CN101186718A - 利用层层组装技术改性弹性蛋白的方法及产物 - Google Patents
利用层层组装技术改性弹性蛋白的方法及产物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101186718A CN101186718A CNA2007101503351A CN200710150335A CN101186718A CN 101186718 A CN101186718 A CN 101186718A CN A2007101503351 A CNA2007101503351 A CN A2007101503351A CN 200710150335 A CN200710150335 A CN 200710150335A CN 101186718 A CN101186718 A CN 101186718A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- elastin
- solution
- hyaluronic acid
- collagen
- assembling
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
本发明涉及一种利用层层组装技术改性弹性蛋白的方法及产物。所制得的改性弹性蛋白，是以弹性蛋白为基底材料，在弹性蛋白表面得到了规则的多层膜结构，弹性蛋白基底材料上组装的第一层物质为透明质酸，第二层为胶原蛋白，透明质酸和胶原蛋白交替组装到弹性蛋白基材表面，构成了规则的层状结构。通过层层组装方法改性过的弹性蛋白材料，亲水性能得到了显著的提高，胶原蛋白的引入使其生物相容性将会有明显的提高，多糖透明质酸的引入将赋予其特定的功能，从而为弹性蛋白在生物医用高分子材料的仿生合成、人工细胞外基质的研究中的应用奠定了基础，也为其在药物控制释放、组织工程中的应用提供理论依据。
Description
技术领域
本发明涉及改性天然蛋白质材料的方法及产物，尤其涉及一种利用层层组装技术改性弹性蛋白的方法及产物。
背景技术
弹性蛋白(elastin)是细胞外基质中弹性纤维的重要组成成分，主要功能是被动伸缩、赋予所在组织以伸缩性和可逆的变形能力，在经常受力而变形的器官，如肺、大动脉及皮肤中都有大量弹性蛋白，对维持这些器官的功能起重要作用。近年来，弹性蛋白以其良好的弹性和顺应性受到国内外的普遍重视，弹性蛋白及其衍生物基生物医用材料的研制和开发也成为生物医用材料中非常活跃的研究方向，然而由于弹性蛋白表面的亲水性差而极大的限制了其应用范围。
近年来，表面改性已成为传统材料转化为具有可设计的特定性能的新材料的最受欢迎的方法之一。已有学者用引发转移终止剂改性方法、原子自由基聚合反应改性方法等成功的改性了弹性蛋白材料，但这些方法改性过程中大多使用了或引入了有机药品，因而破坏了材料的生物相容性，本发明利用层层组装技术，成功的将透明质酸和胶原蛋白这两种细胞外基质交替成分组装到了弹性蛋白材料表面，在保留了弹性蛋白良好的力学性质的前提下，细胞外基质材料的引入将会提高其生物相容性，这种产物有望应用于人工细胞外基质材料和组织工程材料中。国内外未见层层组装技术用于弹性蛋白表面改性方面的研究报道。
发明内容
本发明目的在于不改变弹性蛋白结构和功能(弹性功能)的条件下，以弹性蛋白作为基底材料，利用层层自组装技术，将多糖透明质酸(HA)和细胞外基质蛋白胶原蛋白交替组装到弹性蛋白表面，对其进行表面改性，改性后弹性蛋白材料的亲水性得到了明显的改善，探索了弹性蛋白基材料的制备方法及其性能研究。
1.一种利用层层组装技术改性弹性蛋白的方法，其特征是步骤如下：
(1)配制透明质酸溶液和胶原蛋白溶液；
(2)将弹性蛋白浸入到盐酸中使其表面带有正电荷，用去离子水冲洗掉表面吸附的盐酸，真空烘箱干燥；
(3)将用盐酸处理过的弹性蛋白浸入到(1)配制的透明质酸溶液中，使透明质酸吸附到弹性蛋白表面，得到组装一层的弹性蛋白材料；
(4)将(3)中组装一层的弹性蛋白浸入(1)配制的胶原蛋白溶液中，使胶原蛋白吸附到弹性蛋白上的透明质酸表面，得到组装二层的弹性蛋白材料；
(5)将(4)得到的组装二层的弹性蛋白材料按照(3)、(4)步骤交替浸入到透明质酸和胶原蛋白溶液中，得到组装多层的弹性蛋白材料。
所述的步骤(1)所用透明质酸分子量为600000-1600000，透明质酸溶于0.1-0.3mol/LNaCl溶液中，透明质酸浓度为1.0-3.0mg/ml，溶液pH值为2-6；所用胶原蛋白型号为I、II、III、V等，胶原蛋白溶于0.1-0.3mol/L醋酸0.1-0.3mol/L NaCl的缓冲溶液中，胶原蛋白浓度为1.0-3.0mg/ml，溶液pH值为1-5。
所述的步骤(2)弹性蛋白基底材料为牛颈韧带分别经丙酮、乙醚浸泡脱脂，NaOH溶液煮沸，乙醇回流得到；所用试剂为丙酮、乙醚、氢氧化钠和无水乙醇，丙酮、乙醚浸泡时间为6-12h，氢氧化钠浓度为0.1-0.5mol/L，反应时间为2-6h，无水乙醇回流时间为1-3h。
所述的所述步骤(2)所用盐酸pH值为1-5，反应时间为10-30min，真空烘箱干燥时间为30-60min。
所述的步骤(3)弹性蛋白每次浸入透明质酸溶液时间为15-35min，所述取出后冲洗溶液为0.1-0.3mol/L NaCl(pH＝2-6)溶液和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30-40℃，干燥时间为30-60min。
所述的步骤(4)弹性蛋白浸入胶原蛋白溶液时间为15-35min，取出后冲洗溶液为0.1-0.3mol/L醋酸0.1-0.3mol/L NaCl的缓冲溶液(pH＝1-5)和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30-40℃，干燥时间为30-60min。
利用上述方法所制得的改性弹性蛋白，是以弹性蛋白为基底材料，在弹性蛋白表面得到了规则的多层膜结构，弹性蛋白基底材料上组装的第一层物质为透明质酸，第二层为胶原蛋白，透明质酸和胶原蛋白交替组装到弹性蛋白基材表面，构成了规则的层状结构。
所述的层数分别为2～14层，每层膜厚度在10-20nm之间。
扫描电镜(SEM)、衰减全反射-紫外/可见光谱(ATR-UV-Vis Spectroscopy)和动态接触角对改性弹性蛋白材料进行了表征。结果表明：透明质酸和胶原蛋白成功的交替组装到了弹性蛋白材料表面；SEM照片显示弹性蛋白材料表面随着组装层数的增加而逐渐变得光滑如附图1，2所示，组装7个双层后从材料截面可以看到明显的层状结构，如附图3所示，每层厚度在10nm-20nm之间；衰减全反射-紫外/可见光谱图显示随着组装层数的增加吸光度值线性降低，这反应了组装层的厚度比较均匀，如附图4所示；动态接触角显示组装7个双层后，前进角由121.76°降低到了60°左右，这表明组装后弹性蛋白膜的表面亲水性得到了显著的改善，如附图5所示。
通过层层组装方法改性过的弹性蛋白材料，亲水性能得到了显著的提高，胶原蛋白的引入使其生物相容性将会有明显的提高，多糖透明质酸的引入将赋予其特定的功能，从而为弹性蛋白在生物医用高分子材料的仿生合成、人工细胞外基质的研究中的应用奠定了基础，也为其在药物控制释放、组织工程中的应用提供理论依据。
附图说明
图1：未组装弹性蛋白基底材料表面的扫描电镜照片(1000倍)；
图2：组装了14层的弹性蛋白基底材料表面的扫描电镜照片(1000倍)；
图3：为组装了14层的弹性蛋白基底材料的截面扫描电镜照片(5000倍)；
图4：分别为组装0-7个双层的弹性蛋白材料的衰减全反射-紫外/可见光谱图和0-7个双层的弹性蛋白材料在256nm和300nm处的紫外吸收变化图；
图5：为组装0-7个双层的弹性蛋白材料的动态接触角变化图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式进一步说明本发明的技术方案：
实施例1
(1)将分子量为600000的透明质酸溶于0.1mol/L NaCl溶液中，透明质酸浓度为1.0mg/ml，溶液pH值为2；将胶原蛋白(I型)溶于0.1mol/L醋酸0.1mol/L NaCl的缓冲溶液中，胶原蛋白浓度为1.0mg/ml，溶液pH值为1。
(2)将牛颈韧带分别经丙酮、乙醚浸泡6h脱脂，0.1mol/L NaOH溶液煮沸2h，无水乙醇回流1h得到弹性蛋白基底材料。将弹性蛋白浸入pH值为1盐酸中10min，取出去离子水洗掉材料表面吸附的盐酸，真空烘箱干燥为30min。
(3)将用盐酸处理过的弹性蛋白浸入到(1)配制的透明质酸溶液中15min，取出后冲洗溶液为0.1mol/L NaCl(pH＝2)溶液和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30℃，干燥时间为30min；使透明质酸吸附到弹性蛋白表面，得到组装一层的弹性蛋白材料。
(4)将(3)中组装一层的弹性蛋白浸入(1)配制的胶原蛋白溶液中15min，取出后冲洗溶液为0.1mol/L醋酸0.1mol/L NaCl的缓冲溶液(pH＝1)和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30℃，干燥时间为30min。使胶原蛋白吸附到弹性蛋白上的透明质酸表面，得到组装二层的弹性蛋白材料。每层厚度为10-20nm。
实施例2
(1)将分子量为600000的透明质酸溶于0.1mol/L NaCl溶液中，透明质酸盐浓度为1.0mg/ml，溶液pH值为3；将胶原蛋白(II型)溶于0.1mol/L醋酸0.1mol/L NaCl的缓冲溶液中，胶原蛋白浓度为1.0mg/ml，溶液pH值为2。
(2)将牛颈韧带分别经丙酮、乙醚浸泡8h脱脂，0.1mol/L NaOH溶液煮沸2h，无水乙醇回流1h得到弹性蛋白基底材料。将弹性蛋白浸入pH值为2盐酸中10min，取出去离子水洗掉材料表面吸附的盐酸，真空烘箱干燥为30min。
(3)将用盐酸处理过的弹性蛋白浸入到(1)配制的透明质酸溶液中15min，取出后冲洗溶液为0.1mol/L NaCl(pH＝3)溶液和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30℃，干燥时间为30min；使透明质酸吸附到弹性蛋白表面，得到组装一层的弹性蛋白材料。
(4)将(3)中组装一层的弹性蛋白浸入(1)配制的胶原蛋白溶液中15min，取出后冲洗溶液为0.1mol/L醋酸0.1mol/L NaCl的缓冲溶液(pH＝2)和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30℃，干燥时间为30min。使胶原蛋白吸附到弹性蛋白上的透明质酸表面，得到组装二层的弹性蛋白材料。
(5)将(4)得到的组装二层的弹性蛋白材料按照(3)、(4)步骤交替浸入到透明质酸和胶原蛋白溶液中，得到组装4层的弹性蛋白材料。每层厚度为10-20nm。
实施例3
(1)将分子量为800000的透明质酸溶于0.1mol/L NaCl溶液中，透明质酸浓度为1.0mg/ml，溶液pH值为4；将胶原蛋白(III型)溶于0.1mol/L醋酸0.1mol/L NaCl的缓冲溶液中，胶原蛋白浓度为1.0mg/ml，溶液pH值为3。
(2)将牛颈韧带分别经丙酮、乙醚浸泡10h脱脂，0.1mol/L NaOH溶液煮沸2h，无水乙醇回流1h得到弹性蛋白基底材料。将弹性蛋白浸入pH值为2盐酸中10min，取出去离子水洗掉材料表面吸附的盐酸，真空烘箱干燥为30min。
(3)将用盐酸处理过的弹性蛋白浸入到(1)配制的透明质酸溶液中15min，取出后冲洗溶液为0.1mol/L NaCl(pH＝4)溶液和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30℃，干燥时间为30min；使透明质酸吸附到弹性蛋白表面，得到组装一层的弹性蛋白材料。
(4)将(3)中组装一层的弹性蛋白浸入(1)配制的胶原蛋白溶液中15min，取出后冲洗溶液为0.1mol/L醋酸0.1mol/L NaCl的缓冲溶液(pH＝3)和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30℃，干燥时间为30min。使胶原蛋白吸附到弹性蛋白上的透明质酸表面，得到组装二层的弹性蛋白材料。
(5)将(4)得到的组装二层的弹性蛋白材料按照(3)、(4)步骤交替浸入到透明质酸和胶原蛋白溶液中，得到组装6层的弹性蛋白材料。每层厚度为10-20nm。
实施例4
(1)将分子量为800000透明质酸溶于0.1mol/L NaCl溶液中，透明质酸浓度为1.0mg/ml，溶液pH值为5；将胶原蛋白(V型)溶于0.1mol/L醋酸0.1mol/LNaCl的缓冲溶液中，胶原蛋白浓度为1.0mg/ml，溶液pH值为4。
(2)将牛颈韧带分别经丙酮、乙醚浸泡12h脱脂，0.1mol/L NaOH溶液煮沸2h，无水乙醇回流1h得到弹性蛋白基底材料。将弹性蛋白浸入pH值为2盐酸中10min，取出去离子水洗掉材料表面吸附的盐酸，真空烘箱干燥为30min。
(3)将用盐酸处理过的弹性蛋白浸入到(1)配制的透明质酸溶液中15min，取出后冲洗溶液为0.1mol/L NaCl(pH＝5)溶液和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30℃，干燥时间为30min；使透明质酸吸附到弹性蛋白表面，得到组装一层的弹性蛋白材料。
(4)将(3)中组装一层的弹性蛋白浸入(1)配制的胶原蛋白溶液中15min，取出后冲洗溶液为0.1mol/L醋酸0.1mol/L NaCl的缓冲溶液(pH＝4)和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30℃，干燥时间为30min。使胶原蛋白吸附到弹性蛋白上的透明质酸表面，得到组装二层的弹性蛋白材料。
(5)将(4)得到的组装二层的弹性蛋白材料按照(3)、(4)步骤交替浸入到透明质酸和胶原蛋白溶液中，得到组装8层的弹性蛋白材料。每层厚度为10-20nm。
实施例5
(1)将分子量为100000的透明质酸溶于0.1mol/L NaCl溶液中，透明质酸浓度为1.0mg/ml，溶液pH值为6；将胶原蛋白(I型)溶于0.1mol/L醋酸0.1mol/L NaCl的缓冲溶液中，胶原蛋白浓度为1.0mg/ml，溶液pH值为5。
(2)将牛颈韧带分别经丙酮、乙醚浸泡12h脱脂，0.1mol/L NaOH溶液煮沸2h，无水乙醇回流1h得到弹性蛋白基底材料。将弹性蛋白浸入pH值为2盐酸中10min，取出去离子水洗掉材料表面吸附的盐酸，真空烘箱干燥为30min。
(3)将用盐酸处理过的弹性蛋白浸入到(1)配制的透明质酸溶液中15min，取出后冲洗溶液为0.1mol/L NaCl(pH＝6)溶液和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30℃，干燥时间为30min；使透明质酸吸附到弹性蛋白表面，得到组装一层的弹性蛋白材料。
(4)将(3)中组装一层的弹性蛋白浸入(1)配制的胶原蛋白溶液中15min，取出后冲洗溶液为0.1mol/L醋酸0.1mol/L NaCl的缓冲溶液(pH＝5)和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30℃，干燥时间为30min。使胶原蛋白吸附到弹性蛋白上的透明质酸表面，得到组装二层的弹性蛋白材料。
(5)将(4)得到的组装二层的弹性蛋白材料按照(3)、(4)步骤交替浸入到透明质酸和胶原蛋白溶液中，得到组装10层的弹性蛋白材料。每层厚度为10-20nm。
实施例6
(1)将分子量为100000透明质酸溶于0.15mol/L NaCl溶液中，透明质酸浓度为1.5mg/ml，溶液pH值为2；将胶原蛋白(II型)溶于0.15mol/L醋酸0.15mol/L NaCl的缓冲溶液中，胶原蛋白浓度为1.5mg/ml，溶液pH值为1。
(2)将牛颈韧带分别经丙酮、乙醚浸泡10h脱脂，0.1mol/L NaOH溶液煮沸3h，无水乙醇回流2h得到弹性蛋白基底材料。将弹性蛋白浸入pH值为1盐酸中10min，取出去离子水洗掉材料表面吸附的盐酸，真空烘箱干燥为30min。
(3)将用盐酸处理过的弹性蛋白浸入到(1)配制的透明质酸溶液中20min，取出后冲洗溶液为0.15mol/L NaCl(pH＝2)溶液和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30℃，干燥时间为30min；使透明质酸吸附到弹性蛋白表面，得到组装一层的弹性蛋白材料。
(4)将(3)中组装一层的弹性蛋白浸入(1)配制的胶原蛋白溶液中15min，取出后冲洗溶液为0.15mol/L醋酸0.15mol/L NaCl的缓冲溶液(pH＝1)和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30℃，干燥时间为30min。使胶原蛋白吸附到弹性蛋白上的透明质酸表面，得到组装二层的弹性蛋白材料。
(5)将(4)得到的组装二层的弹性蛋白材料按照(3)、(4)步骤交替浸入到透明质酸和胶原蛋白溶液中，得到组装12层的弹性蛋白材料。每层厚度为10-20nm。
实施例7
(1)将分子量为1200000透明质酸溶于0.2mol/L NaCl溶液中，透明质酸浓度为2.0mg/ml，溶液pH值为2；将胶原蛋白(III型)溶于0.2mol/L醋酸0.2mol/L NaCl的缓冲溶液中，胶原蛋白浓度为2.0mg/ml，溶液pH值为1。
(2)将牛颈韧带分别经丙酮、乙醚浸泡10h脱脂，0.2mol/L NaOH溶液煮沸3h，无水乙醇回流2h得到弹性蛋白基底材料。将弹性蛋白浸入pH值为1盐酸中10min，取出去离子水洗掉材料表面吸附的盐酸，真空烘箱干燥为30min。
(3)将用盐酸处理过的弹性蛋白浸入到(1)配制的透明质酸溶液中15min，取出后冲洗溶液为0.2mol/L NaCl(pH＝2)溶液和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30℃，干燥时间为30min；使透明质酸吸附到弹性蛋白表面，得到组装一层的弹性蛋白材料。
(4)将(3)中组装一层的弹性蛋白浸入(1)配制的胶原蛋白溶液中15min，取出后冲洗溶液为0.2mol/L醋酸0.2mol/L NaCl的缓冲溶液(pH＝1)和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30℃，干燥时间为30min。使胶原蛋白吸附到弹性蛋白上的透明质酸表面，得到组装二层的弹性蛋白材料。
(5)将(4)得到的组装二层的弹性蛋白材料按照(3)、(4)步骤交替浸入到透明质酸和胶原蛋白溶液中，得到组装14层的弹性蛋白材料。每层厚度为10-20nm。
实施例8
(1)将分子量为1200000的透明质酸溶于0.25mol/L NaCl溶液中，透明质酸浓度为2.5mg/ml，溶液pH值为2；将胶原蛋白(V型)溶于0.25mol/L醋酸0.25mol/L NaCl的缓冲溶液中，胶原蛋白浓度为2.5mg/ml，溶液pH值为1。
(2)将牛颈韧带分别经丙酮、乙醚浸泡10h脱脂，0.25mol/L NaOH溶液煮沸3h，无水乙醇回流2h得到弹性蛋白基底材料。将弹性蛋白浸入pH值为1盐酸中10min，取出去离子水洗掉材料表面吸附的盐酸，真空烘箱干燥为30min。
(3)将用盐酸处理过的弹性蛋白浸入到(1)配制的透明质酸溶液中15min，取出后冲洗溶液为0.25mol/L NaCl(pH＝2)溶液和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30℃，干燥时间为30min；使透明质酸吸附到弹性蛋白表面，得到组装一层的弹性蛋白材料。
(4)将(3)中组装一层的弹性蛋白浸入(1)配制的胶原蛋白溶液中15min，取出后冲洗溶液为0.25mol/L醋酸0.25mol/L NaCl的缓冲溶液(pH＝1)和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30℃，干燥时间为30min。使胶原蛋白吸附到弹性蛋白上的透明质酸表面，得到组装二层的弹性蛋白材料。
(5)将(4)得到的组装二层的弹性蛋白材料按照(3)、(4)步骤交替浸入到透明质酸和胶原蛋白溶液中，得到组装14层的弹性蛋白材料。每层厚度为10-20nm。
实施例9
(1)将分子量为1400000的透明质酸溶于0.3mol/L NaCl溶液中，透明质酸浓度为3.0mg/ml，溶液pH值为2；将胶原蛋白(I型)溶于0.3mol/L醋酸0.3mol/L NaCl的缓冲溶液中，胶原蛋白浓度为3.0mg/ml，溶液pH值为1。
(2)将牛颈韧带分别经丙酮、乙醚浸泡10h脱脂，0.3mol/L NaOH溶液煮沸3h，无水乙醇回流2h得到弹性蛋白基底材料。将弹性蛋白浸入pH值为1盐酸中20min，取出去离子水洗掉材料表面吸附的盐酸，真空烘箱干燥为45min。
(3)将用盐酸处理过的弹性蛋白浸入到(1)配制的透明质酸溶液中20min，取出后冲洗溶液为0.3mol/L NaCl(pH＝2)溶液和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为35℃，干燥时间为45min；使透明质酸吸附到弹性蛋白表面，得到组装一层的弹性蛋白材料。
(4)将(3)中组装一层的弹性蛋白浸入(1)配制的胶原蛋白溶液中20min，取出后冲洗溶液为0.3mol/L醋酸0.3mol/L NaCl的缓冲溶液(pH＝1)和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为35℃，干燥时间为45min。使胶原蛋白吸附到弹性蛋白上的透明质酸表面，得到组装二层的弹性蛋白材料。
(5)将(4)得到的组装二层的弹性蛋白材料按照(3)、(4)步骤交替浸入到透明质酸和胶原蛋白溶液中，得到组装14层的弹性蛋白材料。
实施例10
(1)将分子量为1400000的透明质酸溶于0.2mol/L NaCl溶液中，透明质酸浓度为2.0mg/ml，溶液pH值为2；将胶原蛋白(II型)溶于0.2mol/L醋酸0.2mol/L NaCl的缓冲溶液中，胶原蛋白浓度为2.0mg/ml，溶液pH值为1。
(2)将牛颈韧带分别经丙酮、乙醚浸泡10h脱脂，0.2mol/L NaOH溶液煮沸4h，无水乙醇回流2h得到弹性蛋白基底材料。将弹性蛋白浸入pH值为1盐酸中30min，取出去离子水洗掉材料表面吸附的盐酸，真空烘箱干燥为60min。
(3)将用盐酸处理过的弹性蛋白浸入到(1)配制的透明质酸溶液中30min，取出后冲洗溶液为0.2mol/L NaCl(pH＝2)溶液和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为40℃，干燥时间为60min；使透明质酸吸附到弹性蛋白表面，得到组装一层的弹性蛋白材料。
(4)将(3)中组装一层的弹性蛋白浸入(1)配制的胶原蛋白溶液中30min，取出后冲洗溶液为0.2mol/L醋酸0.2mol/L NaCl的缓冲溶液(pH＝1)和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为40℃，干燥时间为60min。使胶原蛋白吸附到弹性蛋白上的透明质酸表面，得到组装二层的弹性蛋白材料。
(5)将(4)得到的组装二层的弹性蛋白材料按照(3)、(4)步骤交替浸入到透明质酸和胶原蛋白溶液中，得到组装14层的弹性蛋白材料。每层厚度为10-20nm。
本发明提出利用层层组装技术改性弹性蛋白的方法及产物，已通过较佳实施例子进行了描述，相关技术人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的结构和技术方法进行改动或适当变更与组合，来实现本发明技术。特别需要指出的是，所有相类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，他们都被视为包括在本发明精神、范围和内容中。
Claims (9)
1.一种利用层层组装技术改性弹性蛋白的方法，其特征是步骤如下：
(1)配制透明质酸溶液和胶原蛋白溶液；
(2)将弹性蛋白浸入到盐酸中使其表面带有正电荷，用去离子水冲洗掉表面吸附的盐酸，真空烘箱干燥；
(3)将用盐酸处理过的弹性蛋白浸入到(1)配制的透明质酸溶液中，使透明质酸吸附到弹性蛋白表面，得到组装一层的弹性蛋白材料；
(4)将(3)中组装一层的弹性蛋白浸入(1)配制的胶原蛋白溶液中，使胶原蛋白吸附到弹性蛋白上的透明质酸表面，得到组装二层的弹性蛋白材料；
(5)将(4)得到的组装二层的弹性蛋白材料按照(3)、(4)步骤交替浸入到透明质酸和胶原蛋白溶液中，得到组装多层的弹性蛋白材料。
2.如权利要求1所述的利用层层组装技术改性弹性蛋白的方法，其特征是所述的透明质酸为分子量600000-1600000；胶原蛋白型号为I、II、III或V。
3.如权利要求1所述的利用层层组装技术改性弹性蛋白的方法，其特征是所述的步骤(1)配制透明质酸溶液是将透明质酸溶于0.1-0.3mol/L NaCl溶液中，透明质酸浓度为1.0-3.0mg/ml，溶液pH值为2-6；所述胶原蛋白溶液是胶原蛋白溶于0.1-0.3mol/L醋酸0.1-0.3mol/L NaCl的缓冲溶液中，胶原蛋白浓度为1.0-3.0mg/ml，溶液pH值为1-5。
4.如权利要求1所述的利用层层组装技术改性弹性蛋白的方法，其特征是所述的步骤(2)弹性蛋白是弹性蛋白基底材料为牛颈韧带分别经丙酮、乙醚浸泡脱脂，NaOH溶液煮沸，乙醇回流得到，丙酮、乙醚浸泡时间为6-12h，氢氧化钠浓度为0.1-0.5mol/L，反应时间为2-6h，无水乙醇回流时间为1-3h。
5.如权利要求1所述的利用层层组装技术改性弹性蛋白的方法，其特征是所述的所述步骤(2)所用盐酸pH值为1-5，反应时间为10-30min，真空烘箱干燥时间为30-60min。
6.如权利要求1所述的利用层层组装技术改性弹性蛋白的方法，其特征是所述的步骤(3)弹性蛋白每次浸入透明质酸溶液时间为15-35min，取出后冲洗溶液为pH＝2-6的0.1-0.3mol/L NaCl溶液和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30-40℃，干燥时间为30-60min。
7.如权利要求1所述的利用层层组装技术改性弹性蛋白的方法，其特征是所述的步骤(4)弹性蛋白浸入胶原蛋白溶液时间为15-35min，取出后冲洗溶液为pH＝1-5的0.1-0.3mol/L醋酸0.1-0.3mol/L NaCl的缓冲溶液和去离子水，冲洗掉附着在材料表面的离子，真空烘箱中干燥温度为30-40℃，干燥时间为30-60min。
8.利用权利要求1的方法所制得的改性弹性蛋白，其特征是所述的改性弹性蛋白是以弹性蛋白为基底材料，在弹性蛋白表面得到了规则的多层膜结构，弹性蛋白基底材料上组装的第一层物质为透明质酸，第二层为胶原蛋白，透明质酸和胶原蛋白交替组装到弹性蛋白基材表面，构成了规则的层状结构。
9.如权利要求8所述的利用层层组装技术改性弹性蛋白，其特征是所述的层数分别为2～14层，每层膜厚度在10-20nm之间。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2007101503351A CN101186718B (zh) | 2007-11-22 | 2007-11-22 | 利用层层组装技术改性弹性蛋白的方法及产物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2007101503351A CN101186718B (zh) | 2007-11-22 | 2007-11-22 | 利用层层组装技术改性弹性蛋白的方法及产物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101186718A true CN101186718A (zh) | 2008-05-28 |
| CN101186718B CN101186718B (zh) | 2010-07-14 |
Family
ID=39479355
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2007101503351A Expired - Fee Related CN101186718B (zh) | 2007-11-22 | 2007-11-22 | 利用层层组装技术改性弹性蛋白的方法及产物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101186718B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101862475B (zh) * | 2009-10-10 | 2013-08-07 | 广州市红十字会医院 | 一种ⅱ型胶原透明质酸复合海绵支架及其用途 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100532394C (zh) * | 2007-01-23 | 2009-08-26 | 天津大学 | 一种利用原子转移自由基聚合反应改性弹性蛋白的方法 |
| CN100532393C (zh) * | 2007-01-23 | 2009-08-26 | 天津大学 | 一种利用引发转移终止剂改性弹性蛋白的方法 |
-
2007
- 2007-11-22 CN CN2007101503351A patent/CN101186718B/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101862475B (zh) * | 2009-10-10 | 2013-08-07 | 广州市红十字会医院 | 一种ⅱ型胶原透明质酸复合海绵支架及其用途 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101186718B (zh) | 2010-07-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Guan et al. | Bio-inspired lotus-fiber-like spiral hydrogel bacterial cellulose fibers | |
| Yao et al. | Design strategies for adhesive hydrogels with natural antibacterial agents as wound dressings: Status and trends | |
| ES2375801T3 (es) | Col�?geno y �?cido hialurónico reticulado y sus usos. | |
| CN108404209B (zh) | 一种胶原-丝素共组装海绵材料、共组装人工皮肤及其制备方法 | |
| CN108912352A (zh) | 一种抗菌粘附可注射水凝胶敷料及其制备方法和应用 | |
| CN102973985B (zh) | 一种具备疏密结构的多孔细菌纤维素皮肤修复材料及其制备方法 | |
| CN105031740B (zh) | 一种具有防水透气功能的仿生人工皮肤及其制备方法 | |
| CN103143059B (zh) | 一种具有多级孔径结构的纳米复合骨缺损修复支架 | |
| CN105169475A (zh) | 一种含有石墨烯、羟基磷灰石和丝素的骨仿生材料的制备方法 | |
| CN201664349U (zh) | 一种新型复合疝和体壁修补片 | |
| Wang et al. | Salinity power generation based biocompatible bacterial cellulose/MXene membrane for biological power source | |
| CN103059333A (zh) | 利用植物蛋白及其水解物制备复水性细菌纤维素膜的方法 | |
| Chen et al. | Structure, extraction, processing, and applications of collagen as an ideal component for biomaterials-a review | |
| CN110152065A (zh) | 一种仿生微纳叠层疏水生物瓣膜及其制备方法 | |
| CN105688288A (zh) | 胶原基复合口腔修复膜材料及其制备方法 | |
| CN103083112B (zh) | 一种具备疏密结构的细菌纤维素皮肤修复材料及其制备方法 | |
| ITMI20131193A1 (it) | Acido ialuronico reticolato, processo per la sua preparazione ed applicazioni in ambito estetico | |
| CN101186718B (zh) | 利用层层组装技术改性弹性蛋白的方法及产物 | |
| CN114276567A (zh) | 一种用于组织工程皮肤构建的仿生水凝胶支架及其制备方法 | |
| CN111135154B (zh) | 一种抗衰老的细菌纤维素膜及其制备方法 | |
| CN115068684A (zh) | 用于糖尿病慢性创面修复的载姜黄素水凝胶及其制备方法 | |
| Luo et al. | Preparation and evaluation of bacterial nanocellulose/hyaluronic acid composite artificial cornea for application of corneal transplantation | |
| Li et al. | Self‐Healing Hydrogel Bioelectronics | |
| Shahriari-Khalaji et al. | Application of bacterial nanocellulose in cancer drug delivery: A review | |
| Zhang et al. | Double-network hydrogels for biomaterials: Structure-property relationships and drug delivery |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20100714 Termination date: 20101122 |