CN101167783A - 杜仲仁总苷在制备治疗骨质疏松病药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
有效成分杜仲仁总苷在制备治疗骨质疏松病药物中的应用。有效成分用杜仲仁总苷制备治疗骨质疏松病药物以软胶囊剂和硬胶囊剂的形式来使用，软胶囊剂按杜仲仁总苷1重量份、沙棘籽油或食用植物油或聚乙二醇400为0.5～8重量份配比采用常规软胶囊的制备方法制成，硬胶囊剂将杜仲仁总苷装入胶囊内制成。杜仲仁总苷经药理试验，杜仲仁总苷不影响动物体重增长，对脏器指数未见明显影响；杜仲仁总苷使骨密度显著升高，对股骨骨折应力显著增加，对股骨破碎应力显著升高，对维甲酸引起的骨长度减少有增加作用，对股骨重量降低有升高作用；杜仲仁总苷对血清雌激素水平未见明显影响；杜仲仁总苷有良好的抗维甲酸引起的大鼠骨质疏松作 用。
Description
技术领域
本发明属于含有原料或其与不明结构之反应产物的医用配制品技术领域，具体涉及到来源于植物的材料。
背景技术
骨质疏松(Osteoporosis)是由于骨量减少，骨的微观结构退化，致使骨的脆性增加，并且易于发生骨折的一种全身性骨骼疾病。绝经期妇女尤为突出，是当前疾病谱的前十位。随着世界人口老龄化趋势的加剧，骨质疏松性骨折作为严重的并发症，对老年人健康的影响，日益引起人们的重视。骨质疏松症是发达国家最重要的公共健康问题之一，也是发展中国家非常突出的问题。骨质疏松症是与高血压、糖尿病、癌症列为21世纪主要慢性疾病，严重影响人类健康。随着人口日趋老龄化，骨质疏松已经成为一种常见病，美国发病率10％，有2000万以上人患骨质疏松，我国没有精确统计，若以发病率10％计，则中国有1.4亿人之多。骨质疏松主要威胁中老年人健康的一种常见代谢性骨病，表现骨含量减少，骨微结构改变，骨折危险性增加，轻微外伤和碰撞即可致骨折。中医认为骨质疏松属于腰痛虚劳，骨痿之范畴。临床表现腰背疼痛、身长缩短、驼背、骨折等，给患者肉体和精神上带来极大痛苦，同时也为社会带来巨大负担。
骨质疏松是人体发育不同阶段的常见病。多见于14岁以前和40岁以后，14岁以前属于骨骼发育中成骨物质不能及时供应或吸收利用不良。40岁以后，主要由于破骨细胞活跃，人体成骨激素如α-维生素D缺失等。尤其是中年妇女50岁以后，由于雌激素的快速减少，引起更年期症状，其中的腰痛、腿痛就是骨质疏松所引起。
目前临床上用于治疗骨质疏松的药物很多，主要是激素疗法和补钙。如尼尔雌醇、雌二醇、α-维生素D、维生素D以及氯化钙、碳酸钙、葡萄糖酸钙等。用于治疗骨质疏松的中成药主要有骨宝灵胶囊、大豆异黄酮、染料木素等。激素治疗易引起毒副作用，单纯补钙不易吸收，还能引起高钙血症。治疗骨质疏松的中成药的主要缺点是治疗疗程很长，疗效不十分明显。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服上述治疗骨质疏松药物的缺点，为用有效成分杜仲仁总苷制备的药物提供一种新用途。
解决上述技术问题所采用的技术方案是：有效成分杜仲仁总苷在制备治疗骨质疏松病药物中的应用。
杜仲仁总苷在制备治疗妇女更年期药物中的应用已在专利号为200410026188.3、发明名称为《一种治疗妇女更年期综合症的胶囊剂》的发明专利中公开。杜仲仁总苷中的桃叶珊瑚苷(Aucubin)含量不低于50％，桃叶珊瑚苷为已知的化合物，分子式为C15H22O9。
有效成分用杜仲仁总苷制备治疗骨质疏松病药物以胶囊剂的形式来使用；所述的胶囊剂包括软胶囊剂和硬胶囊剂。
上述软胶囊剂中含有沙棘籽油或食用植物油或聚乙二醇400辅料，食用植物油包括菜籽油或花生油或豆油或葵花籽油或芝麻油，无水碳酸钠用于吸收沙棘籽油或食用植物油或聚乙二醇400中的水份。按下述重量份配比：
杜仲仁总苷 2份
沙棘籽油或食用植物油或聚乙二醇400 0.5～8份
制备上述药物的优选重量份配比是：
杜仲仁总苷 2份
沙棘籽油或食用植物油或聚乙二醇400 2～6份
制备上述药物的最佳重量份配比是：
杜仲仁总苷 2份
沙棘籽油或食用植物油或聚乙二醇400 4份
硬胶囊剂的胶囊中只装有活性成分杜仲仁总苷。
制备上述药物配比中的杜仲仁总苷中的桃叶珊瑚苷含量不低于50％。
上述的软胶囊剂和硬胶囊剂可按照软胶囊剂和硬胶囊剂常规的制备工艺制成。在每粒软胶囊剂和硬胶囊剂中杜仲仁总苷的含量(桃叶珊瑚苷计)为100mg。
有效成分杜仲仁总苷作为治疗骨质疏松病的口服药物中的应用，所制备成软胶囊剂和硬胶囊剂药物，成人口服，每天口服两次，每次1～3粒，饭前或饭后服用，30天为一个疗程，用药3～5个疗程，儿童酌情减量。
用杜仲籽粕提取杜仲仁总苷的一种提取方法为：将杜仲籽粕去油后粉碎成粗粉，加5倍量的乙醇，回流提取2次，第一次2小时，第二次1小时，合并两次醇提液，回收乙醇至杜仲籽粕量的1/10，放置，至有结晶性沉淀生成，过滤，抽干，置烘箱中60℃烘4～8小时，使含水量少于3％，制成杜仲仁总苷，密封保存备用。
用杜仲籽粕提取杜仲仁总苷的另外一种方法为：将杜仲籽粕去油后粉碎成粗粉，加5倍量的甲醇，回流提取2次，每次1小时，合并两次甲醇提液，回收甲醇至杜仲籽粕量的1/10，放置，至有结晶性沉淀生成，过滤，抽干，置烘箱中60℃烘4～8小时，使含水量低于3％，制成杜仲仁总苷，密封保存备用。
用杜仲籽粕提取杜仲仁总苷的还有一种方法为：将杜仲籽粕去油后粉碎成粗粉，加7倍量的无水乙醇，用带干燥剂的回流提取装置提取3次，每次30钟，合并提取液，回收乙醇，在残留物中加与残留物等量的丙酮，沉淀两次，每次静置30分钟，过滤，挥去丙酮，在置带鼓风机的烘箱中60℃以下烘8小时，使含水量低于3％，制成杜仲仁总苷，密封保存备用。
杜仲仁总苷中水含量测定：采用烘干法测定。称取已制备的杜仲仁总苷2g，置烘箱中80℃烘至恒重，计算含水量。
桃叶珊瑚苷的含量测定：采用高效液相色谱法进行测定。
色谱条件与系统实用性试验：以十八烷基硅烷键合硅烷为填充剂，乙腈-水(3∶97体积比)的混合液为流动相，检测波长为206nm。按桃叶珊瑚苷的色谱峰计算，理论板数不低于1000。
对照品溶液的制备：精密称取在50℃减压干燥至恒重的桃叶珊瑚苷对照品，加30％的甲醇溶解，制成每1mL含40μg的微孔滤膜滤过，取滤液即得。
测定法：分别取对照品溶液和供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定。
杜仲籽粕提取物中含杜仲仁总苷(以桃叶珊瑚苷计)，应不低于50％。
从中药杜仲籽中提取的杜仲仁总苷主要有效成分桃叶珊瑚苷部位，制备的杜仲仁总苷经药理试验，杜仲仁总苷不影响动物体重增长，对脏器指数未见明显影响；杜仲仁总苷使骨密度显著升高，对股骨骨折应力显著增加，对股骨破碎应力显著升高，对维甲酸引起的骨长度减少有增加作用，对股骨重量降低有升高作用；杜仲仁总苷对血清雌激素水平未见明显影响；杜仲仁总苷有良好的抗维甲酸引起的大鼠骨质疏松作用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。
实施例1
以生产1000粒软胶囊剂为例所用的中药原料和辅料及其重量配比为：
杜仲仁总苷 200g
沙棘籽油 400g
上述配比中杜仲仁总苷中的桃叶珊瑚苷含量不低于50％。
其制备方法如下：
取测定含量的杜仲仁总苷200g，，加沙棘籽油400g，加入无水碳酸钠1g，无水碳酸钠用于吸收沙棘籽油中的水份，混均，研磨，过100目筛，在软胶囊机上加料，制成1000粒，每粒含杜仲仁总苷(以桃叶珊瑚苷计)100mg。
实施例2
以生产1000粒软胶囊剂为例所用的中药原料和辅料及其重量配比为：
杜仲仁总苷 200g
沙棘籽油 50g
上述配比中杜仲仁总苷中的桃叶珊瑚苷含量不低于50％。
其制备方法与实施例1相同，用软胶囊机制成1000粒，每粒含杜仲仁总苷(以桃叶珊瑚苷计)100mg。
实施例3
以生产1000粒软胶囊剂为例所用的中药原料和辅料及其重量配比为：
杜仲仁总苷 200g
沙棘籽油 800g
上述配比中杜仲仁总苷中的桃叶珊瑚苷含量不低于50％。
其制备方法与实施例1相同，用软胶囊机制成1000粒，每粒含杜仲仁总苷(以桃叶珊瑚苷计)100mg。
实施例4
以生产1000粒软胶囊剂为例所用的中药原料和辅料及其重量配比为：
在以上实施例1～3中的沙棘籽油可用菜籽油替换，也可用花生油或豆油或葵花籽油或芝麻油替换，用量与相应的实施例相同。
实施例5
以生产1000粒软胶囊剂为例所用的中药原料和辅料及其重量配比为：
杜仲仁总苷 200g
聚乙二醇400 400g
上述配比中杜仲仁总苷中的桃叶珊瑚苷含量不低于50％。
其制备方法如下：
取测定含量的杜仲仁总苷200g，加聚乙二醇400溶液400g，再加无水碳酸钠1g，无水碳酸钠用于吸收聚乙二醇400中的水份，过滤，滤液为囊化液，在软胶囊机上加料，制成1000粒，每粒含杜仲仁总苷(以桃叶珊瑚苷计)100mg。
实施例6
以生产1000粒软胶囊剂为例所用的中药原料和辅料及其重量配比为：
杜仲仁总苷 200g
聚乙二醇400 50g
上述配比中杜仲仁总苷中的桃叶珊瑚苷含量不低于50％。
其制备方法与实施例5相同，在软胶囊机上加料，制成1000粒，每粒含杜仲仁总苷(以桃叶珊瑚苷计)100mg。
实施例7
以生产1000粒软胶囊剂为例所用的中药原料和辅料及其重量配比为：
杜仲仁总苷 200g
聚乙二醇400 800g
上述配比中杜仲仁总苷中的桃叶珊瑚苷含量不低于50％。
其制备方法与实施例5相同，用软胶囊机制成1000粒，每粒含杜仲仁总苷(以桃叶珊瑚苷计)100mg。
实施例8
以生产1000粒硬胶囊剂为例所用的中药原料重量比为：
杜仲仁总苷 200g
上述配比中杜仲仁总苷中的桃叶珊瑚苷含量不低于50％。
其制备方法如下：
取测定含量的杜仲仁总苷200g，装入硬胶囊内，接口密封，制成1000粒，每粒含杜仲仁总苷(以桃叶珊瑚苷计)100mg。
为了验证杜仲仁总苷制备的药物对骨质疏松的治疗效果，申请人委托陕西省生物医药重点实验室制备的杜仲仁总苷，并委托陕西省生物医药重点实验室进行了药效学试验，各种试验情况如下：
试验目的：探讨杜仲仁总苷改善维甲酸所致骨质疏松的效果，为临床用药及新药开发提供客观依据。
实验药物：杜仲仁总苷，将其制成大豆油白色乳剂，含杜仲仁总苷240mg/ml(以桃叶珊瑚苷计)，由陕西省生物医药重点实验室提供，批号为050312；仙灵骨葆胶囊，贵州同济堂制药有限公司生产，国药准字：Z20025337，产品批号为061239；尼尔雌醇片，上海医药(集团)有限公司华联制药厂生产，国药准字：H31021648，产品批号为060601。
实验动物：健康雌性SD大鼠70只，体重150～180g，西安交通大学医学院实验动物中心提供，合格证号为08-005，大鼠固体饲料，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，所有实验动物饲养条件一致。
实验条件：在室温20～25℃，相对湿度为38％～41％，每日使用限量固体饲料和自来水饲养，保持良好通风，每日打扫室内卫生1次，保持室内没有明显的氨臭味。
实验试剂：10％(W/V)乌拉坦溶液。
实验仪器：灌胃针头、注射器、手术剪、手术镊、分析天平(BS223S，北京赛多利斯仪器系统有限公司)、普通天平(ES-1000E型，长沙湘平科技发展有限公司)、YLS-16A小动物骨骼强度测定仪(山东省医学科学院设备站)、骨密度仪(美国产Hologic QDR-2000)。免疫计数器，型号为Ria16r，美国生产；全自动生化分析仪，型号为日立7160型，由日本生产。
1、实验方法
实验分组：取SD品系雌性大白鼠70只，随机分为水对照组(2ml/只)、维甲酸模型组(80mg/kg)、杜仲仁总苷55mg/kg小剂量组、杜仲仁总苷110mg/kg中剂量组、杜仲仁总苷220mg/kg大剂量组、阳性对照组、仙灵骨葆1500mg/kg组、尼尔雌醇0.8mg/kg组，共7组，每组10只。
2、造模
除空白对照组外其余60只大鼠使用维甲酸80mg/kg天，连续灌胃14天。每天称量食物和测量水的消耗量，一周称一次体重，观察动物的饮食、水消耗情况。结果显示维甲酸80mg/kg天，连续灌胃14天可成功导致骨质疏松大鼠模型。
3、给药方法
维甲酸80mg/kg天连续灌胃14天可成功导致骨质疏松大鼠模型后，按分组分别灌胃给予相应的药物，空白对照组及模型组给水。杜仲仁总苷小、中、大剂量组和仙灵骨葆组按剂量每天灌胃一次，尼尔雌醇组每周灌胃一次。同时每天称量食与测量水的消耗量，每周称量体重一次。
给治疗药10周后，将所有动物用10％乌拉坦溶液1.0g/kg(1ml/100g)腹腔注射麻醉，颈动脉取血处死，采血液，用免疫计数器测量血清雌激素；剖开腹腔和头颅分离出心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、肾上腺、卵巢和子宫，分别称量湿重，计算其脏体比；取双侧股骨，剔除软组织，其中右侧股骨用于测量骨结构强度、股骨最大荷载；左侧股骨测量其骨密度，用分析天平称量骨重，用游标卡尺测量骨长度。
4、统计学处理
所有资料以均数±标准差(x±s)表示，以P＜0.05为差异有显著性。
5、试验结果
(1)杜仲仁总苷对维甲酸所致大鼠骨质疏松力学分析
模型组显著降低股骨最大荷载、骨结构强度和骨密度(p＜0.001，p＜0.05)。杜仲仁总苷、仙灵骨葆和尼尔雌醇均能使维甲酸造模后大鼠的股骨最大荷载、骨结构强度和骨密度升高。杜仲仁总苷大、中、小剂量、尼尔雌醇和仙灵骨葆能显著提高股骨最大荷载(p＜0.001)。杜仲仁总苷大、中、小剂量和仙灵骨葆能显著提高骨结构强度(p＜0.01，p＜0.001，p＜0.05)；尼尔雌醇有提高骨结构强度的趋势，但无统计学显著性差异。杜仲仁总苷大、中、小剂量能显著提高骨密度(p＜0.01)；尼尔雌醇和仙灵骨葆有提高骨密度的趋势，但无统计学显著性差异。试验结果见表1。
表1杜仲仁总苷对维甲酸所致大鼠骨质疏松力学分析
| 分组 | 动物数 | 剂量mg/kg | 股骨骨折应力(kg)(股骨最大荷载) | 股骨压碎力(kg)(骨结构强度) | 骨密度(g/cm2) |
| 对照组模型组杜仲仁总苷杜仲仁总苷杜仲仁总苷尼尔雌醇仙灵骨葆 | 1091098108 | 80551102200.81500 | 9.998±0.767***6.054±0.9989.763±2.269***9.347±1.212***9.451±1.400***8.984±0.711***9.404±1.552*** | 14.853±3.502*11.935±1.67314.914±2.435**17.472±2.705***17.295±4.570**13.443±1.48416.938±4.553* | 0.07497±0.01147*0.05925±0.015220.07790±0.00972**0.08386±0.00972**0.07749±0.0065**0.07218±0.00790.06690±0.01120 |
注：组间进行t检验，与维甲酸模型组比*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001
(2)杜仲仁总苷对大鼠股骨长度及其重量的影响
模型组显著缩短股骨长度、降低股骨重量(p＜0.01)。杜仲仁总苷和仙灵骨葆和尼尔雌醇均能使维甲酸造模后大鼠的股骨长度、股骨重量向正常水平回复。杜仲仁总苷中剂量能显著增加股骨长度(p＜0.05)；杜仲仁总苷大剂量、小剂量、尼尔雌醇和仙灵骨葆有增加股骨长度的趋势，但无统计学显著性差异。杜仲仁总苷小剂量能显著增加股骨重量(p＜0.05)；杜仲仁总苷中、大剂量、尼尔雌醇和仙灵骨葆有增加股骨重量的趋势，但无统计学显著性差异。试验结果见表2。
表2.杜仲仁总苷对大鼠股骨长度及其重量的影响
| 分组 | 动物数 | 剂量(mg/kg) | 股骨长度(mm) | 股骨重量(mg) |
| 对照组模型对照组杜仲仁总苷小剂量组杜仲仁总苷中剂量组杜仲仁总苷大剂量组尼尔雌醇仙灵骨葆 | 1091098108 | 80551102200.81500 | 35.72±1.72**29.92±1.7830.71±1.5431.83±1.07*30.51±1.1230.81±1.3731.36±1.99 | 642.8±56.5**517.7±77.2592.6±46.1*580.9±68.1544.1±73.2527.4±35.9556.3±52.5 |
注：组间进行t检验，与维甲酸模型组比*p＜0.05，**p＜0.01
(3)杜仲仁总苷对大鼠血清雌激素水平的影响
模型组的血清雌激素水平有低于对照组的趋势，但无统计学显著差异。杜仲仁总苷中、大剂量和仙灵骨葆均能使维甲酸造模后大鼠的血清雌激素回复正常水平。尼尔雌醇组能显著提高大鼠的血清雌激素水平(p＜0.05)。
试验结果见表见表3。
表3.杜仲仁总苷对大鼠血清雌激素的影响
| 分组 | 动物数 | 剂量(mg/kg) | 雌激素(pg/ml) |
| 对照组模型组杜仲仁总苷小剂量组杜仲仁总苷中剂量组杜仲仁总苷大剂量组尼尔雌醇仙灵骨葆 | 1091098108 | 80551102200.81500 | 4.114±3.4822.951±2.0921.929±1.7714.563±3.2944.128±4.2318.141±6.774*5.983±5.499 |
注：组间进行t检验，与维甲酸模型组比*p＜0.05。
6、试验结论
实验证明，杜仲仁总苷不影响动物体重增长，对脏器指数未见明显影响；杜仲仁总苷使骨密度显著升高，对股骨骨折应力显著增加，对股骨破碎应力显著升高，对维甲酸引起的骨长度减少有增加作用，对股骨重量降低有升高作用；杜仲仁总苷对血清雌激素水平未见明显影响；杜仲仁总苷有良好的抗维甲酸引起的大鼠骨质疏松作用。
杜仲仁总苷软胶囊和硬胶囊主治：骨质疏松。
杜仲仁总苷软胶囊和硬胶囊规格：每粒含杜仲仁总苷(以桃叶珊瑚苷计)100mg。
杜仲仁总苷软胶囊和硬胶囊用法用量：每天口服两次，每次1～3粒，饭前或饭后服用。
Claims (1)
1.有效成分杜仲仁总苷在制备治疗骨质疏松病药物中的应用。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Open date: 20080430 |