CN101163702B

CN101163702B - 制备无菌的3-[2-[4-(6-氟-1,2-苯并异唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6,7,8,9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮棕榈酸酯的方法

Info

Publication number: CN101163702B
Application number: CN2006800138227A
Authority: CN
Inventors: T·F·E·斯皮塔尔斯; J·P·范邓恩; J·A·弗布拉肯; B·沃特斯
Original assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Current assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Priority date: 2005-04-25
Filing date: 2006-04-20
Publication date: 2011-09-07
Anticipated expiration: 2026-04-20
Also published as: HK1117521A1; CN101163702A; WO2006114384A1; JP5249748B2; JP2008538780A; US20080214808A1; EP1879890A1

Abstract

本发明涉及一种制备无菌的结晶3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮棕榈酸酯(I)的方法，其基本上不含3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(II-a)、3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7-二氢-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]-嘧啶-4-酮(II-b)及3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异唑-3-基)-1-哌啶基]-乙基]-6，7，8，9-四氢-2-甲基-9-十五烷基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(III)，且具有20-150μm的平均粒度。

Description

制备无菌的3-[2-[4-(6-氟-1,2-苯并异唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6,7,8,9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮棕榈酸酯的方法

发明背景

本发明涉及一种制备无菌的结晶3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮棕榈酸酯(I)的方法，其基本上不含3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(II-a)、3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7-二氢-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(II-b)及3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-2-甲基-9-十五烷基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(III)，而且具有20-150μm，优选是20-80μm的平均粒度。3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮棕榈酸酯(I)还称为帕潘立酮棕榈酸酯；式(II-a)的化合物也称为帕潘立酮。

在EP-0,368,388(US-5,158,952)中，公开了式(I)的3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮棕榈酸酯。

EP-0,904,081及EP-1,033,987公开了“亚微米”帕潘立酮棕榈酸盐(I)的水性悬浮液，适用为储库(depot)制剂，当其肌内注射给药温血患者时约1个月内治疗有效。在药物研发中，帕潘立酮棕榈酸盐(I)的无菌制剂最初是通过伽马辐照获得。分析受辐照的帕潘立酮(I)时，此方法得到三种分解产物：最高达0.24％的3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(II-a)及3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7-二氢-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]-嘧啶-4-酮(II-b)，其在分析HPLC法中一起洗脱下来且在下文中全体命名为(II)，

及最高达0.46％的3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-2-甲基-9-十五烷基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(III)。

为了避免形成分解产物(II)[即，(II-a)和(II-b)]及(III)，考虑灭菌化合物(I)的多种其他技术。微孔过滤灭菌是不可能的，因为“亚微米”帕潘立酮棕榈酸盐(I)的水性悬浮液将要堵塞过滤器孔隙。加热灭菌证明是不可能的，因为化合物(I)在116.5-119.5℃之间熔融。

开发帕潘立酮棕榈酸盐(I)的无菌制备方法并处理其粒度分布的双重目的在本发明中实现，其提供了一种制备无菌的结晶的式(I)的3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮棕榈酸酯的方法，

其基本上不含3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-2-甲基-9-十五烷基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(III)，且具有20-150μm，优选是20-80μm的平均粒度，

所述方法包括以下步骤：

a)加热3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮棕榈酸酯(I)和胃肠外用等级的乙醇至72℃-78℃；

b)经过无菌0.22μm过滤器过滤溶液进入无菌的结晶反应器；

c)在冷却下使3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮棕榈酸酯结晶；和

d)过滤出由此得到晶体；或者

e)再加热由此得到的悬浮液至72℃-78℃；

f)在冷却下使3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

g)过滤出晶体。

术语“无菌”和“灭菌”在此可互换使用，指的是“没有或不含微生物”。步骤b)之后的所有操作是在使用隔离器技术的完全封闭的环境下无菌进行。

含有步骤a)、b)、c)、e)、f)和g)的方法，即包含两次加热循环的工艺，是更加坚固的，因为其在结晶过程和颗粒的粒度分布中给予最好控制。

在步骤e)中达到的温度及步骤f)中的冷却速率，对于无菌的帕潘立酮棕榈酸酯(I)的粒度分布是特别重要的。再加热至仅低于回流温度(＜77℃)并以0.5℃/分的速率冷却，得到具有平均粒度为约80微米的晶体。再加热至仅低于回流温度(＜77℃)并以1℃/分的速率冷却，得到具有平均粒度为约50-60微米的晶体。在两个实例中，结晶是在约60℃时开始。这些条件和参数是装置特定的(在此对于30L反应器而言)且使用更大的装置时可以变化。

再加热至回流温度(78℃)，并且快速冷却得到具有约20-30微米平均粒度的晶体。优选是步骤f)中的冷却速率是尽可能快。

尽管前面提及，包含步骤a)、b)、c)和d)的方法是仅包含一次加热循环的操作，也是能可行的，因为可从实施例部分的具体实施例中看出。

在本发明的进一步方面，提供了一种以上所述的方法，所述方法包括以下进一步的步骤：

h)在无菌的含表面活性剂及任选的助悬剂和缓冲剂的水溶液中，悬浮步骤d)或g)中得到的晶体；

i)在研磨介质存在下，研磨步骤h)的悬浮液至具有比表面积＞4m²/g的颗粒；

j)过筛步骤i)的悬浮液以除去研磨介质；

k)用无菌的任选包含助悬剂、缓冲剂和抗氧化剂的水溶液稀释并混合步骤j)的溶液；和

l)把筛分的悬浮液装入无菌容器。

这些进一步的操作步骤是从EP-0,904,081和EP-1,033,987中得知。特别地，含表面活性剂及任选的助悬剂和缓冲剂的水的无菌溶液是这样制得的，把表面活性剂及任选的助悬剂和缓冲剂溶解于注射用水并在121℃加热30分钟或微孔过滤灭菌由此得到溶液。研磨操作是按照EP-0,499,299所述的湿法研磨方法。

本发明的颗粒具有吸附在其表面上的表面活性剂或表面改性剂，其量为足以得到比表面积＞4m²/g(即，相当于小于2,000nm的平均粒度)，优选是比表面积＞6m²/g，特别是10-16m²/g。有用的表面改性剂认为是包括物理上粘附于活性剂的表面但不化学键合的那些。

适宜的表面改性剂优选可以是选于已知的有机和无机的药用赋形剂。这样的赋形剂包括多种聚合物、低分子量的低聚物、天然产物和表面活性剂。优选的表面改性剂包括非离子和阴离子的表面活性剂。赋形剂的代表性实例包括明胶、酪蛋白、卵磷脂(磷脂)、阿拉伯胶、胆固醇、西黄蓍胶、硬脂酸、苯扎氯铵、硬脂酸钙、单硬脂酸甘油酯、十六十八醇、西土马哥乳化蜡、山梨坦酯、聚氧乙烯烷基(allcyl)醚类例如聚乙二醇醚类(macrogol)如聚乙二醇1000单鲸蜡基醚(cetomacrogol 1000)，聚氧乙烯蓖麻油衍生物类、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯，例如商业上购得的吐温类^TM、聚乙二醇类、聚氧乙烯硬脂酸酯、胶体二氧化硅、磷酸酯、十二烷基硫酸钠、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、酞酸羟丙基甲基纤维素、非晶纤维素、硅酸镁铝、三乙醇胺、聚乙烯醇(PVA)、泊洛沙姆、泰洛沙泊和聚乙烯吡咯酮(PVP)。大多数的这些赋形剂是详细描述于《药用赋形剂手册》，由American PharmaceuticalAssociation和The Pharmaceutical Society of Great Britain共同出版，Pharmaceutical Press，1986年。表面改性剂的是商业上购得的和/或可以通过现有技术已知的工艺制得。两种或多种表面改性剂可以联合使用。

特别优选的表面改性剂包括聚乙烯吡咯烷酮、泰洛沙泊、泊洛沙姆如Pluronic^TMF68、F108和F127，其是从BASF得到的环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚物；poloxamines，如Tetronic^TM 908(T908)，其是从BASF得到的衍生自向中氨茶碱中依次加入环氧乙烷和环氧丙烷的四官能嵌段共聚物；葡聚糖、卵磷脂，Aerosol OT^TM(AOT)，其是从Cytec Industries得到的磺基琥珀酸钠的十六烷基酯；Duponol^TM P，其是从DuPont得到的月桂基硫酸钠；Triton^TM X-200，其是从Rohm和Haas得到的烷基芳基聚醚磺酸酯；Tweens^TM 20、40、60和80，其是从ICI Speciality Chemicals得到的聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯；Span^TM 20、40、60和80，其是脂肪酸的脱水山梨糖醇酯；Arlacel^TM 20、40、60和80，其是从Hercules，Inc.得到的脂肪酸的脱水山梨糖醇酯； Carbowax^TM 3550和934，其是从Union Carbide得到的聚乙二醇；Crodesta^TM F110，其是从Croda Inc.得到的蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯的混合物；Crodesta^TM SL-40，其是从Croda，Inc.得到；己基癸基三甲基氯化铵(CTAC)；牛血清白蛋白和SA90HCO，其是C₁₈H₁₇CH₂(CON(CH₃)CH₂(CHOH)₄CH₂OH)₂。已发现特别有用的表面改性剂包括泰洛沙泊和泊洛沙姆，优选是Pluronic^TM F108和PluronicTMF68，及聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯，优选是Tween^TM 20。

Pluronic^TM F108相当于泊洛沙姆338，为聚氧乙烯、聚氧丙烯嵌段共聚物，一般符合分子式HO[CH₂CH₂O]_x[CH(CH₃)CH₂O]_y[CH₂CH₂O]_zH，其中x、y和z的平均值分别为128、54和128。泊洛沙姆338的其他商品名是HodagNonionic^TM 1108-F，从Hodag得到，以及Synperonic^TMPE/F108，从ICIAmericas得到。

帕潘立酮棕榈酸盐及表面改性剂的最佳相对量取决于多种参数。表面改性剂的最佳量可取决于，例如所选的具体表面改性剂、如果形成胶束的表面改性剂的临界胶束浓度、(I)的表面积等。特定的表面改性剂存在量优选是0.1-1mg/平方米表面积的(I)。在Pluronic^TM F108用作表面改性剂的情况下，约是6∶1的(I)：表面改性剂的比例(w/w)是优选的。当Tween^TM 20是表面改性剂时，约13∶1的(I)：表面改性剂的比例(w/w)是优选的。

如在此所用的，少于2,000nm的有效平均粒度是指当通过本领域已知的常规技术测量时，至少90％的颗粒具有小于2,000nm的直径，如沉降场流动分级、光子相关光谱或碟式离心。关于有效平均粒度，优选的式至少95％，更优选是至少99％的颗粒具有小于有效平均粒度的粒度，例如2,000nm。更特别地，基本上所有颗粒具有小于2,000nm的粒度。

用于粒度减少步骤的研磨介质是选自硬质的介质，优选是球状的或微粒形，具有小于3mm的平均粒度，更优选是小于1mm。这种介质期望可以提供给本发明的颗粒更短的加工时间及给予研磨装置的更少的研磨。用于研磨介质的材料的选择不认为是关键的。然而，用氧化镁稳定的95％ZrO、硅酸锆和玻璃研磨介质提供给颗粒具有认为是制备药物组合物可接受的污染水平。进一步地，其他介质如多聚体的念珠、不锈钢、钛、氧化铝及用钇稳定的95％ZrO是有用的。优选的研磨介质具有大于2.5g/cm³的密度，并包括用氧化镁和聚合珠稳定的95％ZrO。

研磨时间可以在很大程度上变化，主要取决于所选的特定机械工具和加工条件。

颗粒必须是在一定温度下粒度减小，所述温度不显著降解抗精神病剂。低于30-40℃的加工温度通常是优选的。如果需要，加工装置可以用常规的冷却设备冷却。方法便于在室温和加工压力的条件下进行，对于研磨操作其是安全和有效的。

本发明的水性组合物合宜地进一步包含助悬剂、缓冲剂和抗氧化剂。特定的成分可以同时作为这些试剂的两种或多种起作用，例如，如防腐剂和缓冲剂的作用，或缓冲剂和等渗剂的作用，或如缓冲剂和抗氧化剂。

用于本发明的水性悬浮液的适合的助悬剂是纤维素衍生物，例如甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、藻酸盐、壳聚糖、葡聚糖、明胶，聚乙二醇、聚氧乙烯-和聚氧丙烯醚类。优选地，羧甲基纤维素钠是以0.5-2％的浓度使用，更优选地是1％(w/v)。用于本发明的水性悬浮液的适合的润湿剂是脱水山梨糖醇酯的聚氧乙烯衍生物，例如聚山梨酯20和聚山梨酯80、卵磷脂、聚氧乙烯-和聚氧丙烯醚类、脱氧胆酸钠。优选地聚山梨酯20是以0.5-3％的浓度使用，更优选地是0.5-2％，最优选地是1.1％(w/v)。

适合的缓冲剂是弱酸盐，应当是以足以给予分散液中性至稍微碱性(最高达pH8.5)的量使用，优选是7-7.5的pH范围。特别优选的是使用磷酸氢二钠(无水的)(通常为约0.9％(w/v))和磷酸二氢钠(通常为约0.6％(w/v))的混合物。这种缓冲剂还给与分散液等张，此外较少倾向于絮凝在此悬浮的酯。柠檬酸是用作抗氧化剂。

可填充帕潘立酮棕榈酸酯(I)的适合的无菌容器包含无菌的保温管及无菌的注射器，其可和适合的针头包装成最终用户包装。

本发明还涉及无菌的结晶3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮棕榈酸酯(I)，其基本上不含3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(II-a)、3- [2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7-二氢-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(II-b)和3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-2-甲基-9-十五烷基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(III)，并具有20-80μm的平均粒度。

更特别地，本发明涉及无菌的结晶3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮棕榈酸酯(I)，其含有少于0.5％的3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7-二氢-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(II-b)和少于0.01％的3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-2-甲基-9-十五烷基-4H-吡啶并[1，2-a]-嘧啶-4-酮(III)，并具有20-80μm的平均粒度。

进一步，本发明涉及无菌结晶的3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]-嘧啶-4-酮棕榈酸酯(I)，其基本上不含3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7-二氢-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(II-b)和3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-2-甲基-9-十五烷基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(III)，并具有大于4m²/g的比表面积。

实施例部分

比较实施例

在不同的容器中，化合物(I)是用不同剂量的伽马射线辐照。分解产物(II)[即，化合物(II-a)和(II-b)的量之和]和(III)的量是取决于剂量的增加。

实施例1：典型试验装置下的GMP批次

所有装置是使用以下技术灭菌：

-蒸汽灭菌

-干热灭菌

-汽化的过氧化氢(VHP)灭菌

-伽马辐照

为了提高过程的灭菌保证，灭菌的所有关键操作是在隔离器中进行。

反应容器充入3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]- 6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮棕榈酸酯(2.5kg)和胃肠外用等级的乙醇(7L/kg)，并在搅拌下加热至回流温度(78-79℃)。产物在约70℃下溶解。溶液在76℃下通过无菌的0.22μm过滤器滤进入玻璃结晶反应器。无菌过滤器然后用无菌的加热乙醇(1L/kg)洗涤。

滤液冷却至室温，随后产物结晶。由此得到的悬浮液过滤或者再加热。

再加热至仅低于回流温度(＜77℃)并以0.5℃/分钟的速率冷却，得到具有约80微米的平均粒度的晶体。再加热至仅低于回流温度(＜77℃)并以1℃/分的速率冷却，得到具有约50-60微米的平均粒度的晶体。在两个实例中，结晶是在约60℃开始。

再加热至回流温度(78℃)并快速冷却得到具有约20-30微米的平均粒度的晶体。

然后过滤出晶体，用胃肠外用等级的乙醇洗涤(1L/kg)并在50℃的Tyvek bags的真空下干燥以防止粉尘形成。

HPLC分析显示化合物(I)的量是99.4％或同时(II-a)的量是0.07％或更低，化合物(II-b)和(III)在所有样品中没有检测出。

进行了8个批次，得到的产物具有激光衍射测量的粒度分布，如表1所示。

表1

实施例2：规模扩大和装置设置30L、60L和160L的Hastelloy C22小车间容器。

反应器充入3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-吡啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]-嘧啶-4-酮棕榈酸酯和胃肠外用等级的乙醇(8L/kg)，并在搅拌下加热至回流温度(78-79℃)。产物在约70℃下溶解。

反应混合物然后冷却至室温，随后产物结晶。由此得到的悬浮液再次加热。在比较实施例中，溶液是使用不同的冷却梯度冷却，混合物再次加热和冷却，在每次冷却梯度之后，使用过滤器获得并分离样品。确定了颗粒特征。

HPLC分析显示了，(II-a)的量是0.1％或更低，化合物(II-b)和(III)在所有样品中没有检测出。

进行了不同的批次，得到的产物具有激光衍射测量的粒度分布，如表2-4所示。

表2：30L规模实验

表3：60L规模实验

表4：160L规模实验

实施例3：在50L的不锈钢反应器结晶。所有装置是使用干热灭菌法来灭菌。

不锈钢反应器充入3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]-嘧啶-4-酮棕榈酸酯和胃肠外用等级的乙醇(8L/kg)，并在搅拌下加热至回流温度(78-79℃)。产物在约70℃下溶解。溶液在76℃下通过无菌的0.22μm过滤器滤进无菌的结晶反应器。无菌过滤器然后用无菌的加热乙醇(1L/kg)洗涤。

滤液再加热回流，然后冷却至室温，随后产品结晶。由此得到悬浮液又再次加热。溶液是使用不同的冷却梯度冷却(在比较实施例中)，混合物再次加热和冷却，在每次冷却梯度之后，使用过滤器获得并分离样品。确定了颗粒特征。晶体在50℃的Tyvek bags的真空下干燥以防止粉尘形成，并确定颗粒特征。

进行了不同的批次，得到的产物具有激光衍射测量的粒度分布，如表5所示。

表5

实施例4：完成形式的制备

组合物

表6

装置

-不锈钢(SS)容器

-研磨介质(锆珠)+不锈钢(SS)研磨腔

-0.2μm过滤器

-40μm过滤器

-填充装置

-高压灭菌器

-干热灭菌器

制造

使用注射用水清洁和漂洗锆珠研磨，然后通过干热(260℃下120分钟)灭热原。把注射用水转入SS容器。加入聚山梨酯20，混合溶解。溶液通过无菌的0.2μm过滤灭菌，进入无菌的SS容器。根据前面实施粒制得的帕潘立酮棕榈酸酯(无菌等级)分散于溶液，混合直至均一。悬浮液在研磨室内使用研磨介质锆珠无菌研磨，直至达到所需的。通过40μm过滤器无菌过滤进入无菌的SS容器。

注射用水转移至SS容器，加入胃肠外用柠檬酸一水合物、无水磷酸氢二钠、磷酸二氢钠一水合物、所有用途的氢氧化钠、聚乙二醇4000，搅拌直至溶解。通过无菌0.2μm过滤器过滤灭菌溶液，并无菌转移进入悬浮液。混合最后的悬浮液直至均一。悬浮液无菌装入无菌注射器。目标剂量介于0.25ml和1.50ml，取决于所需的剂量。

表7

灭菌

所有无菌操作和灭菌过程是根据FDA和欧洲调控指南进行。

装置

蒸汽灭菌(F₀≥15)以下的设备进行灭菌：

-SS容器

-锆珠+研磨室

-0.2μm过滤器

-40μm过滤器

-填充泵

直接容器

-1ml长透明的塑料(COC)注射器，具有Luer锁紧套口。

-橡胶顶帽，FM257/2黑灰

-橡胶柱塞塞头，1ml长，4023/50，Flurotec B2-40

-2.25ml透明塑料(COC)注射器，具有Luer锁紧套口。

-橡胶顶帽，FM257/2黑灰

-橡胶柱塞塞头，1-3ml，4023/50，Flurotec B2-40

预装配的顶帽的空注射器，通过伽马辐照(剂量＞25kGy)。橡胶柱塞塞头通过蒸汽灭菌来灭菌(F₀＞15)。

Claims

1.一种制备式(I)的无菌结晶的3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并-[1，2-a]嘧啶-4-酮棕榈酸酯的方法，

其含有少于0.5％的3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(II-a)和3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7-二氢-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(II-b)以及少于0.01％的3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-2-甲基-9-十五烷基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(III)，并且具有20-150μm的平均粒度，

所述方法包括以下步骤：

a)加热3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

b)经过无菌0.22μm过滤器过滤溶液进入无菌的结晶反应器；

c)在冷却下使3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

d)过滤出由此得到的晶体；或者

e)再加热由此得到的悬浮液至72℃-78℃；

f)在冷却下使3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

g)过滤出晶体。

2.权利要求1的方法，其中所述式(I)的无菌结晶的3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并-[1，2-a]嘧啶-4-酮棕榈酸酯具有20-80μm的平均粒度。

3.权利要求1的方法，所述方法包括步骤a)、b)、c)、e)、f)和g)。

4.权利要求1或3的方法，其中步骤e)中的再加热是加热至回流温度。

5.权利要求1或3的方法，其中再加热步骤e)是在小于77℃下进行。

6.权利要求1的方法，所述方法包括步骤a)、b)、c)和d)。

7.一种制备式(I)的无菌结晶的3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并-[1，2-a]嘧啶-4-酮棕榈酸酯的悬浮液的方法，

所述式(I)的无菌结晶的3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并-[1，2-a]嘧啶-4-酮棕榈酸酯含有少于0.5％的3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(II-a)和3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7-二氢-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(II-b)以及少于0.01％的3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

所述方法包括以下步骤：

a)加热3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

b)经过无菌0.22μm过滤器过滤溶液进入无菌的结晶反应器；

c)在冷却下使3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-9-羟基-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮棕榈酸酯结晶；和

d)过滤出由此得到的晶体；或者

e)再加热由此得到的悬浮液至72℃-78℃；

f)在冷却下使3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异

g)过滤出晶体；

h)在无菌的含表面活性剂、助悬剂和缓冲剂的水溶液中，悬浮步骤d)或g)中得到的晶体；

j)过筛步骤i)的悬浮液以除去研磨介质；

l)把筛分的悬浮液装入无菌容器。

8.权利要求7的方法，其中所述式(I)的无菌结晶的3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异