CN101228167A - 作为蛋白激酶抑制剂的吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基-胺衍生物 - Google Patents
作为蛋白激酶抑制剂的吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基-胺衍生物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101228167A CN101228167A CNA2006800267321A CN200680026732A CN101228167A CN 101228167 A CN101228167 A CN 101228167A CN A2006800267321 A CNA2006800267321 A CN A2006800267321A CN 200680026732 A CN200680026732 A CN 200680026732A CN 101228167 A CN101228167 A CN 101228167A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- compound
- disease
- kinases
- acid
- formula
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
- C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D487/04—Ortho-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
- A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Obesity (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
本发明涉及式(I)的吡唑并[1,5a]嘧啶-7-基胺衍生物及其盐,以及它们在治疗蛋白激酶依赖性疾病中的用途。
Description
发明概述
本发明涉及吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基胺衍生物,其在治疗蛋白激酶依赖性疾病(protein kinase dependent diseases)中的用途、其用于制备治疗所述疾病的药物组合物的用途,使用吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基胺衍生物治疗所述疾病的方法,用于治疗所述疾病的包含吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基胺衍生物的药物制品,新的吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基胺衍生物,制备新的吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基胺衍生物和药物制品的方法,上述吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基胺衍生物的用途或使用方法,和/或这些用于治疗动物或人体的吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基胺衍生物。
已有文献报道吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基-胺衍生物为苯并二氮杂受体的配体(例如S.Selleri等人,Bioorg.Med.Chem 7(12),2705-11(1999))、促肾上腺皮质激素释放因子的拮抗剂(EP 1097709)、血管紧张素II受体拮抗剂(例如S.Takeshi等人,Japn.Pharm.Bull.47(7),928-38(1999))、单氧化物合成酶抑制剂(JP 10101671)、镇痛药(WO 9535298)、杀真菌剂(EP071792)或者抗炎剂(WO 9218504)。
我们现在发现吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基胺骨架也可用作设计有效激酶抑制剂的模板。
考虑到大量的蛋白激酶抑制剂和众多增生性和其他蛋白激酶相关的疾病,总是存在提供用作蛋白激酶抑制剂并因此用于治疗相关疾病的新类型化合物的需要。
从增生性疾病的可能疗法观点来看,所需的是有过剩的化合物类型,其每一类型适合特定的蛋白激酶或蛋白激酶类型,从而允许实现特定的治疗。因此,存在发现允许此类特定抑制作用的新类型化合物的强烈需要。
在一个实施方案中,本发明涉及式(I)化合物或其可药用盐:
其中:
R1为H;
R2为苄基、未取代的苯基或由一个或两个取代基取代的苯基,其中所述取代基选自卤素、二低级烷基氨基烷氧基、羟基、烷氧基、苄氧基、环烷基、氨基、乙酰氨基;
R3为H且R4为羟烷基,或
R3和R4以及它们连接的N原子一起代表吗啉基、吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基,该杂环任选被多至四个烷基进一步取代;
A为未取代的苯基或由一个或多个取代基取代的苯基,其中所述取代基选自单、二或三低级烷氧基、二低级烷基氨基、二低级烷基氨基烷氧基;吗啉基任选被烷基二取代;哌啶基任选被二低级烷基氨基取代;并且哌嗪基任选被低级烷基、低级烷氧基、低级烷基哌嗪基、吡咯烷基、二低级烷基氨基或烷基氨基取代。
优选的实施方案是上述式I化合物或其可药用盐,其中:
R1为H;
R2为由氟或氯取代的苯基;
R3为H且R4为羟乙基,或
R3和R4以及它们连接的N原子一起代表哌嗪基;
A为由一个或多个取代基取代的苯基,其中所述取代基选自单、二或三甲氧基、二甲基氨基乙氧基和二乙基氨基哌啶基。
另一实施方案是上述式I化合物或其可药用盐,其中:
R1为H;
R2为由氟或氯取代的苯基;
R3和R4以及它们连接的N原子一起代表哌嗪基;
A为由一个或多个取代基取代的苯基,其中所述取代基选自单、二或三甲氧基、二甲基氨基乙氧基和二乙基氨基哌啶基。
另一实施方案是上述式I化合物或其可药用盐,其中:
R1为H;
R2为由氟或氯取代的苯基;
R3和R4以及它们连接的N原子一起代表哌嗪基;
A为由一个或多个取代基取代的苯基,其中所述取代基选自单、二或三甲氧基。
另一实施方案是上述式I化合物或其可药用盐,其中:
R1为H;
R2为由氟或氯取代的苯基;
R3为H且R4为羟乙基;
A为由一个或多个取代基取代的苯基,其中所述取代基选自单、二或三甲氧基。
本发明的一个实施方案涉及式I化合物在治疗人类或动物体中的用途。
另一实施方案是上述式I化合物在制备药物组合物中的用途。
另一实施方案是包含上述式I化合物的药物组合物。
该药物组合物优选包含上述式I化合物和可药用载体。
另一实施方案提供上述式I化合物在制备用于治疗激酶依赖性疾病的药物组合物中的用途。
蛋白激酶依赖性疾病优选为一种依赖于c-Abl、Bcr-Abl、c-Kit、c-Raf、Flt-1、Flt-3、Her-1、KDR、PDGFR激酶、c-Src、RET受体激酶、FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3、FGF-R4、肝配蛋白受体激酶(例如EphB2激酶、EphB4激酶和相关的Eph激酶)、酪蛋白激酶(CK-1、CK-2、G-CK)、Pak、ALK、ZAP70、Jak1、Jak2、Axl、Cdk1、cdk4、cdk5、Met、FAK、Pyk2、Syk、胰岛素受体激酶、Tie-2的疾病,或一种依赖于激酶如Bcr-Abl、c-Kit、c-Raf、Flt-3、FGF-R3、PDGF受体、RET和Met的组成型激活突变(激活的激酶)的疾病,以及(尤其是异常高度表达或激活的)激酶依赖性疾病,或者依赖于激酶途径活化的疾病,或者依赖于所提及的激酶中任意两个或多个的疾病。
蛋白激酶依赖性疾病更优选为依赖于c-abl、Flt-3、KDR、c-Src、RET、EphB4、c-kit、cdk1、FGFR-1、c-raf、Her-1、Ins-R或Tek的一种疾病,
最优选,待治疗的疾病为增生性疾病,优选为良性肿瘤或尤其是恶性肿瘤,更优选为脑癌、肾癌、肝癌、肾上腺癌、膀胱癌、乳房癌、胃癌(尤其是胃肿瘤)、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胰癌、肺癌、阴道癌、甲状腺癌;肉瘤;成胶质细胞瘤;多发性骨髓瘤或胃肠癌,尤其为结肠癌或结肠直肠腺瘤,或者颈部和头部肿瘤、表皮过度增殖尤其是牛皮癣、前列腺增生、瘤形成,尤其是上皮特征的瘤形成,优选为乳房癌或白血病。
在另一个实施方案中,待治疗的疾病为持续的血管发生引起的疾病,如牛皮癣;卡波济肉瘤;再狭窄,例如支架诱导的再狭窄;子宫内膜异位症;克隆病;霍奇金病;白血病;关节炎,如类风湿性关节炎;血管瘤;血管纤维瘤;眼疾病,如糖尿病性视网膜病和新血管青光眼;肾脏疾病,如肾小球肾炎;糖尿病性肾病;恶性肾硬化;血栓性微血管病综合征;移植排斥和肾小球病;纤维化疾病,如肝脏的硬化;肾小球系膜细胞增生性疾病;动脉硬化;神经组织损伤。
本发明的化合物也可用于抑制气囊导管治疗后的血管再闭塞,用于血管修复或用于插入机械装置如支架后保持血管开放,用作免疫抑制剂,用作无疤创伤愈合的辅助,用于治疗老年斑和接触性皮炎。
除非另外指出,上文和下文中所用的通用术语优选具有此公开中的下列意义:
烷基包括低级烷基,优选为具有不超过7个碳原子的烷基,优选具有1-5个包括5个碳原子,为线性或分支的;优选地,低级烷基为戊基如正戊基,丁基如正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基,丙基如正丙基或异丙基,乙基或甲基。优选地,低级烷基为甲基、丙基或叔丁基。
烷基可为取代的或未取代的,且当为取代的时可具有不超过3个取代基,其包括其他烷基、环烷基、链烯基、炔基、上面定义的芳基取代基中的任何一个或者下面定义的官能团中的任何一个。
卤素优选为氟、氯、溴或碘,最优选为氟、氯或溴。
当复数用于化合物、盐、药物制品、疾病等等时,也意指单个的化合物、盐等等。
盐尤其是式I化合物的可药用盐。
此类盐从具有碱性氮原子的式(I)化合物优选与有机或无机酸形成为如酸加成盐,尤其是可药用盐。合适的无机酸为例如卤素酸如盐酸、硫酸或磷酸。合适的有机酸为例如羧酸;膦酸;磺酸或氨基磺酸;为例如乙酸;丙酸;辛酸;癸酸;正十二烷酸;乙二醇酸;乳酸;反丁烯二酸;琥珀酸;己二酸;庚二酸;辛二酸;壬二酸;苹果酸;酒石酸;柠檬酸;氨基酸,如谷氨酸或天冬氨酸;马来酸;羟基-马来酸;甲基马来酸;环己烷羧酸;金刚烷羧酸;苯甲酸;水杨酸;4-氨基水杨酸;苯二甲酸;苯乙酸;扁桃酸;肉桂酸;甲磺酸或乙磺酸;2-羟基乙烷磺酸;乙烷-1,2-二磺酸;苯磺酸;2-萘磺酸;1,5-萘-二磺酸;2-、3-或4-甲基苯磺酸;甲基硫酸;乙基硫酸;十二烷基硫酸;N-环己氨基磺酸;N-甲基-、N-乙基-或N-丙基-氨基磺酸;或其他有机质子酸,如抗坏血酸。
在存在负电基团,如羧基或磺基条件下,盐也可与碱形成,其中所述碱例如金属盐或铵盐,如碱金属盐或碱土金属盐,例如钠盐、钾盐、镁盐或钙盐,或带有氨或适当有机胺的铵盐,如叔单胺,例如三乙基胺或三(2-羟基乙基)胺,或杂环碱,例如N-乙基-哌啶或N,N′-二甲基哌嗪。
当碱性基团和酸性基团存在于同一个分子中时,式(I)的化合物也可形成内盐。
为分离或纯化目的,也可能使用不可药用盐,例如苦味酸盐或过氯酸盐。为治疗用途,只利用可药用盐或游离化合物(当以药物制品形式应用时),且因此这些是优选的。
考虑游离形式化合物和其盐形式的化合物间密切关系,其中所述的盐包括可用作例如在化合物、互变异构体或互变异构体混合物和其盐的纯化和鉴定中的中间体的那些盐,上文和下文中谈及的化合物尤其是式(I)化合物根据需要和有利地并且如果没有另外指出的话理解为也指这些化合物,尤其是式I化合物的相应互变异构体;这些化合物,尤其是式I的化合物的互变异构体混合物;或这些中任何一个的盐。
当提及“化合物......、其互变异构体或其盐”等时,这是指“化合物......、其互变异构体,或者化合物或互变异构体的盐”。
任何不对称碳原子可以(R)-、(S)-或(R,S)-构型存在,优选以(R)-或(S)-构型存在。具有饱和键的环原子的取代基,如果可能的话,可以顺-(=Z-)或反(=E-)形式存在。因此化合物可以异构体混合物存在,或优选以纯的异构体存在,优选以对映异构体纯的非对映体或纯的对映异构体存在。
本发明也涉及式(I)化合物的前体药物,其在体内这样转变成式(I)的化合物。因此任何谈及式(I)的化合物根据需要和有利地理解为也指式(I)的化合物的相应前体药物是适当和便利的。
式(I)化合物可用Alicade,E、De Mendoza,J、Garcia-Marquina,JM、Almera,C、J.Heterocycl.Chem.11,423(1974)或EP2005/000602中描述的方法类似的制备。
可以通过本身已知的方式制备具有至少一个成盐基团的式(I)化合物的盐。例如,可以通过用诸如适当有机羧酸的碱金属盐(例如2-乙基己酸的钠盐)的金属化合物、诸如相应的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐诸如氢氧化钠或钾、碳酸盐或碳酸氢盐的有机碱金属或碱土金属化合物、也可以用相应的钙化合物或者用氨水或适当的有机胺处理该化合物、优选使用化学量或者仅少量过剩的成盐剂来制备具有酸性基团的式(I)化合物盐。式(I)化合物的酸加成盐以诸如用酸或适当的阴离子交换试剂处理的常规方式获得。可以通过例如用弱碱或者用离子交换剂处理,从而将诸如酸加成盐的盐中和至等电点的方式形成包含酸性和碱性成盐基团(例如游离的羧基基团和游离的氨基基团)的式(I)化合物内盐。
可以用常规方法将盐转变为游离的化合物;例如,金属盐和铵盐可以通过用适当的酸处理来进行转变,而酸加成盐可以通过例如用适当的碱性试剂处理来进行转变。
根据本发明可以获得异构体的混合物,并能够以本身已知的方式将其分离成为单独的异构体;例如能够通过分离多相性溶剂混合物、重结晶和/或层析分离(例如经过硅胶或经过反向柱进行例如中压液相层析)分离非对映异构体;此外,外消旋物也能够分离,例如通过用光学纯的成盐试剂形成盐,然后通过诸如分步结晶或通过经过旋光柱材料进行层析,从而分离可如此获得的非对映异构体混合物。
可以根据标准方法对中间体和最终产物进行加工及/或纯化,例如使用层析法、分配法、(重)结晶法等等。
一般而言,下述条件应用于上文和下文涉及的所有程序,但优选上文或下文特别涉及的反应条件:
所有上述程序步骤都可以在本身已知的反应条件下执行,优选那些特别说明的条件,在缺乏或通常存在溶剂或稀释剂,优选对所用试剂呈惰性但溶解它们的溶剂或稀释剂,可在缺乏或存在催化剂、缩合剂或中和剂,例如阳离子交换剂(例如以H+形式,这取决于反应和/或试剂的性质)的离子交换剂,可以是低温、常温或高温,例如在大约-100℃至大约190℃的温度范围,优选大约-80℃至大约150℃(例如-80至-60℃、室温、-20至40℃或者回流温度),在环境压力或在封闭容器中(根据需要在压力下),和/或可以在惰性气体中,例如氩气或者氮气。
在反应的所有阶段,都可以将形成的异构体混合物分离为诸如非对映异构体或对映异构体的单独异构体,或者将其分离为任意希望的异构体混合物,例如外消旋物或非对映异构体的混合物,例如类似于“额外方法步骤”中所描述的方法。
除非在方法描述中特别说明,否则那些适合任何具体反应的试剂选自的试剂包括那些特别说明的试剂,或者例如水、诸如低级烷基-低级链烷酸酯(例如乙酸乙酯)的酯类、诸如脂肪族醚类(例如二乙基醚)或环状醚类(例如四氢呋喃或二烷)的醚类、诸如苯或甲苯的液体芳香族烃、诸如甲醇、乙醇或1-或2-丙醇的醇、诸如乙腈的腈、诸如二氯甲烷或氯仿的卤代烃、诸如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺的酰胺、诸如杂环氮碱基(例如吡啶或N-甲基吡咯烷-2-酮)的碱基、诸如低级链烷酸酐(例如醋酸酐)的羧酸酐、诸如环己烷、己烷或异戊烷的环状烃、直链烃和支链烃,或者这些溶剂的混合物,例如含水溶液。此类溶剂混合物也可以用于例如进行层析或分离。
化合物,包含它们的盐,也可以以水合物的形式获得,或者它们的晶体可以例如包含用于结晶化的溶剂。可以存在不同的晶体形式。
本发明也涉及那些可从本方法任意阶段中间体获得的化合物用作原材料并执行剩余步骤、或者其中原材料在反应条件下形成或以衍生物的形式(例如以受保护形式或盐的形式)加以利用、或者在反应条件下生成根据本发明的方法可以获得的化合物并将其在原位进行进一步加工等形式的方法。在本发明的方法中,优选使用那些产生在前文描述为尤其有价值的式(I)新化合物的原材料。与实施例中所述反应条件相同或类似的反应条件是特别优选的。
式(I)化合物具有有价值的药理学性质。它们以例如作为不同的蛋白激酶抑制剂来展现其生物活性,优选抑制c-abl、Flt-3、KDR、c-Src、RET、EphB4、c-kit、cdk1、FGFR-1、c-raf、Her-1、Ins-R或Tek,最优选是作为肝配蛋白B4受体(EphB4)激酶的抑制剂。因此,本发明的化合物可用于治疗激酶依赖性疾病,例如用作治疗增生性疾病的药物。
术语“酪氨酸蛋白激酶依赖性疾病的治疗”指所述疾病的尤其是下面提到的疾病的预防性或优选治疗性(包括减轻的和/或治愈的)治疗。
如下测量RET的抑制:用杆状病毒供体载体pFB-GSTX3产生重组杆状病毒,其表达与RET的野生型激酶结构域对应的人RET-Men2A(wtRET)和RET-Men2B的胞质内激酶结构域的氨基酸区域658-1072(Swiss prot No.Q9BTB0),其中所述RET-Men2B与wtRET不同在于活化环M918T的激活突变。通过PCR从质粒pBABEpuroRET-Men2A和pBABEpuro RET-Men2B扩增wtRET和RET-Men2B的胞质结构域编码序列。通过用SalI和KpnI消化使扩增的DNA片段和pFB-GSTX3载体适合连接反应。通过这些DNA片段的连接分别得到杆状病毒供体质粒pFB-GX3-RET-Men2A和pFB-GX3-RET-Men2B。
病毒的产生:将含有激酶结构域的转移载体转染到DH10Bac细胞系(GIBCO)中并铺到选择性琼脂平板上。未在病毒基因组中插入融合序列(由细菌携带)的菌落为蓝色。选取单个白色菌落并通过标准的质粒纯化步骤从细菌中分离病毒DNA(杆粒)。然后使用Cellfectin试剂在25cm2瓶中用病毒DNA转染Sf9细胞或Sf21(美国典型培养物保藏中心)细胞。
测定Sf9细胞中小规模蛋白质的表达:从转染细胞培养物中收集合病毒的培养基并用于感染以增加其滴度。两轮感染之后获得的含病毒的培养基用于大规模的蛋白质表达。为进行大规模蛋白质表达,以5×107个细胞/平板接种100cm2圆形组织培养平板并用1mL含病毒的培养基(大约5MOIs)感染。3天后从平板上刮下细胞并500转/分离心5分钟。将来自10-20个100cm2平板的细胞沉淀重悬于50mL冰冷的裂解缓冲液中(25mM tris-HCI,pH 7.5,2mM EDTA,1%NP-40,1mM DTT,1mMPMSF)。冰上搅拌细胞15分钟,然后5,000转/分离心20分钟。
GST标签蛋白质的纯化:将经离心的细胞裂解物加入2mL谷胱甘肽琼脂糖柱中(Pharmacia)并用10mL 25mM tris-HCI,pH 7.5,2mM EDTA,1mM DTT,200mM NaCl洗涤3次。然后通过10次使用(每次1mL)25mM tris-HCI,pH 7.5,10mM还原谷胱甘肽,100mM NaCl,1mM DTT,10%甘油洗脱GST标签蛋白质并存于-70℃。
酶活性的测量:用经纯化的GST-wtRET或GST-RET-Men2B蛋白质在含15ng GST-wtRET或GST-RET-Men2B蛋白质,20mM tris-HCI,pH 7.5,1mM MnCl2,10mM MgCl2,1mM DTT,3μg/mL聚(Glu,Tyr)4∶1,1%DMSO,2.0μM ATP(γ-[33P]-ATP 0.1μCi)的30μL终体积中进行酪氨酸蛋白激酶测定法。在存在或不存在抑制剂的条件下通过测量[γ33P]ATP的33P掺入聚(Glu,Tyr)4∶1中测定活性。测定在如下所述条件下在96孔板中于室温进行15分钟并通过加入20μL 125 mM EDTA终止。随后将40μL反应混合物转移到预先用甲醇浸润5分钟的Immobilon-PVDF膜上(Millipore),用水漂洗然后用0.5%H3PO4浸润5分钟并置于与真空源脱连接的真空总腔。点上所有的样品后,连接真空装置并用200μL 0.5%H3PO4漂洗每一个孔。移开膜并在摇床上用1.0%H3PO4洗涤4次,用乙醇洗涤1次。室温干燥后计数膜,其中所述膜置于PackardTop Count 96孔支架上并加入10μL/孔的Microscint TM(Packard)。通过每一化合物一式两份在4个浓度(通常为0.01、0.1和10μM)的百分比抑制的线性回归分析计算IC50值。一个单位的蛋白激酶活性定义为37℃1纳摩尔33P ATP从[γ33P]ATP转移到底物蛋白质/分钟/毫克蛋白质。
IC50计算
在Immobilon膜上输入3×4μL终止测定,不经洗涤
背景(3个孔)用H2O测定而不用酶
阳性对照(4个孔)3%DMSO而不是化合物
批对照(1个孔)无反应混合物
通过每一种化合物在4个浓度的(通常从10μM开始3或10倍的稀释系列)百分比抑制的对数回归分析计算IC50值。
在每一实验中,参考化合物的实际抑制用于将IC50值归一化至参考抑制剂平均值的基准:
归一化的IC50=测定的IC50·参考化合物IC50平均值/测定的参考化合物IC50
例如:实验中参考抑制剂为0.4μM,平均为0.3μM
实验中受试化合物为1.0μM,归一化为:0.3/0.4=0.75μM。
例如,星形孢菌素或合成的星形孢菌素衍生物用作参考化合物。
使用这个方案,发现式(I)的化合物对RET抑制显示0.005-100μM范围的IC50值,优选显示0.01-2μM范围的IC50。
可如下证明本发明的化合物作为c-Abl蛋白质-酪氨酸激酶活性的抑制剂的效率:如Geissler等人,Cancer Res.1992;52:4492-4498所述的过滤结合测定法在96孔板中进行体外酶测定法,其具有如下修改。克隆组氨酸标签的c-Abl激酶结构域并如Bhat等人,J.Biol.Chem.1997;272:16170-16175中所述在杆状病毒/Sf9系统中表达。通过钴金属螯合柱然后是阴离子交换柱的两步流程纯化37 kD(c-Abl激酶)的蛋白质,产量为1-2mg/L Sf9细胞(Bhat等人,引用的参考文献)。通过SDS-PAGE在考马斯亮蓝染色后鉴定c-Abl激酶的纯度大于90%。该测定法含有(总体积30μL):c-Abl激酶(50ng)、20mM Tris HCI,pH 7.5、10mM MgCl2、10μMNa3VO4、1mM DTT和存在1%DMSO条件下用30μg/mL聚-Ala,Glu,Lys,Tyr-6∶2∶5∶1(Poly-AEKY,Sigma P1152)的0.06pCi/测定[γ33P]-ATP(5μM ATP)。
通过加入10μL 250 mM EDTA终止反应并将30μL反应混合物转移到预先在甲醇中浸泡5分钟的Immobilon-PVDF膜上(Millipore,Bedford,MA,USA),用水漂洗,然后用0.5%H3PO4浸泡5分钟并置于与真空源脱连接的真空总腔。点上所有样品后连接真空装置并用200μL 0.5%H3PO4漂洗每一个孔。取下膜并在摇床上用0.5%H3PO4洗涤(4次)和用乙醇洗涤一次。室温干燥后计数膜,置于Packard Top Count 96孔支架中,并加入10μL/孔的Microscint TM(Packard)。
使用这个检测系统,式I的化合物对c-Abl抑制显示0.002-100M范围的抑制IC50值,通常显示0.002-5M范围的抑制IC50值。
本发明的化合物作为KDR蛋白质-酪氨酸激酶活性抑制剂的功效可如下证明:VEGF诱导的受体自磷酸化的抑制可在细胞中,如转染的CHO细胞中用另一个体外实验验证,其中所述细胞持续地表达人VEGF-R2受体(KDR),接种于6孔细胞培养板中的完全培养基中(含10%胎牛血清=FCS)并在5%CO2条件下于37℃温育直到其表现大约80%的汇合。然后将待检测的化合物稀释于培养基中(无FCS,含0.1%的牛血清白蛋白)并加入到细胞中。(对照包含无待检测化合物的培养基)。37℃温育两个小时之后加入重组VEGF,最终的VEGF浓度为20ng/ml。37℃再温育5分钟后,用冰冷的PBS(磷酸盐缓冲液)洗涤细胞两次并立即在100μL每孔的裂解缓冲液中裂解。然后离心裂解物以去除细胞核,用商品化的蛋白质测定法(BIORAD)测定上清液的蛋白质浓度。然后裂解物可立即使用或如果需要的话存于-20℃。
进行夹心酶联免疫吸附测定法测量VEGF-R2磷酸化:将VEGF-R2的单克隆抗体(例如Mab 1495.12.14;ProQinase,Freiburg,Germany)固定于黑色ELISA平板上(购自Packard的OptiPlateTM HTRF-96)。然后洗涤平板并用溶于含Tween 20(聚氧乙烯(20)-失水山梨糖醇单月桂酸酯,ICI/Uniquema)的磷酸盐缓冲液(PBST)的3%TopBlock(Juro,Cat#TB232010)饱和其余的游离蛋白质结合位点。然后在这些平板中于4℃孵育细胞裂解物(20μg蛋白质/孔)和与碱性磷酸酶偶联的抗磷酸酪氨酸抗体(PY20:AP,来自Zymed)过夜。(再次洗涤平板)然后用发光AP底物(CDP-Star,即用型,含Emerald II;Applied Biosystems)证明抗磷酸酪氨酸抗体与捕获的磷酸化受体的结合。在Packard Top CountMicroplate Scintillation Counter中测量发光。阳性对照(用VEGF刺激)的信号和阴性对照(未用VEGF刺激)的信号间的差异与VEGF诱导的VEGF-R2磷酸化对应(=100%)。受检测物质的活性计算为VEGF诱导的VEGF-R2磷酸化的百分比抑制,其中诱导半数最大抑制的物质浓度定义为IC50(50%抑制的量)。式I的化合物在此对KDR抑制显示0.005-20μM范围的IC50,优选显示0.005-1μM之间的IC50。
如下测定Flt3激酶抑制:用杆状病毒供体载体pFbacG01(GIBCO)产生表达人Flt-3胞质激酶结构域的氨基酸563-993氨基酸区域的重组杆状病毒。通过PCR从人c-DNA文库(Clontech)中扩增Flt-3胞质结构域的编码序列。通过用BamHI和HindIII消化使扩增的DNA片段和pFbacG01载体适合连接反应。这些DNA片段的连接产生杆状病毒供体质粒Flt-3(1.1)。病毒的产生、sf9细胞中蛋白质的表达和GST融合蛋白的纯化如下进行:
病毒的产生:将含Flt-3激酶结构域的转移载体(pFbacG01-Flt-3)转染到DH10Bac细胞系(GIBCO)中并将转染的细胞铺于选择性琼脂平板上。没有在病毒基因组中插入融合序列(由细菌携带)的菌落为蓝色。选择单个白色菌落并通过标准的质粒纯化流程从细菌中分离病毒DNA(杆粒)。然后在摇瓶中使用Cellfectin试剂用病毒DNA转染Sf9或Sf21细胞(美国典型培养物保藏中心)。
Sf9细胞中小规模蛋白质表达的确定:从转染的细胞培养物中收集合病毒的培养基并用于感染以增加其滴度。两轮感染之后获得的含病毒的培养基用于大规模的蛋白质表达。为大规模的蛋白质表达,用5×107个细胞/平板接种100cm2的圆形组织培养板并用1mL含病毒的培养基(大约5MOI)感染。3天后从平板上刮下细胞并500转/分离心5分钟。将来自10-20个100cm2平板的细胞沉淀重悬于50mL冰冷的裂解缓冲液中(25mMTris-HCI,pH7.5,2mM EDTA,1%NP-40,1mM DTT,1mM PMSF)。冰上搅拌细胞15分钟然后5000转/分离心20分钟。
GST标签蛋白质的纯化:将经离心的细胞裂解物加到2mL谷胱甘肽琼脂糖柱上(Pharmacia)并用10mL 25mM Tris-HCI,pH 7.5,2mMEDTA,1mM DTT,200mM NaCl洗涤3次。然后通过10次(每次1mL)用25mM Tris-HCI,pH 7.5,10mM还原谷胱甘肽,100mM NaCl,1mMDTT,10%甘油洗脱GST标签的蛋白质并存于-70℃。
酶活性的测量:在30μl终体积中进行纯化GST-Flt-3的酪氨酸蛋白激酶测定,其中所述的30μl终体积中含200-1800ng酶蛋白质(取决于比活性),20mM Tris-HCl,pH 7.6,3mM MnCl2,3mM MgCl2,1mM DTT,10μM Na3VO4,3μg/mL聚(Glu,Tyr)4∶1,1%DMSO,8.0μM ATP和0.1μCi[γ33P]ATP。在存在或不存在抑制剂条件下通过测量[γ33P]ATP的33P掺入到聚(Glu,Tyr)底物中测定活性。在如下所述的条件下在96孔板中于室温20分钟进行测定(30μL)并通过加入20μl 125mM EDTA终止。随后将40μL反应混合物转移到预先用甲醇浸泡5分钟的Immobilon-PVDF膜上(Millipore,Bedford,MA,USA),用水漂洗然后用0.5%H3PO4浸泡5分钟并置于与真空源脱连接的真空总腔。点上所有的样品后连接真空装置并用200μL 0.5%H3PO4漂洗每一个孔。移开膜并在摇床上用1.0%H3PO4洗涤4次,用乙醇洗涤一次。室温干燥后计数膜并置于Packard Top Count96孔支架中,加入10μL/孔的Microscint TM(Packard)。通过一式两份的四个浓度(通常为0.01、0.1、1和10μM)的每一种化合物的百分比抑制的线性回归分析计算IC50值。一个蛋白激酶活性单位定义为37℃1纳摩尔33P ATP从[γ33P]ATP转移到底物蛋白质的每分钟每毫克蛋白质。式I的化合物对Flt-3显示0.01-100μM范围的IC50抑制值,优选显示0.05-10μM的IC50抑制值。式I的化合物也抑制其他酪氨酸蛋白激酶,如尤其是c-Src激酶、c-Kit、VEGF-R和/或FGFR,其全部参与动物的,尤其是哺乳动物细胞,包括人细胞的生长调节和转化。适当的测定法在Andrejauskas-Buchdunger等人,Cancer Res.52,5353-8(1992)中描述。使用这个检测系统,式I的化合物对c-Src抑制显示0.005-100μM范围的IC50,通常显示0.005-5μM范围的IC50。式I的化合物也对c-kit抑制显示0.005-10μM范围的IC50,通常显示0.005-5μM范围的IC50,并且对FGFR-1抑制在10μM显示高达95%的抑制。
IGF-1R和Ins-R的抑制可如下测定:使用杆状病毒供体载体pfbgx3lGFIRcd产生表达人IGF-IR成熟肽胞质结构域的氨基酸区域950-1337的重组杆状病毒。使用pC5hinsR产生编码人胰岛素受体胞质内激酶结构域的氨基酸区域919-1343的cDNA片段。使用重组杆状病毒产生的Bac-to-BacTM系统(GIBCO BRL)克隆、表达人IGF-IR和Ins-R的片段并小规模纯化因子Xa-可切割的谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合蛋白。从转染的细胞培养物中收集含病毒的培养基并用于感染以增加其滴度。两轮感染后获得的含病毒的培养基用于大规模的蛋白质表达。制备细胞提取物并加到谷胱甘肽琼脂糖(Pharmacia)柱上。洗涤之后,然后用含谷胱甘肽的缓冲液洗脱GST标签蛋白质。将纯化的蛋白质存于-70℃的洗脱缓冲液中。在含20mM Tris-HCl,pH 7.6,10mM MgCl2,0.01mM Na3VO4,1%DMSO,1mM DTT,3μg/ml poly(Glu,Tyr)4∶1和10μM ATP(γ-[33P]-ATP0.1μCi)的30μl终体积中进行纯化GST-IGF-1R和GST-lns-R的酪氨酸蛋白激酶测定法。室温20分钟在96孔板中进行测定并通过加入25μl 0.05MEDTA pH 7.0终止。将40μl份的液量用多通道点样器点样至连接至低真空源的置于Millipore Microtiter滤器总管中的Whatman P81膜上。除去液体后,将膜转移至一系列的4个含有0.5%H3PO4的洗浴和一个EtOH洗浴(每个摇动孵育10分钟)、干燥、置于添加了10μl Microscint的Hewlett Packard TopCount总管并计数。式I的化合物在10,000nM显示对Ins-R高达90%的抑制,优选显示60-90%的抑制。
Tek的抑制可如下测定:Fabbro等人,Pharmacol.Ther.82(2-3)293-301(1999)已经描述了表达、纯化和测定这些激酶的流程。简言之,用EcoRV和EcoRI从pAcG1载体(Pharmingen)切出谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因并插入Fast-Bac杆状病毒载体(GIBCO)的克隆位点中建立具有来源于pAcG1融合载体(FBG0)的N端克隆位点的5530bp的载体。C端克隆位点可为所用N端克隆位点下游的任一克隆位点(来源于Fast-Bac载体)。从ProQinase,Freiburg,Germany获得N端GST融合的(pAcG1,Pharmingen)KDR、Flt-1、Flk-1、Tek和PDGFR-β激酶结构域。通过EcoRI切出并连入EcoRI消化的FBG1将Tek再次克隆到FBG1载体中(FBG1-Tek)。分别从人子宫和人骨髓cDNA文库(Clontech)通过PCR扩增c-Kit全部胞质结构域(氨基酸544-976)和c-Fms的全部胞质结构域(氨基酸538-972)的编码序列。通过将扩增的DNA片段作为BamHI-EcoRI插入片段克隆到FBG1中与GST融合,产生FBG1-c-Kit和FBG1-c-Fms。通过EcoRI切出并连接到EcoRI消化的FBG0中将Tek再次克隆到FBG0转移载体中(FBG-Tie2/Tek)。通过PCR从人A431细胞获得FGFR-1和c-met激酶结构域。N端引物含有突出的EcoRI位点,而C端引物含有XhoI位点以辅助克隆到转移载体中。PCR片段和FBG0都消化之后凝胶纯化切割产物并连接到一起形成激酶构建体(FBG-Met,FBG-FGFR-1)。
根据GIBCO提供的方案构建每一个激酶的病毒。简言之,将含激酶结构域的转移载体转染到DH10Bac细胞系(GIBCO)中,铺于含推荐浓度的Blue-Gal、IPTG、卡那霉素、四环素和庆大霉素的琼脂板上。没有在病毒基因组中插入融合序列(由细菌携带)的菌落为蓝色。通常挑出单个白色菌落并通过标准的质粒小量制备流程从细菌中分离病毒DNA(杆粒)。然后使用与Bac-to-Bac试剂盒(GIBCO)一起提供的方案在25cm2摇瓶中用病毒DNA转染Sf9细胞或High Five细胞(GIBCO)。从转染的细胞培养物中收集合病毒的培养基并用于感染以增加其滴度。两轮感染之后获得的含病毒的培养基用于大规模的蛋白质表达。对于大规模的蛋白质表达,用5×107个细胞/平板接种100cm2的圆形组织培养板并用1mL含病毒的培养基(大约5MOI)感染。3天后从平板上刮下细胞并500转/分离心5分钟。
将来自10-20个100cm2平板的细胞沉淀重悬于50mL冰冷的裂解缓冲液中(25mM Tris-HCI,pH7.5,2mM EDTA,1%NP-40,1mM DTT,1mM PMSF)。冰上搅拌细胞15分钟然后5000转/分离心20分钟。将上清液加到2ml谷胱甘肽琼脂糖柱上并用10ml的25mM Tris-HCl,pH 7.5,2mM EDTA,1mM DTT,200mM NaCl洗涤三次。然后通过10次(每次1ml)用25mM Tris-HCl,pH 7.5,10mM还原谷胱甘肽,100mM NaCl,1mM DTT,10%甘油洗脱GST标签蛋白质并存于-70℃。
测定法(30μl)含有200-1800ng的酶蛋白质(取决于比活性),20mMTris-HCl,pH 7.6,3mM MnCl2,3mM MgCl2,1mM DTT,10μM Na3VO4,3μg/ml聚(Glu,Tyr)4∶1,8μM ATP(γ[33P]ATP 0.1μCi)。室温孵育反应20分钟然后通过加入25μl 0.25 M EDTA(pH 7.0)停止反应。将40μl份的液量用多通道点样器点样至连接至低真空源的置于Millipore Microtiter滤器总管中的Whatman P81膜上。除去液体后,将膜转移至一系列的4个含有0.5%H3PO4的洗浴和一个EtOH洗浴(每个摇动孵育10分钟)、干燥、置于添加了10μl Microscint的Hewlett Packard TopCount总管并计数。通过线性回归分析计算式(I)化合物对Tek抑制显示大约0.1-100μM IC50值。
Cdk1的抑制可如下测定:Cdk1/cycB:Cdk1/cycB从ProQinase,Freiburg,Germany获得。用10μM 1-甲基腺嘌呤诱导海星卵母细胞进入细胞周期的M期,在液氮中冷冻并存于-80℃。需要的时候,如(Arion等人,Cell 55:371-378(1988)和Rialet等人,Anticancer Res.11:1581-1590(1991))所述匀浆卵母细胞并离心。在p9CKShs-琼脂糖珠上纯化Cdk1/cycB激酶并如(Azzi等人,Eur.J.Biochem.203:353-360.(1992))所述用重组人p9CKShs洗脱。简言之,持续旋转条件下在4℃平衡来源于卵母细胞的上清液与p9CKShs-琼脂糖颗粒30分钟。充分洗涤珠并用纯化的p9CKShs(3mg/ml)洗脱有活性的cdk1/cycB激酶。如(Arion等人,Cell 55:371-378(1988),Meijer等人,EMBO J.1989;8:2275-2282和Meijer等人,EMBOJ.1991;8:2275-2282)所述测量Cdk1/cycB活性。于室温在96孔板中进行稍加修改的测定法20分钟。30μl的终体积中含有0.1-0.3U的Cdk1/cycB,1mg/ml组蛋白H1作为底物,60mM β-甘油磷酸,30mM硝基苯基磷酸酯,25mM MOPS,5mM EGTA,15mM MgCl2,1mM DTT,0.1mM Na3VO4,15μM ATP和0.1μCi γ-33P-ATP(75μM,8800cpm/pmole)。通过加入25μl 0.05 M EDTA pH 7.0终止反应。将40μl份的液量用多通道点样器点样至连接至低真空源的置于Millipore Microtiter滤器总管中的Whatman P81膜上。除去液体后,将膜转移至一系列的4个含有0.5%H3PO4的洗浴和一个EtOH洗浴(每个摇动孵育10分钟)、干燥、置于添加了10μl Microscint的Hewlett Packard TopCount总管并计数。式(I)的化合物在10,000nM显示高达100%的Cdk1抑制。
c-Raf-1的抑制可如下测定:通过用GST-c-Raf-1重组杆状病毒和v-Src和v-Ras重组杆状病毒一起三重感染Sf21细胞获得重组c-Raf-1蛋白质的产生,其中所述的v-Src和v-Ras重组杆状病毒为活性c-Raf-1激酶产生所需要的(Williams等人,PNAS 1992;89:2922-2926)。招募c-Raf-1至细胞膜需要活化的Ras(v-Ras)并且磷酸化c-Raf-1需要v-Src,以充分活化它(Williams等人,PNAS 1992;89:2922-2926)。每个150mm平皿接种2.5×107个细胞并允许其在室温与150mm平皿粘附1小时。对培养基(含10%FBS的SF900II)抽气并以分别为3.0、2.5和2.5的MOI在4-5mL的总体积中加入重组杆状病毒GST-C-Raf-1、v-Ras和v-Src。室温孵育细胞1小时然后加入15mL培养基。27℃孵育感染的细胞48-72hr。刮下感染的Sf21细胞,收集到50mL离心管中并在Sorvall离心机中于4℃以1100g离心10分钟。用冰冷的PBS洗涤细胞沉淀一次并且每2.5×107个细胞用0.6mL裂解缓冲液裂解。不时吹打在冰上,10分钟后实现细胞的完全裂解。用SS-34转子在Sorvall离心机中于4℃以14,500g离心细胞裂解物10分钟并将上清液转移到新管中且存于-80℃。对每2.5×107个细胞用100uL冰冷的PBS平衡的填充有谷胱甘肽琼脂糖4B珠从细胞裂解物中纯化c-Raf-1。允许GST-c-Raf-1与珠在4℃摇动结合1hr。将与珠结合的GST-c-Raf-1转移到柱子中。柱子用裂解缓冲液洗涤一次并用冰冷的Tris缓冲盐溶液洗涤两次。加入冰冷的洗脱缓冲液并停止柱子流动以允许游离的谷胱甘肽破坏GST-c-Raf-1与谷胱甘肽琼脂糖珠的相互作用。将级分(1mL)收集到预冷的试管中。每一试管含有10%甘油(终浓度)以在冻融循环中保持激酶活性。将经纯化的GST-c-Raf-1激酶蛋白质级分存于-80℃。
IκB用作c-Raf-1激酶的底物。IκB在细菌中表达为His标签的蛋白质(由Eder博士克隆并惠赠;ABM,Novartis,Basel)。含IκB质粒的BL21LysS细菌在LB培养基中生长到OD600为0.6然后用IPTG(1mM终浓度)于37℃3小时诱导其表达IκB,然后通过超声处理裂解细菌(微尖端界线设置为在超声缓冲液[50mM Tris pH 8.0,1mM DTT,1mM EDTA]中每一分钟三次)并10,000g离心15分钟。将上清液与硫酸铵混合得到30%的终浓度。于4℃摇动混合物15分钟然后10,000g离心15分钟。然后将沉淀重悬于含10mM BSA的结合缓冲液中(Novagen)。将此溶液用于Ni-agarose(Novagen)并根据Novagen手册洗涤。用洗脱缓冲液(0.4M咪唑,0.2M NaCl,8mM Tris pH 7.9)从柱子上洗脱IκB。在50mM Tris pH8,1mM DTT中透析含有蛋白质的级分。
在存在或不存在抑制剂的条件下通过测量33P从[γ33P]ATP掺入到IB中测定c-Raf-1蛋白激酶的活性。在96孔板中于室温60分钟进行此测定法。其含有(30μl的终体积):c-rafl1激酶(400ng),25mM Tris·HCl,pH7.5,5mM MgCl2,5mM MnCl2,10μM Na3VO4,1mM DTT和0.3μCi/测定[γ33P]-ATP(10μM ATP),使用600ng IB并存在1%DMSO。通过加入10μL 250mM EDTA终止反应并将30μL反应混合物转移到预先用甲醇浸泡5分钟的Immobilon-PVDF膜上(Millipore,Bedford,MA,USA),用水漂洗,然后用0.5%H3PO4浸泡5分钟并置于与真空源脱连接的真空总腔。点上所有的样品之后,连接真空并用200μL 0.5%H3PO4漂洗每一个孔。移下膜并在摇床上用0.5%H3PO4洗涤4次,用乙醇洗涤一次。室温干燥,置于Packard TopCount 96孔支架中并加入10μL/孔的MicroscintTM(Packard)后计数膜。
式(I)的化合物在0.1-50μM范围内,优选在0.1-10μM范围内显示c-Raf-1抑制。
本发明的化合物作为肝配蛋白B4受体(EphB4)激酶抑制剂的功效可如下证明:
Bac-to-BacTM(Invitrogen Life Technologies,Basel,瑞士)GST-融合表达载体的产生:将EphB类的整个细胞质编码区通过PCR从分别来自人胎盘或脑的cDNA文库扩增。产生表达人EphB4受体(SwissProt数据库,登记号P54760)的氨基酸区域566-987的重组杆状病毒。将GST序列克隆到pFastBac1载体(Invitrogen Life Technologies,Basel,瑞士)中并进行PCR扩增。分别将编码EphB4受体结构域的cDNA克隆至改变的FastBac1载体的GST序列的3’框内以产生pBac-to-BacTM供体载体。将由转化产生的单个集落接种以产生用于小规模质粒制备的过夜培养物。质粒DNA的限制酶分析表明数个克隆含有期望大小的嵌入物。通过自动测序证实在两条链上均有嵌入物和约50bp侧翼载体序列。
病毒的制备:若无另外说明,根据GIBCO提供的方案制备每种激酶的病毒。简言之,将含有激酶结构域的转移载体转染到DH10Bac细胞系(GIBCO)中并铺在选择性琼脂板上。融合序列未嵌入病毒基因组(细菌所携带)中的集落为蓝色。选出单个的白色集落,通过标准质粒纯化方法从细菌中分离出病毒DNA(杆状病毒穿梭载体)。然后,使用Cellfectin试剂将Sf9细胞或Sf21细胞转染到含病毒DNA的25cm2瓶中。
GST标签激酶的纯化:将经离心的细胞裂解物加到2mL谷胱甘肽琼脂糖柱上(Pharmacia)并用10mL 25mM Tris-HCI,pH 7.5,2mM EDTA,1mM DTT,200mM NaCl洗涤3次。然后通过10次(每次1mL)用25mMTris-HCI,pH 7.5,10mM还原谷胱甘肽,100mM NaCl,1mM DTT,10%甘油洗脱GST标签的蛋白质并存于-70℃。
蛋白激酶的测定:在有或无抑制剂的存在下,通过测定从[□33P]ATP掺入至作为底物的谷氨酸和酪氨酸聚合物(poly(Glu,Tyr))中的33P来测定蛋白激酶的活性。采用纯化的GST-EphB(30ng)进行的激酶测定于环境温度、在含有20mM Tris·HCl(pH7.5),10mM MgCl2,3-50mM MnCl2,0.01mM Na3VO4,1%DMSO,1mM DTT,3μg/mL poly(Glu,Tyr)4∶1(Sigma;St.Louis,Mo.USA)和2.0-3.0μM ATP(γ-[33P]-ATP 0.1μCi)的30□L终体积中进行15-30分钟。通过加入20μL 125mM EDTA终止测定。随后,将40μL反应混合物转移到Immobilon-PVDF膜(Millipore,Bedford,MA,USA)上,所述膜预先用甲醇浸泡5分钟,用水漂洗,然后用0.5%H3PO4浸泡5分钟并装到带有断开真空源的真空歧管上。所有样品点样后,连接真空并用200μL 0.5%H3PO4漂洗每个孔。移去膜,在摇床上用1.0%H3PO4洗涤4次,用乙醇洗涤1次。于环境温度干燥,在Packard TopCount96孔架中封固,加入10μL/孔MicroscintTM(Packard),然后对膜进行计数。通过4个浓度(通常为0.01、0.1、1和10μM)下每种化合物(一式两份)的抑制百分率的线性回归分析来计算IC50值。一个单位的蛋白激酶活性定义为于37℃每分钟、每mg蛋白质有1nmole 33P ATP从[γ33P]ATP中转移到底物蛋白。式I化合物显示的EphB4抑制低至1nM,IC50值优选在0.001-5.0μM之间。
备选地,EphB4受体自身磷酸化可如下检测:EphB4受体自身磷酸化的抑制可用细胞内的体外实验证实,该细胞例如持续表达人EphB4(SwissProt登录号P54760)的转染的A375人黑素瘤细胞(ATCC号:CRL-1619),其接种在6孔细胞培养板里的完全培养基(具有10%胎牛血清=FCS)中并于37℃在5%CO2中培养至它们表现约90%汇合。然后待测试的化合物稀释于培养基(无FCS,具有0.1%牛血清白蛋白)中,并加至细胞。(对照包含无待检测化合物的培养基)。加入1mg/ml可溶的肝配蛋白B2-Fc(s-肝配蛋白B2-Fc:R&D Biosystems,CatNr 496-EB)和0.1mM原钒酸盐诱导配体诱导的自身磷酸化。37℃下再培养20分钟,用冰冷的PBS(磷酸缓冲盐溶液)洗涤细胞两次并立即在200μl每孔的裂解缓冲液中裂解。然后离心裂解产物以除去细胞核,并使用市售蛋白质测定(BIORAD)测定上清液的蛋白质浓度。然后裂解物可立即使用或如果需要的话存于-20℃。
进行夹心ELISA测量EphB4磷酸化:为了捕获磷酸化的EphB4蛋白,将100ng/孔的肝配蛋白B2-Fc(s-肝配蛋白B2-Fc:R&D Biosystems,CatNr 496-EB)固定于MaxiSorb(Nunc)ELISA平板上。然后洗涤平板并用含Tween 20(聚氧乙烯(20)-失水山梨糖醇单月桂酸酯,ICI/Uniquema)的磷酸盐缓冲液(PBST)中的3%TopBlock(Juro,Cat#TB232010)饱和其余的游离蛋白质结合位点。然后在这些平板中室温孵育细胞裂解物(100μg蛋白质/孔)1小时。用PBS洗涤小孔3次,然后加入与碱性磷酸酶偶联的抗磷酸酪氨酸抗体(PY20碱性磷酸盐偶联:ZYMED,Cat Nr03-7722),再孵育1小时。再次洗涤平板,然后证明抗磷酸酪氨酸抗体与捕获的磷酸化受体的结合,并在0.5-1小时后使用10mM D-对硝基苯磷酸作为底物,测量405nm的OD。阳性对照(用钒酸盐和s-肝配蛋白B2-Fc刺激)的信号和阴性对照(未刺激)的信号间的差异与最大EphB4磷酸化对应(=100%)。受检测物质的活性计算为最大EphB4磷酸化的百分比抑制,其中诱导半数最大抑制的物质浓度定义为IC50(50%抑制的抑制量)。
体内证明式(I)化合物抗肿瘤活性的实验:例如,为了测试诸如下文实施例1给出的式(I)化合物是否体内抑制VEGF介导的血管发生,在小鼠中测试了该化合物对由生长因子移植体模型中的VEGF诱导的血管发生的影响:在多孔的特氟隆小室中装入0.8%W/V的包含肝素(20单位/毫升)(含或不含生长因子(2pg/ml人VEGF))的琼脂,然后将其皮下植入C57/C6小鼠背部侧面。从植入该小室当天开始用所述待测试化合物(例如每天一次口服25、50或100mg/kg)或载体处理上述小鼠,并持续四天。处理结束时,处死小鼠,并移去小室。小心地移出生长在小室周围的血管化组织,将其称重,并通过测量该组织的血红蛋白含量来评定血液含量(Drabkins法;Sigma,Deisenhofen,德国)。先前已经证实这些生长因子诱导这些生长在小室周围的组织(组织学上的特征为包含成纤维细胞和小血管)在重量和血液含量上呈现剂量依赖性的增长,并且已经证实所述反应被特异中和VEGF的抗体阻断(见Wood JM等人,Cancer Res.60(8),2178-2189,(2000)以及Schlaeppi等人,J.Cacner Res.Clin.Oncol.125,336-342,(1999))。利用这个模型,能够证实式(I)化合物的抑制作用。
本发明也涉及包含式(I)化合物的药物组合物,涉及它们的治疗性(在本发明更广义的方面也涉及预防性)治疗的用途或者治疗激酶依赖性疾病、尤其是上文叙述的优选疾病中的方法,涉及所述用途的化合物,并且涉及药物制剂、尤其是所述用途药物制剂的制备。
本发明还涉及体内转化为所述式(I)化合物的式(I)化合物前体药物。因此,任何谈及的式(I)化合物根据需要和有利地也理解为式(I)化合物对应的前体药物。
本发明的可药用化合物也可以用于例如制备包含有效量式(I)化合物或其可药用盐的药物组合物,所述式(I)化合物或其可药用盐作为活性成分与一种或多种显著量的无机或有机的固体或液体的可药用载体一起或混合。
本发明还涉及适合给温血动物尤其是人(或者来自温血动物尤其是人的细胞或细胞系,如淋巴细胞)施用的、用于治疗或者预防(在本发明更广义的方面)对激酶活性的抑制起反应的疾病的、包含一定量式(I)化合物或其可药用盐的药物组合物,所述一定量式(I)化合物或其可药用盐对所述抑制是有效的,尤其当其与至少一种可药用载体一起时。
根据本发明的药物组合物为那些经肠内(例如鼻的、直肠的或口腔的)或肠胃外(例如肌内的或静脉内的)施用于温血动物(尤其是人)的、单独或者与显著量的可药用载体一起的包含有效剂量药学活性成分的药物组合物。有效成分的剂量取决于温血动物的物种、体重、年龄以及个体条件、个体药物代谢动力学数据、待治疗的疾病和给药模式。
本发明也涉及治疗对激酶的抑制起反应的疾病的治疗方法,所述方法包括向尤其是温血动物(例如由于一种上述疾病需要该治疗的人)施用(抗所述疾病)的预防或治疗有效量的根据本发明的式(I)化合物。
式(I)化合物或其可药用盐向温血动物例如大约70kg体重的人施用的剂量优选从大约3毫克/人/天至大约10克/人/天、更加优选从大约10毫克/人/天至大约1.5克/人/天、最优选从大约100毫克/人/天至大约1000毫克/人/天,优选分成1-3个例如相同大小的单剂量。一般而言,儿童接受成年人剂量的一半。
该药物组合物包含从大约1%至大约95%、优选从大约20%至大约90%的活性成分。根据本发明的药物组合物可以是例如单位剂量的形式,例如安瓿剂、小瓶、栓剂、锭剂、片剂或者胶囊剂形式。
本发明的药物组合物通过本身已知的方式,例如通过常规的溶解、冻干、混合、粒化或成型过程进行制备。
优选使用活性成分的溶液、还有悬液、特别是等渗水溶液或悬液,例如在为仅包含活性成分或包含活性成分和载体(例如甘露醇)的冻干组合物时,所述溶液或悬液可在使用之前制备。该药物组合物可以进行灭菌,和/或包含诸如防腐剂、稳定剂、湿润剂和/或乳化剂、增溶剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂的赋形剂,并且通过本身已知的方式、例如通过常规的溶解或冻干过程的方式进行制备。所述溶液或悬液可以包含增加粘度的物质,例如羧甲基纤维素纳、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯吡咯酮或者明胶。
油中悬液包含作为油成分的、通常用于注射目的的植物的、合成的或者半合成油。尤其可以提及的是这样的液体脂肪酸酯,其包含作为酸性成分的、具有8-22个、尤其是12-22个碳原子的长链脂肪酸,诸如月桂酸、十三烷酸、十四烷酸、十五烷酸、软脂酸、十七烷酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸或相应未饱和酸、例如油酸、反油酸、芥酸、巴西勒酸或亚油酸,如果希望的话,所述液体脂肪酸酯中加入抗氧化剂诸如维生素E、β-胡萝卜素或3,5-二-叔丁基-4-羟基甲苯。那些脂肪酸酯的醇成分最大具有6个碳原子,并且是诸如单、双或三羟基的单羟基或多羟基醇,诸如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇或其异构体,但优选乙二醇和丙三醇。因此,提及下列脂肪酸酯的实例:油酸乙酯、十四烷酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、“Labrafil M 2375”(聚氧乙烯甘油三油酸酯,Gattefosse,巴黎)、“Miglyol812”(具C8至C12链长的饱和脂肪酸的甘油三酸酯,Huis AG,德国)、但尤其是诸如棉子油、杏仁油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油、大豆油并特别优选花生油的植物油。
可以通过组合活性成分和固体载体、粒化所得混合物(如果期望的话)、并在加入适当赋形剂后将该混合物加工为片剂、锭剂或胶囊剂(如果期望或需要的话),从而获得口服的药物组合物。也可能将它们整合进入塑料载体,以便活性成分能够以数量可测的方式进行扩散或释放。
特别合适的载体有填充剂,例如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇的糖、纤维素制剂和/或诸如磷酸三钙或磷酸氢钙的磷酸钙,以及粘合剂,例如使用诸如玉米、小麦、水稻或马铃薯淀粉的淀粉糊、明胶、西黄耆胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素纳和/或聚乙烯吡咯烷酮,和/或崩解剂(如果期望的话),例如上述淀粉、和/或羧甲基淀粉、交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、海藻酸或其诸如海藻酸钠的盐。赋形剂尤其是流动调节剂和润滑剂,例如硅酸、滑石、硬脂酸或其诸如硬脂酸镁或硬脂酸钙的盐、和/或聚乙二醇。锭剂片心以适当的、任选地肠道的包衣提供,包含阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛,或者由溶于适当有机溶剂的包衣溶液用于制备包衣,或者为了制备肠溶包衣,由适当的纤维素制剂溶液例如乙基纤维素邻苯二甲酸盐或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸盐制备。胶囊是用明胶制备的干填充胶囊和用明胶及诸如丙三醇或山梨糖醇的增塑剂制备的密封软胶囊。所述干填充胶囊可以包含颗粒形式的活性成分,例如具有诸如乳糖的填充剂、诸如淀粉的粘合剂和/或诸如滑石或硬脂酸镁的助流剂,并且如果希望的话还具有稳定剂。在软胶囊中,优选将活性成分溶解或悬浮于诸如脂肪油、石蜡油或液体聚乙二醇的适当油性赋形剂中,也可加入稳定剂和/或抗菌剂。例如为了分辨目的或者为了指示活性成分的不同剂量,可以向片剂或锭剂包衣或胶囊外壳中加入染料或色素。
式(I)化合物也可以用于与其它抗增殖剂组合。所述抗增殖剂包括但不局限于芳化酶抑制剂、抗雌激素药、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、微管活性剂、烷化剂、组蛋白脱乙酰基酶抑制剂、诱导细胞分化过程的化合物、环加氧酶抑制剂、MMP抑制剂、mTOR抑制剂、抗肿瘤的抗代谢物、铂化合物、靶向/降低蛋白激酶或脂质激酶活性的化合物和进一步抗血管生成的化合物、靶向、降低或抑制蛋白质磷酸酶或脂质磷酸酶活性的化合物、促性腺激素释放因子激动剂、抗雄激素药、甲硫氨酸氨肽酶抑制剂、二膦酸盐、生物反应调节剂、抗增殖性抗体、类肝素酶抑制剂、Ras致癌同种型抑制剂、端粒末端转移酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、用于治疗血液性恶性肿瘤的试剂、靶向、降低或抑制Flt-3活性的化合物、Hsp90抑制剂、替莫唑胺(TEMODAL)和甲酰四氢叶酸。
本文所用的术语“芳化酶抑制剂”涉及抑制雌激素生成即抑制底物雄烯二酮和睾酮分别转化为雌酮和雌二醇的化合物。该术语包括但不局限于类固醇、尤其是阿他美坦、依西美坦和福美坦,以及特别地非类固醇的、尤其是氨鲁米特、洛太米特、吡鲁米特、曲洛司坦、睾内脂、肤康王、伏氯唑、法倔唑、阿那曲唑和来曲唑。依西美坦可以以例如其诸如商标AROMASIN的商品化形式进行施用。福美坦可以以例如其诸如商标LENTARON的商品化形式进行施用。法倔唑可以以例如其诸如商标AFEMA的商品化形式进行施用。阿那曲唑可以以例如其诸如商标ARIMIDEX的商品化形式进行施用。来曲唑可以以例如其诸如商标FEMARA或FEMAR的商品化形式进行施用。氨鲁米特可以以例如其诸如商标ORIMETEN的商品化形式进行施用。包含的化学治疗剂为芳化酶抑制剂的本发明组合对于治疗诸如乳腺肿瘤的激素受体阳性肿瘤尤其有用。
文中所用的术语“抗雌激素药”涉及在雌激素受体水平对抗雌激素效应的化合物。该术语包括但不局限于他莫西芬、氟维司群、雷咯昔芬和盐酸雷咯昔芬。他莫西芬可以以例如其诸如商标NOLVADEX的商品化形式进行施用。盐酸雷咯昔芬可以以例如其诸如商标EVISTA的商品化形式进行施用。氟维司群可以按照US 4,659,516公布的配方进行制造或者其可以以例如其诸如商标FASLODEX的商品化形式进行施用。包含的化学治疗剂为抗雌激素药的本发明组合对于治疗诸如乳腺肿瘤的雌激素受体阳性肿瘤尤其有用。
文中所用术语“抗雄激素”涉及任何能够抑制雄激素生物效应的物质,并且包括但不局限于能够按照US 4,636,505公布的配方制造的比卡鲁胺(CASODEX)。
文中所用术语“促性腺激素释放因子激动剂”包括但不局限于阿巴瑞克、戈舍瑞林和醋酸戈舍瑞林。戈舍瑞林在US 4,100,274中得到公布,并且能够以例如其诸如商标ZOLADEX的商品化形式进行施用。阿巴瑞克可以按照US 5,843,901中公布的配方进行制造。
文中所用术语“拓扑异构酶I抑制剂”包括但不局限于托泊替康、gimatecan、依立替康、喜树碱及其类似物、9-硝基喜树碱和大分子的喜树碱结合物PNU-166148(WO 99/17804中的化合物A1)。依立替康可以以例如其诸如商标CAMPTOSAR的商品化形式进行施用。托泊替康可以以例如其诸如商标HYCAMTIN的商品化形式进行施用。
文中所用术语“拓扑异构酶II抑制剂”包括但不局限于诸如多柔比星(包含脂质体制剂,如CAELYX)、柔红霉素、表柔比星、伊达比星和奈莫柔比星、米托蒽醌和洛索蒽醌(蒽醌)、以及依托泊苷和替尼泊苷(鬼臼毒素)。依托泊苷可以以例如其诸如商标ETOPOPHOS的商品化形式进行施用。替尼泊苷可以以例如其诸如商标VM 26-BRISTOL的商品化形式进行施用。多柔比星可以以例如其诸如商标ADRIBLASTIN或ADRIAMYCIN的商品化形式进行施用。表柔比星可以以例如其诸如商标FARMORUBICIN的商品化形式进行施用。伊达比星可以以例如其诸如商标ZAVEDOS的商品化形式进行施用。米托蒽醌可以以例如其诸如商标NOVANTRON的商品化形式进行施用。
术语“微管活性剂”涉及微管稳定剂、微管去稳定剂和微管聚合抑制剂,其包括但不局限于诸如紫杉醇和多西紫杉的紫杉烷、诸如长春碱、尤其是硫酸长春碱盐的长春花生物碱、尤其是硫酸长春新碱的长春新碱、长春瑞滨、discodermolide、秋水仙碱和诸如epothilone B或D或其衍生物的epothilone及其衍生物。紫杉醇可以以例如其诸如商标TAXOL的商品化形式进行施用。多西紫杉可以以例如其诸如商标TAXOTERE的商品化形式进行施用。硫酸长春碱可以以例如其诸如商标VINBLASTIN R.P的商品化形式进行施用。硫酸长春新碱可以以例如其诸如商标FARMISTIN的商品化形式进行施用。Discodermolide可以按照例如US 5,010,099公布的配方进行制造。还包含WO 98/10121、US 6,194,181、WO 98/25929、WO 98/08849、WO99/43653、WO 98/22461和WO 00/31247中公布的Epothilone衍生物。特别优选Epothilone A和/或B。
文中所用术语“烷化剂”包括但不局限于环磷酰胺、异磷酰胺、美法仑或亚硝基脲(BCNU或Gliadel)。环磷酰胺可以以例如其诸如商标CYCLOSTIN的商品化形式进行施用。异磷酰胺可以以例如其诸如商标HOLOXAN的商品化形式进行施用。
术语“组蛋白脱乙酰基酶抑制剂”或“HDAC抑制剂”涉及抑制组蛋白脱乙酰基酶并且具有抗增殖活性的化合物。这包括WO 02/22577中公布的化合物,尤其是N-羟基-3-[4-[[(2-羟乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺、N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺及其可药用盐。其还特别包含辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)。
术语“抗肿瘤的抗代谢物”包括但不局限于5-氟尿嘧啶或5-FU、卡培他滨、吉西他滨、DNA脱甲基化剂、例如5-阿扎胞苷和地西他滨、氨甲喋呤和依达曲沙、以及诸如培美曲塞的叶酸拮抗剂。卡培他滨可以以例如其诸如商标XELODA的商品化形式进行施用。吉西他滨可以以例如其诸如商标GEMZAR的商品化形式进行施用。还包括单克隆抗体曲妥单抗,其可以以例如其诸如商标HERCEPTIN的商品化形式进行施用。
文中所用术语“铂化合物”包括但不局限于卡铂、顺铂、顺氯氨铂和奥沙利铂。卡铂可以以例如其诸如商标CARBOPLAT的商品化形式进行施用。奥沙利铂可以以例如其诸如商标ELOXATIN的商品化形式进行施用。
本文所用术语“靶向/降低蛋白质或脂质激酶活性、或者蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物或者进一步的抗血管生成的化合物”包括但不局限于:蛋白质酪氨酸激酶抑制剂和/或丝氨酸和/或苏氨酸激酶抑制剂、或者脂质激酶抑制剂,例如:
a)靶向、降低或抑制血小板衍生的生长因子受体(PDGFR)活性的化合物,例如靶向、降低或抑制PDGFR活性的化合物,尤其是抑制PDGF受体的化合物,例如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物,如imatinib、SU101、SU6668和GFB-111;
b)靶向、降低或抑制成纤维细胞生长因子受体(FGFR)活性的化合物;
c)靶向、降低或抑制胰岛素样生长因子受体I(IGF-IR)活性的化合物,例如靶向、降低或抑制IGF-IR活性的化合物,尤其是抑制IGF-IR受体的化合物,如WO 02/092599中公布的那些化合物;
d)靶向、降低或抑制Trk受体酪氨酸激酶家族活性的化合物;
e)靶向、降低或抑制Axl受体酪氨酸激酶家族活性的化合物;
f)靶向、降低或抑制c-Met受体活性的化合物;
g)靶向、降低或抑制Kit/SCFR受体酪氨酸激酶活性的化合物;
h)靶向、降低或抑制C-kit受体酪氨酸激酶(PDGFR家族的一部分)活性的化合物,例如靶向、降低或抑制c-Kit受体酪氨酸激酶家族活性的化合物,尤其是抑制c-Kit受体的化合物,例如imatinib;
i)靶向、降低或抑制c-Abl家族成员及其基因融合产物(例如BCR-Abl激酶)活性的化合物,例如靶向、降低或抑制c-Abl家族成员及其基因融合产物的化合物,例如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物,例如imatinib、PD180970、AG957、NSC 680410或来自ParkeDavis的PD173955;
j)靶向、降低或抑制蛋白激酶C(PKC)和丝氨酸/苏氨酸激酶的Raf家族成员、MEK、SRC、JAK、FAK、PDK和Ras/MAPK家族成员或者PI(3)激酶家族或PI(3)激酶相关激酶家族成员、和/或细胞周期蛋白依赖性激酶家庭(CDK)成员活性的、并且尤其是那些US 5,093,330中公布的诸如米哚妥林的星形孢菌素衍生物的化合物;其它化合物的实例还包括例如UCN-01、沙芬戈、BAY 43-9006、苔藓抑素I、哌立福辛、,llmofosine、RO 318220和RO 320432;诸如WO 00/09495中公布的那些异喹啉化合物、FTI、PD184352或QAN697(P13K抑制剂);
k)靶向、降低或抑制蛋白质酪氨酸激酶抑制剂活性的化合物,例如靶向、降低或抑制蛋白质酪氨酸激酶抑制剂活性的、包括甲磺酸伊马替尼(GLEEVEC)或酪氨酸磷酸化抑制剂的化合物。酪氨酸磷酸化抑制剂优选低分子量(Mr<1500)的化合物或其可药用盐,尤其是选自苄叉丙二腈类或者S-芳基苯丙二腈或双底物喹啉类(bisubstrate quinoline class)的化合物,更尤其是选自酪氨酸磷酸化抑制剂A23/RG-50810、AG 99、酪氨酸磷酸化抑制剂AG 213、酪氨酸磷酸化抑制剂AG 1748、酪氨酸磷酸化抑制剂AG 490、酪氨酸磷酸化抑制剂B44、酪氨酸磷酸化抑制剂B44(+)对映异构体、酪氨酸磷酸化抑制剂AG 555、AG 494、酪氨酸磷酸化抑制剂AG 556、AG957和adaphostin(4-{[(2,5-二羟基苯基)甲基]氨基}-苯甲酸金刚烷酯、NSC 680410、adaphostin)的化合物;以及
I)靶向、降低或抑制受体酪氨酸激酶的表皮生长因子家族(同二聚体或异二聚体的EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4)活性的化合物,例如靶向、降低或抑制表皮生长因子受体家族活性的化合物尤其是抑制诸如EGF受体、ErbB2、ErbB3和ErbB4的EGF受体酪氨酸激酶家族成员或者结合EGF或EGF相关配体的化合物、蛋白质或抗体,并且特别是那些WO97/02266中一般性和特别地公布的化合物、蛋白质或单克隆抗体,例如实施例39的化合物或EP 0 564 409、WO 99/03854、EP 0520722、EP 0 566226、EP 0 787 722、EP 0 837 063、US 5,747,498、WO 98/10767、WO 97/30034、WO 97/49688、WO 97/38983、并且尤其是WO 96/30347(例如命名为CP 358774的化合物)、WO 96/33980(例如化合物ZD 1839)和WO 95/03283(例如化合物ZM105180)中的化合物,例如司徒曼布(HERCEPTIN)、西妥昔单抗、Iressa、Tarceva、OSI-774、CI-1033、EKB-569、GW-2016、E1.1、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.11、E6.3或E7.6.3、以及WO 03/013541中公布的7H-吡咯并-[2,3-d]嘧啶衍生物。
进一步的抗血管生成的化合物包括它们的活性具有另一机制、例如与蛋白质或脂质激酶抑制无关的化合物,例如沙利度胺(THALOMID)和TNP-470。
靶向、降低或抑制蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物是诸如磷酸酶1、磷酸酶2A、PTEN或CDC25的抑制剂,例如冈田酸或其衍生物。
诱导细胞分化过程的化合物例如视黄酸、α-γ-或β-生育酚或α-γ-或δ-生育三烯酚。
文中所用术语环加氧酶抑制剂包括但不局限于例如Cox-2抑制剂、5-烷基取代的2-芳基氨基苯乙酸及衍生物,例如塞来考昔(CELEBREX)、罗非考昔(VIOXX)、艾托考昔、伐地考昔或5-烷基-2-芳基氨基苯乙酸,例如5-甲基-2-(2′-氯-6′-氟苯胺基)苯乙酸、lumiracoxib。
本文所用术语“二膦酸盐”包括但不局限于etridonic acid、clodronicacid、替鲁磷酸、帕米磷酸、阿仑磷酸、伊班磷酸、利塞磷酸和唑来磷酸。“Etridonic acid”可以以例如其诸如商标DIDRONEL的商品化形式进行施用。“Clodronic acid”可以以例如其诸如商标BONEFOS的商品化形式进行施用。“替鲁磷酸”可以以例如其诸如商标SKELID的商品化形式进行施用。“帕米磷酸”可以以例如其诸如商标AREDIATM的商品化形式进行施用。“阿仑磷酸”可以以例如其诸如商标FOSAMAX的商品化形式进行施用。“伊班磷酸”可以以例如其诸如商标BONDRANAT的商品化形式进行施用。“利塞磷酸”可以以例如其诸如商标ACTONEL的商品化形式进行施用。“唑来磷酸”可以以例如其诸如商标ZOMETA的商品化形式进行施用。
术语“mTOR抑制剂”涉及抑制雷帕霉素的哺乳动物靶点(mTOR)、并且具有抗增殖活性的化合物,例如西罗莫司(Rapamune)、依维莫司(CerticanTM)、CCI-779和ABT578。
本文所用术语“类肝素酶抑制剂”是指靶向、降低或抑制硫酸肝素降解的化合物。该术语包括但不局限于PI-88。
本文所用术语“生物反应调节剂”是指淋巴因子或干扰素,例如干扰素γ。
本文所用的诸如H-Ras、K-Ras或N-Ras的术语“Ras致癌同种型抑制剂”是指靶向、降低或抑制Ras致癌活性的化合物,例如“法尼基转移酶抑制剂”,例如L-744832、DK8G557或P115777(Zarnestra)。
本文所用术语“端粒末端转移酶抑制剂”是指靶向、降低或抑制端粒末端转移酶活性的化合物。靶向、降低或抑制端粒末端转移酶活性的化合物尤其是抑制端粒末端转移酶受体的化合物,例如telomestatin。
本文所用术语“甲硫氨酸氨肽酶抑制剂”是指靶向、降低或抑制甲硫氨酸氨肽酶活性的化合物。靶向、降低或抑制甲硫氨酸氨肽酶活性的化合物例如bengamide或其衍生物。
本文所用术语“蛋白酶体抑制剂”是指靶向、降低或抑制蛋白酶体活性的化合物。靶向、降低或抑制蛋白酶体活性的化合物包括例如PS-341和MLN 341。
本文所用术语“基质金属蛋白酶抑制剂”或“MMP”抑制剂包括但不局限于胶原肽模拟抑制剂和非肽模拟抑制剂、四环素衍生物,例如异羟肟酸肽模拟抑制剂巴马司他及其口服的生物有效性类似物马立马司他(BB-2516)、普啉司他(AG3340)、metastat(NSC 683551)、BMS-279251、BAY 12-9566、TAA211、MM1270B或AAJ996。
本文所用术语“用于治疗血液性恶性肿瘤的试剂”包括但不局限于FMS样酪氨酸激酶抑制剂(例如靶向、降低或抑制FMS样酪氨酸激酶受体(Flt-3R)活性的化合物)、干扰素、1-b-D-阿糖呋喃胞嘧啶(ara-c)和重硫酸盐(bisulfan)、以及诸如靶向、降低或抑制复原性淋巴瘤激酶的化合物的ALK抑制剂。
靶向、降低或抑制FMS样酪氨酸激酶受体(Flt-3R)活性的化合物尤其是抑制Flt-3R受体激酶家族元化合物、蛋白质或抗体,例如PKC412、米哚妥林、星形孢菌素衍生物、SU11248和MLN518。
本文所用术语“HSP90抑制剂”包括但不局限于靶向、降低或抑制HSP90的内源腺苷三磷酸酶活性的化合物;通过泛素蛋白酶体途径降解、靶向、降低或抑制HSP90服务蛋白(HSP90 client protein)的化合物。靶向、降低或抑制HSP90内源的腺苷三磷酸酶活性的化合物尤其是抑制HSP90的腺苷三磷酸酶活性的化合物、蛋白质和抗体,例如一种格尔德霉素衍生物17-烯丙氨基,17-去甲氧基格尔德霉素(17AAG)、格尔德霉素相关的其它化合物、根赤壳菌素抑制剂和HDAC抑制剂。
本文所用术语“抗增殖性抗体”包括但不局限于曲妥单抗(HerceptinTM)、曲妥单抗-DM1、erlotinib(TarcevaTM)、贝伐单抗(AvastinTM)、美罗华(Rituxan)、PR064553(抗CD40)和抗体2C4。抗体是指例如完整的单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两种完整抗体组成的多特异性抗体、以及抗体片段,只要它们呈现目的生物学活性。
为了治疗急性髓细胞样白血病(AML),可以将式(I)化合物与标准的非白血性白血病疗法联合,尤其是与用于治疗AML的疗法联合。具体而言,例如可以联合服用式(I)化合物和法尼基转移酶抑制剂和/或其它诸如柔红霉素、多柔比星、Ara-C、VP-16、替尼泊苷、米托蒽醌、伊达比星、碳铂和PKC412的对治疗AML有用的药物。
术语“抗白血病的化合物”包括例如Ara-C、嘧啶类似物,所述嘧啶类似物为脱氧胞苷的2′-α-羟基核糖(阿糖胞苷)衍生物。还包括次黄嘌呤、6-巯基嘌呤(6-MP)和磷酸氟达拉滨的嘌呤类似物。
靶向、降低或抑制组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂活性的化合物,例如丁酸钠和辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA),抑制称为组氨酸脱乙酰基酶的酶活性。特定的HDAC抑制剂包含MS275、SAHA、FK228(以前的FR901228)、曲古抑菌素A(Trichostatin A)和US 6,552,065中公布的化合物,尤其是,N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1 H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐,以及N-羟基-3-[4-[(2-羟乙基){2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其可药用盐,尤其是乳酸盐。
靶向、降低或抑制丝氨酸/苏氨酸mTOR激酶活性的化合物尤其是抑制mTOR激酶家族元化合物、蛋白质或抗体,例如RAD、RAD001、CCI-779、ABT578、SAR543、雷帕霉素及其衍生物、来自Ariad的AP23573、伊维莫司(CERTICAN)和西罗莫司。
本文所用的生长激素释放抑制因子受体的拮抗剂是指靶向、治疗或抑制生长激素释放抑制因子受体的试剂,例如奥曲肽和SOM230。
肿瘤细胞损伤方式指代诸如电离辐射的方式。上文和下文所述术语“电离辐射”表示以电磁射线(例如x-射线和γ-射线)或粒子(例如α-粒子和β-粒子)发生的电离辐射。电离辐射用于(但不局限于)辐射疗法,并在本领域是已知的。见Hellman,Principles of Radiation Therapy,Cancer,in Principles and Practice of Oncology,Devita等人编辑,第四版,Vol.1,pp.248-275(1993)。
本文所用术语EDG结合剂指代一类调节淋巴细胞再循环的免疫抑制剂,例如FTY720。
CERTICAN(依莫维司,RAD)是新研究的增殖信号抑制剂,其阻止T细胞和血管平滑肌细胞增殖。
术语核苷酸还原酶抑制剂指代包括但不局限于氟达拉滨和/或阿糖胞苷(ara-C)、6-硫代鸟嘌呤、5-氟尿嘧啶、克拉曲滨、6-巯基嘌呤(尤其是与ara-C连用治疗ALL)和/或喷司他丁的嘧啶或嘌呤核苷类似物。核苷酸还原酶抑制剂尤其是羟基脲或2-羟基-1 H-异吲哚-1,3-二酮衍生物,例如Nandy等人在Acta Oncologica,Vol.33,No.8,pp.953-961(1994)中提及的PL-1、PL-2、PL-3、PL-4、PL-5、PL-6、PL-7或PL-8。
本文所用术语“S-腺苷蛋氨酸脱羧酶抑制剂”包括但不局限于US5,461,076中公布的化合物。
还特别包含WO 98/35958中公布的诸如1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)-2,3-二氮杂萘或其可药用盐(例如琥珀酸盐)的、WO 00/09495、WO00/27820、WO 00/59509、WO 98/11223、WO00/27819和EP 0 769 947中公布的化合物、蛋白质或VEGF的单克隆抗体,包括那些在Prewett等人,Cancer Res,Vol.59,pp.5209-5218(1999)、Yuan等人,Proc Natl Acad SciU S A,Vol.93,pp.14765-14770(1996)、Zhu等人,Cancer Res,Vol.58,pp.3209-3214(1998)和Mordenti等人,Toxicol Pathol,Vol.27,No.1,pp.14-21(1999)、WO 00/37502和WO 94/10202中描述的化合物、蛋白质或单克隆抗体,包括O′Reilly等人Cell,Vol.79,pp.315-328(1994)中描述的血管他丁(ANGIOSTATIN)、O′Reilly等人,Cell,Vol.88,pp.277-285(1997)中描述的内皮他丁(ENDOSTATIN)、邻氨基苯甲酸酰胺、ZD4190、ZD6474、SU5416、SU6668、贝伐单抗或者抗VEGF抗体或抗VEGF受体的抗体(例如rhuMAb和RHUFab)、VEGF适体(例如Macugon)、FLT-4抑制剂、FLT-3抑制剂、VEGFR-2IgG1抗体、Angiozyme(RPI 4610)和Avastan。
本文所用光动力学疗法指代使用某些已知为光增敏剂的化学药物来治疗或预防癌症的疗法。光动力学疗法的实例包括使用诸如VISUDYNE和卟吩姆钠的试剂的疗法。
本文所用血管稳定(Angiostatic)类固醇指代阻止或抑制血管发生的试剂,例如阿奈可他、曲安西龙、氢化可的松、11-α-表氢化可的松、11-脱氧皮(甾)醇、17α-羟孕酮、皮质酮、去氧皮质酮、睾酮、雌酮和地塞米松。
包含皮质类固醇的植入物指代诸如氟轻松、地塞米松的试剂。
其它的化疗剂包括但不局限于植物生物碱、激素试剂和拮抗剂、生物反应调节剂、优选淋巴因子或干扰素、反义寡核苷酸或寡核苷酸衍生物、或者混杂的试剂或具其它或未知作用机理的试剂。
通过代码编号、通用名称或商业名称鉴定的活性剂结构可以从实际版次的标准提纲“默克索引”或诸如“国际专利(Patents International)(IMS世界出版物)”的数据库中获得。
上述能与式(I)化合物联合使用的化合物可以按照该领域(例如上文引用的文献中)描述的方法进行制备和施用。
进一步地,式(I)化合物也可以用于与诸如施用激素、尤其是辐射的已知治疗方法联用。
尤其是,式(I)化合物可以用作放射增敏剂,尤其是对于对放射疗法表现为弱敏感性的肿瘤的治疗。
“联合”表示以一个剂量单位形式的固定联合、或者多组分的用于联合施用的试剂盒、或者其任意联合,在所述多组分试剂盒中式(I)化合物与联合的配偶体可以同时单独施用或者在允许联合的配偶体表现合作效应(例如协同效应)的时间间隔内各自施用。
实施例
下列实施例帮助描述本发明而不限制其范围:
缩写
DMSO 二甲基亚砜
MS(ESI) 使用电喷雾离子化作用的质谱
EtOAc 乙酸乙酯
HPLC 高压液相层析
mL 毫升
RT 室温
tRET 分钟为单位的HPLC保留时间
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱法
TMSCI 氯化三甲基甲硅烷
当未给出温度时,反应在室温进行。
溶剂的比例,例如洗脱液或溶剂混合物中的溶剂的比例以体积比体积(v/v)给出。
合成
通过使用硅胶(Merck;40-63μm)进行快速层析。使用预先包被硅胶(Merck 60 F254)的平板进行薄层层析。通过紫外线(254nm)完成成分的检测。使用Nucleosil 100-3C18 HD 125×4.0mm柱(1mL/min;7分钟内20-100% NeCN/0.1%TFA)(方法A)、SpectraSystem SP8800/UV2000使用Nucleosil 100-5 C18 AB 250×4.6mm柱(2mL/min;10分钟内2-100%MeCN/0.1%TFA)(方法B)、使用Chromalith Speed ROD RP18 50-4.6mm柱(Merck)(2mL/min;2分钟内2-100%MeCN/0.1%TFA)(方法C)或C8 2.1-50mm 3μm柱(水)(2mL/min;2分钟内5-95%MeCN/0.1%TFA)(方法D)在Agilent HP 1100上进行HPLC。用FisonsInstruments VG Platform II获得电喷质谱。用Bchi 510熔点装置测量熔点。用商业可得的溶剂和化合物进行合成。
分析的HPLC条件:
系统1
7分钟线性梯度20-100%的CH3CN(0.1%TFA)和H2O(0.1%TFA)加上2分钟100%CH3CN(0.1%TFA);在215nm检测,30℃流速1mL/min。柱子:Nucleosil 100-3 C18HD(125×4mm)。
系统2
7分钟线性梯度2-100%的CH3CN(0.1%TFA)和H2O(0.1%TFA)加上2分钟100%CH3CN(0.1%TFA);在215nm检测,30℃流速1mL/min。柱子:Nucleosil 100-3 C18HD(125×4mm)。
实施例1
6-(3-氯-苯基)-3-(3,4-二甲氧基-苯基)-5-哌嗪-1-基甲基-吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基胺
室温下将5-氯甲基-6-(3-氯-苯基)-3-(3,4-二甲氧基-苯基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基胺(实施例1;阶段1.3)(1.5g,3.49mmol)溶解于N,N’-二甲基乙酰胺(30mL)中,然后加入无水哌嗪(3.01g,34.9mMol)。将黄色溶液加热至80℃,90分钟。冷却到室温后在减压条件下浓缩。残渣置于二乙醚(20mL)中并搅拌15分钟,然后滤去剩余的粗制晶体产品。通过进行反复层析(硅胶,120g RediSep,ISCO Sg-100,CH2Cl2/MeOH=4∶1洗脱)进一步纯化。
阶段1.1:2-(3-氯-苯基)-3-氧代-丁腈
在N2环境下将355ml乙醇加热到55℃。于30分钟内向此溶液中加入钠(3.91g;0.17mol)并搅拌1.5小时直到所有金属溶解。在无色溶液中加入3-氯苄基氰(15.31g;0.1mol)和乙酸乙酯(28.53mL;0.29mol),然后在回流下搅拌5小时。反应完成后将黄色混合物冷却到室温并在减压条件下蒸发。将粗制物质置于水中(200mL)并通过加入25g柠檬酸中和。用CH2Cl2(2×250mL)萃取水层。用H2O(2×150mL)洗涤合并的有机相,干燥(Na2SO4),在减压条件下浓缩并层析(硅胶,1kg,Merck 60(0.040-0.063),用EtOAc/己烷1∶1洗脱以获得淡黄色晶体的标题化合物;mp.92-97℃;MS(ESI+):m/z=302.9(M+H)+;HPLC:A tRet=5.67分钟(系统1)。
阶段1.2:4-溴-2-(3-氯-苯基)-3-氧代-丁腈
室温下2-(3-氯-苯基)-3-氧代-丁腈(12克;62mmol)溶解于乙酸(400mL)中,然后加入brom(3.84mL;74.4mMol),冷凝器盖有CaCl2管。将黄色的溶液在90℃下搅拌90分钟。冷却到室温后在减压条件下除去溶剂。油状残渣置于甲苯(50mL)中并在减压条件下除去溶剂,该步骤重复4次。这些纯化步骤之后,分离亮黄色微细晶体的标题化合物;mp.124-132℃;MS(ESI-):m/z=271.9(M-H)-;HPLC:tRet=6.31分钟(系统2)。
阶段1.3:5-氯甲基-6-(3-氯-苯基)-3-(3,4-二甲氧基-苯基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基胺
4-溴-2-(3-氯-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例1;阶段1.2);(9.43克;34.6mmol)溶于乙醇(200mL),接着室温下加入4-(3,4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(15.2克;69.2mMol)(参见实施例93;阶段93.1,EP2005/000602)和乙醇中的HCL(111mL的1.25M溶液;138mmol)。加热回流浅黄色悬浮液共163小时;冷凝器盖有CaCl2管。冷却至室温后滤去晶状产物并用乙醇洗涤。进行快速层析(硅胶,用CH2Cl2/MeOH 98∶2洗脱)进一步纯化以获得黄色晶体的标题化合物;mp.209-211℃;MS(ESI+):m/z=429(M+H)+;HPLC:tRet=7.06分钟(系统2)。
实施例2
3-(3,4-二甲氧基-苯基)-6-(4-氟-苯基)-5-哌嗪-1-基甲基-吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基胺
如实施例1所述制备标题化合物,但是使用5-氯甲基-3-(3,4-二甲氧基-苯基)-6-(4-氟-苯基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基胺。
阶段2.1:5-氯甲基-3-(3,4-二甲氧基-苯基)-6-(4-氟-苯基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基胺
如实施例1所述制备标题化合物,但是使用2-(4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例79;阶段79.1,EP2005/000602)。标题化合物:浅黄色晶体mp.256-259℃;MS(ESI+):m/z=413(M+H)+;HPLC:tRet=6.65分钟(系统2)。
实施例1和2的理化性质
HPLCA tRet=MS [ESI]
实施例编号 MP
[分钟] (M+H)+
从 至
1 202 213.25 3.70/S1 479,1
2 201 205 4.49/S2 463,1
类似制备以下实施例3-5:
实施例3:
6-(3-氯-苯基)-3-[4-(2-二甲基氨基-乙氧基)-苯基]-5-哌嗪-1-基甲基-吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基胺
实施例4:
2-{[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-3-(3,4-二甲氧基-苯基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基甲基]-氨基}-乙醇
实施例5:
2-{[7-氨基-3-(3,4-二甲氧基-苯基)-6-(4-氯-苯基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基甲基]-氨基}-乙醇
实施例6:
包含式(I)化合物的片剂1
用常规方法制备下列组分的片剂,其中片剂包含50mg前述实施例中提及的任一式(I)化合物作为活性成分:
组分: | |
活性成分 | 50mg |
小麦淀粉 | 60mg |
乳糖 | 50mg |
胶态二氧化硅 | 5mg |
滑石 | 9mg |
硬脂酸镁 | 1mg |
175mg |
制备:将活性成分与部分小麦淀粉、乳糖和胶态二氧化硅混合,并将混合物压过筛子。另一部分小麦淀粉与5倍量的水在水浴中混合以形成糊,并且揉捏最初制备的混合物和此糊直到形成软的可塑物质。
将干颗粒压过网眼大小为3mm的筛子,与剩余的玉米淀粉、硬脂酸镁和滑石的预过筛(1mm筛子)混合物混合,并压制形成稍微两面凸起的片剂。
实施例7
包含式(I)化合物的片剂2
用下列组分按照标准方法制备片剂,其中片剂包含100mg前述实施例提及的任一式(I)化合物作为活性成分:
组分: | |
活性成分 | 100mg |
结晶乳糖 | 240mg |
微晶纤维素 | 80mg |
PVPPXL | 20mg |
Aerosil | 2mg |
硬脂酸镁 | 5mg |
447mg |
制备:将活性成分与载体材料混合并通过压片机(Korsch EKO,Stempeldurchmesser 10mm)压制。
实施例8
胶囊
根据标准方法制备下列组分的胶囊,其中胶囊包含100mg前述实施例提及的任一式(I)化合物作为活性成分:
组分: | |
活性成分 | 100mg |
微晶纤维素 | 200mg |
PVPPXL | 15mg |
Aerosil | 2mg |
硬脂酸镁 | 1.5mg |
318.5mg |
通过混合组分并将它们装入大小为1的硬明胶胶囊制备。
实施例9
实施例1和2的化合物作为EphB4和c-Abl蛋白激酶抑制剂的生物学数据:
EphB4
IEphB4 IC50[μM] | IIEphB4 ELISA-IC50[μM] | |
实施例1 | 0.001-1 | 0.001-1 |
实施例2 | 0.001-1 | 0.001-1 |
表1:肝配蛋白B4受体激酶的抑制:
栏I:实施例1和2的化合物作为EphB4受体激酶抑制剂的活性根据说明书中描述的方法在重组肝配蛋白B4受体结构域上测试。栏II:实施例1和2的化合物作为EphB4受体自身磷酸化抑制剂体外在细胞上的活性如说明书中所述测定。
c-Abl
c-Abl IC50[μM] | |
实施例1 | 0.001-1 |
实施例2 | 0.001-1 |
表2:c-Abl蛋白-酪氨酸激酶活性的抑制
实施例1和2的化合物作为c-Abl蛋白酪氨酸激酶抑制剂的活性根据说明书中描述的方法测试。
Claims (10)
1.式(I)化合物或其可药用盐:
其中:
R1为H;
R2为苄基、未取代的苯基或由一个或两个取代基取代的苯基,其中所述取代基选自卤素、二低级烷基氨基烷氧基、羟基、烷氧基、苄氧基、环烷基、氨基、乙酰氨基;
R3为H且R4为羟烷基,或
R3和R4以及它们连接的N原子一起代表吗啉基、吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基,所述杂环任选被多至四个烷基进一步取代;
A为未取代的苯基或由一个或多个取代基取代的苯基,其中所述取代基选自单、二或三低级烷氧基、二低级烷基氨基、二低级烷基氨基烷氧基;吗啉基任选被烷基二取代;哌啶基任选被二低级烷基氨基取代;并且哌嗪基任选被低级烷基、低级烷氧基、低级烷基哌嗪基、吡咯烷基、二低级烷基氨基或烷基氨基取代。
2.根据权利要求1的式(I)化合物或其可药用盐,其中:
R1为H;
R2为由氟或氯取代的苯基;
R3为H且R4为羟乙基,或
R3和R4以及它们连接的N原子一起代表哌嗪基;
A为由一个或多个取代基取代的苯基,其中所述取代基选自单、二或三甲氧基、二甲基氨基乙氧基和二乙基氨基哌啶基。
3.根据权利要求1或2的式(I)化合物在治疗人类或动物体中的用途。
4.药物组合物,其包含根据权利要求1或2的式(I)化合物。
5.药物组合物,其包含根据权利要求1或2的式(I)化合物以及可药用载体。
6.根据权利要求1或2的式(I)化合物在制备用于治疗激酶依赖性疾病的药物组合物中的用途。
7.根据权利要求6的式I化合物或其可药用盐在治疗激酶依赖性疾病中的用途,其中所述激酶依赖性疾病是一种依赖于c-Abl、Bcr-Abl、c-Kit、c-Raf、Flt-1、Flt-3、Her-1、KDR、PDGFR激酶、c-Src、RET受体激酶、FGF-R1、FGF-R2、FGF-R3、FGF-R4、肝配蛋白受体激酶(例如EphB2激酶、EphB4激酶和相关的Eph激酶)、酪蛋白激酶(CK-1、CK-2、G-CK)、Pak、ALK、ZAP70、Jak1、Jak2、Axl、Cdk1、cdk4、cdk5、Met、FAK、Pyk2、Syk、胰岛素受体激酶、Tie-2的疾病,或一种依赖于激酶如Bcr-Abl、c-Kit、c-Raf、Flt-3、FGF-R3、PDGF受体、RET和Met的组成型激活突变(激活的激酶)的疾病,以及(尤其是异常高度表达或激活的)激酶依赖性疾病,或者依赖于激酶途径活化的疾病,或者依赖于所提及的激酶中任意两个或多个的疾病。
8.根据权利要求6或7的用途,其中所述激酶依赖性疾病是一种依赖于c-abl、Flt-3、KDR、c-Src、RET、EphB4、c-kit、cdk1、FGFR-1、c-raf、Her-1、Ins-R或Tek的疾病。
9.根据权利要求6-8中任一项所述的用途,其中待治疗的疾病为增生性疾病,优选为良性肿瘤或尤其是恶性肿瘤,更优选为脑癌、肾癌、肝癌、肾上腺癌、膀胱癌、乳房癌、胃癌(尤其是胃肿瘤)、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胰癌、肺癌、阴道癌、甲状腺癌;肉瘤;成胶质细胞瘤;多发性骨髓瘤或胃肠癌,尤其为结肠癌或结肠直肠腺瘤,或者颈部和头部肿瘤、表皮过度增殖尤其是牛皮癣、前列腺增生、瘤形成,尤其是上皮特征的瘤形成,优选为乳房癌或白血病。
10.根据权利要求6-9中任一项所述的用途,其中待治疗的疾病为持续的血管发生引起的疾病,如牛皮癣;卡波济肉瘤;再狭窄,例如支架诱导的再狭窄;子宫内膜异位症;克隆病;霍奇金病;白血病;关节炎,如类风湿性关节炎;血管瘤;血管纤维瘤;眼疾病,如糖尿病性视网膜病和新血管青光眼;肾脏疾病,如肾小球肾炎;糖尿病性肾病;恶性肾硬化;血栓性微血管病综合征;移植排斥和肾小球病;纤维化疾病,如肝脏的硬化;肾小球系膜细胞增生性疾病;动脉硬化;神经组织损伤;并且所述用途用于抑制气囊导管治疗后的血管再闭塞,用于血管修复或用于插入机械装置如支架后保持血管开放,用作免疫抑制剂,用作无疤创伤愈合的辅助,用于治疗老年斑和接触性皮炎。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB0515026.3A GB0515026D0 (en) | 2005-07-21 | 2005-07-21 | Organic compounds |
GB0515026.3 | 2005-07-21 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101228167A true CN101228167A (zh) | 2008-07-23 |
Family
ID=34976344
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNA2006800267321A Pending CN101228167A (zh) | 2005-07-21 | 2006-07-19 | 作为蛋白激酶抑制剂的吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基-胺衍生物 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20080234284A1 (zh) |
EP (1) | EP1910368A1 (zh) |
JP (1) | JP2009501748A (zh) |
KR (1) | KR20080036997A (zh) |
CN (1) | CN101228167A (zh) |
AU (1) | AU2006271924A1 (zh) |
BR (1) | BRPI0613870A2 (zh) |
CA (1) | CA2615433A1 (zh) |
GB (1) | GB0515026D0 (zh) |
MX (1) | MX2008000898A (zh) |
RU (1) | RU2008106056A (zh) |
WO (1) | WO2007009773A1 (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102105471A (zh) * | 2008-07-25 | 2011-06-22 | 加拉帕戈斯股份有限公司 | 用于治疗变性和炎性疾病的新化合物 |
CN102232075A (zh) * | 2008-12-16 | 2011-11-02 | 伊莱利利公司 | 氨基吡唑化合物 |
CN105906630A (zh) * | 2015-04-06 | 2016-08-31 | 四川百利药业有限责任公司 | 用作fgfr抑制剂的n-(1h-吡唑-5-基)嘧啶并吡唑-4,6-二取代胺类化合物 |
Families Citing this family (58)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7776865B2 (en) * | 2005-10-06 | 2010-08-17 | Schering Corporation | Substituted pyrazolo[1,5-a]pyrimidines as protein kinase inhibitors |
AU2007223865A1 (en) * | 2006-03-08 | 2007-09-13 | Novartis Ag | Use of pyrazolo[1,5A]pyrimidin-7-yl amine derivatives in the treatment of neurological disorders |
GB0606805D0 (en) * | 2006-04-04 | 2006-05-17 | Novartis Ag | Organic compounds |
CN101516888A (zh) * | 2006-09-28 | 2009-08-26 | 诺瓦提斯公司 | 吡唑并[1,5-a]嘧啶衍生物及其治疗用途 |
FR2918986B1 (fr) * | 2007-07-19 | 2009-09-04 | Sanofi Aventis Sa | Derives de 6-cycloamino-3-(pyridazin-4-yl)imidazo[1,2-b]- pyridazine, leur preparation et leur application en therapeutique |
WO2010010186A1 (en) * | 2008-07-25 | 2010-01-28 | Galapagos Nv | Novel compounds useful for the treatment of degenerative and inflammatory diseases |
WO2010010188A1 (en) * | 2008-07-25 | 2010-01-28 | Galapagos Nv | Novel compounds useful for the treatment of degenerative and inflammatory diseases. |
FR2940284B1 (fr) * | 2008-12-19 | 2011-02-18 | Sanofi Aventis | Derives de 6-cycloamino-2,3-di-pyridinyl-imidazo°1,2-b!- pyridazine,leur preparation et leur application en therapeutique |
FR2940285A1 (fr) * | 2008-12-19 | 2010-06-25 | Sanofi Aventis | Derives de 6-cycloamino-2-thienyl-3-(pyridin-4-yl)imidazo °1,2-b!-pyridazine et 6-cycloamino-2-furanyl-3- (pyridin-4-yl)imidazo°1,2-b!-pyridazine, leur preparation et leur application en therapeutique |
US20120189641A1 (en) | 2009-02-25 | 2012-07-26 | OSI Pharmaceuticals, LLC | Combination anti-cancer therapy |
US8465912B2 (en) | 2009-02-27 | 2013-06-18 | OSI Pharmaceuticals, LLC | Methods for the identification of agents that inhibit mesenchymal-like tumor cells or their formation |
EP2401614A1 (en) | 2009-02-27 | 2012-01-04 | OSI Pharmaceuticals, LLC | Methods for the identification of agents that inhibit mesenchymal-like tumor cells or their formation |
WO2010099138A2 (en) | 2009-02-27 | 2010-09-02 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Methods for the identification of agents that inhibit mesenchymal-like tumor cells or their formation |
EP2417138B1 (en) | 2009-04-09 | 2019-11-27 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Pyrazolo[1, 5-a]pyrimidine derivatives as mtor inhibitors |
TWI462920B (zh) | 2009-06-26 | 2014-12-01 | 葛萊伯格有限公司 | 用於治療退化性及發炎疾病之新穎化合物 |
JO3030B1 (ar) | 2009-06-26 | 2016-09-05 | Galapagos Nv | مركب جديد مفيد لمعالجة الامراض التنكسية والالتهابات |
WO2011002887A1 (en) * | 2009-07-02 | 2011-01-06 | Schering Corporation | FUSED TRICYCLIC COMPOUNDS AS NOVEL mTOR INHIBITORS |
CA2774999A1 (en) | 2009-09-30 | 2011-04-07 | President And Fellows Of Harvard College | Methods for modulation of autophagy through the modulation of autophagy-enhancing gene products |
WO2011041152A1 (en) | 2009-09-30 | 2011-04-07 | Schering Corporation | Novel compounds that are erk inhibitors |
ES2534335T3 (es) | 2010-05-20 | 2015-04-21 | Array Biopharma, Inc. | Compuestos macrocíclicos como inhibidores de la Trk cinasa |
WO2012030170A2 (ko) * | 2010-08-31 | 2012-03-08 | (주)아모레퍼시픽 | 카나비노이드 1 수용체 저해제로 작용하는 신규 화합물 |
EP2615916B1 (en) | 2010-09-16 | 2017-01-04 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Fused pyrazole derivatives as novel erk inhibitors |
WO2012149014A1 (en) | 2011-04-25 | 2012-11-01 | OSI Pharmaceuticals, LLC | Use of emt gene signatures in cancer drug discovery, diagnostics, and treatment |
JP2014513686A (ja) | 2011-05-10 | 2014-06-05 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション | Syk阻害薬としてのアミノピリミジン |
EP2706852B1 (en) | 2011-05-10 | 2018-08-22 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Bipyridylaminopyridines as syk inhibitors |
EP2707357B1 (en) | 2011-05-10 | 2017-01-18 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Pyridyl aminopyridines as syk inhibitors |
US8987456B2 (en) | 2011-10-05 | 2015-03-24 | Merck Sharp & Dohme Corp. | 3-pyridyl carboxamide-containing spleen tyrosine kinase (SYK) inhibitors |
US9006444B2 (en) | 2011-10-05 | 2015-04-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Phenyl carboxamide-containing spleen tyrosine kinase (SYK) inhibitors |
WO2013052394A1 (en) | 2011-10-05 | 2013-04-11 | Merck Sharp & Dohme Corp. | 2-pyridyl carboxamide-containing spleen tyrosine kinase (syk) inhibitors |
WO2013152252A1 (en) | 2012-04-06 | 2013-10-10 | OSI Pharmaceuticals, LLC | Combination anti-cancer therapy |
US9242984B2 (en) | 2012-06-20 | 2016-01-26 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Pyrazolyl derivatives as Syk inhibitors |
WO2013192128A1 (en) | 2012-06-20 | 2013-12-27 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Imidazolyl analogs as syk inhibitors |
US9376418B2 (en) | 2012-06-22 | 2016-06-28 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Substituted pyridine spleen tyrosine kinase (SYK) inhibitors |
WO2013192088A1 (en) | 2012-06-22 | 2013-12-27 | Merck Sharp & Dohme Corp. | SUBSTITUTED DIAZINE AND TRIAZINE SPLEEN TYROSINE KINASE (Syk) INHIBITORS |
US9353066B2 (en) | 2012-08-20 | 2016-05-31 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Substituted phenyl-Spleen Tyrosine Kinase (Syk) inhibitors |
WO2014048065A1 (en) | 2012-09-28 | 2014-04-03 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Triazolyl derivatives as syk inhibitors |
US9624210B2 (en) | 2012-12-12 | 2017-04-18 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Amino-pyrimidine-containing spleen tyrosine kinase (Syk) inhibitors |
US9598405B2 (en) | 2012-12-21 | 2017-03-21 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Thiazole-substituted aminopyridines as spleen tyrosine kinase inhibitors |
WO2014176210A1 (en) | 2013-04-26 | 2014-10-30 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Thiazole-substituted aminoheteroaryls as spleen tyrosine kinase inhibitors |
WO2014176216A1 (en) | 2013-04-26 | 2014-10-30 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Thiazole-substituted aminopyrimidines as spleen tyrosine kinase inhibitors |
WO2015095445A1 (en) | 2013-12-20 | 2015-06-25 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Thiazole-substituted aminoheteroaryls as spleen tyrosine kinase inhibitors |
WO2015095444A1 (en) | 2013-12-20 | 2015-06-25 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Thiazole-substituted aminoheteroaryls as spleen tyrosine kinase inhibitors |
WO2015094997A1 (en) | 2013-12-20 | 2015-06-25 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Thiazole-substituted aminoheteroaryls as spleen tyrosine kinase inhibitors |
GB201402071D0 (en) | 2014-02-07 | 2014-03-26 | Galapagos Nv | Novel salts and pharmaceutical compositions thereof for the treatment of inflammatory disorders |
GB201402070D0 (en) | 2014-02-07 | 2014-03-26 | Galapagos Nv | Pharmaceutical compositions for the treatment of inflammatory disorders |
WO2015138273A1 (en) | 2014-03-13 | 2015-09-17 | Merck Sharp & Dohme Corp. | 2-pyrazine carboxamides as spleen tyrosine kinase inhibitors |
DK3322706T3 (da) | 2015-07-16 | 2021-02-01 | Array Biopharma Inc | Substituerede pyrazolo[1,5-a]pyridin-forbindelser som ret-kinaseinhibitorer |
JOP20190077A1 (ar) | 2016-10-10 | 2019-04-09 | Array Biopharma Inc | مركبات بيرازولو [1، 5-a]بيريدين بها استبدال كمثبطات كيناز ret |
TWI704148B (zh) | 2016-10-10 | 2020-09-11 | 美商亞雷生物製藥股份有限公司 | 作為ret激酶抑制劑之經取代吡唑并[1,5-a]吡啶化合物 |
WO2018136663A1 (en) | 2017-01-18 | 2018-07-26 | Array Biopharma, Inc. | Ret inhibitors |
CN110267960B (zh) | 2017-01-18 | 2022-04-26 | 阿雷生物药品公司 | 作为RET激酶抑制剂的取代的吡唑并[1,5-a]吡嗪化合物 |
JOP20190213A1 (ar) | 2017-03-16 | 2019-09-16 | Array Biopharma Inc | مركبات حلقية ضخمة كمثبطات لكيناز ros1 |
TWI791053B (zh) | 2017-10-10 | 2023-02-01 | 美商亞雷生物製藥股份有限公司 | 6-(2-羥基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈之結晶形式及其醫藥組合物 |
TWI812649B (zh) | 2017-10-10 | 2023-08-21 | 美商絡速藥業公司 | 6-(2-羥基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚-3-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲腈之調配物 |
EP3740491A1 (en) | 2018-01-18 | 2020-11-25 | Array Biopharma, Inc. | Substituted pyrrolo[2,3-d]pyrimidines compounds as ret kinase inhibitors |
US11472802B2 (en) | 2018-01-18 | 2022-10-18 | Array Biopharma Inc. | Substituted pyrazolyl[4,3-c]pyridine compounds as RET kinase inhibitors |
JP7061195B2 (ja) | 2018-01-18 | 2022-04-27 | アレイ バイオファーマ インコーポレイテッド | RETキナーゼ阻害剤としての置換ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン化合物 |
CA3111984A1 (en) | 2018-09-10 | 2020-03-19 | Array Biopharma Inc. | Fused heterocyclic compounds as ret kinase inhibitors |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6380203B1 (en) * | 1998-01-14 | 2002-04-30 | Merck & Co., Inc. | Angiogenesis inhibitors |
WO2004022561A1 (en) * | 2002-09-04 | 2004-03-18 | Schering Corporation | Pyrazolopyrimidines as cyclin-dependent kinase inhibitors |
AR049769A1 (es) * | 2004-01-22 | 2006-09-06 | Novartis Ag | Derivados de pirazolo(1,5-a)pirimidin 7-il-amina para utilizarse en el tratamiento de enfermedades dependientes de la quinasa de proteina |
-
2005
- 2005-07-21 GB GBGB0515026.3A patent/GB0515026D0/en not_active Ceased
-
2006
- 2006-07-19 MX MX2008000898A patent/MX2008000898A/es not_active Application Discontinuation
- 2006-07-19 WO PCT/EP2006/007109 patent/WO2007009773A1/en active Application Filing
- 2006-07-19 US US11/996,337 patent/US20080234284A1/en not_active Abandoned
- 2006-07-19 CN CNA2006800267321A patent/CN101228167A/zh active Pending
- 2006-07-19 RU RU2008106056/04A patent/RU2008106056A/ru not_active Application Discontinuation
- 2006-07-19 JP JP2008521883A patent/JP2009501748A/ja active Pending
- 2006-07-19 CA CA002615433A patent/CA2615433A1/en not_active Abandoned
- 2006-07-19 BR BRPI0613870-5A patent/BRPI0613870A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2006-07-19 KR KR1020087001656A patent/KR20080036997A/ko not_active Application Discontinuation
- 2006-07-19 EP EP06762704A patent/EP1910368A1/en not_active Withdrawn
- 2006-07-19 AU AU2006271924A patent/AU2006271924A1/en not_active Abandoned
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102105471A (zh) * | 2008-07-25 | 2011-06-22 | 加拉帕戈斯股份有限公司 | 用于治疗变性和炎性疾病的新化合物 |
CN102105471B (zh) * | 2008-07-25 | 2014-10-15 | 加拉帕戈斯股份有限公司 | 用于治疗变性和炎性疾病的化合物 |
CN102232075A (zh) * | 2008-12-16 | 2011-11-02 | 伊莱利利公司 | 氨基吡唑化合物 |
CN102232075B (zh) * | 2008-12-16 | 2013-12-11 | 伊莱利利公司 | 氨基吡唑化合物 |
CN105906630A (zh) * | 2015-04-06 | 2016-08-31 | 四川百利药业有限责任公司 | 用作fgfr抑制剂的n-(1h-吡唑-5-基)嘧啶并吡唑-4,6-二取代胺类化合物 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
MX2008000898A (es) | 2008-03-18 |
KR20080036997A (ko) | 2008-04-29 |
EP1910368A1 (en) | 2008-04-16 |
CA2615433A1 (en) | 2007-01-25 |
GB0515026D0 (en) | 2005-08-31 |
RU2008106056A (ru) | 2009-10-27 |
JP2009501748A (ja) | 2009-01-22 |
AU2006271924A1 (en) | 2007-01-25 |
BRPI0613870A2 (pt) | 2011-02-15 |
US20080234284A1 (en) | 2008-09-25 |
WO2007009773A1 (en) | 2007-01-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101228167A (zh) | 作为蛋白激酶抑制剂的吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基-胺衍生物 | |
AU2005205915B2 (en) | Pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-7-yl-amine derivatives for use in the treatment of protein kinase dependent diseases | |
US20050222171A1 (en) | Organic compounds | |
JP2010508324A (ja) | プロテインキナーゼモジュレーターとしての3−アミノカルボニル置換縮合ピラゾロ誘導体 | |
KR101277823B1 (ko) | 피롤로[2,3d]피리미딘 및 티로신 키나제 억제제로서 그의 용도 | |
CN101696188A (zh) | 作为激酶抑制剂的三氟甲基取代的苯甲酰胺化合物 | |
US20080096868A1 (en) | 1,4 Substituted Pyrazolopyrimidines as Kinase Inhibitors | |
KR20080072886A (ko) | EPHB 및 VEGFR2 키나제 억제제로서의 3-(치환아미노)-피라졸로[3,4-d]피리미딘 | |
JP2009518340A (ja) | EphBおよびVEGFR2キナーゼ阻害剤としてのピラゾロ[1,5−a]ピリジン−3−カルボン酸 | |
KR20070097493A (ko) | 키나제 억제제로서의 이치환된 우레아 | |
JP2009532401A (ja) | キナーゼ阻害剤としての3−置換N−(アリール−またはヘテロアリール)−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン | |
JP2009532400A (ja) | キナーゼ阻害剤としての3−非置換N−(アリール−もしくはヘテロアリール)−ピラゾロ[1,5−a]ピリミジン | |
JP2010508325A (ja) | プロテインキナーゼの阻害剤として有用な3−アミノ−ピラゾール−4−カルボキサミド誘導体 | |
MXPA06008303A (en) | Pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-7-yl-amine derivatives for use in the treatment of protein kinase dependent diseases |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20080723 |