CN101219148A - 由β-2’,3’-二脱氢-2’,3’-二脱氧-5-氟胞苷选择的HIV-1突变 - Google Patents

由β-2’,3’-二脱氢-2’,3’-二脱氧-5-氟胞苷选择的HIV-1突变 Download PDF

Info

Publication number
CN101219148A
CN101219148A CNA2007101666768A CN200710166676A CN101219148A CN 101219148 A CN101219148 A CN 101219148A CN A2007101666768 A CNA2007101666768 A CN A2007101666768A CN 200710166676 A CN200710166676 A CN 200710166676A CN 101219148 A CN101219148 A CN 101219148A
Authority
CN
China
Prior art keywords
d4fc
medicine
application
combination
pharmaceutical composition
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2007101666768A
Other languages
English (en)
Inventor
雷蒙德·F·斯基纳茨
珍妮弗·哈蒙德
约翰·W·梅勒斯
丹尼斯·C·利奥塔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Emory University
Original Assignee
Emory University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Emory University filed Critical Emory University
Publication of CN101219148A publication Critical patent/CN101219148A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/08—Antibacterial agents for leprosy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV

Abstract

本发明涉及由β－2’，3’－二脱氢－2’，3’－二脱氧－5－氟胞苷选择的HIV－1突变，其公开一种治疗HIV的方法，包括向需要治疗的人给予β－D－D4FC或其可药用前体或盐，其以联合或交替的方式与一种在HIV－1中在除反转录酶区域的第70(K突变至N)、90或172位密码子以外的位点上诱导突变的药物结合使用。还公开了一种用于对患者使用β－D－D4FC作为“抢救治疗”的方法，所述患者对其他抗HIV药物表现出抗药性。通常可使用β－D－D4FC作为抢救治疗，用于对在第70(K突变至N)、90或172位密码子以外的位点上诱导突变的药物表现出抗药性的任一患者。

Description

由β-2’，3’-二脱氢-2’，3’-二脱氧-5-氟胞苷选择的HIV-1突变
本申请是申请日为2000年1月21日、申请号为00802998.9、发明名称为“由β-2′，3′-二脱氢-2′，3′-二脱氧-5-氟胞苷选择的HIV-1突变”的专利申请的分案申请。
本发明部分由美国国家健康研究所的基金资助，许可号为1R01-A1-41980-01。美国政府对本发明享有某些权利。
本申请要求于1999年1月22日申请的美国临时专利申请60/116,773的优先权。
发明背景
在1983年，AIDS的病因学原因被确定为人类免疫缺陷性病毒(HIV)。在1985年，报道了合成核苷3’-叠氮基-3’-脱氧胸苷(AZT)抑制人类免疫缺陷性病毒的复制。从那时起，其他一些合成核苷被证实对于抗HIV有效，包括2’，3’-二脱氧肌苷(DDI)、2’，3’-二脱氧胞苷(DDC)、2’，3’-二脱氢-2’，3’-二脱氧胸苷(D4T)、顺-2-羟甲基-5-(5-氟胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硫戊环(FTC)、(-)-顺-2-羟甲基-5-(胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硫戊环(3TC)。在细胞激酶导致细胞磷酰化为5’-三磷酸后，将这些合成核苷引入病毒DNA的生长链中，由于缺少3’-羟基而导致链终止。它们也可抑制反转录酶这一病毒酶。
已认识到，在长期使用抗病毒药进行治疗之后，可出现HIV的抗药性变体。最典型地，抗药性的出现是由病毒复制中所使用的酶的编码基因突变引起的，在HIV情况下，最典型的酶是反转录酶、蛋白酶或DNA聚合酶。最近已证实，通过将所述化合物和第二种抗病毒化合物以及可能的第三种抗病毒化合物联合或交替给药，可以延长、提高或恢复药物抗HIV感染的有效性，所述第二种抗病毒化合物以及可能的第三种抗病毒化合物诱导不同于所述基本药所引起的突变的突变。此外，这类联合或交替治疗可改变药物的药物动力学、生物分布或其他参数。通常，联合治疗比交替治疗更为优选，因为它同时对病毒产生多种影响。但是，人们不能预测指定药物在HIV-1基因组中将诱导什么突变、突变是永久的还是暂时的、或被经突变的HIV-1序列感染的细胞对联合或交替使用其他药物的治疗将怎样响应。对于用当代抗逆转录病毒的药物处理的长期细胞培养物，缺乏其中抗药性的动力学参数，这一事实加剧了上述的不可预测性。
已从接受这些药物的长期单一治疗的患者中分离出对3’-叠氮基-3’-脱氧胸苷(AZT)、2’，3’-二脱氧肌苷(DDI)或2’，3’、二脱氧胞苷(DDC)显示出抗药性的HIV-1变体(Larder BA，Darby G，Richman DD.科学(Science)，1989，243：1731-4；St Clair MH，Martin JL，Tubor WG等人，科学(Science)1991，253：1557-9；St Clair MH，Martin JL，TudorWG等人，科学(Science)1991，253：1557-9；和Fitzgibbon JE，HowellRM，Haberzettl CA，Sperber SJ，Gocke DJ，Dubin DT.抗微生物药物和化学疗法(Antimicrob.Agents Chemother.)1992，36：153-7)。临床数据显示，在儿童和成人中，AZT抗药性均是不良临床结果的指示(Mayers DL.在关于抗微生物药物和化学疗法的第32届国际科学会议上的讲稿，(Anaheim，CA.1992)；Tudor-Williams G，St Clair MH，McKinney RE等人，柳叶刀(Lancet)，1992，339：15-9；Ogino MT，Dankner WM，Spector SA.儿科杂志(J Pediatr.)  1993，123：1-8；Crumpacker CS，D’Aquila RT，Johnson VA等人，关于病毒抗药性的第三次工作会议(Third Workshop on Viral Resistance)(Gaithersburg，MD.1993)；以及，Mayers D和RV43研究组，关于病毒抗药性的第三次工作会议(Third Workshop on Viral Resistance)(Gaithersburg，MD.1993))。在细胞培养和人临床试验中，HIV对于非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTI)的抗药性的快速发展均已有报道(Nunberg JH，Schleif WA，Boots EJ等人，病毒学(J Virol)1991，65(9)：4887-92；Richman D，ShihCK，Lowy I等人，Proc Natl Acad Sci(USA)1991，88：11241-5；MellorsJW，Dutschman GE，Im GJ，Tramontano E，Winkler SR，Cheng YC.MolPharm.1992，41：446-51；Richman DD和ACTG 164/168研究组，第二次国际HIV-1抗药性工作会议，(Noordwijk，芬兰，1993)；和Saag MS，Emini EA，Laskin OL等人，新英格兰医学杂志(N Engl J Med)  1993，329：1065-1072)。在NNRTI L’697,661的情况下，在治疗的头2-6周内，具有抗药性的HIV-1出现，与之伴随的是病毒败血症回复到治疗前的水平(Saag MS，Emini EA，Laskin OL等人，N Engl J Med 1993，329：1065-1072)。在包括蛋白酶抑制剂在内的其他种类的HIV-1抑制剂的情况下，也注意到突破与抗药株的出现相伴的病毒败血症的情况(Jacobsen H，Craig CJ，Duncan IB Haenggi M，Yasargil K，Mous J.关于病毒抗药性的第三次工作会议(Gaithersburg，MD.1993))。这一经验使人们认识到，在对所有用于HIV-1的新疗法进行临床前评价的早期，必须对HIV-1抗药性的潜在性进行评估。
2’，3’-二脱氧-2’，3’-二脱氢-5-氟胞苷(D4FC)是一种已知的化合物。欧洲专利申请公开No.0409227 A2(由Ajinomoto Co.，Inc.申请)公开了β-D-D4FC(实施例2)及其在治疗乙型肝炎上的用途。荷兰专利No.8901258(由Stichting Rega V.Z.W.申请)一般地公开了5-卤代-2’，3’-二脱氧-2’，3’-二脱氢胞苷衍生物，用于治疗HIV和乙型肝炎(“HBV”)。美国专利No.5703058公开了一种治疗HIV和HBV感染的方法，包括联合或交替给予有效量的β-L-D4FC和顺-2-羟甲基-5-(5-氟胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硫戊环、顺-2-羟甲基-5-(胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硫戊环、9-[4-(羟甲基)-2-环戊烯-1-基]-鸟嘌呤(carbovir)、9-[2-(羟基乙氧基)甲基]-鸟嘌呤(阿昔洛韦)、干扰素、3’-脱氧-3’-叠氮基-胸苷(AZT)、2’，3’-二脱氧肌苷(DDI)、2’，3’-二脱氧胞苷(DDC)、(-)-2’-氟-5-甲基-β-L-阿拉伯糖尿苷(L-FMAU)或2’，3’-二脱氢-2’，3’-二脱氧胸苷(D4T)。美国专利No.5905070公开了一种治疗HIV和HBV感染的方法，包括联合或交替给予有效量的β-D-D4FC和顺-2-羟甲基-5-(5-氟胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硫戊环、顺-2-羟甲基-5-(胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硫戊环、9-[4-(羟甲基)-2-环戊烯-1-基]-鸟嘌呤(carbovir)、9-[2-(羟基乙氧基)甲基]-鸟嘌呤(阿昔洛韦)、干扰素、3’-脱氧-3’-叠氮基-胸苷(AZT)、2’，3’-二脱氧肌苷(DDI)、2’，3’-二脱氧胞苷(DDC)、(-)-2’-氟-5-甲基-β-L-阿拉伯糖尿苷(L-FMAU)或2’，3’-二脱氢-2’，3’-二脱氧胸苷(D4T)。
本发明的一个目的是确定β-D-D4FC用于治疗HIV的最佳给药方案。
本发明的另一个目的是提供一种方法和包括β-D-D4FC的组合物，用于治疗被HIV感染的患者，在单独给药β-D-D4FC后，该HIV表现出有利的或已改善的药物动力学、生物分布、代谢、抗药性或其他参数。
本发明的又一个目的是提供用于治疗被HIV感染的患者的方法和组合物，其中β-D-D4FC与第二种化合物联合或交替给药，所述第二种化合物与β-D-D4FC协同对抗HIV。
本发明的又一个目的是提供用于治疗被HIV的抗药形式感染的患者的方法和组合物。
本发明的再一个目的是提供一种方法和试剂盒以评估怎样给药β-D-D4FC才最佳。
发明概述
已发现β-D-D4FC在HIV-1中在反转录酶区域的第70(K突变至N)、90或172位密码子上诱导突变。基于此发现，提供一种治疗HIV的方法，包括向需要治疗的人给予β-D-D4FC或其可药用前体或盐，其与一种在HIV-1中在除反转录酶区域的第70(K突变至N)、90或172位密码子以外的位点上诱导突变的药物联合使用或交替使用。可参考已发表的针对已知抗HIV药物的突变模式，或通过确定针对新药的突变模式，实施本发明。
基于此发现，也提供一种对患者使用β-D-D4FC作为“抢救治疗”的方法，所述患者对其他抗HIV药物表现出抗药性。已发现β-D-D4FC与AZT、DDC、DDI、D4T、3TC、(-)-FTC或β-L-D4FC没有显著的交叉抗药性。相反，β-L-D4FC在第184位密码子上快速诱导突变(蛋氨酸至缬氨酸)，产生对3TC和FTC的高水平抗药性。β-D-D4FC通常可作为抢救治疗用于任何在除上述第70(K突变至N)、90或172位密码子以外的位点上诱导突变的药物表现出抗药性的患者。
本文公开的发明一般地至少包括以下实施方案：
(i)治疗人体中HIV感染的方法，包括向所述人给予有效量的任选位于药用载体中的β-D-D4FC或其可药用前体或盐，其与一种在HIV-1中在除反转录酶区域的第70(K突变至N)、90或172位密码子以外的位点上诱导突变的药物联合使用或交替使用，该药物不是顺-2-羟甲基-5-(5-氟胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硫戊环、顺-2-羟甲基-5-(胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硫戊环、9-[4-(羟甲基)-2-环戊烯-1-基]-鸟嘌呤(carbovir)、9-[2-(羟基乙氧基)甲基]-鸟嘌呤(阿昔洛韦)、干扰素、3’-脱氧-3’-叠氮基-胸苷(AZT)、2’，3’-二脱氧肌苷(DDI)、2’，3’-二脱氧胞苷(DDC)、(-)-2’-氟-5-甲基-β-L-阿拉伯糖尿苷(L-FMAU)或2’，3’-二脱氢-2’，3’-二脱氧胸苷(D4T)。
(ii)治疗人体中HIV感染的方法，包括向所述人给予有效量的任选位于药用载体中的β-D-D4FC或其可药用盐，其与一种在HIV-1中在反转录酶区域的第70位密码子上诱导K突变为N(即，赖氨酸至天冬酰胺)、在第90位密码子上诱导V突变为I(即，缬氨酸至异亮氨酸)或在第172位密码子上诱导R突变为K(即，精氨酸至赖氨酸)的药物联合使用或交替使用，该药物不是顺-2-羟甲基-5-(5-氟胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硫戊环、顺-2-羟甲基-5-(胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硫戊环、9-[4-(羟甲基)-2-环戊烯-1-基]-鸟嘌呤(carbovir)、9-[2-(羟基乙氧基)甲基]-鸟嘌呤(阿昔洛韦)、干扰素、3’-脱氧-3’-叠氮基-胸苷(AZT)、2’，3’-二脱氧肌苷(DDI)、2’，3’-二脱氧胞苷(DDC)、(-)-2’-氟-5-甲基-β-L-阿拉伯糖尿苷(L-FMAU)或2’，3’-二脱氢-2’，3’-二脱氧胸苷(D4T)。
(iii)治疗被对3TC具有抗药性的HIV病毒株感染的患者的方法，包括向该患者给予有效量的任选位于药用载体中的β-D-D4FC或其可药用前体或盐。
(iv)治疗被对AZT具有抗药性的HIV病毒株感染的患者的方法，包括向该患者给予有效量的任选位于药用载体中的β-D-D4FC或其可药用前体或盐。
(v)治疗被对顺-2-羟甲基-5-(氟胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硫戊环具有抗药性的HIV病毒株感染的患者的方法，包括向该患者给予有效量的任选位于药用载体中的β-D-D4FC或其可药用前体或盐。
(vi)治疗被对顺-2-羟甲基-5-(胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硫戊环具有抗药性的HIV病毒株感染的患者的方法，包括向该患者给予有效量的任选位于药用载体中的β-D-D4FC或其可药用前体或盐。
(vii)治疗被对2’，3’-二脱氢-2’，3’-二脱氧胸苷(D4T)具有抗药性的HIV病毒株感染的患者的方法，包括向该患者给予有效量的任选位于药用载体中的β-D-D4FC或其可药用前体或盐。
(viii)治疗被对2’，3’-二脱氧肌苷(DDI)具有抗药性的HIV病毒株感染的患者的方法，包括向该患者给予有效量的任选位于药用载体中的β-D-D4FC或其可药用前体或盐。
(ix)治疗被对2’，3’-二脱氧胞苷(DDC)具有抗药性的HIV病毒株感染的患者的方法，包括向该患者给予有效量的任选位于药用载体中的β-D-D4FC或其可药用前体或盐。
(x)治疗被HIV感染的患者的方法，包括向该患者以联合或交替的方式给予有效量的β-D-D4FC或其可药用前体或盐和有效量的(S)-6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并嗪-2-酮(SUSTIVA，参见美国专利No.5519021)。
本文所公开的联合、交替或抢救方案在预防和治疗HIV感染和其他相关病症中是有用的，所述其他相关病症例如为AIDS相关性综合症(ARC)、持久扩散性淋巴结病(PGL)、AIDS相关性神经病、抗HIV抗体阳性和HIV阳性的病症、卡波西肉瘤、血小板减少性紫癜和条件性病原微生物感染。此外，这些化合物或制剂可预防性地用于防止或阻碍抗HIV抗体或HIV阳性的或接触HIV的个体的临床疾病的进展。
附图简述
图1是显示β-D-D4FC的图。
图2是显示β-D-D4FC的浓度(微摩尔)与p24抗原产生的％抑制关系的图。该图说明对β-D-D4FC敏感性降低的病毒的选择。
发明详述
I.定义
本文中使用的术语“抗药性病毒”指的是，与恒定细胞系中的原初病毒相比，其EC50增加三倍、更典型地是增加五倍或更多的病毒，所述恒定细胞系包括但不限于外周血单核细胞(PBMC)或者MT2或MT4细胞。
术语D-D4FC可与下面的术语β-D-D4FC互换使用。
本文中使用的术语“基本上纯”或“基本上以一种光学异构体的形式”指的是，核苷组合物至少包括95％-98％、或更优选99％-100％的单一一种核苷对映体。在一优选实施方案中，以基本上纯的形式施用β-D-D4FC，用于任一所公开的适应症。
本文中使用的术语“前药”指的是，D-D4FC经5’和N4酰化、烷基化或磷酰化(包括单、二和三磷酸酯以及稳定的磷酸酯和磷脂)的衍生物。在一实施方案中，酰基基团是羧酸酯，其中酯基基团的非羰基部分选自直链、支链或环状烷基、烷氧基烷基(包括甲氧基甲基)、芳烷基(包括苄基)、芳氧烷基(包括苯氧基甲基)、芳基(包括任选被卤素、烷基、烷基或烷氧基取代的苯基)、磺酸酯如烷基或芳烷基磺酰基(包括甲基磺酰基)、三苯甲基或单甲氧基三苯甲基、取代的苄基、三烷基甲硅烷基或二苯基甲基甲硅烷基。酯中的芳基最好包括苯基。所述烷基可以是直链、支链或环状的，并优选C1-C18。
本文中使用的术语“可药用盐”指的是，在给药至接受者后，能直接或间接提供β-D-D4FC或自身表现出活性的药用盐。
本文中使用的氨基酸的缩写述于表1中。
表1
             氨基酸                     密码子
    丙氨酸   Ala     A   GCA   GCC   GCG   GCU
    半胱氨酸   Cys     C   UGC   UGU
    天冬氨酸   Asp     D   GAC   GAU   GAC   GAU
    谷氨酸   Glu     E   GAA   GAG
    苯丙氨酸   Phe     F   UUC   UUU
    甘氨酸   Gly     G   GGA   GCG   GGG   GGU
    组氨酸   His     H   CAC   CAU
    异亮氨酸   Ile     I   AUA   AUC   AUU
    赖氨酸   Lys     K   AAA   AAG
    亮氨酸   Leu     L   UUA   UUG   CUA   CUC  CUG  GUU
    蛋氨酸   Met     M   AUG
    天冬酰胺   Asn     N   AAC   AAU
    脯氨酸   Pro     P   CCA   CCC   CCG   CCU
    谷氨酰胺   Gln     Q   CAA   CAG
    精氨酸   Arg     R   AGA   AGG   CGA   CGC  CGG  CGU
    丝氨酸   Ser     S   AGC   AGU   UCA   UCC  UCG  UCU
    苏氨酸   Thr     T   ACA   ACC   ACG   ACU
    缬氨酸   Val     V   GUA   GUC   GUG   GUU
    色氨酸   Trp     W   UGG
    酪氨酸   Tyr     Y   UAC   UAU
II.由β-D-D4FC选择的在HIV反转录酶中的突变
β-2’，3’-二脱氢-2’，3’-二脱氧-5-氟胞苷(D4FC)的D和L对映体均是HIV的强的和选择性的抑制剂，尽管D对映体选择性更强些。通过HIV-1LAI在递增浓度的药物的存在下在MT-2细胞和外周血单核细胞(PBMC)中的连续传代，评估对D-D4FC抗药性的体外发展。具有D-D4FC抗药性的变体仅在长期接触药物的情况下产生。在MT-2细胞中传20代后获得的病毒对D-D4FC表现出5.3倍的抗药性。尽管进行了多次尝试，但仍不可在PBMC中分离出抗药性病毒。从在MT-2细胞中选出的病毒得到的RT的DNA测序揭示出两种突变：K65R和V179D。D-D4FC抗药性病毒的选择在MT-2细胞中重复进行，表现出19.3倍抗药性的变体编码三种新的RT突变：K70N、V90I和R172K。K65R重组的HIV-1LAI病毒对D-D4FC表现出3.9倍抗药性。V179D是一种赋予非核苷RT抑制剂抗药性的突变，它很可能对K65R是补偿性的。也可通过用单一或多种突变构建重组病毒，来评价其他突变在D4FC抗药性中的作用。但是，所测试的重组体无一被证明具有＞2倍的抗药性。
材料和方法
化学物质：D-D4FC如前所述在我们的实验室之一中合成(Shi等人，1999)。将它在无菌水中制备成10mM储备液，并在-20℃下储存。在临使用前，解冻该化合物并稀释到所希望的浓度。
细胞：MT-2细胞(AIDS研究和参考试剂计划，国家过敏和传染性疾病研究所，国家健康研究所，由D.Richman提供)在补充有10％胎牛血清、10mM HEPES缓冲液、青霉素(50IU/ml)和链霉素(50μg/ml)的RPMI 1640(Whittaker M.A.，Bioproducts，Walkersville，MD)中培养。
病毒：HIV-1LAI是一种经分子克隆的临床分离物，既用作用于抗药性选择的起始病毒，又用于重组突变体的产生。通过将5-10jig的原病毒质粒DNA电穿孔入1.3×107MT-2细胞中，制备HIV-1LAI的储备制备物。当病毒的细胞致病作用达到顶峰(通常是转染后7天)时，收集来自被感染的培养物的上清液，等分并在-80℃下储存直至使用。在MT-2细胞中，利用三倍终点稀释来测定病毒制备物的效价，用Reed和Muench方程式计算TCID50。
抗药性病毒的选择：在开始选择之前，在不存在药物的条件下，将起始病毒(HIV-1LAI)作为无细胞的病毒在MT-2细胞中传代10个周期。通过在浓度逐步递增的D-D4FC的存在下在MT-2细胞中连续传代HIV-1LAI，来选择D-D4FC抗药性病毒。D-D4FC抗药性病毒的选择进行两次。通过用0.01mol病毒接种1×106 MT-2细胞来开始选择。当病毒的细胞致病作用达到顶峰(感染后4-7天)时，收集来自被感染的培养物的上清液，随后将0.1-0.3ml用于引发另一轮的感染。等分上清液并在-80℃下储存，用于表征所选择的病毒。病毒在每一浓度下至少传代三次，在指定浓度的药物存在下的周期数取决于病毒在特定浓度的D-D4FC中生长的能力。在首次选择过程中，在增加药物浓度之前，将病毒在药物不存在的情况下传代一次(表2)。作为对照，也在药物不存在的情况下平行地使病毒传代。首次选择在0.75μM下开始，并在37个无细胞传代周期的进程中逐步增加至4.0μM。第二次选择在0.2μM下开始，并在27个无细胞传代周期的进程中逐步增加至6.2μM(表2)。
表2
           选择#1             选择#2
    传代数     [D-Fd4C]μM     传代数    [D-Fd4C]μM
    1-2     0.75     1-3    0.2
    3-4     1.5     4-6    0.4
    5     1.0     7-9    0.8
    6     0     10-12    1.6
    7-9     1.5     13    3.2
    10-12     2.0     14-16    1.6
    13-16     3.0     17-19    3.2
    17     0     20-22    4.8
    18-20     4.5     23-25    6.2
    21     0     26    12.0
    22-35     4.5     27    6.2
    36-38     1.0
    39-41     2.0
    42-43     4.0
抗病毒敏感性实验：通过测量对p24抗原产生的％抑制，测量病毒对D-D4FC的敏感性。简言之，MT-2细胞(1×105细胞/ml)在连续稀释度的D-D4FC存在下用0.01moi的病毒感染。每一稀释度平行测试三次。在感染后第7天收获培养上清液，并使用商品化的检验法(DuPont，NEN产品，Wilmington，Del.)来检验对p24抗原产生的％抑制。将病毒敏感性表示为50％抑制p24抗原产生(EC50)所需的药物浓度。
所选病毒反转录酶的DNA测序：使用TRIzol试剂(GibcoBRL，Grand Island，NY)分离来自所选病毒的病毒RNA(vRNA)。利用RT-PCR扩增全长RT编码区域。随后，PCR产物使用Wizard PCR prep(Promega，Madison，WI)纯化并测序。
突变型重组体HIV-1的产生：使用Altered SitesII体外诱变系统(Promega，Madison，WI)产生突变型RT。诱变在HIV-1LAI、被克隆进诱变载体(PALTER，Promega)的RT上进行。通过对RT基因直接测序，测定所希望的突变的存在。随后，将突变型RT连接到pxxHIV-1LAI载体中。然后，如上所述，通过将5-10μg DNA电穿孔入1.3×107个MT-2细胞中，制备突变型病毒的储备物。
结果与讨论
抗药性病毒的表型：在MT-2细胞中在37(选择#1)和20(选择#2)个感染周期后，选择D-D4FC抗药性病毒。对来自选择#1传了37代的病毒(p37 D-D4FC#1)的D-D4FC敏感性的评价证明，正如EC50从0.21μM增加到4.07μM所证实(图2，表3)，p37 D-D4FC#1的D-D4FC敏感性比野生型低19.4倍。对来自选择#2传了20代的病毒(p20D4FC#2)的D-D4FC敏感性的评价证明，正如EC50从0.21μM增加到1.1μM所证实(图2，表3)，p20 D-D4FC#2的D-D4FC敏感性比野生型低5.3倍。
抗药性病毒的基因型：分离来自p37 D-D4FC#1和p20 D-D4FC#2的vRNA，并利用RT-PCR扩增。对PCR产物的测序揭示在p37D-D4FC#1中存在三个新的突变：K70N(AAA→4AAT)、V90I(GTT→ATT)和R172K(AGA→AAA)(表2)。在p20 D-D4FC#2中鉴定了两个不同的突变：.K65R(AAA→AGA)和V179D(GTT→GAT)(表3)。在来自这些病毒的RT基因(从氨基酸8-330)中没有发现其他突变。另外，在药物不存在的条件下平行传代的对照病毒中，没有发现突变。
用不同的有关突变对D4FC抗药性病毒进行的分离，可以使用用于分离D4FC抗药性病毒的不同选择技术进行。在选择#1中，在增加药物浓度之前，在一个感染周期中除去选择压力。在第二个选择方法中，不进行此操作。此外，用于每一选择方法的D-D4FC起始浓度变化约3倍。对选择#1使用较高的药物起始浓度(0.75μM)。这两个不同点可能是在所选病毒中观察到不同突变的原因。
突变型重组体HIV-1：含有在所选病毒中鉴定的突变的突变型重组体HIV-1经定点诱变产生。表4列出所产生的每一种突变型重组病毒以及相应的EC50。尽管K65R病毒xxHIV-1LAI证实其对D-D4FC的敏感性降低3.9倍，但其他病毒无一显示出＞3.0倍的抗药性。但是，应注意到，三重突变(xxHIV-1LAI，K70N/V90I/R172K)生长得不好，这可能是不能再现在经体外选择的病毒中所观察到的抗药性的原因。
表3  MT-2细胞中由D-D4FC选择的病毒的敏感性和相关突变
  病毒     EC50(μM)     抗药性倍数     来自基线的突变
  HIV-1LAIp0     0.21     --     --
  HIV-1p37D-Fd4C#1     4.07     19.4     K70NV90IR172K
  HIV-1p20D-Fd4C#2     1.11     5.3     K65RV179D
表4  MT-2细胞中重组HIV-1的D-D4FC敏感性
    病毒     EC50     抗药性倍数
    xxLAI     0.32     --
    xxK65R     1.24     3.9
    xxLAI     0.17     --
    xxK70N     0.24     1.4
    xxV90I     0.25     1.5
    xxLAI     0.28     --
    xxR172K     0.23     0.8
    xxV90I/R172K     0.36     1.3
    xxLAI     0.13     --
    xxK70N/V90I/R172K     0.056     0.4
表5所列的是，在被急性感染的人PBM细胞中(第6天)的平均有效浓度和对于D-D4FC单独使用或与AZT和D4T联合使用的联合指数(C.I.)。表6说明β-D-D4FC或β-L-D4FC在人PBM细胞中对抗HIV-1和已克隆的病毒的作用。
表5
在被急性感染的人PBM细胞中(第6天)，针对D-D4FC单独使用或与AZT或D4T联合使用的平均有效浓度及联合指数(C.I.)
    治疗(药物比例)                              参数a                            在Fa b为以下数值时的C.I.
  m±SE    EC50(μM)    EC50(μM)     r     0.50     0.75     0.90     0.95
    D-D4FC   0.95±0.17    0.0076    0.078     0.97
    AZT   0.96±0.17    0.0033    0.032     0.98
    D4T   0.82±0.16    0.015    0.22     0.95
    D-D4FC/AZT   0.65±0.09    0.0012    0.035     0.96     0.164±0.134     0.276±0.233     0.465±0.407     0.664±0.598
    (100∶1)     0.163±0.120     0.274±0.215     0.460±0.384     0.654±0.571
    D-D4FC/D4T   0.86±0.11    0.0087    0.11     0.98     1.14     1.25     1.38     1.47±1.44
    (5∶1)     1.045     1.154     1.276     1.37±1.27
am是斜率±标准偏差，EC50是平均有效浓度，r是相关系数，如由效果中值曲线所确定。
b C.I.＜1、＝1或＞1，指示协同性、附加性和对抗性。Fa是效果中值方程式的一个组分，指受影响的系统部分(例如，0.50意味着在RT活性降低50％的C.I.)。C.I.值被测定用于相互非排斥的作用(用斜体字表示的值针对相互排斥作用，该作用较弱)。
表6
β-D-D4FC和β-L-D4FC在人PBM细胞中对抗HIV-1和已克隆的病毒的效果
    病毒                        β-D-D4FC                       β-L-D4FC
  EC50，μM   EC90，μM     FI50     FI90   EC50，μM   EC90，μM     FI50     FI90
    HIV-1LAV   0.22   1.32     -     -   0.034   0.16     -     -
    xxBRUPITT   0.065   0.46     -     -   0.025   0.088     -     -
    M184VPITT   0.14   1.04     2     2   3.66   14.3     146     163
    4X AZTPITT(67N，70R，215Y，219Q)   0.072   0.46     1     1   0.016   0.11     1     1
    T215YPITT   0.067   0.35     1     1   0.0047   0.03     0.2     0.3
    M184V/T215YPITT   0.057   0.47     1     1   8.3   74.6     332     848
    215/41PITT   0.13   0.49     2     1   0.018   0.066     1     1
    4xM184VPITT a(184V，67N，70R，215Y，219Q)   0.045     0.2   ＞3.3     ＞47
    G2-2PITT a(103N，41L，184V，210W，其他b)   0.04     0.2   ＞3.3     ＞47
    L-D4FC-res.(25μM)   ND   ND     ND     ND   7.56   33.3     222     208
FI50＝从来自HIV-1LAv或xxBRUPITT的抗药性病毒EC50数据中得到的EC50数据。
FI90＝从来自HIV-1LAV或xxBRUPITT的抗药性病毒EC90数据中得到的EC90数据。
以黑体表示的值表示FI＞10
a在MT-2细胞中：由Pittsburg的J.Mellors博士提供。
b.添加性突变：203D，207A，211K，214F，245M，277N，283I，284K，200D，311R。
III.HIV药物的联合或交替
通常，在交替治疗过程中，按顺续地给予有效剂量的每一种药物，而在联合治疗中，一同给予有效剂量的两种或更多种药物。在交替治疗中，例如可以给予有效量的一种或多种第一药物并达有效的一段时间以治疗病毒感染，然后，在治疗程序中用一种或多种第二药物替换那些第一药物，并同样以有效量给予并达有效的一段时间。
剂量取决于每种药物的吸收、生物分布、代谢和排泄率等因素，以及本领域技术人员所公知的其他因素。应注意的是，剂量值也随有待减轻的病况的严重程度而变化。可进一步理解的是，对于任何具体的受治对象，应依据个体需要和给予或监督给予所述组合物的人的专业判断，调节具体的剂量方案和时间表。对于抗HIV化合物，包括核苷衍生物(如AZT、D4T、DDI和3TC)或蛋白酶抑制剂，如奈非那韦(nelfinavir)和印地那韦(indinavir)，合适的剂量范围的实例可在科学文献和医生手册(Physicians Desk Reference)中找到。对于本文所述的其他化合物，合适的剂量范围的一些实例也可在公共文献中找到，或者可以通过已知的方法得以确定。这些剂量范围可按所需进行改变，以获得所希望的结果。
在一优选实施方案中，D-D4FC与一种蛋白酶抑制剂联合给药。在具体实施方案中，D-D4FC与印地那韦(Crixivan)、奈非那韦([3S-[2(2S*，3S*)，3-α，4-a-β，8a-β-]]-N-(1，1-二甲基乙基)十氢-2-)2-羟基-3-[(3-羟基-2-甲基苯甲酰基)氨基]-4-(苯基硫代)丁基]-3-异喹啉羧酰胺单甲磺酸酯)(Viracept)、沙奎那韦(saquinavir)(Invirase)或141W94(安普那韦(amprenavir)；(S)-四氢呋喃-3-基-N-[(1S，2R)-3-[N-[(4-氨基苯基)磺酰基]-N-异丁基氨基]-1-苄基-2-羟丙基]氨基甲酸酯；或艾发韦安(efavirenz)(S)-6-氯-4-(环丙基乙炔基)-1，4-二氢-4-(三氟甲基)-2H-3，1-苯并嗪-2-酮)联合或交替给药。
在另一优选实施方案中，D-D4FC与一种核苷类似物联合或交替给药，该核苷类似物包括阿波卡韦(abacavir)(1592U89)，即(1S，4R)-4-[2-氨基-6-环丙基-氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-环戊烯-1-甲醇琥珀酸酯。
在另一实施方案中，D-D4FC与一种非核苷反转录酶抑制剂联合给药，非核苷反转录酶抑制剂例如为DMP-266((S)-6-氯-4-环丙基乙炔基-4-三氟甲基-1，4-二氢-2H-3，1-苯并嗪-2-酮(SUSTIVA，参见美国专利No.5519021)；地拉韦定(delavirdine)(1-[3-(1-甲基-乙基)-氨基]-2-吡啶基-4-[[5-[(甲基磺酰基)氨基]-1H-吲哚-2-基]羰基]-，单乙基磺酸酯)、奈韦拉平(nevirapine)或地拉韦定(delarvirdine)。
在其他实施方案中，D-D4FC与HIV整合酶抑制剂或趋化因子抑制剂联合或交替给药。
II.分析由D-D4FC诱导的HIV基因组突变
类似于授权给Larder等的美国专利No.5409810中所述针对AZT的方法和试剂盒但基于针对D-D4FC的突变情形的方法和试剂盒，可用于分析由D-D4FC诱导的突变的存在，由此构成本发明的一部分。除将该Larder专利以全文引入作为参考之外，还在下面对这些技术进行描述。
在本发明的一个方面，提供评价HIV-1样品对D-D4FC敏感性的方法，包括：
(i)从样品中分离核酸；
(ii)将一寡核苷酸杂交到该核酸上，所述寡核苷酸与野生型DNA序列(或其相应的RNA)的一个区域或突变型DNA序列(或其相应的RNA)的一个区域互补；
(iii)尝试从所述寡核苷酸的3’端聚合所述核酸；
(iv)确定由寡核苷酸引物延伸的产物是否存在。
在此方法中使用自HIV-1样品中分离的基因组DNA或RNA是可能的。将用于支持HIV-1分离物生长的合适的细胞温育一段时间。通过离心回收细胞。然后，可通过在EDTA和去垢剂如SDS的存在下用蛋白酶K消化所述细胞，来分离DNA，然后用苯酚提取。
熟知的提取和纯化方法可用于从样品中分离DNA。可使用以下方法分离RNA。使合适的细胞感染并温育一段时间。通过离心回收这些细胞。将细胞再次悬浮在RNA提取缓冲液中，然后使用蛋白酶消化缓冲液和蛋白酶K进行消化。在苯酚/氯仿混合物的存在下除去蛋白。然后，在进一步的离心步骤之后，可回收RNA。(Maniatis，T.等，分子克隆，实验室手册，第二版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，(1989))。
尽管由于核酸在HIV-1样品中相对缺乏而使用未经扩增的核酸也是可以的，但优选将其扩增。可使用聚合酶链反应(PCR)技术选择性地扩增核酸，PCR为体外方法，用于从小量模板产生大量具有限定长度的特定核酸片段和序列。
所述PCR由标准反应物组成，其中采用Mg2+浓度、寡核苷酸引物和使用该引物扩增RT基因的温度循环条件。挑选引物，从而使所选引物扩增整个RT基因或含有对应于HIV-1的野生型DNA序列的一个区域的核苷酸的所选序列，所述DNA序列包括所述发生突变的密码子。
RNA不能通过PCR直接扩增。其相应的cDNA必须是合成的。cDNA的合成通常使用寡dT引物通过被引发的反转录进行。有利的是，对引物进行选择以便使他们简化进行RT的核酸序列或含有对应于所述RNA区域的核苷酸的所选序列，所述RNA或对应于与反转录酶区域的第70(K突变至N)、90或172位密码子相对应的突变型DNA序列的所述区域。这可通过制备与RNA链的一个区域互补的寡核苷酸引物来完成，所述RNA链为野生型DNA序列的相应序列的上游。然后，可以以同样方式将由此法(参见Maniatis，T.等，同上)制备的cDNA用于已讨论过的DNA。
此法的下一阶段是将寡核苷酸杂交到所述核酸上，该寡核苷酸与野生型DNA序列(或其相应RNA)的一个区域互补，或与突变型DNA序列(或其相应RNA)的一个区域互补。
然后提供条件和试剂以允许所述核酸从寡核苷酸引物的3’端聚合。这类聚合反应是本领域所熟知的。
如果寡核苷酸引物在其3’端具有一个与突变型基因型互补的核苷酸，该突变型基因型在RT区域中在第70(K变至N)、90或172位密码子发生核苷酸改变，则所述核酸序列的聚合将仅在样品核酸与突变型基因型相同的时候发生。野生型核酸序列的聚合将不会发生或至少不以显著的程度发生，因为在寡核苷酸引物3’端的核苷酸和样品的核酸序列之间不匹配。
如果寡核苷酸引物在其3’末端具有一个与野生型基因型互补的核苷酸，即，该基因型在RT区域中在第70(K突变至N)、90或172位密码子为野生型核苷酸，则在该位置上将发生野生型的核酸序列聚合。在该3’位置上具有突变型核苷酸的核酸将不发生聚合。
每一寡核苷酸的优选长度是15-20个核苷酸。寡核苷酸可按照本领域技术人员熟知的方法进行制备(Koster，H.，药物研究(DrugResearch)，30，第548页(1980)；Koster，H.，四面体通讯(TetrahedronLetters)，第1527页(1972)；Caruthers，四面体通讯(TetrahedronLetters)，第719页(1980)；四面体通讯(Tetrahedron Letters)，第1859页(1981)；四面体通讯(Tetrahedron Letters)，24，第245页(1983)；Gate.M.核酸研究(Nucleic Acid Research)，8，第1081页(1980))，通常使用自动化DNA合成仪如Applied Biosystems 381A合成仪进行制备。
确定由寡核苷酸引物延伸的产物的存在是很方便的。用于该检测的方法通过使用适宜的标记来完成。
标记可方便地被连接到寡核苷酸引物或连接到将与由引物延伸的聚合产物结合的其他分子上。
标记例如可以是酶、放射性同位素或荧光染料。优选的标记可以是生物素，它可随后使用与酶如过氧化物酶或碱性磷酸酶偶联的链霉抗生物素来检测。例如可通过在琼脂糖凝胶上进行聚合反应的跑胶和观察用溴化乙锭标记的特定DNA片段，检测由寡核苷酸引物延伸的聚合产物的存在，或对其进行Southern印迹和放射自显影以检测与聚合产物相对应的带的存在与否。如果仅对应于标记寡核苷酸的主要带存在，则意味聚合已发生。如果具有正确的预定尺寸的带存在，则意味聚合已发生。
例如，将如本文所述从患者的淋巴细胞中分离的DNA用作PCR扩增的模板，并使用与扩增序列匹配或不匹配的合成寡核苷酸引物。已证实PCR在检测这些突变中具有可行性。PCR使用扩增不应突变系统(Amplification Refractory Mutation System，“ARMS”)(Newton，C.R.等，核酸研究(Nucleic Acids Research)，17，第2503页，(1989))。产生合成的寡核苷酸，其与特定突变所在区域相临近的区域退火，从而，寡核苷酸的3’ENDE与突变型或野生型序列配对或不配对。进行PCR，其导致对其中发生配对的DNA片段的识别(使用凝胶电泳)，或对其中发生失配的片段的不识别。
如本文所述，DNA从经HIV-1感染的T细胞中提取出，并使用这些引物进行“ARMS”PCR分析。
如上所述，通过使用寡核苷酸引物来鉴定片段的存在，即，通过将寡核苷酸引物用于已扩增的DNA片段在严格条件下尝试聚合，来进行鉴定，所述引物可经过标记，所述严格条件只允许互补的DNA杂交(唯一的区别是不必进行示差杂交，这是因为所述DNA无论源自突变型DNA还是源自野生型DNA，用“ARMS”方法扩增的DNA的片段都是相同的。因此可使用共同的寡核苷酸检测这些片段的存在。这一寡核苷酸的序列源自在各HIV-1株间是保守的DNA片段内的DNA序列)。
可调整上述PCR实验，以能够直接检测在来自PBL样品的DNA中与D-D4FC抗药性相关的突变，所述PBL样品来自被感染的个体且未经培养以获得病毒。由于该材料通常比被感染的淋巴培养物中的材料含有大为减少的HIV-1 DNA，因此可使用“双倍PCR”(或嵌套集合)方案(Simmonds，P.，Balfe，P，Peutherer，J.F.，Ludlam，C.A.，Bishop，J.O.和Leigh Brown，A.J.，病毒学杂志(J.Virol.)，64，864-872，(1990))，以增加在样品中目标HIV-1 RT DNA信号的量。双倍PCR克服了稀有模板序列的有限扩增问题。少量的欲扩增材料可与特别设计的引物对一起用于第二次PCR中，所述引物对允许对野生型和突变型残基进行区别。
适用于在一实验中确定HIV-1样品对D-D4FC抗药状况的测试试剂盒包括：一寡核苷酸，如本文所述，所述寡核苷酸与野生型DNA序列(或其相应的RNA)的一个区域或突变型DNA序列的一个区域互补；从所述寡核苷酸3’端聚合及确定由寡核苷酸引物延伸的产物存在的方法所需要的其他材料。所述试剂盒利用依据本发明第一方面的方法。所述其他材料包括适宜的酶、缓冲剂和洗涤溶液，以及必要情况下的标记和针对该标记的底物。如果使用PCR扩增核酸，则应包括附加材料，如适宜的寡核苷酸引物和dNTP，所述寡核苷酸引物将扩增野生型DNA序列(或其相应的RNA)的一个区域或本文所述突变型DNA序列(或其相应的RNA)的一个区域。
在本发明的第二方面，提供一种确定HIV-1样品对D-D4FC敏感性的方法，包括：
(i)从样品中分离核酸；
(ii)将一寡核苷酸杂交到该核酸上，所述寡核苷酸与野生型DNA序列(或其相应的RNA)的一个区域或图1所示的突变型DNA序列(或其相应的RNA)的一个区域互补，该区域含有在RT区域中在第70(K突变至N)、90或172位密码子区域上一个或多个核苷酸；和
(iii)确定任何产生的寡核苷酸和核酸的杂交体是否在这些位置中的一个上具有互补核苷酸。
优选对寡核苷酸进行这样的设计以致形成与其补体完美配对的杂交体。
如本发明第一方面所述，通过前述方法从样品中分离核酸(DNA或RNA)。
类似地，PCR可用于扩增RT DNA(或其相应RNA)或优选用于扩增RT DNA(或其相应RNA)的一个区域，该区域包含在指定位置上含有一个或多个所述核苷酸的DNA(或其相应RNA)。
在此法的第二阶段，将该核酸用于与寡核苷酸杂交，所述寡核苷酸与野生型DNA序列(或其相应的RNA)的一个区域或突变型DNA序列的一个区域互补。
寡核苷酸可以具有任何长度，这取决于受检测的目标核苷酸的位置。如果所设计的寡核苷酸仅在一个目标位置上包括一核苷酸，则该核苷酸优选位于或接近所述寡核苷酸的中心位置。
为了确定寡核苷酸和核酸序列是否已形成配对的杂交体，设置特定的杂交条件，从而只有当反转录酶区域的第70(K突变至N)、90或172位密码子上的一个或多个核苷酸与允许或不允许杂交的寡核苷酸的一个或多个相应核苷酸互补时，杂交体才形成。在进行杂交步骤之前确定例如反应温度和盐溶液浓度是重要的，这样做用来发现对保障特异性足够严格的条件(Maniatis，T.等，分子克隆，实验室手册(Molecular Cloning，A Laboratory Manual)，第二版，Cold Spring HarborLaboratory Press，(1989))。如果寡核苷酸探针具有一DNA序列，该序列在其对应于反转录酶的第70(K突变至N)、90或172位密码子的一个或多个核苷酸上与野生型核酸序列互补，则该寡核苷酸将与野生型核酸完美杂交。如果不存在与野生型核酸的完美杂交，则意味着从同一样品中分离的核酸含有一种或多种突变。
如果寡核苷酸探针具有与突变型核酸序列互补的DNA序列，则该寡核苷酸将杂交到突变型核酸上。如果不发生杂交，则意味着从样品中分离的核酸不含有这一或这些突变。可标记寡核苷酸探针，作为如本发明第一方面所述检测的工具。
杂交和随后未杂交的核酸的除去，在严格的条件下进行，它只允许互补DNA的杂交而不允许包含不匹配核苷酸的寡核苷酸的杂交(即，如所述使用球蛋白或HLA-DQa基因(Saikt，R.K.等人，自然(Nature)，324，第163页，(1986))、活化的Ras基因(Ver Laan-De，Vries，M.等人，基因(Gene)，50，第313页，(1986))和β地中海贫血(Wong，C.等人，自然(Nature)，330，第383页，(1987))用于检测镰状细胞突变的寡核苷酸特异性杂交)。
可通过将RT核酸序列固定到硝酸纤维素、尼龙或其他固相基质上，进行杂交(如斑点印迹)。通过使用标记工具来测定杂交体的存在是很方便的。例如，可使用酶、放射性同位素或荧光染料适当地标记化学合成的寡核苷酸探针。优选的探针可以是生物素，它可随后使用与酶如过氧化物酶或碱性磷酸酶偶联的链霉抗生物素来检测。
此外，通过将上述未标记的化学合成的寡核苷酸固定到上述固相载体上和随后用前述标记的RT核酸序列进行杂交，也可完成杂交。
在上述的两种针对杂交所讨论的情况中，将引入合适的对照反应，以确定有效杂交的发生(如寡核苷酸杂交到互补的寡核苷酸上)。
结果易于解释为，经分离的核酸或杂交到野生型寡核苷酸上，或杂交到突变型寡核苷酸上。
适用于实验中以确定HIV-1样品对D-D4FC的敏感性的测试试剂盒包括：一寡核苷酸，如本文所述，所述寡核苷酸与野生型DNA序列(或其相应的RNA)的一个区域或突变型DNA序列的相关区域互补；进行杂交所需要的其他材料。该试剂盒利用依据本发明第二方面的方法。所述其他材料包括适宜的缓冲剂和洗涤溶液，以及必要情况下的标记和针对该标记的底物。通常将寡核苷酸标记。如果在杂交前使用PCR扩增核酸，则应包括附加材料，如适宜的寡核苷酸引物、适宜的酶和dNTP(脱氧核苷三磷酸)，所述寡核苷酸引物将扩增野生型DNA序列(或其相应的RNA)的一个区域或突变型DNA序列的一个区域。
在所述实验的另一种替代形式中，扩增中的dNTP可与检测分子如放射性同位素、生物素、荧光染料或酶偶联或未偶联。
使用RNA扩增系统在分离自临床样品的HIV-1 RT RNA中检测zidovudine抗药性突变也是可能的。使用Guatelli等人所述的方法(Proc.Natl.Acad.Sci.，(USA)，8/7，1874-1878，(1990年3月))，通过使用对于逆转录病毒复制所必需的三种酶活性：反转录酶、RNase H和DNA依赖性RNA聚合酶，可在等温条件下在体外按指数规律地复制(扩增)一目标核酸序列。这一方法可在杂交步骤之前应用，以将突变型与前述野生型核苷酸区分开。
药物组合物的制备
对于患有由本文所述疾病、特别是HIV感染引起的所述疾病的人可如下进行治疗，对患者给以有效量的位于药用载体或稀释剂中的D-D4FC或其可药用盐或前体，用于如本文具体所述的任何适应症或给药方式。活性物质可以以液体或固体形式，通过任何适当的途径给药，例如口服、肠胃外给药、肠内给药、静脉注射、皮内给药、皮下给药、透皮给药、鼻内给药或局部给药。
将活性化合物包含在可药用载体或稀释剂中，其量足以对患者释放出治疗有效量的化合物以抑制病毒在体内的复制，尤其是HIV的复制，而对受治疗的患者不产生严重的毒性作用。″抑制剂量″是指足够产生抑制作用例如按照上述测试方法测定的抑制作用的活性成分的量。
在所有的上述条件下，优选的化合物剂量可以是约1-75mg/kg，优选1-20mg/kg体重每天，更一般的情况下，为每天每千克受治者体重0.1-约100mg。可药用衍生物的有效剂量范围可以根据释放的母体核苷的重量进行计算。如果衍生物本身具有活性，可以按照上述方法用衍生物的重量，或者按照本领域技术人员所熟知的其它方法估算有效剂量。
化合物可方便地以单位剂量形式或任何适当的剂量形式给药，包括但不限于每单位剂量形式含有7-3000mg，优选70-1400mg的活性成分。通常50-1000mg的口服剂量是方便的。
活性成份的理想给药方式是活性化合物的血浆峰浓度达到约0.02-70mmol，优选约0.5-10mM，这一点可以通过，例如静脉注射0.1-25％活性成分的溶液(任选在生理盐水中)，或者以活性成分的大丸剂形式给药来实现。
活性化合物在药物组合物中的浓度依赖于药物的吸收、生物分布、代谢和排泄速率，以及其它的本领域技术人员已知的因素。值得一提的是剂量标准也随着待治疗病情的严重程度而变化。可以理解的还有：对于具体的受治疗者，应当根据个体的需要和给药人员或主管给药人员的专业判断，随时间调整具体的剂量配给方案。本文所述的浓度范围仅仅是示范性的，而不是用来限定所要求保护的组合物的范围和实施。活性成分可以一次性给药，也可以分成数个较小的剂量在不同的时间间隔给药。
活性化合物优选的给药方式是口服，口服组合物通常含有惰性稀释剂或可食用的载体。它们可以包封在明胶胶囊中或被压成片剂。为了便于口服给药治疗，活性化合物可以与赋型剂混合，以片剂、锭剂或胶囊形式使用。药学上适合的粘结剂和/或辅剂也可以作为部分组成包括在内。
片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等可以含有以下任意组分或性质相似的化合物：粘结剂如微晶纤维素、黄耆胶或明胶；赋型剂如淀粉或乳糖；崩解剂如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂如硬脂酸镁或Sterotes；助滑剂如胶质二氧化硅；甜味剂如蔗糖或糖精；或矫味剂如薄荷油、水杨酸甲酯或橙味调味料。如果剂量单位形式是胶囊，那么，除了上述类型物质以外，还可以含有液体载体如脂肪油。此外，剂量单位形式可以含有改善剂量单位物理形状的其它各种物质，例如，糖衣、虫胶包衣或其它肠衣剂。
化合物可以作为酏剂、悬浮剂、糖浆剂、糯米纸囊剂、咀嚼胶或类似剂型的一个组分给药。糖浆剂除了活性化合物以外，可以含有蔗糖作为甜味剂，以及一些防腐剂、染料、着色剂和调味香料。
化合物或其可药用的衍生物或盐还可以和无损于所需作用的其它活性物质相混合，或者与具有增补所需作用的物质相混合，例如抗生素、杀真菌剂、抗炎剂、蛋白酶抑制剂，或其它核苷类或非核苷类抗病毒剂，如上面详细所述的。用于肠胃外给药、透皮给药、皮下给药或局部应用的溶液或悬浮液可以包括下面的组分：无菌稀释剂如注射用水、生理盐水、不挥发油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如乙二胺四乙酸；缓冲剂如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐以及张力调节剂如氯化钠或葡萄糖。肠胃外给药制剂可以封装在玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器和多倍剂量的小瓶中。
如果是静脉注射，优选的载体是生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。
脂质体悬浮液(包括脂质体，其带有靶向受染细胞的病毒抗原的单克隆抗体)也是优选的可药用载体。这些均可以按照本领域技术人员所熟知的方法制备，如美国专利4,522,811(其以全文引入作为参考)所述。举例来讲，制备脂质体制剂可以将适当的脂质如硬脂酰磷脂酰基乙醇胺、硬脂酰磷脂酰基胆碱、二十烷酰磷脂酰基胆碱和胆固醇溶解于无机溶剂，然后蒸发，在容器表面留下一层干脂质薄膜，将活性化合物或其单磷酸酯、二磷酸酯和/或三磷酸酯衍生物的水溶液加入到容器中，然后用手旋转摇动容器，以使容器壁上的脂质物质脱离并分散脂质聚集体，从而形成脂质体悬浮液。
控释制剂
所有在此部分列举的关于控释制剂的美国专利均以全文引入作为参考。
自1966年Kulksmi等人报道了聚乳酸的合成和可生物降解性(“聚乳酸用于外科移植”(Polyactic acid for surgical implants)，外科档案(Arch.Surg.)，93：839)以来，可生物降解的聚合物领域得到迅速发展。已报道作为基质材料用于传递手段的其他聚合物的实例包括，聚酸酐、聚酯如聚乙交酯和聚(丙交酯/乙交酯)、聚氨基酸如聚赖氨酸、聚氧化乙烯的聚合物和共聚物、以丙烯酸为末端的聚氧化乙烯、聚酰胺、聚氨基甲酸酯、聚原酸酯、聚丙烯腈和聚磷腈(polyphophazene)。例如参见，授权给Langer的美国专利No.4891225和4906474(聚酸酐)、授权给Hutchinson的4767628(聚丙交酯、聚(丙交酯/乙交酯))、授权给Tice等人的4530840(聚丙交酯、聚乙交酯和共聚物)。还参见，授权给Hubbell等人的美国专利No.5626863，其描述可光聚合的可生物降解的水凝胶作为组织接触性材料和控释载体(已聚合和交联的高分子的水凝胶，包括带有可生物降解的单体延伸或低聚体延伸的亲水性低聚物，这些延伸是能聚合和交联的已封端的单体或低聚体)；和由Focal，Inc.申请的PCT WO 97/05185，其涉及作为用于药物传递的控释制剂和组织治疗剂的复块可生物降解的水凝胶。
生物来源的可降解材料是熟知的，例如有交联的白明胶。透明质酸已被交联并已被用作为可降解的溶胀聚合物，用于生物医学应用(授权给Della Valle等人的美国专利4957744；(1991)“用于减少血栓形成对聚合生物材料进行表面改性”，聚合物材料科学工程(Polym.Mater.Sci.Eng.)，62：731-735)。
目前将一些分散体系用作，或正在研究将其用作物质的载体，特别是生物活性化合物的载体。用于药物或化妆品制剂的分散体系可分为悬浮液或乳浊液。悬浮液被限定为大小从几纳米至数百微米、使用悬浮剂分散在液体介质中的固体颗粒。固体微粒包括微球体、微囊体和纳球体。乳浊液被限定为由乳化剂如表面活性剂和类脂的界面膜稳定的、一种液体在另一种液体中的分散体。乳浊液制剂包括油包水和水包油乳浊液、多重乳浊液、微滴乳浊液、微液滴和脂质体。微液滴是单层磷脂囊泡，其由一内部含油相的球形类脂层构成，正如授权给Haynes的美国专利No.4622219和4725442所限定。脂质体是通过混合水不溶性的极性类脂与水溶液而制备的磷脂囊泡。由水不溶性类脂在水中混合引起的不利的熵，产生高度有序聚集的、同心会合的内含水溶液的磷脂膜。
授权给Dunn等人的美国专利4938763公开一种用于形成原位植入体的方法，其通过将非反应性的水不溶性的热塑性聚合物溶解于生物相容性的水溶性溶剂中以形成液体、将该液体置于机体中、并允许所述溶剂散逸以形成固体植入体而形成原位植入。聚合物溶液可利用注射器置入机体中。植入体可呈现出其周围空穴的形状。在另一实施方案中，从反应性的液态低聚的聚合物形成植入体，所述聚合物为不含溶剂的聚合物，和通常伴有固化催化剂的添加而在原地固化以形成固体的聚合物。
一些专利公开了可用于施用D-D4FC或者其核苷酸或其他限定前药的药物传递系统。美国专利No.5749847公开一种用于通过电穿孔将核苷酸传递到有机体中的方法。美国专利No.5718921公开包括聚合物和分散在其中的药物的微球体。美国专利No.5629009公开一种用于生物活性因子控释的传递系统。美国专利No.5578325公开了非直链的亲水疏水性复块共聚物的毫微粒和微粒。美国专利No.5545409公开了用于生物活性因子控释的传递系统。美国专利No.5494682公开了离子交联的聚合微囊体。
授权给Andrx Pharmaceuticals，Inc.的美国专利No.5728402公开一种包括一内相和一外相的控释制剂，所述内相包括与水凝胶形成剂混合的活性药物、其盐或前药，所述外相包括对抗在胃中溶解的包衣。授权给Andrx Pharmaceuticals，Inc.的美国专利No.5736159和5558879公开了具有极小水溶性的药物控释制剂，其中在原位形成一通路。授权给Andrx Pharmaceuticals，Inc.的美国专利No.5567441公开每日服用一次的控释制剂。美国专利No.5508040公开一多微粒搏动药物传递系统。美国专利No.5472708公开一搏动粒子基药物传递系统。美国专利5458888公开了可用混合物制备的一控释片剂，具有内部含药物相和包括平均分子量为3000-10000的聚乙二醇聚合物的外相。美国专利No.5419917公开了一种改变水凝胶形式的药物的释放速率的方法，其基于有效量的药用离子化化合物的使用，该化合物能使药物从水凝胶中以基本上零级释放速率释放。美国专利No.5458888公开了一控释片剂。
授权给Elan Corporation，plc的美国专利No.5641745公开了一种控释药物制剂，其包括在可生物降解聚合物中的活性药物以形成微球体或纳球体。适合的可生物降解聚合物为聚D，L-丙交酯或者聚D，L-丙交酯与聚D，L-(丙交酯/乙交酯)的混合物。授权给Elan Corporation，plc的美国专利No.5616345描述了用于每日给药一次的控制吸收制剂，包括与有机酸相伴的活性化合物和一多层膜，该膜围绕在核的周围并含有占主要部分的药用膜形成性、水不溶性合成聚合物和占小部分的药用膜形成性、水溶性合成聚合物。美国专利No.5641515公开了一基于可生物降解毫微粒的控释制剂。美国专利No.5637320公开一用于每日给药一次的控制吸收制剂。美国专利No.5580580和5540938针对制剂及其在神经病治疗中的用途。美国专利No.5533995针对一有关控制药物传递的被动透皮装置。美国专利No.5505962描述一控释药物制剂。
前药制剂
正如下面具体描述的，D-D4FC或者任何本文所述的用于与D-D4FC或其相关化合物联合或交替治疗的核苷或其他化合物，可作为酰化的前药或核苷酸前药给药。
本文所述的任何核苷或其他含有羟基或氨基官能团的化合物均可以作为核苷酸前药进行给药，以提高核苷的活性、生物利用度、稳定性或改变其性质。许多核苷酸前药配基是已知的。一般情况下，对所述化合物或核苷的一、二或三磷酸酯的羟基进行烷基化、酰化或其它亲脂性的修饰，都会增强核苷的稳定性。可以在磷酸酯部分或羟基上置换一个或多个氢的取代基例子是烷基、芳基、类固醇、碳水化合物(包括糖)、1，2-二酰基甘油和醇。更多的描述在R.Jones和N.Bischofberger，抗病毒研究(Antiviral Research)，27(1995)1-17，所有这些均可用于和所公开的核苷或其他化合物联合，以达到期望的效果。
活性核苷或其他含羟基化合物也可以醚脂提供(和，对于核苷，特别提供为5’-醚脂)，正如以下以全文引入作为参考的文献所公开的：Kucera，L.S.，N.Iyer，E.Leake，A.Raben，Modest E.K.，D.L.W.和C.Piantadosi.1990.“新的抑制感染性HIV-1产生的和诱导缺陷性病毒形成的膜作用性醚脂类似物”(Novel memberane-interactive ether lipidanalogs that inhibit infectious HIV-1 production and induce defective virusformation)，爱滋病研究及人逆转录病毒(AIDS Res.Hum.RetroViruses.)6：491-501；Piantadosi，C.，J.Marasco C.J.，S.L.Morris-Natschke，K.L.Meyer，F.Gumus，J.R.Surles，K.S.Ishaq.L.S.Kucera，N.Iyer，C.A.Wallen，S.Piantadosi和E.J.Modest.1991.“新醚脂核苷偶联物的合成和抗HIV活性评价”(Synthesis and evaluation of novel ether lipidnucleoside conjugates for anti-HIV activity)，药物化学杂志(J.Med.Chem.)34：1408-1414；Hosteller，K.Y.，D.D.Richman，D.A.Carson，L.M.Stuhmiller，G.M.T.van Wijk和H.van den Bosch.1992“3’-脱氧胸苷的一种前体——3’-脱氧胸苷二磷酸二肉豆寇酰甘油，在CEM和HT4-6C细胞中大大增强对I型人类免疫缺陷性病毒的抑制”(Greatly enhancedinhibition of human immunodeficiency virus type I replication in CEM andHT4-6C cells by 3’-deoxythymidine diphosphate dimyristoylglycerol，alipid prodrug of 3’-deoxythymidine)，抗微生物药物和化学疗法(Antimicrob.Agents Chemother.)36：2025-2029；Hosteller，K.Y.，L.M.Stuhmiller，H.B.Lenting，H.van den Bosch和D.D.Richman，1990.“叠氮胸苷和其他抗病毒核苷的磷脂类似物的合成和抗逆转录病毒活性”(Synthesis and antiretroviral activity of phospholipid analogs ofazidothymidine and other antiviral nucleosides.)，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)265：61127。
一些美国专利公开了适当的可以以共价键结合到核苷或其他含羟基或胺化合物上的亲脂性取代基，优选结合到核苷或亲脂性制备物的5′-OH上，非限定性的例子包括美国专利5,149,794(1992年9月22日，Yatvin等人)、5,194,654(1993年3月16日，Hostetler等人)、5,223,263(1993年6月29日，Hostetler等人)、5,256,641(1993年10月26日，Yatvin，等人)、5,411,947(1995年5月2日，Hostetler等人)、5,463,092(1995年10月31日，Hostetler等人)、5,543,389(1996年8月6日，Yatvin等人)、5,543,390(1996年8月6日，Yatvin等人)、5,543,391(1996年8月6日，Yatvin等人)和5,554,728(1996年9月10日，Basava等人)。所有这些文献均以全文引入作为参考。一些外国专利申请公开了可结合到本发明核苷上的亲脂性取代基或亲脂性制剂，包括WO 89/02733、WO90/00555、WO 91/16920、WO 91/18914、WO 93/00910、WO 94/26273、WO 96/15132、EP 0350287、EP 93917054.4和WO 91/19721。
在以下文献中描述了核苷酸前药的非限定性例子：Ho，D.H.W.(1973“1β-D-阿拉伯呋喃糖胞苷的激酶和脱氨酶在人和小鼠组织中的分布”(Distribution of Kinase and deaminase of1β-D-arabinofuranosylcytosine in tissues of man and muse)，癌症研究(Cancer Res.)33，2816-2820；Holy，A.(1993)“经等极磷修饰的核苷酸类似物”(Isopolar phosphorous-modified nucleotide analogues)，发表于De Clercq编辑的抗病毒药物设计进展(Advances in Antiviral DrugDesign)，第I卷，JAI出版社，179-231页；Hong，C.I.，Nechaev，A.和West，C.R.(1979a)“1β-D-阿拉伯呋喃糖胞苷皮质醇和可的松偶联物的合成和抗肿瘤活性”(Synthesis and antitumor activity of1β-D-arabino-furanosylcytosine conjugates of cortisol and cortisone.)，生物化学生物物理研究通讯(Biochem.Biophys.Rs.Commun.)88，1223-1229；Hong，C.I.，Nechaev，A.，Kirisits，A.J.Buchheit，D.J.和West，C.R.(1980)“作为潜在抗肿瘤剂的核苷偶联物，3.1-(β-D-阿拉伯呋喃糖胞苷皮质甾类和所选亲脂性醇的偶联物的合成和抗肿瘤活性。)”(Nucleoside conjugates as potential antitumor agents.3.Synthesis andantitumor activity of 1-(β-D-arabinofuranosyl)cytosine conjugates ofcorticosteroids and selected lipophilic alcohols.)  药物化学杂志(J MedChem.)28，171-177；Hosteller，K.Y.，Stuhmiller，L.M.，Lenting，H.B.M.van den Bosch，H.和Richman，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)265，6112-6117；Hosteller，K.Y.，Carson，D.A.和Richman，D.D.(1991)；“磷脂酰叠氮胸苷：在CEM细胞中抗逆转录病毒作用的机理”(Phosphatidylazidothymidine：mechanism of antiretroviral action in CEMcells.)生物化学杂志(J.Biol.Chem.)266，11714-11717；Hosteller，K.Y.，Korba，B.Sridhar，C.，Gardener，M.(1994a)“在感染乙型肝炎的细胞中的磷脂酰二脱氧胞苷抗病毒活性和在小鼠中增强的肝摄取”(Antiviralactivity of phosphatidyl-dideoxycytidine in hepatitis B-infected cells andenhanced hepatic uptake in mice.)抗病毒研究(Antiviral.Res.)24，59-67；Hosteller，K.Y.，Richman，D.D.，Sridbar.C.N.Felgner，P.L.Felgner，J.，Ricci，J.，Gardener，M.F.Selleseth，D.W.和Ellis，M.N.(1994b)“磷脂酰叠氮胸苷和磷脂酰二脱氧胞苷：对在小鼠淋巴组织中的摄取和在被人类免疫缺陷性病毒感染的细胞和被劳舍尔氏白血病病毒感染的小鼠中的抗病毒活性的评价”(Phosphatidylazidothymidineand phosphatidyl-ddC：Assessment of uptake in mouse lymphoid tissuesand antiviral activities in human immunodeficiency virus-infected cellsand in rauscher leukemia virus-infected mice.)抗微生物药物的化学疗法(Antimicrobial Agents Chemother.) 38，2792-2797；Hunston，R.N.，Jones，A.A.，McGuigan，C.，Walker，R.T.，Balzarini，J.和DeClercq，E.(1984)“从2’-脱氧-5-氟尿苷衍生的一些环磷酸三酯的合成和生物学性质”(Synthesis and biological properties of some cyclic phosphotriestersderived from 2′-deoxy-5-fluorouridine.)药物化学杂志(J.Med.Chem.)27，440-444；Ji，Y.H.，Moog，C.，Schmitt，G.，Bischoff，P.和Luu，B.(1990)；“7-β-羟基胆固醇和嘧啶核苷的单磷酸酯作为潜在抗肿瘤药：合成和抗肿瘤活性的初步评价”(Monophosphoric acid esters of7-β-hydroxycholesterol and of pyrimidine nucleoside as potentialantitumor agents：synthesis and preliminary evaluation of antitumoractivity.)药物化学杂志(J.Med.Chem.)33 2264-2270；Jones，A.S.，McGuigan，C.，Walker，R.T.，Balzarini，J.和DeClercq，E.(1984)“一些核苷环氨基磷酸酯的合成、性质和生物学活性”(Synthesis，properties，and biological activity of some nucleoside cyclic phosphoramidates)J.Chem.Soc.Perkin Trans.I，1471-1474；Juodka，B.A.和SmaM J.(1974)“二核糖核苷磷(P→N)氨基酸衍生物的合成”(Synthesis ofdiribonucleoside phosph(P→N)amino acid derivatives)Coll.Czech.Chem.Comm.39，363-968；Kataoka，S.，Imai，J.，Yamaji，N.，Kato，M.，Saito，M.，Kawada，T.和Imai，S.(1989)“烷基化的cAMP衍生物；选择性合成和生物学活性”(Alkylated cAMP derivatives；selectivesynthesis and biological activities)Nucleic Acids Res.Sym.Ser.21，1-2；Kataoka，S.，Uchida，“(cAMP)苄基和甲基三酯”((cAMP)benzyl andmethyl triesters)杂环(Heterocycles)32，1351-1356；Kinchington，D.，Harvey，J.J.，O′Connor，T.J.，Jones，B.C.N.M.，Devine，K.G.，Taylor-Robinson D.，Jeffries，D.J.和McGuigan，C.(1992)比较齐多夫定氨基磷酸酯和二氨基磷酸酯衍生物在体外对HIV和ULV的抗病毒作用(Comparison of antiviral effects of zidovudine phosphoramidate andphosphorodiamidate derivatives against HIV and ULV in vitro)抗病毒化学及化学疗法(Antiviral Chem.Chemother.)3，107-112；Kodama，K.，Morozumi，M.，Saithoh，K.I.，Kuninaka，H.，Yosino，B.和Saneyoshi，M.(1989)“1-β-D-阿拉伯呋喃糖胞苷-5′-硬脂酰磷酸的抗肿瘤活性和药学性质；1-β-D-阿拉伯呋喃糖胞苷的口服活性衍生物”(Antitumor activityand pharmacology of 1-β-D-arabinofuranosylcytosine-5′-stearylphosphate；an orally active derivative of 1-β-D-arabinofuranosylcytosine)日本癌症研究杂志(Jpn.J.Cancer Res.)80，679-685；Korty，M.和Engels，J.(1979)“腺苷-和鸟苷3′，5′磷酸苄酯对豚鼠心肌的作用”(The effects ofadenosine-and guanosine 3′，5′phosphoric and acid benzyl esters onguineapig ventricular myocardium)Naunyn-Schmiedeberg′s Arch.Phormacol.310，103-111；Kumar，A.，Goe，P.L.，Jones，A.S.Walker，R.T.Balzarini，J.和Declercq，E.(1990)“一些环状氨基磷酸酯核苷衍生物的合成和生物学评价”(Synthesis and biological evaluation of some cyclicphosphoramidate nucleoside derivatives)药物化学杂志(J.Med.Chem.)33，2368-2375；LeBec，C.和Huynh-Dinh，T.(1991)“作为抗癌前药的5-氟尿苷和阿拉伯糖胞苷的亲脂性磷酸三酯衍生物的合成”(Synthesisof lipophilic phosphate triester derivatives of 5-fluorouridine anarabinocytidine as anticancer prodrugs)四面体通讯(Tetrahedron Lett.)32，6553-6556；Lichtenstein，J.，Barner，H.D.和Conen，S.S，(1960)大肠杆菌对外源提供的核苷酸的代谢(The metabolism of exogenouslysupplied nucleotides by Escherichia coli.)生物化学杂志(J.Biol.Chem.)235，457-465；Lucthy，J.，Von Daeniken，A.，Friederich，J.Manthey，B.，Zweifel，J.，Schlatter，C.和Benn，M.H.(1981)三种天然存在的氰基环硫烷的合成和毒理学性质(Synthesis and toxicological properties of threenaturally occurring cyanoepithioalkanes)Mitt.Geg.Lebensmittelunters.Hyg.72，131-133(化学文摘(Chem.Abstr.)95，127093)；McGigan，C.Tollerfield，S，M.和Riley，P.a.(1989)抗病毒药Ara的一些磷酸三酯衍生物的合成和生物学评价(Synthesis and biological evaluation of somephosphate triester derivatives of the anti-viral drug Ara)  核酸研究(Nucleic Acids Res.)17，6065-6075；McGuigan，C.，Devine，K.G.，O′Connor，T.J.，Galpin，S.A.，Jeffries，D.J.和Kinchington，D.(1990a)一些作为抗HIV化合物的新3’-叠氮基-3’-脱氧胸苷(AZT)氨基磷酸酯衍生物的合成和评价(Synthesis and evaluation of some novelphosphoramidate derivatives of 3′-azido-3′-deoxythymidine(AZT)asanti-HIV compounds)抗病毒化学和化学疗法(Antiviral Chem.Chemother.)1107-113；McGuigan，C.，O′Connor，T.J.，Nicholls，S.R.Nickson，C.和Kinchington，D.(1990b)“AZT和ddCyd的一些新的取代二烷基磷酸酯衍生物的合成和抗HIV活性”(Synthesis and anti-HIVactivity of some novel substituted dialkyl phosphate derivatives of AZTand ddCyd)抗病毒化学和化学疗法(Antiviral Chem.Chemother.)1，355-360；McGuigan，C.，Nicholls，S.R.，O′Connor，T.J.，和Kinchington，D.(1990c)“作为潜在抗艾滋病药物的3′-修饰核苷的一些新二烷基磷酸酯衍生物的合成”(Synthesis of some novel dialkyl phosphatederivative of 3′-modified nucleosides as potential anti-AIDS drugs)抗病毒化学和化学疗法(Antiviral Chem.Chemother.)1，25-33；McGuiganC.，Devin，K.G.，O′Connor，T.J.和Kinchington，D.(1991)“3’-叠氮基-3’-脱氧胸苷(AZT)的一些卤代烷基氨基磷酸酯衍生物的合成和抗HIV活性；三氯乙基甲氧基氨基丙酰基化合物的强活性”(Synthesis andanti-HIV activity of some haloalkyl phosphoramidate derivatives of3′-azido-3′deoxythymidine(AZT)；potent activity of the trichloroethylmethoxyalaninyl compound)抗病毒研究(Antiviral Res.)15，255-263；McGuigan，C.，Pathirana，R.N.，Balzarini，J.和DeClercq，E.(1993b)“生物活性AZT核苷酸由AZT的芳基磷酸酯衍生物在细胞内传递”(Intracellular delivery of bioactive AZT nucleotides by aryl phosphatederivatives of AZT)药物化学(J.Med.Chem.)36，1048-1052。
抗HIV药AZT的烷基氢磷酸酯衍生物可比母体核苷类似物毒性低。抗病毒化学和化学疗法(Antiviral Chem.Chemother.)5，271-277；Meyer，R.B.，Jr.，Shuman，D.A.和Robins，R.K.(1973)嘌呤核苷3′，5′-环氨基磷酸酯的合成(Synthesis of purine nucleoside 3′，5′-cyclicphosphoramidates.)四面体通讯(Tetrahedron Lett.)269-272；Nagyvary，J.Gohil，R.N.，Kirchner，C.R.和Stevens，J.D.(1973)“对环AMP的中性酯的研究”(Studies on neutral esters of cyclic AMP)生物化学和生物物理研究通讯(Biochem.Biophys.Res.Commun.)55，1072-1077；Namane，A.Gouyette，C.，Fillion，M.P.，Fillion，G.和Huynh-Dinh，T.(1992)“使用糖基磷酸三酯前药改善AZT在脑内的传递”(Improvedbrain delivery of AZT using a glycosyl phosphotriester prodrug)药物化学杂志(J.Med.Chem.)35，3039-3044；Nargeot，J.Nerbonne，J.M.Engels，J.和Leser，H.A.(1983)美国国家学院科学(Natl.Acad.Sci.U.S.A.)80，2395-2399；Nelson，K.A.，Bentrude，W.G.Stser，W.N.和Hutchinson，J.P.(1987)“核苷环状3′，5′单磷酸酯的磷酸酯环的椅式-扭式平衡问题。胸苷苯基环状3′，5′单磷酸酯的非对映异构体的1HNMR和x射线结晶学研究”(The question of chair-twist equilibria for thephosphate rings of nucleoside cyclic 3′，5′monophosphates.1HNMR andx-ray crystallographic study of the diastereomers of thymidine phenylcyclic 3′，5′-monophosphate)美国化学协会杂志(J.Am.Chem.Soc.)109，4058-4064；Nerbonne，J.M.，Richard，S.，Nargeot J.和Lester，H.A.(1984)“新的可光活化的环核苷酸产生环AMP和环GMP细胞内浓度的跳跃”(New photoactivatable cyclic nucleotides produce intracellularjumps in cyclic AMP and cyclic GMP concentrations)自然(Nature)301，74-76；Neumann，J.M.，Herv，M.，Debouzy，J.C.，Guerra，F.I.，Gouyette，C.，Dupraz，B.和Huyny-Dinh，T.(1989)“胸苷糖基磷脂的合成和用NMR进行跨膜转运研究”(Synthesis and transmembrane transport studies byNMR of a glucosyl phospholipid of thymidine.)美国化学协会杂志(J.Am.Chem.Soc.)111，4270-4277；Ohno，R.，Tatsumi，N.，Hirano，M.，Imai，K.Mizoguchi，H.，Nakamura，T.，Kosaka，M.，Takatuski，K.，Yamaya，T.，Toyama K.，Yoshida，T.，Masaoka，T.，Hashimoto，S.，Ohshima，T.，Kimura，I.，Yamada，K.和Kimura，J.(1991)“通过口服1-β-D-阿拉伯呋喃糖胞苷-5′硬脂酰磷酸酯治疗骨髓发育异常综合征”(Treatment ofmyelodysplastic syndromes with orally administered1-β-D-arabinouranosylcytosine-5′stearylphosphate)肿瘤学(Oncology)48，451-455。Palomino，E.，Kessle，D.和Horwitz，J.P.(1989)“用于将2′，3′二脱氧核苷持续传递到脑的二氢吡啶载体系统”(Adihydropyridine carrier system for sustained delivery of 2′，3′dideoxynucleosides to the brain)药物化学杂志(J.Med.Chem.)32，22-625；Perkins，R.M.，Barney，S.Wittrock，R.，Clark P.H.，Levin，R.Lambert，D.M.，Petteway，S.R.，Serafinowska，H.T.，Bailey，S.M.，Jackson，S.，Harnden，M.R.Ashton，R.，Sutton，D.，Harvey，J.J.和Brown，A.G.(1993)“BRL47923和其前药SB203657A在小鼠中对抗劳舍尔氏鼠白血病病毒感染的活性”(Activity of BRL47923 and its oral prodrug，SB203657A against a rauscher murine leukemia virus infection in mice)抗病毒研究(Antiviral Res.)20(增刊I).84；Piantadosi，C.，Marasco，C.J.，Jr.，Norris-Natschke，S.L.，Meyer，K，L.，Gumus，F.，Surles，J.R.，Ishaq，K.S.，Kucera，L.S.Iyer，N.，Wallen，C.A.，Piantadosi，S.和Modest，E.J.(1991)“新醚酯核苷偶联物的合成和抗HIV-1活性评价”(Synthesis and evaluation of novel ether lipid nucleoside conjugates foranti-HIV-1 activity)药物化学杂志(J.Med.Chem.)34，1408-1414；Pompon，A.，Lefebvre，I.，Imbach，J.L.，Kahn，S.和Farquhar，D.(1994).“叠氮胸苷-5′-单磷酸的单-和双(新戊酰基氧基甲基)酯在细胞提取物和组织培养基中的分解途径；在线ISRP-清洗HPLC技术的应用”(Decomposition pathways of the mono-and bis(pivaloyloxymethyl)esters of azidothymidine-5′-monophosphate in cell extract and in tissueculture medium；an application of the on-line ISRP-cleaning HPLCtechnique)抗病毒化学和化学疗法(Antiviral Chem.Chemother.)5，91-98；Postemark，T.(1974)“环AMP和环GMP”(Cyclic AMP andcyclic GMP)药理学年鉴(Annu.Rev.Pharmacol.)14，23-33；Prisbe，E.J.，Martin，J.C.M.，McGhee，D.P.C.，Barker，M.F.，Smee，D.F.Duke，A.E.，Matthews，T.R.和Verheyden J.P.J.(1986)“9-[(1，3-二羟基-2-丙氧基)甲基鸟嘌呤的磷酸酯和膦酸酯衍生物的合成和抗疱疹病毒活性”(Synthesis and antiherpes virus activity of phosphate and phosphonatederivatives of 9-[(1，3-dihydroxy-2-propoxy)methyl]guanine)药物化学杂志(J.Med.Chem.)29，671-675；Pucch，F.，Gosselin，G.，Lefebvre，I.，Pompon，a.，Aubertin，A.M.Dirn和Imbach，J.L.(1993)“核苷单磷酸通过还原酶介导的活化过程进行细胞内传递”(Intracellular delivery ofnucleoside monophosphate through a reductase-mediated activationprocess)抗病毒研究(Antiviral.Res.)22，155-174；Pugaeva，V.P.，Klochkeva S.I.，Mashbits，F.D.和Eizengart，R.S.(1969)“对工业气氛中硫化乙烯的毒理学评估和健康标准定级”(Toxicological assessmentand health standard ratings for ethylene sulfide in the industrialatmosphere)Gig.Trf.Prof Zabol.14，47-48(化学文摘(Chem.Abstr.)72，212)；Robins，R.K.(1984)“核苷酸类似物作为逆转录病毒和肿瘤的抑制剂的潜能”(The potential of nucleotide analogs as inhibitors ofRetro viruses and tumors)药学研究(Pharm.Res.)11-18；Rosowsky，A.，Kim S.H.，Ross和J.Wick，M.M.(1982)“1-β-D-阿拉伯呋喃糖胞苷的亲脂性5′-(烷基磷酸)酯及其N4-酰基和2，2′-脱水-3′-O-酰基衍生物作为潜在的前药”(Lipophilic 5′-(alkylphosphate)esters of1-β-D-arabinofuranosylcytosine and its N4-acyl and 2，2′-anhydro-3′-O-acylderivatives as potential prodrugs)药物化学杂志(J.Med.Chem.)25，171-178；Ross，W.(1961)“在葡萄糖预处理后，步行人群对带有碱性侧链的芳香族氮芥的敏感性增加”(Increased sensitivity of the walkerturnout towards aromatic nitrogen mustards carrying basic side chainsfollowing glucose pretreatment)生物化学和药学(Biochem.Pharm.)8，235-240；Ryu，E.K.，Ross，R.J.Matsushita，T.，MacCoss，M.，Hong，C.I.和West，C.R.(1982)，“磷脂-核苷偶联物.3. 1-β-D-阿拉伯呋喃糖胞苷5′二磷酸[-]，2-酰基甘油的合成和初步生物学评价”(Phospholipid-nucleoside conjugates.3.Synthesis and preliminarybiological evaluation of 1-β-D-arabinofuranosylcytosine 5′diphosphate[-]，2-diacylglycerols)药物化学杂志(J.Med，Chem.)25，1322-1329；Saffhill，R.和Hume，W.J.(1986)“5-碘代脱氧尿苷和5-溴代乙氧基尿苷被不同来源的血清降解及将它们用于向DNA中引入的结果”(Thedegradation of 5-iododeoxyuridine and 5-bromoethoxyuridine by serumfrom different sources and its consequences for the use of thesecompounds for incorporation into DNA)化学与生物学的相互作用(Chem.Biol.Interact.)57，347-355；Saneyoshi，M.，Morozumi，M.，Kodama，K.，Machida，J.，Kuninaka，A.和Yoshino，H.(1980)“合成的核苷和核苷酸.XVI.一系列1-β-D-阿拉伯呋喃糖胞苷5′-烷基或芳基磷酸酯的合成和生物学评价”(Synthetic nucleosides and nucleotides.XVI.Synthesisand biological evaluations of a series of 1-β-D-arabinofuranosylcytosine5′-alky or arylphosphates)化学药学通报(Chem Pharm.Bull.)28，2915-2923；Sastry，J.K.，Nehete，P.N.，Khan，S.，Nowak，B.J.，Plunkett，W.，Arlinghaus，R.B.和Farquhar，D.(1992)“可透膜的二脱氧尿苷5′-单磷酸类似物抑制人类免疫缺陷性病毒感染”(Membrane-permeabledideoxyuridine  5′-monophosphate analogue inhibits humanimmunodeficiency virus infection)分子药理学(Mol Pharmacol.)41，441-445；Shaw，J.P.，Jones，R.J.Arimilli，M.N.，Louie，M.S.，Lee，W.A.和Cundy，K.C.(1994)“来自PMEA前药的PMEA在雄性Sprague-Dawley大鼠中的口服生物利用度”(Oral bioavailability ofPMEA from PMEA prodrugs in male Sprague-Dawley Rats)第九次AAPS年会，San Diego，CA(摘要)。Shuto，S.，Ueda，S.，Imamura，S.，Fukukawa，K.Matsuda，A.和Ueda，T.(1987)“5’磷脂酰核苷通过酶两相反应一步合成”(A facile one-step synthesis of 5′phosphatidiylnucleosides by an enzymatic two-phase reaction)四面体通讯(Tetrohedron Lett.)28，199-202；Shuto，S.Itoh，H.，Ueda，S.，Imamura，S.，Kukukawa，K.，Tsujino，M.，Matsuda，A.和Ueda，T.(1988)药学通报(Pharm.Bull.)36，209-217。有用的磷酸酯前药基团的例子是S-酰基-2-硫乙基基团，其也称作“SATE”。
本发明参照其优选实施方案进行了描述。在阅读了上面对本发明的详细描述之后，对本发明进行变化和修饰，对本领域技术人员而言是显而易见的，这些变化和修饰均包括在本发明范围之内。

Claims (49)

1.一种用于治疗或预防人类HIV感染者的药物组合物，其包括有效量的β-D-D4FC或其可药用盐或酯，可选择地以可药用载体形式，和有效量的至少一种选自下列物质的第二种药物：茚地那韦(indinavir)、奈非那韦(nelfinavir)、沙奎那维(saquinavir)、安普那韦(amprenavir)、依非韦伦(efavirenz)、地拉韦啶(delavirdine)、奈韦拉平(nevirapine)、和阿巴卡韦(abacavir)。
2.权利要求1所述的药物组合物，其中与β-D-D4FC结合使用的所述第二种药物为茚地那韦(indinavir)。
3.权利要求1所述的药物组合物，其中与β-D-D4FC结合使用的所述第二种药物为奈非那韦(nelfinavir)。
4.权利要求1所述的药物组合物，其中与β-D-D4FC结合的所述第二种药物为沙奎那维(saquinavir)。
5.权利要求1所述的药物组合物，其中与β-D-D4FC结合使用的所述第二种药物为安普那韦(amprenavir)。
6.权利要求1所述的药物组合物，其中与β-D-D4FC结合使用的所述第二种药物为为依非韦伦(efavirenz)。
7.权利要求1所述的药物组合物，其中与β-D-D4FC结合使用的所述第二种药物为地拉韦啶(delavirdine)。
8.权利要求1所述的药物组合物，其中与β-D-D4FC结合使用的所述第二种药物为奈韦拉平(nevirapine)。
9.权利要求1所述的药物组合物，其中与β-D-D4FC结合使用的所述第二种药物为阿巴卡韦(abacavir)。
10.权利要求1所述的药物组合物，其中所述的β-D-D4FC和第二种药物以可药用载体形式给药。
11.权利要求10所述的药物组合物，其中可药用载体适于口服、静脉内给药、肠胃外给药、皮内给药、皮下给药或局部给药。
12.权利要求10所述的药物组合物，其中可药用载体适于口服。
13.权利要求10所述的药物组合物，其中可药用载体适于静脉内给药。
14.权利要求10所述的药物组合物，其中可药用载体适于肠胃外给药。
15.权利要求10所述的药物组合物，其中可药用载体适于皮内给药。
16.权利要求10所述的药物组合物，其中可药用载体适于局部给药。
17.权利要求1所述的药物组合物，其中所述的β-D-D4FC和第二种药物以单剂量单位形式给药。
18.权利要求17所述的药物组合物，其中所述的单剂量单位含7-3000mg每种化合物。
19.权利要求17的药物组合物，其中所述的单剂量单位为片剂或胶囊。
20.有效量的权利要求1的组合物在制备治疗或预防人体HIV感染的药物中的应用。
21.权利要求20的应用，其中与所述β-D-D4FC结合使用的第二种药物是茚地那韦(indinavir)。
22.权利要求20的应用，其中与所述β-D-D4FC结合使用的第二种药物是奈非那韦(nelfinavir)。
23.权利要求20的应用，其中与所述β-D-D4FC结合使用的第二种药物是沙奎那维(saquinavir)。
24.权利要求20的应用，其中与所述β-D-D4FC结合使用的第二种药物是安普那韦(amprenavir)。
25.权利要求20的应用，其中与所述β-D-D4FC结合使用的第二种药物是依非韦伦(efavirenz)。
26.权利要求20的应用，其中与所述β-D-D4FC结合使用的第二种药物是地拉韦啶(delavirdine)。
27.权利要求20的应用，其中与所述β-D-D4FC结合使用的第二种药物是奈韦拉平(nevirapine)。
28.权利要求20的应用，其中与所述β-D-D4FC结合使用的第二种药物是阿巴卡韦(abacavir)。
29.权利要求20的应用，其中β-D-D4FC与第二种药物以可药用载体形式给药。
30.权利要求29的应用，其中所述可药用载体适合口服、静脉内给药、肠胃外给药、皮内给药、皮下给药或局部给药。
31.权利要求20的应用，其中β-D-D4FC与第二种药物为单剂量单位的形式。
32.权利要求31的应用，其中所述单剂量单位含有7-3000mg每种化合物。
33.权利要求31的应用，其中所述单剂量单位是药片或胶囊。
34.有效量的β-D-D4FC或其可药用盐或酯在制备治疗或预防人体HIV感染的药物中的应用，其中所述β-D-D4FC或其可药用盐或酯任选地位于药用载体中，与有效量的第二种药物联合使用或交替使用，其中第二种药物选自茚地那韦(indinavir)、奈非那韦(nelfinavir)、沙奎那维(saquinavir)、安普那韦(amprenavir)、依非韦伦(efavirenz)、地拉韦啶(delavirdine)、奈韦拉平(nevirapine)、或阿巴卡韦(abacavir)。
35.权利要求34的应用，其中与所述β-D-D4FC结合使用或交替使用的第二种药物是茚地那韦(indinavir)。
36.权利要求34的应用，其中与所述β-D-D4FC结合使用或交替使用的第二种药物是奈非那韦(nelfinavir)。
37.权利要求34的应用，其中与所述β-D-D4FC结合使用或交替使用的第二种药物是沙奎那维(saquinavir)。
38.权利要求34的应用，其中与所述β-D-D4FC结合使用或交替使用的第二种药物是安普那韦(amprenavir)。
39.权利要求34的应用，其中与所述β-D-D4FC结合使用或交替使用的第二种药物是依非韦伦(efavirenz)。
40.权利要求34的应用，其中与所述β-D-D4FC结合使用或交替使用的第二种药物是地拉韦啶(delavirdine)。
41.权利要求34的应用，其中与所述β-D-D4FC结合使用或交替使用的第二种药物是奈韦拉平(nevirapine)。
42.权利要求34的应用，其中与所述β-D-D4FC结合使用或交替使用的第二种药物是阿巴卡韦(abacavir)。
43.权利要求34的应用，其中β-D-D4FC与第二种药物以可药用载体形式给药。
44.权利要求43的应用，其中所述可药用载体适合口服、静脉内给药、肠胃外给药、皮内给药、皮下给药或局部给药。
45.权利要求34的应用，其中β-D-D4FC与第二种药物为单剂量单位的形式。
46.权利要求45的应用，其中所述单剂量单位含有7-3000mg每种化合物。
47.权利要求45的应用，其中所述单剂量单位是药片或胶囊。
48.权利要求34的应用，其中与β-D-D4FC与第二种药物结合使用。
49.权利要求34的应用，其中与β-D-D4FC与第二种药物交替使用。
CNA2007101666768A 1999-01-22 2000-01-21 由β-2’,3’-二脱氢-2’,3’-二脱氧-5-氟胞苷选择的HIV-1突变 Pending CN101219148A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11677399P 1999-01-22 1999-01-22
US60/116,773 1999-01-22

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN00802998A Division CN1337880A (zh) 1999-01-22 2000-01-21 由β－2′,3′－二脱氢－2′,3′－二脱氧－5－氟胞苷选择的HIV－1突变

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101219148A true CN101219148A (zh) 2008-07-16

Family

ID=22369127

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN00802998A Pending CN1337880A (zh) 1999-01-22 2000-01-21 由β－2′,3′－二脱氢－2′,3′－二脱氧－5－氟胞苷选择的HIV－1突变
CNA2007101666768A Pending CN101219148A (zh) 1999-01-22 2000-01-21 由β-2’,3’-二脱氢-2’,3’-二脱氧-5-氟胞苷选择的HIV-1突变

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN00802998A Pending CN1337880A (zh) 1999-01-22 2000-01-21 由β－2′,3′－二脱氢－2′,3′－二脱氧－5－氟胞苷选择的HIV－1突变

Country Status (21)

Country Link
EP (1) EP1143976B9 (zh)
JP (1) JP2002535278A (zh)
KR (1) KR100745408B1 (zh)
CN (2) CN1337880A (zh)
AT (1) ATE324894T1 (zh)
AU (1) AU781281B2 (zh)
BR (1) BR0007627A (zh)
CA (1) CA2360039C (zh)
DE (1) DE60027691T2 (zh)
DK (1) DK1143976T3 (zh)
ES (1) ES2263449T3 (zh)
HK (1) HK1040064B (zh)
IL (1) IL144382A (zh)
MX (1) MXPA01007359A (zh)
NO (1) NO323586B1 (zh)
NZ (1) NZ528156A (zh)
PL (1) PL198237B1 (zh)
PT (1) PT1143976E (zh)
RU (1) RU2254133C2 (zh)
WO (1) WO2000043014A2 (zh)
ZA (1) ZA200105971B (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2254941T3 (es) * 2002-06-27 2006-06-16 Medivir Ab Interaccion sinergica entre abacavir y alovudina.
AU2004296877A1 (en) * 2003-12-09 2005-06-23 Incyte Corporation Dosing methods for ss-D-2',3'-dideoxy-2',3'-didehydro-5-fluorocytidine antiviral therapy
WO2005097618A2 (en) 2004-04-01 2005-10-20 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Low dose therapy for treating viral infections
US20060084628A1 (en) * 2004-10-19 2006-04-20 Achillion Pharmaceuticals Combination therapy for treating viral infections
US8091224B2 (en) * 2008-10-06 2012-01-10 GE Intelligent Platforms Embedded Systems, Inc. Method for coupling a battery within an embedded system

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL8901258A (nl) * 1989-05-19 1990-12-17 Stichting Rega V Z W 5-halogeno-2',3'-dideoxycytidinederivaten in geneesmiddelen voor het behandelen van retrovirus-infecties.
FR2729390A1 (fr) * 1995-01-18 1996-07-19 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux inhibiteurs de farnesyl transferase, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
US5703058A (en) * 1995-01-27 1997-12-30 Emory University Compositions containing 5-fluoro-2',3'-didehydro-2',3'-dideoxycytidine or a mono-, di-, or triphosphate thereof and a second antiviral agent
US5869461A (en) * 1995-03-16 1999-02-09 Yale University Reducing toxicity of L-nucleosides with D-nucleosides
MXPA00012842A (es) * 1998-06-24 2004-06-22 Univ Emory Uso de 3'-azido-2',3'-didesoxiuridina en combinacion de drogas adicionales contra el vih para la manufactura de un medicamento para el tratamiento del vih.

Also Published As

Publication number Publication date
IL144382A (en) 2007-02-11
CA2360039C (en) 2009-11-24
KR100745408B1 (ko) 2007-08-02
DE60027691D1 (de) 2006-06-08
EP1143976B1 (en) 2006-05-03
EP1143976B9 (en) 2007-02-14
JP2002535278A (ja) 2002-10-22
RU2254133C2 (ru) 2005-06-20
MXPA01007359A (es) 2003-09-22
NO20013599D0 (no) 2001-07-20
WO2000043014A2 (en) 2000-07-27
NZ528156A (en) 2005-03-24
HK1040064A1 (en) 2002-05-24
EP1143976A2 (en) 2001-10-17
ES2263449T3 (es) 2006-12-16
PT1143976E (pt) 2006-09-29
PL198237B1 (pl) 2008-06-30
HK1040064B (zh) 2006-07-21
BR0007627A (pt) 2002-04-09
DK1143976T3 (da) 2006-09-04
WO2000043014A3 (en) 2000-11-30
DE60027691T2 (de) 2007-04-12
CN1337880A (zh) 2002-02-27
ATE324894T1 (de) 2006-06-15
ZA200105971B (en) 2002-10-21
AU781281B2 (en) 2005-05-12
IL144382A0 (en) 2002-05-23
WO2000043014A8 (en) 2001-01-18
KR20020068260A (ko) 2002-08-27
NO323586B1 (no) 2007-06-11
AU2627000A (en) 2000-08-07
CA2360039A1 (en) 2000-07-27
NO20013599L (no) 2001-09-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6194391B1 (en) 3′-azido-2′,3′-dideoxyuridine administration to treat HIV and related test protocol
US7635690B2 (en) HIV-1 mutations selected for by β-2′,3′-didehydro-2′,3′-dideoxy-5-fluorocytidine
AU2006325404B2 (en) Pharmaceutical combination comprising nucleotide and nucleoside reverse transcriptase inhibitors (such as tenofovir and lamivudine) in different parts of the dosage unit
JP2017533944A (ja) Ｔｌｒ阻害剤及びブルトンチロシンキナーゼ阻害剤の併用
CN101219148A (zh) 由β-2’,3’-二脱氢-2’,3’-二脱氧-5-氟胞苷选择的HIV-1突变
US7115584B2 (en) HIV-1 mutations selected for by β-2′,3′-didehydro-2′,3′-dideoxy-5-fluorocytidine
Yadav et al. Dolutegravir, second generation integrase inhibitor: A new hope for HIV patient
Morris-Natschke et al. Phospholipid analogs against HIV-1 infection and disease
JP2002538171A (ja) 抗ウイルス剤の医薬的組合せ
US20110053884A1 (en) Potent combinations of zidovudine and drugs that select for the k65r mutation in the hiv polymerase
TW201717926A (zh) 用於治療尤文氏家族腫瘤(ewing family tumors)的組成物及方法
EP1731155A2 (en) Beta-D-2', 3' -Didehydro-2',3' -Dideoxy-5-Fluorocydine for use in the treatment of HIV infections
Nikolopoulos et al. Antiretrovirals for HIV exposure prophylaxis
JP2004530700A (ja) Ａ１アデノシン及びｐ２ｘプリン受容体拮抗薬を使用する方法及び製剤
MX2008007776A (en) Pharmaceutical combination comprising nucleotide and nucleoside reverse transcriptase inhibitors (such as tenofovir and lamivudine) in different parts of the dosage unit

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Open date: 20080716