CN101164536A - 芹菜素囊泡制剂及其制备工艺 - Google Patents

Abstract

本发明提供了芹菜素囊泡制剂及其制备工艺。该制剂按重量体积百分比如下：芹菜素为0.25％－20％，非离子表面活性剂为40％－90％，胆固醇为8.7－48.8％，冻干保护剂为2％－20％。所说的非离子表面活性剂为司盘20、司盘40、司盘60、司盘80、吐温20、吐温60、吐温80、苄泽、卖泽、泊洛沙姆及其混合物；本发明可以制成注射剂、滴鼻剂、软膏剂、口服液等制剂，可以经静脉、肌肉、鼻腔、口腔等途径给药。采用乙醇注入法、薄膜分散法、反相蒸发法、水化法、挤出法、机械法，pH梯度法等制备。本发明制剂具有较高的包封率，提高了药物稳定性，具有明显的缓释作用。

Description

芹菜素囊泡制剂及其制备工艺

技术领域：

本发明涉及医药技术领域，确切地说它是利用非离子表面活性剂与芹菜素形成的芹菜素囊泡制剂及其制备工艺。

背景技术：

芹菜素(5，7，4’-三羟基黄酮)属于黄酮类，广泛存在于伞形科植物旱芹(Apium graveolens var.dulce)叶；卷柏科卷柏(Selaginellatamariscina)全草；柏科圆柏(Sabina chinensis)叶中。芹菜素具有多种药理活性：(1)抗肿瘤作用：芹菜素可以使乳腺癌细胞(MCF-7和MDA-MB-468)发生G2/M期阻滞。用芹菜素处理细胞3 d后，细胞的生长均受到明显的抑制，其IC50分别为7.18μg/ml和8.19μg/ml；芹菜素可以使人类前列腺癌细胞及人类白血病细胞HL-60发生选择性周期阻滞，并诱导细胞凋亡。其诱导凋亡的机制可能是通过细胞色素C的释放及切冬酶(casep2ase-9、casepase-3)的激活而实现(Anticancer Res，2001，21(1A)：413 420)；芹菜素可以抑制黑色素瘤细胞的侵袭和转移，以芹菜素作用于小鼠随后向其尾静脉注射黑色素瘤细胞，14～18d后小鼠断髓处死，并记数鼠肺中黑色素瘤细胞的克隆数。结果显示，芹菜素可以明显降低肺组织中黑色素瘤细胞克隆数量，且呈剂量依赖关系(Int JCancer，2000，87：595-600.)。(2)抗炎作用：急、慢性炎症的发生均和NO有关，NO是由NO合酶(NOS)催化合成的，而在病理状态下过多的NO是由诱导型NO合酶(iNOS)催化生产的，芹菜素可显著抑制脂多糖(LPS)引起的巨噬细胞iNOS高表达，因而能够显著降低细胞内NO含量，然而芹菜素对iNOS本身的活力并没有影响(action.Bioorg Med Chem，2003，11(9)：1995)。(3)降血压和舒张血管作用：对原发性高血压的降压效果明显，且未发现快速耐受现象，关于降压机制的初步分析，认为主要是通过颈动脉体和主动脉弓的化学感受器的反射作用引起的(中药活血化瘀有效成分药理与应用.哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1999：22)。(4)抗动脉硬化和血栓症：芹菜素-7-0-β-D-吡喃葡萄糖醛酸可显著减少12-HETE的产生，说明芹菜素及其苷可通过抑制血小板的花生四烯酸代谢途径来抵抗动脉硬化和血栓形成(旱柳叶中抗血栓、抗动脉硬化活性成分的研究.中药材，1999，22(3)：13)。(5)抗焦虑作用：与传统的抗焦虑药苯二氮类药物(BDZ)相同，芹菜素可与GA-BA-BDZ-C1受体复合物的BDZ受体结合，通过增强GABA能神经传递来发挥抗焦虑作用，然而与BDZ相比，芹菜素只有微弱的镇静催眠作用，不会产生肌肉松驰和抗惊厥作用，因而副作用大大降低(effects.Planta Med，1995，61：213)。(5)雌激素样作用：芹菜素是一种植物性雌激素，与雌激素结构相似，有雌激素和抗雌激素样作用。芹菜素(10I9M)可以抑制卵巢分泌雌激素和孕激素(锦州医学院学报，2005.Dec.，26(6)，(9-12))。也有将芹菜素用于治疗脂肪肝、肥胖症和作为软骨再生剂用于治疗骨关节炎的报道(中国专利申请号03127190.1和200480030411.X)，但芹菜素相关制剂及临床应用的其它研究，迄今为止未见国内外文献报道。

发明内容：

本发明的目的是提供一种中药黄酮类囊泡制剂，即芹菜素囊泡制剂。本发明是通过如下技术方案完成的：本发明所涉及的基本处方(液体，按重量体积算)如下：

芹菜素：0.25％-20％；

非离子表面活性剂：40％-90％；

胆固醇：8.7％-48.8％；

所说的非离子表面活性剂为司盘20、司盘40、司盘60、司盘80、吐温20、吐温60、吐温80、苄泽、卖泽、泊洛沙姆或其任意比例混合物。

囊泡、前体囊泡的制备如下：

(1)芹菜素囊泡的制备

按比例将芹菜素、非离子表面活性剂与(或不与)胆固醇共同溶于有机溶剂如乙醇、乙醚、氯仿和二氯甲烷及其混合溶液中，水相介质为水或缓冲液(包括磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、酒石酸盐缓冲液，pH＝4.0-8.0)，采用薄膜分散超声法、乙醇注入法、逆相蒸发法制得芹菜素囊泡溶液。

(2)芹菜素前体囊泡的制备

于上述囊泡中加入支撑剂(支撑剂为一种或任何两种或两种以上混合的多元醇，海藻糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷、甘露醇及其混合物)，溶解后，进行喷雾干燥或冷冻干燥即得。

采用上述冷冻干燥法和喷雾干操法方法所获得的芹菜素前体囊泡再水化时，能够重新分散(或重建)成粒度和形态与原液中的囊泡无显著差别的囊泡。

(3)包封率测定：评价脂质体质量的指标有粒径、粒径分布和包封率等。其中包封率是衡量脂质体内在质量的一个重要指标。常见的包封率测定方法有凝胶柱法、超速离心法、超滤法等。我们采用微柱离心法测定包封率，具有样品用量少、耗时短、操作简单、成本低等优点。

具体方法：取芹菜素囊泡0.2ml各两份，一份直接加入5ml容量瓶中，加入适量TritonX100，用蒸馏水定容后测定吸光度；另一份加入离心(2000r/min)后的Sephadex G-50凝胶小柱，收集前两管离心液，加入适量TritonX100后定容于5ml容量瓶中测定吸光度(A)，按下列公式计算包封率。(芹菜素的最大吸收波长为：312nm)

E％＝(A₁/A₂)×100％

其中，E％为包封率；A₁为过凝胶柱样品的A值；A₂为未过凝胶柱样品的A值。

囊泡可以为了提高囊泡贮存过程中的稳定性，还可在囊泡溶液中加入适当的支撑剂，经冷冻干燥和喷雾干燥将其制成前体囊泡，并可用此前体囊泡制备无菌粉针、片剂、颗粒剂、胶囊剂等。

本发明的优点：本发明选择适宜的非离子表面活性剂将芹菜素制成囊泡，本发明具有较高的包封率，粒径较小。所制得的囊泡按芹菜素计包封率在60％以上，粒径为160-220nm。提高生物利用度，并实现靶向给药目的，具有明显的缓释作用，从而延长药物的作用时间。所述的囊泡可以制成注射剂、口服剂型、糖浆、滴剂、喷鼻剂、外用软膏等制剂，可以经静脉、肌肉、口腔、鼻腔等途径给药。

附图说明：

图1为0.5小时小鼠体内组织分布图。

图1为1小时小鼠体内组织分布图。

图1为3小时小鼠体内组织分布图。

图1为5小时小鼠体内组织分布图。

图1为8小时小鼠体内组织分布图。

图中SL AP表示芹菜素溶液组，Nios AP表示芹菜素囊泡组。

具体实施方式：

芹菜素囊泡在小鼠体内的组织分布研究：

昆明种小鼠随机分成两组，以注射芹菜素水针剂的一组为对照组，另外一组注射芹菜素囊泡，使每组中每个时间点均有6只动物。12h前禁食不禁水，尾静脉注射，2.0mg/kg，给药后于不同时间点0.5h，1h，3h，5h，8h摘除眼球取血后处死，取心、肝、脾、肺、肾、脑组织。取各组织约0.1g加入生理盐水匀浆(小于0.1g的组织直接匀浆)，加入10μl水飞蓟宾内标液(0.4mg/mL)，涡旋混匀，加入1mL甲醇沉淀蛋白，涡旋混匀后4000rpm/min离心15min精密移取上清液至离心管中，氮气吹干，加入200μl流动相溶解，进HPLC检测。色谱条件：Shimadzu色谱柱(250mm×4.6mm)，流动相为水(0.1％磷酸)∶乙腈(体积比为45∶55)，流速1.0mL/min，检测波长312nm，进样量为20μL。数据处理方法：小鼠体内组织分布的血药浓度数据用中国药理学会数学药理委员会编制的3P8 7药动学程序进行处理。药时曲线下面积(AUC_0-8)分别由梯形法求得，并经过对数转换后进行方差分析。附图1-5.

组织分布结果表明，制剂组明显延长了药物在体内的循环时间，生物利用度为129％，具有明显的缓释作用。

实施例1：芹菜素囊泡的制备

处方：

芹菜素                 0.05g

Tween 80               0.5g

胆固醇                 0.25g

乙醇                   适量

pH7.4的磷酸盐缓冲液    适量

制成                   100mL

制备工艺：称取处方量的芹菜素、Tween 80和胆固醇于烧杯中，加入适量乙醇溶解，在55℃水浴条件下，注入到pH 7.4的磷酸盐缓冲液中，制得芹菜素囊泡溶液。所得囊泡进行包封率测定，包封率为65.80％。

实施例2：芹菜素囊泡的制备

处方：

芹菜素                 0.05g

Span80                 0.4g

胆固醇                 0.20g

乙醇                   适量

pH7.4的磷酸盐缓冲液    适量

制成                   100mL

制备工艺：同上，包封率为60.68％。

实施例3：芹菜素囊泡的制备

处方：

芹菜素                 0.05g

卖泽                   0.50g

胆固醇                 0.20g

乙醇                   适量

pH7.4的磷酸盐缓冲液    适量

制成                   100mL

制备工艺：称取处方量的芹菜素、卖泽和胆固醇于烧杯中，加入适量的乙醇和氯仿混合溶剂溶解后，减压蒸发除去有机溶剂成薄膜，加入磷酸盐缓冲液，水化1～2小时，高压均质机处理5分钟，过0.22um滤膜，得芹菜素囊泡溶液。所得囊泡进行包封率测定，包封率为68.62％。

实施例4：芹菜素囊泡的制备

处方：

芹菜素                 0.05g

苄泽                   0.40g

胆固醇                 0.20g

乙醇                   适量

pH7.4的磷酸盐缓冲液    适量

制成                   100mL

制备工艺：同上，包封率为69.52％。

实施例5：芹菜素囊泡的制备

处方：

芹菜素                 0.05g

Tween80                0.30g

卖泽                   0.10g

胆固醇                 0.20g

乙醇                   适量

pH7.4的磷酸盐缓冲液    适量

制成                   100mL

制备工艺：同上，包封率为65.56％。

实施例6：芹菜素囊泡的制备

处方：

芹菜素                 0.05g

Tween80                0.40g

Span80                 0.10g

胆固醇                 0.20g

乙醇                   适量

pH7.4的磷酸盐缓冲液    适量

制成                   100mL

制备工艺：同上，包封率为68.09％。

实施例7：芹菜素前体囊泡的制备

处方：

芹菜素            0.05g

Tween80           0.50g

胆固醇            0.20g

乙醇              适量

蒸馏水            适量

制成              100mL

制备工艺：同实例1，包封率为70.47％。在此囊泡中加入2％的甘露醇，溶解后进行冷冻干燥，得前体囊泡，该前体囊泡水化后的包封率为65.15％。

实施例8：芹菜素前体囊泡的制备

处方：

芹菜素          0.05g

Tween80         0.40g

卖泽            0.10g

胆固醇          0.20g

乙醇            适量

蒸馏水          适量

制成            100mL

制备工艺：同实例1，包封率为73.47％。在此囊泡中加入5％的乳糖，溶解后进行喷雾干燥，得前体囊泡，该前体囊泡水化后的包封率为69.48％。

Claims (8)

1.芹菜素囊泡制剂，其特征在于：组分组成按重量百分比如下：

芹菜素：0.25％-20％；

非离子表面活性剂：40％-90％；

胆固醇：48.9％-8.7％。

2.根据权利要求1所述的芹菜素囊泡制剂，其特征在于：所述的非离子表面活性剂为司盘20、司盘40、司盘60、司盘80、吐温20、吐温60、吐温80、苄泽、卖泽、泊洛沙姆或其任意比例混合物。

3.根据权利要求1所述的芹菜素囊泡制剂，其特征在于：制剂可以为注射剂、滴鼻剂、软膏剂、口服液。

4.根据权利要求3所述的芹菜素囊泡制剂，其特征在于：注射剂包括注射液和无菌粉针。

5.根据权利要求4所述的芹菜素囊泡制剂，其特征在于：无菌粉针为注射液中加入适当支持剂或赋形剂，通过喷雾干燥和冷冻干燥获得。

6.根据权利要求5所述的芹菜素囊泡制剂，其特征在于：所述的支持剂为一种或任何两种或两种以上混合的多元醇，海藻糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖、右旋糖营、甘露醇及其混合物。

7.一种如权利要求1所述的芹菜素囊泡制剂的制备方法，其特征在于：可以采用乙醇注入法、薄膜分散法、反相蒸发法、水化法、挤出法、机械法，pH梯度法等。

8.根据权利要求7所述的芹菜素囊泡制剂的制备方法，其特征在于：机械法包括使用均质机、乳匀机、挤出仪、纳米机、匀浆机、高压微射流等各种机械设备制备囊泡的方法。

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