在220nm下
柱子：Zorbax Rx C18，25cm×4.6mm
保护：Zorbax C18
温度：环境温度
流速：1.0mL/min
溶剂A：25mM乙酸铵(无pH调节)
溶剂B：100％乙腈
梯度：
t(min)     0   20   21  25   26   32
％溶剂B    10  40   60  60   10   10
表2.99mTc络合物118和119的收率数据
冷实施例# 放射性标记的产物实施例# ％RCP
1 118 100.0
  2   119   72.0
实施例120-152
[14C]H-D-氨基酸-酰肼-乙酰基偶联物的合成
Figure A20068003141402351
部分A-[14C]乙酸钠溶液的制备
从General Electric Health Care(先前的Amersham Biosciences)获得二百五十毫居里的[1-14C]乙酸，钠盐，固体50-60mCi/mmol放射性比度。将所述[1-14C]乙酸，钠盐，固体溶解于无水乙腈(25mL)中从而制备[14C]乙酸钠储备溶液。将所述溶液蜗旋混合10分钟。移去等分用于使用液体闪烁计数器(LSC)方法进行放射性分析。通过将经测量的等分的放射性溶液分配入含有Perkin Elmer Ultima GoldTM闪烁液(5mL)的10mL玻璃闪烁管并接着使用Packard 2500TR型或1600TR LSC型测量放射性含量来进行LSC放射性分析。接着由该储备溶液制备十倍稀释液从而制得用于反应的溶液。在每个反应之前，在所述试剂溶液上进行LSC放射性分析。
部分B-[14C]乙酸钠与氨基酸-酰肼的偶联
通过在环境温度(25℃)下将胺与含14C的乙酸钠在HBTU和DIEA在DMF中的溶液中偶联进行Boc-氨基酸-酰肼的乙酰化。将所述内容物合并于5mL圆锥形内腔的WheatonTM厚壁反应管形瓶中，并使其反应1小时。
部分C-脱保护以及最后的纯化
使用以下方法之一除去侧链保护基。
方法A：50∶50TFA∶二氯甲烷，在RT下持续15分钟。
方法B：95∶2.5∶2.5TFA∶苯甲醚∶水，在RT下持续45分钟。
方法C：在2∶1乙腈∶H2O中的2mol％Pd(OAc)2、4mol％TPPTS、Et2NH。
将粗制反应混合物使用与质谱仪接合的HPLC(LC/MS)在ZorbaxEclipse XDB C-18(4.6mm×250mm)柱上进行分析。将所述溶液在减压下浓缩并将所述粗制产物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexTMLUNA C18(2)柱(10mm×250mm)上使用含有0.1％三氟乙酸的H2O∶乙腈梯度以5mL/min的流速进行。将产物级份在减压下浓缩并通过LC/MS在Zorbax Eclipse XDB C-18柱(4.6mm×250mm)上使用含0.1％甲酸的H2O∶乙腈梯度进行分析。将与放射性活度检测器接合的LCMS和HPLC用于确定RCP。纯度数据示于表3中。
表3.[14C]H-D-氨基酸-酰肼-乙酰基偶联物的收率数据
冷实施例#   放射性标记的产物实施例# ％RCP
  3   120   99.0
  4   121   99.0
  5   122   100.0
  6   123   100.0
  7   124   95.0
  8   125   100.0
  9   126   94.0
  13   127   100.0
  14   128   100.0
  20   129   100.0
  21   130   100.0
  22   131   100.0
  23   132   90.0
  24   133   100.0
  25   134   100.0
  26   135   91.0
  27   136   100.0
  28   137   100.0
  29   138   100.0
  30   139   100.0
  39   140   100.0
  40   141   100.0
  45   142   95.0
  46   143   100.0
  74   144   92.0
  75   145   99.0
  76   146   98.0
  77   147   100.0
  78   148   100.0
  79   149   91.0
  80   150   100.0
  83   151   100.0
  85   152   100.0
实施例153-213
111In-标记的DTPA和DOTA偶联物的合成
Figure A20068003141402371
将H-D-氨基酸-酰肼-DTPA偶联物(50μg)在0.5M pH 6.0乙酸铵(1.0mL)中的溶液用在0.05N HCl中的111InCl3储备溶液(2.0mCi)处理。将所得到的溶液在沸水浴中加热20分钟。将所述粗制反应混合物使用与质谱仪接合的HPLC(LC/MS)在Zorbax Eclipse XDB C-18(4.6mm×250mm)柱上使用含有25mM NH4OAc(pH 6.8)的H2O∶乙腈梯度进行分析。将产物通过HPLC纯化，所述HPLC在PhenomenexTM LUNAC18(2)柱(10mm×250mm)上使用含有25mM NH4OAc(pH 6.8)的H2O∶乙腈梯度进行。将产物级份在减压下浓缩并使用与放射性活度检测器接合的HPLC在Zorbax Eclipse XDB C-18(4.6mm ×250mm)柱上使用含有25mM NH4OAc(pH 6.8)的H2O∶乙腈梯度进行分析。纯度数据示于表4中。
表4.111In-标记的DTPA和D0TA偶联物的纯度数据
  冷实施例#   放射性标记的产物实施例#   ％RCP
  10   153   100.0
  11   154
  19   155   100.0
  31   156   99.0
  38   157   100.0
  41   158   97.0
  42   159   99.0
  43   160   98.0
  47   161   80.0
  48   162   97.0
  49   163   100.0
  50   164   100.0
  51   165   100.0
  52   166   100.0
  53   167   100.0
  54   168   95.0
  冷实施例#   放射性标记的产物实施例#   ％RCP
  55   169   100.0
  56   170   96.0
  57   171   97.0
  58   172   95.0
  59   173   l00.0
  60   174   99.0
  61   175   98.0
  62   176   96.0
  63   177   100.0
  64   178   100.0
  65   179   99.0
  66   180   99.0
  67   181   98.0
  68   182   100.0
  69   183   98.0
  70   184   100.0
  71   185   99.0
  72   186   100.0
  73   187   93.0
  81   188   100.0
  82   189   94.0
  84   190   100.0
  86   191   100.0
  87   192   87.0
  88   193   100.0
  89   194   100.0
  90   195   100.0
  91   l96   100.0
  92   197   95.0
  93   198   96.0
  94   199   96.0
  95   200   70.0
  96   201   78.0
  97   202   87.0
  98   203   100.0
  99   204   100.0
  100   205   100.0
  101   206   100.0
  102   207   84.0
  冷实施例#   放射性标记的产物实施例#   ％RCP
  103   208   100.0
  104   209   95.0
  105   210   100.0
  106   211   100.0
  107   212   100.0
  108   213   100.0
实施例214-216
68Ga-标记的DTPA和DOTA偶联物的合成
Figure A20068003141402401
将H-d-氨基酸-酰肼-螯合剂偶联物(350μg)在NH4OAc缓冲液(0.5M，pH 6.0，450μL)中的溶液用68GaCl3(18mCi，33μmol)处理并在100℃下加热30分钟。通过与Berthold X和γ-射线检测器接合的HPLC检查所述反应混合物，其显示～100％纯度，如表5中所示。
表5.68Ga络合物
冷实施例#   放射性标记的产物实施例# ％RCP
  19   214   100.0
  11   215   100.0
  84   216   100.0
实施例219
体外血管结合试验
从新西兰白兔获得正常主动脉。从沿着腹主动脉进行了气囊剥离且置于高脂饮食(0.5％胆固醇)16-22周的新西兰白兔获得带有动脉粥样硬化斑块的主动脉。用3-F Fogarty导管沿着所述腹主动脉和左髂股动脉产生血管损伤。该方法在兔中产生具有由纤维盖覆盖的富脂质核的经加速的复杂病变发展。在37℃下将兔斑块主动脉或正常兔主动脉(0.5cm)用在磷酸盐缓冲盐水(450μL)中稀释的10nCi 14C标记的化合物或1.5μCi99mTc标记的化合物或0.135μCi111In标记的化合物或0.135μCi68Ga标记的化合物或0.135μCi153Gd标记的化合物培育2小时。收集来自该样品的上清液并通过HPLC分析从而确定化合物在血管存在中的稳定性。然后用磷酸盐缓冲盐水(3×10mL)洗涤所述血管组织。将磷酸盐缓冲盐水(10mL)加至所述组织并在37℃下培育1小时。然后将所述组织用磷酸盐缓冲盐水(3×10mL)洗涤。将所述经洗涤的组织在组织氧化剂中氧化用于C-14标记的化合物。在β计数器上确定所述经氧化的组织中的计数。将经99m Tc标记的化合物或111In标记的化合物或68Ga标记的化合物或153Gd标记的化合物培育的血管在γ计数器上计数。将化合物结合至组织的量确定为所述经培育的化合物的百分数。使用下式计算此：
Figure A20068003141402411
数据示于表7中。
表7：体外血管结合数据
  冷实施例#   放射性标记的产物实施例# 结构   组织结合％
  1   118   H-d-Leu-Ahxh-Hynic   15.74
  2   119   H-NLeu-Ahxh-Hynic   3.33
  3   120   Boc-d-Leu-Ahxh-H   14.09
  4   121   Boc-d-Leu-Apah-H   30.55
  5   122   Boc-d-Leu-NHNH2   13.99
  6   123   Boc-d-Leu-NHNH-CO-(PEG)4-NH2   9.74
  7   124   Boc-d-Leu-NHNH-CO-NHNH2   5.85
  8   125   N，N-Me2-d-Leu-Ahxh-H   4.63
  9   126   Boc-d-Leu-N(Me)-NH-Ahx-NH2   2.97
  10   155   H-d-Leu-Ahxh-DOTA   3.49
  13   127   Boc-Leu-PABA-CO-d-Leu-Ahxh-H   24.22
14 128   Ac-PL-NLys(Boc)～LL-PABA-CO-d-Leu-Ahxh-H 5.77
  19   157   H-d-Leu-Ahxh-DTPA   5.98
  20   129   Boc-d-Phe-Ahxh-H   14.42
  21   130   Boc-Aib-Ahxh-H   3.33
  22   131   Boc-d-Arg(Pmc)-Ahxh-H   5.19
  23   132   Boc-d-Glu(tBu)-Ahxh-H   2.47
  24   133   Boc-cLeu-Ahxh-H   9.10
  25   134   Boc-d-Ala-Ahxh-H   5.72
  26   135   Boc-βLeu-Ahxh-H   2.30
  27   136   Boc-d-Lys(e-Leu(Boc))-Ahxh-H   9.15
  28   137   H-Abxh-d-Leu-Boc   1.43
  29   138   Boc-d-Leu-Ambh-H   21.11
  30   139   Boc-d-Leu-Inph-H   18.36
  31   158   H-d-Leu-Inph-DTPA   4.35
  38   157   H-D-Phe-Ahxh-DTPA   9.23
  39   140   Boc-d-Leu-Gly-NH-丁基-NH2   0.52
  冷实施例#   放射性标记的产物实施例# 结构   组织结合％
  40   141   Boc-d-Leu-N(Me)-NH-Ahx-H   0.75
  41   158   H-d-Leu-Ambh-DTPA   5.29
  42   159   H-d-Leu-Apah-DTPA   10.10
  43   160   H-d-Leu-Apah-DOTA   9.59
  47   161   H-d-Phe-Ambh-DTPA   7.75
  48   162   H-d-Bip-NHNH-DTPA   6.39
  49   163   H-Pro-Ahxh-DTPA   2.61
  50   164   H-d-Phe-Apah-DTPA   13.88
  51   165   H-d-Pro-Ahxh-DTPA   5.51
  52   166   H-d-Ser(Bzl)-Ahxh-DTPA   5.91
  53   167   H-d-Cys(Bzl)-Ahxh-DTPA   9.74
  54   168   H-d-Hphe-Ahxh-DTPA   9.17
  55   169   H-d-Tyr(Et)-Apah-DTPA   13.53
  56   170   H-d-Cha-Apah-DTPA   7.55
  57   171   H-d-Leu-Apph-DTPA   16.56
  58   172   H-d-His-Ahxh-DTPA   4.22
  59   173   H-d-Cys(Bzl)-Apah-DTPA   13.82
  60   174   H-d-Phe-Apph-DTPA   17.15
  61   175   H-d-Bip-Ahxh-DTPA   32.09
  62   176   H-d-Leu-Apah-Ahx-DTPA   25.21
  63   177   H-d-Phe(CF3)-Apah-DTPA   13.53
  64   178   H-d-Tic-Apah-DTPA   6.00
  65   179   H-d-Cys(Bzl)-Ambh-DTPA   9.67
  66   180   H-d-Hphe-Apph-DTPA   18.24
  67   181   H-d-Cys(Bzl)-Apph-DTPA   13.91
  68   182   H-d-Phe-Apph-Ahx-DTPA   12.02
  69   183   H-d-1-Nal-Ambh-DTPA   24.41
  70   184   H-d-Trp-Apph-ETPA   13.08
  71   185   H-d-H2phe-Ambh-DTPA   10.64
  72   186   [H-d-Cys(Bzl)-Apph]2EDTA[APEEPA-   7.78
  冷实施例#   放射性标记的产物实施例# 结构   组织结合％
  DTPA]2
  73   187   H-d-Stya-Ambh-DTPA   13.66
77 147   Boc-d-Phe[p-(Ac-PL-NLys(Boc)～Hphe-L-NH)]-Ahxh-H 44.73
  80   150   Boc-L-d-Leu-Ahxh-H   5.36
  81   188   H-cLeu-Ahxh-DTPA   3.91
  82   189   H-d-Leu-NHNH-DTPA   1.08
  83   151   Boc-d-Aphe(ε-Leu(Boc))-Ahxh-H   26.92
  86   191   H-d-Val-Ahxh-DTPA   3.02
  87   192   H-d-Phe-NHNH-DTPA   1.78
  88   193   H-d-Aphe-Ahxh-DTPA   8.69
  89   194   H-d-Cha-Ahxh-DTPA   16.33
  90   195   H-cLeu-Ambh-DTPA   9.52
  91   196   H-d-Cha-Ambh-DTPA   8.25
  92   197   H-d-Cha-Inph-DTPA   6.97
  93   198   H-d-Val-Ambh-DTPA   5.26
  94   199   H-d-Phe-Inph-DTPA   3.36
  95   200   H-d-Nle-Ahxh-DTPA   2.72
  96   201   H-d-Leu-XInph-DTPA   2.94
  97   202   H-d-Phe-XInph-DTPA   5.44
  98   203   H-d-Hphe-Ambh-DTPA   17.96
  99   204   H-d-Phe(F5)-Ambh-DTPA   16.11
  100   205   H-d-Phe(4-NHBz)-Ambh-DTPA   8.83
  101   206   H-d-T yr(Bzl)-Ambh-DTPA   19.62
  102   207   H-Aic-Ambh-DTPA   5.26
  103   208   H-d-Trp-Ambh-DTPA   14.91
  104   209   H-d-Phe-Bbh-DTPA   20.9
  105   210   H-d-Hphe-mAmbh-DTPA   13.13
  106   211   H-d-Hphe-Ambh-Ahx-DTPA   18.09
  107   212   H-d-2-Nal-Ambh-DTPA   18.78
  冷实施例#   放射性标记的产物实施例# 结构   组织结合％
  108   213   H-d-Hphe-Pheh-AEEA-DTPA   26.68
  11   215   H-d-Leu-Ahxh-Apa-DOTA   11.54
实施例220
试验底物的氨肽酶N裂解
部分A-底物的制备
将所述试验化合物溶解于50∶50TFA∶二氯甲烷中并使其在氮气、环境温度下保持10分钟从而从所述N-末端氨基酸除去Boc保护基。将所述溶液浓缩并将所得到的油状残余物溶解于50∶50乙腈∶水且冷冻干燥。将所得到的絮状固体直接用于APN试验。
部分B-酶试验
氨肽酶N在连接至另一氨基酸的蛋白质和肽的N-末端裂解氨基酸。以8mM的浓度在100％DMSO中制备试验底物的储备溶液。将所述储备溶液(4.7μL)加至缓冲液(50mM Hepes/pH 7.5，10mM CaCl2，0.1％Brij)使得试验底物在所述反应中的最终浓度为0.5mM。向该反应溶液中加入0.02U所述酶(APN)，将所述溶液混合，并立即将30μL所述混合物转移至含有乙酸(15μL)的HPLC管形瓶中用于t＝0分钟测量。将试验管中剩余的混合物在37℃下培育25分钟。在25分钟时间点，将30μL所述混合物转移至含有乙酸(15μL)的HPLC管形瓶中用于t＝25分钟测量。通过在Zorbax SB-C18柱(4.6×150mm，5微米)上使用含有0.1％TFA的水∶乙腈梯度以1.0mL/min的流速以及以UV检测进行反相HPLC而将所述试验底物和产物分离。将峰面积积分并将底物峰面积用于确定以下方程式中的速率常数k：
K＝{(％水解的/100)*[S]}/[E]*[时间]
其中S＝试验底物的以μmol为单位的浓度
E＝氨肽酶N的单位/ml浓度
K＝底物水解的μmol/分钟/单位酶
所述试验底物的水解速率示于表8中。
表8：试验底物的APN水解速率
  化合物#   μmol/分钟/U
  13   0.33
  80   0.00
  83   0.43
实施例221
MMP底物的MMP-2和MMP-9介导的水解的动力学测量部分A-MMP-2和MMP-9的活化及活性位点滴定
将经纯化的MMP-2(10μg)或MMP-9(10μg)在100μLTCN缓冲液(50mM Tris(pH 7.5)，10mM CaCl2，150mM NaCl)中重构。通过在37℃下用1mM氨苯乙酸汞(APMA)培育16小时而将经纯化的人类MMP-9活化。通过在37℃下用1mM APMA培育2小时而将Pro-MMP-2活化。在培育结束时，向活化MMP-2以及活化MMP-9中加入100％甘油(100μL)(最终浓度50％甘油)。将活化MMP-2和活化MMP-9等分并分别在-20℃和-20℃下储存。
部分B-MMP-2/MMP-9的活性位点滴定
在动力学研究之前，通过活性位点滴定研究将活性蛋白酶的含量量化。使用以2.5mM贮液浓度溶解于100％DMSO中的GM6001来滴定MMP-9和MMP-2的活性位点。在TCN缓冲液中制备GM6001的稀释液(1∶2)从而在活性位点滴定试验中给出5nM至0.08nM GM6001的最终浓度。将经活化的MMP-2或经活化的MMP-9(2nM)在96孔黑色微量滴定板中在37℃下用增加浓度的GM6001培育并将在试验缓冲液(50mM N-三(羟甲基)甲基甘氨酸/pH 7.5，100mM CaCl2，0.2％NaN3)中的荧光底物I(Mca-P-L-G-L-Dpa-A-R-NH2)(150μL)加至每孔中。将该板在室温下剧烈振摇1分钟并在27℃下培育1小时。将所述反应用20μL 0.5M EDTA终止。将所述板在荧光分光光度计上在320nm的激发波长以及395nm的发射波长处读数。使用Morrison方程以及Kaleidagraph软件(Reading，PA)确定所述活性酶的浓度。
部分C-底物水解的动力学测量
使用放射HPLC试验来确定活性MMP-2和活性MMP-9底物水解的动力学参数。在100％DMSO中制备不同试验底物的储备溶液(1mM)。将所述试验底物的储备溶液在缓冲液(50mM Hepes/pH 7.5，10mM CaCl2，0.1％Brij)中稀释66.6倍(15nM)从而得到工作储备溶液。将所述试验底物的工作储备溶液(10μl)加至在试验管中的缓冲液(115μL)中并在37℃下温热2分钟。向该溶液中加入15μl活性MMP-2(最终浓度10nM)或活性MMP-9(最终浓度2nM)的工作储备液。最后，加入10μCi放射性标记的试验底物并将所述溶液混合且立即将67.5μl所述混合物转移至含有7.5μl 0.5M EDTA的HPLC管形瓶中用于t＝0分钟测量。将所述试验管中的剩余混合物在37℃下培育60分钟。在60分钟时间点时，将67.5μl所述混合物转移至含有7.5μL 0.5M EDTA的HPLC管形瓶中用于t＝60分钟测量。通过反相HPLC分离所述放射性标记的底物和产物，所述反相HPLC在柱温保持在25℃的ZorbaxRx-C18柱(4.6×250mm)上以1ml/min流速以及60μL样本量进行。流动相A(MPA)是25mM乙酸铵以及流动相B(MPB)是100％乙腈。使用在3分钟处2％MPB、在13分钟处40％MPB、在18分钟处80％MPB的分步梯度来分离产物和底物。通过IN/USβ内存检测器来检测所述放射性标记。将峰面积积分并将底物峰面积用于确定下述方程式中的速率常数k：
k＝(-ln(St/So))/t
其中St＝在60分钟处的底物峰
So＝在0分钟处的底物峰
T＝3600秒。
在该反应中，底物浓度比Km低得多，因此
Kcat/Km＝k/[Et](M-1S-1)
各种试验底物的Kcat/Km值列于表9中。
表9.试验底物的MMP-2和MMP-9水解的速率
Figure A20068003141402481
实施例222
ApoE小鼠体内主动脉吸收研究
载脂蛋白E(apoE)敲除小鼠是一种在头臂动脉、主动脉弓以及腹主动脉发生动脉粥样硬化病变的高胆固醇血症的模型。将小鼠以高-脂肪饮食饲养从而促进斑块形成并将化合物在以此饮食37-41周之间的小鼠中进行试验。将试验化合物进行放射性标记(14C、99mTc或111In，如上所述)并经由尾部静脉单次快速浓注以0.02-4.0mCi/kg给药给经麻醉的小鼠。在注射后0-30分钟之间经由尾部采集血样用于药代动力学分析并在60分钟用CO2使小鼠安乐死用于采集组织。用盐水经由股静脉穿过左心室引出而冲洗主动脉。然后将主动脉从心脏移至肾分叉处并采集另外的组织样品(血、肌肉、肝脏、肾脏、心脏、肺、脾以及无名动脉)。将所有样品称重并检测放射性活度。将组织吸收表示为每克组织的注射剂量百分数(％ID/g)。从％ID/g数据计算主动脉与血的比值。数据示于表10中。
表10.在ApoE小鼠中在注射后60分钟主动脉斑块吸收以及放射性标记化合物的主动脉：血比值。
Figure A20068003141402491
Figure A20068003141402501
Figure A20068003141402511
实施例223
兔子体内主动脉吸收研究
以主动脉气囊内皮损伤且接着以0.5％胆固醇饮食饲养22周而在雄性新西兰白兔(3kg)中诱导动脉粥样硬化。将试验化合物进行放射性标记(14C、99mTc或111In，如上所述)并经由耳缘静脉单次快速浓注以002-1.0mCi/kg给药给经麻醉的兔子。在注射后0、2、5、7、10、15、30和60分钟从耳中央动脉采集血样。在注射后60分钟使兔子安乐死用于组织采集(血、肌肉、胆汁、尿液、肾脏、肝脏、脾、心脏、肺、结肠、小肠、胃、睾丸)。采集腹主动脉(上部、中间以及下部)以及左右股动脉。将化合物给药给带有及不带有斑块的兔子用于比较主动脉吸收。将所有样品称重并检测放射性活度。将组织吸收表示为每克组织的注射剂量百分数(％ID/g)。从％ID/g数据计算主动脉与血的比值。数据示于表11中。
表11.在动脉粥样硬化兔模型以及正常兔中在注射后60分钟的主动脉斑块吸收以及放射性标记化合物的主动脉：血比值。
                       斑块兔                      正常兔
放射性标记的    主动脉        主动脉/血    主动脉          主动脉/血
实施例#         吸收，％ID/g               吸收，％ID/g
118             0.099         5.54         0.095            6.14
120             0.088         3.98
128             0.076         1.93
139             0.096         2.92
147             0.24          9.05
155             0.080         1.67         0.065            2.21
159             0.083         4.08
164             0.085         3.56
171             0.168         2.89         0.143            4.49
174             0.111         5.42
176             0.123         4.95
183             0.146         4.72
203             0.127         2.76         0.129            4.78
208                                        0.135            5.58
215             0.092         1.31
实施例224
ApoE小鼠体内主动脉MRI显像
图1至3所示为经该系列中的一种化合物给药的ApoE敲除小鼠的腹主动脉的磁共振图像的例子。将小鼠以高脂饮食饲养从而促进斑块形成并将化合物在以此饮食37-41周之间的小鼠中进行试验。将试验化合物经由尾部静脉单次快速浓注以0.05mmol/kg(除了实施例114，以0.1mmol/kg给药)给药给经麻醉的小鼠。在注射后1小时以4.7特斯拉使用2.5cm视野(约90微米分辨率)以黑血、流动-抑制的自旋回波法获得图像。图4是从Magnevist
Figure A20068003141402521
(钆喷酸二甲葡胺(gadopentetatedimeglumine))，一种钆的DTPA螯合物给药获得的类似图像。
能够看出，尽管背景图像强度变化，与钆喷酸二甲葡胺相比，该系列的所有化合物在主动脉中获得显著增加的相对图像强度(在这些轴面图像中显示为环形结构)。作为参考，在注射造影剂前使用相同方法获得的图像示于图5中。这表示几乎没有或没有与周围肌肉组织的对比以及与使用造影剂获得的图像相比降低的信噪比。
Figure A20068003141402531
对本领域技术人员将是显而易见的是，本公开不限于上述说明性实施例，并且其可以以其它具体形式具体表达而不背离其基本属性。因此，所需的是，所述实施例在各个方面都考虑为是说明性的而非限制性的，以所附的权利要求为参考，而非上述实施例，以及因此拟将所有落入权利要求等价物的意思和范围内的变化都包括于此。
权利要求书(按照条约第19条的修改)
1.一种式(I)的化合物
或其药学上可接受的盐；其中
A为D-氨基酸残基或由D-氨基酸残基和第二D-氨基酸组成的肽；
D1和D2独立地选自氢、螯合剂以及显像部分；
L1为连接物，条件是L1不含有氨基酸残基；或
L1和D2与它们所连接的氮原子一起形成五-到七-元环；以及
R1和R2独立地选自氢及烷基。
2.权利要求1的化合物，其中D1和D2至少一个为显像部分。
3.权利要求2的化合物，其中所述显像部分由非金属同位素组成。
4.权利要求3的化合物，其中所述非金属同位素为14C、13N、18F、123I或125I。
5.权利要求1的化合物，其中L1为选自亚烷基、亚烯基、亚芳基、亚杂烷基、亚芳烷基及亚杂环基的连接物。
6.权利要求5的化合物，其中L1为亚烷基。
7.权利要求5的化合物，其中L1为亚芳烷基。
8.权利要求1的化合物，其中A为D-氨基酸残基。
9.权利要求8的化合物，其中A是
Figure A20068003141402552
其中
n为0-6；

Claims (30)

1. 一种式(I)的化合物
Figure A2006800314140002C1
或其药学上可接受的盐；其中
A为D-氨基酸残基或由D-氨基酸残基和第二D-氨基酸组成的肽；
D1和D2独立地选自氢、螯合剂以及显像部分；
L1为连接物；或
L1和D2与它们所连接的氮原子一起形成五-到七-元环；以及
R1和R2独立地选自氢及烷基。
2. 权利要求1的化合物，其中D1和D2至少一个为显像部分。
3. 权利要求2的化合物，其中所述显像部分由非金属同位素组成。
4. 权利要求3的化合物，其中所述非金属同位素为14C、13N、18F、123I或125I。
5. 权利要求1的化合物，其中L1为选自亚烷基、亚烯基、亚芳基、亚杂烷基、亚芳烷基及亚杂环基的连接物。
6. 权利要求5的化合物，其中L1为亚烷基。
7. 权利要求5的化合物，其中L1为亚芳烷基。
8. 权利要求1的化合物，其中A为D-氨基酸残基。
9. 权利要求8的化合物，其中A是
Figure A2006800314140002C2
其中
n为0-6；
Ar为芳基基团；以及
Rx及Ry独立地选自氢、烯基、烷氧基羰基、烷基羰基、烷基、芳基及芳烷基。
10. 权利要求9的化合物，其中
n为2；
Ar为苯基；以及
Rx和Ry为氢。
11. 权利要求1的化合物，其中D1和D2中的一个为氢且另一个为螯合剂。
12. 权利要求11的化合物，进一步包含显像剂。
13. 权利要求11的化合物，其中D1与D2中的一个为氢且另一个为式(II)的螯合剂
Figure A2006800314140003C1
其中
o、p、q、r、s、t及u各自独立地为1-6。
14. 权利要求13的化合物，其中
o、r、s、t及u各自为1；以及
p及q各自为2。
15. 一种诊断剂，其包含：
a.式(III)的化合物
Figure A2006800314140003C2
或其药学上可接受的盐，其中
A为D-氨基酸残基或由D-氨基酸残基和第二D-氨基酸组成的肽；
D1和D2独立地选自氢及螯合剂；
L1为连接物；或
L1和D2与它们所连接的氮原子一起形成五-到七-元环；以及
R1和R2独立地选自氢及烷基；以及
b.显像剂。
16. 权利要求15的诊断剂，其中所述显像剂为产生回声的物质、光学指示剂、硼中子吸收剂、顺磁性金属离子、铁磁性金属、发射γ射线的放射性同位素、发射正电子的放射性同位素或X射线吸收剂。
17. 权利要求16的诊断剂，其中所述显像剂为顺磁性金属离子。
18. 权利要求17的诊断剂，其中所述顺磁性金属离子为Gd(III)。
19. 权利要求16的诊断剂，其中所述显像剂为选自99mTc、95Tc、111In、62Cu、64Cu、67Ga、68Ga及153Gd的发射γ射线的放射性同位素或发射正电子的放射性同位素。
20. 权利要求19的诊断剂，其中所述发射γ射线的放射性同位素是99mTc。
21. 权利要求19的诊断剂，其中所述发射γ射线的放射性同位素是111In。
22. 一种化合物，其是
Figure A2006800314140004C1
或其药学上可接受的盐。
23. 一种诊断剂，其是
Figure A2006800314140005C1
或其药学上可接受的盐。
24. 一种诊断剂，其是
或其药学上可接受的盐，其中Ar选自苯基、间苯磺酸或对苯磺酸。
25. 一种诊断剂，其是
Figure A2006800314140005C3
或其药学上可接受的盐。
26. 一种组合物，其包含：
(a)权利要求1的化合物；以及
(b)药学上可接受的载体。
27. 一种组合物，其包含：
(a)权利要求15的诊断剂；以及
(b)药学上可接受的载体。
28. 一种用于在患者中检测、显像和/或监测冠状动脉斑块、颈动脉斑块、主动脉斑块、任何动脉血管斑块、动脉瘤、脉管炎和/或其它的动脉壁疾病的存在的试剂盒，其包含：
a.式(III)的化合物
Figure A2006800314140006C1
或其药学上可接受的盐，其中
A为D-氨基酸残基或由D-氨基酸残基和第二D-氨基酸组成的肽；
D1和D2独立地选自氢及螯合剂；
L1为连接物；或
L1和D2与它们所连接的氮原子一起形成五-到七-元环；以及
R1和R2独立地选自氢及烷基；
b.显像剂；
c.药学上可接受的载体；以及
d.用于制备包含用于在患者中检测、显像和/或监测冠状动脉斑块、颈动脉斑块、主动脉斑块、任何动脉血管斑块、动脉瘤、脉管炎和/或其它的动脉壁疾病的存在的诊断剂的组合物的说明书。
29. 一种在患者中检测、显像和/或监测冠状动脉斑块、颈动脉斑块、主动脉斑块、任何动脉血管斑块、动脉瘤、脉管炎和/或其它的动脉壁疾病的存在的方法，其包括以下步骤：
a.将权利要求1的化合物给药给患者；以及
b.通过诊断显像技术在患者中获得所述化合物集中部位的影像。
30. 一种在患者中检测、显像和/或监测冠状动脉斑块、颈动脉斑块、主动脉斑块、任何动脉血管斑块、动脉瘤、脉管炎和/或其它的动脉壁疾病的存在的方法，其包括以下步骤：
a.将权利要求15的诊断剂给药给患者；以及
b.通过诊断显像技术在患者中获得所述化合物集中部位的影像。
CNA2006800314144A 2005-06-30 2006-06-28 作为显像剂的酰肼偶联物 Pending CN101252954A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US69549605P 2005-06-30 2005-06-30
US60/695,496 2005-06-30

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101252954A true CN101252954A (zh) 2008-08-27

Family

ID=37137580

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2006800314144A Pending CN101252954A (zh) 2005-06-30 2006-06-28 作为显像剂的酰肼偶联物

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20070014721A1 (zh)
EP (1) EP1896086A1 (zh)
JP (1) JP2009500410A (zh)
KR (1) KR20080022588A (zh)
CN (1) CN101252954A (zh)
AU (1) AU2006266074A1 (zh)
CA (1) CA2613439A1 (zh)
NO (1) NO20076423L (zh)
WO (1) WO2007005491A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102558291A (zh) * 2010-12-17 2012-07-11 北京大学人民医院 一种双模分子影像探针
CN107771085A (zh) * 2015-04-17 2018-03-06 斯米克Ip有限公司 生物缀合物及其用途

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0907612A2 (pt) 2008-01-08 2015-07-21 Lantheus Medical Imaging Inc Conjugados de n-coxiamida como agentes de imageamento
WO2010056205A1 (en) 2008-11-11 2010-05-20 Nanyang Technological University Intravascular contrast agents
US8877157B2 (en) 2009-07-08 2014-11-04 Lantheus Medical Imaging, Inc. N-alkoxyamide conjugates as imaging agents
US9144415B2 (en) 2010-03-26 2015-09-29 The University Of Tokushima Carotid-artery-plaque ultrasound-imaging method and evaluating device
GB201102189D0 (en) 2011-02-08 2011-03-23 King S College London Materials and methods relating to cardiovascular imaging
EP2775906B1 (en) 2011-11-11 2019-07-03 Yale University Evaluation of presence of and vulnerability to atrial fibrillation and other indications using matrix metalloproteinase-based imaging
CN110809478A (zh) 2017-07-07 2020-02-18 斯米克Ip有限公司 合成的生物缀合物
PT3681475T (pt) 2017-10-16 2021-03-08 Faes Farma Sa Composições aquosas compreendendo bilastina e mometasona
MX2018003175A (es) * 2018-03-14 2019-09-16 Instituto Nac De Investigaciones Nucleares 177lu-dota-hynic-ipsma como un radiofarmaco terapeutico dirigido al antigeno prostatico especifico de membrana.
EP4297804A1 (en) * 2021-02-26 2024-01-03 Telix Pharmaceuticals (Innovations) Pty Ltd Solid phase synthesis of glutamate-urea-lysine derived (gul derived) prostate-specific membrane antigen (psma) targeting conjugates and their use as precursors for therapeutic and / or diagnostic agents

Family Cites Families (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4859777A (en) * 1981-07-01 1989-08-22 Eastman Kodak Company Terpyridine chelating agents
US4452774A (en) * 1982-04-30 1984-06-05 President And Fellows Of Harvard College Isonitrile radionuclide complexes for labelling and imaging agents
WO1987002893A1 (en) * 1985-11-18 1987-05-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Polychelating agents for image and spectral enhancement (and spectral shift)
CA1305160C (en) * 1985-12-23 1992-07-14 Paul Louis Bergstein Ether isonitriles and radiolabeled complexes thereof
US4913891A (en) * 1986-04-17 1990-04-03 The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy Positron emitter labeled enzyme inhibitors
US5567411A (en) * 1986-11-10 1996-10-22 State Of Oregon Acting By And Through The State Board Of Higher Education On Behalf Of The University Of Oregon Dendritic amplifier molecules having multiple terminal active groups stemming from a benzyl core group
US5252317A (en) * 1986-11-10 1993-10-12 The State Of Oregon Acting By And Through The State Board Of Higher Education On Behalf Of The University Of Oregon Amplifier molecules for diagnosis and therapy derived from 3,5-bis[1-(3-amino-2,2-bis (aminomethyl)-propyl) oxymethyl] benzoic acid
US5064956A (en) * 1987-06-24 1991-11-12 The Dow Chemical Company Process for preparing mono-n-alkylated polyazamacrocycles
US5026537A (en) * 1989-04-06 1991-06-25 Centocor, Inc. Methods for imaging atherosclerotic plaque
US5087440A (en) * 1989-07-31 1992-02-11 Salutar, Inc. Heterocyclic derivatives of DTPA used for magnetic resonance imaging
GB8923843D0 (en) * 1989-10-23 1989-12-13 Salutar Inc Compounds
GB9006977D0 (en) * 1990-03-28 1990-05-23 Nycomed As Compositions
ATE187340T1 (de) * 1991-03-27 1999-12-15 Nycomed Salutar Inc Kontrastmittel
GB9209641D0 (en) * 1992-05-02 1992-06-17 Johnson Matthey Plc Improvements in radiolabelling
US5760191A (en) * 1993-02-05 1998-06-02 Nycomed Imaging As Macrocyclic complexing agents and targeting immunoreagents useful in therapeutic and diagnostic compositions and methods
US5744120A (en) * 1993-03-30 1998-04-28 The Dupont Merick Pharmaceutical Company Ternary radiopharmaceutical complexes
US5750088A (en) * 1993-03-30 1998-05-12 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Stable hydrazones linked to a peptide moiety as reagents for the preparation of radiopharmaceuticals
HU222574B1 (hu) * 1993-03-31 2003-08-28 Mallinckrodt Medical Inc. Redukálószerként foszfinokat tartalmazó radioaktív gyógyászati készítmények és az ezeket tartalmazó készletek
US5417959A (en) * 1993-10-04 1995-05-23 Mallinckrodt Medical, Inc. Functionalized aza-crytand ligands for diagnostic imaging applications
US5520904A (en) * 1995-01-27 1996-05-28 Mallinckrodt Medical, Inc. Calcium/oxyanion-containing particles with a polymerical alkoxy coating for use in medical diagnostic imaging
SE515621C2 (sv) * 1995-05-08 2001-09-10 Ericsson Telefon Ab L M Förfarande vid lägesbestämning
US5801228A (en) * 1995-06-07 1998-09-01 Nycomed Imaging As Polymeric contrast agents for medical imaging
IT1275571B (it) * 1995-07-19 1997-08-07 Consiglio Nazionale Ricerche Substrati fluorogenici suscettibili di fotoattivazione previa trasformazione per via enzimatica atti alla diagnosi ed alla terapia fotodinamica dei tumori
ES2217408T3 (es) * 1996-04-01 2004-11-01 Epix Medical, Inc. Agentes diagnosticos de contraste para formacion de imagenes bioactivados.
US5804161A (en) * 1996-05-14 1998-09-08 Nycomed Salutar Inc. Contrast agents
DE19717904A1 (de) * 1997-04-23 1998-10-29 Diagnostikforschung Inst Säurelabile und enzymatisch spaltbare Farbstoffkonstrukte zur Diagnostik mit Nahinfrarotlicht und zur Therapie
AU9307498A (en) * 1997-09-08 1999-03-29 General Hospital Corporation, The Imaging agents for early detection and monitoring of cardiovascular plaque
US6083486A (en) * 1998-05-14 2000-07-04 The General Hospital Corporation Intramolecularly-quenched near infrared fluorescent probes
US5980863A (en) * 1998-11-02 1999-11-09 Eagle Vision Pharmaceutical Corporation Manganese compositions and methods for MRI
US6254852B1 (en) * 1999-07-16 2001-07-03 Dupont Pharmaceuticals Company Porous inorganic targeted ultrasound contrast agents
US20030004141A1 (en) * 2001-03-08 2003-01-02 Brown David L. Medical devices, compositions and methods for treating vulnerable plaque

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102558291A (zh) * 2010-12-17 2012-07-11 北京大学人民医院 一种双模分子影像探针
CN107771085A (zh) * 2015-04-17 2018-03-06 斯米克Ip有限公司 生物缀合物及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
KR20080022588A (ko) 2008-03-11
AU2006266074A1 (en) 2007-01-11
US20070014721A1 (en) 2007-01-18
JP2009500410A (ja) 2009-01-08
WO2007005491B1 (en) 2007-04-12
WO2007005491A1 (en) 2007-01-11
EP1896086A1 (en) 2008-03-12
NO20076423L (no) 2008-03-27
CA2613439A1 (en) 2007-01-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101252954A (zh) 作为显像剂的酰肼偶联物
NO319680B1 (no) Perfluorholdige metallkomplekser, fremgangsmate for fremstilling av dem, farmasoytiske midler som inneholder dem og anvendelse av dem for fremstilling av farmasoytiske midler til anvendelse som kontrastmidler.
AU2018200419A1 (en) Labeled inhibitors of prostate specific membrane antigen (PSMA), their use as imaging agents and pharmaceutical agents for the treatment of prostate cancer
CN107427699A (zh) 用于治疗疾病的kdm1a抑制剂
AU2001270025B2 (en) Vitronectin receptor antagonist pharmaceuticals for use in combination therapy
WO2023098920A1 (zh) 一种双重靶向化合物及其制备方法和应用
JP2007504242A (ja) マトリックスメタロプロテイナーゼ基質含有化合物およびそれらの使用法
TW477699B (en) Pharmaceutical agents that contain perfluoroalkyl-containing metal complexes and their use in tumor therapy and interventional radiology
CN110035996A (zh) 用于磁共振成像的新型高弛豫性钆螯合物
CN105636978A (zh) 线性肽抗生素
JP2001500152A (ja) 標識化エラスターゼ・インヒビター
WO2024026072A1 (en) Fibroblast activation protein-targeted compositions and methods of use thereof
JP6087386B2 (ja) 造影剤としてのｎ−アルコキシアミド抱合体
EP1257549A2 (en) Matrix metalloproteinase inhibitors and uses thereof
JP5475454B2 (ja) 過弗素化されたｐｅｇ基を有する金属キレート類、それらの製剤方法、及びそれらの使用
JP4878119B2 (ja) エナンチオマー純粋な（４Ｓ，８Ｓ）−及び（４Ｒ，８Ｒ）−４−ｐ−ニトロベンジル−８−メチル−３，６，９−トリアザ−３Ｎ，６Ｎ，９Ｎ−トリカルボキシメチル−１，１１−ウンデカン二酸及びそれらの誘導体、それらの製造方法並びに医薬品の製造のためのそれらの使用
WO2022101352A1 (en) Ligands of prostate specific membrane antigen (psma) containing heteroaromatic linker building blocks
EP1437145A1 (en) Enhanced scintigraphic imaging agents for imaging of infection and inflammation
WO2024183618A1 (zh) 一种含氮杂环类化合物及其制备方法与用途
US20240115744A1 (en) Fibrin-binding compounds for imaging and treatment
EP3694826A1 (en) Universal building blocks for radiolabeling
TW215091B (zh)
ITMI980476A1 (it) Chelati complessi di manganese ad alta relassivita' in siero
JP5162081B2 (ja) エナンチオマー純粋な（４Ｓ，８Ｓ）−及び（４Ｒ，８Ｒ）−４−ｐ−ベンジル−８−メチル−３，６，９−トリアザ−３Ｎ，６Ｎ，９Ｎ−トリカルボキシメチル−１，１１−ウンデカン二酸と生体分子との結合体、その塩の製造方法並びに医薬品の製造のためのそれらの使用
WO2024044755A2 (en) Extracellular hsp90 (ehsp90)-targeted radiopharmaceuticals and use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication