CN101234205B - 具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊及其制备方法。该纳米胶囊由两种聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物混合组装而成，其中一种嵌段共聚物的聚乳酸链端接有阿霉素，在纳米胶囊中的摩尔比例为98-70％；另一种嵌段共聚物的聚乙二醇链端接有乳糖，在纳米胶囊中的摩尔比例为2-30％。连接在聚乳酸链段上的阿霉素处于胶囊内核，受聚乳酸和聚乙二醇的双重保护，具有缓释功能；连接在聚乙二醇链端的乳糖处于胶囊外层，具有靶向功能，使纳米胶囊优先进入携带乳糖受体的细胞。
Description
技术领域
本发明涉及具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊及其制备方法，属于高分子药物领域。
背景技术
阿霉素为一种蒽环类抗肿瘤抗生素，为细胞周期非特异性药，对S期作用最强，对M、G1和G2期也有作用，其作用机制主要是阿霉素不经分子嵌入DNA而抑制核酸的合成。主要用于治疗急性白血病、恶性淋巴瘤、肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、乳腺癌、宫颈癌、膀胱癌、睾丸癌、甲状腺癌、软组织肿瘤、骨肉瘤和神经母细胞癌等。目前临床给药多为静脉滴注，但阿霉素不能透过血脑屏障，且静注后该药迅速分布全身，对骨髓和心脏都有较为严重的毒副作用，尽管用药剂量很大，能到达病灶部位发挥疗效的比例却很低。
高分子作为药物输送的载体，具有多种形式。近期迅速发展起来的是微米和纳米尺度的高分子药物载体，包括微米或纳米颗粒、胶束、囊泡和纤维。它们的基本特征，是将药物分子物理分散到这些微米或纳米载体中，利用载体的某种特性，实现药物的定位输送和/或控制释放。这种担载方式总有一个难以克服的缺点：初期暴释。克服上述缺点的有效办法是改成“化学担载”，即将药物分子化学键合到高分子上。通过与高分子的键合，改善药物本身的某种性能或不足，如水溶性，从而开发新的剂型，提高原药的疗效，降低原药的毒副作用。一些脂溶性药物如紫杉醇和阿霉素与具聚乙二醇或聚氨基酸的键合物，属于这一类。已进入临床或临床前研究阶段。
纳米至微米尺度高分子药物或高分子微粒担载药物的显著特征是“增强的渗透和滞留效应”，即EPR效应。EPR效应的直接结果，就是抗癌药物在癌变部位的富集，形成“病灶部位靶向”，到达病灶部位的药物的药效得到充分发挥，因而可以减少给药频率和剂量，减少非靶部位的药物聚集和毒副作用。到目前为止，EPR效应作为高分子载体药物设计的基础和依据，已经引起了人们广泛的研究兴趣。但毛细血管的通透性本身就是一个很复杂的问题，不同的器官、组织，不同的病变，以及不同的病变阶段，毛细血管的结构和通透性都会变化，因此，至今尚不能主动地利用EPR效应来精确设计高分子药物的大小。
在朝着“细胞靶向”努力奋斗的过程中，人们创造了一系列的靶向技术，除了基于材料pH敏感性的胃肠靶向外，还有基于叶酸的癌变组织靶向，基于乳糖的肝靶向，以及“磁靶向”等。中国专利(申请号200610034163.7)公开了一种同时负载药物和纳米磁性颗粒的可生物降解胶囊的制备方法；中国专利CN 101032623 A公开了一种有叶酸受体介导的靶向性壳聚糖类载体及制备方法和应用；中国专利CN 1683016A公开了一种胶质瘤靶向化疗的表面含转铁蛋白载药微粒制备方法。
在发明人已经申请的中国专利(中国专利申请号200410011176.3和200610016559.9)中，公开了两种紫杉醇高分子键合药。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊。该纳米胶囊由两种聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物(PEG-PLA-Dox和Lac-PEG-PLA)混合组装而成，两者的聚乙二醇链段之间和聚乳酸链段之间数均分子量的差别，均不超过±10％；其中一种嵌段共聚物的聚乳酸链端接有阿霉素(Dox)，即PEG-PLA-Dox，在纳米胶囊中的摩尔比例为98-70％；另一种嵌段共聚物的聚乙二醇链端接有乳糖(Lac)，即Lac-PEG-PLA，在纳米胶囊中的摩尔比例为2-30％。这种纳米胶囊的结构示意图见图1。连接在聚乳酸链段上的阿霉素(Dox)处于胶囊内核，受聚乳酸和聚乙二醇的双重保护，具有缓释功能；连接在聚乙二醇链端的乳糖处于胶囊外层，具有靶向功能，靶标为乳糖受体过表达的癌细胞。所以本发明将“键合技术”和“靶向技术”相结合，可同时实现阿霉素的靶向输送和可控释放，并以“混合胶束”作为自己的特征。
本发明的另一目的是提供上述具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊的制备方法，其步骤和条件如下：
(1)含有端羧基的嵌段共聚物PEG-PLA-COOH和阿霉素的氨基缩合，合成聚乙二醇-聚乳酸-阿霉素键合药(PEG-PLA-Dox)，该合成反应如下：
反应条件为：在三乙胺(TEA)的存在下，在二甲基亚砜(DMSO)溶液中，将嵌段共聚物的端羧基与阿霉素的氨基进行缩合反应，获得高分子阿霉素键合药；其中，端羧基嵌段共聚物在DMSO溶液中的质量浓度为5-20％；阿霉素的用量是嵌段共聚物端羧基摩尔数的1-2倍，TEA与阿霉素等摩尔量，反应时间是12-36h，反应温度为0℃，合成的聚乙二醇-聚乳酸-阿霉素键合药(PEG-PLA-Dox)中阿霉素的质量含量为10-30％，聚乙二醇的数均分子量400-5000，聚乳酸的数均分子量1000-10000。典型的PEG-PLA-Dox的核磁共振图谱见图2。
(2)合成乳糖-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物(Lac-PEG-PLA)，其中聚乙二醇的数均分子量400-5000，聚乳酸的数均分子量1000-10000，聚乙二醇和聚乳酸分别与步骤(1)的聚乙二醇段和聚乳酸段的数均分子量相差不超过±10％；
所述的步骤(2)中的乳糖-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物的合成反应如下所示：
其步骤和条件如下：
(a)以叔丁氧羰基保护的氨基聚乙二醇(NBoc-PEG-OH)为引发剂，以辛酸亚锡或二乙基锌为催化剂，在甲苯溶液中进行左旋丙交酯的开环聚合，获得带保护端氨基的嵌段共聚物NBoc-PEG-PLA，其中NBoc-PEG-OH中PEG的数均分子量为400-5000，与步骤(1)所用PEG-PLA-COOH中的PEG链段的数均分子量相差不超过±10％；丙交酯的用量由NBoc-PEG-OH的用量计算得到，参照步骤(1)所用PEG-PLA-COOH中PEG与PLA的比例，过量0-10％；辛酸亚锡或二乙基锌催化剂的用量是丙交酯单体摩尔量的0.01-0.5％，甲苯用量是NBoc-PEG-OH和丙交酯总质量的3-10倍，聚合温度110-180℃，聚合时间12-48h；聚合产物用沉淀剂甲醇、乙醇或乙醚沉降，过滤，洗涤，真空干燥。
(b)脱除嵌段共聚物NBoc-PEG-PLA中的保护基团NBoc，具体方法是：将步骤(a)中所得到的带保护端氨基的嵌段共聚物NBoc-PEG-PLA在二氯甲烷和三氟乙酸的混合溶剂中0℃条件下搅拌2-4h；二氯甲烷与三氟乙酸的体积比为(1-3)∶1，聚合物在混合溶剂中的质量百分数为10-20％，然后旋转蒸发除去二氯甲烷和三氟乙酸，向得到的固体中加入三乙胺，三乙胺的体积是三氟乙酸体积的1-2倍，10-30℃条件下搅拌6-10h，聚合产物用沉淀剂甲醇、乙醇或乙醚沉降，过滤，洗涤，真空干燥，获得端氨基的嵌段共聚物NH2-PEG-PLA。
(c)将嵌段共聚物NH2-PEG-PLA的端氨基和乳糖反应，得到聚乙二醇端含有乳糖基元的嵌段共聚物Lac-PEG-PLA。其中乳糖用量是嵌段共聚物端氨基的5-10倍，反应介质是二甲基亚砜(DMSO)，其用量是反应物总量的5-20倍，反应催化剂是NaBH3CN，其用量与乳糖等摩尔，反应温度为20-50℃，反应时间为1-3天，最后用沉淀剂甲醇、乙醇或乙醚沉降，过滤，洗涤，真空干燥。
典型Lac-PEG-PLA样品的核磁共振图谱见图3。
(3)把PEG-PLA-Dox和Lac-PEG-PLA按摩尔比(98-70)∶(2-30)混合，用透析法制成混合纳米胶囊，具体的步骤和条件是：
(a)将两种嵌段共聚物溶于有机溶剂中，所用的有机溶剂是丙酮、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或它们中任意两种或三种的混合物，有机溶剂体积的毫升数是高分子键合药质量克数的4-100倍；PEG-PLA-Dox和Lac-PEG-PLA的摩尔比为(98-70)∶(2-30)。
(b)在搅拌条件下，向上述两种嵌段共聚物的混合溶液中滴加二次蒸馏水，形成混合纳米胶束水溶液，水的体积是有机溶剂体积的1-5倍。
(c)将混合纳米胶束水溶液进行透析，除去溶液中的有机溶剂，透析膜截流分子量3000g/mol，透析介质为二次蒸馏水，4-8小时更换一次，共透析24-72小时。
(d)将透析后的混合纳米胶束水溶液浓缩到质量浓度0.5-5％，可以采用旋转蒸发或超滤膜法浓缩。
(e)将浓缩后的混合纳米胶束水溶液冷冻干燥，得到具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊。
上述具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊的制备方法中，如在步骤(3)的(a)中使用挥发性较强的有机溶剂丙酮或四氢呋喃或者两者的混合溶剂，步骤(c)和(d)改用旋转蒸发的方法，除去阿霉素键合药纳米胶束混合水溶液中的挥发性有机溶剂，旋转蒸发的时间是2-8小时，至溶液总体积的毫升数达到键合药质量克数的20～200倍。
为了增加冻干后的纳米胶囊的溶解性，在步骤(3)中(e)的冻干之前，在纳米胶束水溶液中添加增溶剂乳糖、甘露醇、水解明胶、氯化钠、葡萄糖或它们的混合物，混合均匀；增溶剂用量为胶束水溶液中生物降解高分子阿霉素键合药质量的50-200％。
图4给出了具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊的形貌和粒径分布。它们分别由透射电镜和光散射方法测定。
本发明的有益效果：本发明采用混合胶束的方法制备具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊。由聚乳酸分子链端接有阿霉素和聚乙二醇分子链端接有乳糖单元的两种聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物按给定比例混合组装而成。众所周知，聚乳酸是一种完全生物降解的聚合物，已被美国FDA批准在人体内使用。它以玉米淀粉为原料，价廉易得，经发酵获得乳酸，再聚合为聚乳酸，生产成本相对较低。
本发明所制备的高分子阿霉素键合药和乳糖-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物都具有双亲性，而且它们中的聚乙二醇-聚乳酸嵌段的长度相同或相近，它们的混合物可以在水介质中自组装成复合纳米颗粒，由于阿霉素连接在聚乳酸链端，它被包裹在纳米粒子的内部(见图1)，受聚乳酸和聚乙二醇双重保护，免受人体免疫系统的攻击，因而可以降低用药剂量，减少毒副反应；由于与高分子结合牢固，阿霉素分子不会直接通过扩散从胶囊中逃逸出来。由于乳糖分子连接在聚乙二醇链端，它处于纳米胶囊的最外层，发挥“探针”的作用，容易被乳糖的受体所识别和结合，因而使整个纳米胶囊对乳糖受体过表达的细胞有靶向作用，优先将阿霉素送到携带乳糖受体的细胞。
本发明所使用的聚乙二醇的高度亲水性使它处于纳米胶束的外围，由于人体免疫系统对聚乙二醇不敏感，这种在聚乙二醇保护下的阿霉素键合药的纳米胶束可以在血液循环系统中滞留很长时间而不被免疫细胞吞噬，具有长期药效。所选用的聚乙二醇的分子量在5000以下，在聚乳酸段降解后，可经肾脏排出体外。
本发明所制备的Lac-PEG-PLA/PEG-PLA-Dox混合纳米胶束的靶向性能见图5。这是用人的肝癌H7402细胞试验的结果。红色是阿霉素的荧光。由图可见，由于乳糖单元的靶向效应，纳米颗粒不但在肝癌细胞的表面聚集，而且被内吞到细胞内。这些阿霉素纳米颗粒显然会有较好的杀灭癌细胞的作用。如图6所示，Lac-PEG-PLA/PEG-PLA-Dox混合纳米胶束的细胞抑制率和纯的阿霉素相当，与单纯的PEG-PLA-Dox纳米胶束相比，有显著的差异。考虑到纳米胶束的缓释功能，在较长的时间尺度上观察，混合纳米胶束的细胞抑制率会更好。
附图说明
图1：靶向胶束自组装的示意图，其中Dox＝阿霉素，PLA＝聚乳酸链段，PEG＝聚乙二醇链段，Lac＝乳糖。
图2：高分子键合阿霉素PEG-PLA-Dox的1H NMR谱图。
图3：含糖端基的嵌段共聚物Lac-PEG-PLA的1H NMR谱图。
图4：典型Lac-PEG-PLA/PEG-PLA-Dox混合纳米胶束的形貌图(a)和粒径分布图(b)。
图5：H7402细胞的荧光显微照片。细胞培养液中分别添加Lac-PEG-PLA/PEG-PLA-Dox混合纳米胶束(质量比3∶7)，有效Dox含量100ng/mL。细胞培养4小时。
图6：H7402细胞的细胞抑制率。细胞培养液中分别添加Lac-PEG-PLA/PEG-PLA-Dox混合纳米胶束(■)、PEG-PLA-Dox纳米胶束(▲)和Dox纯药(
)。细胞培养4小时。
具体实施方式
实施例1：聚乙二醇-聚乳酸-阿霉素键合药(PEG-PLA-Dox)的合成
在50ml的安瓶中加入1.1g端羧基嵌段聚合物PEG-PLA-COOH，其中PEG段分子量为400，PLA段分子量为4000。然后加入20ml无水二甲基亚砜，待聚合物溶解后，加入200mg阿霉素、0.06ml TEA和50mg DMAP，0℃下反应24h，滤掉反应过程中生成的沉淀，滤液用无水乙醚沉降，得到白色沉淀物，真空干燥。阿霉素在键合药中的质量含量为12％。
实施例2：叔丁氧羰基保护的氨基的嵌段共聚物(NBoc-PEG-PLA)的制备
将2g分子量为400的NBoc-PEG-OH加入到带有分水器、回流冷凝管和磁搅拌子的干燥安瓶中，加入无水甲苯40ml，共沸除水30分钟，然后冷却到室温，加入20g用乙酸乙酯重结晶三次的丙交酯(LA)单体，反应瓶用高纯氩气换气三次，然后加入为LA单体摩尔数1/500的辛酸亚锡，110℃下搅拌反应12h，然后将产物溶于适量二氯甲烷，用乙醚沉降，得到白色产物，在40℃下真空干燥，即得NBoc-PEG-PLA嵌段聚合物，其数均分子量为4400(由1H NMR算出)。
实施例3：端氨基的嵌段共聚物NH2-PEG-PLA的合成
1.1g嵌段共聚物NBoc-PEG-PLA溶解在10ml二氯甲烷和5ml三氟乙酸的混合溶剂中，在0℃条件下搅拌2h，然后旋转蒸发除去二氯甲烷和三氟乙酸。向得到的固体中加入10ml三乙胺，室温搅拌8h。反应产物用乙醚沉降，过滤，洗涤，真空干燥，得到端氨基的嵌段共聚物NH2-PEG-PLA，其数均分子量为4300。
实施例4：乳糖-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物(Lac-PEG-PLA)的合成
将0.55g端氨基的聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物和0.2g乳糖溶于5mlDMSO中，加入0.3g NaBH3CN，反应体系在20℃反应72h。产物用乙醚沉降，洗涤，过滤，真空干燥。
实施例5：制备PEG-PLA-Dox和Lac-PEG-PLA的混合纳米胶囊。
取0.98g阿霉素键合药PEG-PLA-Dox和0.02g连接有乳糖的嵌段共聚物Lac-PEG-PLA，溶解于10ml丙酮中，缓慢加入50ml二次蒸馏水，旋转蒸发除去丙酮，至混合胶束水溶液体积减至40ml。在得到的纳米胶束水溶液中添加增溶剂乳糖和氯化钠各0.5g，混合均匀；然后冷冻干燥，得到具有乳糖靶向的高分子阿霉素键合药纳米胶束的冻干粉。
实施例6：聚乙二醇-聚乳酸-阿霉素键合药(PEG-PLA-Dox)的合成
在50ml的安瓶中加入1g端羧基嵌段聚合物PEG-PLA-COOH，其中PEG段分子量为1000，PLA段分子量为1000。然后加入20ml无水二甲基亚砜，待聚合物溶解后，加入300mg阿霉素、0.1ml TEA和80mg DMAP，0℃下反应24h，滤掉反应过程中生成的沉淀，滤液用无水乙醚沉降，得到白色沉淀物，真空干燥。阿霉素在键合药中的质量含量为21％。
实施例7：叔丁氧羰基保护的氨基的嵌段共聚物(NBoc-PEG-PLA)的制备
将2g分子量为1000的NBoc-PEG-OH加入到带有分水器、回流冷凝管和磁搅拌子的干燥安瓶中，加入无水甲苯40ml，共沸除水30分钟，然后冷却到室温，加入2g用乙酸乙酯重结晶三次的丙交酯(LA)单体，反应瓶用高纯氩气换气三次，然后加入为LA单体摩尔数1/500的辛酸亚锡，110℃下搅拌反应12h，然后将产物溶于适量二氯甲烷，用乙醚沉降，得到白色产物，在40℃下真空干燥，即得NBoc-PEG-PLA嵌段聚合物，其数均分子量为2000(由1HNMR算出)。
实施例8：端氨基的嵌段共聚物NH2-PEG-PLA的合成
1g嵌段共聚物NBoc-PEG-PLA溶解在10ml二氯甲烷和8ml三氟乙酸的混合溶剂中，在0℃条件下搅拌3h。然后旋转蒸发除去二氯甲烷和三氟乙酸。向得到的固体中加入15ml三乙胺。室温搅拌8h.聚合产物用乙醚沉降，过滤，洗涤，真空干燥，得到端氨基的嵌段共聚物NH2-PEG-PLA，其数均分子量为1900。
实施例9：乳糖-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物(Lac-PEG-PLA)的合成
将实施例8得到的端氨基的聚乙二醇-脂肪族聚酯嵌段共聚物0.5g和0.4g乳糖溶于10ml DMSO中，加入0.6g NaBH3CN，反应体系在20℃反应36h。产物用乙醚沉降，洗涤，过滤，真空干燥。
实施例10：制备PEG-PLA-Dox和Lac-PEG-PLA混合胶束的纳米胶囊。
取0.75g阿霉素键合药PEG-PLA-Dox和0.25g链接有乳糖的嵌段共聚物Lac-PEG-PLA溶解于10ml四氢呋喃中，缓慢加入20ml二次蒸馏水，用截流分子量3500的透析袋透析2天得到混合胶束水溶液。在得到的纳米胶束水溶液中添加增溶剂乳糖、甘露醇和葡萄糖各0.5g，混合均匀；然后冷冻干燥，得到具有乳糖靶向的高分子阿霉素键合药纳米胶束的冻干粉。
Claims (4)
1.具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊，其特征在于，该纳米胶囊由两种聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物混合组装而成，两者的聚乙二醇链段之间和聚乳酸链段之间数均分子量的差别，均不超过±10％；其中一种聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物的聚乳酸链端接有阿霉素，其为聚乙二醇-聚乳酸-阿霉素，在纳米胶囊中的摩尔比例为98-70％；另一种聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物的聚乙二醇链端接有乳糖，其为乳糖-聚乙二醇-聚乳酸，在纳米胶囊中的摩尔比例为2-30％；连接在聚乳酸链段上的阿霉素处于胶囊内核；连接在聚乙二醇链端的乳糖处于胶囊外层。
2.如权利要求1所述具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊的制备方法，其特征是包括以下步骤和条件：
(1)含有端羧基的嵌段共聚物PEG-PLA-COOH和阿霉素的氨基缩合，合成聚乙二醇-聚乳酸-阿霉素键合药PEG-PLA-Dox，该合成反应如下：
反应条件为：在三乙胺的存在下，在二甲基亚砜溶液中，将嵌段共聚物的端羧基与阿霉素的氨基进行缩合反应，获得高分子阿霉素键合药；其中，端羧基嵌段共聚物在二甲基亚砜溶液中的质量浓度为5-20％；阿霉素 的用量是嵌段共聚物端羧基摩尔数的1-2倍，三乙胺与阿霉素等摩尔量，反应时间是12-36h，反应温度为0℃，合成的聚乙二醇-聚乳酸-阿霉素键合药PEG-PLA-Dox中阿霉素的质量含量为10-30％，聚乙二醇的数均分子量400-5000，聚乳酸的数均分子量1000-10000；
(2)合成乳糖-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物Lac-PEG-PLA，其中聚乙二醇的数均分子量400-5000，聚乳酸的数均分子量1000-10000，聚乙二醇和聚乳酸分别与步骤(1)的聚乙二醇段和聚乳酸段的数均分子量相差不超过±10％；
所述的步骤(2)中的乳糖-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物的合成反应如下所示：
其步骤和条件如下：
(a)以叔丁氧羰基保护的氨基聚乙二醇NBoc-PEG-OH为引发剂，以辛酸亚锡或二乙基锌为催化剂，在甲苯溶液中进行左旋丙交酯的开环聚合，获得带保护端氨基的嵌段共聚物NBoc-PEG-PLA，其中NBoc-PEG-OH中PEG的数均分子量为400-5000，与步骤(1)所用PEG-PLA-COOH中的PEG链段的数均分子量相差不超过±10％；丙交酯的用量由NBoc-PEG-OH的用量计算得到，参照步骤(1)所用PEG-PLA-COOH中PEG与PLA的比例，过量0-10％；辛酸亚锡或二乙基锌催化剂的用量是丙交酯单体摩尔量的0.01-0.5％，甲苯用量是NBoc-PEG-OH和丙交酯总质量的3-10倍，聚合温度110-180℃，聚合时间12-48h；聚合产物用沉淀剂甲醇、乙醇或乙醚沉降，过滤，洗涤，真空干燥；
(b)脱除嵌段共聚物NBoc-PEG-PLA中的保护基团NBoc，具体方法是：将步骤(a)中所得到的带保护端氨基的嵌段共聚物NBoc-PEG-PLA在二氯甲烷和三氟乙酸的混合溶剂中0℃条件下搅拌2-4h；二氯甲烷与三氟乙酸的体积比为1∶1-3∶1，聚合物在混合溶剂中的质量百分数为10-20％，然后旋转蒸发除去二氯甲烷和三氟乙酸，向得到的固体中加入三乙胺，三乙胺的体积是三氟乙酸体积的1-2倍，10-30℃条件下搅拌6-10h，聚合产物用沉淀剂甲醇、乙醇或乙醚沉降，过滤，洗涤，真空干燥，获得端氨基的嵌段共聚物NH2-PEG-PLA；
(c)将嵌段共聚物NH2-PEG-PLA的端氨基和乳糖反应，得到聚乙二醇端含有乳糖基元的嵌段共聚物Lac-PEG-PLA，其中乳糖用量是嵌段共聚物端氨基的5-10倍，反应介质是二甲基亚砜，其用量是反应物总量的5-20倍，反应催化剂是NaBH3CN，其用量与乳糖等摩尔，反应温度为20-50℃，反应时间为1-3天，最后用沉淀剂甲醇、乙醇或乙醚沉降，过滤，洗涤，真空干燥；
(3)把PEG-PLA-Dox和Lac-PEG-PLA按摩尔比98∶70∶2-30混合，用透析法制成混合纳米胶囊，具体的步骤和条件是：
(a)将两种嵌段共聚物溶于有机溶剂中，所用的有机溶剂是丙酮、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或它们中任意两种或三种的混合物，有机溶剂体积的毫升数是高分子键合药质量克数的4-100倍；PEG-PLA-Dox和Lac-PEG-PLA的摩尔比为98∶70∶2-30；
(b)在搅拌条件下，向上述两种嵌段共聚物的混合溶液中滴加二次蒸馏水，形成混合纳米胶束水溶液，水的体积是有机溶剂体积的1-5倍；
(c)将混合纳米胶束水溶液进行透析，除去溶液中的有机溶剂，透析膜截流分子量3000g/mol，透析介质为二次蒸馏水，4-8小时更换一次，共透析24-72小时；
(d)将透析后的混合纳米胶束水溶液浓缩到质量浓度0.5-5％，可以采用旋转蒸发或超滤膜法浓缩；
(e)将浓缩后的混合纳米胶束水溶液冷冻干燥，得到具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊。
3.如权利要求2所述的具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊的制备方法，其特征在于步骤(3)中的(a)使用挥发性有机溶剂丙酮或四氢呋喃或者两者的混合溶剂，相应地，步骤(3)的中(c)和(d)采用旋转蒸发的方法，除去阿霉素键合药纳米胶束混合水溶液中的挥发性有机溶剂；旋转蒸发的时间是2-8小时，至溶液总体积的毫升数达到键合药质量克数的20～200倍。
4.如权利要求2所述的具有靶向功能的高分子阿霉素键合药纳米胶囊的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中的(e)的冻干之前，在纳米胶束水溶液中添加增溶剂乳糖、甘露醇、水解明胶、氯化钠、葡萄糖或它们的混合物，混合均匀；增溶剂用量为胶束水溶液中生物降解高分子阿霉素键合药质量的50-200％。
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