CN101151277A - 抗干扰素γ抗体及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及能够结合人干扰素γ(IFNγ)，调节IFNγ与其受体IFNγ－R之间的相互作用，和/或调节IFNγ的生物活性的全人抗体和其片段。本发明还涉及在预防或治疗免疫相关紊乱和在改善与免疫相关紊乱有关的综合症中的使用这种抗IFNγ抗体。

Description

抗干扰素γ抗体及其使用方法
技术领域
本发明通常关于全人抗干扰素γ抗体及其使用方法。
背景技术
人干扰素γ(IFNγ，IFN-gamma)是由活化T-淋巴细胞和天然杀伤细胞产生的一种淋巴细胞因子。经证实，它能够抗增殖、抗病毒、具有免疫调节活性并能够结合作为免疫系统的大多数初级细胞上的异二聚体受体的IFNγ-R，并引发一连串导致炎症的事件。IFNγ的抗病毒和免疫调节活性对许多临床病症有效是周知的。然而，存在许多临床调整，其中IFNγ-活性具有有毒效应是周知的。例如，自身免疫性疾病与血液中和自体免疫患者患病组织中IFNγ高水平相关。IFNγ-活性也与恶病质和脓毒性休克疾病状态相关联。
因此，对于靶向IFNγ活性的疗法存在需要。
发明内容
本发明提供了特异性针对干扰素γ(IFNγ，这里也统称为IFN-gamma)的全人单克隆抗体。示范性单克隆抗体包括这里描述的NI-0501；AC1.2R3P2_A6(这里也统称为″A6″)；AC1.2R3P2JB4(这里也统称为″B4″)；AD1.4R4P1JB9(这里也统称为″B9″)；AD1.4R4P2_C9(这里也统称为″C9″)；AC1.4R4P2_C10(这里也统称为″C10″)；AC1.2R3P7_D3(这里也统称为″D3″)；AD1.2R2P2JD6(这里也统称为″D6″)；AC1.2R2P2_D8(这里也统称为″D8″)；AD1.3R3P6JB1(这里也统称为″E1″)；AD1.3R3P5_F8(这里也统称为″F8″)；AD1.3R3P6_F9(这里也统称为″F9″)；AD1.4R4P2_G7(这里也统称为″G7″)；AD1.1 R3P3_G9 (这里也统称为″G9″)；和AD1.3R3P6_G10(这里也统称为″G10″)。作为选择，单克隆抗体是能够结合与KI-0501；AC1.2R3P2JB4；AD1.4R4P1JB9；AD1.4R4P2_C9；AC1.4R4P2_C10；AC1.2R3P7_D3；AD1.2R2P2_D6；AC1.2R2P2_D8；AD1.3R3P6_E1；AD1.3R3P5JF8；AD1.3R3P6_F9；AD1.4R4P2_G7；AD1.1R3P3J39；或AD1.3R3P6_G10相同的表位的抗体。该抗体在这里分别统称为huIFNγ抗体。
huIFNγ抗体包含具有SEQ ID NOS：2、12、20、28、36、42、51、58、63、68、75、81、88、94、或103氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NOS：7、15、23、31、38、47、54、60、66、71、78、83、91、96或105氨基酸序列的轻链可变区。优选地，三个重链互补决定区(CDRs)包括的氨基酸序列与选自由SYAMS(SEQ ID NO：3)；AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ IDNO：4)；DGSSGWYVPHWF DP(SEQ ID NO：5)；DHSSGWYVISGMDV(SEQ ID NO：13)；DLTVGGPWYYFDY(SEQ ID NO：21)；DGWNALGWLES(SEQ IDNO：29)；SNAMS(SEQ IDNO：43)；TLTGSGGTAYYADSVEG(SEQ ID NO：44)；GTELVGGGLDN(SEQ ID NO：45)；RSFDSGGSFEY(SEQ ID NO-.64)；VGSWYLEDFDI(SEQ ID NO：69)；GGNYGDYFDYFDY(SEQID NO：76)；和DFWVITSGNDY(SEQ ID NO：89)所组成的组的序列有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或更多同源性。轻链具有三个互补决定区，这三个互补决定区包括的氨基酸序列与选自由TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：8)；EDNQRPS(SEQID NO：9)；QSYDGSNRWM(SEQ ID NO：10)；TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：16)；EDNQRPS(SEQ ID NO：17)；QSNDSDNVV(SEQ ID NO：18)；DDDQRPS(SEQ ID NO：25)；QSYDSSNVV(SEQ ID NO：26)；TRSGGSIGSYYVQ(SEQ ID NO：32)；DDKKRPS(SEQ ID NO：33)；QSYDSNNLW(SEQ ID NO：34)；TRSSGTIASNYVQ(SEQ ID NO：39)；QSYDNSNHWV(SEQ ID NO：40)；TGSGGSIATNYVQ(SEQ ID NO：48)；QSYDSDNHHVV(SEQ ID NO：49)；TGSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：55)；QSYDSSNQEVV(SEQ ID NO-.56)；QSYDSNNFWV(SEQ ID NO：61)；TRSSGSIASNYVH(SEQ ID NO：72)；QSSDTTYHGGW(SEQ ID NO：73)；QSYEGF(SEQ ID NO：79)；TGRNGNIASNYVQ(SEQ ID NO：84)；EDTQRPS(SEQ ID NO：85)；QSSDSNRVL(SEQ ID NO：86)；QSFDSTNLW(SEQ ID NO：92)；AGSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：97)；QSYSYNNQW(SEQ ID NO：98)；TRSSGSIVSNYVQ(SEQ ID NO：106)；EDNRRPS(S EQ ID NO：107)所组成的组的序列有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或更多同源性。该抗体结合IFNγ.
本发明的huIFNγ抗体包括由氨基酸序列SYAMS(SEQ IDNO：3)或SNAMS(SEQ ID NO：43)组成的VH CDR 1区域；由氨基酸序列AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)或TLTGSGGTAYYADSVEG(SEQ ID NO：44)组成的VHCDR2区域，和包括选自由DGSSGWYVPHWFDP(SEQ IDNO：5)；DHSSGWYVTSGMDV(SEQ ID NO：13)；DLTVGGPWYYFDY(SEQ ID NO：21)；DGWNALGWLES(SEQ ID NO：29)；GTELVGGGLDN(SEQ ID NO：45)；RSFDSGGSFEY(SEQ ID NO：64)；VGSWYLEDFDI(SEQ ID NO：69)；GGNYGDYFDYFDY(SEQ ID NO：76)；和DFWVITSGNDY(SEQ ID NO：89)组成组的氨基酸序列的VH CDR3区域。
huIFNγ抗体包括：包括选自由TRSSGSIASNYVQ(SEQ IDNO：8)；TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：16)；TRSGGSIGSYYVQ(SEQ ID NO.32)；TRSSGTIASNYVQ(SEQ ID NO：39)；TGSGGSIATNYVQ(SEQ ID NO：48)；TGSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：55)；TRSSGSIASNYVH(SEQ ID NO：72)；TGRNGNIASNYVQ(SEQ ID NO：84)；AGSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO.97)和TRS SGSrV SNYVQ(SEQ ID NO：106)组成的氨基酸序列的VLCDR1区域；包括选自由EDNQRPS(SEQ ID NO：9)；EDNQRPS(SEQ ID NO：17)；DDDQRPS(SEQ ID NO：25)；DDKKRPS(SEQ ID NO：33)；EDTQRPS(SEQ ID NO：85)和EDNRRPS(SEQ ID NO：107)组成组的氨基酸序列的VLCDR2区域；和包括选自由QSYDGSNRWM(SEQ ID NO：10)；QSNDSDNVV(SEQ ID NO：18)；QSYDSSNW(SEQ ID NO：26)；QSYDSNNLVV(SEQ ID NO：34)；QSYDNSNHWV(SEQ IDNO：40)；QSYDSDNHHW(SEQ ID NO：49)；QSYDSSNQEW(SEQ ID NO：56)；QSYDSNNFWV(SEQ ID NO：61)；QSSDTTYHGGW(SEQ ID NO：73)；QSYEGF(SEQ ID NO：79)；QSSDSNRVL(SEQ ID NO：86)；QSFDSTNLVV(SEQ ID NO：92)；和QSYSYNNQW(SEQ ID NO：98)组成组的氨基酸序列的VL CDR3区域。
huIFNγ抗体包括，例如，由氨基酸序列SYAMS(SEQ IDNO：3)或SNAMS(SEQ ID NO：43)组成的VH CDR1区域；由氨基酸序列AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)或TLTGSGGTAYYADSVEG(SEQ ID NO：44)组成的VH CDR2区域；包括选自由DGSSGWYVPHWFDP(SEQ IDNO：5)；DHSSGWYVISGMDV(SEQ ID NO：13)；DLTVGGPWYYFDY(SEQ ID NO：21)；DGWNALGWLES(SEQ ID NO：29)；GTELVGGGLDN(SEQ ID NO：45)；RSFDSGGSFEY(SEQ ID NO：64)；VGSWYLEDFDI(SEQ ID NO：69)；GGNYGDYFDYFDY(SEQ ID NO：76)；和DFWVITSGNDY(SEQ ID NO：89)组成组的氨基酸序列的VHCDR3区域；包括选自由TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：8)；TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：16)；TRSGGSIGSYYVQ(SEQ ID NO：32)；TRSSGTIASNYVQ(SEQ ID NO：39)；TGSGGSIATNYVQ(SEQ ID NO：48)；TGSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：55)；TRSSGSIASNYVH(SEQ ID NO-.72)；TGRNGNIASNYVQ(SEQ ID NO：84)；AGSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：97)和TRSSGSIVSNYVQ(SEQ ID NO：106)组成组的氨基酸序列的VL CDR1区域；包括选自由EDNQRPS(SEQ ID NO：9)；EDNQRPS(SEQ ID NO.17)；DDDQRPS(SEQ ID NO：25)；DDKKRPS(SEQ ID NO：33)；EDTQRPS(SEQ ID NO：85)和EDNRRPS(SEQ ID NO：107)组成组的氨基酸序列的VL CDR2区域；和包括选自由QSYDGSNRWM(SEQ ID NO：10)；QSNDSDNVV(SEQ ID NO：18)；QSYDSSNVV(SEQ ID NO：26)；QSYDSNNLW(SEQ ID NO：34)；QSYDNSNHWV(SEQ IDNO：40)；QSYDSDNHHVV(SEQ ID NO：49)；QSYDSSNQEVV(SEQ ID NO：56)；QSYDSNNFWV(SEQ ID NO：61)；QSSDTTYHGGW(SEQ ID NO：73)；QSYEGF(SEQ ID NO：79)；QSSDSNRVL(SEQ ID NO：86)；QSFDSTNLW(SEQ ID NO：92)；和QSYSYNNQW(SEQ ID NO：98)组成组的氨基酸序列的VL CDR3区域。
huIFNγ抗体的重链源自胚系V(可变)基因，例如DP47(IGHV3-23)胚系基因(GenBank Accession No.M99660)或与人DP47胚系基因序列同源的核酸序列。DP47(IGHV 3-23)胚系基因的核酸序列包括，例如，如下所示核酸序列：
GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGA(SEQ ID NO：99)
huIFNγ抗体的轻链源自Igλ轻链可变区胚系基因如IGLV6-57或V1-22(GenBank Accession No.Z73673)或与人IGLV6-57胚系基因序列同源的核酸序列。IGLV6-57胚系基因的核酸序列包括如下所示核酸序列：
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCAGCATTGCCAGCAACTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCACTGTGATCTATGAGGATAACCAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCTTATGATAGCAGCAATCA(SEQ ID NO：108)
在另一方面，本发明提供了通过对主体进行huIFNγ抗体给药来治疗、预防或减轻免疫相关紊乱的症状的方法。例如，huIFNγ抗体被用于治疗、预防或减轻免疫相关紊乱如Crohn′s疾病、系统性红斑狼疮、干癣、结节病、类风湿性关节炎、血管炎、异位性皮炎和继发-进展型多发性硬化的症状。优选地，对主体进一步进行第二种试剂给药如，但不限于，识别细胞因子如白细胞介素1(IL-I)、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-27和IL-31和趋化因子如MIP1α、MIP1β、RANTES、MCP1、IP-10、ITAC、MIG、SDF和fractalkine的抗细胞因子或抗体趋化因子试剂。
该主体正患有或易于发展成为免疫相关疾病，如自体免疫疾病或炎症紊乱。
附图说明
图1为huIFNγ抗体NI-0501和AC1.2R3P2_A6的轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表达。图1A描述了编码NI-0501重链可变区的核苷酸序列，并且图1B表示图1A中显示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图1B中用下划线标出。图1C描述了编码NI-0501重链可变区的核苷酸序列，并且图1D表示了图1C中显示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图1D中用下划线标出。图1E描述了编码AC1.2R3P2_A6重链可变区的核苷酸序列，并且图1F表示图1E中显示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图1F中用下划线标出。图1G描述了编码AC1.2R3P2_A6轻链可变区的核苷酸序列，并且图1H表示图1G中显示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图1H中用下划线标出。
图2为huIFNγ抗体AC1.2R3P2_B4的轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表达。图2A描述了编码重链可变区的核苷酸序列，并且图2B表示图2A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图2B中用下划线标出。图2C描述了编码轻链可变区的核苷酸序列，并且图2D表示了图2C中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图2D中用下划线标出。
图3为huIFNγ抗体AD1.4R4P1_B9的轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表达。图3A描述了编码重链可变区的核苷酸序列，并且图3B表示图3A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图3B中用下划线标出。图3C描述了编码轻链可变区的核苷酸序列，并且图3D表示了图3C中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图3D中用下划线标出。
图4为huIFNγ抗体AD1.4R4P2_C9的轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表达。图4A描述了编码重链可变区的核苷酸序列，并且图4B表示图4A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图4B中用下划线标出。图4C描述了编码轻链可变区的核苷酸序列，并且图4D表示了图4C中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图4D中用下划线标出。
图5为huIFNγ抗体AC1.4R4P2_C10的轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表达。图5A描述了编码重链可变区的核苷酸序列，并且图5B表示图5A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图5B中用下划线标出。图5C描述了编码轻链可变区的核苷酸序列，并且图5D表示了图5C中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图5D中用下划线标出。
图6为huIFNγ抗体AC1.2R3P7_D3的轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表达。图6A描述了编码重链可变区的核苷酸序列，并且图6B表示图6A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图6B中用下划线标出。图6C描述了编码轻链可变区的核苷酸序列，并且图6D表示了图6C中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图6D中用下划线标出。
图7为huIFNγ抗体AD1.2R2P2_D6的轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表达。图7A描述了编码重链可变区的核苷酸序列，并且图7B表示图7A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图7B中用下划线标出。图7C描述了编码轻链可变区的核苷酸序列，并且图7D表示了图7C中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图7D中用下划线标出。
图8为huIFNγ抗体AC1.2R2P2_D8的轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表达。图8A描述了编码重链可变区的核苷酸序列，并且图8B表示图8A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图8B中用下划线标出。图8C描述了编码轻链可变区的核苷酸序列，并且图8D表示了图8C中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图8D中用下划线标出。
图9为huIFNγ抗体AD1.3R3P6_E1的轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表达。图9A描述了编码重链可变区的核苷酸序列，并且图9B表示图9A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图9B中用下划线标出。图9C描述了编码轻链可变区的核苷酸序列，并且图9D表示了图9C中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图9D中用下划线标出。
图10为huI FNγ抗体AD1.3R3P5_F8的轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表达。图10A描述了编码重链可变区的核苷酸序列，并且图10B表示图10A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图10B中用下划线标出。图10C描述了编码轻链可变区的核苷酸序列，并且图10D表示了图10C中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图10D中用下划线标出。
图11为huIFNγ抗体AD1.3R3P6_F9的轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表达。图11A描述了编码重链可变区的核苷酸序列，并且图11B表示图11A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图11B中用下划线标出。图11C描述了编码轻链可变区的核苷酸序列，并且图11
D表示了图11C中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图11D中用下划线标出。
图12为huIFNγ抗体AD1.4R4P2_G7的轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表达。图12A描述了编码重链可变区的核苷酸序列，并且图12B表示图12A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图12B中用下划线标出。图12C描述了编码轻链可变区的核苷酸序列，并且图12D表示了图12C中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图12D中用下划线标出。
图13为huIFNγ抗体AD1.1R3P3_G9的轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表达。图13A描述了编码重链可变区的核苷酸序列，并且图13B表示图13A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图13B中用下划线标出。图13C描述了编码轻链可变区的核苷酸序列，并且图13D表示了图13C中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图13D中用下划线标出。
图14为huIFNγ抗体AD1.3R3P6_G10的轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表达。图14A描述了编码重链可变区的核苷酸序列，并且图14B表示图14A中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图14B中用下划线标出。图14C描述了编码轻链可变区的核苷酸序列，并且图14D表示了图14C中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。互补决定区在图14D中用下划线标出。
图15为描述采用scFv周质提取物抑制IFNγ诱导受体基因的曲线图。定量的scFv提取物按剂量依赖性模式抑制IFNγ-诱导受体基因。对于每个scFv克隆，如每个克隆名称上的柱形所示的不同浓度(2.7、0.68、0.17、0.043和0.011nM)被测试(从左向右依次降低浓度，参见下表3)。
图16.1-12组为描述采用scFv提取物抑制黑素瘤细胞上IFNγ-诱导MHC II类表达的一系列曲线图。提纯的全人scFv抑制黑素瘤细胞上IFNγ-诱导MHC II类表达。对scFv克隆()和小鼠抗人IFNγ mAb 16C3(---)进行了描述。
图17.1-7组为描述采用scFv提取物抑制黑素瘤细胞上IFNγ-诱导MHC II类表达的一系列曲线图，scFv提取物在全人IgG骨架上重建。提纯的全人IgG mAbs抑制黑素瘤细胞上IFNγ-诱导MHC II类表达。对全人IgG克隆(-X-)和小鼠抗人IFNγmAb16C3(-▲-)，和R&D系统，Inc.(Minneapolis，MN)小鼠抗人IFNγ MAB285(-●-)进行了描述。
图18为描述NI-0501 huIFNγ对人IFNγ亲和性的曲线图。
图19为对比由A6和NI-0501(这里也统称为“胚系的A6回复突变”或“回复突变的A6”克隆生成的抗体的活性的曲线图。
图20为描述天然人IFNγ上NI-0501 huIFNγ抗体的活性的曲线图。
图21A-21F为描述NI-0501 huIFNγ抗体与不同种类的重组IFNγ结合的一系列曲线图。
图22为描述NI-0501 huIFNγ抗体中和由天然食蟹猴IFNγ诱导的MHC II类上调的能力的一种曲线图。
图23为描述NI-0501 huIFNγ抗体阻滞全血中IFNγ-诱导的IP-10生成的能力的曲线图。
具体实施方式
本发明提供了特异性针对干扰素γ(IFNγ)的全人单克隆抗体。该抗体在这里一致统称为huIFNγ抗体。
HuIFNγ抗体是，例如能够调节至少一种IFNγ生物活性的IFNγ拮抗剂或抑制剂。IFNγ的生物活性包括，例如结合IFNγ受体(IFNγ-R)、调节，如减少或抑制，细胞表面上主要组织相容性复合体(MHC)II类表达，和调节，如减少或抑制，细胞增殖。例如，huIFNγ抗体通过全部或局部阻滞IFNγ与IFNγ受体(IFNγ-R)结合来完全或部分抑制IFNγ活性。与不结合这里描述的huIFNγ抗体情况下IFNγ活性水平相比，huIFNγ抗体存在下，当IFNγ活性水平减少至少95％，如96％、97％、98％、99％或100％时，IFNγ抗体被认为完全抑制IFNγ活性。与不结合这里描述的huIFNγ抗体情况下IFNγ活性水平相比，huIFNγ抗体存在下，当IFNγ活性水平减少小于95％，如10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、75％、80％、85％或90％时，IFNγ抗体被认为部分抑制IFNγ活性。
另外，本发明的huIFNγ抗体抑制细胞上IFNγ-诱导MHC II类表达(参见，如实施例4和5)。优选地，huIFNγ抗体在浓度至少为0.02nM时，能够抑制人黑素瘤细胞线Me67.8内大于50％的IFNγ-诱导的MHC II类表达。例如，抗体显示出浓度在0.022nM到0.044 nM范围内，例如在0.022nM、0.028nM或0.044nM浓度下抑制Me67.8细胞线内IFNγ-诱导MHC II类表达大于50％。
huIFNγ抗体调节主体内的一种免疫反应，例如，在人主体内的一种免疫反应。优选地，huIFNγ抗体调节主体内适应性免疫反应。更优选地，huIFNγ抗体调节细胞或细胞介导免疫反应，如周知的Th1-型或Th1-介导反应。
例如，这里描述的huIFNγ抗体调节，如减少、抑制或预防过度Th1-介导免疫反应，例如与自体免疫或炎性紊乱如Crohn′s疾病、系统性红斑狼疮、干癣、结节病、类风湿性关节炎、血管炎、异位性皮炎和继发-进展型多发性硬化相关的过度Th1-介导免疫反应。如这里使用的，术语“过度”Th1-介导免疫反应统指与不经受与过度Th1免疫反应相关的疾病或紊乱的主体内Th1细胞因子生成水平进行对比，主体内Th1细胞因子如IL-2、IL-3、TNF-alpha(TNFα)和IFNγ的提高水平。为了对作为过度反应的Th1-介导免疫反应进行分类，如通过ELISA或其他测试测量和分析分泌的细胞因子的水平评估Th1细胞因子生成反应的水平。
这里描述的huI FNγ抗体调节，如抑制、减少或预防类别转换到IgG类型，如IFNγ-诱导类型转换。这些huIFNγ抗体调节，例如，抑制、预防或减少ThI-介导反应并随后减少IFNγ-诱导转换。
通过采用IFNγ，例如小鼠或人IFNγ(参见，如Genbank Accession No.X13274)或其免疫原性片段、衍生物或变异体对动物进行免疫而产生本发明的huIFNγ抗体。作为选择，采用含有编码IFNγ的核酸分子的载体转染的细胞对该动物进行免疫，使得IFNγ在转染细胞表面进行表达并与其联合。或者，通过筛选包含抗体或结合与IFNγ的结构域序列结合的抗原的一种文库得到该抗体。该文库在如作为与噬菌体外壳蛋白融合的蛋白质或肽的噬菌体中制得，噬菌体外壳蛋白在组合的噬菌体颗粒表面上被表达并且编码DNA序列包含在噬菌体颗粒(例如，“噬菌体展示文库”)内。
本发明的huIFNγ抗体包括，例如，下表1所示的重炼互补确定区(CDRs)、表2中所示的轻链CDRs，和其组合物。
表1.结合和中和IFNγ的抗体的VH序列
  Clone Name   VHCDR1   VHCDR2   VHCDR3
  NI-0501   SYAMS(SEQ ID NO：3)   AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)   DGSSGWYVPHWFDP(SEQID NO：5)
  AC1.2R3P2_A6   SYAMS(SEQ ID NO：3)   AISGSGGSTYYADSVKG(SEQID NO：4)   DGSSGWYVPHWFDP(SEQ ID NO：5)
  AC1.2R3P2_D8   SYAMS(SEQ ID NO：3)   AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)   DGSSGWYVPHWFDP(SEQID NO：5)
  AC1.4R4P2_C10   SYAMS(SEQ ID NO：3)   AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)   DGSSGWYVPHWFDP(SEQ ID NO：5)
  AC1R3P2_B4   SYAMS(SEQ ID NO：3)   AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)   DHSSGWYVISGMDV(SEQID NO：13)
  AD14R4P1_B9   SYAMS(SEQ ID NO：3)   AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)   DLTVGGPWYYFDY(SEQ ID NO：21)
  AD1.3R3P5_F8   SYAMS(SEQ ID NO：3)   AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)   VGSWYLEDFDI(SEQ ID NO：69)
  AD1.3R3P6_F9   SYAMS(SEQ ID NO：3)   AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)   GGNYGDYFDYFDY(SEQID NO：76)
  AD1.3R3P6_E1   SYAMS(SEQ ID NO：3)   AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)   RSFDSGGSFEY(SEQ ID NO：64)
  AD14R4F2_C9   SYAMS(SEO ID NO：3)   AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)   DGWNALGWLES(SEQID NO：29)
  AD14R4P2_G7   SYAMS(SEQ ID NO：3)   AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)   DGWNALGWLES(SEQID NO：29)
  AD1.3R3P6_G10   SYAMS(SEQ ID NO：3)   AISGSGGSTYYADSVKG(SEQID NO：4)   DGWNALGWLES(SEQID NO：29)
  AD1R2P2_D6   SYAMS(SEQ ID NO：3)   AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)   DGWNALGWLES(SEQID NO：29)
  AD1.1R3P3_G9   SYAMS(SEQ ID NO：3)   AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)   DFWVITSGNDY(SEQ ID NO：89)
  AC1.2R3P7_D3   SNAMS(SEQ IDNO：43)   TLTGSGGTAYYADSVEG(SEQ ID NO：44)   GTELVGGGLDN(SEQ IDNO：45)
表2.结合和中和IFNγ的抗体的VL序列
  Clone Name   VL CDR1   VL CDR2   VL CDR3
  NI-0501   TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：8)   EDNQRPS(SEQ ID NO：9)   QSYDGSNRWM(SEQ ID NO：10)
  AC1.2R3P2_A6   TRSSGSIVSNYVQ(SEQ ID NO：106)   EDNRRPS(SEQ ID NO：107)   QSYDGSNRWM(SEQID NO：10)
  AC1.2R3P2_D8   TRSSGSIVSNYVQ(SEQ ID NO：8)   EDNQRPS(SEQ ID NO：17)   QSYDSNNFWV(SEQID NO：61)
  AC1.4R4P2_C10   TRSSGTIASNYVQ(SEQ ID NO：39)   EDNQRPS(SEQ ID NO：17)   QSYDNSNHWV(SEQ ID NO：40)
  AC1R3P2_B4   TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：16)   EDNQRPS(SEQ ID NO：17)   QSNDSDNVV(SEQ ID NO：18)
  AD14R4P1_B9   TRSSGSIVSNYVQ(SEQ ID NO：8)   DDDQRPS(SEQ ID NO：25)   QSYDSSNVV(SEQ ID NO：26)
  AD1.3R3P5_F8   TRSSGSIASNYVH(SEQ ID NO：72)   EDNRRPS(SEQ ID NO：9)   QSSDTTYHGGVV(SEQ ID NO：73)
  AD1.3R3P6_F9   TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：16)   EDNQRPS(SEQ ID NO：17)   QSYEGF(SEQ ID NO：79)
  AD1.3R3P6_E1   TRSSGYIASSYVQ(SEQ ID NO：8)   EDDRRPS(SEQ ID NO：25)   QSYDDTTPWV(SEQ ID NO：26)
  AD14R4P2_C9   TRSGGSIGSYYVQ(SEQ ID NO：32)   DDKKRPS(SEQ ID NO：33)   QSYDSNNLVV(SEQ ID NO：34)
  AD14R4P2_G7   TGRNGNIASNYVQ(SEQ ID NO：84)   EDTQRPS(SEQ ID NO：85)   QSSDSNRVL(SEQ ID NO：86)
  AD1.3R3P6_G10   AGSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：97)   EDNQRPS(SEQ ID NO：17)   QSYSYNNQVV(SEQ ID NO：98)
  AD1R2P2_D6   TGSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：55)   EDNQRPS(SEQ ID NO：17)   QSYDSSNQEVV(SEQ ID NO：56)
  AD1.1R3P3_G9   TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：16)   EDNRRPS(SEQ ID NO：9)   QSFDSTNLVV(SEQ ID NO：92)
  AC1.2R3P7_D3   TGSGGSIATNYVQ(SEQ ID NO：48)   EDNQRPS(SEQ ID NO：17)   QSYDSDNHHVV(SEQ ID NO：49)
一种示范性huIFNγ单克隆抗体为这里描述的NI-0501抗体。NI-0501抗体为AC1.2R3.P2_A6抗体的回复突变型式。如这里使用的，术语“回复突变”统指使核苷酸或氨基酸残基突变回复到在胚系序列中相应位置上的核苷酸或残基。NI-0501抗体包括S EQID NO：1所示核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：2)，和SEQ ID NO：6(图1A-1D)中所示核酸序列编码的轻链可变区(SEQID NO：7)。
包括如Chothia等和E.A.Kabat等定义的互补决定区(CDR)的氨基酸在图1B和1D中用下划线标出。(参见，Chothia，C，et al，Nature 342：877-883(1989)；Kabat，EA，et al，Sequencesof Protein of immunological interest，Fifth Edition，US Department of Health and Human Services，US Government PrintingOffice(1991))。A6抗体的重链CDRs具有下列序列：SYAMS(SEQ ID NO：3)；AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)；和DGSSGWYVPHWFDP(SEQ ID NO：5)。A6抗体的轻链CDRs具有下列序列：TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：8)；EDNQRPS(SEQ ID NO：9)；和QSYDGSNRWM(SEQ ID NO：10)。
另一种示范性huIFNγ单克隆抗体为这里描述的AC1.2R3.P2_A6抗体(″A6″)。A6抗体包括SEQ ID NO：102中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：103)，和SEQ ID NO：104中所示的的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO：105)(图1E-1H)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定义的互补决定区(CDR)的氨基酸在图1F和1H中用下划线标出。(参见，Chothia，C，et al，Nature 342：877-883(1989)；Kabat，EA，et al，Sequences of Protein of immunological interest，Fifth Edition，US Department of Health and Human Services，US Government Printing Office(1991))。A6抗体的重链CDRs具有下列序列：SYAMS(SEQ ID NO：3)；AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)；和DGSSGWYVPHWFDP(SEQ ID NO：5)。A6抗体的轻链CDRs具有下列序列：TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：8)；EDNQRPS(SEQ ID NO：9)；和QSYDGSNRWM(SEQ ID NO：10)。AC1.2R3P2_B4抗体(这里也统称为″B4″)包括SEQ ID NO：11中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：12)，和SEQ ID NO：14中所示的的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ IDNO：15)(图2A-2D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定义的CDR的氨基酸在图2B和2D中用下划线标出。B4抗体的重链CDRs具有下列序列：SYAMS(SEQ ID NO：3)；AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)；和DHSSGWYVISGMDV(SEQ IDNO：13)。B4抗体的轻链CDRs具有下列序列：TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：16)；EDNQRPS(SEQ ID NO：17)；和QSNDSDNVV(SEQ ID NO：18)。
AD1.4R4P1_B9抗体(这里也统称为″B9″)包括SEQ ID NO：19中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：20)，和SEQ ID NO：22中所示的的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ IDNO：23)(图3A-3D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定义的CDR的氨基酸在图3B和3D中用下划线标出。B9抗体的重链CDRs具有下列序列：SYAMS(SEQ ID NO：3)；AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)；和DLTVGGPWYYFDY(SEQ IDNO：21)。B4抗体的轻链CDRs具有下列序列：TRSSGSIVSNYVQ(SEQ ID NO：8)；DDDQRPS(SEQ ID NO：25)；和QSYDSSNVV(SEQ ID NO：26)。
AD1.4R4P2_C9抗体(这里也统称为″C9″)包括SEQ ID NO：27中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：28)，和SEQ ID NO：30中所示的的核酸序列编码的轻链可变区(SEQID NO：31)(图4A-4D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定义的CDR的氨基酸在图4B和4D中用下划线标出。C9抗体的重链CDRs具有下列序列：SYAMS(SEQ ID NO：3)；AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)；和DGWNALGWLES(SEQ IDNO：29)。C9抗体的轻链CDRs具有下列序列：TRSGGSIGSYYVQ(SEQ ID NO-.32)；DDKKRPS(SEQ ID NO：33)；和QSYDSNNLW(SEQ ID NO：34)。
AC1.4R4P2_C10抗体(这里也统称为″C10″)包括SEQ ID NO：35中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：36)，和SEQ ID NO：37中所示的的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO：38)(图5A-5D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定义的CDR的氨基酸在图5B和5D中用下划线标出。C10抗体的重链CDRs具有下列序列：SYAMS(SEQ ID NO：3)；AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)；和DGSSGWYVPHWFDP(SEQ ID NO：5)。C10抗体的轻链CDRs具有下列序列：TRSSGTIASNYVQ(SEQ ID NO：39)；EDNQRPS(SEQ ID NO：17)；和QSYDNSNHWV(SEQ ID NO.40)。
AC1.2R3P7JD3抗体(这里也统称为″D3″)包括SEQ ID NO：41中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：42)，和SEQ ID NO：46中所示的的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ IDNO：47)(图6A-6D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定义的CDR的氨基酸在图6B和6D中用下划线标出。D3抗体的重链CDRs具有下列序列：SNAMS(SEQ ID NO：43)；TLTGSGGTAYYADSVEG(SEQ ID NO：44)；和GTELVGGGLDN(SEQ IDNO：45)。D3抗体的轻链CDRs具有下列序列：TGSGGSIATNYVQ(SEQ ID NO：48)；EDNQRPS(SEQ ID NO：17)和QSYDSDNHHW(SEQ ID NO：49)。
AD1.2R2P2_D6抗体(这里也统称为″D6″)包括SEQ ID NO：50中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：51)，和SEQ ID NO：53中所示的的核酸序列编码的轻链可变区(SEQID NO：54)(图7A-7D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定义的CDR的氨基酸在图7B和7D中用下划线标出。D6抗体的重链CDRs具有下列序列：SYAMS(SEQ ID NO：3)；AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)；和DGWNALGWLES(SEQ IDNO：29)。D6抗体的轻链CDRs具有下列序列：TGSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：55)；EDNQRPS(SEQ ID NO：17)；和QSYDSSNQEVV(SEQ ID NO：56)。
AC1.2R2P2_D8抗体(这里也统称为″D8″)包括SEQ ID NO：57中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：58)，和SEQ ID NO：59中所示的的核酸序列编码的轻链可变区(SEQID NO：60)(图8A-8D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定义的CDR的氨基酸在图8B和8D中用下划线标出。D8抗体的重链CDRs具有下列序列：SYAMS(SEQ ID NO：3)；AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)；和DGSSGWYVPHWF DP(SEQID NO：5)。D8抗体的轻链CDRs具有下列序列：TRSSGSrVSNYVQ(SEQ ID NO：8)；EDNQRPS(SEQ ID NO：17)；和QSYDSNNFWV(SEQ ID NO：61)。
AD1.3R3P6J31抗体(这里也统称为″E1″)包括SEQ ID NO：62中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：63)，和SEQ ID NO：65中所示的的核酸序列编码的轻链可变区(SEQID NO：66)(图9A-9D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定义的CDR的氨基酸在图9B和9D中用下划线标出。E1抗体的重链CDRs具有下列序列：SYAMS(SEQ ID NO：3)；AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)；和RSFDSGGSFEY(SEQ ID NO：64)。E1抗体的轻链CDRs具有下列序列：TRSSGSrVSNYVQ(SEQ ID NO：8)；DDDQRPS(SEQ ID NO：25)；和QSYDSSNW(SEQ ID NO：26)。
AD1.3R3P5_F8抗体(这里也统称为″F8″)包括SEQ ID NO：67中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：68)，和SEQ ID NO：70中所示的的核酸序列编码的轻链可变区(SEQID NO：71)(图10A-10D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定义的CDR的氨基酸在图10B和10D中用下划线标出。F8抗体的重链CDRs具有下列序列：SYAMS(SEQ ID NO：3)；AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)；和VGSWYLEDFDI(SEQID NO：69)。F8抗体的轻链CDRs具有下列序列：TRSSGSIASNYVH(SEQ ID NO：72)；EDNRRPS(SEQ ID NO：9)；和QSSDTTYHGGVV(SEQ ID NO：73)。
AD1.3R3P6_F9抗体(这里也统称为″F9″)包括SEQ ID NO：74中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：75)，和SEQ ID NO：77中所示的的核酸序列编码的轻链可变区(SEQID NO：78)(图11A-11D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定义的CDR的氨基酸在图11B和11D中用下划线标出。F9抗体的重链CDRs具有下列序列：SYAMS(SEQ ID NO：3)；AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)；和GGNYGDYFDYFDY(SEQ ID NO：76)。F9抗体的轻链CDRs具有下列序列：TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：16)；EDNQRPS(SEQ ID NO：17)；和QSYEGF(SEQ ID NO：79)。
AD1.4R4P2_G7抗体(这里也统称为″G7″)包括SEQ IDNO：80中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：81)，和SEQ ID NO：82中所示的的核酸序列编码的轻链可变区(SEQID NO：83)(图12A-12D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定义的CDR的氨基酸在图12B和12D中用下划线标出。G7抗体的重链CDRs具有下列序列：SYAMS(SEQ ID NO：3)；AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)；和DGWNALGWLES(SEQ ID NO：29)。G7抗体的轻链CDRs具有下列序列：TGRNGNIASNYVQ(SEQ ID NO：84)；EDTQRPS(SEQ ID NO：85)；和QSSDSNRVL(SEQ ID NO：86)。
AD1.1R3P3_G9抗体(这里也统称为″G9″)包括SEQ IDNO：87中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：88)，和SEQ ID NO：90中所示的的核酸序列编码的轻链可变区(SEQID NO：91)(图13A-13D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定义的CDR的氨基酸在图13B和13D中用下划线标出。G9抗体的重链CDRs具有下列序列：SYAMS(SEQ ID NO：3)；AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)；和DFWVITSGNDY(SEQID NO：89)。G9抗体的轻链CDRs具有下列序列：TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：16)；EDNRRPS(SEQ ID NO：9)；和QSFDSTNLVV(SEQ ID NO：92)。
AD1.3R3P6_G10抗体(这里也统称为″G10″)包括SEQ IDNO：93中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO：94)，和SEQ ID NO：95中所示的的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO：96)(图14A-14D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定义的CDR的氨基酸在图14B和14D中用下划线标出。G10抗体的重链CDRs具有下列序列：SYAMS(SEQ ID NO：3)；AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)；和DGWNALGWLES(SEQ ID NO：29)。G10抗体的轻链CDRs具有下列序列：AGSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：97)；EDNQRPS(SEQ ID NO：17)；和QSYSYNNQW(SEQ ID NO：98)。
本发明的huIFNγ抗体也包括重链可变氨基酸序列与SEQ ID NO：2、12、20、28、36、42、51、58、63、68、75、81、88、94、或103(图1-14)的氨基酸序列有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或更多同源和/或轻链可变氨基酸与SEQ ID NO：7、15、23、31、38、47、54、60、66、71、78、83、91、96或105(图1-14)的氨基酸序列有至少90％、92％、95％、97％、98％、99％或更多同源的抗体。
或者，单克隆抗体为结合与NI-0501、A6、B4、B9、C9、C10、D3、D6、D8、E1、F8、F9、G7、G9或G10一样的表位的抗体。
除非另外定义，结合本发明使用的科学技术术语应该具有本领域普通技术人员普遍理解的含义。另外，除非前后文必需，单数术语应包括复数并且复数术语应包括单数。通常，与这里描述的细胞核组织培养、分子生物学、和蛋白质和寡核苷酸或多聚核苷酸化学和杂交相关的术语和技术是本领域中众所周知的和普遍采用的。标准技术用于重组DNA、寡核苷酸合成、和组织培养和转化(例如，电穿孔、脂质体)。酶反应和提纯技术按照厂商说明书或按照本领域中普遍采用的或按照这里描述的进行实施。现有技术和方法通常按照本领域中众所周知的常规方法和在被引用的和在本详述中讨论的多种通常和更特异性参考文献中描述的进行实施。参见，例如Sambrook et al.Molecular Cloning：A Laboratory Manual(2d ed.，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(1989))。这里描述的与分析化学、有机合成化学、和药物和制药化学相关的术语和实验室工作程序和技术是本领域中众所周知的并普遍采用的。标准技术用于化学合成、化学分析、药物制备、配制、和输送、和患者治疗。
如依照本公开采用的，下列术语，除非另外指出，应理解为具有下列含义：
如这里使用的，术语“抗体”统指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子(Ig)的免疫活性部分，例如该免疫球蛋白分子含有特异性结合(与发生免疫反应)一种抗原的分子。这种抗体包括，但不限于，多克隆、单克隆、嵌合、单链、Fab、Fab′和F(ab′)2片段、和Fab表达文库。“特异性结合”或“与发生免疫反应”意指该抗体与预期抗原的一种或一种以上抗原决定簇并不与其它多肽反应(例如，结合)或按照更低亲和力(Kd＞10-6)结合其它多肽。
众所周知，基本抗体结构单元包括一种四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链，每对具有一种“轻”链(约25kDa)和一种“重”链(约50-70kDa)。每个链的氨基末端部分包括约100到110个或更多个主要负责抗原识别的氨基酸可变区。每个链的羧基末端部分确定主要负责效应因子功能的恒定区。人轻链分为κ和λ轻链。重链分为μ、δ、γ、α、或ε，并将抗体类型分别定义为IgM、IgD、IgA、和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过约12个或更多氨基酸的″J″区结合起来，重链也包括约10个或更多氨基酸的″D″区。一般参见Fundamental Immunology Ch.7(Paul，W.，ea.，2nd ed.Raven Press，N.Y.(1989))。每个轻/重链对的可变区形成抗体结合位。
如这里采用的，术语“单克隆抗体”(MAb)或“单克隆抗体组合物”，统指由一组独特的轻链基因产物和独特的重链基因产物组成的抗体分子。特别地，单克隆抗体的互补性决定区(CDRs)在所有该组分子中是相同的。Mabs包含能与抗原的特殊表位进行免疫反应的抗原结合位，该抗原其特征在于具有独特结合亲和性。
一般来说，人的抗体分子是关于IgG、IgM、IgA、IgE和IgD类的任何一种，因分子中重链性质而彼此不同。该种类也具有亚类，如IgG1、IgG2和其他的。此外，在人体内，轻链可为κ链或λ链。
术语“抗原结合位”、或“结合部分”统指参与抗原结合的免疫球蛋白分子的一部分。抗原结合位由重(″H″)链和轻(″L″)链N-末端可变(″V″)区的氨基酸残基组成。重链和轻链V区内的三个高度分支，统称为“高变区”，插入到被称为“骨架区”或″FRs″的更保守侧枝之间。因此，术语“FR”统指在免疫球蛋白内高变区之间、和邻接高变区天然发现的氨基酸序列。在抗体分子内，一种轻链的三个高变区和一种重链的三个高变区相对于三维空间内彼此倾向于形成一种抗原结合面。抗原结合面互补于被结合抗原的抗原结合面，并且重链和轻链的每一种的三个高变区统称为“互补性决定区”或″CDRs″。分配给每个结构域的氨基酸与具有免疫学重要性的蛋白质的Kabat序列的定义一致(National Institutes ofHealth，Bethesda，Md.(1987 and 1991))，or Chothia & Lesk J.MoI.Biol.196：901-9 17(1987)，Chotliia et al.Nature 342：878-883(1989)。
如这里采用的，术语“表位”包括能够特异性结合免疫球蛋白、scFv、T-细胞受体的任何蛋白质决定簇。术语“表位”包括能够特异性结合免疫球蛋白、或T-细胞受体的任何蛋白质决定簇。表位决定簇通常组成分子如氨基酸或糖侧链的化学活性面基团并通常具有特殊的三维结构特征，以及荷质比特征。当离解常数＜1μM；优选＜100nM，最优选＜10nM时，抗体被认为特异性结合一种抗原。
如这里采用的，术语“免疫球蛋白结合”，和“免疫球蛋白结合性质”统指该类型的非共价作用，其发生在免疫球蛋白分子和对免疫球蛋白具有特异性的抗原之间。免疫球蛋白结合作用的强度、或亲和性可采用相互作用的离解常数(Kd)表示，其中较小Kd表示较大亲和性。被筛选多肽的免疫球蛋白结合性质采用本领域中众所周知的方法进行量化。该种方法需要测量抗原-结合位/抗原复合体形成和离解的速度，其中该速度取决于复合体配对的浓度、相互作用的亲和力、和同等影响两种反应方向速度的几何参数。因此，″结合速率″(Kon)和“离解速率”(Koff)可通过浓度计算和离解的和实际速率进行确定。(参见Nature 361：186-87(1993))。Koff/Kon比值取消与亲和力不相关的所有参数，等于离解常数Kd。(通常参见，Davies et al.(1990)Annual Rev Biochem59：439-473)。依据经测试如本领域的技术人员周知的放射配基结合法或类似方法进行测量，当平衡结合常数(Kd)is≤1μM，优选＜100nM，更优选100pM，最优选＜100pM到约1pM，本发明抗体被认为特异性结合IFNγ表位。
本领域的技术人员将认识到，在没有不适当实验的情况下，有可能通过是否先前的阻止后面的结合IFNγ抗原多肽来确定是否人单克隆抗体具有与本发明的人单克隆抗体(例如，单克隆抗体NI-0501、A6、B4、B9、C9、C10、D3、D6、D8、E1、F8、F9、G7、G9或G10)相同特异性。依据本发明的人单克隆抗体结合的降低显示出，是否被测试的人单克隆抗体与本发明的单克隆抗体竞争，两种单克隆抗体结合相同的、或紧密相关的表位。确定是否人单克隆抗体具有本发明的人单克隆抗体特异性的另一种方法是采用具有正常反应活性的IFNγ抗原多肽前培养本发明的单克隆抗体，然后加入进行测试的人单克隆抗体来确定是否被测试的人单克隆抗体被抑制其结合IFNγ抗原多肽的能力。如果测试的人单克隆抗体被抑制，那么，它多半具有本发明单克隆抗体相同的、或功能等同的表位特异性。
本领域中周知的多种方法被用于制备抗蛋白如IFNγ蛋白、或抗衍生物、片段、类似物、同系物或其同源物的单克隆抗体。(参见，如Antibodies：A Laboratory Manual，Harlow E，and Lane D，1988，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold SpringHarbor，N Y，incorporated herein by reference)。全人抗体为抗体分子，其中包括CDRs的轻链和重链的完整序列源自人基因。这种抗体称为“人抗体”，或“全人抗体”。人单克隆抗体被制备出，例如，采用下面提供的实施例中进行描述的方法。人单克隆抗体也能采用三体瘤技术；人B-细胞杂种瘤技术制得(参见，Kozbor，et al.，1983 Immunol Today 4：72)；采用EBV杂种瘤技术制备人单克隆抗体(参见，Cole，et al.，1985 In：MONOCLONALANTIBODIES AND CANCER THERAPY，Alan R.Liss，Inc.，pp.77-96)。人单克隆抗体可被采用并可采用人杂种瘤(参见，Cote，et al.，1983.Proc Natl Acad Sci USA 80：2026-2030)或通过用EB病毒体外转化人B-细胞制得(参见Cole，et al.，1985In：MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY，Alan R.Liss，Inc.，pp.77-96)。
采用众所周知的技术，如采用蛋白A或蛋白G的亲和层析法提纯抗体，该亲和层析法主要提供免疫血清的IgG片断。随即，或可供选择地，特异性抗原可被固定在一种层析柱上通过免疫亲和层析法提纯免疫特异性抗体，该特异性抗原为免疫球蛋白的靶点，或其表位。如D.Wilkinson对免疫球蛋白的提纯进行了讨论(The Scientist，published by The Scientist，Inc.，Philadelphia PA，Vol.14，No.8(April 17，2000)，pp.25-28)。
可预期的是，修饰本发明抗体的效应子功能，以致提高，如进行免疫相关疾病治疗中抗体的功效。例如，半胱氨酸残基可被引入到Fc区，从而使得该区域内链间二硫键形成。因此，生成的同型二聚体抗体可改善内化能力和/或提高补体介导细胞杀伤和抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。(参见，Caron et al.，J.ExpMed.，176：1191-1195(1992)和Shopes，J.Immunol.，148：2918-2922(1992))。或者，抗体可遗传工程学方法生产出，其具有双Fc区并从而可提高补体融解和ADCC性能(参见，Stevensonet al.，Anti-Cancer Drug Design，3：219-230(1989))。
本发明也包括Fv，Fab，Fab′和F(ab′)2 huIFNγ片段、单链huIFNγ抗体、双特异性huIFNγ抗体和偶联物huIFNγ抗体。
双特异性抗体是对至少两种不同抗原具有结合特异性的抗体。在本发明中，结合特异性中的一种是针对IFNγ。第二个结合靶点为任何其他抗原，并且优势为细胞表面蛋白或受体或受体亚单位。
制备双特异性抗体的方法是本领域中周知的。传统上，双特异性抗体的重组制备是基于两种免疫球蛋白重链/轻链对的共表达，两个重链具有不同特异性(Milstein and Cuello，Nature，305：537-539(1983))。由于随机分类的免疫球蛋白重链和轻链，这些杂种瘤(四源杂交瘤)生成十个不同抗体分子的潜在混合物，仅其中一种具有正确的双特异性结构。正确分子的提纯通常采用亲和层析法步骤完成。类似的方法在1993年5月13日公布的WO 93/08829和Traunecker et al.，EMBO J.，10：3655-3659(1991)中被公开。
具有预期结合特异性(抗体-抗原结合部位)的抗体可变结构域可融合免疫球蛋白恒定结构域序列。该融合优选具有免疫球蛋白重链结构域，包括至少CH2和CH3铰链区。优选具有包含在至少一种融合中轻链结合位的第一种重链恒定区(CH1)。编码免疫球蛋白重链融合的DNA和必要时，免疫球蛋白轻链，被插入到分离的表达载体，并共转染到适宜的宿主有机体内。对于生成双特异性抗体的进一步详情参见，Suresh et al.，Methods in Enzymology，121：210(1986)。
依据WO 96/27011中描述的另一种方法，一对抗体分子间的界面可被遗传工程学方法最大化二聚体的百分率，该二聚体由重组细胞培养物中得到。优选界面包括至少抗体恒定结构域CH3区域的一部分。在该方法中，第一种抗体分子的界面的一种或一种以上小氨基酸侧链被较大侧链(例如，酪氨酸或色氨酸)取代。通过采用较小氨基酸侧链(例如，丙氨酸或苏氨酸)取代较大氨基酸侧链，等同于或类似于较大侧链尺寸的代偿性空腔建立在第二个抗体分子界面上。这提供了提高异型二聚体产量超过其他不必要的最后产物如同型二聚体的机理。
双特异性抗体可制成全长抗体或抗体片段(例如，F(ab′)2双特异性抗体)。由抗体片段生成双特异性抗体的技术在文献中进行了描述。例如，双特异性抗体可采用化学键合制得。Brermanet al.，Science 229：81(1985)描述了一种方法，其中完整抗体被蛋白裂解而生成F(ab′)2片段。这些片段在二巯基配位助剂亚砷酸钠存在下被还原来稳定邻近的巯基并阻止分子内二硫化物形成。然后，生成的Fab′片段被转变成硫代硝基苯(TNB)衍生物。然后，Fab′-TNB衍生物中的一种通过采用巯基乙胺还原而被转变成Fab′-巯基并与等摩尔量的其他Fab′-TNB衍生物混合形成双特异性抗体。制备的双特异性抗体可用作酶的选择性固定的试剂。
此外，Fab′片段可直接从E.coli中得到并化学结合形成双特异性抗体。Shalaby et al.，J.Exp.Med.175：217-225(1992)描述了全人性化双特异性抗体F(ab′)2分子的制备。每个Fab′片段从E.coli中分泌出并经过体外直接化学结合形成双特异性抗体。该形成的双特异性抗体能够结合过表达ErbB2受体的细胞和正常人T细胞，以及引发抗人乳腺肿瘤靶点的人细胞毒素淋巴细胞的细胞溶解酶活性。
制备和从重组细胞培养物中直接分离双特异性抗体的多种技术已经进行了描述。例如，采用亮氨酸拉链制备双特异性抗体。Kostelny et al.，J.Immunol.148(5)：1547-1553(1992)。Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽通过基因融合连接到两个不同抗体的Fab′部分。抗体同型二聚体在铰链区被还原形成单体，然后再氧化形成抗体异型二聚体。这种方法也可被用于制备抗体同型二聚体。Hollinger et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993)描述的“双链抗体”技术已经提供了制备双特异性抗体片段的可供选择机理。该片段包括与通过一种接头与轻链可变区(VL)连接的重链可变区(VH)，该接头太短以至于在同一链上的两个结构域之间不能配对。因此，一种片段的VH和VL结构域不强行与另一种片段的VL和VH结构域配对，从而形成两个抗原结合位。通过使用单链Fv(sFv)二聚体制备双特异性抗体片段的另一种策略已经进行了报道。参见Gruber et al.，J.Immunol.152：5368(1994)。
具有大于2价的抗体也在考察中。例如，三特异性抗体可被制得。Tutt et al.，J.Immunol.147：60(1991)。
示范性双特异性抗体可结合两个不同的表位，至少其中一种存在于本发明的蛋白质抗原中。或者，一种免疫球蛋白分子的抗-抗原臂可与一种结合白细胞如T-细胞受体分子(例如，CD2、IFNγ、CD28、或B7)、或IgG的Fc受体(FcγR)如FcγRI(CD64)、FcγRII(IFNγ2)和FcγRIII(CD 16)上的诱导分子的一种臂结合使细胞防御机理焦点引入到细胞表达特殊抗原上。双特异性抗体也可用于表达一种特殊抗原的细胞的直接细胞毒类药物。这些抗体具有一种抗原结合臂和结合一种细胞毒类药物或一种放射性核素螯合剂如EOTUBE、DPTA、DOTA、或TETA的结合臂。另一种重要的双特异性抗体结合这里描述的蛋白抗原并进一步结合组织因子(TF)。
偶联物抗体也在本发明界定的范围内。偶联物抗体由两个共价键连接的抗体组成。这种抗体，例如被提出使免疫系统细胞靶向不必要细胞(美国专利No.4,676,980)，并治疗HIV感染(WO 91/00360；WO 92/200373；EP 03089)。可期望的是，该抗体可采用合成蛋白化学中周知的方法在体外制得，包括涉及交联剂的那些。例如，免疫毒素可采用二硫化物交换反应或通过形成一种硫醚键而构成。用于本目的的适宜试剂的实施例包括亚氨基硫醇和methyl-4-mercaptobutyrimidate和如在美国专利No.4,676,980中公开的那些。
本发明也关于包括与细胞毒类药物如一种毒素(例如，细菌、真菌、植物、或动物的酶活性毒素免疫偶联物，或其片段)，或放射性同位素(例如，放射性偶联物)。
可采用的酶活性毒素和其片段包括白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌)、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲素A链、α-八叠球菌、油桐蛋白、康乃馨蛋白、垂序商陆蛋白(PAPI、PAPII、和PAP-S)、苦瓜抑制剂、泻果素、巴豆毒素、肥皂草抑制剂、gelonin、mitogillin、restrictocin、酚霉素、依诺霉素、和镰刀菌毒素。多种放射性核对生产放射性偶联物抗体是可利用的。实施例包括212Bi、131I、131In、90Y、和186Re。
抗体和细胞毒素药物的偶联物采用多种双功能蛋白偶联剂如N-琥珀酰亚胺-3-(2-嘧啶二硫)丙酸酯(SPDP)、亚氨硫醇(IT)、酰亚胺酯的双功能衍生物(例如，己二(亚胺)酸二甲酯盐酸盐)、活性酯(例如，辛二酸二琥珀酰亚胺酯)、醛(例如，戊二醛)、双叠氮化合物(例如，双(p-叠氮苯甲酰基)已二胺、双重氮衍生物(例如，双-(p-重氮苯甲酰基)-乙二胺、二异氰酸酯(例如，甲苯-2，6-二异氰酸酯)和双-活性氟化合物(例如，1，5-二氟-2，4-二硝基苯)制得。例如，蓖麻蛋白免疫毒素可依据Vitettaet al.，Science 238：1098(1987)中描述的方法制得。碳-14标记的1-异硫氰基苯甲基-3-甲基二乙烯三胺五乙酸(MX-DTPA)为放射性核苷酸与抗体偶联用的一种示范性螯合剂。(参见WO94/11026)。
本领域中的那些普通技术人员将认识到大量可能基团可与生成的抗体偶联或与本发明的其他分子偶联。(参见，例如，″Conjugate Vaccines″，Contributions to Microbiology and Immunology，J.M.Cruse and R.E.Lewis，Jr(eds)，Carger Press，New York，(1989)，全部内容通过引述合并于本文中)。
偶联通过一些化学反应实现，该化学反应将结合两个分子只要抗体和另一种基团保持其各自活性。该链接可包括许多化学机理，例如共价结合、亲和性结合、插入、配位结合和络合作用。然而，优选的结合为共价结合。共价结合或者经现有侧链直接缩合或经插入外部桥接分子而得到。对于其他分子，许多二价或多价连接试剂在偶联蛋白质分子例如本发明的抗体中是有效的。例如，代表性偶联剂可包括有机化合物例如硫酯、碳二亚胺、琥珀酰亚胺酯、二异氰酸酯、戊二醛、重氮苯和己二胺。该列表目的不在于罗列在本领域中多种类型的偶联剂，而是示范出更普通偶联剂。(参见Killen and Lindstrom，Jour.Immun.133：1335-2549(1984)；Jansen et al.，Immunological Reviews 62：185-216(1982)；和Vitetta et al.，Science 238：1098(1987)。优选的接头在文献中进行了描述(参见，例如Ramakrishnan，S.et al.，CancerRes.44：20 1-208(1 984)描述了MBS(M-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester)的使用)。也参见，美国专利No.5,030,719，描述了与一种抗体通过寡肽接头偶联的卤化乙酰肼衍生物。尤其优选接头包括：(i)EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基-丙基)碳化二亚胺盐酸盐；(ii)SMPT(4-琥珀酰亚胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫)-甲苯(Pierce Chem.Co.，Cat.(21558G)；(iii)SPDP(琥珀酰亚胺基-6[3-(2-吡啶基二硫代)丙酰胺基]己酸酯(Pierce Chem.Co.，Cat#21651G)；(iv)硫代-LC-SPDP(硫代琥珀酰亚胺基6[3-(2-吡啶二巯基)-丙酰胺]己酸硫代琥珀酰亚胺酯(Pierce Chem.Co.Cat.#2165-G)；和(v)与EDC偶联的硫代-NHS(N-羟基硫代-琥珀酰亚胺：Pierce Chem.Co.，Cat.#24510)。
上面描述的接头包含具有不同特征的组分，因此导致区别生理化学性质的偶联物。例如，烷基羧酸酯的硫代-NHS酯比芳香族羧酸酯的硫代-NHS酯更稳定。进一步，接头SMPT包含空间位组二硫键，并可形成具有提高稳定性的偶联物。双硫键一般没有其他链接稳定，因为双硫键在体外被切割，导致更少的可利用的偶联物。特殊地，硫代-NHS可提高碳化二亚胺偶联的稳定性。当在与硫代-NHS偶联中被使用时，碳化二亚胺偶联(例如，EDC)形成酯，这种酯比单独的碳化二亚胺偶联反应更耐水解。
这里采用的术语“分离的多聚核苷酸”应意指基因组、cDNA或人造起源或其一些组合的多聚核苷酸，由于其起源“分离多聚核苷酸”(1)与所有或部分的多聚核苷酸相关，其中“分离多聚核苷酸”自然界中不存在，(2)可与多聚核苷酸链接，其在自然界中不链接，或(3)作为较大序列的一部分在自然界中不存在。
这里提到的术语“分离的蛋白”意指cDNA、重组RNA、或人造起源或其一些组合物的一种蛋白质，由于其起源“分离多聚核苷酸”(1)与自然界发现的蛋白质不相关，(2)无相同来源的其他蛋白质，例如，无胶原蛋白，(3)由来自不同种类的细胞表达，或(4)在自然界中不存在。
术语“多肽”在这里被用作专业术语统指天然蛋白质、多肽序列的片段、或类似物。因此，天然蛋白质片段、和类似物为多肽类的种类。依照本发明优选的多肽包括图1B、2B、3B和4B表示的人重链免疫球蛋白分子和图1D、2D、3D和4D表示的轻链免疫球蛋白分子，以及包括重链免疫球蛋白分子与轻链免疫球蛋白分子例如κ轻链免疫球蛋白分子结合形成的抗体分子，反之亦然，以及其片段和类似物。
这里采用的用于对象的术语“天然生成”统指能在自然界中自然发现对象的事实。例如，多肽或多聚核苷酸序列，多肽或多聚核苷酸序列存在于有机体中(包括病毒)，可从自然界内的一种来源中分离出不经过人在实验室中人为修饰，则是天然生成。
这里采用的术语“可操作链接”统指被描述的组分位置处于使其能够按照目的方式发挥作用的关联中。与编码序列可操作链接的对照序列以在与对照序列兼容的条件下获得编码序列表达的方式被结合。
这里采用的术语“对照序列”统指对影响其结合的编码序列的表达和处理所必需的多聚核苷酸序列。依据原核生物中宿主有机体，这种对照序列的性质不同，这种对照序列通常包括启动子、核糖体结合位、和真核细胞中转录终止序列，通常，这种对照序列包括启动子和转录终止序列。术语“对照序列”目的最小化包括对表达和处理必要的所有组分，并且也可包括对如前导序列和融合部分序列有利的其他组分。如这里提到的术语“多聚核苷酸”意指一种聚合的长度至少10个碱基的核苷酸、或核糖核苷酸或脱氧核苷酸或任一类型核苷酸的修饰形式。该术语包括单链或双链的DNA。
这里提到的术语寡核苷酸包括经天然生成的寡核苷酸链、和天然生成寡核苷酸链连接在一起的修饰的核苷酸、和非天然形成的寡核苷酸链。寡核苷酸为多聚核苷酸亚型，通常包括200个碱基或更少碱基的长度。优选的寡核苷酸长度为10到60个碱基对，最优选12、13、14、15、16、17、18、19、或20到40个碱基。尽管寡核苷酸可为双链，例如用在基因突变构建中，寡核苷酸通常为单链，例如，探针的寡核苷酸。本发明的寡核苷酸或者正义寡核苷酸或反义寡核苷酸。
这里提到的术语“天然生成的核苷”包括脱氧核糖核苷和核糖核苷。这里通指的术语“修饰核苷酸”包括具有修饰的或取代的糖基和类似基团的核苷酸。这里提到的术语“寡核苷酸链接”包括寡核苷酸键合例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、phosphoroselerloate、phosphorodiselenoate、phosphoroanilothioate，phoshoraniladate，phosphoronmidate和类似物。参见如LaPlanche et al.Nucl.Acids Res.14：9081(1986)；Stec et al.J.Am.Chem.Soc.106：6077(1984)，Stein et al.Nucl.Acids Res.16：3209(1988)，Zonet al.Anti Cancer Drug Design 6：539(1991)；Zon et al.Oligonucleotides and Analogues：A Practical Approach，pp.87-108(F.Eckstein，Ed.，Oxford University Press，Oxford England(1991))；Stec et al.U.S.Patent No.5,151,510；Uhlmann and Peyman Chemical Reviews 90：543(1990)。必要时，寡核苷酸可包括监测用标记物。
这里提到的术语“选择性杂化”意指直接和特定结合。依据本发明的多聚核苷酸、寡核苷酸和其片段在杂化和清洗条件下选择性杂化核酸链，这种条件最小化可估量的对非特异性核酸可探测结合。高严谨条件可用于得到本领域中和这里讨论的周知的选择性杂化条件。通常，多聚核苷酸、寡核苷酸、和本发明的片段之间的核酸序列和主体的一种核酸序列将有至少80％，更典型至少85％、90％、95％、99％、和100％的优选被提高的同源性。两个氨基酸序列是同源的，如果其序列之间有局部或全部等同。例如，85％同源性意指两个序列按照最大匹配进行排列时，85％的氨基酸是相同的。空隙(进行匹配的两个序列中的任何一种内)允许在最大匹配中，5个或小于5个的空隙长度是优选的，具有2个或小于2个的空隙长度是更优选的。可供选择地和优选地，两个蛋白序列(或源自它们的具有至少30个氨基酸长度的多肽序列)是同源的，如术语在这里被采用，如果它们具有大于5(标准偏差单位内)的比对分数，采用具有突变数据矩阵和空隙罚分6或大于6的程序ALIGN。参见Dayhoff，M.O.，in Atlas of Protein Sequence and Structure，pp.101-110(Volume 5，NationalBiomedical Research Foundation(1972))and Supplement 2 tothis volume，pp.1-10。如果当采用ALIGN程序进行最佳排列时，它们的氨基酸大于或等于50％的等同，两个序列或其部分更优选同源。术语“相应于”在这里被采用意指一种多聚核苷酸序列与所有或部分参考多聚核苷酸序列同源(例如，等同的，非严格进化相关的)，或者意指一种多肽序列与参考多肽序列等同。相反，术语“互补于”在这里被采用意指该互补性序列与所有或者部分参考多聚核苷酸序列同源。举个例子，核苷酸序列″TATAC″对应于参考序列″TATAC″并与参考序列″GTATA″互补。
下列术语用于描述两个或多个多聚核苷酸或氨基酸序列之间的顺序关系：“参考序列”、“比对窗口”、“序列一致性”“序列一致性百分比”、和“高度同源”。“参考序列”为作为序列比对基础的确定序列，参考序列为较大序列的亚集，例如，全长cDNA或序列列表中给出的基因序列的片断或者可包括完整cDNA或基因序列。一般地，参考序列为至少18个核苷酸或6个氨基酸长度，常常为至少48个核苷酸或16个氨基酸长度。因为两个多聚核苷酸或氨基酸序列每一种可(1)包括两个分子间相似的序列(例如，完整多聚核苷酸或氨基酸序列的一部分)，和(2)可进一步包括两个核苷酸或氨基酸序列之间不同的序列，两个(或更多)分子之间的序列比对典型地通过在“比对窗”比对两个分子的序列来鉴别和比对序列相似性的局部区而完成。“比对窗”，如这里采用的，统指至少18个邻接核苷酸位置或6个氨基酸的方案片断，其中多聚核苷酸序列或氨基酸序列可与至少18个核苷酸或6个氨基酸序列进行比对并且其中，与两个序列优化比对算法的参考序列(不包括添加或缺失)对比，比对窗中的多聚核苷酸序列的一部分可包括20％或更少(例如，空隙)的添加、缺失、取代、和类似处理。排列比对窗的序列优化比对算法可通过local homology algorithm of Smith and Waterman Adv.Appl.Math.2：482(1981)、homology alignment algorithm of Needleman and Wimsch J.MoI.Biol.48：443(1970)、the search for similarity method of Pearson and Lipman Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)85：2444(1988)、运算方法(Wisconsin遗传学软件包7.0版(Genetics Computer Group，575 Science Dr.，Madison，Wis.)中GAP、BESTFIT、FASTA、和TFASTA)、Geneworks，or Mac Vectorsoftware packages)、或通过观察来进行处理，经多种方法生成的最佳比对算法(例如，生成比对窗中同源的最高百分比)被选择。
术语“序列一致性”是指比对窗上两个多聚核苷酸或氨基酸序列是等同的(例如，在核苷酸连着核苷酸或残基连着残基上)。术语“序列一致性百分比”是通过比对比对窗上两个最佳排列序列、确定等同核酸碱基(例如，A、T、C、G、U或I)或残基存在于两个序列中生成匹配部分的数量、区分比对窗(例如，窗口尺寸)内部分的全部数量与匹配部位的数量，将结合乘以100得到序列以致性的百分比。这里采用的术语“高度同源”是指多聚核苷酸或氨基酸序列的一种特征，其中与具有至少18个核苷酸(6个氨基酸)位点，经常在至少24-48个核苷酸(8-16个氨基酸)位点的对比窗上参考序列进行比较，多聚核苷酸或氨基酸包括具有至少85％序列一致性，优选至少90到95％序列一致性，更经常至少99％序列一致性的序列，其中序列一致性通过将参考序列与可包括缺失或添加对比窗上参考序列的20％或小于20％的序列进行比对而计算得到。参考序列可为较大序列的亚集。
如这里使用的，20个常规氨基酸和其缩写按照常规用法。参见Immunology-A Synthesis(2nd Edition，E.S.Golub and D.R.Gren，Eds.，Sinauer Associates，Sunderland Mass.(1991))。20个常规氨基酸、非天然氨基酸如α-，α-二取代氨基酸、N-烷基氨基酸、乳酸、和其他非常规氨基酸的立体异构体(例如，D-氨基酸)也可为本发明多聚核苷酸的适宜组分。非常规氨基酸的实施例包括：4羟(基)脯氨酸、γ-羧基谷氨酸，ε-N，N，N-三甲基赖氨酸，ε-N-乙酰基赖氨酸，O-磷酸丝氨酸，N-乙酰基丝氨酸，N-甲酰甲硫氨酸，3-甲基组氨酸，5-羟(基)赖氨酸，σ-N-甲基精氨酸，和其他类似氨基酸和亚氨酸(例如，4-羟(基)脯氨酸)。在这里被采用的多肽表示法中，依据标准用法和常规，左箭头为氨基末端方向，右箭头为羧基末端方向。
类似地，除非另外指定，单链多聚核苷酸序列的左手末端为5′端，双链多聚核苷酸序列的左手末端为称为5′方向。初生RNA转录的5′到3′添加的方向称为转录方向，与RNA具有相同序列的DNA链上序列区和5′到RNA转录的5′末端称为“上游序列”，与RNA具有相同序列的DNA链上序列区和3′到RNA转录的3′末端称为“下游序列”。
如对多肽使用的，术语“高度同源”是指两个肽序列，当进行优化比对时，如通过程序GAP或BESTFIT采用缺省gap weight，具有至少80％序列同源，优选至少90％序列同源，更优选至少95％序列同源，最优选至少99％序列同源。
优选地，不相同的残基部分经保守氨基酸取代进行区分。
保守氨基酸取代统指具有相似侧链的残基的可交换性。例如，具有脂肪族侧链的一组氨基酸为氨基乙酸、丙胺酸、缬氨酸、亮氨酸、和异亮氨酸；具有脂肪族-羟基侧链的一组氨基酸为丝氨酸和苏氨酸；具有含有酰胺的侧链的一组氨基酸为天冬酰胺酸和谷氨酸盐；具有芳族侧链的一组氨基酸为苯基丙氨酸、酪氨酸、和色氨酸；具有碱性侧链的一组氨基酸为赖氨酸、精氨酸、和组氨酸；和具有含有硫侧链的一组氨基酸为半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸取代基团为：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯基丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙胺酸缬氨酸、谷氨酸-天(门)冬氨酸、和天冬酰胺酸-谷氨酸盐。
如这里讨论的，抗体或免疫球蛋白分子的氨基酸序列中最小变化包括在本发明内，但是氨基酸序列中的变化保持至少75％，更优选至少80％、90％、95％，最优选99％。特殊地，保守氨基酸取代被考虑。保守氨基酸取代为在氨基酸家族内存在的那些，氨基酸家族是侧链中相关联的。遗传编码氨基酸通常分为两个家族：(1)酸性氨基酸为天(门)冬氨酸酯、谷氨酸酯；(2)碱性氨基酸为赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性氨基酸为丙胺酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯基丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸，和(4)不带电的极性氨基酸为氨基乙酸、天冬酰胺酸、谷氨酸盐、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。亲水性氨基酸包括精氨酸、天冬酰胺酸、天(门)冬氨酸酯、谷氨酸盐、谷氨酸酯、组氨酸、赖氨酸、丝氨酸、和苏氨酸。憎水性氨基酸包括丙胺酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯基丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。其他家族氨基酸包括(i)丝氨酸和苏氨酸，其脂肪族-羟基家族；(ii)天冬酰胺酸和谷氨酸盐，其为含酰胺的家族；(iii)丙胺酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸，其为脂肪族家族；和(iv)苯基丙氨酸、色氨酸、和酪氨酸，其为芳香族家族。例如，可合理预期的是，用异亮氨酸或缬氨酸单独取代亮氨酸，用谷氨酸酯单独取代天(门)冬氨酸酯，用丝氨酸单独取代苏氨酸，或用具有结构相关氨基酸相似取代一种氨基酸，不会对生成的分子的结合或性质产生主要影响，尤其如果取代不涉及顾家位点内氨基酸。是否氨基酸改变产生功能肽能通过评估多肽衍生物的特殊活性而确定出。评估在这里进行了详细描述。抗体或免疫球蛋白分子的片段或类似物可通过本领域普通技术人员制备得到。片段或类似物的优选氨基-和羧基-端存在于功能结构域边界附近。结构和功能结构域可通过核苷酸和/或氨基酸序列数据与公共或专有序列数据库进行比对而被鉴别出。优选地，计算机比对方法被用于鉴别序列基序或已知结构和/或功能的其他蛋白中存在的预期蛋白构形结构域。鉴别出折叠成已知三维结构的蛋白序列的方法是周知的。Bowie et al.Science 253：164(1991)。因此，现有实施例证实本领域技术人员能识别序列基序和结构构形，依据本发明，该结构构形可用于确定结构和功能结构域。
优选的氨基酸取代为那些：(1)减少蛋白质水解的敏感性，(2)减少氧化的敏感性，(3)改变形成蛋白复合体的结合亲和性，(4)改变结合亲和性，和(4)赋予或修改这种类似物的其他物理化学或功能性质。类似物能包括除了天然生成肽序列之外的一种序列的多种突变蛋白。例如，单个或多个氨基酸取代(优选保守氨基酸取代)可能在天然生成序列(优选在形成分子内接触的结构域外部分多肽内)中进行。保守氨基酸取代不应该大体上改变母序列的结构特征(例如，取代氨基酸不应该趋向折断母体序列中的螺旋，或破坏其他类型的表征母序列的二级结构)。领域公认的多肽二级和三级结构的实施例在Proteins，Structures and Molecular Principles(Creighton，Ed.，W.H.Freeman and Company，New York(1984))；Introduction to Protein Structure(C.Brandenand J.Tooze，eds.，Garland Publishing，New York，N.Y.(1991))；and Thornton et at.Nature 354：105(1991)中进行了描述。
如这里采用的术语“多肽片段”统指具有氨基末端和/或羧基末端缺失的多肽，而剩余氨基酸序列与推导出的天然生成序列中相对应位点是同源的，例如，来自全长cDNA序列。典型地，片段具有至少5、6、8或10个氨基酸长，优选至少14个氨基酸长，更优选至少20个氨基酸长，通常至少50个氨基酸长，并甚至更优选至少70个氨基酸长。这里采用的术语“类似物”统指由至少25个氨基酸片断组成的多肽，该多肽与部分的被推导的氨基酸序列有大体上同源性并具有至少下列性质中的一种：(1)在适宜的结合条件下，特异性结合IFNγ，(2)具有阻断适宜的IFNγ结合的能力，或者(3)具有体外或体内抑制IFNγ-表达细胞增长的能力。典型地，多肽类似物包括天然生成序列的保守氨基酸取代(或者添加或者缺失)。典型地，类似物为具有至少20个氨基酸长，优选至少50个氨基酸长或更长，并通常能与全长天然生成多肽一样长。
肽类似物普遍在制药企业中使用作为具有类似于模版肽性质的非肽类药物。这些类型的非肽类化合物称为“肽模拟分子”或“拟肽物质”。Fauchere，J.Adv.Drug Res.15：29(1986)，Veberand Freidinger TINS p.392(1985)；and Evans et al.J.Med.Chem.30：1229(1987)。这种化合物经常在计算机分子模拟帮助下形成。结构类似于药物用肽的肽模拟分子可用于产生相等治疗功效或预防功效。一般地，拟肽物质结构类似于示范性多肽(例如，具有生物化学或药理活性的多肽)，例如人抗体，但具有一种或一种以上由选自由-CH2NH-、-CH2S-、-CH2-CH2-、～CH＝CH-(cis and trans)、-COCH2-、CH(OH)CH2-、和-CH2SO-组成组的链接经本领域中众所周知方法任选取代的肽链。用同一类型的D-氨基酸系统取代一致序列的一种或一种以上氨基酸(例如，D-赖氨酸取代L-赖氨酸)可用于制备更稳定肽。此外，包括一致序列或大体同源的一致序列变化的限制性肽可通过本领域中周知的方法制备得到(Rizo and Gierasch Ann.Rev.Biochem.61：387(1992))；例如，通过加入内半胱氨酸残基，该内半胱氨酸残基能够形成使肽形成环的分子内二硫键。
术语“试剂”在这里被采用表示一种化学化合物、化学化合物的混合物、生物大分子、生物原料中得到的一种提取物。
如这里采用的，术语“标记”或“标记的”统指加入可探测的标记物，例如通过加入放射性标记氨基酸或附着上可被标记抗生物素蛋白(例如，含荧光标记物或可通过光学或量热方法被探测的酶活性的链霉亲和素)检测出的生物素基团的多肽。在某一情况中，标记或标记物也可具有治疗性的。标记多肽和糖蛋白的多种方法在本领域中是周知的并可被采用。多肽标记的实施例包括，但不限于，下列：放射性同位素或放射性核(例如，3H、14C、1 5N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)、荧光标记物(例如，FITC、若丹明、镧系元素磷)、酶标记(例如，辣根过氧化物酶、p-半乳糖苷酶、荧光素酶、碱性磷酸酶)、化学发光的、生物素基团、二级受体(例如，亮氨酸拉链对序列、二级抗体的结合位、金属结合结构域、表位附加标记)识别的预先确定多肽表位。在一些实施方案中，标记被附着在不同长度的间隔臂减少潜在空间位阻。如这里采用的术语“制药试剂或药物”统指当正确对一种患者进行给药时，能够引发预期治疗功效的一种化学化合物或组合物。
依据本领域中常规用法，这里的也可以使用其他的化学术语，如The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(Parker，S.，Ed.，McGraw-Hill，San Francisco(1985))中所例举的。
在这里使用的术语“抗肿瘤药物”统指抑制人体内肿瘤、尤其恶性病变(癌症的)例如癌科、恶性毒瘤、淋巴瘤、或白血病形成或发展的功能性质的药物。转移的抑制通常为抗肿瘤药物的一种性质。
如这里采用的，“大体上纯净的”是指目标种类为存在的主要种类(例如，以摩尔计，它比组合物中任何其他单个种类更多)，优选地，大体纯化组分为一种组合物，其中目标种类包括至少约所有存在的大分子种类的50％(以摩尔计)。
一般地，大体上纯化组合物将包括组合物中存在的大于80％，更优选地大于约85％、90％、95％、和99％的大分子种类。最优选地，目标种类被纯化成基本均一性(经传统检测方法不能检测出组合物中的污染物种类)，其中组合物基本由单一大分子种类组成。
术语患者包括人和兽医医学对象。术语对象包括人和其他哺乳动物。
人抗体和抗体的人性化
例如，采用下面实施例中描述的方法制备得到huIFNγ抗体。通过将scFv克隆转化成IgG形式制备得到IgG huIFNγ抗体(参见，实施例6)。或者，例如，采用噬菌体-展示方法、仅含人序列的抗体形成huIFNγ抗体。这种方法在本领域中是重所周知的，例如，在WO92/01047和美国专利No.6,521,404，通过引述合并于本文中。在该方法中，采用IFNγ或其片段的天然或重组原料来源，对实行轻链和重链随机配对的噬菌体的组合文库进行筛选。
通过一种方法制备得到一种huIFNγ抗体，其中至少该方法的一种步骤包括对具有人IFNγ蛋白的基因改造的、非人动物进行免疫。异基因非人动物的内生重链和/或κ轻链位点的一些已经丧失和不能够进行必需的重组而产生编码响应一种抗原的免疫球蛋白的基因。此外，至少一种人重链位点和至少一种人轻链位点已经稳定转染到动物体内。因此，响应给药的抗原，人位点进行重组而提供编码对该抗原免疫特异性的人可变区的基因。因此，一经进行免疫，转基因鼠产生分泌全人免疫球蛋白的B-细胞。
制备异基因非人动物的多种技术在本领域中是众所周知的。例如，参见美国专利No.6,075,181和No.6,150,584。通过一种方案，异基因(人)重链和轻链免疫球蛋白基因被引入到宿主胚系(例如，精子或卵母细胞)中并且，在两步中，采用同源重组进行失活处理致使对应的宿主基因的非功能化。人重链和轻链免疫球蛋白基因在适宜的真核微生物或原核微生物内进行重新构建，生成的DNA片段被引入到适宜的宿主内，例如，原核受精小鼠卵母细胞或胚胎干细胞。通过在宿主细胞内，尤其在胚胎干细胞或原核受精小鼠卵母细胞内同源重组进行靶向破坏适宜的位点使内生宿主免疫球蛋白位点失活。靶向破坏可能涉及在靶向位点内引入病变或删除，或在靶向位点内删除同时插入位点，例如插入可选择的标记物。在胚胎干细胞中，制备得到嵌合动物，其部分源自修饰的胚胎干细胞并能够通过胚系传递遗传修饰。宿主内生位点的杂交将产生动物，其抗体是纯粹异基因的，例如，人。
在可供选择的方案中，至少部分的人重链和轻链免疫球蛋白位点被用于通过在胚胎干细胞内同源重组直接取代对应内生免疫球蛋白位点。这导致失活和内生免疫球蛋白的同时发生。由此生成嵌合动物，其中胚胎干细胞衍生的细胞可能有助于胚系细胞。
例如，表达人抗-IFNγ抗体的B细胞克隆被从异基因非人动物中除去并依据本领域中周知的多种方法被永生化。这种B细胞可直接源自动物的血液或淋巴组织，包括但不限于脾、扁桃腺、淋巴结、和骨髓。合成的、永生化B细胞可被扩大并在体外培养而生成较大、临床用量的huIFNγ抗体。或者，编码具有一种或一种以上人可变区免疫球蛋白的基因可获得并以不同细胞类型被表达，包括但不限于哺乳动物细胞培养体系，为了直接获得由单链Fv分子组成的抗体或其单链。
此外，由异基因非人动物产生的整组全人抗-IFNγ抗体可被筛选出鉴别一种具有最佳特征的这种克隆。该特征包括，例如，对人IFNγ蛋白的结合性、相互作用的稳定性以及同型的全人抗-IFNγ抗体。那么，具有预期特征的整组克隆被用作编码预期可变区的核苷酸序列原料来源，用于进一步在可供选择的细胞体系中，采用传统重组或转基因技术生成具有这些特征的抗体。
对制备第一种转基因小鼠TM菌株相关的一般方案进行了说明。参见Green et al.Nature Genetics 7：13-21(1994)。该方法进一步进行了讨论并在1990年1月12日提出的美国专利申请Serial Nos.07/466,008、1990年11月8日提出的07/610,515、1992年7月24日提出的07/919,297、1992年7月30日提出的07/922,649、1993年3月15日提出的08/031,801、1993年8月27日提出的08/112,848、1994年4月28日提出的08/234,145、1995年1月20日提出的08/376,279、1995年4月27日提出的08/430,938、1995年6月5日提出的08/464,584、1995年6月5日提出的08/464,582、1995年6月5日提出的08/463,191、1995年6月5日提出的08/462,837、1995年6月5日提出的08/486,853、1995年6月5日提出的08/486,857、1995年6月5日提出的08/486,859、1995年6月5日提出的08/462,513、1996年10月2日提出的08/724,752、和1996年12月3日提出的08/759,620和美国专利Nos.6,162,963、6,150,584、6,114,598、6,075,181、和5,939,598和日本专利Nos.3068180 B2、3068 506 B2、和3 068 507 B2。也参见Mendez et al.Nature Genetics 15：146-156(1997)和Green and Jakobovits J.Exp.Med.：188：483-495(1998).也参见1996年6月12日准予公开的欧洲专利No.，EP 0463 151 B1、1994年2月3日公开的国际专利申请No.，WO 94/02602、1996年10月31日公开的国际专利申请No.，WO96/34096、1998年6月11日公开的WO 98/24893、2000年12月21日公开的WO 00/76310。
在可供选择的方法中，其他的利用“微小位点”方法。在微小位点方法中，内生Ig位点经包含Ig位点片段(单个基因)被模拟出。因此，一种或一种以上VH基因、一种或一种以上DH基因、一种或一种以上JH基因、μ恒定区、和第二个恒定区(优选γ恒定区)组成插入动物体内的构成物。该方法在Surani et al提出的美国专利No.5,545,807和Lonberg and Kay提出的每个美国专利Nos.5,545,806、5,625,825、5,625,126、5,633,425、5,661,016、5,770,429、5,789,650、5,814,318、5,877,397、5,874,299、和6,255,458，Krimpenfort和Berns提出的美国专利No.5,591,669和6,023.010，Berns et al提出的美国专利Nos.5,612,205、5,721,367、和5,789,215，Choi和Dunn提出的美国专利No.5,643,763，和1 990年8月29日提出的GenPharm国际美国专利申请Serial Nos.07/574,748、1990年8月31日提出的07/575,962、1991年12月17日提出的07/810,279、1992年3月18日提出的07/853,408、1992年6月23日提出的07/904,068、1992年12月16日提出的07/990,860、1993年4月26日提出的08/053,131、1993年7月22日提出的08/096,762、1993年11月18日提出的08/155,301、1993年12月3日提出的081161，739、1993年12月10日提出的08/165,699、1994年3月9日提出的08/209,741。也参见欧洲专利No.0 546 073 B1、国际专利申请Nos.WO 92/03918、WO 92/22645、WO 92/22647、WO92/22670、WO 93/12227、WO 94/00569、WO 94/25585、WO96/14436、WO 97/13852、和WO 98/24884和美国专利No.5,981,175。进一步参见Taylor et al，1992，Chen et al，1993，Tuaillon et al，1993，Choi et al，1993，Lonberg et al，(1994)，Taylor et al，(1994)，和Tuaillon et al，(1995)，Fishwild et al，(1996)。
最小位点方法的一种优势是迅速生成包括部分Ig位点的构建并将其引入到动物体内。然而，相当地，最小位点方法的一种重要优势为，理论上，通过包含小量的V、D、和J基因引入少量的多样性。事实上，已作的工作显示出支持该观点。通过采用最小位点方法得到的动物的B-细胞形成和抗体生成显示出成长受到妨碍。因此，围绕本发明的研究始终如一地关注于引入Ig位点的大部分为了获得更大多样性并努力重组动物的全部免疫能力。
已经证实经微小细胞融合、大片染色体或整个染色体引入等方法，可以从老鼠身上制备人抗体。参见欧洲专利申请Nos.773 288和843 961。
人抗小鼠抗体(HAMA)反应已经工业化制备得到嵌合抗体或其他人抗体。然而，嵌合抗体具有一种人恒定区和免疫可变区，可预期的是，确定的人抗-嵌合抗体(HACA)反应将被观察到，尤其在慢性的或多剂利用该抗体中。因此，将预期的是，提供抗IFNγ的全人抗体为了使HAMA的关注目标和/或影响或HACA反应的无效。
具有减少免疫发生的抗体的生产也通过人性化和采用适宜文库的展示技术实现。应理解的是，小鼠抗体或来自其他种类的抗体可被人性化处理或采用本领域中众所周知的方法进行灵长猿化处理。参见，例如Winter and Harris Immunol Today 14：43 46(1993)和Wright et al.Crit，Reviews in Immunol.12125-168(1992)。主体抗体可通过重组DNA技术进行基因改造，用相应的人序列取代CH1、CH2、CH3、铰链区、和/或骨架区(参见，WO 92102190和美国专利Nos.5,530,101、5,585,089、5,693,761、5,693,792、5,714,350、和5,777,085)。采用Ig cDNA构建嵌合免疫球蛋白基因也是本领域中周知的(Liu et al.P.N.A.S.84：3439(1987)and J.Immunol.139：3521(1987))。mRNA从杂种瘤或其他产生抗体的细胞中分离并用于生产cDNA。主体的cDNA可通过采用特异性引物经聚合酶链反应进行扩增(美国专利Nos.4,683,195和4,683,202)。或者，构建一种文库并对其进行筛选分离出主体序列。然后，编码抗体可变区的DNA序列被融合到人恒定区序列上。人恒定区基因的序列可在Kabat et a1.(1991)Sequences of Proteins of immunological Interest，N.I.H.publication no.91-3242中得到。人C区基因容易从已知克隆中得到。同型选择将受到预期的效应子功能如补体结合、或抗体依赖性细胞毒性的引导。优选同型为IgG1、IgG3和IgG4。人轻链恒定区、κ或λ中的任一种可被利用。嵌合的、人性化抗体通过传统方法进行表达。
抗体片段，如Fv、F(ab′)2和Fab可通过完整蛋白的切割，例如，通过蛋白酶或化学切割制得。或者，一种截短型基因被设计出。例如，编码F(ab′)2片段的一部分的嵌合基因将包括编码CH1结构域和H链铰链区的DNA序列，以及得到截短型分子的一种翻译终止密码子。
H和L J区的一致序列可用于设计寡核苷酸，其作为探针引导有效限制位点进入到V区片断和人C片断的后生链接的J区。C区cDNA可通过定点突变技术将一种限制性位点放置在人序列中的类似位点处来进行修饰。
表达载体包括质粒体、逆转录酶病毒、YACs、EBV衍生游离基因、和类似物。一种方便性载体为编码功能完整人CH或CL免疫球蛋白序列的载体，采用基因改造的适宜的限制性位点使得一些VH或VL-31序列可容易被插入并被表达。在这种载体内，拼接通常发生在插入J区内的剪接供体位点和人C区前的剪接接受位之间，并也在存在人CH外显子内的剪接区。多聚腺苷酸化和转录终止发生在编码区下游的天然染色体位点。得到的嵌合抗体可与任何强启动子连接，包括逆转录病毒LTRs，例如，SV-40病毒早期启动子(Okayama et al.MoL Cell.Bio.3：280(1983))，Rous肉瘤病毒(Gorman et al.P.N.A.S.79：6777(1982))，和小鼠莫洛尼氏白血病毒LTR(Grosschedl et al.Cell 41：885(1985))。按照理解的，天然Ig启动子和类似物可被采用。
进一步，人抗体或来自其他种类的抗体可通过展示类型技术，包括，但不限于，展示文库、逆转录病毒展示、核糖体展示、和其他技术，采用本领域中众所周知的技术制得，生成的分子可能经过附加的成熟，如亲和力成熟，该技术是本领域中周知的。Wright and Harris，supra.，Hanes and Plucthau PEAS USA 94：4937-4942(1997)(核糖体展示)、Parmley and Smith Gene 73：305-318(1988)(噬菌体展示)、Scott TIB5 17：241-245(1992)、Cwirla et al.PNAS USA 87：6378-6382(1990)、Russel et al Nucl.Acids Research 21：1081-1085(1993)、Hoganboom et al.Immunol.Reviews 130：43-68(1992)、Chiswell and McCaffertyTIBTECH；10：80-8A(1992)和美国专利No.5,733,743。如果展示技术用于制备非人抗体，这种抗体可按照上面描述的方法进行人性化。
采用这些技术，抗体可制成IFNγ表达细胞，IFNγ，IFNγ形式，表位或其肽，和其表达文库(参见，例如，美国专利No.5,703,057)，其后按照上面描述的内容根据上面描述的活性对该文库进行筛选。
其他疗法的设计和产生
依据本发明和基于这里制备和表征的与IFNγ相关抗体的活性，促进了抗体基团之外的其他治疗形式的设计。这种形式包括，但不限于，先进的抗体治疗，如双特异性抗体、免疫毒素、和反射性标记疗法、肽疗法的生成、基因治疗、显著的内抗体、反义疗法、和小分子。
例如，关于双特异性抗体，能制得双特异性抗体，其包括(i)两个抗体，一种对IFNγ具有特异性并且另一种与第二个分子结合在一起，(ii)一种单个抗体，具有对IFNγ特异性的一种链和对第二个分子具有特异性的第二个链，或者(iii)一种单链抗体，其对IFNγ和另一种分子具有特异性。采用众所周知的方法制得这种双特异性抗体，例如关于(i)和(ii)，参见，例如Fanger et al.Immunol Methods 4：72-81(1994)and Wright and Harris，supra，关于(iii)，参见，例如Traunecker et al.Int.J.Cancer(Suppl.)7：51-52(1992)。
关于免疫毒素，采用本领域中众所周知的方法可将抗体修饰来起到免疫毒素作用。参见，例如Vitetta Immunol Today 14：252(1993)。也参见美国专利No.5,194,594。关于放射性抗体的制备，这种修饰抗体也可利用本领域中众所周知的方法容易制得。参见，例如Junghans et al.in Cancer Chemotherapy and Biotherapy 655-686(2d edition，Chafher and Longo，eds.，LippincottRaven(1996))。也参见美国专利4,681,581、4,735,210、5,101,827、5,102,990(RE 35,500)、5,648,471、和5,697,902。免疫毒素和放射性标记分子中的每一种将可能杀死表达IFNγ细胞，尤其本发明抗体有效的那些细胞。
关于治疗肽的生成，通过利用IFNγ和抗体的结构信息，例如本发明抗体或筛选肽文库，针对IFNγ的治疗肽可被制得。肽治疗的设计和筛选在Houghten et al.Biotechniques 13：412-421(1992)、Houghten PNAS USA 82：5131-5135(1985)、Pinalla etal.Biotechniques 13：901-905(1992)、Blake and Litzi-Davis BioConjugate Chem.3：510-513(1992)中进行了讨论。按照类似方法，连同上面讨论的与抗体相关的肽类基团，免疫毒素和放射性标记分子也可被制得。假定IFNγ分子(或一种形式，如剪接变异体或可替换形式)在疾病过程中具有活性，也可能通过传统方法设计基因和反义治疗剂。这种形式可用于调节IFNγ功能。关于本发明抗体使设计和其相关功能测试的使用更便捷。反义治疗剂的设计和方案在国际专利申请No.WO 94/29444中进行了详细讨论。基因治疗的设计和方案是众所周知的。然而，特殊地，关于内抗体的基因治疗方法的采用可能证明具有显著优势。参见，如Chen et al.Human Gene Therapy 5：595-601(1994)andMarasco Gene Therapy 4：11-15(1997)。关于基因治疗剂的一般设计和考虑也在国际专利申请No.WO 97/38137进行了讨论。
IFNγ分子结构和其与依据本发明其他分子如本发明抗体的相互作用中收集到信息，并且其他可能用于合理设计另外的治疗形式。在这点上，合理的药物设计技术如X射线结晶学、计算机辅助(或帮助)分子建模(CAMM)、定量或定性结构-或活性关系(QSAR)、和类似方法可用于关注药物发明活动。合理设计实现了蛋白或合成结构的预测，合成结构可能与分子或其特殊形式相互作用，该特殊形式可用于修饰或调节IFNγ活性。这种结构可被化学合成或在生物体系中表达。该方法在Capsey et al.Genetically Engineered Human Therapeutic Drags(Stockton Press，NY(1988))进行了讨论。进一步，组合文库可被设计和合成并在筛选程序中使用，如高通量筛选活动。
治疗剂给药和配制
应了解，依据本发明，治疗剂给药将与适宜载体、赋形剂一起给药，其他试剂被添加到制剂中来提供改善的转移、输送、耐受性和类似性质。许多适宜的配方可在所有制药药剂师周知的药典中找到：Remington′s Pharmaceutical Sciences(15th ed，MackPublishing Company，Easton，PA(1975))，尤其在Blaug，Seymour编写的第87章。这些配方包括，例如，粉末、贴剂、药膏、凝胶剂、蜡、油、脂质、含小泡的脂质(例如，LipofectinTM)、DNA偶联物、无水吸收贴剂、水包油和油包水乳剂、乳剂碳蜡(不同分子量的聚乙二醇)、半固态凝胶、和含有碳蜡的半固态混合物。假如制剂中的活性组分经配制不失活并且制剂与给药路线生理上兼容并具有耐受性，现有混合物中的任何一种可能在本发明的处理和治疗中有效。也参见，Baldrick P.″Pharmaceutical excipient development：the need for preclinical guidance.″Regul.Toxicol Pharmacol.32(2)：210-8(2000)，Wang W.″Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals.″Int.J.Pharni.203(1-2)：1-60(2000)，Charman WN″Lipids，lipophilicdrugs，and oral drug delivery-some emerging concepts.″J Phartn Sci.89(8)：967-78(2000)，Powell et al.″Compendium of excipients for parenteral formulations″PDA J Pharm Sci Technol.52：238-311(1998)和与制药药剂师周知的制剂、赋形剂和载体相关的引用的附加信息。
本发明的治疗剂，包括本发明的huIFNγ抗体，用于治疗或缓解免疫相关紊乱的综合症，例如，自体免疫疾病或炎性紊乱。
例如，对患有Crohn′s疾病(CD)的主体进行huIFNγ抗体给药可能直接作用在引发疾病的免疫细胞上，从而提供最小抑制免疫系统的快速干预。对患有系统性红斑狼疮的主体进行huIFNγ抗体给药是另一种提供修饰引发疾病的免疫细胞的医学指征。对患有牛皮癣的主体进行huIFNγ抗体、全人蛋白给药避免了运用更强烈药物治疗患者的需要，这种药物具有经证实不必要的副作用(例如，肝损伤)。对患有风湿性关节炎的主体进行huIFNγ抗体给药为提供机会来调节下游生长和诱导ThI-介导反应的疾病的功能。
自体免疫疾病包括，例如，获得性免疫缺陷综合症(AIDS，自体免疫组分的病毒性疾病)、斑秃、僵直性脊椎炎、抗磷脂抗体综合症，自体免疫阿狄森氏病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳病(AIED)、自身免疫性淋巴增生综合症(ALPS)、自身免疫性血小板减少性紫癜(ATP)、贝西氏病、心肌病、腹腔口炎性腹泻-疱疹样皮炎；慢性疲劳和免疫功能不全症候群(CFIDS)、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIPD)、瘢痕性类天疱疮、冷凝集素病、CREST综合症、克隆氏症、Degos病、幼年型皮肌炎、盘状红斑、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛-纤维织炎、葛瑞芙氏症、格林-巴利综合症、桥本氏甲状腺炎、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA肾病、胰岛素非依赖性糖尿病、幼年慢性关节炎(史提尔氏病)、幼年型类风湿性关节炎、梅尼尔氏症、混合结缔组织病、多发性硬化症、重症肌无力、恶性贫血症、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合症、风湿性多肌痛、多肌炎及皮肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、银屑病关节炎、雷诺现象、莱特尔综合症、风湿热、风湿性关节炎、结节病、硬皮病(进行性系统性硬化症(PSS)、也命名为系统性硬皮病(SS))、干燥综合症、僵人综合症、系统性红斑狼疮、大动脉炎、颞动脉炎/巨细胞血管炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、白癫风和韦格纳肉芽肿。
炎性紊乱包括，例如，慢性和急性炎性紊乱。炎性紊乱的实施例包括阿尔茨海默病，哮喘，特异反应性过敏，过敏，动脉硬化症，支气管哮喘，湿疹，血管球性肾炎，移植物抗宿主病，溶血性贫血，骨关节炎，脓血症，中风，组织和器官移植，血管炎，糖尿病型视网膜病和呼吸机诱发性肺损伤。
huIFNγ抗体调节主体内，例如人主体内的免疫反应。例如，这里描述的huIFNγ抗体调节，例如减少、抑制或预防放大的Th1-介导免疫反应如与自体免疫或炎性紊乱如，克隆氏症，全身性红斑性狼疮，银屑病，类肉状瘤病，风湿性关节炎，血管炎，异位性皮炎和继发-进展型多发性硬化相关的放大的Th1-介导免疫反应。在放大的Th1-介导免疫反应中，Th1细胞因子，如IL-2、IL-3、TNF-alpha(TNFα)和IFNγ，存在于主体内的水平高于没有患有与放大的Th1-免疫反应相关的疾病或紊乱的主体内Th1细胞因子产生水平。为了将Th1-介导免疫反应分类放大反应，采用ELISA或其他测试，通过测量和分析分析细胞因子水平评估Th1细胞因子产生反应水平。
在这里描述的huIFNγ抗体也用于调节，如抑制、减少或预防，类型转变成IgG同型，例如IFNγ-诱导的类别转换。这些huIFNγ抗体调节，例如，抑制、预防或减少Th1-介导反应，从而降低IFNγ-诱导转换。在一种实施方案中，用于治疗免疫相关紊乱的huIFNγ抗体组合物联合许多抗-细胞因子试剂或抗-趋化因子试剂中的任何一种一起给药。适宜的抗-细胞因子或抗趋化因子试剂识别，例如，细胞因子如白细胞介素1(IL-I)、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-27和IL-31，和/或趋化因子如MIP1α、MIP1β、RANTES、MCP1、IP-10、ITAC、MIG、SDF和趋化因子。
本发明也提供了治疗或缓解免疫紊乱相关综合症的方法。例如，本发明组合物用于治疗或缓解这里描述的自体免疫疾病和炎性紊乱中任何一种的综合症。免疫相关紊乱的综合症包括，例如，炎症、发烧、食欲不振、体重降低、腹部症状如，腹部疼痛、腹泻或便秘，关节疼痛或疼痛(关节痛)，疲劳，皮疹，贫血症，对寒冷极其敏感(雷诺氏现象)，肌肉软弱，肌肉疲劳，皮肤或组织状态改变、呼吸短促或其他非正常呼吸型，胸疼或胸部肌肉收缩、心跳不正常(例如，提高或降低)，感光性，模糊或其它视觉失常、和器官功能减弱。
huIFNγ抗体的治疗制剂对患有免疫相关紊乱，如自体免疫疾病或炎性紊乱的主体进行给药。患有自体免疫疾病或炎性紊乱的主体经本领域中周知的方法鉴别出。例如，患有自体免疫疾病如克隆氏症、狼疮或银屑癣的主体采用许多临床和/或实验室测试如身体检查、放射性检查、和血液、尿液和粪便分析评价免疫状态来鉴别出。例如，患有狼疮的患者通过采用如抗核抗体测试(ANA)确定是否细胞核的自体抗体存在于血液中来鉴别出。患有克隆氏症的患者采用如上肠胃道摄影术和/或分别评价小肠和大肠的结肠镜检查来鉴别出。
患有银屑癣的患者采用如从受影响皮肤贴片中取得的组织进行显微镜检查来鉴定出，然而患有风湿性关节炎的患者采用如血液测试和/或X射线或其他影像评估进行鉴定。
如果许多实验室或临床结果的任何一些被得到，对患有免疫相关紊乱如自体免疫疾病或炎性紊乱的患者进行huIFNγ抗体给药。例如，对患有免疫相关紊乱如自体免疫疾病或炎性紊乱的患者进行huIFNγ抗体给药被成功地考虑过，与紊乱相关的综合症中的一种或一种以上被缓解、减少、抑制或不发展到进一步如恶化状态。对患有免疫相关紊乱如自体免疫疾病或炎性紊乱的患者进行huIFNγ抗体给药被成功地考虑，如果该紊乱，例如自体免疫紊乱，症状缓解或不发展到进一步如恶化状态。
诊断和预防制剂
本发明的全人抗-IFNγ Mabs在诊断和预防制剂中使用。在一种实施方案中，将本发明的huIFNγ Mab对存在患上一种前述自体免疫疾病风险的患者进行给药。对易患有一种或一种以上前述自体免疫疾病的患者可采用基因型、血清学或生物化学标记物进行给药。
在本发明的另一种实施方案中，将huIFNγ抗体对诊断患有一种或一种以上前述自体免疫疾病的人个体进行给药。一经诊断，进行huIFNγ抗体给药来减轻或消除自体免疫影响。
本发明抗体也在监测患者样本中IFNγ中有效并因此作为诊断剂。例如，本发明的huIFNγ抗体在体外测试如ELISA中使用来检测患者样本中IFNγ水平。
在一种实施方案中，本发明的hulFNγ抗体固定在固体支撑体上(例如，微升培养本的孔槽中)。被固定抗体起到可能存在于测试样本中任何IFNγ的捕获抗体的作用。在接触患者样本的固定抗体之前，将固体支撑体清洗并用阻滞剂如水貂蛋白或白蛋白进行处理来预防被分析物的非特异性吸收。
随即，将孔槽用怀疑含有抗原的测试样本，或含有标准量的抗原的溶液进行处理。这种样本为，如来自怀疑具有病理学诊断水平的循环抗原的主体中取得血清样本。在冲洗测试样本或标准物，将固体支撑体用可探测标记的第二个抗体进行处理。标记的第二个抗体起到探测抗体的作用。可探测标记的水平被测量出，并且测试样本中IFNγ抗原的浓度通过与标准样本中得到的标准曲线进行对比而被确定。
应理解的，基于体外诊断测试中采用本发明huIFNγ抗体得到的结果，将主体患有的一种疾病(例如，自体免疫或炎性紊乱)以IFNγ抗原的表达水平为基础来分出阶段。对于给定疾病，从诊断为处于疾病发展中不同阶段，和/或该疾病治疗中不同程度的主体中抽取血液样本。采用提供发展或治疗的每个阶段统计学显著性结果的一组样本，可评价每个阶段特征的抗原浓度范围被指定出。
这里引用的所有出版物和专利论文通过引述合并于文本中，似乎每个出版物或论文进行特别和单独说明通过引述合并于本文中。引用出版物和专利论文目的不是承认任何一种是相关现有技术，也不等同于承认同样的内容或日期。采用描述对本发明进行了描述，本领域中的技术人员将认识到本发明可在多种实施方案和前述描述中实施并且下列实施例是为了说明目的而不是限制权力要求书。
实施例
下列实施例提供了指导性试验和达到的结果，这些试验和结果仅为了起到举例说明目的并作为本发明的限制。
实施例1：人干扰素γ的克隆、表达和提纯
克隆.
对应于人干扰素γ(hlFNγ，hulFNγ)的成熟序列的序列经聚合酶链反应(PCR)采用特异性寡核苷酸从人cDNA中进行扩增。将扩增产物凝胶提纯并克隆进pET41c表达载体内(Novagen，SanDiego CA)。进一步，经蛋白体内生物素化和经IMAC(固定化金属离子亲和层析法)提纯将载体进行修饰而引入AvitagTM(Avidity，Denver CO)和在hlFNγ的C-末端处引入八-组氨酸标签。
表达.
大肠杆菌BL21细胞与pET41 c-hlFNγ和pACYC 184-BirA载体共转化，pACYC 184-BirA载体编码AvitagTM序列体内生物素化的BhA酶。抗卡那霉素(50μg/ml)和氯霉素(10μg/ml)的单菌落被筛选出并用于接种LB(Kan 50μg/ml/Cm 10μg/ml)中的[起子]培养物并在37℃培养。
第二天，将培养物用于接种一种添加50μM生物素的LB(Kan 50μg/ml/Cm 10μig/ml)的400ml培养物。将该培养物在37℃下经振荡培养直到OD600为0.6。在那个阶段，将异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)加入达到最后浓度1mM，将该培养物进一步在相同条件下培养3小时。将细胞在4000rpm转速下离心分离20分钟，将颗粒状物在-20℃下冷冻。在这些条件下，基本上所有hlFNγ是不溶的并在包含体内找到。
提纯.
将细菌颗粒状物解冻并重新悬浮在含有8μl Benzonaze(Novagen)的Bugbuster试剂并在室温下培养30分钟。
4℃下，将15′000g的该溶液离心分离。含有包含体的颗粒状物重新悬浮在7ml增溶缓冲液中(50mM Tris-HCL pH 7.4，300mM NaCl，20mM咪唑，5mM β-巯基乙醇，6M胍-HCl)。将15′000g的重新悬浮物质在4℃下离心分离30分钟。
两个5ml的Hi Trap Chelating column(Amersham，Buckinghamshire，England)，装载NiSO4，用增溶缓冲液平衡，依据厂商说明书连接在一起。离心分离后的上清液经0.45μm孔径膜过滤并用蠕动泵按1ml/min速度装载在柱上。然后，将该柱置于AKTA prime色谱系统用于柱上蛋白折叠和洗提。用35ml增溶缓冲液以1ml/min流速冲洗固定的蛋白质。具有渐增浓度的refolding buffer的线性梯度增溶缓冲液按1ml/min速度使用1分钟直到达到100％refolding buffer。然后，将折叠蛋白从柱中用洗提缓冲液中洗提出来(50mM Tris-HCl、300mM NaCl、400mM咪唑)。含片段的蛋白质被冷冻起来并在用PBS平衡的PD10柱(Amersham)上进行脱盐。然后，将脱盐的蛋白质等分并在-80℃下储存。
实施例2：细胞表面上的细胞表达干扰素γ
用c-myc-标记的人IFNγ稳定转染中国仓鼠卵母(CHO)细胞(从ATCC中得到)。将cDNA亚克隆到含新霉素抗性基因的pCDNA 3.1质粒体内(Invitrogen，Carlsbad CA)。采用抗-6xHis(Sigma)抗体筛选转染子。人IFNγ的表面表达经流式细胞术采用抗-IFNγ mAb(clone B27，Becton Dickinson，Franklin Lakes NJ)得到证实。
实施例3：人scFv文库的筛选
人scFv文库的构建和操作的一般方法在Vaughan et al.，(Nat.Biotech.1996，14：309-314)中进行了描述，因此通过全部引述被合并于本文中。依据下面方法，人scFv文库被筛选抗hlFNγ。
液相筛选.
室温下，在回转式混合机中，采用含3％(w/v)脱脂乳的PBS对经Cambridge抗体技术得到的scFv噬菌体文库(1012Pfu)的等分量阻断一种小时。然后，室温下，被阻断噬菌体在链亲合素磁珠(Dynal M-280)上取消选择1小时。室温下，取消选定的噬菌体于回转式混合机上用生物素化hEFNγ(100nM)体内培养两个小时。采用磁性表座将小球捕获，随即用PBS/0.1％Tween 20清洗4次，用PBS清洗3次。然后，将小球直接加入到10ml成指数增长的TG1细胞中并在37℃经缓慢振荡(100rpm)培养一种小时。被感染的TG1等分物被连续稀释来测定筛选产物。剩余的被感染TG1按3000rpm转速下自璇15分钟并重新悬浮在0.5ml  2xTY-AG(含有100μg/ml氨苄青霉素和2％葡萄糖的2xTY介质)并涂在2xTYAG琼脂生物测试板上。30℃下过夜培养后，将10ml 2xTYAG加入到培养板上并将细胞从表面刮擦下来并转移到50ml聚丙烯试管中。将含有50％丙三醇的2xTYAG加入到细胞悬浮液中来得到最终浓度为17％的丙三醇。筛选循环得到的等分物保存在-80℃下。
细胞表面筛选.
室温下，在回转式混合机中，采用含3％(w/v)脱脂乳的PBS对经Cambridge抗体技术得到的scFv噬菌体文库(1012Pfu)的等分量阻断一种小时。然后，在37℃/5％CO2条件下，被阻断噬菌体在empty pDisplay vector转染和含2％(w/v)脱脂乳的PBS阻断的CHO细胞上取消选择1小时(在T75烧瓶中80％confluence)。室温下，取消选定的噬菌体经平缓振荡在CHO-pDisplay-hlFNγ载体上培养一种小时。用PBS经细胞清洗10次。将10ml成指数增长的TG1细胞添加到T75烧瓶中洗提被结合噬菌体并且在37℃经缓慢振荡将其培养一种小时。被感染的TG1等分物被连续稀释来测定筛选产物。剩余的被感染TG1按3000rpm转速下自璇15分钟并重新悬浮在0.5ml 2xTY-AG(含有100μg/ml氨苄青霉素和2％葡萄糖的2xTY介质)并涂在2xTYAG琼脂生物测试板上。30下过夜培养后，将10ml2xTYAG加入到培养板上并将细胞从表面刮擦下来并转移到50ml聚丙烯试管中。将含有50％丙三醇的2xTYAG加入到细胞悬浮液中来得到最终浓度为17％的丙三醇。筛选循环得到的等分物保存在-80℃下。
噬菌体抢救
从先前筛选循环中得到的100μl细胞悬浮液被加入到20ml2xTYAG中并在37℃震荡(240rpm)培养直到OD600为0.3到0.5。将培养物用3.3x1010MK13K07辅助噬菌体重叠感染并在37℃下培养1小时(150rpm)。通过按2000rpm转速将细胞离心分离10分钟改变该介质，除去该介质并将颗粒物重新悬浮在20ml2xTY-AK(100μg/ml氨苄青霉素；50μg/ml卡那霉素)。然后，将培养物在30℃(240rpm)培养过夜。
ELISA的单克隆噬菌体营救.
将单克隆挑选到每个孔槽内含有150μl 2xTYAG介质(2％葡萄糖)的微升培养板内(100-120rpm)5-6小时。M13KO7辅助噬菌体被加入到每个孔槽内得到多重感染的10(例如，培养物中每个细胞的10个噬菌体)并在37℃(100rpm)下培养1小时。培养后，将培养板按3,200rpm转速离心分离10min。将上清液仔细除去，细胞重新悬浮在150μl 2xTYAK介质中并在30℃(120rpm)下培养过夜。对于ELISA，通过加入含有5％脱脂乳粉末的150μl 2x浓缩PBS阻断噬菌体，随即在室温下培养1小时。然后，将培养板按3000rpm转速下离心分离10分钟并且噬菌体含有ELISA用的上清液。
噬菌体ELISA.
将ELISA培养板(Maxisorb，NUNC)用含有2μg/ml hlFNγPBS涂敷过夜。对照培养板被涂敷2μg/ml BSA。然后，用3％脱脂乳/PBS于室温下封闭1小时。在转移经过封闭噬菌体上层清液之前用PBS 0.05％Tween 20清洗3次并且在室温下培养1小时。然后，用PBS 0.05％Tween 20清洗3次。每个孔槽内50μl含有(HRP)-偶联抗M13抗体(Amersham，稀释成1∶10,000)的3％脱脂乳/PBS。室温下培养1小时之后，将培养板用PBS0.05％Tween 20清洗5次。然后，加入50μl TMB(Sigma)和50μl 2N H2SO4使ELISA终止反应。在450nm处读出吸收强度。
噬菌体克隆排序
单克隆被放入到微升培养板内并在30℃(120rpm)下培养过夜，该培养板的每个孔内含有150μl 2xTYAG介质(2％葡萄糖)。第二天，将5μl培养物转移到含有45μl dH2O的另一种培养板内并进行混合。然后，将该培养板在-20℃下冷冻。解冻后，1μl该悬浮液用于PCR扩增，采用标准PCR协议，利用对pCANTAB6：mycseq，5′-CTCTTCTGAGATGAGTTTTTG-3″(SEQ ID NO：100)和基因3前导序列，5′-TTATTATTCGCAATTCCTTTAGTTGTTCCT-S′(SEQ ID NO：101)具有特异性引物。
采用Montage PCRμ96系统(Millipore)，将PCR反应在96孔板内提纯。采用mycseq和基因3前导引物对5μl被洗提DNA进行排序。
功能测试用ScFv周质制备.
将单克隆接种到每个孔槽内含有0.9ml 2xTYAG介质(0.1％葡萄糖)的深孔槽的微升培养板内5-6小时(250rpm)。然后，向每个100μl孔槽内加入含有0.2mM IPTG的2xTY介质达到最终浓度0.02mM IPTG。然后，将培养板在30℃按250rpm振荡培养过夜。在2,500rpm转速下将深孔槽培养板离心分离10分钟，仔细将上层清液除去。颗粒物重新悬浮在150μl TES缓冲液(50mM Tris/HCl(Ph＝8)，1mM EDTA(pH＝8)、20％蔗糖、加入完整蛋白酶抑制剂，Roche)中。通过加入150μl稀释的TES缓冲液(1∶5＝TES∶水稀释液)产生低渗透压冲击并在冰上培养30分钟。然后，将培养板在4000rpm转速下离心分离10分钟除去细胞和碎片。仔细将上层清液转移到另一种微升培养板内并放置于冰上在功能实验或ELISA中即刻测试。
大规模scFv提纯
1ml 2xTYAG[起子]培养物与新切线2xTYAG琼指平板上的单菌落接种并在37℃振荡(240rpm)培养5小时。0.9ml该培养物用于与同一介质的400ml培养物接种并在30℃下剧烈振荡(300rpm)下培养过夜。
第二天，向培养物中加入400μl IM IPTG进行诱导并继续培养3小时。4℃下，按5,000rpm转速离心分离收集该细胞。颗粒状细胞重新悬浮在加入上面描述的蛋白酶抑制剂的10ml冰冷TES缓冲液中。通过加入15ml按比例1∶5稀释的TES缓冲液产生渗压震扰并在冰上培养1小时。仔细将上层清液转移到一种新试管中。向上层清液中加入咪唑到最终浓度为10mM。向每个试管中加入1ml PBS内平衡的Ni-NTA resin(Qiagen)并在4℃下，旋转式混合器上培养1小时。
将试管在2,000rpm转速下离心分离5分钟并仔细除去上层清液。将颗粒状树脂重新悬浮在10ml冷却的(4℃)清洗缓冲液中(50mM NaH2PO4、300mM NaCl、10mM咪唑，pH为8.0)。将悬浮液加入到polyprep柱(Biorad)内。8ml冷却的清洗缓冲液用于经自然流动来清洗该柱。采用2ml洗提缓冲液(50mMNaH2PO4、300mM NaCl、250mM咪唑、pH为8.0)从该柱上洗提出scFv。经280nm处吸收分离馏分并在缓冲液在PBS平衡的PD10脱盐柱(Amersham)上交换之前将含馏分蛋白质集中在一起。采用SDS-PAGE分析含scFv的PBS并通过280nm处吸收确定其值。将提纯的scFv等分并在-20℃和4℃下存储。
实施例4：scFv提取物抑制干扰素γ-诱导受体基因表达
不同的huIFNγ抗体的周质scFv提取物按照上面描述的方法制得。高通量筛选细胞基测试用于鉴别IFNγ活性的单链可变片段(scFv)阻滞剂。一种受到IFNγ-可诱导GBP1启动子支配的受体基因被转染到人黑素瘤细胞系中，Me67.8。scFv和IFNγ两者都共同加入到细胞培养物中。6小时培养时间之后，实施荧光素酶测试。发现抑制萤火虫荧光素酶感应的scFv被保留用于进一步确认。
一些scFv提取物抑制剂量依赖模式的IFNγ-诱导受体基因(图15)。对于图15中显示的每个scFv克隆，多种浓度(2.7、0.68、0.17、0.043和0.011nM)按照上面每个克隆命名的柱显示的进行测量(从左向右降低浓度)。这些浓度下的每个scFv提取物显示的抑制百分率在下表3中显示出。
表3：周质scFV提取物抑制IFNγ-诱导受体基因表达的百分率
  [scFv]nM   A6   H8   A8   D8   C10   B4   B9   F9   A4   E1   C9   G7   G10   D6   G6   G9   D3   F8
  2.7   82   80   85   60   63   63   62   68   36   43   56   75   47   82   73   52   69   64
  0.68   92   75   86   60   50   49   53   32   1   68   67   73   44   73   66   12   55   64
  0.17   100   65   87   40   53   21   56   3   0   38   58   24   0   31   25   0   36   48
  0.043   87   26   65   10   34   5   0   0   0   10   33   38   0   11   0   0   28   0
  0.011   0   0   13   0   19   0   0   0   0   0   0   4   0   0   0   0   20   0
实施例5：干扰素γ-诱导MHC类II表达的scFv抑制
表达
实施流式细胞术试验来鉴别全人IgG抗体、或其片段，能够封闭IFNγ-诱导MHC II类分子表达。涂覆Me67.8细胞之后，在不同浓度的后备全人抗IFNγ单克隆抗体存在下，5ng/ml重组人IFNγ被加入到培养物中。培养48小时后，用荧光标记抗-人MHC II类抗体(HLA-DR)进行染色并采用FACSCalibur进行分析。因此，IC50(50％的IFNγ-诱导MHC II类表达被抑制，如50％的抑制浓度)，每个后备抗体被测量。
按照上面实施例1中描述的方法制得提纯的人scFv。采用上面描述的实施流式细胞术试验对scFv对黑素瘤细胞上IFNγ-诱导MHC II类表达的影响进行评估。这些scFv抑制了黑素瘤细胞上IFNγ-诱导MHC II类表达。(图16，1-12组)。这些scFv克隆抑制黑素瘤细胞上IFNγ-诱导MHC II类表达的能力与这里统称为16C3的小鼠抗人IFNγmAb进行对比。scFv克隆(-)和小鼠抗人IFNγmAb 16C3(---)在图16中进行了描述。
实施例6：将scFv重新格式化成IgG形式
按照上面实施例1中描述的方法制得提纯的全人scFv。采用诱导前导序列的特异性寡核苷酸和5′端处的HindIII限制性位点扩增筛选的scFv的VH和VL序列。Apal或Avrll位点分别被引入到重链和轻链序列的3′端。扩增的VH序列被分解掉HindIII/Apal并被克隆进pCon_γ1表达载体(LONZA，Basel，Switzerland)中。扩增的VL序列被分解掉HindIII/Apal并被克隆进pCon_λ2表达载体(LONZA)中。通过转染至哺乳动物细胞内进行排序之前检验该构建。
采用Fugene 6转染试剂(Roche，Basel，Switzerland)，其适宜表达载体内的VH和VL CDNA序列被转染至哺乳动物细胞内。简单地说，峰值量细胞在含有胎牛血清的2ml培养介质的6-孔槽培养板中以每孔6x105个细胞的浓度进行培养。按照厂商说明书，采用Fugene 6转染试剂，将编码后备VH和VL序列的表达载体共转染至细胞内。转染后的1天，将培养物吸出，将3ml新无血清介质加入到细胞内并在37℃下培养三天。培养三天之后，上层清液被用于收集蛋白G柱上提纯的IgG。
依据厂商说明书，采用蛋白质G-G-Sepharose 4B fast flowcolumn(Sigma，St.Louis，MO)，将重新格式化全IgG从转染细胞内无血清上层清液中提纯出。简单地说，转染细胞的上层清液与ImmunoPure(G)IgG结合缓冲液(Pierce，Rockford IL)在4℃下培养过夜。然后，样本通过蛋白G-Sepharose 4B快速柱并且采用洗提缓冲液提纯IgG。然后，洗提的IgG馏分用PBS透析并在280nm初吸收确定IgG含量。经SDS-PAGE检验纯度和IgG完整性。
实施例7：重建scFv抑制干扰素γ-诱导MHC II类表达
按照上面描述的方法，scFv被重新格式化成IgG形式。采用上面实施例2中描述的流式细胞术试验对scFv对黑素瘤细胞上IFNγ-诱导MHC II类表达的影响进行评估。如图17，1-7组中显示的，这些IgG克隆抑制了黑素瘤细胞上IFNγ-诱导MHC II类表达。这些IgG克隆抑制黑素瘤细胞上IFNγ-诱导MHC II类表达的能力与小鼠抗人IFNγmAb16C3和R&D系统小鼠抗人IFNγ抗体MAB285进行对比。对全人克隆(-X-)、小鼠抗人IFNγmAb 16C3(-▲-)、R&D系统，Inc.(Minneapolis，MN)小鼠抗人IFNγMAB285(-●-)进行了描述。
这些IgG克隆的IC50值在下表4中显示出。
表4.全人抗-IFNγ单克隆抗体的IC50分析
  IgGmAb   MHCII抑制细胞基测试IC50
  16C3   100pM
  MAB285   400pM
  AC1.2R3P2_A6   41pM
  AD14R4P1_B9   322pM
  AC1.4R4P2_C10   203pM
  AC1.2R3P2_D8   708pM
  AD1.3R3P5_F8   1525pM
  AD1.3R3P6_F9   185pM
  AD14R4P2_G7   233pM
实施例8：huIFNγ抗体克隆到胚系序列的回复突变
在这里描述的研究中，A6克隆的核酸和氨基酸序列中核苷酸和氨基酸残基突变到相应的胚系序列中核苷酸或氨基酸。该过程在这里统称为“回复突变”。
A6重链：抗体A6的免疫球蛋白重链可变基因具有与人胚系DP-47或IGHV3-23(GenBank登录号M99660)100％同源性。将A6免疫球蛋白重链连接区(IGHJ)与6个人功能性免疫球蛋白重链连接区比较。A6免疫球蛋白重链连接区(IGHJ)定义为IGHJ2(下表5A)，但具有与IGHJ5-02(下表5B)更全面同源性。因此，A6初始IGHJ区突变到相应IGHJ5-02序列上，但仅对于CDR3外的序列。突变核苷酸和氨基酸残基在表5A和5B中列出，并且CDR区用下划线标出。
表5A：A6和人功能性IGHJ2基因之间的对比
Figure A20068000996200731
T
Figure A20068000996200732
TTCGA
Figure A20068000996200733
CCTGGGGCCG
Figure A20068000996200735
GGCACCCTGGTCAC
Figure A20068000996200736
GTCTC
Figure A20068000996200737
A6(SEQ ID NO：109)
  
Figure A20068000996200738
  
Figure A20068000996200739
  
Figure A200680009962007310
  F  D     W  G  R  G  T  L  V  T  V  S  S(SEQ ID NO：110)
CTACTGGTACTTCGATCTCTGGGGCCGTGGCACCCTGGTCACTGTCTCCTCA IGHJ2(SEQ ID NO：111)
  Y  W  Y  F  D  L  W  G  R  G  T  L  V  T  V  S  S(SED ID NO：112)
  CDR 3
表5B：A6和人功能性IGHJ5-02基因之间的对比
Figure A200680009962007312
ACTGGTTCGACCCCTGGGGCCGGG
Figure A200680009962007314
ACCCTGGTCACCGTCTC
Figure A200680009962007315
A6(SEQID NO：113)
   
Figure A200680009962007316
  W  F  D  P  W  G    G   T  L  V  T  V  S  S(SEQ ID NO：114)
ACAACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA IGHJ5-02(SEQ ID NO：115)
   N  W  F  D  P  W  G  Q  G  T  L  V  T  V  S  S(SEQ ID NO：116)
CDR 3
A6轻链：抗体A6的免疫球蛋白λ可变基因(VL)属于IGLV6-57或V1-22子群(GenBank Accession Number Z73673)。与IGLV6-57对比，A6-VL有7个突变，CDRs中有3个突变，骨架区有4个突变(下表6)。突变核苷酸和氨基酸残基在表6中框中列出，CDR区用下划线标出。
骨架区中的4个突变为：Kabat位点43处骨架区2中Ser到Ala；Kabat位点72处骨架区3中Ser到Thr；Kabat位点79和80处骨架区3中Lys到GIu和Thr到Ala。骨架区的4个突变首先分别被改变，然后所有都回复到相应的人胚系残基。对比于A6抗体，回复到相应的人胚系氨基酸的这4个残基的突变不以任何方式改变NI-0501抗体对其靶点抗原的结合亲和性，NI-0501抗体在这里也统称为“回复突变的A6”。从A6VL序列到CDR1(Ala到VaI)和CDR2(GIn到Arg)相应胚系残基的突变被完成，并且相对于A6抗体，显示出不改变NI-0501抗体的huIFNγ的完整亲和性
表6：A6和人功能性IGHV6-57基因之间的对比
                                         CDR 1              
Figure A20068000996200741
       CDR 2
Human IGLV6-57  NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSI
Figure A20068000996200742
SNYVQWYQQRPGS
Figure A20068000996200743
PTTVIYEDN
Figure A20068000996200744
RPSGVP 60
A6-VL           NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSI
Figure A20068000996200745
SNYVQWYQQRPGS
Figure A20068000996200746
PTTVIYEDN RPSGVP 60
                ＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊.＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊：＊＊＊＊＊＊＊＊＊：＊＊＊＊＊＊
                            
Figure A20068000996200748
        
Figure A20068000996200749
       CDR 3
Human IGLV6-57 DRFSGSIDSSSN
Figure A200680009962007410
ASLTISGL
Figure A200680009962007411
EDEADYYCQSYD
Figure A200680009962007412
SN--------------98(SEQ ID NO：117)
A6-VL          DRFSGSIDSSSNASLTISGL
Figure A200680009962007414
EDEADYYCQSYD SNRWMFGGGTKLTVLG 112(SEQ ID
NO：118)
NI-0501重链和轻链的完整序列在图1A-1D中列出。核苷酸和回复突变而产生NI-0501抗体(例如，那些核苷酸和从初始A6序列的残基)的氨基酸残基用下划线标出并在图1A和1C中用斜体字标出。
实施例9：huIFNγ抗体的亲和性和结合动力学
huIFNγ抗体的亲和性和结合动力学用Biacore 2000instrument(Biacore AB，Uppsala，Sweden)表征出。NI-0501的200RU经EDC/NHS化学固定在C1 Biacore chip上。通过在浓度200nM和1nM之间的HBS-EP缓冲液中通过hlFNγ(R&D Systems)测量结合性。流速为100μl/minute并温度设置为25℃。依据1∶1Langmuir模型和确定的Kon，Koff和KD值(图18)设置数据。
实施例10：huIFNγ抗体活性
NI-0501huIFNγ抗体的活性与克隆A6(例如，A6huIFNγ抗体)产生的抗体活性进行比较。在这研究中，对每个huIFNγ抗体抑制人黑素瘤细胞系，Me67.8上重组人IFNγ(rhuIFNγ)-诱导MHC II类上调的能力进行评估。简单地说，在NI-0501或A6huIFNγ抗体存在下，Me67.8黑素瘤细胞与rhuIFNγ一起培养48-72小时。按照上面实施例5中描述的方法测量MHC II类上调。两种抗体出现类似活性，证实NI-0501 huIFNγ抗体中回复突变不改变抗体活性(图19)。
在初始IFNγ上测试NI-0501 huIFNγ抗体活性。在该研究中，采用1μg/ml分裂素PHA活化人周质血单核细胞(PBMCs)48小时，并经ELISA，上层清液被测试原始IFNγ的存在。然后，将上层清液用于促进Me67.8细胞上MHC II类上调。NI-0501能中和由原始人IFNγ诱导的MHC II类上调(图20)。
实施例11：huIFNγ 抗体的交叉反应性
结合性测试：采用SandwichELISA形式试验测试NI-0501结合IFNγ的能力。简单地说，采用经过涂覆NI-0501(-▲-)或对照抗种类IFNγ mAb(-■-)捕获图21中列出的每个曲线图题目中提到种类中的IFNγ。采用对测试中IFNγ具有特异性的多克隆抗体探测每个种类的IFNγ。如图21中显示的，结合老鼠IFNγ的NI-0501与对照抗体相似，但不对其他种类，除了食蟹猴之外。
IFNγ活性的中和：对抗体NI-0501测试其中和或抑制几个不同种类的重组IFNγ蛋白的能力。简单地说，NI-0501存在或不存在情况下，不同测试种类的重组IFNγ被放入具有Me67.8细胞的培养物中48-72小时。按照上面实施例5中描述的方法测量MHC II类上调。通过抑制人黑素瘤细胞，Me67.8上MHC II类上调来证实食蟹猴IFNγ的交叉反应性和中和(图21)。NI-0501能够抑制食蟹猴的IFNγ但不能中和其他测试种类的IFNγ，证实无这些种类抗体的交叉活性(表7)。
表7：NI-0501的交叉反应
  NI-0501  nhuIFNγ  rhuIFNγ  ncyIFNγ  rcyIFNγ  rdIFNγ  rcIFNγ  rrIFNγ  rmIFNγ
  结合   +   +   +   +   -   -   -     -
  中和   +   +   +   +   *   *   *     *
Nhu＝初始人IFNγ
rhu＝重组人IFNγ
ncy＝初始食蟹猴IFNγ
rcy＝重组食蟹猴IFNγ
rd＝重组狗IFNγ
rc＝重组猫IFNγ
rr＝重组老鼠IFNγ
rm＝重组小鼠IFNγ
+＝交叉反应
-＝不交叉反应
*＝未测试的
此外，采用1μg/ml分裂素PHA活化食蟹猴周质血单核细胞(PBMCs)48小时，并经ELISA，上层清液被测试原始IFNγ的存在。然后，将上层清液用于促进Me67.8细胞上MHC II类上调。NI-0501能中和由原始食蟹猴IFNγ诱导的MHC II类上调(图22)。
实施例12：huIFNγ抗体的生物活性
将这里描述的研究设计成一经对食蟹猴给药就测试NI-0501huIFNγ抗体的生物活性。根据这里描述的安全性和药物动力学研究选择NI-0501，因为该huIFNγ抗体被发现与食蟹猴的IFNγ交叉反应，如这里描述的。为评估多重静脉灌输之后的不良临床反应，用下列剂量给猴子进行灌输：30mg/kg、100mg/kg和200mg/kg。
在具有分裂基因的小鼠中，观察到KLH免疫的反应中IgG2a水平降低和IgG1水平的提高，证实IFNγ和IgG反应之间的相关性。在13周主要毒理学研究期间，用含有KLH的弗氏不完全佐剂(IFA)对猴子进行免疫。猴子体内KLH/IFA的典型免疫反应，用安慰剂共处理，得出血清中可探测的特异性IgM和IgG反应。将这些研究设计成评估是否在NI-0501治疗的猴子体内中和IFNγ，该猴子用含有KLH的IFA进行免疫，改变KLH-特异性IgG效价。
实施例13：采用huIFNγ抗体调节IFNγ活性
经几个不同细胞系中IFNγ上调趋化因子IP-10的产生。基于该观察，形成全血测试。在该全血测试中，几个供体中得到的全血样本与固定浓度的IFNγ和不同浓度的NI-0501混合。培养之后，采用ELISA测量IP-10水平，作为一种评估抗-IFNγ抗体封闭IP-10产生的功效的方法(图23)。
其他实施方式
虽然结合详细描述对本发明进行了介绍，但前面描述的目的在于说明而不是限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求的范围来定义。其他的方面、优势、和修改在下列权利要求书界定的范围内。

Claims (23)

1.一种分离的全人单克隆抗-IFNγ抗体或其片段，其中所述抗体包括：
(a)一种包括氨基酸序列SYAMS(SEQ ID NO：3)或SNAMS(SEQ ID NO：43)的VH CDR1区；
(b)一种包括氨基酸序列AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)或TLTGSGGTAYYADSVEG(SEQ ID NO：44)的VH CDR2区；和
(c)一种选自由DGSSGWYVPHWFDP(SEQ ID NO：5)；DHSSGWYVISGMDV(SEQ ID NO：13)；DLTVGGPWYYFDY(SEQ ID NO：21)；DGWNALGWLES(SEQ ID NO：29)；GTELVGGGLDN(SEQ ID NO：45)；RSFDSGGSFEY(SEQID NO：64)；VGSWYLEDFDI(SEQ ID NO：69)；GGNYGDYFDYFDY(SEQ ID NO：76)；和DFWVITSGNDY(SEQID NO：89)组成组的氨基酸序列的VH CDR3区，
其中，所述抗体结合IFNγ。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体进一步包括：
(d)一种VL CDR1区，包括选自由TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：8)；TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：16)；TRSGGSIGSYYVQ(SEQ ID NO：32)；TRSSGTIASNYVQ(SEQ ID NO：39)；TGSGGSIATNYVQ(SEQ ID NO：48)；TGSSGSIASNYVQ(SEQ IDNO：55)；TRSSGSIASNYVH (SEQ ID NO：72)；TGRNGNIASNYVQ(SEQ ID NO：84)；AGSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：97)和TRSSGSIVSNYVQ(SEQ ID NO：106)和组成组的氨基酸序列；
(e)一种VL CDR2区，包括选自由EDNQRPS(SEQ ID NO：9)；EDNQRPS(SEQ ID NO：17)；DDDQRPS(SEQID NO：25)；DDKKRPS(SEQ ID NO：33)；EDTQRPS(SEQID NO：85)和EDNRRPS(SEQ ID NO：107)组成组的氨基酸序列；和
(f)一种VL CDR3区，包括选自由QSYDGSNRWM(SEQ ID NO：10)；QSNDSDNVV(SEQ ID NO：18)；QSYDSSNVV(SEQ ID NO：26)；QSYDSNNLW(SEQ ID NO：34)；QSYDNSNHWV(SEQ ID NO：40)；QSYDSDNHHW(SEQ ID NO：49)；QSYDSSNQEVV(SEQ ID NO：56)；QSYDSNNFWV(SEQ ID NO：61)；QSSDTTYHGGW(SEQ ID NO：73)；QSYEGF(SEQ ID NO：79)；QSSDSNRVL(SEQ IDNO：86)；QSFDSTNLVV(SEQ ID NO：92)；and QSYSYNNQW(SEQ ID NO：98)组成组的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体为IgG同型体。
4.根据权利要求2所述的抗体，其中所述抗体包括一种由氨基酸序列SYAMS(SEQ ID NO：3)组成的VH CDR1区；一种由氨基酸序列AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)组成的VH CDR2区；一种由氨基酸序列DGSSGWYVPHWFDP(SEQ ID NO：5)组成的VH CDR3区；一种由氨基酸序列TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：8)组成的VL CDR1区；一种由氨基酸序列EDNQRPS(SEQ ID NO：9)组成的VL CDR2区；一种由氨基酸序列QSYDGSNRWM(SEQ IDNO：10)组成的VL CDR3区。
5.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体为NI-0501。
6.一种分离的全人单克隆抗体，其中所述抗体包括一种选自由SEQ ID NOS：2、12、20、28、36、42、51、5 8、63、68、75、81、88、94或103组成组的重链可变氨基酸序列，其中所述抗体结合IFNγ。
7.根据权利要求6所述的抗体，其中所述抗体进一步包括一种选自由SEQ ID NOS：7、15、23、31、38、47、54、60、66、71、78、83、91、96或105组成组的轻链可变氨基酸序列，其中所述抗体结合IFNγ。
8.根据权利要求7所述的抗体，其中所述抗体包括一种由氨基酸序列SYAMS(SEQ ID NO：3)组成的VH CDR1区；一种由氨基酸序列AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)组成的VH CDR2区；一种由氨基酸序列DGSSGWYVPHWFDP(SEQ ID NO：5)组成的VH CDR3区；一种由氨基酸序列TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：8)组成的VL CDR1区；一种由氨基酸序列EDNQRPS(SEQ ID NO：9)组成的VLCDR2区；和一种由氨基酸序列QSYDGSNRWM(SEQ IDNO：10)组成的VL CDR3区。
9.根据权利要求4所述的抗体，其中所述抗体为IgG同型。
10.一种药物组合物，包括权利要求1所述抗体和一种载体。
11.一种药物组合物，包括权利要求4所述的一种抗体和一种载体。
12.一种缓解自体免疫疾病或炎性紊乱综合症的方法，该方法包括对需要的主体给药足量的权利要求1所述的抗体，从而缓解主体体内自体免疫疾病或炎性紊乱综合症。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述主体是人。
14.根据权利要求12所述的方法，其中所述抗体包括一种由氨基酸序列SYAMS(SEQ ID NO：3)组成的VH CDR1区；一种由氨基酸序列AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)组成的VH CDR2区；一种由氨基酸序列DGSSGWYVPHWFDP(SEQ ID NO：5)组成的VH CDR3区；一种由氨基酸序列TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：8)组成的VL CDR1区；一种由氨基酸序列EDNQRPS(SEQ ID NO：9)组成的VLCDR2区；和一种由氨基酸序列QSYDGSNRWM(SEQ IDNO：10)组成的VL CDR3区。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述抗体为NI-0501。
16.根据权利要求12所述的方法，其中所述自体免疫疾病或炎性紊乱选自由Crohn′s疾病、系统性红斑狼疮、干癣、类风湿性关节炎、血管炎、异位性皮炎和继发-进展型多发性硬化所组成的组。
17.根据权利要求12所述的方法，其中对所述抗体进行静脉给药。
18.根据权利要求12所述的方法，其中所述抗体与一种第二试剂共同给药，所述第二试剂选自：
(a)一种识别选自白细胞介素1(IL-1)、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-27和IL-31的一种或一种以上细胞因子的抗细胞因子；
(b)一种识别选自IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-27和IL-31的一种或一种以上细胞因子的抗体趋化因子试剂；
(c)一种选自MIPlα、MIPlβ、RANTES、MCPl、IP-10、ITAC、MIG、SDF和fractalkine的趋化因子。
19.一种减少细胞上MHC II类表达的方法，该方法包括用足够剂量的权利要求1所述的抗体接触细胞来减少所述细胞上MHC II类表达。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述细胞为人黑素瘤细胞。
21.根据权利要求19所述的方法，其中所述抗体包括一种由氨基酸序列SYAMS(SEQ ID NO：3)组成的VH CDR1区；一种由氨基酸序列AISGSGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO：4)组成的VH CDR2区；一种由氨基酸序列DGSSGWYVPHWFDP(SEQ ID NO：5)组成的VH CDR3区；一种由氨基酸序列TRSSGSIASNYVQ(SEQ ID NO：8)组成的VL CDR1区；一种由氨基酸序列EDNQRPS(SEQ ID NO：9)组成的VLCDR2区；和一种由氨基酸序列QSYDGSNRWM(SEQID NO：10)组成的VL CDR3区。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述抗体为NI-0501。
23.根据权利要求19所述的方法，其中所述细胞与一种第二试剂接触，所述第二试剂选自：
(a)一种识别选自由白细胞介素1(IL-1)、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-27和IL-31的一种或一种以上细胞因子的抗细胞因子；
(b)一种识别选自由IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-27和IL-31的一种或一种以上细胞因子的抗体趋化因子试剂；
(c)一种选自MIPlα、MIPlβ、RANTES、MCPl、IP-10、ITAC、MIG、SDF和fractalkine的趋化因子。
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