CN100352464C - 一种治疗骨质疏松的药物 - Google Patents
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Abstract
一种治疗骨质疏松的药物,由淫羊藿、补骨脂、杜仲、续断、黄芪、牛膝、牡蛎(煅)组成。制备方法为:a)将牡蛎(煅)粉碎成细粉;b)补骨脂加4倍量浓度为70%的乙醇提取三次,每次2小时,过滤,合并滤液;c)淫羊藿、杜仲、续断、黄芪和牛膝一起加水煎煮三次,每次1小时,加水量为药材量的14倍,合并煎液,过滤,滤液浓缩至相对密度为1.10-1.15(50℃),加乙醇使醇浓度达70%,放置过夜,过滤;d)合并步骤b和步骤c的滤液,浓缩至相对密度为1.25-1.30(50℃),减压干燥,粉碎成细粉,与步骤a制备的牡蛎(煅)细粉混合,加入阿司帕坦20g和糊精适量,混匀,用适当浓度的乙醇制粒,干燥,即得目标产品。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物,具体地涉及一种治疗骨质疏松的药物。
本发明还涉及上述药物的制备方法。
本发明还涉及上述药物在制备治疗骨质疏松的药物中的应用。
背景技术
世界卫生组织在2000年明确指出骨质疏松是人体衰老过程中出现的一种病理现象,它发病率高,致残率高,是目前威胁人类健康一种疾病。据统计,全世界约二亿妇女患骨质疏松症,在美国1986年单纯股骨颈骨折达24万7千多人,耗费资金70多亿美元。美国学者统计:因骨质疏松引起骨折,第一年死亡率12%至20%;全美每天由骨质疏松引起骨折而造成死亡人数达145人。在西德,每年因骨质疏松引起骨折,折磨着5万多人,年耗资金6亿多马克。赵氏在中国原发性骨质疏松症流行病学报告:我国是世界上老年人口最的国家,目前60岁以上老人有一亿两千万,到2050年将达四亿五千万。预测目前我国有骨质疏松患者八千四百万,占总人口的6.6%。到2050年将成倍增加,达两亿一千二百万,占总人口的13.2%。回顾性研究认为中国城市50岁以上的老年妇女因骨质疏松症而发生脊柱骨折为15%;南部城市50岁以上老人髋部骨折的总发病率为11.26/100000;北方地区50岁以上老人髋部骨折的总发病率74.6/100000,男女发病率为1∶2。骨质疏松危害严重,又无明显早期表现,积极预防,早期诊断和正确治疗是非常重要的课题。目前西药尚没有有效方法的情况下,研究中医药治疗骨质疏松症具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗骨质疏松的药物。
本发明的又一目的在于提供上述药物的制备方法。
为实现上述目的,本发明提供的治疗骨质疏松的药物,是由下述重量配比的原料制成的药剂:
淫羊藿440-530;补骨脂260-310;杜仲350-450;续断260-330;黄芪260-330;牛膝230-310;牡蛎40-55。各原料优选的重量配比是:淫羊藿500;补骨脂300;杜仲400;续断300;黄芪300;牛膝300;牡蛎50。
所述的药剂是任何一种药剂学上所说的剂型,优选颗粒剂。
本发明提供的制备上述药物的方法,步骤有:
a)将牡蛎粉碎成细粉;
b)补骨脂加4-6倍量浓度为70-90%的乙醇提取2-4次,每次2小时,过滤,合并滤液;
c)淫羊藿、杜仲、续断、黄芪和牛膝一起加水煎煮1-3次,每次0.5-1.5小时,加水量为药材量的10-14倍,合并煎液,过滤,滤液浓缩至相对密度在50℃时为1.05-1.20,加乙醇使醇浓度达50-80%,放置过夜,过滤;
d)合并步骤b和步骤c的滤液,浓缩,减压干燥,粉碎成细粉,与步骤a制备的牡蛎细粉混合;
e)在步骤d的产品中加入重量比1.0-2.0%的甜味剂和重量比0.5-1.5倍的稀释剂,混匀;
所述甜味剂为甜叶菊苷、甜菜碱、阿司帕坦、甘草甜素或糖精钠,优选阿司帕坦;
所述稀释剂为淀粉、糊精或乳糖,优选糊精。
制备方法中,步骤b的乙醇浓度优选为70%。
制备方法中,步骤b中乙醇加入量优选为4倍。
制备方法中,步骤b中乙醇提取次数优选为3次。
制备方法中,步骤c中加水量优选为14倍。
制备方法中,步骤c中煎煮次数优选为3次。
制备方法中,步骤c中每次煎煮时间优选为1小时。
制备方法中,步骤c中的滤液浓缩至相对密度在50℃时优选为1.10-1.15。
制备方法中,步骤c中加入乙醇使醇浓度优选为70%。
制备方法中,步骤d中减压干燥至相对密度在50℃时优选为1.25-1.30。
制备方法中,步骤e得到的产品用浓度为80-90%的乙醇制粒,干燥,得颗粒剂产品。
本发明提供的上述药物可以用来制备治疗骨质疏松的药物。
附图说明
图1为本发明制备工艺流程示意图。
具体实施方式
以下详细介绍本发明治疗骨质疏松的药物的原料、制备方法,以及病理实验及结果来说明其在制药领域中的用途。
一、药物原料
(一)淫羊藿
本品为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim、柔毛淫羊藿Epimediumpubescens maxim、巫山淫羊藿(Epimedium wushanense T.S.Ying)或朝鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)的干燥地上部分。(可参阅《中国药典2000年版一部;267》)。
根据阴健等人的《中药现代研究与临床应用(1),学苑出版社,北京,1994;303》和徐国钧等人的《中国药材学(下)中国医药科技出版社;1996;1398》介绍,淫羊藿类植物主要含有黄酮类化合物,还含木脂素、生物碱、挥发油、脂肪酸、蜡醇、植物甾醇、木兰碱(magnoflerin)等。黄酮类化合物:淫羊藿含淫羊藿甙(icariin)、淫羊藿次甙(icariside I)、Icariside II、淫羊藿新甙(epimedosideA)。
箭叶淫羊藿地上部分含淫羊藿甙、脱水淫羊藿甙元-3-o-α-鼠李糖甙、淫羊藿甙元-3-α-鼠李糖甙、槲皮素及槲皮素甙、叶含2苯氧基色原酮、去甲氧基-7-甲基茵陈色原酮、6-去甲氧基-4’-甲基-8异戊烯基茵陈色原酮和6-去甲氧基-7-异戊烯基茵陈色原酮。
柔毛淫羊藿含淫羊藿次甙、淫羊藿甙C、淫羊藿甙IV、金丝桃甙、宝藿甙I、柔藿甙。
巫山淫羊藿含巫山淫羊藿甙。
朝鲜淫羊藿地上部分含淫羊藿甙、淫羊藿次甙、淫羊新甙A,B,C,D,E(epimedosideA,B,C,D,E)。
根据郭宝林等有的《药学学报1996,331(4)292》介绍,采用高效液相法,测定药典记载的5种淫羊藿中9种黄酮:它们是淫羊藿甙、宝藿甙I(baohuoside I)、宝藿甙II(baohuoside II)、淫羊藿甙A(epimedinA)、箭藿甙B(sagittatosideB)、朝藿定B(epimedinB)、朝藿定C(epimedinC)、大淫羊藿甙C(ikarisosideC)和大淫羊藿甙F(ikarisosideF)。从5个品种,9个产地的样品分析结果看,其主要成分较为一致,均为淫羊藿甙、朝藿定B和朝藿定C。淫羊藿甙含量在0.26%-3.69%,除湖北样品低于药典规定的0.5%外,其它均接近或高于药典标准,含量在3%以上的为贵州产的箭叶淫羊藿和辽宁产的朝鲜淫羊藿。值得注意的是巫山淫羊藿和两个产地的箭叶淫羊藿中朝藿定B和朝藿定C的含量远远大于淫羊藿甙,从结构来看朝藿定B和朝藿定C比淫羊藿甙多一个糖,在光和热等外部条件的作用下,可部分向淫羊藿甙转化,因此认为评价淫羊藿质量时,对朝藿定B和朝藿定C的含量应加以考虑。
药典以淫羊藿甙为对照品,定性用醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂,三氯化铝为显色剂。含量测定是用分光光度法,控制总黄酮不得低于5%,以高效液相法测定单体,规定不得低于0.5%。
淫羊藿苷(Icariin)的结构式:(据国家医药管理局中草药情报中心站编:植物药有效成分手册1986:0738)
分子式及分子量:C33H40O15;676.65
物理性状:淡黄色针状结晶(含水吡啶),熔点231-232°,[α]22 D-92°。溶于乙醇、醋酸乙酯,不溶于醚、苯和氯仿。
(二)补骨脂
本品为豆科植物psoralea corylifolia L的干燥果实(《中国药典2000年版一部,147》)。主含:香豆素衍生物(1)补骨脂内脂(psoralen)、异补骨内脂(白芷素,angelicin)、补骨脂素(psoralidin,6-isopentenylcoumestrol),另含异补骨脂素、双羟异补骨脂素及8-甲氧基补骨脂素。并谓含环氧补骨脂素(psoralidin-2,3’-oxide)、黄酮类化合物、补骨脂甲素(coryfolin,bavachin)补骨脂乙素(corylifolinin,isobavchalcone)、补骨脂甲素甲醚(bavachin)、异补骨脂甲素(isobavachin)、补骨脂乙素甲醚(bavachromene)、新补骨脂异黄酮(neobavaisoflavone)、补骨脂色烯素(bavachromene)及补骨脂苧素(corylin)。尚含巴库查耳酮(bakuchalcone)及异新巴法查耳酮(isoneobavachalcone),以及补骨脂异黄酮醇等,此外,含有补骨脂醛(psoraldehyde)、d-补骨脂酚(d-bachkuchiol)、挥发油、皂甙。补骨脂中还分离得到bavacoumestanA,B(《2徐国钧等;中国药材学,下,中国医药科技出版社,北京1196;1066》)。
药典用补骨脂素和异补骨脂素为对照品,以环己烷-醋酸乙酯(8∶2)为展开剂,进行薄层层析鉴别,但无含量测定。据姚三桃等《中国药学杂志,1996;31(7)394》报道,对国内11个地区的补骨脂药材中补骨脂素和异补骨脂进行含量测定,它们的含量分别为0.05-1.17%及0.16-1.20%。
补骨酯素(Psoralen)的结构式:(国家医药管理局中草药情报中心站编:植物药有效成分手册1986:1035,0076)
分子式及分子量:C11H6O3;186.16
物理性状:无色针状结晶(乙醇),熔点189-190°,溶于乙醇、氯仿,微溶于水、乙醚和石油醚。
异补骨酯素(Isopsoralen)的结构式:(国家医药管理局中草药情报中心站编:植物药有效成分手册1986:1035,0076)
分子式及分子量:C11H6O3;186.16
物理性状:熔点137-138°。
(三)杜仲
本品为杜仲科植物Eucommia ulmoides Oliv.的干燥树皮(中国药典第一部2000年版131)。杜仲叶和皮含有14种木脂素和木脂素甙(ligninoglycosides),其与甙元联接的均为吡喃葡萄糖,其中二苯基呋喃木脂素、甙有松脂醇双糖甙等、松脂醇双糖甙(pinoresinol diglycoside)为杜仲降压有效成分。从杜仲皮中还分到正二十九烷、正卅烷醇、白桦脂醇(betulin)、白桦脂酸、β-谷甾醇、熊果酸、香草酸、氨基酸、微量元素。还分离得到10种环烯醚萜类(iridoids),有都桷子素葡萄糖甙(geniposide)、桃叶珊瑚甙(aucubin)、筋骨草甙(ajugoside)、杜仲甙(ulmoside)、玄参甙乙酸酯(harpagide acetate)及葡匐甙(reptoside)等,除杜仲甙类外其余成分甙元均以β-甙链联接吡喃葡萄糖。
杜仲甙类糖部分为异麦芽糖。此外尚含有鞣质、黄酮和少量生物碱。
药典以松脂醇二葡萄糖甙为对照品,采用高效液相法测定,规定其含量不得低于0.1%。
松脂醇二葡萄糖甙(Pinoresinol digluaoside)的结构式:(徐国钧等:中国药材学,上,中国科学技术出版社,北京上册1996,796)
分子式及分子量:C32H42O16; 682
物理性状:为白色块晶,熔点225-7°。
(四)续断
本品为续断科植物续断Dipsacus asperoides C.Y.cheng et T.M.Ai的干燥根(《中国药典一部2000年版270》)。主要化学成分有龙胆碱(getianine)约0.6%(《胡世林:中国地道药材原色谱说山东科技出版社1998;211》);三萜皂甙:从乙醇提取物中分离得到11种化合物,经光谱及化学反应已确定为多糖甙,其甙元为常春藤皂甙元(hederagenin)和齐登果酸(Oleanolicacid),糖单元有葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖、木糖及半乳糖。现按皂甙元不同,糖单元个数,结合方式等归类如下:常春藤皂甙元的多糖甙有化合物IV为三糖甙,化合物VII和化合物XI为五糖甙,化合物IX为六糖甙,化合物X和XII为七糖甙;以齐登果酸为皂甙元的有化合物V为三糖甙和化合物VIII为八糖甙(《张永文等:药学学报1991,26(9)676;1991,26(12)911;1992,27(12)912;1993,28(5)358》)。从乙醇提取物中可分离得到8个化合物,一个为常春藤皂甙元,其余7个为三萜皂甙,均为常春藤皂甙元的多糖甙,被命名为川续断甙A,C,E,F,G,H1,H2(asperosaponinA,C,E,F,G,H1,H2)经光譜分析鉴定,川续断甙A,C,E,G和H2分别与前文报道的化合物I,VI,XI,XII和X为相同化合物,F和H1为新的化合物,川续断甙F为六糖甙,川续断甙H1为八糖甙(《魏峰等:药学学报1994,29(7)511》);挥发油:经气质和气红联用分析,共鉴定41个化合物,其中以酚类化合物为最多,萜类较少,高含量组分cavotanaceton,但未超过10%(《吴知行等:中国药科大学学报1994,25(4)202》)。此外尚含蔗糖、β-谷甾醇、akebiasaponinD.(《张永文等:药学学报1991,26(9)676;1991,26(12)911;1992,27(12)912;1993,28(5)358》),并对后者采用HPLC进行含量测定(《杨中林等:中医药信息2000,(1)17》)。
川续断甙的结构式:
R R’
IV CH3CO OH
V H H
VI H OH
(五)黄芪
本品为豆科植物蒙古黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.Var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根(《中国药典2000年一部:249》)。化学成分膜荚黄芪含黄酮类成分芒柄花黄素(7-羟基-4′-甲氧基异黄酮formononetin)、3′-羟基芒柄花黄素(毛蕊异黄酮calycosin)及其葡萄糖苷、2’,3′-二羟基-7,4’-二甲氧基异黄酮、7,2′-二羟基-3’4′-二甲氧基异黄烷及其葡萄糖苷、7,3′-二羟基-4’5′-二甲氧基异黄烷、3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷(3-hydroxy-9,10-dimethoxypterocarpane)及其葡萄糖苷等。皂甙类成分有黄芪苷I-VIII(astragalosideI-VIH)及大豆皂苷I(soyasapohenosidei)。又从膜荚黄芪中分得黄芪甲苷(即黄芪皂苷IV)与黄芪乙苷。此外,含有γ氨基丁酸、D-葡萄糖、D-果糖、蔗糖、β-谷甾醇、胆碱、甜菜碱、亚麻酸、油酸、亚油酸等(《徐国均:中国药材学,中国医药科技出版社,北京,1996:232》)。
蒙古黄芪含黄酮类成分芒柄花素、毛蕊异黄酮、7,3′-二羟基-4′-甲氧基异黄酮、9,10-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-葡萄糖苷、3’-羟基-4′-甲氧基异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、L-3-羟基-9-甲氧基紫檀烷;皂甙类大豆皂苷I,黄芪苷I,II,IV,胡萝卜苷;多糖类:已分离出多糖有黄芪多糖I,II,III,AG-1,AG-2,AH-1,AH-2,AH2,其中AG-1和AH-1具有免疫促进作用。其他成分尚有氨基酸、β-谷甾醇、蔗糖、甜菜碱、亚麻酸等(《阴健等:中药现代研究与临床应用(1)学苑出版社,北京1994:592,518》)。
药典中以黄芪甲苷为对照品进行鉴别和含量测定,规定黄芪甲苷的含量不得低于0.04%。
黄芪甲苷(Astragaloside)的结构式:(《王宝琹:中成药质量标准与标准物质的研究:中国医药科技出版社1994,537》)
分子式及分子量:C41H68O14;784
物理性状:m.p.295-296℃,UVMeoH λmax 200.8。
(六)牛膝
本品为苋科植物牛膝Achyranthes bidentata BL.的干燥根(《中国药典2000年版一部;54》)。
化学成分有三萜类化合物,水解后可产生齐登果酸(oleanolic acid)。总皂甙对动物子宫平滑肌有一定的活性;甾体类含蜕皮甾酮(ecdysterone)、牛膝甾酮、紫茎牛甾酮;多糖类:总多糖有抗癌作用,还含免疫活性多糖,其他成分有氨基酸、生物碱类、香豆素类化合物,根含大量蔗糖、甜菜碱、钾盐等(《阴健等;中药现代研究与临床应用(1),学苑出版社,北京,1994;87》)。
药典鉴别齐登果酸,以氯仿-甲醇(40∶1)为展开剂,磷钼酸试液为显色剂。
齐登果酸(Oleanolic acid)的结构式:(《国家医药管理局中草药情报中心站编:植物药有效成分手册0946》)
分子式及分子量:C30H48O3;456.71
物理性状:白色针状结晶(乙醇),熔点308-10°,[α]20 D+73.3°(C=0.15,氯仿)。不溶于水,可溶于甲醇、乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
(七)牡蛎
本品为牡蛎科动物长牡蛎Ostrea gigas Thunberg、大连湾牡蛎的贝壳(《中国药典2000年版一部;138》)。以上3种牡蛎的贝壳均含碳酸钙90%以上,并含磷酸钙、硫酸钙、少量的钠、锶、铁,微量的铝、硅、钛、锰、钡、铜、锌、铬、镍等多种元素,还含蛋白质、氨基酸等(《国家中医药管理局中华本草编委会;中华本草精选本下册,上海科学技术出版社1996:2376》)。
二、本发明的药材来源与前处理:
淫羊藿:购于安徽毫州药材市场。经鉴定为小檗科植物箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.干燥地上部分。符合《中国药典》2000年版一部淫羊藿项下有关规定。使用时应除去粗梗与杂质。
补骨脂:购于和义南苑药材批发部,经鉴定为豆科植物补骨脂Psoraleacorylifolia L.的干燥成熟果实,符合《中国药典》2000年版一部补骨脂项下有关规定。
杜仲:购于和义南苑药材批发部,经鉴定为杜仲科植物杜仲Encommiaulmoides Oliv.干燥树皮的饮片,符合《中国药典》2000年版一部杜仲项下有关规定。
续断:购于和义南苑药材批发部,经鉴定为川续断科植物川续断Dipsacus asperoides C.Y.Cheng et T.M.Ai干燥根的饮片,符合《中国药典》2000年版一部续断项下有关规定。
黄芪:购于和义南苑药材批发部,经鉴定为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch)Bge.干燥根的饮片,符合《中国药典》2000年版一部黄芪项下有关规定。
牛膝:购于和义南苑药材批发部,经鉴定为苋科植物牛膝Achyranthesbidentata BL..干燥根的饮片,符合中国药典2000年版一部牛膝项下有关规定。
牡蛎:购于和义南苑药材批发部。经鉴定本品为牡蛎科动物长牡蛎Ostrra gigas Thumberg.的贝壳,符合中国药典2000年版一部牡蛎项下有关规定。用时砸碎。
三、本发明制备工艺的确定:
淫羊藿:主要含有淫羊藿苷等黄酮苷类化合物。药理研究表明:淫羊藿水煎液能明显提高性机能,并增加附性器官重量,提高血浆睾酮含量。还能提高大鼠尿中17-酮的含量,提示可能具有提高肾上腺皮质功能的作用。故淫羊藿宜用水煎提取。
杜仲主要含有木脂素苷类、环烯醚萜苷类和绿原酸等有机酸类。
续断主要含有三萜皂苷类。
黄芪主要含有黄芪甲苷等皂苷类。
牛膝主要含有三萜皂苷类等成分。
以上成分均溶于水,故采用杜仲、续断、黄芪、牛膝和淫羊藿混合水煎的方法提取。
补骨脂:主要含有补骨脂素和补骨脂内酯等香豆素类;补骨脂甲素、乙素等黄酮类和补骨脂酚等酚类成分,均不溶于水而溶于乙醇,故采用醇提。
牡蛎(煅):为矿物药,主要成分为碳酸钙、磷酸钙和硫酸钙类,不溶于水。预试验时曾采用水煎提取和稀盐酸提取,均不能将钙盐提取完全,鉴于该药属于健骨制剂,钙盐很重要,再者由于其每日剂量仅为1.5g,较小,可直接加入制剂内,为保证疗效,采用粉碎成细粉直接入药。
四、本发明的制备工艺
一)工艺参数的选择:
1.补骨脂醇提工艺参数的优选
(1)补骨酯素的含量测定方法:
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-水(50∶60)为流动相;检测波长295nm;柱温35℃。
供试品溶液的制备:称取提取物干膏0.2g,加甲醇10ml溶解,滤过,取续滤液5ml,用微孔滤膜(0.5um)滤过,即得。
对照品溶液的制备:称取在105℃干燥至恒重的补骨酯素对照品适量,加流动相制成每1ml含补骨酯素0.125mg的溶液,作为对照品溶液。
测定法:分别吸取对照品溶液3ul与供试品溶液1ul,注入液相色谱仪,测定,即得。
(2)正交试验优选:
称取补骨脂30g,共9个样品分别按表1的因素水平、表2的正交试验设计的具体参数进行提取、浓缩和干燥,得9个干燥提取物,并以上述方法测定每个干燥提取物中补骨脂素的含量,并将其换算为相当于补骨脂生药中补骨脂素的含量,进行方差分析,结果见表3。
表1、因素水平表
水平 | A(醇浓度) | B(提取次数) | C(加醇量) |
123 | 70%80%90% | 234 | 456 |
注:确定每次提取2小时。
表2、正交试验数据表
试验号 | A | B | C | D | 补骨脂素含量%(g/100g补骨脂) |
123456789 | 111222333 | 123123123 | 123231312 | 123312231 | 0.420.450.430.340.400.420.230.260.28 |
K1K2 | 1.301.16 | 0.991.11 | 1.101.07 | 1.101.10 | CT=1.1592 |
K3 | 0.77 | 1.13 | 1.06 | 1.03 | |
RjSj | 3.62850.0503 | 3.48910.0030 | 3.47850.0003 | 3.48090.0011 |
注:由于C的S值比空列D的S值还小,故采用C和D联合估计误差。
表3、方差分析表
来源 | Sj | 自由度 | 均方差 | F比 | 显著性 |
ABE | 0.05030.00300.0014 | 224 | 0.025150.001500.00035 | 71.864.29 | ** |
*:F1-0.05(2,4)=6.94 **:F1-0.01(2,4)=18.0
由表3结果可知:A因素对结果有极显著性影响,选A1;B因素和C因素对结果无显著影响,结合直观分析和生产实际,选B2C1,确定最佳条件为A1B2C1,也即:用70%的乙醇提取3次,每次2小时,加醇4倍量。
2.淫羊藿等药水煎醇沉工艺参数的优选:
1)淫羊藿等药水煎工艺参数的优选:
①淫羊藿苷的含量测定方法:照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水(30∶70)为流动相;检测波长270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取110℃干燥至恒重的淫羊藿苷对照品适量,加甲醇制成每ml含0.1mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备取提取物约0.2g,研碎,精密称定,置100ml锥形瓶中,精密加70%乙醇25ml,称定重量,超声处理60分钟,放置至室温,再称定重量,用70%乙醇补足减失重量,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密吸取续滤液10ml,蒸至1ml通过聚酰胺柱(内径1.5cm,长9cm,聚酰胺13-30目4g,以水100ml预洗),先以水150ml洗脱,弃去,再以70%乙醇150ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液5μl;供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
②正交优选试验:
称取淫羊藿50g、杜仲40g、续断30g、黄芪30g和牛膝30g,混合,共9个样品,分别按表4的因素水平和表5的正交试验设计参数进行煎煮、滤过、浓缩、干燥,得9个水提物,按上述方法测定水提物中淫羊藿苷的含量,并换算为相当于淫羊藿生药中的含量,进行方差分析,结果见表5、表6。
表4、因素水平表
水平 | A(煎煮次数) | B(提取时间) | C(加水倍数) |
123 | 123 | 0.5h1.0h1.5h | 101214 |
表5、淫羊藿等药水煎正交试验数据表
试验号 | A | B | C | D | 淫羊藿苷含量%(g/100g淫羊藿) |
123456789 | 111222333 | 123123123 | 123231312 | 123312231 | 0.430.680.650.520.750.790.700.820.81 |
K1K2K3 | 1.762.062.33 | 1.652.252.25 | 2.042.012.10 | 1.992.171.99 | CT=(∑Yi)2/9=4.2025 |
Rj | 12.7701 | 12.8475 | 12.6117 | 12.6291 |
Sj | 0.0542 | 0.0800 | 0.0014 | 0.0072 |
因为C因素的S值比D因素的S值还小,故采用二者联合估计误差。
表6、方差分析表
来源 | Sj | 自由度 | 均方差 | F比 | 显著性 |
ABE | 0.05420.08000.0086 | 224 | 0.02710.04000.00215 | 12.6018.60 | *** |
*:F1-0.05(2,4)=6.94 **:F1-0.01(2,4)=18.0
结果表明A因素对结果有显著影响,选A3;B因素对结果有极显著影响,选B2;C因素对结果无明显影响,结合直观分析和生产实际,选C3,最佳条件为A3B2C3。即:加水14倍量,煎煮3次,每次煎煮1小时。
2)淫羊藿等药醇沉工艺参数的优选:
鉴于影响醇沉效果的因素主要为药液的浓缩程度和醇沉浓度,因此分别对二者进行了优选。
a.浓缩程度对醇沉结果的影响试验:
称取淫羊藿80g、杜仲64g、续断48g、黄芪48g、牛膝48g,混合后加水煎煮3次,每次1小时,加水14倍量,水煎液均分为4份,分别浓缩至相对密度为1.05、1.10、1.15和1.20,分别加入乙醇使含醇量在达到70%,放置过夜,滤过,滤液回收乙醇并继续浓缩至稠膏、减压干燥,粉碎即得4个干膏粉,并分别测定淫羊藿苷的总量,结果见表7。
表7水沉试验结果表
相对密度 | 干膏得量(g) | 淫羊藿苷总量(g) |
1.051.101.151.20 | 21.2017.4516.0712.16 | 0.1200.1180.1170.100 |
表7结果表明:相对密度为1.05、1.10和1.15三者醇沉后淫羊藿苷总量无明显差异,但1.05的干膏量偏大,故确定醇沉时将药液浓缩至相对密度为1.10-1.15。
b.醇浓度对醇沉结果的影响试验:
称取淫羊藿80g、杜仲64g、续断48g、黄芪48g、牛膝48g,混合后加水煎煮3次,每次1小时,加水14倍量,水煎液浓缩至相对密度为1.12(50℃测),均分为4等份,分别加入乙醇使含醇量达到50%、60%、70%、80%,放置过夜,滤过,回收乙醇,浓缩,干燥。测定提取物中淫羊藿苷的含量,并换算为相当于淫羊藿生药中淫羊藿苷的含量,结果见表8。
表8、醇沉试验结果表
醇沉浓度 | 干膏得量(g) | 淫羊藿苷含量(mg/g淫羊藿) |
50%60%70%80% | 21.218.916.615.3 | 0.620.630.660.67 |
结果表明:醇沉浓度以70%和80%较好,综合考虑,选醇沉浓度为70%。
综合上述结果,确定醇沉条件为:药液浓缩至相对密度为1.10-1.15(50℃测),醇沉浓度为70%。
二)本发明制备工艺中浓缩、干燥的研究:
1.浓缩方法:减压浓缩,条件为:压力-0.06mpa;温度:60℃。
2.干燥方法:减压干燥,条件为:压力-0.1mpa;温度:80℃,时间:8小时。
3.干膏收率考察试验:
为了考察醇提、水提后出膏率的情况,按制法项下方法进行了三批提取试验,结果见表9。
表9、三批出膏率考察试验数据表
批号 | 投料量(Kg) | 出膏量(Kg) | 出膏率(%) |
010205010208010210 | 10.7510.7510.75 | 2.5352.6032.585 | 23.5824.2124.05 |
根据表9可知:出膏率一般在24%左右,故暂订出膏率不应低于22%。牡蛎(煅)粉碎出粉率考察试验:
取牡蛎(煅)500g,粉为细粉,计算出粉率。共做三批试验,结果见表10。
表10、三批出粉率考察试验数据表
批号 | 投料量(g) | 出膏量(g) | 出膏率(%) |
011101011102011103 | 500500500 | 491488495 | 98.297.699.0 |
由表10可知:牡蛎(煅)粉碎出粉率一般在97%以上。暂订不得低于96%。
三)成型工艺的研究:
1.辅料类型的选择:
(1)稀释剂的选择:中药制剂常用的稀释剂为淀粉、糊精、乳糖等。由于本颗粒剂为水溶性颗粒剂,故不能用淀粉(不溶于水)。乳糖虽然具有热水中溶解度好,但价格太高;而糊精溶于热水,吸湿性小,且价格低廉,故选糊精为稀释剂。
(2)甜味剂的选择:常用的甜味剂有:甜叶菊苷、甜菜碱、阿司帕坦(Aspartrame)、甘草甜素和糖精钠等。由于甜菜碱呈碱性,恐对成分有影响,甘草甜素为类肾上腺皮质激素类,长期服用恐影响人体电解质代谢;糖精为合成甜味剂,而甜叶菊苷甜味不正,有一点怪味,故选用阿司帕坦为甜味剂。
2.辅料用量的选择:
(1)糊精:按处方量称取药材,根据制法项下方法处理,将减压干燥后所得药粉均分成三份,分别加入二者混合物量的1/2、1、1.5倍的糊精,混匀,分别用适当浓度的乙醇制粒,干燥。结果表明:加糊精1和1.5倍量者软材粘度适宜,易成型,颗粒性状好;而加糊精1/2倍量者,软材太粘,制粒时粘筛,颗粒吸湿变软,故确定加入药粉1倍量左右的糊精,做成10g/袋,3袋/日的颗粒剂。
(2)阿司帕坦:取按上述工艺制备的未加甜味剂的颗粒三等份,分别加入成品制剂1.0%、1.5%、2.0%量的阿司帕坦,开水冲后,1.0%量的与1.5%量的口感较苦,2.0%量的尚可,故选用加入成品制剂的2.0%量的阿司帕坦。
3.成型参数:用85%的乙醇适量(乙醇浓度和用量可根据当时实际的温、湿度作具体调整)作为湿润剂制粒,粒度14目。
4.制剂吸湿性考察试验:按处方量称取药材,按制备方法制备颗粒,干燥、分装后在相对湿度为85%、40℃的条件下放置一个月,测定其水分含量和外观性状,结果见表11。
表11制剂吸湿性考察试验数据表
样品 | 水分含量(%) | 性状 | 溶散性 |
试验前试验后 | 3.03.1 | 棕褐色颗粒棕褐色颗粒 | 符合规定符合规定 |
表11结果表明:水分含量未见明显增加,外观未见明显变化,说明其吸湿性不强,稳定性良好,制剂工艺可行。
表12:批中试数据
批号 | 011101 | 011102 | 011103 |
投料量(Kg)牡蛎(煅)量(g)细粉得量(g)出粉率(%)提取药物量(Kg)干膏粉得量(Kg)出膏率(%)阿司帕坦加入量(g)糊精加入量(Kg)颗粒得量(Kg)颗粒收率(%)成品袋数成品收率(%)粒度水分溶化性装量差异 | 21.550049197.621.05.1124.32004.1999.8798.797597.52.03.8符合规定符合规定 | 21.550048898.221.05.0824.22004.2329.8298.297397.32.04.2符合规定符合规定 | 21.550049599.021.04.9523.62004.3569.7997.997097.02.14.5符合规定符合规定 |
淫羊藿苷含量(mg/袋) | 20.68 | 19.15 | 17.13 |
实施例一(本发明制备的药物在以下的实施例中称为仙牛健骨颗粒)
牡蛎(煅)50g粉碎成细粉。补骨脂300g加4倍量70%的乙醇提取三次,每次2小时,合并煎液,滤过。淫羊藿500g、杜仲400g、续断300g、黄芪300g、牛膝300g一起加水煎煮三次,每次1小时,加水量为药材量的14倍,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.10-1.15(50℃),加乙醇使醇浓度达70%,放置过夜,滤过,滤液和上述补骨脂醇提液合并,回收乙醇并浓缩至相对密度为1.25-1.30(50℃),减压干燥,粉碎成细粉,与牡蛎(煅)细粉混合。
本处方每日生药量为64.5g,经提取精制后一般很难将出膏率降到10%以下,即使出膏率为10%,干膏量亦达6g以上,同时为保持药物的稳定性,还需要加入一定量的辅料,如果制成胶囊和片剂则没有服用量太大,由于上述原因,本发明的药物制成颗粒剂较为合适。因此再加入药粉重量2.0%的阿司帕坦和药粉1倍量的糊精,混匀,用浓度为80-90%的乙醇制粒,干燥,共制成产品颗粒剂1000g。所得干膏量约为每日15g(包括牡蛎粉)左右,分装成每袋10g,每日3袋的包装。
实施例二
药物急性毒性实验(最大给药量试验)
本试验的目的是观察小鼠口服仙牛健骨颗粒所产生的急性毒性反应和死亡情况。
根据中药新药研究的有关规定,用仙牛健骨颗粒进行了小鼠急性毒性实验观察。因无法测出LD50,故进行了最大给药量的测定。小鼠灌胃给药,累积剂量为102.8g生药/kg,是临床用药的112倍。动物未发现不良反应及死亡。
试验材料
仙牛健骨颗粒,3.85g生药/ml。
昆明种小白鼠40只,雌雄各半,体重19.80±1.34g(n=40),由中国科学院实验动物中心提供。合格证号<医动许字>(1999)第036号。
试验方法:动物禁食12小时,常水稀释药物浓度为2.57g生药/ml,用16号灌胃针头灌胃,一次灌胃给药0.4ml/10g体重。累计剂量102.8g生药/kg,对照组灌服同体积常水,每日观察动物状况,称体重,体重增长见表1,连续观察7天。
试验结果:给药后连续观察7天,每天称体重,给药组20只小鼠在给药当天动物精神不震,体卷缩,4~6h后恢复正常,无明显不良反应及死亡。体重增加,一周后体重25.18±3.95g(n=40)。精神状态佳,毛色白而有光泽,二便正常。仙牛健骨颗粒对小鼠灌胃的最大给药量为102.8g生药/kg,是临床用药的112倍(临床用量64.5g生药/日/人,人以70kg体重计算)。见表13。
分组 | N | 对照组 | 给药组 |
药前药后1天2天3天4天5天6天7天 | 2020202020202020 | 19.40±1.3120.95±1.7922.75±2.4523.70±2.8124.00±2.8724.65±3.1525.55±3.6526.20±4.07 | 20.20±1.2820.65±1.8421.95±2.6322.70±3.0122.85±3.1723.50±3.2723.85±3.4524.15±3.63 |
结论:小鼠灌胃给药,最大给药累积剂量为102.8g生药/kg,是临床用药的112倍。动物未发现不良反应及死亡。
实施例三
本实施例采用三月龄雌性大鼠,切除双侧卵巢造成骨质疏松模型。观察仙牛健骨颗粒对大鼠切除双侧卵巢造成骨质疏松的治疗作用。
试验材料
药物:
仙牛健骨颗粒:3.85g生药/ml。
尼尔雌醇:1mg/片,批号:20000501,北京四环制药二厂生产。
动物:选用三月龄Wistar种雌性大鼠,体重260g-300g,由中国科学院动物研究所提供,京动许字(2000)第013号总058号。
饲养场所:中国中医研究院西苑医院实验动物中心为二级动物饲养设施,合格证号:北京医动字第01-4010号。饲料:北京九江口饲料厂提供大鼠饲料,执行标准GB14924-94。
试验方法
动物腹腔戊巴比妥钠麻醉(50mg/kg),施双侧卵巢切除术(假手术组不切除卵巢),手术当天肌注青霉素12万/只,以防感染。除(1)假手术组(对照组)外,于术后一周随机分为:(2)模型组;(3)阳性药尼尔雌醇组1mg/kg;(4)仙牛健骨颗粒大剂量组12g生药/kg;(5)仙牛健骨颗粒中剂量组6g生药/kg;(6)仙牛健骨颗粒小剂量组3g生药/kg(临床用量64.5g生药/日/人,按70kg体重计算,临床用量为0.92g生药/kg,大鼠等效剂量5.805g/kg)。
给药方法:仙牛健骨颗粒各剂量组每日灌胃给药一次,每周给药7天;阳性药尼尔雌醇,一周灌胃给药一次。连续给药4个月,每月称一次体重。
试验结束后,经腹主动脉取血,分离血清用放免法测定甲状旁腺素(PTH)、降钙素(CT)、骨钙素(BGP)、雌二醇(E2);解剖取子宫称重。PTH、CT、BGP、E2放射免疫分析试剂盒由北京中国原子能科学研究院提供,批号200105。测试仪器:FT-630G全自动r计数仪。
不脱钙骨制片方法:取大鼠左侧胫骨近端1/3,去除软组织。用乙醇逐级脱水,二甲苯透明,每级各两次,每次24h。浸透液的配制:I液:甲基丙烯酸甲酯(北京益利精细化学品有限公司,批号:960523)75ml,邻苯二甲酸二丁酯(北京化学试剂公司,批号:970628)25ml;II液:在I液的基础上加过氧化苯甲酰(北京金龙化学试剂有限公司,批号:20000420)1g;III液:在I液的基础上加过氧化苯甲酰2.5g。以上三液,用磁力搅拌器充分搅匀。标本在I、II、III液各浸透36h。在青霉素小瓶中注入约5ml的III液,将标本按同一方向放入瓶中,然后置于40℃烘箱中聚合3~4天,待变为无色透明的坚硬包埋块后,砸碎小瓶,取出包埋块。修块后,在Reicheit-Jung 2040切片机上,用钨钢刀分别切出5μm的纵向不脱钙骨切片。用二甲苯溶掉树脂后,梯度乙醇至水,甲苯胺蓝染色。
骨组织形态计量学指标的测定:按照章明放等人在《运动对雌性大鼠去势后骨质疏松症的作用.中华骨科杂志,1994,14(6):365.》中的方法,采用Leica Qwin图象分析系统进行骨组织形态计量。计量结果皆以均数±标准差
表示,采用方差分析,两两比较采用q检验。
①骨小梁组织形态计量
骨小梁体积百分比(TBV%):骨小梁体积占被测骨髓腔总体积的百分比,是骨量水平的主要标志。
骨小梁吸收表面百分比(TRS%):不规则、凹凸不平的骨小梁表面占骨小梁表面的百分比。
骨小梁形成表面百分比(TFS%):有成骨细胞被覆的类骨质表面占骨小梁表面的百分比。
②皮质内表面形态计量
类骨质平均宽度(OSW):皮质内表面类骨质的平均宽度。
③骺板厚度测量
骺板厚度(EPT):甲苯胺蓝着色的骺板平均厚度。
大鼠左股骨测定骨力学,应用QTS-25流变仪测定骨力学、骨干重及灰重等指标,根据文献《J.L.Fercotti et al.Monophasic Dose-ResponseCurves of Betamethasone on Geometric and Mechanical Properties of FenurDiaphyses in Growing Rats BONE Vol 16 No1 January 1995:103~108》进行计算。
右侧胫骨测定骨无机元素(钙,用国际标准GB/T6436-92测定。磷,用国际标准GB/T6437-92测定)。
以上各项观察指标均进行统计学处理,进行组间比较。
试验结果
1、仙牛健骨颗粒对大鼠骨力学的影响。见表14和表15。
分组 | 最大载荷(N) | 最大桡度(mm) | 最大应力(MPa) |
对照组模型组尼尔雌醇组仙牛健骨大剂量组仙牛健骨中剂量组仙牛健骨小剂量组 | 5068.44±666.774472.15±429.34*5259.56±346.37###4781.25±489.86△4946.16±343.46#4942.55±599.97 | 0.151±0.0280.120±0.012**0.159±0.017###0.143±0.024#0.143±0.021##0.149±0.027## | 174.73±16.02159.46±11.99*176.76±15.33##165.94±12.93166.86±18.46158.10±18.99*△ |
与对照组比较:*P<0.05,**P<0.01;与模型组比较:#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001;与尼尔雌醇组比较:△P<0.05。
分组 | 弹性载荷(N) | 弹性桡度(mm) | 弹性应力(MPa) |
对照组模型组尼尔雌醇组仙牛健骨大剂量组仙牛健骨中剂量组仙牛健骨小剂量组 | 3423.43±660.622996.04±534.433384.72±378.082925.01±319.24*△△3223.84±497.973478.35±731.25 | 0.065±0.0180.053±0.0140.066±0.010#0.051±0.017△0.053±0.011△△0.068±0.028 | 117.67±16.82106.73±18.71113.55±12.09101.67±10.16*△108.90±19.41110.20±14.80 |
与对照组比较:*P<0.05;与模型组比较:#P<0.05;与尼尔雌醇组比较:△P<0.05,△△P<0.01。
测定结果表明:模型组骨力学指标中最大载荷、最大桡度、最大应力明显低于对照组(假手术组)P<0.05-0.001,仙牛健骨颗粒三个剂量组最大桡度与模型组比较有明显增强(P<0.05-0.01);中剂量组最大载荷与模型组比较有明显增强(P<0.05),仙牛健骨颗粒弹性载荷、弹性桡度、弹性应力与模型组比较无显著性差异但其测定值接近对照组,提示仙牛健骨颗粒有提高去势大鼠骨结构力学的作用,使骨组织承载能力趋于正常。
2.仙牛健骨颗粒对大鼠股骨皮、髓质面积、骨灰重及骨盐含量的影响。见表16和表17。
分组 | 皮质面积(mm2) | 髓质面积(mm2) | 壁厚度 |
对照组模型组尼尔雌醇组健骨大剂量组健骨中剂量组健骨小剂量组 | 7.08±0.857.63±0.696.74±0.56##7.41±0.46△△7.35±0.61△7.55±0.76△ | 3.17±0.413.47±0.462.82±0.54##3.39±0.44△3.20±0.363.40±0.43△ | 0.22±0.020.2±0.02**0.25±0.03*###0.21±0.01△△△0.23±0.02##△0.23±0.02##△ |
与对照组比较:*P<0.05,**P<0.01;与模型组比较:#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001;与尼尔雌醇组比较:△P<0.05,△△P<0.01,△△△P<0.001。
分组 | 股骨干重(g) | 股骨灰重(g) | 骨盐含量(g/g) |
对照组模型组尼尔雌醇组健骨大剂量组健骨中剂量组健骨小剂量组 | 0.9283±0.23120.9676±0.35840.6578±0.0600**#0.7863±0.19050.6765±0.0445***#0.6895±0.0589**# | 0.4331±0.03580.4292±0.04630.4114±0.03710.5032±0.18970.4191±0.03100.4181±0.0379 | 0.6373±0.00860.5920±0.0161***0.6255±0.0112*###0.6280±0.05730.6194±0.0122**###0.6061±0.0066***#△△△ |
与对照组比较:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;与模型组比较:#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001;与尼尔雌醇组比较:△P<0.05,△△P<0.01,△△△P<0.001。
以上结果表明,皮质面积、髓质面积模型组与对照组比较无明显差异。股骨壁厚度模型组明显小于对照组(P<0.01),仙牛健骨颗粒三个剂量组与模型组比较明显增厚,接近于对照组,尼尔雌醇组与对照组比较明显增厚(P<0.05)。骨盐含量模型组明显低于对照组差异非常显著(P<0.001),仙牛健骨颗粒三个剂量组与模型组比较明显增加(P<0.1~0.001)。
3、仙牛健骨颗粒对大鼠骨钙、骨磷的影响。见表18。
组别 | n | 骨钙(%) | 骨磷(%) |
对照组模型组尼尔雌醇组仙牛健骨大剂量组仙牛健骨中剂量组仙牛健骨小剂量组 | 1010991010 | 22.922±1.09922.374±0.68322.520±0.72621.242±0.76321.472±0.90420.860±0.747 | 10.895±0.44011.134±0.30810.921±0.33210.999±0.34011.531±0.34910.473±0.344 |
以上结果显示,胫骨骨钙、骨磷含量模型组与对照组比较无显著性差异。
4、仙牛健骨颗粒对大鼠胫骨骨形态学的影响
1)对大鼠胫骨骨小梁体积百分比(TBV%)的影响
模型组、仙牛健骨颗粒大、中、小剂量组大鼠的TBV%均显著低于正常对照组,而尼尔雌醇组无显著性差异。与模型组比较,仙牛健骨颗粒大、中剂量组和尼尔雌醇组的TBV%皆显著增高,而仙牛健骨颗粒小剂量组无显著性差异。见表19。
表19.各组大鼠胫骨TBV%的变化
组别 | N | TBV% |
对照组模型组尼尔雌醇组仙牛健骨大剂量组仙牛健骨中剂量组仙牛健骨小剂量组 | 101010101010 | 21.18±6.607.69±4.09*22.15±5.76##15.27±3.80*##12.39±4.20**#6.76±4.34** |
与对照组比较:*p<0.05,**p<0.01;与模型组比较:#p<0.05,##p<0.01。
2)对大鼠胫骨骨小梁吸收表面百分比(TRS%)的影响
与对照组比较,模型组、仙牛健骨颗粒大、中、小剂量组大鼠的TRS%皆显著增高,而尼尔雌醇组无显著性变化。与模型组比较,仙牛健骨颗粒大、中剂量组和尼尔雌醇组的FRS%均显著降低,而仙牛健骨颗粒小剂量组无显著性差异。见表20。
组别 | N | TRS% |
对照组模型组尼尔雌醇组仙牛健骨大剂量组仙牛健骨中剂量组仙牛健骨小剂量组 | 101010101010 | 4.26±0.8712.14±5.68**4.74±1.52##5.84±2.19*##7.49±2.80**#12.28±4.88** |
与对照组比较:*p<0.05,**p<0.01;与模型组比较:#p<0.05,##p<0.01。
3)对大鼠胫骨骨小梁形成表面百分比(TFS%)的影响
模型组、仙牛健骨颗粒大、中、小剂量组与正常对照组比较,TFS%皆显著增高,而尼尔雌醇组无显著性变化。仙牛健骨颗粒大、中剂量组和尼尔雌醇组与模型组比较,TFS%均显著降低,而仙牛健骨颗粒小剂量组无显著性变化。见表21。
表21.各组大鼠胫骨TFS%的变化
组别 | n | TFS% |
正常对照组模型组尼尔雌醇组仙牛健骨大剂量组仙牛健骨中剂量组仙牛健骨小剂量组 | 101010101010 | 4.31±1.5513.31±6.72**4.66±1.33##6.00±1.97*##7.80±3.75*#12.86±6.05** |
与对照组比较:*p<0.05,**p<0.01;与模型组比较:#p<0.05,##p<0.01。
5、对大鼠胫骨类骨质平均宽度(OSW)的影响
与对照组比较,模型组、仙牛健骨颗粒大、中、小剂量组的类骨质平均宽度均显著增高,而尼尔雌醇组无显著性变化。与模型组比较,仙牛健骨颗粒大剂量组和尼尔雌醇组的OSW皆显著降低,仙牛健骨颗粒中小剂量组虽有降低的趋势,但无统计学意义。见表22。
组别 | N | OSW(μm) |
对照组模型组尼尔雌醇组仙牛健骨大剂量组仙牛健骨中剂量组仙牛健骨小剂量组 | 101010101010 | 6.48±0.439.79±1.16**6.81±0.76##7.34±0.87*##8.80±1.05**9.16±1.38** |
与对照组比较:*p<0.05,**p<0.01;与模型组比较:##p<0.01。
6、对大鼠胫骨骺板(EPT)的影响
大鼠胫骨骨骺板,各组之间比较,皆无显著性差异。见表23。
组别 | n | EPT(μm) |
对照组模型组 | 1010 | 73.29±13.5270.72±12.32 |
尼尔雌醇组仙牛健骨大剂量组仙牛健骨中剂量组仙牛健骨小剂量组 | 10101010 | 74.74±13.9974.44±13.6476.21±12.7272.41±15.94 |
大鼠切除卵巢后,作为骨量主要标志的胫骨骨小梁体积百分比(TBV%)显著降低,而代表骨吸收参数的骨小梁吸收表面百分比(TRS%)以及代表骨形成参数的骨小梁形成表面百分比(TFS%)和类骨质平均宽度(OSW)均显著增高,表明卵巢切除所造成的是一种骨吸收大于骨形成的高转换型骨质疏松模型,这与国内外报道的结果相一致。大、中剂量的仙牛健骨颗粒以及尼尔雌醇能使上述指标发生逆转,可使TBV%显著增高,使TRS%和TFS%及OSW均明显降低。
以上结果表明:大、中剂量的仙牛健骨颗粒对卵巢切除所致的骨质疏松症具有明显的治疗作用。
实施例四
本实施例采用三月龄雄性大鼠,醋酸泼尼松灌胃给药,造成骨质疏松模型。观察仙牛健骨颗粒对醋酸泼尼松引起的骨质疏松的治疗作用。
试验材料
药物:仙牛健骨颗粒:同实施例三。醋酸泼尼松:5mg/片,批号:000903,天津太平洋制药有限公司生产。阿法骨化醇胶囊(D3):0.5μg/粒,批号:000701,海南轻骑海药股份有限公司海口市制药厂分装(临床用量0.5-1μg/日/人)。
动物:选用三月龄SD种雄性大鼠,二级,体重350g-400g,由中国科学院动物研究所提供,许可证编号:SCXK11-00-0002
饲养场所:中国中医研究院西苑医院实验动物中心为二级动物饲养设施,合格证号:北京医动字第01-4010号。饲料用北京九江口饲料厂提供大鼠饲料,执行标准GB14924-94。
方法
分组:(1)对照组;(2)模型组;(3)阳性药D3组0.2μg/kg;(4)仙牛健骨颗粒大剂量组12g生药/kg;(5)仙牛健骨颗粒中剂量组6g生药/kg;(6)仙牛健骨颗粒小剂量组3g生药/kg。
造模方法:除对照组外,其余各组均给予醋酸泼尼松(4.5mg/kg,2次/周)灌胃给药,造成骨质疏松模型。
给药方法:仙牛健骨颗粒各剂量组及D3组,每日灌胃给药一次,每周给药7天,每月称一次体重。
试验结束后,经腹主动脉取血,分离血清用放免法测定甲状旁腺素(PTH)、降钙素(CT)、骨钙素(BGP)。甲状旁腺素、降钙素、骨钙素放射免疫分析试剂盒由北京中国原子能科学研究院提供,批号200105。测试仪器:FT-630G全自动r计数仪。
不脱钙骨制片方法:取大鼠左侧胫骨近端1/3,去除软组织。用乙醇逐级脱水,二甲苯透明,每级各两次,每次24h。浸透液的配制:I液:甲基丙烯酸甲酯(北京益利精细化学品有限公司,批号:960523)75ml,邻苯二甲酸二丁酯(北京化学试剂公司,批号:970628)25ml:II液:在I液的基础上加过氧化苯甲酰(北京金龙化学试剂有限公司,批号:20000420)lg;Ⅲ液:在I液的基础上加过氧化苯甲酰2.5g。以上三液,用磁力搅拌器充分搅匀。标本在I、II、III液各浸透36h。在青霉素小瓶中注入约5ml的III液,将标本按同一方向放入瓶中,然后置于40℃烘箱中聚合3~4天,待变为无色透明的坚硬包埋块后,砸碎小瓶,取出包埋块。修块后,在Reicheit-Jung 2040切片机(德国)上,用钨钢刀分别切出5μm的纵向不脱钙骨切片。用二甲苯溶掉树脂后,梯度乙醇至水,甲苯胺蓝染色。
骨组织形态计量学指标的测定:按照《章明放等.运动对雌性大鼠去势后骨质疏松症的作用.中华骨科杂志,1994,14(6):365.》的方法,采用Leiea Qwin图象分析系统进行骨组织形态计量。计量结果皆以均数±标准差
表示,采用方差分析,两两比较采用q检验。
①骨小梁组织形态计量
骨小梁体积百分比(TBV%):骨小梁体积占被测骨髓腔总体积的百分比,是骨量水平的主要标志。
骨小梁吸收表面百分比(TRS%):不规则、凹凸不平的骨小梁表面占骨小梁表面的百分比。
骨小梁形成表面百分比(TFS%):有成骨细胞被覆的类骨质表面占骨小梁表面的百分比。
②皮质内表面形态计量
类骨质平均宽度(OSW):皮质内表面类骨质的平均宽度。
③骺板厚度测量
骺板厚度(EPT):甲苯胺蓝着色的骺板平均厚度。
大鼠左侧股骨应用QTS-25流变仪测定骨力学、骨干重及灰重等指标,根据文献《J.L.Fercotti et al.Monophasic Dose-Response Curves ofBetamethasone on Geometric and Mechanical Properties of Fenur Diaphysesin Growing Rats BONE Vol 16 No1 January 1995:103~108》进行计算。
以上各项观察指标均进行统计学处理,进行组间比较。
结果
1、仙牛健骨颗粒对大鼠胫骨骨形态学的影响
1)仙牛健骨颗粒对大鼠胫骨骨小梁体积百分比(TBV%)的影响
与正常对照组比较,模型组、仙牛健骨颗粒大、中、小剂量组大鼠胫骨骨小梁体积百分比(TBV%)均显著降低,D3组无显著性变化。与模型组比较,仙牛健骨颗粒大剂量组的骨小梁体积百分比均显著增高,中、小剂量组无显著性差异(P<0.01)。见表24。
组别 | N | TBV% |
对照组模型组D3组仙牛健骨大剂量组仙牛健骨中剂量组仙牛健骨小剂量组 | 101010101010 | 24.42±4.9312.69±3.31**21.53±3.65##17.53±2.72**##13.53± 2.07**13.64±2.28** |
与对照组比较:**p<0.01;与模型组比较:##p<0.01。
2)仙牛健骨颗粒对大鼠胫骨骨小梁吸收表面百分比(TRS%)的影响模型组、仙牛健骨颗粒大、中、小剂量组大鼠胫骨骨小梁吸收表面百分比较对照组均显著增高,D3组无显著性变化。与模型组比较,仙牛健骨颗粒大剂量组、D3组的骨小梁吸收表面百分比(TRS%)均显著降低;仙牛健骨颗粒中、小剂量组无显著性变化。见表25。
组别 | N | TRS% |
对照组模型组D3组仙牛健骨大剂量组仙牛健骨中剂量组仙牛健骨小剂量组 | 101010101010 | 3.89±0.966.56±1.66**4.48±0.92##4.89±1.14*#6.41±1.29**6.51±1.39** |
与对照组比较:*p<0.05,**p<0.01;与模型组比较:#p<0.05,##p<0.01。
3)仙牛健骨颗粒对大鼠胫骨骨小梁表面百分比(TFS%)的影响
与正常对照组比较:模型组、仙牛健骨颗粒中、小剂量组大鼠胫骨骨小梁表面百分比(TFS%)均显著降低;仙牛健骨颗粒大剂量组与D3组无显著性变化。仙牛健骨颗粒大剂量组、D3组的骨小梁表面百分比较模型组皆明显增高,仙牛健骨颗粒中、小剂量组无显著性变化。见表26。
组别 | N | TFS% |
对照组模型组D3组仙牛健骨大剂量组仙牛健骨中剂量组仙牛健骨小剂量组 | 101010101010 | 4.84±1.683.34±1.24*4.51±0.96#4.42±0.89#3.52±0.90*3.27±0.84* |
与对照组比较:*p<0.05;与模型组比较:#p<0.05。
4)仙牛健骨颗粒对大鼠胫骨类骨质平均宽度(OSW)的影响
仙牛健骨颗粒大剂量组、D3组的类骨质平均宽度与模型组比较,均显著增高,中、小剂量组无显著性变化。见表27。
组别 | N | OSW(μm) |
对照组 | 10 | 7.56±0.73 |
模型组D3组仙牛健骨大剂量组仙牛健骨中剂量组仙牛健骨小剂量组 | 1010101010 | 5.70±0.65**7.29±0.83##6.72±0.83*##6.23±0.61**5.87±0.62** |
与对照组比较:*p<0.05,**p<0.01;与模型组比较:###<0.01。
5)仙牛健骨颗粒对大鼠胫骨骨骺板(EPT)的影响
各组之间比较,大鼠胫骨骨骺板(EPT)均无显著性差异。见表28。
组别 | N | EPT(μm) |
对照组模型组D3组仙牛健骨大剂量组仙牛健骨中剂量组仙牛健骨小剂量组 | 101010101010 | 78.80±9.5479.06±14.7176.48±16.7676.19±14.5178.02±15.9879.59±14.71 |
骨组织形态计量学研究结果显示,泼尼松引起大鼠代表骨吸收参数的骨小梁吸收表面百分比(TRS%)显著增高,代表骨形成参数的骨小梁形成表面百分比(TFS%)、类骨质平均宽度(OSW)均显著降低,从而导致作为骨量主要标志的骨小梁体积百分比(TBV%)显著降低,即导致骨质疏松的发生。仙牛健骨颗粒大剂量和阳性药D3均能显著增高TBV%,降低TRS%。以上结果表明:仙牛健骨颗粒对泼尼松所致的大鼠骨质疏松症具有一定的治疗作用。
6)仙牛健骨颗粒对大鼠股骨干重、灰重及骨盐含量的影响。见表29。
分组 | 股骨干重(g) | 股骨灰重(g) | 骨盐含量(g/g) |
对照组模型组D3组健骨大剂量组 | 0.8539±0.11920.8387±0.08580.8553±0.06790.7671±0.0697△ | 0.5962±0.07260.5405±0.05310.5630±0.06080.5135±0.0556* | 0.7004±0.03500.6453±0.0283**0.6574±0.0300**0.6691±0.0330 |
健骨中剂量组健骨小剂量组 | 0.8568±0.05800.7771±0.0820 | 0.5610±0.03950.5090±0.0571** | 0.6547±0.0091***0.6546±0.0100** |
与对照组比较:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;与阳性药组比较:△P<0.05。
以上结果表明,股骨干重及灰重各给药组与模型组比较无明显差异。骨盐含量,仙牛健骨颗粒大剂量组与对照组相同,无显著性差异。其他各组的骨盐含量明显低于对照组(P<0.01)。
7)仙牛健骨颗粒对大鼠甲状旁腺素、降钙素、骨钙素的影响。见表30。
分组 | 甲状旁腺素(pmol/L) | 降钙素(pmo/L) | 骨钙素(ng/ml) |
对照组模型组D3组仙牛健骨大剂量组仙牛健骨中剂量组仙牛健骨小剂量组 | 90.4322±8.5751117.9340±11.0036***79.2345±10.6441*###82.2808±10.4635###133.3 168±11.2507***##183.9150±142.6191 | 22.9318±3.720114.8998±3.7089**31.3123±9.7954*###19.3149±4.4331#△△23.1081±10.2503#19.7002±4.2504#△△ | 20.6592±2.877048.5030±9.1697***31.1069±5.4919***###24.0425±5.6037###△20.2206±4.8508###△△△30.2845±4.4297***### |
与对照组比较:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;与模型组比较:#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001。
与D3组比较△P<0.05,△△P<0.01,△△△P<0.001。
结果显示:模型组与对照组比较甲状旁腺素明显增高(P<0.001),仙牛健骨颗粒大、中、小剂量组与模型组比较明显降低并接近于对照组水平;模型组与对照组比较降钙素明显降低(P<0.01),仙牛健骨颗粒三个剂量组与模型组比较明显增高(P<0.05),与对照组测定值相近;模型组与对照组比较骨钙素明显增高(P<0.001),仙牛健骨颗粒大、中剂量组与模型组比较明显降低(P<0.001),与对照组测定值无显著性差异。
8)仙牛健骨颗粒对大鼠骨力学的影响。见表31和表32。
分组 | 最大载荷(N) | 最大桡度(mm) | 最大应力(MPa) |
对照组 | 3968.18±567.15 | 0.1261±0.0260 | 145.09±15.96 |
模型组D3组仙牛健骨大剂量组仙牛健骨中剂量组仙牛健骨小剂量组 | 3868.53±576.024152.13±521.933964.73±684.133911.65±472.843686.48±363.64△ | 0.1175±0.02040.1273±0.02150.1229±0.01590.1235±0.00970.1233±0.0158 | 143.00±10.91145.38±10.73133.62±21.94129.12±16.50*#△141.33±16.20 |
与对照组比较:*P<0.05;与模型组比较:#P<0.05;△P<0.05。
分组 | 弹性载荷(N) | 弹性桡度(mm) | 弹性应力(MPa) |
对照组模型组D3组仙牛健骨大剂量组仙牛健骨中剂量组仙牛健骨小剂量组 | 2405.75±411.282441.83±401.742554.18±735.712577.06±702.502232.57±330.372186.10±233.99 | 0.053±0.0310.046±0.0170.047±0.0130.050±0.0130.051±0.0120.041±0.010 | 88.64±16.8690.57±12.3189.03±22.0387.67±26.3973.79±12.21*#84.65±15.83 |
与对照组比较:*P<0.05;与模型组比较:#P<0.05。
9)仙牛健骨颗粒对大鼠体重的影响。见表33。
分组 | 药前 | 药后1个月 | 药后2个月 | 药后3个月 |
对照组模型组D3组仙牛健骨大剂量组仙牛健骨中剂量组仙牛健骨小剂量组 | 356.00±33.87351.00±22.95366.70±37.68337.20±27.86390.20±27.61320.70±47.30 | 419.70±36.02420.30±25.18434.70±35.33414.10±32.45453.90±30.21422.40±22.34 | 472.60±64.34488.50±60.46485.00±38.72465.70±33.90513.00±32.82479.50±29.13 | 509.50±66.11521.30±61.16514.60±46.08487.20±41.80534.10±34.81499.00±34.51 |
各组给药前体重差异不明显。随着时间的增加各组大鼠体重也逐渐增加。仙牛健骨颗粒各组体重与模型组及对照组比较无明显差异。
糖皮质激素(GC)长期使用或间断用量过大,都可引起骨质疏松,其发病机理目前尚不清楚。应用泼尼松2次/周给药造成骨质疏松动物模型,观察仙牛健骨颗粒的治疗作用。结果表明;仙牛健骨颗粒改善泼尼松所致骨形态学的改变,显著增加骨小梁体积百分比(TBV%);降低骨小梁吸收表面百分比(TRS%);提升骨小梁形成表面百分比(TFS%)及类骨质平均宽度(OSW)。
对大鼠甲状旁腺素(PTTH)、降钙素(CT)、骨钙素测定结果表明:仙牛健骨颗粒可明显降低由泼尼松引发的甲状旁腺素及骨钙素的升高;提升降钙素水平。各组体重、骨力学未见明显改变。
以上结果表明:大剂量的仙牛健骨颗粒对泼尼松所致的大鼠骨质疏松症具有一定的治疗作用。
Claims (18)
1、一种治疗骨质疏松的药物,是由下述重量配比的原料制成的药剂:
淫羊藿440-530;补骨脂260-310;杜仲350-450;续断260-330;黄芪260-330;牛膝230-310;牡蛎40-55。
2.权利要求1的药物,其中各原料的重量配比是:淫羊藿500;补骨脂300;杜仲400;续断300;黄芪300;牛膝300;牡蛎50。
3.权利要求1或2的药物,其特征在于,所述的药剂是任何一种药剂学上所说的剂型。
4.权利要求3的药物,其特征在于,所述的药剂是颗粒剂。
5.权利要求1所述药物的制备方法,步骤有:
a)将牡蛎粉碎成细粉;
b)补骨脂加4-6倍量浓度为70-90%的乙醇提取2-4次,每次2小时,过滤,合并滤液;
c)淫羊藿、杜仲、续断、黄芪和牛膝一起加水煎煮1-3次,每次0.5-1.5小时,加水量为药材量的10-14倍,合并煎液,过滤,滤液浓缩至相对密度在50℃时为1.05-1.20,加乙醇使醇浓度达50-80%,放置过夜,过滤;
d)合并步骤b和步骤c的滤液,浓缩,减压干燥,粉碎成细粉,与步骤a制备的牡蛎细粉混合;
e)在步骤d的产品中加入重量比1.0-2.0%的甜味剂和重量比0.5-1.5倍的稀释剂,混匀;
所述甜味剂为甜叶菊苷、甜菜碱、阿司帕坦、甘草甜素或糖精钠;
所述稀释剂为淀粉、糊精或乳糖。
6.权利要求5的制备方法,其特征在于,所述甜味剂为阿司帕坦。
7.权利要求5的制备方法,其特征在于,所述稀释剂为糊精。
8.权利要求5的制备方法,其特征在于,步骤b的乙醇浓度为70%。
9.权利要求5的制备方法,其特征在于,步骤b中乙醇加入量为4倍。
10.权利要求5的制备方法,其特征在于,步骤b中乙醇提取次数为3次。
11.权利要求5的制备方法,其特征在于,步骤c中加水量为14倍。
12.权利要求5的制备方法,其特征在于,步骤c中煎煮次数为3次。
13.权利要求5的制备方法,其特征在于,步骤c中每次煎煮时间为1小时。
14.权利要求5的制备方法,其特征在于,步骤c中的滤液浓缩至相对密度在50℃时为1.10-1.15。
15.权利要求5的制备方法,其特征在于,步骤c中加入乙醇使醇浓度达70%。
16.权利要求5的制备方法,其特征在于,步骤d中减压干燥至相对密度在50℃时为1.25-1.30。
17.权利要求5的制备方法,其特征在于,步骤e得到的产品用浓度为80-90%的乙醇制粒,干燥,得颗粒剂产品。
18.权利要求1或2所述药物在制备治疗骨质疏松的药中的应用。
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CN101390960B (zh) * | 2008-11-11 | 2011-04-13 | 南京同仁堂药业有限责任公司 | 一种治疗气虚肾亏血瘀型骨质疏松症的药物组合物及其制备方法 |
CN103185767A (zh) * | 2012-12-11 | 2013-07-03 | 河南省康星药业股份有限公司 | 淫益增蛋超微粉成分补骨脂素及异补骨脂素的鉴别方法 |
CN104922198A (zh) * | 2015-06-05 | 2015-09-23 | 宋云飞 | 一种用于治疗骨质疏松症的药物 |
CN104906499A (zh) * | 2015-06-26 | 2015-09-16 | 吴强 | 一种治疗肝肾阴虚型骨质疏松的药物与及其制备方法 |
CN105250680A (zh) * | 2015-10-05 | 2016-01-20 | 淄博齐鼎立专利信息咨询有限公司 | 一种用于治疗骨质疏松的药物制剂 |
CN115770266B (zh) * | 2023-01-30 | 2023-05-09 | 云南中医药大学 | 一种用于治疗绝经后骨质疏松的药物组合物 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1200279A (zh) * | 1997-05-27 | 1998-12-02 | 贵州绿色实业有限公司 | 一种防治骨质疏松的药物 |
CN1253012A (zh) * | 1998-11-06 | 2000-05-17 | 卿多舜 | 抗骨松片等制剂及制备方法 |
CN1368175A (zh) * | 2001-01-31 | 2002-09-11 | 杨孟君 | 纳米山鸡大补制剂药物及其制备方法 |
CN1413702A (zh) * | 2002-11-19 | 2003-04-30 | 贵州神奇制药有限公司 | 金乌骨通胶囊及其制备工艺 |
CN1579442A (zh) * | 2003-08-14 | 2005-02-16 | 广州中医药大学附属骨伤科医院 | 一种骨质疏松症治疗药物及其生产方法 |
-
2005
- 2005-05-19 CN CNB2005100117425A patent/CN100352464C/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1200279A (zh) * | 1997-05-27 | 1998-12-02 | 贵州绿色实业有限公司 | 一种防治骨质疏松的药物 |
CN1253012A (zh) * | 1998-11-06 | 2000-05-17 | 卿多舜 | 抗骨松片等制剂及制备方法 |
CN1368175A (zh) * | 2001-01-31 | 2002-09-11 | 杨孟君 | 纳米山鸡大补制剂药物及其制备方法 |
CN1413702A (zh) * | 2002-11-19 | 2003-04-30 | 贵州神奇制药有限公司 | 金乌骨通胶囊及其制备工艺 |
CN1579442A (zh) * | 2003-08-14 | 2005-02-16 | 广州中医药大学附属骨伤科医院 | 一种骨质疏松症治疗药物及其生产方法 |
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Publication number | Publication date |
---|---|
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