CN107849127A

CN107849127A - 用于诊断和治疗cxcl9和其它生物标志物水平升高的患者的病症

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Publication number: CN107849127A
Application number: CN201680040022.8A
Authority: CN
Inventors: C.德敏; W.费尔林; F.德贝内德蒂
Original assignee: Novimmune SA
Current assignee: Swedish Orphan Biovitrum AB
Priority date: 2015-05-07
Filing date: 2016-05-09
Publication date: 2018-03-27
Also published as: JP2021100943A; WO2016177913A1; MX2024001909A; JP2023090964A; IL302519A; MX2022001008A; IL282923A; EA037532B1; IL282923B1; JP2018515493A; IL255440A0; US11034760B2; EA201792447A1; SG10202108996PA; IL282923B2; AU2016257023A1; BR112017023867A2; KR20180004254A; US20160326244A1; US20210101972A1

Abstract

提供用于治疗噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)的方法和组合物。总的来说本公开内容还涉及用于诊断和治疗与CXCL9的水平升高、总IFNγ和其它生物标志物的水平升高有关的病症的方法和组合物。本公开内容还涉及使用干预或否则拮抗干扰素γ (IFNγ)信号传导(包括中和性抗IFNγ抗体)的药剂治疗CXCL9的水平升高、总IFNγ和其它生物标志物的水平升高的患者的病症的症状、延迟其进展或否则改善其症状的方法。

Description

用于诊断和治疗CXCL9和其它生物标志物水平升高的患者的病症

的方法和组合物

相关申请

本申请要求2015年5月7日提交的美国临时申请号62/158,153、2015年9月21日提交的美国临时申请号62/221,393和2015年10月27日提交的美国临时申请号62/246,949的权益，其各自的内容通过引用以其整体结合到本文中。

发明领域

本公开内容总的来说涉及用于治疗噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)的方法和组合物。还提供用于诊断和治疗与CXCL9水平升高、总IFNγ和其它生物标志物水平升高有关的病症的方法和组合物。本公开内容还涉及使用干预或否则拮抗干扰素γ (IFNγ)信号传导(包括中和抗IFNγ抗体)的药剂治疗CXCL9水平升高、总IFNγ和其它生物标志物水平升高的患者的病症的症状、延迟其进展或否则改善其症状的方法。

发明背景

人干扰素γ (IFNγ、IFN-gamma)是一种由活化T-淋巴细胞和自然杀伤细胞产生的淋巴因子。它表现出抗增殖和免疫调节活性，与IFNγ-R (一种免疫系统的大多数原代细胞上的异二聚体受体)结合，并引发一系列导致炎症的事件。已知IFNγ的免疫调节活性在许多临床情况下具有有益作用。然而，有许多临床背景，其中已知IFNγ-活性具有有害作用。例如，自身免疫性疾病与来自自身免疫患者血液和患病组织中的高水平IFNγ有关。IFNγ-活性还与如恶病质和感染性休克这类疾病状态有关。

IFNγ牵涉多种病症；正在开发作为治疗剂的抗IFNγ药剂。因此，存在对用于鉴定IFNγ相关病症中IFNγ产生的生物标志物的组合物和方法的需要。

发明概述

本文提供的组合物和方法使用本文称为NI-0501的完全人IgG1抗干扰素γ (IFNγ)单克隆抗体(mAb)，其结合并中和IFNγ。NI-0501与IFNγ的可溶性和受体(IFNγR1)结合形式结合。本文提供的组合物和方法可用于治疗噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)。

本文称为NI-051的抗IFNγ抗体含有包含SYAMS的氨基酸序列(SEQ ID NO: 1)的可变重链互补决定区1 (VH CDR1)；包含AISGSGGSTYYADSVKG的氨基酸序列(SEQ ID NO: 2)的可变重链互补决定区2 (VH CDR2)；和包含DGSSGWYVPHWFDP的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)的可变重链互补决定区3 (VH CDR3)；包含TRSSGSIASNYVQ的氨基酸序列(SEQ ID NO: 4)的可变轻链互补决定区1 (VL CDR1)；包含EDNQRPS的氨基酸序列(SEQ ID NO: 5)的可变轻链互补决定区2 (VL CDR2)；和包含QSYDGSNRWM的氨基酸序列(SEQ ID NO: 6)的可变轻链互补决定区3 (VL CDR3)。NI-0501包含SEQ ID NO: 47的氨基酸序列的重链可变氨基酸序列和SEQ ID NO: 48的氨基酸序列的轻链可变氨基酸序列。

在本文提供的组合物和方法中，NI-0501配制成用于输注的无菌浓缩剂(按照mL)。在一些实施方案中，NI-0501如下配制：5 mg NI-051、1.55 mg L-组氨酸、3.14 mg L-组氨酸盐酸盐一水合物、7.31 mg氯化钠(NaCl)和0.05 mg聚山梨醇酯80，其中pH介于5.8和6.2之间。在一些实施方案中，NI-0501如下配制：5 mg NI-051、1.55 mg L-组氨酸、3.14 mg L-组氨酸盐酸盐一水合物、7.31 mg氯化钠(NaCl)和0.05 mg聚山梨醇酯80，其中pH为6.0。

在本文提供的组合物和方法中，将NI-0501给予有需要的受试者用于治疗、预防和/或延迟HLH相关症状的发生或进展、或减轻HLH相关症状。在一些实施方案中，以1 mg/kg的初始剂量在1小时内通过IV输注将NI-0501给予有需要的受试者。在某些患者人群中，例如，具有低体重和/或非常年轻的患者人群，IV输注可持续超过1小时，例如至少90分钟、至少2小时或至少3小时或更久。

在一些实施方案中，在初始IV输注后以1 mg/kg的初始剂量在1小时内通过至少一次额外的IV输注将NI-0501给予有需要的受试者。在一些实施方案中，至少一次额外的IV输注是以高于1 mg/kg初始剂量的剂量。在一些实施方案中，至少一次额外的IV输注剂量为3mg/kg。在一些实施方案中，至少一次额外的IV输注在初始IV输注后至少3天给予。在一些实施方案中，至少一次额外的IV输注在选自以下的时间给予：在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天。在一些实施方案中，至少一次额外的IV输注在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天给予。

在一些实施方案中，在初始IV输注后以1 mg/kg的初始剂量在1小时内通过至少一系列额外IV输注将NI-0501给予有需要的受试者，其中所述额外IV输注的系列包括至少一系列的一周两次IV输注。在一些实施方案中，至少一系列的一周两次IV输注以高于1 mg/kg初始剂量的剂量给予。在一些实施方案中，至少一系列的一周两次IV输注以3 mg/kg的剂量给予。在一些实施方案中，至少一次额外的IV输注在初始IV输注后至少三周给予。在一些实施方案中，至少一次额外的IV输注在选自以下的时间给予：在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周。在一些实施方案中，至少一次额外的IV输注在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周给予。

在一些实施方案中，在初始IV输注后通过至少两次额外的IV输注将NI-0501给予有需要的受试者。在一些实施方案中，至少两次额外的IV输注是以高于1 mg/kg初始剂量的剂量。在一些实施方案中，第一次额外IV输注和第二次额外IV输注以相同剂量给予。在一些实施方案中，第一次额外IV输注和第二次额外IV输注以高于初始剂量的相同剂量给予。在一些实施方案中，第一次和第二次额外IV输注的至少一次以3mg/kg的剂量给予。在一些实施方案中，第一次额外IV输注在初始IV输注后至少3天给予。在一些实施方案中，第一次额外IV输注在选自以下的时间给予：在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天。在一些实施方案中，第一次额外IV输注在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天给予。在一些实施方案中，第二次额外IV输注在选自以下的时间给予：在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周。在一些实施方案中，第二次额外IV输注在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周给予。在一些实施方案中，第一次额外IV输注在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天给予，且第二次额外IV输注在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周给予。

在一些实施方案中，第一次额外IV输注和第二次额外IV输注以不同的剂量给予。在一些实施方案中，第一次额外IV输注和第二次额外IV输注以不同的剂量给予，其中第二次额外IV输注剂量高于第一次额外IV输注。在一些实施方案中，第一次额外IV输注和第二次额外IV输注以不同的剂量给予，其中第二次额外IV输注剂量高于第一次额外IV输注，且其中第一次和第二次额外IV输注剂量均高于初始剂量。在一些实施方案中，第一次和第二次额外IV输注的至少一次以3mg/kg的剂量给予。在一些实施方案中，第一次额外IV输注以3mg/kg的剂量给予，第二次额外IV输注以6 mg/kg的剂量给予。在一些实施方案中，第一次额外IV输注在初始IV输注后至少3天给予。在一些实施方案中，第一次额外IV输注在选自以下的时间给予：在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天。在一些实施方案中，第一次额外IV输注在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天给予。在一些实施方案中，第二次额外IV输注在选自以下的时间给予：在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周。在一些实施方案中，第二次额外IV输注在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周给予。在一些实施方案中，第一次额外IV输注在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天给予，并且第二次额外IV输注在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周给予。

在一些实施方案中，第一次额外IV输注包括至少第一系列的每周两次IV输注，第二次额外IV输注包括至少第二系列的每周两次IV输注。在一些实施方案中，第一系列的每周两次IV输注和第二系列的每周两次IV输注以高于1 mg/kg初始剂量的剂量给予。在一些实施方案中，第一系列的每周两次IV输注以3 mg/kg的剂量给予，第二系列的每周两次IV输注以6 mg/kg的剂量给予。在一些实施方案中，第一系列的额外IV输注在初始IV输注后至少3天给予。在一些实施方案中，第一系列的额外IV输注在选自以下的时间给予：在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天。在一些实施方案中，第一系列的额外IV输注在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天给予。在一些实施方案中，第二系列的额外IV输注在选自以下的时间给予：在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周。在一些实施方案中，第二系列的额外IV输注在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周给予。在一些实施方案中，第一系列的额外IV输注在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天给予，并且第二系列的额外IV输注在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周给予。

在一些实施方案中，输注在初始剂量后每3天进行直到初始剂量后的15天。在一些实施方案中，输注在初始剂量后每3天进行直到初始剂量后的15天，接着在初始剂量后至少15天开始每周两次输注。在一些实施方案中，输注剂量在初始剂量后的任何时间点增加至3mg/kg。在一些实施方案中，在最少两次3 mg/kg的输注后、增加NI-0501的剂量到6 mg/kg直到4次输注。

在本文提供的组合物和方法中，将NI-0501给予有需要的受试者用于治疗、预防和/或延迟HLH相关症状的发生或进展，或减轻HLH相关症状。在一些实施方案中，以1 mg/kg的初始剂量在1小时内通过IV输注将NI-0501给予有需要的受试者。在一些实施方案中，输注在初始剂量后每3天进行直到初始剂量后的15天。在一些实施方案中，输注在初始剂量后每3天进行直到初始剂量后的15天，接着在初始剂量后至少15天开始每周两次输注。在一些实施方案中，输注剂量在初始剂量后的任何时间点增加至3 mg/kg。在一些实施方案中，在最少两次3 mg/kg的输注后，增加NI-0501的剂量到6 mg/kg直到4次输注。

在本文提供的组合物和方法中，将NI-0501给予有需要的受试者用于治疗、预防和/或延迟HLH相关症状的发生或进展，或减轻HLH相关症状。在一些实施方案中，通过IV输注将大于6 mg/kg的剂量的NI-0501给予有需要的受试者。在一些实施方案中，在初始剂量后通过IV输注将大于6 mg/kg的第二剂量的NI-0501给予有需要的受试者。在一些实施方案中，第二剂量为至少10 mg/kg。在一些实施方案中，第二剂量为10 mg/kg。在一些实施方案中，第二剂量为10 mg/kg，每日重复。在一些实施方案中，第二剂量为10 mg/kg，每日重复达1周。在一些实施方案中，第二剂量为10 mg/kg，每日重复达2周。在一些实施方案中，第二剂量为10 mg/kg，每日重复持续超过2周。

在一些实施方案中，将NI-0501给予有需要的受试者用于治疗、预防和/或延迟继发性HLH相关症状的发生或进展、或减轻继发性HLH相关症状。在一些实施方案中，在sJIA背景下的将NI-0501给予有需要的受试者用于治疗、预防和/或延迟继发性HLH相关症状的发生或进展，或减轻继发性HLH相关症状。在一些实施方案中，将作为6 mg/kg的初始剂量的NI-0501给予有需要的受试者。在一些实施方案中，以随后的NI-0501剂量继续NI-0501治疗。在一些实施方案中，以随后每3天3 mg/kg的NI-0501剂量继续NI-0501治疗持续至少4周(即直到SD27)。

在一些实施方案中，在达到所需临床结果时减少、停止或否则缩短NI-0501治疗。在一些实施方案中，NI-0501治疗在有完全临床反应(即MAS缓解)的证据时缩短。

在一些实施方案中，在4周后，按需继续NI-0501治疗持续至多额外4周(即直到SD56)作为维持直到实现MAS缓解。在一些实施方案中，在4周后，按需继续NI-0501治疗持续至多额外4周(即直到SD56)作为维持直到实现MAS缓解，其具有降低剂量至1 mg/kg并延长输注间的间隔至每周给药的可能性。

在本文提供的组合物和方法中，将NI-0501给予有需要的受试者用于治疗、预防和/或延迟HLH相关症状的发生或进展，或减轻HLH相关症状，其中受试者有给予地塞米松的背景。在一些实施方案中，受试者是初治患者(即之前未曾针对HLH进行治疗)，且地塞米松以至少10 mg/m²的剂量给予。在一些实施方案中，受试者正接受NI-0501作为二线HLH治疗，且地塞米松以范围为10 mg/m²-5 mg/m²的剂量给予。在一些实施方案中，受试者正接受NI-0501作为二线HLH治疗，且地塞米松以至少5 mg/m²的剂量给予。在一些实施方案中，受试者正接受NI-0501作为二线HLH治疗，且地塞米松以小于5 mg/m²的剂量给予。

在一些实施方案中，在治疗之前和/或期间和/或之后与一种或多种其它药剂(例如以非限制性实例为例，治疗剂、抗炎药和/或免疫抑制剂)组合给予NI-0501。在一些实施方案中，第二药剂是已知用于HLH治疗的药剂。在一些实施方案中，其它药剂包括至少依托泊苷。在一些实施方案中，将NI-0501和其它药剂配制成单一治疗组合物，同时给予NI-0501和其它药剂。或者，NI-0501和其它药剂彼此分开，例如各自配制成单独的治疗组合物，同时给予NI-0501和其它药剂，或在治疗方案期间在不同时间给予NI-0501和其它药剂。例如，在给予其它药剂前给予NI-0501、在给予其它药剂后给予NI-0501或以交替方式给予NI-0501和其它药剂。如本文所述，NI-0501和其它药剂以单剂量或多剂量给予。

在一些实施方案中，NI-0501和其它药剂同时给予。例如，NI-0501和其它药剂可配制在单一组合物中或作为两种或更多种单独的组合物给予。在一些实施方案中，NI-0501和其它药剂序贯给予，或在治疗方案期间在不同时间给予NI-0501和其它药剂。

在一些实施方案中，其它药剂是免疫抑制剂。在一些实施方案中，免疫抑制剂是环孢菌素A (CsA)。在一些实施方案中，在给予NI-0501之前受试者一直接受CsA。在一些实施方案中，其它药剂包括至少依托泊苷。在一些实施方案中，在给予NI-0501之前受试者一直接受依托泊苷。

在一些实施方案中，其它药剂是鞘内甲氨蝶呤和/或糖皮质激素。在一些实施方案中，在给予NI-0501之前，受试者一直接受鞘内甲氨蝶呤和/或糖皮质激素。

在一些实施方案中，其它药剂是IV免疫球蛋白(IVIG)。在一些实施方案中，在患有经证实的免疫球蛋白缺乏症的受试者中给予IVIG作为替代治疗。在其中受试者患有经证实的免疫球蛋白缺乏症的一些实施方案中，以0.5 g/kg的剂量每4周或更频繁地给予IVIG以维持适当的IgG水平。

在一些实施方案中，一种或多种其它药剂是镇痛剂治疗、血液制品输液、电解质和葡萄糖输注、抗生素、抗真菌和抗病毒治疗和/或常规支持性护理。

本公开内容还提供可用于鉴定或否则细化患有病症的患者群的组合物和方法，其中患者的CXCL9水平单独升高或连同一种或多种其它干扰素γ (IFNγ)相关生物标志物升高。具体地讲，本公开内容提供用于检测作为患有或疑似患有噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)的患者中作为IFNγ产生的生物标志物的CXCL9水平的组合物和方法。具体地讲，本公开内容提供用于检测患有或疑似患有继发性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)的患者中作为IFNγ产生的生物标志物的CXCL9水平的组合物和方法。在一些实施方案中，所述组合物和方法用于检测患有或疑似患有巨噬细胞活化综合征(MAS)的患者中作为IFNγ产生的生物标志物的CXCL9水平。在一些实施方案中，所述组合物和方法用于检测在自身免疫性疾病或炎性病症的情况下患有或疑似患有MAS的患者中作为IFNγ产生的生物标志物的CXCL9水平。在一些实施方案中，所述组合物和方法用于检测患有或疑似患有系统性自身免疫性疾病或炎性病症的背景下的MAS的患者中作为IFNγ产生的生物标志物的CXCL9水平。在一些实施方案中，所述组合物和方法用于检测患有或疑似患有全身型幼年特发性关节炎(sJIA)的背景下的MAS的患者中作为IFNγ产生的生物标志物的CXCL9水平。在一些实施方案中，所述组合物和方法用于检测患有或疑似患有系统性红斑狼疮(SLE)的背景下的MAS的患者中作为IFNγ产生的生物标志物的CXCL9水平。

鉴定为CXCL9水平升高的患者被鉴定为用干扰或否则拮抗IFNγ的一种或多种生物活性(例如IFNγ信号传导)和中和IFNγ的至少一种生物活性的药剂(例如抗体或其它基于多肽的治疗剂、基于肽的治疗剂、小分子抑制剂、基于核酸的治疗剂及其衍生物)治疗的合适候选人。

在患有或疑似患有病症的患者中，流体和其它生物样品含有单独或连同其它IFNγ相关生物标志物(例如CXCL10和/或CXCL11)一起水平升高的CXCL9。

CXCL9和这些其它的生物标志物是体内IFNγ产生的指示物。因此，干扰、抑制、降低或否则拮抗IFNγ信号传导的抗IFNγ拮抗剂例如中和性抗IFNγ抗体或其它基于多肽的治疗剂、基于肽的治疗剂、小分子抑制剂、基于核酸的治疗剂及其衍生物的使用阻断或否则抑制IFNγ活性。因此，所述组合物和方法可用于通过将例如中和性抗IFNγ抗体或其它基于多肽的治疗剂、基于肽的治疗剂、小分子抑制剂、基于核酸的治疗剂及其衍生物等抗IFNγ拮抗剂给予显示CXCL9和/或其它生物标志物表达水平升高的患者，治疗依赖于IFNγ表达和/或活性异常(例如升高)、异常促炎细胞因子产生和/或其组合、受其驱动、与之有关或否则受其影响的病症的症状、延迟病症症状的进展或否则改善病症的症状。通过检测CXCL9单独或连同一种或多种IFNγ相关配体或其它生物标志物一起的水平，来鉴定可能是用抗IFNγ拮抗剂(例如中和性抗IFNγ抗体，例如本文所述那些)治疗的合适候选人的患者。在一些实施方案中，没有CXCL9单独或连同其它IFNγ相关生物标志物一起水平升高的患者仍可用包括本文所述中和性抗IFNγ抗体或其它基于多肽的治疗剂、基于肽的治疗剂、小分子抑制剂、基于核酸的治疗剂及其衍生物的任一种在内的抗IFNγ拮抗剂治疗。

CXCL9单独或连同一种或多种其它IFNγ相关生物标志物一起水平升高的患者被鉴定为用一种或多种抗IFNγ拮抗剂、例如本文所述中和性抗IFNγ抗体的疗法的合适候选人。本文所用短语“表达水平升高”是指大于来自未患有或未疑似患有原发性或继发性HLH或HLH相关病症的患者样品或来自另一对照样品中CXCL9单独或连同一种或多种其它生物标志物一起的表达基线水平的表达水平。在一些实施方案中，CXCL9和/或其它生物标志物的表达水平升高是显著的水平升高。

所检测的CXCL9单独或连同一种或多种其它IFNγ相关生物标志物一起的水平可用于对患者群进行细化或否则分层。在一些实施方案中，检出的水平用于确定应给予指定患者的抗IFNγ拮抗剂的剂量。在一些实施方案中，检出的水平用于对患者群进行归类或否则分层。例如，根据CXCL9的检出水平，可将患者归类为患有“重度”或高级别MAS，或相反为非重度或低级别MAS。

样品为例如血液或血液组分，例如血清、血浆。在一些实施方案中，样品是另一种体液，例如以非限制性实例来说，尿液、滑液、支气管肺泡液、脑脊液、支气管肺泡灌洗液(BAL)和/或唾液。在一些实施方案中，生物样品是CSF。在一些实施方案中，生物样品是来自HLH患者的CSF。

除检测IFNγ和/或其它IFNγ相关生物标志物的水平以外，还可通过评价可改进用于鉴定或否则细化患者群的生物标志物的灵敏度和特异性的多种其它生物和临床参数的任一种，鉴定用抗IFNγ拮抗剂治疗的合适患者。或者，这些其它的生物和临床参数可单独用作鉴定是用抗IFNγ拮抗剂或其它合适疗法治疗的合适候选人的患者的手段。以非限制性实例来说，这些生物和临床参数包括以下的任一种：铁蛋白水平、嗜中性粒细胞计数、血小板计数、丙氨酸氨基转移酶水平和/或乳酸脱氢酶水平。

用本发明的组合物和方法是有用的病症包括其中IFNγ表达和/或活性异常(例如升高)的任何病症，特别是HLH，包括继发性HLH、MAS和/或sJIA。

以非限制性实例来说，本文提供的方法和组合物适用于诊断和/或治疗病症例如原发性和/或继发性HLH病症。以非限制性实例来说，合适的自身免疫和/或炎性病症包括IFNγ活性和/或表达异常相关的原发性和/或继发性HLH病症。

一旦患者被鉴定为CXCL9单独或连同一种或多种IFNγ相关生物标志物一起水平升高，则对他们用抗IFNγ拮抗剂进行治疗。例如，抗IFNγ拮抗剂是中和性抗IFNγ抗体或其免疫活性(例如抗原结合)片段。合适的中和性抗IFNγ抗体包括本文所述抗IFNγ抗体的任一种。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段含有包含与SYAMS的氨基酸序列(SEQ ID NO: 1)有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列的可变重链互补决定区1 (VH CDR1)；包含与AISGSGGSTYYADSVKG的氨基酸序列(SEQ ID NO: 2)有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列的可变重链互补决定区2 (VH CDR2)和包含与DGSSGWYVPHWFDP的氨基酸序列(SEQ ID NO: 3)有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列的可变重链互补决定区3 (VH CDR3)；包含与TRSSGSIASNYVQ的氨基酸序列(SEQ ID NO: 4)有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列的可变轻链互补决定区1 (VL CDR1)；包含与EDNQRPS的氨基酸序列(SEQ ID NO: 5)有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列的可变轻链互补决定区2 (VL CDR2)和包含与QSYDGSNRWM的氨基酸序列(SEQ ID NO: 6)有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列的可变轻链互补决定区3 (VLCDR3)。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段含有包含SYAMS的氨基酸序列(SEQ ID NO: 1)的VH CDR1；包含AISGSGGSTYYADSVKG的氨基酸序列(SEQ ID NO: 2)的VHCDR2区和包含DGSSGWYVPHWFDP的氨基酸序列(SEQ ID NO: 3)的VH CDR3区；包含TRSSGSIASNYVQ的氨基酸序列(SEQ ID NO: 4)的可变轻链互补决定区1 (VL CDR1)区；包含EDNQRPS的氨基酸序列(SEQ ID NO: 5)的VL CDR2区和包含QSYDGSNRWM的氨基酸序列(SEQID NO: 6)的VL CDR3区。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段含有包含VH CDR1序列、VHCDR2序列和VH CDR3序列的组合的重链，其中该组合是表1A中的单行所示3个重链CDR序列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)的组合。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段含有包含VL CDR1序列、VLCDR2序列和VL CDR3序列的组合的轻链，其中该组合是表1B中的单行所示3个轻链CDR序列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)的组合。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段含有包含VH CDR1序列、VHCDR2序列和VH CDR3序列的组合的重链，其中该组合是表1A中的单行所示3个重链CDR序列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)的组合，并包含VL CDR1序列、VL CDR2序列和VL CDR3序列的组合的轻链，其中该组合是表1B中的单行所示3个轻链CDR序列(VL CDR1、VL CDR2、VLCDR3)的组合。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段包含与SEQ ID NO: 47的氨基酸序列的重链可变氨基酸序列有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段包含与SEQ ID NO: 48的氨基酸序列的轻链可变氨基酸序列有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段包含与SEQ ID NO: 47的氨基酸序列的重链可变氨基酸序列有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列和与SEQ ID NO: 48的氨基酸序列的轻链可变氨基酸序列有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段包含SEQ ID NO: 47的氨基酸序列的重链可变氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段包含SEQ ID NO: 48的氨基酸序列的轻链可变氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段包含SEQ ID NO: 47的氨基酸序列的重链可变氨基酸序列和SEQ ID NO: 48的氨基酸序列的轻链可变氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段包含与SEQ ID NO: 44的氨基酸序列的重链氨基酸序列有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段包含与SEQ ID NO: 46的氨基酸序列的轻链氨基酸序列有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段包含与SEQ ID NO: 44的氨基酸序列的重链氨基酸序列有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列和与SEQ ID NO: 46的氨基酸序列的轻链氨基酸序列有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段包含SEQ ID NO: 44的氨基酸序列的重链氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段包含SEQ ID NO: 46的氨基酸序列的轻链氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段包含SEQ ID NO: 44的氨基酸序列的重链氨基酸序列和SEQ ID NO: 46的氨基酸序列的轻链氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段包含与选自SEQ ID NO: 50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98和102的重链可变氨基酸序列有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段包含与选自SEQ ID NO: 52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92、96、100和104的轻链可变氨基酸序列有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段包含与选自SEQ ID NO: 50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98和102的重链可变氨基酸序列有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列和与选自SEQ ID NO: 52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92、96、100和104的轻链可变氨基酸序列有至少90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段含有选自SEQ ID NO: 50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98和102的重链可变氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段含有选自SEQ ID NO: 52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92、96、100和104的轻链可变氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段含有选自SEQ ID NO: 50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98和102的重链可变氨基酸序列和选自SEQ ID NO: 52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92、96、100和104的轻链可变氨基酸序列。

在一些实施方案中，以治疗有效量给予抗IFNγ抗体或其免疫活性片段。本发明抗体的治疗有效量通常涉及达到治疗目的所需的量。该治疗目的可以是抗体与其靶抗原间的结合相互作用，在某些情况下干扰该靶的功能。以非限制性实例为例，本发明的抗体或抗体片段的治疗有效剂量的常见范围可为约0.1 mg/kg体重-约50 mg/kg体重。常见剂量频率的范围可为例如每日两次至一周一次。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段以约0.5 mg/kg-约2 mg/kg的范围、例如以约0.5 mg/kg-约1.5 mg/kg和/或约0.5 mg/kg-约1.0 mg/kg的范围的初始剂量(即负荷剂量)给予。在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段以约1.0 mg/kg的初始剂量给予。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段作为初次负荷剂量接着一个或多个维持剂量给予。在一些实施方案中，一个或多个维持剂量是与初次负荷剂量基本相似的剂量。在一些实施方案中，一个或多个维持剂量是小于初次负荷剂量的剂量。在一些实施方案中，一个或多个维持剂量是大于初次负荷剂量的剂量。

在一些实施方案中，一个或多个维持剂量包含至少两剂或更多剂，其中各维持剂量是相同的剂量。在一些实施方案中，两个或更多个维持剂量与初次负荷剂量基本相似。在一些实施方案中，两个或更多个维持剂量大于初次负荷剂量。在一些实施方案中，两个或更多个维持剂量小于初次负荷剂量。

在一些实施方案中，一个或多个维持剂量包含至少两剂或更多剂，其中各维持剂量是不同的剂量。在一些实施方案中，两个或更多个维持剂量以递增剂量给予。在一些实施方案中，两个或更多个维持剂量以递减剂量给予。

在一些实施方案中，一个或多个维持剂量包含至少两剂或更多剂，其中各维持剂量以周期时间间隔给予。在一些实施方案中，两剂或更多剂以递增的时间间隔给予。在一些实施方案中，两剂或更多剂以递减的时间间隔给予。

在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段以范围约0.5 mg/kg-约2 mg/kg、例如以范围约0.5 mg/kg-约1.5 mg/kg和/或约0.5 mg/kg-约1.0 mg/kg的初始负荷剂量；接着至少1个、例如2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个或5个或更多个维持剂量给予。在一些实施方案中，抗IFNγ抗体或其免疫活性片段以约1.0 mg/kg的初始负荷剂量；接着至少1个、例如2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个或5个或更多个维持剂量给予。

本发明的药物组合物可包括本发明的抗IFNγ抗体和载体。这些药物组合物可包括在试剂盒(例如诊断试剂盒)中。

本发明还提供实施本文所提供的任何方法的试剂盒。例如，在一些实施方案中，试剂盒包括对单独或连同一种或多种IFNγ相关生物标志物一起的CXCL9有特异性的检测试剂和用于检测检测试剂的工具。

附图简述

图1是描述在进行中的2期试验性研究中原发性HLH患者中给药前血清CXCL9水平与在输注NI-0501抗体后24小时的总IFNγ水平之间的相关性的图示。

图2是描述在进行中的2期试验性研究中原发性HLH患者中在输注NI-0501抗体后24小时的血清CXCL9水平和总IFNγ给药前水平之间的相关性的图示。

图3A和3B是描述在患有全身型幼年特发性关节炎(sJIA)继发巨噬细胞活化综合征(MAS)的患者中和在患有活动性sJIA的患者中血清CXCL9水平和IFNγ水平之间的相关性的系列图。

图4A-1、4A-2、4B-1、4B-2、4C-1、4C-2、4D-1和4D-2是描述在患有活动性sJIA和sJIA继发MAS的患者中IFNγ和血清CXCL9水平与临床参数之间的相关性的系列图。

图5是描述如通过IFNγ诱导型趋化因子的未检出水平所示IFNγ被完全中和的图示。

图6是描述在NI-0501治疗(2周和治疗结束)期间HLH疾病活动性改善的图示：血小板计数>100 x 10⁹/L、嗜中性粒细胞计数>1 x 10⁹/L、血纤蛋白原>1.5 g/L和铁蛋白降低至少25%的患者的百分比。

图7A和7B是描述给药前CXCL9和在NI-0501输注后24时总IFNγ水平之间的相关性的系列图。图7B中所示的插图描述在NI-0501治疗期间各IFNγ和CXCL9分布的实例。

图8A、8B、8C、8D是描述在活动性MAS期间和在采样时在活动性sJIA而无MAS期间(Act sJIA)可获得其配对样品的各个患者中IFNγ和CXCL9、CXCL10和CXCL11的血清水平的系列图。应用配对样品的Wilcoxon秩检验得出显著水平(p)。

图9A和9B是描述一位患者在他的sJIA、3次MAS发作期间出现的白血细胞(WBC)和血小板(PLT)计数和铁蛋白水平(图9A)的变化和IFNγ、CXCL9、CXCL10和CXCL11 (图9B)的血清水平变化的系列图。

图10A、10B、10C、10D、10E、10F、10G、10H、10I和10J是描述在采样时有活动性MAS的患者(红色圆圈)和在采样时患有活动性sJIA而无MAS的患者(黑色三角形)中IFNγ和CXCL9的水平与铁蛋白水平、嗜中性粒细胞和血小板计数和与LDH和ALT水平的相关性的系列图。各个相关性的Spearman相关系数(Rs)和显著水平(p)见表3。

图11A、11B、11C、11D、11E和11F是描述MAS中IFNγ与CXCL9和CXCL10产生的关系的系列图。图A：在采样时有MAS的患者中IFNγ的水平与CXCL9和CXCL10的水平的相关性。各个相关性的Spearman相关系数(Rs)和显著水平(p)见表3。

图12是实施例7提出的研究中筛查、治疗和随访部分的图示。

图13A和13B是描述在开始NI-0501治疗时在体温> 37.5℃的2名患者中给予NI-0501对体温的作用的图示。

图14是描述给予NI-0501对患者的嗜中性粒细胞计数的作用的系列图表。

图15是描述给予NI-0501对患者的血小板计数的作用的系列图表。

图16是描述给予NI-0501对患者的铁蛋白血清水平的作用的系列图表。

图17是描述给予NI-0501对患者的糖皮质激素逐渐减少的作用的系列图表。

图18是描述给予NI-0510保持IFNγ中和直到HSCT时的图示。HLH对NI-0501治疗的反应还持续直到移植。

图19是实施例8提供的研究的筛查、治疗和随访部分的图示。

发明详述

本文提供的组合物和方法使用结合并中和IFNγ的完全人IgG1抗干扰素γ (IFNγ)单克隆抗体(mAb) (本文称为NI-0501)。NI-0501与IFNγ的可溶性和受体(IFNγR1)结合形式结合。由于NI-0501是人IgG1，因此保持该免疫球蛋白同种型的性质，包括占用Fcγ受体和结合补体的能力。IFNγ是免疫系统的最有效和多效的细胞因子之一。它对针对病毒和胞内细菌感染的先天性和适应性免疫是关键的。在与其受体结合后，IFNγ起产生各种生理和细胞反应的作用。在过去20年的多项研究使IFNγ与炎性疾病的发病机制和维持关联起来(参见例如Billiau A. “Interferon-gamma: biology and role in pathogenesis.” Adv.Immunol. 1996; 62:61-130；Schoenborn JR, Wilson CB. “Regulation of interferon-gamma during innate and adaptive immune responses.” Adv. Immunol. 2007;96:41-101；以及Zhang SY, Boisson-Dupuis S, Chapgier A等, “Inborn errors ofinterferon (IFN)-mediated immunity in humans: insights into the respectiveroles of IFN-alpha/beta, IFN-gamma, and IFN-lambda in host defense.” Immunol.Rev. 2008;226:29-40。一旦发生抗原结合特异性免疫力，IFNγ便主要通过天然杀伤(NK)和天然杀伤T (NKT)细胞(作为先天性免疫应答的一部分)和通过CD4 Th1和CD8细胞毒性T淋巴细胞(CTL)效应T细胞产生。

本文提供的组合物和方法可用于治疗噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)。HLH是一种特征在于随着免疫系统的明显活化，由NK和CD8+ T细胞引起的细胞毒性功能严重受损或缺乏的综合征。

HLH包括原发性(遗传性/家族性) HLH和继发性HLH，两者在临床上描述为导致对不同组织和器官具有有害结果的严重高细胞因子血症的免疫系统调节异常(Henter JI,Elinder G, Soder O等 “Hypercytokinemia in familial hemophagocyticlymphohistiocytosis.” Blood 1991;78:2918-2922)。HLH分类见下表9：

表9. HLH分类

原发性HLH是一种异源常染色体隐性病症。原发性HLH最常见于婴儿期和儿童早期，估计欧洲的发生率为1/50,000名活产婴儿(Henter JI, Elinder G, Soder O, Ost A.Incidence in Sweden and clinical features of familial hemophagocyticlymphohistiocytosis. Acta Paediatr.Scand. 1991;80:428-435)。该疾病必是致死的，如果不治疗，其中位生存时间在症状开始后小于2个月(Janka GE. Familialhemophagocytic lymphohistiocytosis. Eur. J. Pediatr. 1983;140:221-230；以及Aricò M, Janka G, Fischer A, Henter JI, Blanche S, Elinder G, Martinetti M,Rusca MP Hemophagocytic lymphohistiocytosis Report of 122 children from theInternational Registry. FHL Study Group of the Histiocyte Society. Leukemia.1996 Feb;10(2):197-203)。

存在于HLH中的细胞毒性功能受损导致高细胞因子血症和吞噬血细胞作用。这些进而引起HLH的所有典型症状(Dhote R, Simon J, Papo T et al. Reactivehemophagocytic syndrome in adult systemic disease: report of twenty-six casesand literature review. Arthritis Rheum. 2003;49:633-639；Risdall RJ, McKennaRW, Nesbit ME et al. Virus-associated hemophagocytic syndrome: a benignhistiocytic proliferation distinct from malignant histiocytosis. Cancer 1979;44:993-1002；以及Risdall RJ, Brunning RD, Hernandez JI, Gordon DH. Bacteria-associated hemophagocytic syndrome. Cancer 1984;54:2968-2972)。HLH的典型症状包括例如长期发热、脾大、肝大、血细胞减少症、高铁蛋白血症、高甘油三酯血症、血纤维蛋白原过少、吞噬血细胞作用、高细胞因子血症和/或淋巴组织细胞浸润、骨髓发育不全、脑膜浸润。

HLH患者中升高的细胞因子中有：IFNγ、白介素6 (IL-6)、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF) α、IL-8、巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。

HLH还可发生在感染、风湿性疾病或肿瘤病期间，在这种情况下，它被称为继发性HLH。继发性HLH表现出原发性形式的相同病征和症状，并可能同样地严重。继发性HLH的现有疗法旨在解决基础疾病的原因。对于由感染(例如利什曼病)引起的HLH，当然是这种情况。值得注意的是，某些感染，特别是病毒感染(例如由CMV或EBV所致感染)的存在，极常是表现HLH的原发性形式的引发物。这个观察结果还得到原发性HLH的动物模型中的以下证据的支持：被淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)感染是疾病发生所必需的(Jordan MB,Hildeman D, Kappler J, Marrack P. An animal model of hemophagocyticlymphohistiocytosis (HLH): CD8+ T cells and interferon gamma are essentialfor the disorder. Blood 2004;104:735-743；Pachlopnik SJ, Ho CH, Chretien F etal. Neutralization of IFNgamma defeats haemophagocytosis in LCMV-infectedperforin-and Rab27a-deficient mice. EMBO Mol.Med. 2009；1:112-124；Kögl T, Müller J, Jessen B et al. Hemophagocytic lymphohistiocytosis in syntaxin-11-deficient mice: T-cell exhaustion limits fatal disease. Blood. 2013；121:604-613；以及Sepulveda FE, Debeume F, Menasché G et al. Distinct severity of HLHin both human and murine mutants with complete loss of cytotoxic effectorPRF1, RAB27A, and STX11 Blood. 2013；121:595-603)。

当HLH在肿瘤病，特别是血液恶性肿瘤期间出现时，患者病况的严重程度常常需要在专门解决基础疾病之前立即治疗HLH。

患有风湿性疾病(例如全身型幼年特发性关节炎(sJIA)和系统性红斑狼疮(SLE))的患者中HLH的病征和症状的存在，常被风湿病学家称为巨噬细胞活化综合征(MAS)，并且可先于风湿性疾病本身出现。患有MAS的大多数患者具有受损的NK，且穿孔蛋白功能试验和相当多的患者显示PRF1和UNC13D的多态性或杂合突变。尽管它是极其严重并危及生命的病况，但通常在开始适当治疗(大多数情况下由皮质甾类和环孢菌素组成)时它便消退。然而，大约15%发生MAS的患者中，疾病可能难以控制，可考虑使用依托泊苷(Minoia F, Davi S,Horne AC et al. Clinical Features, Treatment, and Outcome of MacrophageActivation Syndrome Complicating Systemic Juvenile Idiopathic Arthritis: AMultinational, Multicenter Study of 362 Patients. Arthritis & Rheumatism2014；66: 3160-3169)。

虽然原发性HLH主要被公认为儿童期疾病，但HLH是可存在于成人中的病况，并且越来越多意识到这比过去公认的更常发生。在大多数成年患者中，该疾病在恶性肿瘤(主要为非霍奇金淋巴瘤)、感染、自身炎症性或自身免疫性疾病和医源性免疫缺乏期间发生。

目前没有获准用于HLH治疗的药物。然而，本领域的专家已确立了管理HLH患者的准则(Henter JI, Horne AC, Arico' M, Egeler RM, Filipovich AH, Imashuku SLadisch S, McClain K, Webb D, Winiarski J and Janka Diagnostic andTherapeutic Guidelines for Hemophagocytic Lymphohistiocytosis Blood Cancer2007；48:124-13.1；Henter JI, Samuelsson-Horne A, Arico M et al. Treatment ofhemophagocytic lymphohistiocytosis with HLH-94 immunochemotherapy and bonemarrow transplantation. Blood 2002；100:2367-2373；以及Jordan MB, Allen CE,Weitzman S, Filipovich AH, McClain KL. How I treat hemophagocyticlymphohistiocytosis. Blood 2011；118:4041-4052)。

原发性HLH患者的管理目前包括下列步骤(Henter et al. Blood Cancer 2007)：(i)用皮质甾类和免疫抑制药物(例如依托泊苷、CsA、阿仑珠单抗、抗胸腺细胞球蛋白)组合的8周诱导疗法；(ii)维持疗法直到移植；和(iii)针对已鉴定的遗传缺陷和最终在极重HLH病例中没有疾病相关突变的所有患者的移植。

诱导疗法的主要目的是抑制以HLH为特征的危及生命的炎性过程，使得需要它的那些患者能够移植(Horne A, Janka G, Maarten ER et al. Haematopoietic stem celltransplantation in haemophagocytic lymphohistiocytosis. Br. J. Haematol.2005;129:622-630)。移植是与高外显率遗传突变有关的HLH的唯一治疗性治疗(Henter etal. Blood 2002)。

尽管采用这类准则，但原发性HLH的总体死亡率仍保持在约40-50% (Henter etal. Blood 2002；Trottestam H, Horne A, Arico M et al. Chemoimmunotherapy forhemophagocytic lymphohistiocytosis: long-term results of the HLH-94 treatmentprotocol. Blood 2011;118:4577-4584)。

在诱导期间，需要使用与严重的短期和长期安全问题有关的药物进一步促成已高的死亡率。开发了本文提供的组合物和方法作为靶向治疗，确保了功效与较低毒性。

在过去数年中，已得到IFNγ在HLH发生中的关键作用的越来越多的证据(HenterJI, Elinder G, Soder O et al. Hypercytokinemia in familial hemophagocyticlymphohistiocytosis. Blood 1991;78:2918-2922；Jordan MB, Hildeman D, KapplerJ, Marrack P. An animal model of hemophagocytic lymphohistiocytosis (HLH):CD8+ T cells and interferon gamma are essential for the disorder. Blood 2004;104:735-743；Pachlopnik SJ, Ho CH, Chretien F et al. Neutralization ofIFNgamma defeats haemophagocytosis in LCMV-infected perforin-and Rab27a-deficient mice. EMBO Mol.Med. 2009;1:112-124；Behrens EM, Canna SW, Slade K etal. Repeated TLR9 stimulation results in macrophage activation syndrome-likedisease in mice. J. Clin. Invest 2011;121:2264-2277；Xu XJ, Tang YM, Song H,MD, Yang SL, Xu WQ, Zhao N, Shi SW, Shen HP, Mao JQ, Zhang LY, and Pan BH,Diagnostic Accuracy of a Specific Cytokine Pattern in HemophagocyticLymphohistiocytosis in Children J Pediatr 2011；以及Risma K, Jordan MB.Hemophagocytic lymphohistiocytosis: updates and evolving concepts. Curr.Opin. Pediatr. 2012;24:9-15)。

表征HLH的原发性形式的基因突变全都影响参与同一过程的蛋白质，最终损害细胞毒活性。最先在HLH患者中鉴定出穿孔蛋白突变。

穿孔蛋白敲除(KO)小鼠被视为人类疾病的关联模型。实际上，这些小鼠一旦感染LCMV，便发生人类疾病的所有诊断特征和许多临床和实验室的特有特征，而且如果不治疗它们便死亡。出于这些原因，穿孔蛋白KO小鼠已被用来研究HLH的病理生理学。它们出现的HLH样病理取决于在响应抗原结合刺激时产生的CD8+ T细胞和IFNγ。

证实了当IFNγ的高循环水平被中和时，随着抗IFNγ抗体的给予，不仅仅临床和实验室异常情况得到恢复，而且存活率得到显著改进。相反，任何其它细胞因子的消除都对存活均无影响(Jordan et al., Blood 2004；Pachlopnik et al., EMBO Mol. Med.2009)。

在NI-0501研发项目的情况下研究了两个继发性HLH模型。在一个模型中，反复给予CpG (引起TLR9刺激)已被用来在健康小鼠(即具有细胞毒性途径的正常遗传学)中模拟慢性严重超刺激作为感染继发的HLH的模型。尽管这些小鼠不一定死亡，但它们发生HLH的典型临床和实验室特征。当IFNγ用给予抗IFNγ抗体中和时，疾病的临床和实验室特征得以恢复。引人关注的是，在该模型中，证实了给予抗IFNγ抗体也在相关靶组织(例如肝和脾)中导致IFNγ作用被完全中和(底稿准备中)。

为了研究发生在风湿性疾病背景下的继发性HLH的病理生理学，使用表达高水平的IL-6的IL-6转基因小鼠产生动物模型，所述IL-6的表达水平与患有sJIA (与HLH的继发性形式最常相关的风湿性疾病)的患者产生的类似。当用Toll样受体(TLR)配体引发时，这些小鼠带有人类疾病的多种特征而死亡(Strippolli R, Carvallo F, Scianaro R etal. Amplification of the response to Toll-like receptor ligands by prolongedexposure to interleukin-6 in mice: Implication for the pathogenesis ofmacrophage activation syndrome. Arthritis & Rheumatism 2012；64: 1680-1688)。在这些小鼠中，当IFNγ用给予抗IFNγ抗体中和时，存活显著改善且实验室参数恢复(Prencipe G等，底稿准备中)。

HLH中IFNγ的重要性的进一步增强是原发性HLH患者中高浓度的循环IFNγ水平(Henter et al., Blood 1991；Xu et al., J Pedatr 2011)。在从HLH诊断到治疗和随访监测的71名的一系列患者中，IFNγ水平在所有患者中超出正常的上限(17.3 pg/mL)，特别是53.5%的水平超出1000 pg/mL。还报告了IFNγ水平在早期快速上升，并且在HLH有效治疗时，可在48小时内从> 5000 pg/mL降至正常。

最近，在患有HLH的继发性形式的患者中的观察研究中，证实了在患有感染继发的HLH的患者和患有发生在sJIA背景下的HLH的患者两者中高水平的IFNγ。CXCL9、CXCL10和CXCL11 (已知被IFNγ诱导的3种趋化因子)的水平也显著升高。值得注意的是，发现IFNγ和3种IFNγ趋化因子的水平与疾病严重程度的实验室参数(例如铁蛋白、血小板计数和转氨酶)显著相关(Bracaglia等，已提交底稿)。

因高细胞因子血症和由活化淋巴细胞和组织细胞引起的器官浸润是造成所有HLH症状的原因，并取决于CD8+ T细胞活性过高和高IFNγ水平，IFNγ的中和构成合理的治疗方法。实际上，目前没有可用的特异性靶向CD8+ T细胞的药剂，并且靶向IFNγ下游的各细胞因子不一定可行。

因此，根据来自原发性和继发性HLH的动物模型和患有原发性和继发性HLH两者的患者中所进行观察的数据，证实该疾病发病机制中IFNγ所起的关键作用，IFNγ的中和为开发针对HLH的靶向疗法提坚实的基本原理，所述疗法必须在没有毒性或有限毒性情况下是有效的。

本公开内容还提供可用于鉴定或否则细化患有病症的患者群的组合物和方法，其中患者的CXCL9水平单独升高或连同一种或多种其它干扰素γ (IFNγ)相关生物标志物一起升高。具体地讲，本公开内容提供用于在检测噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)、继发性HLH和/或巨噬细胞活化综合征(MAS)中作为IFNγ产生的生物标志物的CXCL9水平的组合物和方法。

动物模型的大量证据表明IFNγ在原发性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)中的关键致病作用。高水平的IFNγ也存在于患有HLH的人中。之前曾报告，在患有活动性MAS (一种发生在全身型幼年特发性关节炎(sJIA)情况下的继发性HLH形式)的患者中观察到高水平的IFNγ和3种IFNγ相关趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11 (参见例如BracagliaC., Caiello I, De Graaf K. et al. Pediatric Rheumatology 2014,12(Suppl1):O3)。小鼠中的间接证据表明IFNγ大多产生于外周组织，且血液浓度可能相对低。

术语巨噬细胞活化综合征(MAS)是指慢性炎性风湿性疾病的可能致命的严重并发症。它通常发生在全身型幼年特发性关节炎(sJIA)的情况下，其中10-20%患者在患病期间发生该综合征。虽然较罕见，但还可发生在系统性红斑狼疮、川崎病以及其它自身免疫性和自身炎症性疾病中。在sJIA中，MAS通常发生在活动性疾病期，包括在疾病发作时。可在高比例的患者中鉴定出感染性引发物。MAS的典型特征包括发热、脾大、出血和肝的病征、中枢神经系统和可导致多器官衰竭的肾受累。实验室异常情况包括白细胞、血小板和血红蛋白、高转氨酶血症的降低、铁蛋白的显著增加和凝血系统血管内活化的证据(Ravelli, A. etal., Macrophage activation syndrome as part of systemic juvenile idiopathic arthritis: diagnosis, genetics, pathophysiology and treatment. Genes Immun.13(4): p. 289-98)。MAS引起重大的发病率和死亡率，占因sJIA死亡的相当部分(Minoia,F., et al., Clinical features, treatment, and outcome of macrophage activation syndrome complicating systemic juvenile idiopathic arthritis: a multinational, multicenter study of 362 patients. Arthritis Rheumatol, 2014.66(11): p. 3160-9；Hashkes, P.J., et al., Mortality outcomes in pediatric rheumatology in the US. Arthritis Rheum, 2010. 62(2): p. 599-608)。随着随之发生的新治疗靶的鉴定和可能的靶向疗法开发，对疾病发病机制的更好理解可导致在MAS的管理和结果中的重大改进。

MAS具有噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)的大部分临床特征和实验室异常情况，且实际上目前归类为继发性或反应性HLH (sec-HLH) (Jordan, M.B., et al., How I treat hemophagocytic lymphohistiocytosis. Blood, 2011. 118(15): p. 4041-52)。HLH的原发性形式(p-HLH)由编码参与颗粒胞吐作用的蛋白质的基因突变引起，所述基因包括PRF1、UNC13D、STXBP2、STX11、RAB27A和XIAP，通常导致CD8+淋巴细胞和NK细胞有缺陷的细胞毒活性。按照现有分类，在缺乏可鉴定的遗传原因和/或家族性遗传时，HLH被定义为继发性或反应性。Sec-HLH可发生在缺乏可证实的引发物时，或发生在感染、恶性肿瘤或风湿性疾病的情况下，后者通常称为MAS。MAS发生的遗传基础正被逐步阐明，多项研究表明MAS和总的来说sec-HLH与低外显率变体的杂合性或p-HLH的相同致病基因的突变的关联(Kaufman, K.M. et al., Whole-exome sequencing reveals overlap between macrophage activation syndrome in systemic juvenile idiopathic arthritis and familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Arthritis Rheumatol, 2014. 66(12): p. 3486-95；Vastert, S.J. et al., Mutations in the perforin gene can be linked to macrophage activation syndrome in patients with systemic onset juvenile idiopathic arthritis. Rheumatology (Oxford), 2010. 49(3): p. 441-9.；Zhang, K. et al., Macrophage activation syndrome in patients with systemic juvenile idiopathic arthritis is associated with MUNC13-4 polymorphisms.Arthritis Rheum, 2008. 58(9): p. 2892-6；和Zhang, M. et al., Genetic defects in cytolysis in macrophage activation syndrome. Curr Rheumatol Rep, 2014. 16(9): p. 439；以及Bracaglia C, Sieni E, Da Ros M et al., Mutations of familialhemophagocytic lymphohistiocytosis (FHL) related genes and abnormalities ofcytotoxicity function tests in patients with macrophage activation syndrome(MAS) occurring in systemic juvenile idiopathic arthritis (sJIA). PediatricRheumatology 2014, 12(Suppl 1):P53)。这些在p-HLH和MAS之间的遗传背景中的相似性进一步支持共有的致病机制。

p-HLH患者以及p-HLH鼠模型中的研究，支持有缺陷的细胞毒活性和抗原呈递细胞(APC)-CD8+ T细胞交叉对话中的异常情况导致免疫应答和异常T细胞活化的缺陷性沉默的假设。这导致不受控制的免疫活化和因T淋巴细胞和巨噬细胞所致促炎细胞因子的产生，导致器官损害。在p-HLH动物模型中、在穿孔蛋白和Rab27缺陷型小鼠中进行的研究表明由活化CD8+ T细胞产生的干扰素-γ (IFNγ)的关键作用。在穿孔蛋白缺陷型小鼠中，IFNγ的中和导致否则致死综合征的存活，其中生物化学和血液学异常情况恢复(Jordan, M.B. etal., An animal model of hemophagocytic lymphohistiocytosis (HLH): CD8+ T cells and interferon gamma are essential for the disorder. Blood, 2004. 104(3): p. 735-43；Pachlopnik Schmid, J. et al., Neutralization of IFNgamma defeats haemophagocytosis in LCMV-infected perforin-and Rab27a-deficient mice. EMBO Mol Med, 2009. 1(2): p. 112-24)。在Rab27缺陷型小鼠中，其中该疾病不导致死亡，IFNγ的中和引起外周器官，包括中枢神经系统受累的显著改善(Pachlopnik2009)。高循环IFNγ水平也存在于按照HLH 2004诊断准则诊断的HLH患者中(My, L.T. etal., Comprehensive analyses and characterization of haemophagocytic lymphohistiocytosis in Vietnamese children. Br J Haematol, 2010. 148(2): p.301-10；Takada, H. et al., Increased serum levels of interferon-gamma- inducible protein 10 and monokine induced by gamma interferon in patients with haemophagocytic lymphohistiocytosis. Clin Exp Immunol, 2003. 133(3): p.448-53；Tang, Y. et al., Early diagnostic and prognostic significance of a specific Th1/Th2 cytokine pattern in children with haemophagocytic syndrome.Br J Haematol, 2008. 143(1): p. 84-91；Xu, X.J. et al., Diagnostic accuracy of a specific cytokine pattern in hemophagocytic lymphohistiocytosis in children. J Pediatr, 2012. 160(6): p. 984-90 e1)，因此不一定以遗传突变的存在为基础。应注意，这些研究包括没有可证实的遗传原因的可观(但是可变的)患者比例(同前)。

本文提供的研究被设计成评价活动性MAS患者中IFNγ和3种IFNγ相关趋化因子的血清水平与它们本身和与疾病活动性的实验室参数间的相关性以找寻IFNγ体内产生的生物标志物。具体地讲，测量sJIA患者中IFNγ、CXCL9、CXCL10、CXCL11和IL-6的循环水平，其中约37% (20/54)的患者在采样时有MAS。还评价了循环水平与疾病活动性参数的关系，就像IFNγ的水平与CXCL9、CXCL10和CXCL11的水平的相关性一样。在一些实施方案中，生物标志物是总IFNγ水平，其可用作药效学生物标志物。

正如本文证实的，与在采样时没有MAS的活动性sJIA的相比，在活动性MAS中IFNγ和3种IFNγ相关趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11的水平显著升高。发现在活动性MAS中，疾病严重程度的实验室参数例如铁蛋白、嗜中性粒细胞、血小板、丙氨酸氨基转移酶和乳酸脱氢酶与IFNγ和CXCL9显著相关；与CXCL10和CXCL11较低程度地相关；与IL-6水平没有相关性。在患有活动性sJIA而无MAS的患者中，在实验室参数和细胞因子水平之间没有显著相关性。在活动性MAS中，IFNγ水平与CXCL9水平显著相关，与CXCL10水平较低程度地相关，与CXCL11水平不相关。

存在于活动性MAS患者中的高水平的IFNγ和CXCL9与疾病严重程度的实验室参数显著相关。活动性MAS患者中IFNγ和CXCL9密切相关。因为已表明CXCL9只受IFNγ诱导，而不受其它干扰素诱导(参见例如Groom J. R.和Luster A. D. Immunol Cell Biol 2011,Feb;89(2):207-15)，因此本文公开的研究结果证实，CXCL9是MAS中IFNγ产生的生物标志物。

本文提供的研究还证实，IFNγ和趋化因子(C-X-C基序)配体9 (CXCL9)、CXL10和CXCL11 (已知被IFNγ诱导的3种趋化因子)的水平在MAS并发sJIA的患者中升高，但不在有活动性sJIA而没有MAS的患者中升高。然而，在这些患者中IFNγ、CXCL9、CXCL10和CXCL11的水平与疾病严重程度的实验室参数相关。

本发明的中和性抗IFNγ抗体包括例如下表1A所示重链互补决定区(CDR)、表1B所示轻链CDR及其组合。由Chothiaet et al., 1989；E. A. Kabatet et al., 1991定义的包括互补决定区(CDR)的氨基酸用下划线和斜体文本突出显示在下文。(参见Chothia, C etal., Nature 342:877-883(1989)；Kabat, EA et al., Sequences of Protein ofimmunological interest, Fifth Edition, US Department of Health and HumanServices, US Government Printing Office (1991))。

表1A. 来自结合并中和IFNγ的抗体克隆的VHCDR序列

表1B. 来自结合并中和IFNγ的抗体克隆的VL CDR序列

本发明的示例性抗体包括例如描述于PCT公开号WO2006/109191的抗IFNγ抗体，其内容通过引用以其整体结合到本文中。

本发明的示例性抗体包括例如本文称为NI-0501的抗体，其结合人IFNγ。以下表示NI-0501抗体的重链、轻链、可变重(VH)链和可变轻(VL)链序列，具有VH和VL氨基酸序列中下划线表示的CDR序列：

NI-0501重链核酸序列：

GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGATGGTAGCAGTGGCTGGTACGTACCACACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATAG(SEQ ID NO: 43)

NI-0501重链氨基酸序列：

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDGSSGWYVPHWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQID NO: 44)

NI 0501轻链核酸序列：

AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACTCGCAGCAGTGGCAGCATTGCCAGCAACTATGTGCAGTGGTACCAACAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCACTGTCATCTATGAGGATAACCAGAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAATTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGGCTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCTTATGATGGCAGCAATCGTTGGATGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTACCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAG(SEQ ID NO: 45)

NI 0501轻链氨基酸序列：

NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIASNYVQWYQQRPGSSPTTVIYEDNQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDGSNRWMFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS (SEQ IDNO: 46)

NI-0501重链可变区氨基酸序列：

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDGSSGWYVPHWFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 47)

NI 0501轻链可变区氨基酸序列

NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIASNYVQWYQQRPGSSPTTVIYEDNQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDGSNRWMFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 48)

合适的抗IFNγ抗体包括描述于美国专利7,700,098的抗体，其通过引用以其整体结合到本文中。几种示例性抗体包括本文称为ARC1.2R3P2_A6 (“A6”)、ARC1.2R3P2_B4 (“B4”)、ARC1.2R3P2_B9 (“B9”)、ARC1.2R3P2_C9 (“C9”)、ARC1.2R3P2_C10 (“C10”)、ARC1.2R3P2_D3 (“D3”)、ARC1.2R3P2_D6 (“D6”)、ARC1.2R3P2_D8 (“D8”)、ARC1.2R3P2_E1 (“E1”)、ARC1.2R3P2_F8 (“F8”)、ARC1.2R3P2_F9 (“F9”)、ARC1.2R3P2_G7 (“G7”)、ARC1.2R3P2_G9(“G9”)和ARC1.2R3P2_G10 (“G10”)的抗体。

以下表示这些抗体的序列。

A6 VH核酸序列：

GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGATGGTAGCAGTGGCTGGTACGTACCACACTGGTTCGACCCCTGGGGCCGGGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGT(SEQ ID NO:49)

A6 VH氨基酸序列：

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDGSSGWYVPHWFDPWGRGTLVTVSS(SEQ ID NO: 50)

A6 VL核酸序列：

AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACTCGCAGCAGTGGCAGCATTGTCAGCAACTATGTGCAGTGGTACCAACAGCGCCCGGGCAGTGCCCCCACCACTGTCATCTATGAGGATAACCGGAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAATACTGCCTCCCTCACCATCTCTGGGCTGGAGGCTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCTTATGATGGCAGCAATCGTTGGATGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT(SEQ ID NO: 51)

A6 VL氨基酸序列：

NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIVSNYVQWYQQRPGSAPTTVIYEDNRRPSGVPDRFSGSIDSSSNTASLTISGLEAEDEADYYCQSYDGSNRWMFGGGTKLTVLG(SEQ ID NO: 52)

B4 VH核酸序列：

GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGATCATAGCAGTGGCTGGTACGTAATCTCCGGTATGGACGTCTGGGGCCGAGGGACAATGGTCACCGTCTCGAGT(SEQ ID NO:53)

B4 VH氨基酸序列：

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDHSSGWYVISGMDVWGRGTMVTVSS(SEQ ID NO: 54)

B4 VL核酸序列：

AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCAGCATTGCCAGCAACTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCACTGTGATCTCTGAGGATAACCAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCGTCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATTTCTGGACTGAGGACTGAGGACGAGGCTGACTATTACTGTCAGTCTAATGATTCCGACAATGTGGTTTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT(SEQ ID NO: 55)

B4 VL氨基酸序列：

NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIASNYVQWYQQRPGSSPTTVISEDNQRPSGVPDRFSGSVDSSSNSASLTISGLRTEDEADYYCQSNDSDNVVFGGGTKLTVLG(SEQ ID NO: 56)

B9 VH核酸序列：

GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATCCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAAGGACCTAACAGTGGGTGGTCCCTGGTACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT(SEQ ID NO: 57)

B9 VH氨基酸序列：

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNPKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDLTVGGPWYYFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 58)

B9 VL核酸序列：

AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCAGCATTGTCAGCAACTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTGCCCCCACCACTGTGATCTTTGACGATGACCAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGGTCGGTTCTCTGGCTCCCTCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGGCTGCAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCTTATGATAGCAGCAATGTGGTATTCGGCGGGGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGT(SEQ ID NO: 59)

B9 VL氨基酸序列：

NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIVSNYVQWYQQRPGSAPTTVIFDDDQRPSGVPGRFSGSLDSSSNSASLTISGLQTEDEADYYCQSYDSSNVVFGGGTKVTVLG(SEQ ID NO: 60)

C9 VH核酸序列：

GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAAAGATGGATGGAACGCGCTGGGATGGCTTGAATCCTGGGGCCGGGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGT(SEQ ID NO: 61)

C9 VH氨基酸序列：

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDGWNALGWLESWGRGTLVTVSS(SEQ ID NO: 62)

C9 VL核酸序列：

AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAGGACGATAACCATCTCCTGCACCCGCAGTGGTGGCAGCATTGGCAGCTACTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCACTGCCCCCACCACTGTGATCTATGACGATAAAAAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTATTGTCAGTCTTATGATAGCAACAATCTTGTGGTTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGT(SEQ ID NO: 63)

C9 VL氨基酸序列：

NFMLTQPHSVSESPGRTITISCTRSGGSIGSYYVQWYQQRPGTAPTTVIYDDKKRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDSNNLVVFGGGTKVTVLG(SEQ ID NO: 64)

C10 VH核酸序列：

GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGATGGTAGCAGTGGCTGGTACGTACCACACTGGTTCGACCCCTGGGGCAGGGGGACAATGGTCACCGTCTCGAGT(SEQ ID NO:65)

C10 VH氨基酸序列：

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDGSSGWYVPHWFDPWGRGTMVTVSS(SEQ ID NO: 66)

C10 VL核酸序列：

AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCACCATTGCCAGCAACTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCACTGTGATCTATGAGGATAACCAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCTTATGATAACAGCAATCATTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGT(SEQ ID NO: 67)

C10 VL氨基酸序列：

NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGTIASNYVQWYQQRPGSSPTTVIYEDNQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDNSNHWVFGGGTKVTVLG(SEQ ID NO: 68)

D3 VH核酸序列：

GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCAGGGGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCAATGCCATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTCTTACTGGTAGTGGTGGTACCGCATACTACGCAGACTCCGTGGAGGGCCGGTTCAGCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAGGGCACGGAACTCGTGGGAGGAGGACTTGACAACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGT(SEQ ID NO: 69)

D3 VH氨基酸序列：

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D3 VL核酸序列：

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D3 VL氨基酸序列：

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D6 VH核酸序列：

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D6 VH氨基酸序列：

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D6 VL核酸序列：

AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCGGCAGCAGTGGCAGCATTGCCAGCAACTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTGCCCCCACCACTGTGATCTATGAGGATAACCAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCTTATGATAGCAGCAATCAAGAGGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT(SEQ ID NO: 75)

D6 VL氨基酸序列：

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D8 VH核酸序列：

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D8 VH氨基酸序列：

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D8 VL核酸序列：

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D8 VL氨基酸序列：

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E1 VH核酸序列：

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E1 VH氨基酸序列：

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E1 VL核酸序列：

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E1 VL氨基酸序列：

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F8 VH核酸序列：

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F8 VH氨基酸序列：

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F8 VL核酸序列：

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F8 VL氨基酸序列：

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F9 VH核酸序列：

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F9 VH氨基酸序列：

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F9 VL核酸序列：

AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCAGCATTGCCAGCAATTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTGCCCCCACCATTGTGATCTATGAAGATAACCAAAGACCCTCTGGGGTCCCTCATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCTTATGAGGGGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT(SEQ ID NO: 91)

F9 VL氨基酸序列：

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G7 VH核酸序列：

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G7 VH氨基酸序列：

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G7 VL核酸序列：

AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACGCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTGACCATTTCCTGCACCGGCAGAAATGGCAACATTGCCAGCAACTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGACAGTGCCCCCACCCTTATAATCTTTGAAGATACCCAAAGACCCTCTGGGGTCCCTACTCGGCTCTCAGGCTCCATCGACACCTCCTCCAATTCTGCCTCCCTCATCATCTCTTCATTGAGGACTGAGGACGAGGCTGATTACTACTGTCAATCTTCTGATTCCAACAGGGTGCTGTTCGGCGGAGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGT(SEQ ID NO: 95)

G7 VL氨基酸序列：

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G9 VH核酸序列：

GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAAAGATTTTTGGGTTATTACGAGTGGGAATGACTACTGGGGGCGGGGGACCACGGTCACCGTCTCGAGT(SEQ ID NO: 97)

G9 VH氨基酸序列：

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G9 VL核酸序列：

AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTGACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCAGCATTGCTAGCAATTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCACTGTGATCTTTGAAGATAACCGAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTTTCTGGCTCCATCGACACCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCTTTTGATAGCACCAATCTTGTGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT(SEQ ID NO: 99)

G9 VL氨基酸序列：

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G10 VH核酸序列：

GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAAAGATGGATGGAACGCGCTGGGATGGCTTGAATCCTGGGGGAAGGGGACCACGGTCACCGTCTCGAGT(SEQ ID NO: 101)

G10 VH氨基酸序列：

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G10 VL核酸序列：

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G10 VL氨基酸序列：

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在一些实施方案中，IFNγ抗体被设计成IgG同种型的形式。在一些实施方案中，IFNγ抗体被设计成IgG1同种型的形式。

在一些实施方案中，本发明的IFNγ抗体特异性结合人和/或食蟹猴IFNγ，其中抗体结合与NI-0501抗体、A6抗体、B4抗体、B9抗体、C9抗体、C10抗体、D3抗体、D6抗体、D8抗体、E1抗体、F8抗体、F9抗体、G7抗体、G9抗体和/或G10抗体相同的表位。

定义：

除非另有定义，否则与本发明联用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的相同含义。此外，除非文中另有要求，否则单数术语应包括复数，且复数术语应包括单数。总的来说，与本文所述的细胞和组织培养、分子生物学及蛋白质和寡核苷酸或多核苷酸化学、杂交联用或所述这些的技术的术语是众所周知并常用于本领域的术语。标准技术被用于重组DNA、寡核苷酸合成和组织培养与转化(例如穿孔、脂转染)。酶促反应和纯化技术按照生产商说明书或按本领域通常实现的或按本文描述的进行。上述技术和程序一般按照本领域众所周知的常规方法和按描述于本说明书引用和论述的各种通用或更专用的参考文献进行。参见例如Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2ded., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Hrbor, N.Y. (1989))。与本文描述的分析化学、合成有机化学及医学和药物化学的实验室程序和技术联用的术语是众所周知并常用于本领域的术语。标准技术被用于化学合成、化学分析、药物制备、制剂、递送和患者治疗。

抗IFNγ抗体的给予

应认识到，本发明的治疗性实体的给予与合适的载体、赋形剂和掺入制剂中提供改进的传送、递送、耐受性等的其它活性剂一起给予。多种合适的制剂可见于所有药剂师已知的配方中：Remington’s Pharmaceutical Sciences (15th ed., Mack PublishingCompany, Easton, PA(1975))，特别是其中Blaug、Seymour所编辑的第87章。这些制剂包括例如散剂、糊剂、软膏剂、胶冻剂、蜡制剂、油制剂、脂质、含脂质(阳离子或阴离子)囊泡(例如Lipofectin™)、DNA缀合物、无水吸收糊剂、水包油和油包水乳剂、乳剂碳蜡(不同分子量的聚乙二醇)、半固体凝胶剂和含有碳蜡的半固体混合物。上述混合物的任一种可适于本发明的治疗和疗法，条件是制剂中的活性成分不被制剂灭活，且制剂与给药途径在生理上是相容的和可耐受的。另参见Baldrick P. ‘‘Pharmaceutical excipient development:the need for preclinical guidance.” Regul. Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8(2000)；Wang W. “Lyophilization and development of solid proteinpharmaceuticals.” Int. J. Pharm. 203(1-2):1-60(2000)；Charman WN “Lipids,lipophilic drugs, and oral drug deliverysome emerging concepts.” J Pharm Sci.89(8):967-78(2000)；Powell et al. “Compendium of excipients for parenteralformulations” PDA J Pharm Sci Technol. 52:238-311(1998)以及其中对于关于药剂师熟知的制剂、赋形剂和载体的额外信息的引用。

结合用于诊断或治疗特定免疫相关病症的任何已知方法来确定治疗的功效。免疫相关病症的一种或多种症状的缓解表明抗体提供临床益处。

本发明的抗体，包括多克隆、单克隆、人源化和完全人抗体可用作治疗剂。所述治疗剂一般可用来治疗或预防与受试者中指定靶标的异常表达或活化有关的疾病或病理。将抗体制剂，优选对其靶抗原结合具有高特异性和高亲和力的抗体制剂给予受试者，抗体制剂一般由于其与靶标结合而发挥作用。抗体的给予可消除或抑制或干扰靶标的信号传导功能。抗体的给予可消除或抑制或干扰靶标与靶标天然结合的内源配体的结合。

本发明的抗体的治疗有效量一般涉及达到治疗目的的量。如上所述，这可以是抗体与其靶抗原之间的结合相互作用，在某些情况下，干扰靶标的功能。所需待给予的量此外将取决于抗体对其特异性抗原的结合亲和力，并且还将取决于所给予的抗体从其给予的其它受试者的自由体积耗减的速率。以非限制性实例为例，用于本发明的抗体或抗体片段的治疗有效剂量的常见范围可为约0.1mg/kg体重-约50mg/kg体重。常见给药频率的范围可为例如每日两次至一周一次。

可以药物组合物的形式给予本发明的抗体或其片段用于治疗各种疾病和病症。在例如Remington: The Science And Practice Of Pharmacy 19th ed. (Alfonso R.Gennaro, et al., editors) Mack Pub. Co., Easton, Pa.:1995；Drug AbsorptionEnhancement: Concepts, Possibilities, Limitations, And Trends, HarwoodAcademic Publishers, Langhorne, Pa.,1994；以及Peptide And Protein DrugDelivery (Advances In Parenteral Sciences, Vol.4), 1991, M. Dekker, New York中提供了在制备此类组合物中涉及的原则和考量，以及组分选择中的指导。

制剂还可包含一种以上活性化合物，例如待治疗的特定适应症需要的抗IFNγ拮抗剂，优选彼此无不利影响、具有互补活性的那些。备选或另外，组合物可包含提高其功能的试剂，例如细胞毒性剂、细胞因子、化学治疗剂或者生长抑制剂。这样的分子合适以有效用于预期目的的量组合存在。

在一个实施方案中，活性化合物，例如抗IFNγ拮抗剂，在组合疗法中给予，即与可用于治疗病理病况或病症的一种或多种其它药剂组合。术语“组合”在本文中意指基本上同时(同时或者序贯)给予的药剂。如果序贯给予，在开始给予第二种化合物时，优选在治疗部位仍可以有效浓度检出两种化合物中的第一种。

例如，组合疗法可包括本发明的一种或多种中和性抗IFNγ抗体，其与一种或多种另外的治疗剂，例如下文更详细描述的一种或多种细胞因子和生长因子抑制剂、免疫抑制剂、抗炎药剂、代谢抑制剂、酶抑制剂和/或细胞毒性剂或细胞生长抑制剂共配制和/或共给予。这类组合疗法可有利地利用较低剂量的给予的治疗剂，从而避免与各种单一疗法有关的可能的毒性或并发症。

在使用抗体片段时，特异性结合到靶蛋白的结合结构域的最小抑制性片段和/或干扰或否则拮抗IFNγ信号传导的最小抑制性片段是优选的。例如，基于抗体的可变区序列，可设计保留结合靶蛋白序列的能力的肽分子。这类肽可以化学合成和/或通过重组DNA技术产生。(参见例如Marasco et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 7889-7893(1993))。制剂还可以包含一种以上对于待治疗的具体适应症是必需的活性化合物，优选不会彼此不利影响、具有互补活性的那些。备选或另外，组合物可包含增强其功能的药剂，例如细胞毒性剂、细胞因子、化学治疗剂或生长抑制剂。这类分子以对于预定目的是有效的量适宜地组合存在。

CXCL9和其它生物标志物的水平采用各种标准检测技术中的任一种来检测。检测试剂可用于检测样品中给定靶标(或其蛋白片段)的存在。在一些实施方案中，检测试剂包含可检测标记。在一些实施方案中，检测试剂是抗体(或其片段)或探针。在一些实施方案中，所述试剂或探针被标记。关于探针或抗体的术语“标记的”旨在包括通过使可检测物质与探针或抗体偶联(即物理连接)的探针或抗体的直接标记，以及通过与被直接标记的另一种试剂有反应的探针或抗体的间接标记。间接标记的实例包括使用荧光标记的第二抗体检测第一抗体，并用生物素使DNA探针末端标记，使得它可以用荧光标记的链霉抗生物素检测。

术语“生物样品”旨在包括从受试者分离的组织、细胞和生物流体以及受试者内存在的组织、细胞和流体。因此包括在术语“生物样品”的用法内的为血液和血液的级分或组分，包括血清、血浆或淋巴。体液可以是自受试者的身体内的任何地方(优选外周位置)分离的流体，包括但不限于例如血液、血浆、血清、滑液、尿、痰、脊髓液、脑脊液、胸膜液；呼吸道、肠道和泌尿生殖道的流体；唾液、器官系统内流体、腹水、肿瘤囊液、羊水及其组合。生物样品还包括所有前述流体的实验分离的部分。生物样品还包括包含匀质化固体材料例如粪便、组织和活检样品的溶液或混合物。本发明的检测方法可用于在体外和体内检测生物样品中的分析物mRNA、蛋白质或基因组DNA。例如，用于检测分析物mRNA的体外技术包括RNA杂交和原位杂交。用于检测分析物蛋白质的体外技术包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、蛋白质印迹、免疫沉淀和免疫荧光。用于检测分析物基因组DNA的体外技术包括DNA杂交。用于进行免疫测定的方法描述于例如“ELISA: Theory and Practice: Methods in MolecularBiology”, Vol. 42, J. R. Crowther (Ed.) Human Press, Totowa, NJ, 1995；“Immunoassay”, E. Diamandis和T. Christopoulus, AcademicPress, Inc., SanDiego, CA, 1996；以及“Practice and Theory of EnzymeImmunoassays”, P. Tijssen,Elsevier Science Publishers, Amsterdam, 1985。此外，用于检测分析物蛋白质的体内技术包括将标记的抗分析物蛋白抗体引入受试者内。例如，所述抗体可用放射性标记物标记，所述放射性标记物在受试者中的存在情况和位置可以通过标准成像技术来检测。

所述组合物和方法可用于治疗与干扰素-γ (IFNγ)表达和/或活性(包括异常IFNγ表达和/或活性)有关的各种病症的任一种。本公开内容的组合物和方法可用于治疗噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)。HLH是一种病理性免疫活化的罕见的和严重的威胁生命的疾病，其特征在于极度炎症的临床病征和症状(发热、脾大、血细胞减少症、凝血病)，导致发生异常免疫介导的病理，其通过组织损害，最终可引起多器官衰竭和死亡(HenterJI, Elinder G, Söder O, Hansson M et al: Hypercytokinemia in familialhemophagocytic lymphohistiocytosis. Blood 1991, 78:2918-2922)。HLH包括原发性(遗传性/家族性) HLH和继发性HLH。

原发性HLH是一种异源常染色体隐性病症，大多见于婴儿期和儿童早期，据估计在欧洲发生率为1/50,000名活产婴儿(Janka GE: Familial hemophagocyticlymphohistiocytosis. Eur. J. Pediatr. 1983, 140:221-230)。如果不治疗，该疾病必是致死的，其中位生存期小于症状开始后2个月(Filipovich AH: Hemophagocyticlymphohistiocytosis (HLH) and related disorders. Hematology Am Soc HematolEduc Program 2009:127-131)。

原发性HHL中的遗传缺陷全都影响参与清除活化巨噬细胞所需的NK细胞和/或细胞毒性淋巴细胞的细胞毒性途径、编码穿孔蛋白合成的蛋白质、细胞溶解颗粒成熟、颗粒胞吐作用和释放颗粒胞吐作用或功能的基因(Filipovich, A., K. McClain and A. Grom.2010. Histiocytic disorders: recent insights into pathophysiology andpractical guidelines. Biol. Blood Marrow Transplant. 16(1 Suppl):S82-S89)。在约20-40%的原发性HLH患者中，以HLH综合征为特征的细胞毒性功能受损因编码穿孔蛋白(PRF1)的基因突变所致，所述穿孔蛋白是一种细胞毒性颗粒的细胞溶解蛋白，其是T细胞和天然杀伤细胞介导的细胞溶解的关键调节因子。在约10%的患者中，该病由编码参与穿孔蛋白释放进入靶细胞中的蛋白质的UNC13D基因突变引起。另外，一些免疫缺陷综合征，例如2型Griscelli综合征(GS-2)和Chediak-Higashi综合征(CHS)常常伴随HLH一起存在(JankaGE, Lehmberg K: Hemophagocytic lymphohistiocytosis: pathogenesis andtreatment. Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2013, 2013:605-611)。

HLH的继发性形式可发生在感染、自身免疫性/风湿性疾病过程中或与恶性肿瘤联合发生。继发性形式与原发性HLH的相同病征和症状一起存在，并且可能同样严重。

本公开内容的组合物和方法可用于治疗继发性HLH。本公开内容的组合物和方法可用于治疗巨噬细胞活化综合征(MAS)。

MAS是一种风湿性疾病(其因T淋巴细胞和巨噬细胞的过度活化和扩增而引起)的可能危及生命的严重并发症。这些免疫细胞不受控制的扩增导致明显的高细胞因子血症和与发热、血细胞减少症、肝脾大、肝功能障碍、凝血异常情况和高铁蛋白血症有关的高炎性状态，并且可发展成多器官衰竭和死亡(Schulert GS, Grom AA: Pathogenesis ofmacrophage activation syndrome and potential for cytokine-directed therapies.Annu. Rev. Med. 2015, 66:145-159)。

因为其与HLH极强的临床和病理相似性，所以MAS被归类为HLH的继发性或获得性形式。实际上，最近证实，大多数MAS患者具有受损的NK和穿孔蛋白功能试验，且许多MAS患者显示PRF1和UNC13D的多态性或杂合突变(Zhang M, Behrens EM, Atkinson TP,Shakoory B et al:Genetic defects in cytolysis in macrophage activationsyndrome. Curr Rheumatol Rep 2014, 16:439)。

MAS最常发生在sJIA患者中，系统性红斑狼疮(SLE)患者中较罕见，虽然较罕见，但是也披露于血管炎(特别是川崎病)患者中。约7-17%的SJIA患者发生明显的MAS (SawhneyS, Woo P, Murray KJ: Macrophage activation syndrome: a potentially fatalcomplication of rheumatic disorders. Arch. Dis. Child. 2001, 85:421-426；Moradinejad MH, Ziaee V: The incidence of macrophage activation syndrome inchildren with rheumatic disorders. Minerva Pediatr. 2011, 63:459-466)，一些证据表明亚临床MAS可见于多达活动性全身性疾病患者的1/3 (Behrens EM, Beukelman T,Paessler M, Cron RQ: Occult macrophage activation syndrome in patients withsystemic juvenile idiopathic arthritis. J. Rheumatol. 2007, 34:1133-1138)。

因为MAS是可能致死的，所以适时诊断和即时治疗干预是疾病适当管理必不可少的。报道的MAS中的死亡率达到20-30%，并且它仍是儿科风湿病学中死亡率的主要原因(Grom AA, Horne A, De Benedetti F: Macrophage activation syndrome in the eraof biologic therapy. Nat Rev Rheumatol. 2016 Mar 24. doi: 10.1038/nrrheum.2015.179)。

已针对sJIA患者中MAS的诊断提出了不同的成套标准。有时推荐主要针对HLH的原发性(遗传)形式研发的HLH-2004诊断准则(Henter J, Horne A, Aricó M, Egeler RM etal: HLH-2004: Diagnostic and therapeutic guidelines for hemophagocyticlymphohistiocytosis. Pediatr Blood Cancer 2007, 48:124-131)。然而，它们呈现若干限制，并且可能不适用于sJIA患者。例如标准(例如低于HLH-2004所要求的阈值的血细胞减少和血纤维蛋白原过少)只有在MAS的晚期才变得明显，因为这些患者常常具有升高的白血细胞和血小板计数以及升高的血纤蛋白原血清水平作为sJIA炎性反应的一部分(SchulertGS, Grom AA: Pathogenesis of macrophage activation syndrome and potential forcytokine-directed therapies. Annu. Rev. Med. 2015, 66:145-159)。吞噬血细胞作用在出现时可能不存在于大部分的MAS患者中(Minoia F, Davì S, Horne A, Demirkaya Eet al: Clinical features, treatment, and outcome of macrophage activationsyndrome complicating systemic juvenile idiopathic arthritis: amultinational, multicenter study of 362 patients. Arthritis & rheumatology(Hoboken, N.J.) 2014, 66:3160-3169)。而且，在MAS的情况下按常规不评价吞噬血细胞作用、NK细胞活性和sCD25。

备选方法基于MAS并发sJIA的初步诊断准则(PDG)的应用，所述准则通过MAS患者群与突发sJIA1的患者群相比较的分析确立。

最近，在大批患者群中针对其将sJIA/MAS与sJIA (不存在MAS时)和全身性感染区分开来的能力对sJIA相关MAS的HLH-2004诊断准则和初步诊断准则进行了比较(Davì S,Minoia F, Pistorio A, Horne A et al: Performance of current guidelines fordiagnosis of macrophage activation syndrome complicating systemic juvenileidiopathic arthritis. Arthritis & rheumatology (Hoboken, N.J.) 2014, 66:2871-2880)。尽管因其追溯性质而有一些限制，但该研究似乎表明初步MAS准则在灵敏度和特异性间达到最佳平衡，并与治疗医师所做诊断达到最大一致性。HLH-2004成套标准的灵敏度<30%。然而，还报道了达到PDG的每个单一标准的患者比例是高度可变的，并且一些临床特征(例如CNS功能障碍和出血)可能出现在MAS的晚期，使得在初期MAS中其灵敏度低(LehmbergK, Pink I, Eulenburg C, Beutel K et al: Differentiating macrophage activationsyndrome in systemic juvenile idiopathic arthritis from other forms ofhemophagocytic lymphohistiocytosis. The Journal of pediatrics 2013, 162:1245-1251)。

最近，开发出诊断评分(HScore)，并在追溯性312名患者群中得到证实，患者群中162人被认定患有反应性噬血细胞性综合征(Fardet L, Galicier L, Lambotte O,Marzac C, Aumont C, Chahwan D, Coppo P, Hejblum G: Development and validationof the HScore, a score for the diagnosis of reactive hemophagocytic syndrome.Arthritis & rheumatology (Hoboken, N.J.) 2014, 66:2613-2620)。9个变量(3个临床[即已知的基础性免疫抑制、高温、器官巨大症]、5个生物学[即甘油三酯、铁蛋白、血清谷氨酸草酰乙酸转氨酶、血纤蛋白原水平和血细胞减少症]和1个细胞学[即对骨髓抽吸物的吞噬血细胞作用特征])在HScore中保持，患有噬血细胞性综合征的概率的范围为<1%具有≤90的HScore至>99%具有≥250的HScore。

在对MAS的经证实的诊断标准达到最终的一致意见以前，熟练医师的临床诊断在将MAS与以重叠特征表现的病况(例如SJIA突发或脓毒症样综合征)区分开来的挑战中仍是关键。

对于MAS的治疗目前仍没有已批准的药物。通常，高剂量糖皮质激素是MAS的一线治疗。在对糖皮质激素不起反应的患者中，提出了环孢菌素A (CsA)作为其它治疗(StéphanJL, Koné-Paut I, Galambrun C, Mouy R, Bader-Meunier B, Prieur AM: Reactivehaemophagocytic syndrome in children with inflammatory disorders. Aretrospective study of 24 patients. Rheumatology (Oxford, England) 2001, 40:1285-1292)。

作为研发用于治疗pHLH的HLH-94治疗方案的一部分，在高剂量糖皮质激素不成功的患者中也考虑给予依托泊苷。然而，药物的潜在毒性仍是主要顾虑。其它现有的一线HLH治疗包括地塞米松。然而，例如依托泊苷和/或地塞米松等治疗是骨髓抑制的和/或广泛性免疫抑制的。目前没有二线HLH治疗的治疗标准，例如阿仑珠单抗/ATG等治疗是极度免疫抑制的，而且认为用这些治疗的生存非常差。

在MAS的治疗中抑制IL-1、IL-6R或TNFα途径的生物制剂的效用仍不清楚。虽然据报道抑制这些途径的生物制剂在单独的情况下是有效的，但也有患者在这些治疗的背景下发生MAS (Stern A, Riley R, Buckley L: Worsening of macrophage activationsyndrome in a patient with adult onset Still's disease after initiation ofetanercept therapy. J Clin Rheumatol 2001, 7:252-256；Ramanan AV, Schneider R:Macrophage activation syndrome following initiation of etanercept in a childwith systemic onset juvenile rheumatoid arthritis. J. Rheumatol. 2003, 30:401-403；De Benedetti F, Brunner HI, Ruperto N, Kenwright A et al: Randomizedtrial of tocilizumab in systemic juvenile idiopathic arthritis. N. Engl. J.Med. 2012, 367:2385-2395；Ruperto N, Brunner HI, Quartier P, Constantin T etal: Two randomized trials of canakinumab in systemic juvenile idiopathicarthritis. N. Engl. J. Med. 2012, 367:2396-2406)以及患者对这些治疗不起反应的报告，表明了IL-1、IL-6R或TNFα的抑制不提供针对MAS发生的保护，也不提供充分发展的综合征的有效治疗。

一项大型追溯性多中心研究在共362名患者中对MAS/sJIA的临床、实验室和组织病理学特征以及现行治疗和结果进行了研究(Minoia F, Davì S, Horne A, Demirkaya Eet al: Clinical features, treatment, and outcome of macrophage activationsyndrome complicating systemic juvenile idiopathic arthritis: amultinational, multicenter study of 362 patients. Arthritis & rheumatology(Hoboken, N.J.) 2014, 66:3160-3169)。在大约一半的患者中，MAS发生在活动性sJIA背景下或在疾病发作时在其30%的sJIA突发期间。在1/3的患者中鉴定出感染性引发物。其24名患者中，报告了感染的类型，EBV是最常见的致病因子(25%)。在11名患者(3.8%)中，MAS被认为与治疗副作用有关：这些中的8人涉及靶向IL-6 (N=4)、IL-1 (N=3)或TNFα (N=1)途径的生物制剂。几乎所有患者都给予了糖皮质激素。分别将环孢菌素、生物药物和依托泊苷给予61%、15%和12%的患者。

MAS的有效治疗方案的鉴定因此代表了未满足的高的医学需求领域。超过50%的sJIA和MAS患者不对仅全身性糖皮质激素起反应，或可能需要高剂量的长期治疗并伴有重大发病率。当患者不对糖皮质激素起反应时，无法获得有关其它治疗(例如CsA或依托泊苷)的疗效的基于充分证据的数据。MAS的进程可立即变得不可逆，导致致命结果。现有数据表明，sJIA相关MAS的死亡率为8%，其中约1/3的患者需要进入ICU。有关IFNγ在该疾病发病机制中的关键作用的最新研究结果表明IFNγ阻断可能代表新的治疗靶标。

本公开内容的组合物(包括NI-0501组合物)和方法对于原发性和继发性HLH的现行疗法是有利的。

MAS和HLH的特征在于持续的免疫细胞活化和IFNγ、TNFα、IL-1和IL-6的过量产生的促炎细胞因子的相关细胞因子风暴(Henter JI, Elinder G, Söder O, Hansson M etal: Hypercytokinemia in familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Blood1991, 78:2918-2922；Imashuku S, Hibi S, Fujiwara F, Todo S: Hyper-interleukin(IL)-6-naemia in haemophagocytic lymphohistiocytosis. Br. J. Haematol. 1996,93:803-807；Xu X, Tang Y, Song H, Yang S et al: Diagnostic accuracy of aspecific cytokine pattern in hemophagocytic lymphohistiocytosis in children.J. Pediatr. 2012, 160:984-90.e1；Put K, Avau A, Brisse E, Mitera T et al:Cytokines in systemic juvenile idiopathic arthritis and haemophagocyticlymphohistiocytosis: tipping the balance between interleukin-18 andinterferon-γ. Rheumatology (Oxford) 2015)。在过去数年中，已积累了证据支持IFNγ在HLH (Jordan MB, Hildeman D, Kappler J, Marrack P: An animal model ofhemophagocytic lymphohistiocytosis (HLH): CD8+ T cells and interferon gammaare essential for the disorder. Blood 2004, 104:735-743；Pachlopnik Schmid J,Ho C, Chrétien F, Lefebvre JM et al: Neutralization of IFNgamma defeatshaemophagocytosis in LCMV-infected perforin-and Rab27a-deficient mice. EMBOMol Med 2009, 1:112-124；Zoller EE, Lykens JE, Terrell CE, Aliberti J et al:Hemophagocytosis causes a consumptive anemia of inflammation. J. Exp. Med.2011, 208:1203-1214)和MAS (Behrens EM, Canna SW, Slade K, Rao S et al:Repeated TLR9 stimulation results in macrophage activation syndrome-likedisease in mice. J. Clin. Invest. 2011, 121:2264-2277)两者发生中的关键作用。

对于原发性HLH，穿孔蛋白敲除小鼠被视为关联模型，因为这些小鼠一旦感染LCMV，便发生人类疾病的全部诊断特征和许多临床和实验室特有的特征。它们发生的HLH样疾病取决于在响应抗原刺激时产生的CD8+ T细胞和IFNγ (Imashuku S, Hibi S,Fujiwara F, Todo S: Hyper-interleukin (IL)-6-naemia in haemophagocyticlymphohistiocytosis. Br. J. Haematol. 1996, 93:803-807)。已证实当IFNγ的高循环水平被给予抗IFNγ抗体中和时，不仅仅临床和实验室异常情况恢复，而且存活率显著提高。相反，消除许多其它的细胞因子对存活没有影响(Imashuku S, Hibi S, Fujiwara F,Todo S: Hyper-interleukin (IL)-6-naemia in haemophagocyticlymphohistiocytosis. Br. J. Haematol. 1996, 93:803-807；Xu X, Tang Y, Song H,Yang S et al: Diagnostic accuracy of a specific cytokine pattern inhemophagocytic lymphohistiocytosis in children. J. Pediatr. 2012, 160:984-90.e1)。进一步加强IFNγ在HLH中的重要性是存在于这些患者中的高浓度的循环IFNγ水平(Henter JI, Elinder G, Söder O, Hansson M et al: Hypercytokinemia infamilial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Blood 1991, 78:2918-2922；Xu X,Tang Y, Song H, Yang S et al: Diagnostic accuracy of a specific cytokinepattern in hemophagocytic lymphohistiocytosis in children. J. Pediatr. 2012,160:984-90.e1)。在从HLH诊断到治疗和随访受监测的71名的一系列患者中，在所有患者中IFNγ水平超出正常的上限(17.3 pg/mL)，特别是53.5%的水平超出1000 pg/mL。还报告了IFNγ水平在早期快速上升，并且在HLH有效治疗时在48小时内可从> 5000 pg/mL下降至正常。

在NI-0501研发项目的情况下研究了继发性HLH的2种动物模型以阐明IFNγ可能的致病作用。首先，在模拟感染驱动的HLH的鼠模型中，CpG的反复给予通过TLR9的活化引发导致HLH33的临床(例如体重减轻、脾大)和实验室(例如血细胞减少症、高铁蛋白血症)特征的高细胞因子血症。当IFNγ通过给予抗IFNγ抗体被中和时，疾病的临床和实验室特征恢复。在相关靶组织(例如肝和脾)中显示IFNγ的中和是完全的。引人关注的是，给予抗IFNγ抗体揭示了IFNγ的量为血液中所测量的500-2,000倍，可能更好地反映出组织中的IFNγ产生。在TLR9刺激后，在血液和肝两者中两种IFNγ诱导型趋化因子(CXCL9和CXCL10)增量调节，并且观察到IFNγ的血清水平与CXCL9和CXCL10血清浓度之间显著相关。IFNγ的中和诱导血清CXCL9和CXCL10以及肝中其mRNA水平显著降低(Buatois V, Chatel L, Cons L,Lory S et al: IFNγ drives disease in the TLR9-mediated secondary HLH inmice: rationale for a new therapeutic target in secondary HLH, 准备中)。

第二，研究了表达高水平IL-6的IL-6转基因小鼠动物模型，因为它模拟患有sJIA(与HLH的继发性形式最常相关的风湿性疾病)的患者的病况。当用Toll样受体(TLR)配体引发时，观察到致死率提高、炎性细胞因子产生增加和炎性信号传导途径过度活化。然而，这些小鼠显示血小板和嗜中性粒细胞计数下降；sCD25、铁蛋白和LDH水平升高，类似于通常存在于MAS患者中的许多特征(Strippoli R, Carvello F, Scianaro R, De Pasquale L etal: Amplification of the response to Toll-like receptor ligands by prolongedexposure to interleukin-6 in mice: implication for the pathogenesis ofmacrophage activation syndrome. Arthritis Rheum. 2012, 64:1680-1688)。在这些小鼠中，当IFNγ用给予抗IFNγ抗体中和时，存活显著改善，且实验室参数恢复(Prencipe G等，底稿准备中)。

最近在患有感染继发或未知起因的HLH的继发性形式(通过正常细胞毒活性、缺乏引起pHLH的已知基因的突变和缺乏家族史排除pHLH)或患有发生在sJIA背景下的MAS的患者中进行的观察研究中收集到类似证据。

在14名继发性HLH患者(其中7人的基础性感染是可确认的)中，在活跃的充分发展的疾病期间和在疾病缓解期间对血清样品进行了分析。与疾病缓解相比，活跃期中IFNγ、CXCL9和CXCL10的水平显著较高(IFNγ：34.7相对于<3.5 pg/ml；CXCL9：33598相对于745pg/ml；CXCL10：4420相对于132 pg/ml；中值)。IFNγ的水平与CXCL9的水平显著相关(p=0.0018)，并与CXCL10的水平较低程度地相关(p=0.014)。IFNγ和趋化因子(特别是CXCL9)的水平与疾病严重程度的参数(例如嗜中性粒细胞和血小板计数、铁蛋白和ALT)显著相关，这进一步支持IFNγ在继发性HLH中的致病作用和趋化因子作为疾病的相关生物标志物的可能用途(Buatois V, Chatel L, Cons L, Lory S et al: IFNγ drives disease inthe TLR9-mediated secondary HLH in mice: rationale for a new therapeutictarget in secondary HLH)。

显示了在患有发生在sJIA患者中MAS的患者中的类似研究结果。在54名sJIA患者中测量了IFNγ、IFNγ诱导型趋化因子(CXCL9、CXCL10、CXCL11)和IL-6的血清浓度，其中20人患有MAS。在充分发展的MAS的患者和在采样时有活动性sJIA但无MAS的患者中IL-6的水平相当。相反，循环IFNγ和趋化因子水平在MAS中显著较高，特别是CXCL9，其中值水平是与有活动性sJIA而无MAS的患者相比的约15倍(13392相对于837 pg/mL；p=0.005)。值得注意的是，只在MAS患者中在CXCL9水平和典型异常的参数之间表明显著相关性，例如铁蛋白(p=0.041)、嗜中性粒细胞(p=0.010)和血小板(p=0.022)计数、ALT (p=0.044)和LDH (p=0.013)。IFNγ的水平还与疾病严重程度的实验室参数相关，例外的是LDH，对于其未达到统计显著性(Bracaglia等，底稿准备中)。

总之，这些数据为IFNγ的中和作为继发性HLH和MAS的靶向疗法以及为其在临床背景下的研究提供了坚实的基本原理。

本公开内容的组合物(包括NI-0501组合物)和方法相对于sJIA的现行疗法是有利的。例如，本公开内容的组合物(包括NI-0501组合物)和方法可用于治疗sJIA患者的MAS/sHLH，其主要目的是实现MAS缓解。

用于鉴定作为获益于用NI-0501治疗的该患者群和用于评价NI-0501在MAS/sHLH中的功效的基本原理以多种因素为基础。首先，MAS/sJIA的相关动物模型中获得的临床前数据表明，IFNγ中和明显提高存活并恢复实验室参数的变化。其次，MAS/sHLH患者中的观察数据表明高水平IFNγ的存在，更重要的是，IFNγ诱导的趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11的极高水平的存在。第三，在MAS/sHLH患者中，IFNγ和CXCL9的浓度与例如铁蛋白、血小板计数和转氨酶等疾病参数显著相关。接下来，在其中所给予的所有输注均是耐受性良好的既往研究的pHLH患者中观察到的有利的耐受性特征和缺乏相关安全顾虑，证实了健康志愿者中所做的观察研究，已知由IFNγ中和促成的病原体引起的感染没有被报道，并且发生在一些pHLH患者中的感染无一被视为与NI-0501治疗有关，而是与其免疫状态、疾病持续时间和既往或同时治疗有关。第五，既往临床研究的初步数据显示对疾病参数的有利影响，在治疗的最初几天有可观的作用起效：HLH的典型临床病征和症状在每一次给予NI-0501后开始快速改善(在数小时内发热，数天内脾/肝大)；在截止值处的18名可评价的患者中，用NI-0501治疗使得10患者名转向HSCT。接下来，PK建模和模拟方法的证据显示NI-0501的可预测的药代动力学概况，且实现IFNγ的中和并保持。最后，在NI-0501无法足够控制疾病时，常规疗法(例如CsA)可不需要间歇期而立即开始。

综上所述，根据临床前和临床证据，存在在风湿性疾病继发的MAS/sHLH中中和IFNγ的坚实的基本原理，且pHLH患者的初步数据表明NI-0501的有利的利益风险特征，其显著改善至HLH特征正常化。

因此，在该严重的危及生命的风湿性疾病并发症的管理中，NI-0501代表了革新的和有效的治疗方法，可能限制来自长期高剂量糖皮质激素治疗的副作用。

药物组合物

本发明的抗体或可溶性嵌合多肽(本文亦称为“活性化合物”)及其衍生物、片段、类似物和同源物可掺入适于给药的药物组合物中。所述组合物通常包含抗体或可溶性嵌合多肽和药学上可接受的载体。本文所用术语“药学上可接受的载体”旨在包括与药物给予相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣材料、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。合适的载体描述于该领域中的标准参考文本：最新版本的Remington's PharmaceuticalSciences，在此通过引用予以结合。这些载体或稀释剂的优选实例包括但不限于水、盐水、林格氏溶液、葡萄糖溶液和5%人血清白蛋白。也可使用脂质体和非水性载体，例如固定油。用于药学活性物质的这些介质和试剂的使用是本领域众所周知的。除非在任何常规介质或试剂与活性化合物不相容的情况下，否则考虑其在组合物中的使用。还可将补充的活性化合物掺入组合物中。

本发明的药物组合物被配制成与其预期给药途径相容。给药途径的实例包括肠胃外，例如静脉内、皮内、皮下、口服(例如吸入)、经皮(即局部)、经粘膜和直肠给药。用于肠胃外、皮内或皮下应用的溶液剂或混悬剂可包括以下组分：无菌稀释剂，例如注射用水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗细菌剂，例如苄醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲剂，例如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调整张度的试剂，例如氯化钠或葡萄糖。pH可以用酸或碱(例如盐酸或氢氧化钠)调节。肠胃外制剂可以封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。

适于注射使用的药物组合物包括无菌水性溶液剂(其中是水可溶性的)或分散体和用于无菌注射溶液剂或分散体的临用时配制的无菌粉末。对于静脉内给药，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, N.J.)或磷酸缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，组合物必须是无菌的，并且应是存在达到易注射性程度的流体。在制造和储存条件下它必须是稳定的，并且必须在防止微生物(例如细菌和真菌)的污染作用下保存。载体可以是包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适混合物的溶剂或分散介质。可以例如通过使用包衣材料如卵磷脂，在分散体的情况下通过保持所需颗粒大小以及通过使用表面活性剂，来保持适当的流动性。防止微生物的作用可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂来实现，例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等。在许多情况下，在组合物中将优选包括等渗剂，例如糖类、例如甘露醇、山梨醇等多元醇、氯化钠。可注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包含延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶来实现。

可通过将活性化合物以所需量与上面列举的成分之一或组合(需要时)一起掺入合适的溶剂中，接着过滤除菌，来制备无菌注射液剂。通常，通过将活性化合物掺入含有基础分散介质和来自上述列举的那些的所需其它成分的无菌溶媒中，来制备分散体。在用于制备无菌注射液剂的无菌粉末的情况下，制备方法是真空干燥和冷冻干燥，从其先前无菌过滤的溶液中获得活性成分加上任何其它所需成分的粉末。

口服组合物一般包括惰性稀释剂或可食用载体。它们可以封装在明胶胶囊中或压成片剂。对于口服治疗性给药目的，活性化合物可以与赋形剂掺合并以片剂、锭剂或胶囊剂的形式使用。口服组合物也可以使用流体载体制备用作漱口水，其中在该流体载体中的化合物经口应用并涮洗及吐出或咽下。可包含药学上相容的粘合剂和/或辅助材料作为组合物的一部分。所述片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等可含有任何以下成分或类似性质的化合物：粘合剂，例如微晶纤维素、西黄蓍胶或明胶；赋形剂，例如淀粉或乳糖；崩解剂，例如藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，例如胶体二氧化硅；甜味剂，例如蔗糖或糖精；或调味剂，例如薄荷、水杨酸甲酯或橙味调味剂。

对于通过吸入给药，化合物从加压容器或分配器以气溶胶喷雾的形式递送，所述加压容器或分配器包含合适的抛射剂(例如二氧化碳等气体)或喷雾器。

全身给药也可通过经粘膜或经皮方式。对于经粘膜或经皮给药，在制剂中使用适于待渗透的屏障的渗透剂。这类渗透剂通常是本领域已知的，包括例如用于经粘膜给药，去垢剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物。经粘膜给药可通过使用鼻喷雾剂或栓剂来实现。对于经皮给药，将活性化合物配制成本领域通常已知的软膏剂、药膏剂、凝胶剂或乳膏剂。

所述化合物也可以栓剂(例如与常规栓剂基质一起，例如可可脂和其它甘油酯)或滞留型灌肠剂的形式制备，用于直肠递送。

在一个实施方案中，与载体一起制备活性化合物，所述载体将保护化合物免于从体内快速清除，例如控释制剂，包括植入物和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。制备这类制剂的方法对于那些本领域技术人员将是显而易见的。该材料也可自Alza Corporationand Nova Pharmaceuticals, Inc.商购获得。脂质体悬浮剂(包括用针对病毒抗原的单克隆抗体靶向受感染细胞的脂质体)也可以用作药学上可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员已知方法，例如如描述于美国专利号4,522,811的方法制备。

以剂量单位形式配制口服或胃肠外组合物以易于给药和使剂量均匀性是特别有利的。本文所用的剂量单位形式是指适合作为单一剂量用于待治疗受试者的物理上离散的单位；每个单位含有预定量的经计算与所需的药物载体联合以产生所需治疗效果的活性化合物。本发明的剂量单位形式的规格是由活性化合物的独特性质和要实现的特定治疗效果以及配制这种活性化合物用于个体治疗的领域中固有的限制来决定，并直接取决于活性化合物的独特性质和要实现的特定治疗效果以及配制这种活性化合物用于个体治疗的所述领域中固有的限制。

药物组合物可以连同给药说明书包括在容器、包装或分配器中。

在下面的实施例中将进一步描述本发明，其不限制权利要求中描述的本发明范围。

实施例

实施例1. 巨噬细胞活化综合征(mas)中作为IFNγ产生的生物标志物的CXCL9水平

本文提供的研究被设计成评价活动性MAS患者中IFNγ和3种IFNγ相关趋化因子的血清水平与自身和与疾病活动性的实验室参数之间的相关性从而找寻IFNγ体内产生的潜在生物标志物。

在sJIA患者(n=54) (其中20人在采样时有MAS)中，采用Luminex多重测定法测量了IFNγ、CXCL9、CXCL10、CXCL11和IL-6的循环水平。评价了这些循环水平与疾病活动性参数的关系，以及IFNγ的水平与CXCL9、CXCL10和CXCL11的水平的相关性。

与在采样时没有MAS的活动性sJIA相比，IFNγ和3种IFNγ相关趋化因子(CXCL9、CXCL10和CXCL11)的水平显著升高(所有p值<0.005)。发现在活动性MAS中，疾病严重程度的实验室参数(铁蛋白、嗜中性粒细胞、血小板、丙氨酸氨基转移酶和乳酸脱氢酶)与IFNγ和CXCL9显著相关，与CXCL10和CXCL11较低程度地相关；与IL-6水平无相关性。在患有活动性sJIA而无MAS的患者中，在实验室参数和细胞因子水平之间没有显著的相关性，见下表7。在活动性MAS中，IFNγ水平与CXCL9水平显著相关(r=0.69；r²=0.47；p=0.001)，与CXCL10水平较低程度地相关(r=0.53；r²=0.28；p=0.015)，与CXCL11水平不相关(r=-0.04；p=0.886)。

表7. MAS患者和活动性sJIA患者中疾病活动性的实验室参数与IFNγ、CXCL9、CXCL10、CXCL11和IL-6的相关性。

N=嗜中性粒细胞计数；PLT=血小板计数；ALT=丙氨酸氨基转移酶，¹=中值(IQR)；r*=Spearman r

存在于活动性MAS患者中IFNγ和CXCL9的高水平与疾病严重程度的实验室参数显著相关。在活动性MAS患者中，IFNγ和CXCL9密切相关。因为已表明CXCL9只受IFNγ诱导，而不受其它干扰素诱导(参见例如Groom J. R. and Luster A. D. Immunol Cell Biol 2011,Feb；89(2):207-15)，这些研究结果证实CXCL9是MAS中IFNγ产生的生物标志物。

实施例2. 原发性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)患者中的CXCL9和IFNγ水平相关性

本文提供的研究来自给予NI-0501抗体的原发性HLH患者中进行中的2期试验性研究和接受特予使用(compassionate use)的NI-0501抗体的患者。

如图1所示，在获自6名原发性HLH患者和获自3名特予使用患者样品中，分别通过Luminex和Meso Scale Discovery (MSD)技术测量了CXCL9和IFNγ的血清水平。在CXCL9和总IFNγ浓度之间进行了相关分析。进行了统计学分析，并应用Spearman检验得到p值。

如图2所示，在获自6名原发性HLH患者和3名特予使用患者的样品中，分别通过Luminex和MSD技术，测量了给药前CXCL9和IFNγ的血清水平。相关分析在CXCL9和总IFNγ浓度之间进行。进行了统计学分析，并应用Spearman检验得到p值。

实施例3.继发性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)患者中的CXCL9和IFNγ水平相关性

本文提供的研究来自给予NI-0501抗体的继发性HLH患者的观察研究和来自接受特予使用的NI-0501抗体的患者。

具体地讲，这些是患有发生巨噬细胞活化综合征(MAS，一种继发性HLH的形式)的全身型幼年特发性关节炎(sJIA)的患者。对于这些患者，在CXCL9或IFNγ和疾病参数(例如铁蛋白、血小板计数(PLT)、嗜中性粒细胞计数(Neu)和丙氨酸氨基转移酶(ALT))之间也有相关性。

如图3A和3B所示，采用Luminex技术通过多路测定法，测量了获自19名sJIA继发MAS的患者和24名在采样时有活动性sJIA的患者的样品中CXCL9和IFNγ的血清水平。进行了CXCL9和IFNγ浓度之间的相关分析。进行了统计学分析，并应用Spearman检验得到p值。

如图4A-1、4A-2、4B-1、4B-2、4C-1、4C-2、4D-1和4D-2所示，采用Luminex技术通过多路测定法，测量了sJIA继发MAS的患者和在采样时有活动性sJIA的患者中CXCL9和IFNγ的血清水平。进行了IFNγ或CXCL9水平和铁蛋白、血小板计数、嗜中性粒细胞计数或ALT(丙氨酸氨基转移酶)之间的相关性分析。进行了统计学分析，并应用Spearman检验得到p值。

实施例4. 重度噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)患者中的CXCL9和IFNγ水平相关性

本文提供的研究是来自接受特予使用的NI-0501抗体的患者。该患者显示NLRC4相关疾病和重度噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)的症状。最近报道了NLRC4基因的突变引起复发性巨噬细胞活化综合征和IL-18产生增加，已知后者诱导IFNγ。

该研究中的患者具有以下特征：在20日龄时发作，伴有发热、皮疹、明显的肝脾大、全血细胞减少症、血纤维蛋白原过少、高甘油三酯血症、明显的铁蛋白和sCD25增加。接着多器官衰竭，需要进入ICU。HLH诊断基于8项HLH-2004标准的6项。引起原发性HLH的基因(PRF1、UNC13D、STXBP2、STX11、RAB27A、XIAP)和功能试验(穿孔蛋白表达、脱粒和细胞毒性)为阴性。高剂量i.v.糖皮质激素和i.v.环孢菌素-A伴随总体病况和实验室异常情况逐步改善。通过感染(白色念珠菌(Candida Albicans)和肺炎克雷白氏菌(Klebsiella Pneumoniae)脓毒症)引发HLH再活化、总体病况的快速恶化和新进入ICU。因为已免疫受损的受试者中存在活动性感染，所以不考虑用依托泊苷和/或ATG治疗。

IFNγ的可测量血清水平和IFNγ诱导的趋化因子CXCL9和CXCL10的高血清水平以及IL-18的血清水平显著升高得到证实(表8)。

表8. 在开始NI-0501治疗时和在用NI-0501治疗期间IFNγ、IFNγ相关趋化因子和IL-18的水平

NI-0501的特予使用治疗在地塞米松(13.6 mg/m²)和i.v.环孢菌素-A背景下开始。根据药代动力学，每3天，随后每7天给予NI-0501。未观察到输注反应。NI0501是耐受良好的。HLH临床特征和实验室异常情况逐步改善。活动性进行性感染被快速清除。在治疗5个月后，患者保持极好状态。患者继续接受口服环孢菌素-A (6 mg/kg)和泼尼松(0.3 mg/kg等同于0.9 mg/m2的地塞米松)。所有HLH参数正常化。

受试者仍出现不明原因的炎症发作。NLRC4的分析显示新生错义突变(T337N)。记录了血清IL-18升高，证实了NLRC4突变的关联性。与NI-0501复合的高水平IFNγ表明IFNγ的高产量。如通过IFNγ诱导型趋化因子的未检出水平所示，IFNγ被完全中和(图5和表8)。IL-18的循环水平持续升高。

因此，该研究表明在患有重度顽固性HLH (因NLRC4突变所致)的患者中，用NI-0501阻断IFNγ是耐受良好的，没有安全顾虑，使得所有HLH特征得到控制，使得快速糖皮质激素减少，并且与进行性活动性感染的消退有关。

实施例5.噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)用NI-0501治疗的靶向方法

本文提供的研究是来自患有原发性HLH的儿童中的试验2期研究。原发性HLH (pHLH)是一种罕见的免疫调节病症，如不治疗，必是致死的。它由病理性免疫活化驱动，导致发热、脾大、血细胞减少症和凝血病的发生，这可引起多器官衰竭和死亡。根据来自用抗IFNγ抗体治疗的原发性和继发性HLH (sHLH)鼠模型的数据和HLH患者中的观察研究，IFNγ的高产量被视为是驱动疾病发生的关键因素。免疫化学疗法，主要是基于依托泊苷的方案，是目前唯一控制HLH的药理方法，并且给患者带来治愈性同种异体造血干细胞移植(同种异体HSCT)。尽管进一步强化治疗方案的近期尝试，但部分由于药物相关毒性死亡率和发病率仍高。

如上所述，NI-0501是结合并中和人IFNγ的高亲和力的完全人抗IFNγ mAb，为控制HLH提供新的靶向方法。

方法：在美国和欧洲进行了开放标记2期研究以评价NI-0501在患有已证实的pHLH或疑似pHLH的儿童中的安全性和功效。以1 mg/kg的初始剂量每3天给予NI-0501，对于初始背景地塞米松5-10 mg/m²，各个患者中根据PK数据和/或临床反应指导的剂量可能增加。治疗持续时间的范围为4-8周。评价了转向同种异体HSCT的能力、相关HLH疾病参数和8周生存率。

研究人群：招募了共13名患者：8F/5M，中值年龄1.0岁(范围2.5个月-13岁)。12名患者在接受常规疗法并再活化、得到不满意的反应或对疗法不耐受后接受NI-0501作为二线治疗。1名患者在一线用NI-0501治疗。9名患者携带已知的HLH遗传缺陷(3人FHL2、2人FHL3、2人GS-2、1人XLP1、1人XLP2)。大多数患者处在HLH范围的严重端，总体病况受损，带有来自之前HLH治疗的明显毒性。铁蛋白在12/13的患者中升高，sCD25在8人中升高，血细胞减少症存在于10名患者中，脾大8人，血纤维蛋白原过少和高甘油三酯血症9人。肝损害和CNS受累分别存在于7和3名患者中。

结果：总的来说，NI-0501治疗显著改善HLH疾病活动性的参数(图6)，13名患者中9人达到令人满意的反应。6名患者进行到HSCT。2名有良好HLH控制的患者在鉴定出合适的供体时计划进行到HSCT。在1名患者(其用一线NI-0501实现疾病控制)中，鉴于致病性HLH基因突变不存在，则仍无法计划HSCT。13名患者中11人在8周时是活着的。在2名可评价的患者中CNS病征和症状消退。在前4周的NI-0501治疗期间在50%患者中降低地塞米松剂量50%以上是可能的。

生物标志物评价特别是CXCL9，一种已知被IFNγ强烈诱导的趋化因子，不仅可供证实完全IFNγ中和，而且还显示出作为与IFNγ产生有关的用于HLH诊断的新的参数(图7A和7B)。

NI-0501是耐受良好的，且未鉴定出安全顾虑。已知由IFNγ中和促成的感染无一被报道，且无感染发生在未接受之前的化学疗法的患者中。7名患者报称至少一个SAE，所有通过DMC评价为与给予NI-0501无关。未观察到可归于NI-0501的“脱靶”作用的非预期事件(例如骨髓中毒性、血液动力学作用)。

结论：IFNγ通过NI-0501的靶向中和提供一种HLH管理的革新和可能较少毒性的方法。该研究的结果显示NI-0501在对常规疗法没有令人满意的反应或对其显示不耐受的原发性HLH患者中是一种安全有效的治疗选择。此外，用NI-0501的疗法与基于依托泊苷的方案相关的典型的短期或长期毒性的任一种无关。pHLH患者中NI-0501作为一线治疗的评价不断进行，预期可获得类似的重大临床益处。

实施例6. 表征患有巨噬细胞活化综合征并发全身性JIA的患者的干扰素-γ和干扰素诱导的趋化因子的循环水平升高

干扰素γ (IFNγ)是原发性噬血细胞性组织细胞增多病(HLH)鼠模型中的关键介导物。鉴于原发性和继发性HLH (sec-HLH) (包括巨噬细胞活化综合征(MAS))之间的相似性，对患有全身型幼年特发性关节炎(sJIA)和MAS的患者中的IFNγ水平及其生物学活性进行了分析。

在本文提供的研究中，采用Luminex多重测定法评价sec-HLH患者(n=11)和他们中20人在采样时有MAS的sJIA患者(n=54)中IL-1β、IL-6、IFNγ和IFN诱导的和/或IFN相关趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11的血清水平。在IL-6转基因小鼠模型(其中MAS特征通过用LPS刺激TLR4而诱导)中评价了IFNγ诱导的趋化因子的表达(肝和脾中的CXCL9和CXCL10mRNA水平)以及其与铁蛋白水平的相关性。

如下文更详细表示的，IFNγ和IFN诱导的趋化因子的循环水平在MAS (本文亦称为活动性MAS和sec-HLH)期间显著升高。与患有活动性sJIA而无MAS的患者相比，IFNγ和IFN诱导的趋化因子的水平在MAS患者中明显较高。在患有活动性sJIA而无MAS患者组中，IFNγ和IFN诱导的趋化因子与患有临床非活动性sJIA患者的相当。在MAS期间，表征该综合征的实验室异常情况(包括铁蛋白和丙氨酸转移酶水平和嗜中性粒细胞和血小板计数)与IFNγ和CXCL9的水平显著相关。在MAS的鼠模型中，在肝和脾中铁蛋白的血清水平与mRNACXCL9的水平显著相关。

因此，下文提供的研究表明，IFNγ和IFN诱导的趋化因子的高水平及其(特别是CXCL9)与MAS实验室异常情况的严重程度的相关性表明IFNγ在MAS中起关键作用。干扰素-γ和干扰素诱导的趋化因子的循环水平升高表征患有巨噬细胞活化综合征并发性全身性JIA的患者。

材料与方法：患者和样品。在以下3个儿科风湿病学中心从有或没有MAS的sJIA患者中收集外周血液样品：罗马的Ospedale Pediatrico Bambino Gesù、热那亚的IstitutoGiannina Gaslini和Cincinnati Children’s Hospital Medical Centre。对符合全身性关节炎的ILAR分类标准的54名sJIA患者(在发作时年龄7.9岁，四分位数间距4.6-13.6岁；女性48%)进行了研究(Petty, R.E. et al., International League of Associations for Rheumatology classification of juvenile idiopathic arthritis: second revision, Edmonton, 2001. J Rheumatol, 2004. 31(2): p. 390-2)。对于SJIA患者中的20人，在按3个中心每一个的治疗医师所诊断的活动性充分发展的MAS发作期间，收集样品。后验分析显示，这20名发作中的17人(85%)符合新提出的MAS分类标准(Minoia F, DavìS, Bovis F et al. Development of new classification criteria for macrophageactivation syndrome complicating systemic juvenile idiopathic arthritis.Pediatric Rheumatology 2014, 12(Suppl 1):O1.)。可得到28名患有活动性SJIA而无MAS证据的患者的样品。在按照Wallace标准界定的临床非活动性疾病期间，35份样品可获自35名sJIA患者(在其病史中或有或无MAS) (Wallace, C.A. et al., Preliminary criteria for clinical remission for select categories of juvenile idiopathic arthritis. J Rheumatol, 2004. 31(11): p. 2290-4)。

因为已显示在患有sec-HLH (排除了风湿性疾病)的患者中IFNγ增加，所以还从在Ospedale Pediatrico Bambino Gesù观察到的11名sec-HLH患者(在发作时年龄8.6岁，四分位数间距4.1-12.9岁；女性36%)中收集样品，并用作阳性对照。所有sec-HLH患者符合2004-HLH诊断准则(Henter, J.I. et al., HLH-2004: Diagnostic and therapeutic guidelines for hemophagocytic lymphohistiocytosis. Pediatr Blood Cancer,2007. 48(2): p. 124-31)：6名患者符合5项标准，5名患者符合4项标准。应注意，sCD25的水平(U/ml)未获得，因为没有在招募这些患者的机构中按常规进行试验。根据缺乏家族史、缺乏其中已知引起HLH的致病突变和存在正常功能研究(包括NK活性、穿孔蛋白表达和CD107脱粒)，排除原发性HLH的诊断。所有11名sec-HLH患者贡献各在活动性疾病期间所获得的一份样品。

由各中心的研究人员在集中式万维网数据库中收集有关诊断和在采样时所有患者的临床和实验室特征。在活动性疾病期间采样的20名MAS患者中，6人在采样时未接受任何治疗，而其余的14名患者已接受了具体针对MAS的治疗之一，包括糖皮质激素脉冲法(glucocorticoids pulse)、环孢菌素A、阿那白滞素或环磷酰胺。11名处于活动性疾病中的sec-HLH患者6人在采样时尚未接受具体治疗，而其余5名患者已接受上述治疗中的至少一种。Ospedale Pediatrico Bambino Gesù道德规范委员会批准了该研究。收集了所有参与者的书面同意书。

细胞因子的定量测定。通过Luminex®多重微珠技术，分析了IL-6、IL-1β、IFNγ、CXCL9、CXCL10和CXCL11的水平。试剂购自Millipore，且所有试剂以Milliplex® MAP试剂盒提供。试剂按照生产商的方案制备。将25 μl/孔的标准物、空白和质量检查样品一式两份加入Milliplex MAP 96孔板中，接着加入25 μl血清基质。将25 μl测定缓冲液加入每个样品孔接着加入25 μl样品。一式两份或一式三份加入样品，这取决于可获得的样品体积。将板在Luminex 200®系统(Luminex Corp.)中测量。原始数据应用x PONENT软件3.1版(Luminex Corp.)获得，数据应用Milliplex Analyst软件3.5.5.0版(Millipore)分析。然后将Milliplex Analyst软件获得的原始数据在用于Luminex分析(NI-Sc-ESM-MAC-012-v01和Sc-ESM-MAC-013-v01)的专用宏中进一步分析。

动物实验。之前描述了IL-6转基因小鼠的产生和表型以及通过给予TLR配体诱导的MAS样综合征的特征(Strippoli, R. et al., Amplification of the response to Toll-like receptor ligands by prolonged exposure to interleukin-6 in mice: implication for the pathogenesis of macrophage activation syndrome. ArthritisRheum, 2012. 64(5): p. 1680-8)。将小鼠保持在专用的无病原体的条件下，并按照国家政策处理。研究方案经地方道德规范委员会批准。所有实验在10和14周龄的小鼠中进行。用5 µg/g体重的脂多糖的单剂量腹膜内给予小鼠(LPS，大肠杆菌(E. coli)血清型055:B5；Sigma-Aldrich)。30小时后处死小鼠。使用Trizol (Life technologies)从脾和肝组织中提取总RNA。使用Superscript Vilo试剂盒(Invitrogen)获得cDNA。使用TaqMan UniversalPCR Master Mix (Applied Biosystems)与小鼠Cxcl9和Cxcl10基因表达测定法(AppliedBiosystems)进行实时PCR测定。使用小鼠Hprt (Applied Biosystems)使基因表达数据归一化。数据以任意单位(AU)表示，应用2^-∆ct方法测定。使用商购获得的ELISA试剂盒(ALPCODiagnostics)，按照生产商的说明书，测定血清铁蛋白浓度。

统计分析。统计分析应用GraphPad Prism 5软件进行。连续变量(定量人口统计学、临床和实验室数据)表示为中值和四分位数间距(IQR)，并应用Mann-Whitney U检验比较。在假设前后差异的分布不遵循高斯分布的情况下，应用Wilcoxon符号的秩检验比较配对组。应用Spearman秩相关性评价与实验室参数的关系。p值<0.05被视为有统计显著性。

结果：MAS患者中IFNγ和IFNγ诱导的趋化因子的水平升高。当将在采样时患有活动性sJIA而无MAS的患者与在临床非活动性疾病期间采样的患者比较时，正如所预期的(deBenedetti, F. et al., Correlation of serum interleukin-6 levels with joint involvement and thrombocytosis in systemic juvenile rheumatoid arthritis.Arthritis Rheum, 1991. 34(9): p. 1158-63)，发现与患有临床非活动性疾病的患者的IL-6水平相比，在患有活动性sJIA的患者中IL-6水平显著较高(p<0.01)。正如在之前的若干活动性SJIA研究所报告的，血清IL-1β水平在大多数患者中独立于疾病活动性状态而低于检测限。值得注意的是，在患有临床活动性sJIA的患者和患有临床非活动性疾病的患者中IFN和三种IFNγ诱导的趋化因子γ的水平之间没有差异。

当将在采样时有MAS的患者与在采样时患有活动性sJIA而无MAS的患者比较时，IL-1β和IL-6的水平相当，表明已知在活动性sJIA中起关键作用的2种细胞因子的水平在充分发展的MAS中不增加。应注意，循环IL-1β水平在大多数患有有或没有MAS的sJIA患者中低于定量限(即3.5 pg/ml)。相比之下，与在采样时患有活动性sJIA而无MAS的患者相比，循环IFNγ水平在活动性MAS患者中显著较高。与在采样时患有活动性sJIA而无MAS的患者相比，3种IFNγ相关趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11的水平在活动性MAS患者中也显著较高。对于CXCL9，这种差异特别明显，其中值水平在MAS患者中是与患有活动性sJIA而无MAS的患者相比的约15倍。

在sec-HLH患者中，IFNγ的水平以及3种IFNγ相关趋化因子的水平明显增加。IFNγ和IFNγ相关趋化因子的水平大多无法与MAS患者的相区分，且差异在统计上没有显著性。顺便提一句，在活动性MAS患者和活动性sec-HLH患者中，IFNγ和3种IFNγ诱导的趋化因子的水平在未接受治疗的患者中和在已接受治疗的患者中相当。

IFNγ和CXCL9、CXCL10和CXCL11的水平在各患者中与MAS的存在有关。图8A-8D显示在各患者中IFNγ和CXCL9、CXCL10和CXCL11的水平，从所述患者中可获得在活动性MAS期间和在活动性sJIA而无MAS期间的配对样品。与代表性分析中所获得的结果一致，通过配对样品分析，IFNγ和3种IFNγ诱导的趋化因子的水平在MAS期间获得的样品中显著较高。另外，在几名患者中，可获得在MAS发作之前和之后两者的样品，并且证实IFNγ和IFNγ诱导的趋化因子水平在MAS临床症状消退时回复到正常。例如，该研究中一名患者经历3次MAS发作，其血清样品在这些发作期间以及在采样时在疾病期而无MAS期间获得。进一步证实了IFNγ和3种IFNγ诱导的趋化因子的产生增加与活动性MAS的关系，在该患者中，IFNγ和3种IFNγ相关趋化因子的水平升高只存在于MAS发作时(图9A-9B)。

IFNγ和IFNγ相关趋化因子的水平与MAS的实验室异常情况相关。检查了IFNγ和3种IFNγ诱导的趋化因子的水平与在采样时MAS的实验室参数的相关性。在患有活动性sJIA而无MAS的患者中，IFNγ和3种IFNγ诱导的趋化因子的水平与MAS的实验室参数无关，只有一个例外：CXCL9、CXCL10和CXCL11的水平与ALT水平弱相关，其r²的范围为0.17-0.25(表2)。不清楚这种关联的显著性；然而应注意，在患有活动性sJIA而无MAS的所有患者中，ALT水平在正常范围内。在采样时有MAS的患者中，发现MAS的实验室特征与IL-1和IL-6没有显著相关性。相比之下，在采样时有MAS的患者中，IFNγ和IFNγ诱导的趋化因子的水平与铁蛋白的水平、与嗜中性粒细胞和血小板计数以及与升高的LDH和ALT有关，所有这些通常在MAS患者中异常(表2)。与实验室异常情况的相关性对于IFNγ和CXCL9特别明显，只有IFNγ与LDH的相关性例外，其未达到统计显著性(表2和图10A-10J)。此外，如上所述，这些相关性不存在于在采样时患有活动性s-JIA而无MAS的患者中。该组的1名患者有明显高水平的IFNγ (336.2 pg/ml)、CXCL9 (549400 pg/ml)和CXCL10 (35066 pg/ml)。该患者患有特别严重的MAS，并伴发严重的中枢神经系统受累被收入重症监护病房。该观察结果为在IFNγ和CXCL9的水平和疾病严重程度之间有强相关的假设提供进一步支持。总之，这些结果显示IFNγ和IFNγ相关趋化因子产生增加是与MAS的实验室异常情况的严重程度强相关的活动性MAS的特征。

表2. 在患有活动性继发性HLH、在采样时患有活动性MAS、在采样时患有活动性sJIA而无MAS和患有临床非活动性sJIA的患者中IL-1β、IL-6、IFNγ和3种IFNγ相关趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11的血清水平。

值以中值(四分位数间距)显示

*活动性sJIA相对于临床非活动性sJIA：p < 0.01

表3. 患有MAS的患者和在采样时患有活动性sJIA而无MAS的患者中疾病活动性的实验室参数与IFNγ、CXCL9、CXCL10、CXCL11和IL-6的水平的相关性。

NEU=嗜中性粒细胞计数；PLT=血小板计数；ALT=丙氨酸氨基转移酶；LDH=乳酸脱氢酶；

1= 中值(IQR)；

r*= Spearman r。

患有MAS的患者和患有活动性sJIA的患者中疾病活动性的实验室参数与IFN-γ、CXCL9、CXCL10、CXCL11和IL-6的相关性

MAS患者中IFNγ与IFNγ诱导的趋化因子水平的相关性。为了进一步表征MAS患者中IFNγ和3种IFNγ诱导的趋化因子之间的关系，评价了IFNγ水平与每个各别趋化因子的水平的相关性。值得注意的是，CXCL9显示出主要地被IFNγ特异性诱导，而CXCL10和CXCL11也被I型干扰素诱导。与此一致，在活动性MAS患者中，循环IFNγ的水平与CXCL9显著相关(r=0.693；r²=0.48；p=0.001)，但与CXCL10水平具有较弱的相关性(r= 0.535；r²=0.29；p=0.015) (图11A-11F)。与CXCL11水平的相关性也较弱，且未达到统计显著性(r=0.447；r²=0.20；p=0.08) (未显示)。

IFNγ诱导的趋化因子与MAS小鼠模型中的疾病活动性相关。为了进一步研究IFNγ诱导的趋化因子产生与MAS的关联，在MAS鼠模型中研究了这些趋化因子在靶组织(肝和脾)中的表达。在该模型中，在IL-6转基因小鼠的高水平IL-6的背景下通过模拟用TLR4激动剂脂多糖(LPS)急性感染诱导MAS临床和实验室特征(Strippoli et al. Arthritis Rheum2012)。该方法重现sJIA患者中所发生的情况：在活动性疾病存在时感染可引发MAS/HLH，其特征的确在于高水平的IL-6。在用LPS诱导后，CXCL9和CXCL10的高水平mRNA存在于IL-6转基因小鼠的肝和脾中。值得注意的是，铁蛋白的血清水平与脾和肝中CXCL9表达及肝中CXCL10表达的水平显著相关，表明靶组织中IFNγ相关的上游事件(即肝和脾中的CXCL9和CXCL10产生)和典型的下游实验室异常情况(例如高铁蛋白水平)间的关系。总之，MAS患者和MAS鼠模型中的数据表明IFNγ产生增加与CXCL9表达增加、CXCL10 (较低程度相关)和MAS的实验室异常情况明确相关。

在p-HLH患者和动物模型两者中的研究证实了IFNγ在疾病发病机制中的重要作用。然而，仍不清楚IFNγ在sec-HLH中，包括在sJIA背景下的MAS中的作用。该研究令人信服的证实了IFNγ和IFNγ诱导的趋化因子的高水平存在于sJIA中MAS发生的患者中。另外，IFNγ、CXCL9和CXCL10的水平与MAS严重程度的实验室参数强相关。该研究发现，IFNγ和3种IFNγ相关趋化因子的血清水平在患有活动性sJIA的患者和患有临床非活动性疾病的患者之间相当。该结果没有表明IFNγ在sJIA中的致病作用，并且实际上与其他作者的多个观察结果一致。3项基因表达研究没有在采样时在患有活动性sJIA而无MAS的患者的外周血单核细胞(PBMC)中找出显著的IFNγ-诱导标志(Fall, N. et al., Gene expression profiling of peripheral blood from patients with untreated new-onset systemic juvenile idiopathic arthritis reveals molecular heterogeneity that may predict macrophage activation syndrome. Arthritis Rheum, 2007. 56(11): p.3793-804；Ogilvie, E.M. et al., Specific gene expression profiles in systemic juvenile idiopathic arthritis. Arthritis Rheum, 2007. 56(6): p. 1954-65；Pascual, V. et al., Role of interleukin-1 (IL-1) in the pathogenesis of systemic onset juvenile idiopathic arthritis and clinical response to IL-1 blockade. J Exp Med, 2005. 201(9): p. 1479-86)。在PBMC离体刺激后，在活动性sJIA患者中产生IFNγ的细胞数目与对照的相似(Lasiglie, D. et al., Role of IL-1 beta in the development of human T(H)17 cells: lesson from NLPR3 mutated patients.PLoS One, 2011. 6(5): p. e20014)。始终如一的是，患有活动性和非活动性SJIA两者的患者不显示IFNγ的血清或滑液水平升高(de Jager, W. et al., Blood and synovial fluid cytokine signatures in patients with juvenile idiopathic arthritis: a cross-sectional study. Ann Rheum Dis, 2007. 66(5): p. 589-98)。CXCL9和CXCL10在sJIA患者的滑膜组织中几乎无法检出，而这些趋化因子的高水平可存在于来自患有少关节或多关节JIA的患者的滑膜组织，这支持IFNγ在sJIA的关节炎症中没有作用(Sikora,K.A. et al., The limited role of interferon-gamma in systemic juvenile idiopathic arthritis cannot be explained by cellular hyporesponsiveness.Arthritis Rheum, 2012. 64(11): p. 3799-808)。小鼠中的最新数据显示用弗氏完全佐剂免疫刺激IFNγ敲除小鼠产生包括sJIA特征的全身性炎性综合征，进一步支持IFNγ在sJIA中的有限作用(Avau, A. et al., Systemic juvenile idiopathic arthritis-like syndrome in mice following stimulation of the immune system with Freund's complete adjuvant: regulation by interferon-gamma. Arthritis Rheumatol, 2014.66(5): p. 1340-51)。

形成鲜明对比的是，该研究显示与在采样时患有活动性sJIA而无MAS的患者的相比，在采样时患有活动性MAS的患者的IFNγ和IFNγ相关趋化因子的水平显著较高。用在活动性MAS和活动性sJIA而无MAS两者期间获得的系列样品，在各患者中也证实了这一点。顺便提一句，在MAS期间采样的患者中，该研究未发现IL-6或IL-1β的水平显著增加，也没发现与MAS的实验室参数有任何关联，表明了这些细胞因子，尽管关键性地参与sJIA的致病机制(De Benedetti, F. et al., Randomized trial of tocilizumab in systemic juvenile idiopathic arthritis. N Engl J Med, 2012. 367(25): p. 2385-95；Ruperto, N. et al., Two randomized trials of canakinumab in systemic juvenile idiopathic arthritis. N Engl J Med, 2012. 367(25): p. 2396-406)，但在维持MAS时可能不是关键的。IFNγ和IFNγ相关趋化因子水平升高的这个发现与之前的一些研究结果一致。Shimizu等人报道了与患有活动性sJIA而无MAS的患者相比，新蝶呤(在用IFNγ刺激时通过人巨噬细胞合成的鸟苷三磷酸的代谢物)的水平在MAS患者中在sJIA期间较高(Shimizu, M. et al., Distinct cytokine profiles of systemic-onset juvenile idiopathic arthritis-associated macrophage activation syndrome with particular emphasis on the role of interleukin-18 in its pathogenesis.Rheumatology (Oxford), 2010. 49(9): p. 1645-53)。最近，Put等人报道了在患有原发性和继发性HLH两种的5名患者中IFNγ和CXCL10的水平升高，他们中的3人在sJIA的进程中患有MAS (Put, K. et al., Cytokines in systemic juvenile idiopathic arthritis and haemophagocytic lymphohistiocytosis: tipping the balance between interleukin-18 and interferon-gamma. Rheumatology (Oxford), 2015)。与这些结果一致，在采样时患有活动性sJIA而无MAS的5名患者中IFNγ和CXCL10的水平明显较低(Put等，Rheumatology 2015)。

引人关注的是，该研究发现不仅IFNγ和IFNγ相关趋化因子的水平明显升高，而且其水平，特别CXCL9的水平，与MAS的实验室特征严密相关，表明了与疾病严重程度关联。进一步支持与疾病严重程度关联的是，该研究发现在患有重度疾病伴多器官衰竭和中枢神经系统受累伴全身发作、需要长期入住重症监护病房的1名患者中，IFNγ和CXCL9和CXCL10的水平明显较高。

发现在MAS患者中，在3种IFNγ诱导的趋化因子中，CXCL9与IFNγ水平具有最强相关性。该观察结果与以下已确立的观点一致：与还可被I型干扰素诱导的CXCL10和CXCL11的产生不同，CXCL9产生显示出唯一且特异性地被IFNγ诱导(Groom, J.R. and A.D.Luster, CXCR3 ligands: redundant, collaborative and antagonistic functions.Immunol Cell Biol, 2011. 89(2): p. 207-15)。这表明CXCL9水平可用作MAS活性的灵敏的特异性生物标志物。实际上，使用模拟在高IL-6水平背景下通过感染性刺激物引发MAS的MAS鼠模型(Strippoli et al., Arthritis Rheum 2012)中，该研究还发现肝和脾中CXCL9的表达水平与铁蛋白的循环水平显著相关。对于CXCL10表达水平，这种相关性仅存在于肝中，但对脾水平则无。这也得到了MAS患者中的研究结果的支持，其中CXCL9水平与所有MAS的实验室参数密切相关。总之，人和小鼠中的这些观察结果显示CXCL9与MAS特征和IFNγ产生强相关，进一步支持IFNγ的过量产生在MAS中起主要致病作用的假设。这些观察结果还与Put等人使用来自在活动性sJIA而无MAS期间以及在MAS期间获得的同一SJIA患者的系列淋巴结活检样品产生的免疫组织化学数据一致。他们报道了在MAS期间获得的组织中，但非在活动性sJIA而无MAS期间获得的组织中，通过免疫组织化学检出高水平的CXCL10和吲哚胺2,3-双加氧酶，两者均为IFNγ诱导蛋白(Put et al., Rheumatology 2015)。

在MAS和sec-HLH中的这些结果，连同参考文献中在p-HLH患者中可获得的观察结果，都支持这一假设：IFNγ和IFNγ相关趋化因子特别是CXCL9的增加是HLH独立于基础病因的特有特征。在这个方面，令人关注地注意到，在通过NLRC4功能获得性突变诱导的复发性MAS的患者中检出高水平的CXCL9 (Canna, S.W. et al., An activating NLRC4 inflammasome mutation causes autoinflammation with recurrent macrophage activation syndrome. Nat Genet, 2014. 46(10): p. 1140-6)，表明了甚至在只通过炎性体(inflammasome)调节异常诱导的HLH的背景下，IFNγ过度产生都可能出现。

p-HLH动物模型中，在穿孔蛋白和Rab27a敲除小鼠两者中的数据明确表明IFNγ的致病作用。同样，TLR9诱导的HLH模型、感染继发的HLH模型中的最新数据也显示对IFNγ产生增加的主要作用(Behrens, E.M. et al., Repeated TLR9 stimulation results in macrophage activation syndrome-like disease in mice. J Clin Invest, 2011. 121(6): p. 2264-77和(Bautois et al. 进行中)。在上述MAS鼠模型中的其它研究最近证实，用抗IFNγ抗体治疗使得存活提高且MAS的临床和实验室特征回复(Prencipe et al., 进行中)。总之，该研究结果和动物中的这些观察结果提供了IFNγ中和作为MAS的治疗方法的原理。

实施例7. 患有原发性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)的儿科患者中静脉内多次给予抗干扰素γGamma抗IFNγ单克隆抗体的安全性、耐受性、药代动力学和功效评价

本文提供的研究被设计成测定多次静脉内(IV)给予本文称为NI-0501的抗IFNγ抗体的安全性和耐受性概况；测定NI-0501在HLH患者中的功效和利益/风险概况；描述NI-0501在HLH患者中的药代动力学(PK)概况；确定HLH的合适的NI-0501治疗剂量方案；并评价NI-0501的免疫原性。

临床前研究：之前的研究表明，对于来自非人灵长类动物物种(包括猕猴和食蟹猴)但不是来自狗、猫、猪、兔、大鼠或小鼠的IFNγ，NI-0501显示类似的结合亲和力和阻断活性。食蟹猴中的毒理学和安全性研究表明，没有归因于NI-0501的脱靶毒性，每周一次给予NI-0501是耐受良好的，且不需要对抗生素预防的需求，并且在这些既往研究中没有观察到异常的组织病理学或行为研究结果。

由于NI-0501结合游离和IFNγR1结合的FNγ的能力，进行了研究以查出在靶标存在下NI-0501介导ADCC和CDC活性的潜力。证实没有ADCC活性，并且未观察到CDC活性的诱导。

I期临床研究：在20名健康成年志愿者中的1期随机双盲安慰剂对照单一递增剂量研究调查单次静脉内(IV)给予NI-0501的安全性、耐受性和药代动力学概况。在该研究期间，6名受试者接受安慰剂，而3、3、4和4名受试者(共14名受试者)分别接受0.01、0.1、1和3mg/kg的NI-0501剂量。

NI-0501的PK分析揭示了IgG1的预期概况，其半衰期长(约22天)，清除慢(≤0.007 L/h)且分布容积低(平均< 6 L)。

20名受试者中14人(70%)在开始药物输注后观察到总共41件不良事件(AE)，其中10件由4名接受安慰剂的受试者报告。36件(87.8%) AE为轻微强度，5件(12.2%)为中等强度。未报告严重或危及生命的AE。在14名经历AE的受试者的10人中报告23件药物相关的AE(56.1%) (至少有合理的可能性)。观察到大部分AE是个别发生的，且没有与NI-0501递增剂量有关的趋势。所有NI-0501输注均是无特别事件的。

总之，NI-0501输注是耐受良好的，而且在药物输注后监测8周内所观察到的作用未显示任何严重或意外的脱靶安全性或免疫原性顾虑。

2/3期临床研究材料与方法：这些研究在原发性HLH患者中进行。研究被分为3个部分：筛查、治疗和随访。概况见图12。

在这些研究中，合适的患者包括初次HLH治疗的患者(本文亦称为“一线患者”)，或已经接受常规HLH疗法的患者(本文亦称为“二线患者”)但例如按治疗医师未达到令人满意的反应，或显示对其不耐受的病征。在常规HLH疗法不成功或显示对其不耐受后接受NI-0501的患者代表该研究的关键组群，以表明NI-0501作为原发性HLH的二线治疗的功效。招募首次治疗的患者用于收集一线背景下的功效和安全性数据。

该研究不包括下列患者：诊断为经证实的风湿病或肿瘤病伴发的继发性HLH的患者；在筛查之前前2周内用任何T细胞耗竭剂(例如抗胸腺细胞球蛋白(ATG)、抗CD52疗法)在前治疗或在其规定的半衰期5倍以内用任何其它生物学药物治疗(除在已记录的B细胞EBV感染情况下的利妥昔单抗以外)的患者；患有有活性的分枝杆菌、荚膜组织胞浆菌(Histoplasma Capsulatum)、志贺氏菌属(Shigella)、沙门氏菌属(Salmonella)、弯曲杆菌属(Campylobacter)和利什曼原虫属(Leishmania)感染的患者；有结核病或潜伏性结核过往史的证据的患者；有HIV抗体、乙型肝炎表面抗原结合或丙型肝炎抗体的阳性血清的患者；存在恶性肿瘤的患者；患有另一种严重影响心血管、肺、肝或肾功能的伴发病或畸形的患者；对该研究方案的任何组分有超敏反应或变态反应史的患者；在筛查的前12周内接受活的或减毒活病毒(包括BCG)疫苗的患者；和/或妊娠或哺乳期女性患者。

本文提供的研究使用抗干扰素γ抗体NI-0501，一种针对人IFNγ的完全人IgG1单克隆抗体(mAb)。NI-0501以作为用于输注的无菌浓缩剂(每mL)提供，如下表4所示。

表4. NI-0501制剂

成分	量(每mL)
		NI-0501	5 mg
L-组氨酸	1.55 mg
		L-组氨酸盐酸盐一水合物	3.14 mg
氯化钠(NaCl)	7.31 mg
		聚山梨醇酯80	0.05 mg
pH	6.0 ± 0.2

在这些研究中，以1 mg/kg的初始剂量在1小时内通过IV输注给予NI-0501。预期该剂量在具有低于或等于3400 pg/mL的基线IFNγ浓度的患者中抑制至少99%的IFNγ作用达3天。每3天进行输注直到研究第15天(SD15) (输注#6)，且之后每周两次。在研究期间的任何时间，根据通过各个患者中的临床和实验室反应指导的预定标准(如下表5所述)，NI-0501剂量增加至3 mg/kg是可能的。在最少两次3 mg/kg的输注后，在重新评价时，如果患者有资格接受3 mg/kg的NI-0501的相同临床和实验室标准仍适用，则在定时监测临床和实验室HLH参数的情况下，可增加NI-0501的剂量到6 mg/kg直到4次输注。根据这些参数的进展，NI-0501的剂量可：i)降低回到3 mg/kg，或ii)如果PK和PD证据表示极高的IFNγ产生和因此最快的NI-0501清除，则保持在6 mg/kg用于额外的IV输注(或增加超过6 mg/kg)。如果符合本文列出的临床和实验室标准，则剂量增加可发生在研究期间的任何时间。

表5. 指导剂量增加的临床和实验室标准

^a如果这些标准在SD6后仍适用，则NI-0501剂量从1 mg/kg增加至3 mg/kg。

^b 如果NI-0501剂量在SD3已增加，则在标准重新评定前必进行以3 mg/kg剂量的至少两次输注。

^c 取决于在SD3或SD6是否发生剂量增加至3 mg/kg。

^d 对于最多4次输注。

缩略语：bsl. = 基线；ANC = 绝对嗜中性粒细胞计数；US =超声

在这些研究中，给予NI-0501达8周，而且可将治疗期分成单独的2期：治疗期1和2，如图12所示。

在给予NI-0501达8周后，可开始准备造血干细胞移植(HSCT)的预处理方案。如果患者的状况和供体可得性允许进行移植，则预期的治疗持续时间可缩短，但不缩短到小于4周。在第8周已鉴定出合适供体的情况下或如果出于与给予NI-0501无关的原因移植日程延迟，则NI-0501治疗可在长期随访研究的情况下继续，条件是为患者确立有利的利益/风险。

在这些研究中，NI-0501在地塞米松的背景下给予，这可根据患者情况逐渐减少。在首次治疗的患者中，NI-0501可在10 mg/m²地塞米松的背景下给予。在接受NI-0501作为二线HLH治疗的患者中，地塞米松必须以至少5 mg/m²的剂量或如果较高则以筛查前的相同剂量给予。患者需要从SD-1起接受地塞米松。

按照治疗医师的判断，可根据患者情况逐渐减少地塞米松。递减方案可由治疗医师选择，条件是在每个步骤地塞米松剂量不超过减半，且变化频率不超过每周一次。

在地塞米松逐渐减少后如果疾病恶化，则可按照治疗医师增加地塞米松的剂量并保持直到达到令人满意的反应。

正如HLH治疗准则中建议的，从开始NI-0501治疗前一日直到研究结束，患者接受针对耶氏肺孢子虫(Pneumocystis jiroveci)真菌和带状疱疹(Herpes Zoster)病毒感染的预防性治疗。自NI-0501治疗起始(即SD-1)前一日开始直到研究结束，患者接受预防性治疗。例如，对于耶氏肺孢子虫预防，患者可接受例如以等分剂量一天两次每周连续3天口服给予的750 mg/m²/天磺胺甲噁唑与150 mg/m²/天甲氧苄啶。对于真菌感染预防，患者可接受例如每日氟康唑12 mg/kg，最大400 mg每日剂量。对于HZ病毒预防，患者可接受例如阿昔洛韦对于2岁以上儿童200 mg每日4次，对于2岁以下儿童100 mg每日4次。只要有可能时，这些治疗将口服给予，否则静脉内给予。

患者还可接受各种伴同疗法的任一种，例如环孢菌素A、鞘内甲氨蝶呤和糖皮质类固醇等。如果在筛查前已给予患者，则环孢菌素A (CsA)可继续。CsA可在任何时间撤销。一旦开始给予NI-0501，则在研究过程中不能重新引入CsA。

如果在NI-0501治疗开始时患者正接受鞘内甲氨蝶呤和糖皮质激素，则该治疗可按需要继续。如果CNS症状出现在NI-0501治疗开始前，则鞘内甲氨蝶呤和糖皮质激素的疗法必须在第一次NI-0501给予之前开始。

在经证实的免疫球蛋白缺乏症的情况下，IV免疫球蛋白(IVIG)只允许作为替代治疗。例如，在经证实的免疫球蛋白缺乏症(证明应当进行替代治疗)的情况下，可以0.5 g/kg的剂量每4周或更频繁地给予IVIG以维持适当的IgG水平。筛查之前前4周内的任何输注以及在NI-0501治疗期间的任何输注均是可接受的。

允许镇痛剂治疗、血液制品输液、电解质和葡萄糖输注、抗生素、抗真菌和抗病毒治疗和一般支持性护理。一旦达到最大NI-0501剂量水平，则在未保持或有限的HLH改善情况下允许其它HLH治疗。如本文所用，未保持的HLH改善是指对于3个HLH参数(参见下表6)无法保持自基线至少50%改善的患者。至少两次连续测量必须记录HLH改善的丧失。如本文所用，有限的HLH改善是指在最少3个HLH临床和实验室标准中自基线的变化小于50%。应给予依托泊苷作为另外的HLH治疗，除非从既往病史得到对该药物缺乏反应或不耐受的明确证据。

下列疗法可能不能与NI-0501给药同时使用：一般不允许依托泊苷、T细胞耗竭剂，或者任何其它生物学药物，以下除外：G-CSF，在长期中性粒细胞减少的情况下；利妥昔单抗，在已证实的B-细胞EBV感染的情况下；和其它的HLH治疗，在最大NI-0501剂量水平下未保持或有限的HLH改善(如本文定义)的情况下。应给予依托泊苷，除非从既往病史得到对该药物缺乏反应或不耐受的明确证据。在整个研究期间包括4周随访期，应避免用活的或减毒(包括BCG)疫苗接种。如果在研究结束后NI-0501浓度保持在治疗水平，则无疫苗接种的时期应延长，直到不再检出可测量浓度的NI-0501。

表征该疾病的临床病征(发热、脾大、CNS症状)和实验室参数(CBC、血纤蛋白原、铁蛋白、sCD25水平)的进展用来评价反应的实现和至反应的时间。主要功效终点包括总反应率，即在治疗结束(EoT)时实现完全或部分反应或HLH改善，如下表6中定义。次要功效终点包括在研究期间任何时间的至反应的时间；反应的耐久性，即在研究期任何时间实现的反应的维持直到EoT和更久(包括任何长期随访研究中采集的数据)；能够降低糖皮质激素达基线剂量的50%或更高的患者数；当认为需要时，能够进行到HSCT的患者数；在第8周(或EoT)和在研究结束时的生存；NI-0501的血清浓度以测定NI-0501药代动力学(PK)概况；测定药效学(PD)作用，包括循环总IFNγ和其中和的标志物(即CXCL9和CXCL10)的水平；和测定其它生物标志物，例如sCD25、IL-10。

表6. 反应的定义

待收集和评价的安全性参数包括不良事件(AE)的发生率、严重程度、诱因和结果(严重和不严重)，要特别留意感染；实验室参数例如全血细胞计数(CBC)的进展，其重点在红血球(血红蛋白)、嗜中性粒细胞和血小板、肝试验、肾功能试验和凝血；出于安全原因退出的患者数；和其它参数，例如测定免疫原性(ADA)的针对NI-0501的循环抗体的水平(如有的话)。

应用精确二项检验以单侧0.025水平评价主要终点(总反应率)。至反应的时间、反应的耐久性和存活时间应用Kaplan-Meier曲线提供，如果可行的话，以计算的中值提供。针对这些终点每一个的中值计算95%置信区间。基于二元结果的其它终点(包括降低糖皮质激素达50%或更高的患者数和能够进行到HSCT的患者数)可转换成比例和计算出的相关95%置信区间。针对主要终点只获得就p-值而言的统计显著性。所有其它终点被视为对主要终点的支持，因此没有公布正式的终点层级。

患者中NI-0501的给予导致在NI-0501第一次输注后数小时内发热快速正常化。图13A和13B表示在开始NI-0501治疗时在体温> 37.5℃的2名患者中NI-0501输注对体温的作用。图14是描述给予NI-0501对患者的嗜中性粒细胞计数的作用的系列图表。图15是描述给予NI-0501对患者的血小板计数的作用的系列图表。图16是描述给予NI-0501对患者的铁蛋白血清水平的作用的系列图表。图17是描述给予NI-0501对患者的糖皮质激素逐渐减少的作用的系列图表。图18是描述给予NI-0510保持IFNγ中和直到HSCT时的图示。HLH对NI-0501治疗的反应还持续直到移植。还针对在NI-0501给药后的任何CNS受累对患者进行了评价。在治疗结束(EOT)时基线CNS受累和状态的概况见下表11。

表11. 对NI-0501治疗的反应-CNS受累

注意：患者接受IT疗法，4#患者除外，该患者中未进行常规的IP给药

^* 治疗继续进行

^$ 2周以后开始治疗

^{^} 未进行EOT时的对照

已进行造血干细胞移植(HSCT)的10名患者中，所有患者已植入；在1名患者中，在HSCT后D+145由于混合嵌合性所致需要CD34干细胞加强。1名患者中发生二次移植失败，接着HLH再活化。该患者在HSCT后D+68因急性呼吸衰竭和细菌感染死亡。另一患者在HSCT后D+47死亡(在重度GvHD的情况下的感染性休克)。在其它3名患者中报告了轻微GvHD并且消退/正在消退。

进行移植的10名患者的8人中测量了在HSCT时NI-0501的中和血清浓度，正如通过CXCL9的水平(一种被IFNγ强烈诱导的趋化因子)低于定量限所反映的。因此，这些数据显示NI-0501可免除基于依托泊苷的方案所报告的短期或长期毒性。这转化成同种异体HSCT相关并发症的风险降低。

这些数据表明，NI-0501治疗改善和/或可消除HLH的相关临床和实验室异常情况，包括CNS病征和症状。对NI-0501的反应不依赖于致病突变的存在和类型和/或感染性引发物的存在和类型。NI-0501是耐受良好的。迄今未出现安全顾虑(例如无骨髓中毒性、无广泛性免疫抑制)。未观察到已知被IFNγ中和促进的病原体引起的感染。IFNγ用NI-0501中和可提供管理HLH的新的靶向方法。

实施例8. 在发生巨噬细胞活化综合征/继发性HLH(MAS/sHLH)的全身型幼年特发性关节炎(sJIA)的患者中短期静脉内给予NI-0501 (一种抗干扰素γ (抗IFNγ)单克隆抗体)的安全性、耐受性、药代动力学和功效

本文提供的研究被设计成表明用于sJIA患者的MAS/sHLH治疗中的NI-0501的功效和安全性，研究被分成两个部分：(i)试验研究，评价NI-0501的PK概况和给药策略以及初步评价该患者群中的NI-0501利益/风险；和(ii)关键研究，表明NI-0501的功效和安全性(在确诊NI-0501的给药方案和积极的利益/风险概况时要继续的研究)。该研究设计的概况见图19。

试验研究的主要目的是：(i)确定用于伴发MAS/sHLH的sJIA患者的合适的NI-0501治疗剂量方案；(ii)评价伴发MAS/sHLH的sJIA患者中NI-0501的利益/风险概况；和(iii)披露伴发MAS/sHLH的sJIA患者中NI-0501的药代动力学(PK)概况。关键研究的主要目的是：(i)测定伴发MAS/sHLH的sJIA患者中的NI-0501功效；(ii)评价伴发MAS/sHLH的sJIA患者中短期静脉内(i.v.)给予NI-0501的安全性和耐受性概况；(iii)证实伴发MAS/sHLH的sJIA患者中NI-0501积极的利益/风险概况；(iv)进行趋化因子CXCL9和CXCL10作为MAS/sHLH诊断生物标志物和作为对NI-0501治疗反应的预测因子的探测性评价；和(v)评价伴发MAS/sHLH的sJIA患者中NI-0501的免疫原性。

研究人群包括对高剂量糖皮质激素治疗显示不当反应的伴发MAS/sHLH的sJIA患者。纳入标准包括以下：(i)性别：男性和女性；(ii)年龄：在sJIA诊断时< 16岁；(iii)在下列实验室和临床标准的至少2项存在下，由治疗风湿病学家证实的活动性MAS/sHLH的诊断：(a)实验室标准：血小板计数≤ 262 x10⁹/L、WBC计数≤ 4.0 x10⁹/L、AST水平> 59 U/L和/或血纤蛋白原水平≤ 2.5 g/L；(b)临床标准：肝大、出血现象和/或CNS功能障碍；(iv)对高剂量i.v.糖皮质激素治疗出现不当反应持续至少3天(包括但不限于连续3天的30 mg/kgmPDN脉冲)的患者，按照当地护理标准；(v)高剂量i.v.糖皮质激素不应低于2 mg/Kg/天mPDN，等同于2次单独的每日剂量直到60 mg/天。在患者情况和/或实验室参数快速恶化的情况下，纳入可发生在自高剂量i.v.糖皮质激素开始小于3天内；(vi)患者同意(或法定全权代理人同意)；和(vii)在患者为青春期后接受避孕措施。

排除标准包括：(i)疑似或证实的原发性HLH或随肿瘤病发生的HLH的诊断；(ii)用以下治疗的患者：阿那白滞素、托珠单抗、Canakinumab、TNF抑制剂、利妥昔单抗或在其规定半寿期5倍内的任何其它生物学药物；(iii)有活性的分枝杆菌(典型和非典型)、荚膜组织胞浆菌、志贺氏菌属、沙门氏菌属、弯曲杆菌属和利什曼原虫属感染；(iv)潜伏性结核的证据；(v)对HIV抗体呈阳性血清；(vi)存在恶性肿瘤；(vii)患有严重影响心血管、肺、CNS、肝或肾功能、以研究人员的观点可能严重影响对治疗起反应的可能性和/或评价NI-0501安全性的另一种伴发疾病或畸形的患者；(viii)对研究方案的任何成分有超敏反应或变态反应史；(ix)在筛查前12周内接受BCG疫苗；(x)在筛查前6周内接受其它活的或活的减毒疫苗；和/或(xi)妊娠或哺乳期女性患者。

给药方案、给药频率和治疗持续时间：在这些研究中，将NI-0501用于实施例7所示制剂。在第1部分，在SD0以6 mg/kg的初始剂量在1小时时间内通过输注给予NI-0501。每3天以3 mg/kg的剂量继续NI-0501治疗持续4周(即直到SD27)。在达到完全临床反应(即MAS缓解)时可缩短NI-0501治疗。在4周后，可按需继续NI-0501治疗再长达4周(即直到SD56)作为维持直到实现MAS缓解，其具有降低剂量至1 mg/kg并延长输注间的间隔至每周给药的可能性。如果PK概况显示非预期的TMDD (因此发出异常高的IFNγ产生的信号)，则NI-0501的剂量可增加到通过临床和PK证据指导的10 mg/kg。只有在仔细评价该个别患者中利益/风险概况时才批准该剂量增加。

在第2部分，在证实提议的给药方案是适当时，并表明积极的NI-0501利益/风险时，研究才可继续。需要时根据第1部分获得的证据，给药方案的少量修改将适用。

背景疗法与伴随治疗：在至少2 mg/kg甲泼尼龙(mPDN)等同物直到60 mg/天(在30kg或以上的患者中) (这在治疗期间可根据患者情况逐渐减少)的背景下给予NI-0501。患者接受针对带状疱疹感染的预防性治疗，优选前一天开始(和在开始NI-0501治疗之前的任何情况下)直到不再检出血清NI-0501水平。如果在开始NI-0501治疗前至少3天开始，则环孢菌素A (CsA)可继续。允许CsA剂量调整以保持治疗水平。可根据研究人员的判断，在研究期间的任何时间撤销CsA。一旦开始给予NI-0501，便不能重新引入CsA。如果在NI-0501治疗开始时患者正接受鞘内甲氨蝶呤和糖皮质激素，则该治疗可按需继续。在整个研究期间和在任何情况下，避免用活的或减毒(包括BCG)疫苗接种，直到不再检出血清NI-0501水平。允许镇痛剂治疗、血液制品输液、电解质和葡萄糖输注、抗生素、抗真菌和抗病毒治疗和一般支持性护理。

样品大小：在第1部分，可招募至少5名可评价的患者。在第2部分，在继续研究时，可招募至少10名可评价的患者以达到共15名可评价的患者。鉴于该疾病的罕见孤儿性质和没有任何经批准的治疗，没有正式验证15人的样品大小。但是，根据至少50%的患者对仅全身性糖皮质激素反应不充分，即用糖皮质激素的50%的患者在开始治疗后第8周实现MAS缓解的假设，应用5%的单侧显著水平，该研究可具有70%效能以检测从50%到77%的改善。

研究持续时间和研究结束定义：研究的持续时间对于各患者可为8周(加上最多1周筛查期)。研究的结束定义为最后一名患者最后一次随访。要求接受至少一剂NI-0501的所有患者进入NI-0501-05研究用于长期随访。

研究终点：在研究的第1部分(试验性)，对以下进行评价以确认该患者群的给药方案：(i) NI-0501的利益/风险概况；(ii) NI-0501的PK概况；(iii)已知被IFNγ诱导的趋化因子(例如CXCL9、CXCL10、CXCL11)水平；(iv)在NI-0501开始后2、4、6和8周血细胞减少症、肝功能障碍和凝血病的MAS截然不同的特征的进展；和(v) NI-0501治疗的剂量和持续时间。在研究的第2部分(关键)，功效研究终点如下：(a)主要功效终点：开始NI-0501治疗后第8周实现MAS缓解的患者数；和(b)次要功效终点：按照研究人员的评价，至MAS缓解的时间；至初始反应的时间；在研究期间的任何时间针对其可逐步减少糖皮质激素到在发生MAS前给予的相同(或较低)剂量的患者数；至实现糖皮质激素逐步减少的时间；在研究结束时的生存；和由于没有功效退出研究的患者数。在研究第2部分(关键)中，安全性研究终点如下：(a)AE的发生率、严重程度、诱因和结果(严重和不严重)，要特别留意感染；实验室参数特别是CBC (集中在血红蛋白、嗜中性粒细胞和血小板)、LFTs和凝血参数的进展；因安全原因退出研究的患者数；和测定免疫原性(ADA)的针对NI-0501的循环抗体的水平(如有的话)。

通过NI-0501的PK概况评价药代动力学和药效学；在给药前循环的游离IFNγ的水平和开始NI-0501后的总IFNγ (游离IFNγ+与NI-0501结合的)；已知被IFNγ诱导的趋化因子(例如CXCL9、CXCL10、CXCL11)的水平；趋化因子水平(CXCL9、CXCL10)和游离NI-0501、游离IFNγ (给药前)和总IFNγ的水平之间的相关性；趋化因子和总IFNγ水平与MAS严重程度的实验室参数(例如铁蛋白、血小板计数、LFTs (试测性分析))的相关性；和其它潜在疾病生物标志物(例如sCD25、IL-10、IL-6、IL-18、TNFα、新蝶呤)的水平。

其它实施方案

尽管结合其详细描述对本发明进行了描述，但前述描述旨在说明而非限制本发明的范围，本发明的范围由随附权利要求书的范围界定。其它方面、优势和改变均在随附权利要求书的范围内。

Claims

1. 一种治疗有需要的受试者的噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)的方法，所述方法包括给予治疗有效量的抗体或其抗原结合片段，其结合干扰素γ (IFNγ)并含有包含SYAMS的氨基酸序列(SEQ ID NO: 1)的可变重链互补决定区1 (VH CDR1)；包含AISGSGGSTYYADSVKG的氨基酸序列(SEQ ID NO: 2)的可变重链互补决定区2 (VH CDR2)和包含DGSSGWYVPHWFDP的氨基酸序列(SEQ ID NO: 3)的可变重链互补决定区3 (VH CDR3)；包含TRSSGSIASNYVQ的氨基酸序列(SEQ ID NO: 4)的可变轻链互补决定区1 (VL CDR1)；包含EDNQRPS的氨基酸序列(SEQ ID NO: 5)的可变轻链互补决定区2 (VL CDR2)和包含QSYDGSNRWM的氨基酸序列(SEQ ID NO: 6)的可变轻链互补决定区3 (VL CDR3)。

2. 权利要求1的方法，其中所述抗体包含SEQ ID NO: 47的氨基酸序列的重链可变氨基酸序列和SEQ ID NO: 48的氨基酸序列的轻链可变氨基酸序列。

3.权利要求1的方法，其中将所述抗体配制成用于输注的无菌浓缩制剂。

4. 权利要求3的方法，其中所述制剂包含5 mg抗体、1.55 mg L-组氨酸、3.14 mg L-组氨酸盐酸盐一水合物、7.31 mg氯化钠(NaCl)和0.05 mg聚山梨醇酯80，其中pH介于5.8和6.2之间。

5.权利要求4的方法，其中所述pH为6.0。

6. 权利要求1的方法，其中以1 mg/kg的初始剂量在1小时内通过IV输注将所述抗体给予有需要的受试者。

7. 权利要求6的方法，其中在初始IV输注后以1 mg/kg的初始剂量在1小时内通过至少一次额外的IV输注将所述抗体给予有需要的受试者。

8. 权利要求7的方法，其中所述至少一次额外的IV输注是以高于1 mg/kg初始剂量的剂量。

9. 权利要求6的方法，其中所述至少一次额外的IV输注剂量为3 mg/kg。

10.权利要求6或权利要求9的方法，其中所述至少一次额外的IV输注在初始IV输注后至少3天给予。

11.权利要求10的方法，其中所述至少一次额外的IV输注在选自以下的时间给予：在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天。

12.权利要求10的方法，其中所述至少一次额外的IV输注在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天给予。

13. 权利要求6的方法，其中在初始IV输注后以1 mg/kg的初始剂量在1小时内通过至少一系列额外IV输注将所述抗体给予有需要的受试者，其中所述额外IV输注的系列包括至少一系列的一周两次IV输注。

14. 权利要求13的方法，其中所述至少一系列的一周两次IV输注以高于1 mg/kg初始剂量的剂量给予。

15. 权利要求13的方法，其中所述至少一系列的一周两次IV输注以3 mg/kg的剂量给予。

16.权利要求13或权利要求15的方法，其中所述至少一次额外的IV输注在初始IV输注后至少三周给予。

17.权利要求16的方法，其中所述至少一次额外的IV输注在选自以下的时间给予：在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周。

18.权利要求16的方法，其中所述至少一次额外的IV输注在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周给予。

19.权利要求6的方法，其中在初始IV输注后通过至少两次额外的IV输注将所述抗体给予有需要的受试者。

20. 权利要求19的方法，其中所述至少两次额外的IV输注是以高于1 mg/kg初始剂量的剂量。

21.权利要求20的方法，其中所述第一次额外IV输注和第二次额外IV输注以相同剂量给予。

22.权利要求20或21的方法，其中所述第一次额外IV输注和第二次额外IV输注以高于初始剂量的相同剂量给予。

23. 权利要求22的方法，其中所述第一次和第二次额外IV输注的至少一次以3 mg/kg的剂量给予。

24.权利要求19或权利要求23的方法，其中所述第一次额外IV输注在初始IV输注后至少3天给予。

25.权利要求24的方法，其中所述第一次额外IV输注在选自以下的时间给予：在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天。

26.权利要求24的方法，其中所述第一次额外IV输注在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天给予。

27.权利要求24的方法，其中所述第二次额外IV输注在选自以下的时间给予：在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周。

28.权利要求24的方法，其中所述第二次额外IV输注在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周给予。

29.权利要求24的方法，其中所述第一次额外IV输注在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天给予，并且第二次额外IV输注在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周给予。

30.权利要求20的方法，其中所述第一次额外IV输注和第二次额外IV输注以不同的剂量给予。

31.权利要求30的方法，其中所述第一次额外IV输注和第二次额外IV输注以不同的剂量给予，其中各剂量高于初始剂量。

32. 权利要求30的方法，其中所述第一次额外IV输注以3 mg/kg的剂量给予。

33. 权利要求30的方法，其中所述第二次额外IV输注以6 mg/kg的剂量给予。

34. 权利要求30的方法，其中所述第一次额外IV输注以3 mg/kg的剂量给予，并且第二次额外IV输注以6 mg/kg的剂量给予。

35.权利要求30或权利要求34的方法，其中所述第一次额外IV输注在初始IV输注后至少3天给予。

36.权利要求35的方法，其中所述第一次额外IV输注在选自以下的时间给予：在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天。

37.权利要求35的方法，其中所述第一次额外IV输注在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天给予。

38.权利要求35的方法，其中所述第二次额外IV输注在选自以下的时间给予：在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周。

39.权利要求35的方法，其中所述第二次额外IV输注在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周给予。

40.权利要求35的方法，其中所述第一次额外IV输注在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天给予，并且第二次额外IV输注在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周给予。

41.权利要求30的方法，其中所述第一次额外IV输注包括至少第一系列的每周两次IV输注，并且第二次额外IV输注包括至少第二系列的每周两次IV输注。

42. 权利要求41的方法，其中所述第一系列的每周两次IV输注和第二系列的每周两次IV输注以高于1 mg/kg初始剂量的剂量给予。

43. 权利要求42的方法，其中所述第一系列的每周两次IV输注以3 mg/kg的剂量给予，并且第二系列的每周两次IV输注以6 mg/kg的剂量给予。

44.权利要求41或43的方法，其中所述第一系列的额外IV输注在初始IV输注后至少3天给予。

45.权利要求44的方法，其中所述第一系列的额外IV输注在选自以下的时间给予：在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天。

46.权利要求44的方法，其中所述第一系列的额外IV输注在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天给予。

47.权利要求44的方法，其中所述第二系列的额外IV输注在选自以下的时间给予：在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周。

48.权利要求44的方法，其中所述第二系列的额外IV输注在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周给予。

49.权利要求44的方法，其中所述第一系列的额外IV输注在初始IV输注后3天、在初始IV输注后6天、在初始IV输注后9天、在初始IV输注后12天和在初始IV输注后15天给予，并且第二系列的额外IV输注在初始IV输注后3周、在初始IV输注后4周、在初始IV输注后5周、在初次输注后6周、在初次输注后7周和在初次输注后8周给予。

50.权利要求1的方法，其中所述受试者在地塞米松的背景下给药。

51. 权利要求50的方法，其中之前未曾针对HLH对受试者进行治疗，且其中所述地塞米松以至少10 mg/m²的剂量给予。

52. 权利要求50的方法，其中所述受试者正接受所述抗体作为二线HLH治疗，且地塞米松以至少5 mg/m²的剂量给予。

53.权利要求1的方法，其中所述方法进一步包括给予受试者至少第二药剂。

54.权利要求53的方法，其中所述第二药剂是治疗剂、抗炎药和/或免疫抑制剂。

55. 一种缓解病症的症状的方法，所述方法包括检测来自受试者的生物样品的单独CXCL9或连同一种或多种其它生物标志物的水平，将CXCL9表达的检出水平与对照表达的水平进行比较，当检出的水平升高时，以足以缓解病症的症状的量将抗干扰素γ (IFNγ)拮抗剂给予受试者。

56.权利要求55的方法，其中所述一种或多种其它生物标志物选自总IFNγ水平、CXCL10、CXCL11及其组合。

57.权利要求55的方法，其中所述生物样品是血液或来源于血液。

58.权利要求55的方法，其中所述生物样品是血清。

59.权利要求55的方法，其中所述抗IFNγ拮抗剂是抗IFNγ抗体或其免疫活性片段。

60. 权利要求59的方法，其中所述抗IFNγ抗体或其免疫活性片段含有包含SYAMS的氨基酸序列(SEQ ID NO: 1)的可变重链互补决定区1 (VH CDR1)；包含AISGSGGSTYYADSVKG的氨基酸序列(SEQ ID NO: 2)的可变重链互补决定区2 (VH CDR2)；包含DGSSGWYVPHWFDP的氨基酸序列(SEQ ID NO: 3)的可变重链互补决定区3 (VH CDR3)；包含TRSSGSIASNYVQ的氨基酸序列(SEQ ID NO: 4)的可变轻链互补决定区1 (VL CDR1)区；包含EDNQRPS的氨基酸序列(SEQ ID NO: 5)的可变重链互补决定区2 (VL CDR2)；和包含QSYDGSNRWM的氨基酸序列(SEQ ID NO: 6)的可变重链互补决定区3 (VL CDR3)。

61. 权利要求59的方法，其中所述抗IFNγ抗体或其免疫活性片段包含SEQ ID NO: 47的重链可变氨基酸序列和SEQ ID NO: 48的轻链可变氨基酸序列。

62. 权利要求59的方法，其中所述抗IFNγ抗体或其免疫活性片段包含SEQ ID NO: 44的重链氨基酸序列和SEQ ID NO: 46的轻链氨基酸序列。

63.权利要求55的方法，其中所述受试者是人。

64.权利要求55的方法，其中所述病症是自身免疫性或炎性病症。

65.权利要求55的方法，其中所述病症是原发性或继发性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)。

66.权利要求55的方法，其中所述病症是巨噬细胞活化综合征(MAS)。

67.权利要求55的方法，其中所述病症是在全身型幼年特发性关节炎(sJIA)情况下的MAS。

68.一种制剂，其包含：

(a) 治疗有效量的结合干扰素γ (IFNγ)的分离的抗体或其抗原结合片段；

(b) L-组氨酸；

(c) L-组氨酸盐酸盐一水合物；

(d) 氯化钠(NaCl)；

(e) 聚山梨醇酯80；

其中所述制剂的pH介于5.8和6.2之间。

69. 权利要求68的制剂，其中所述分离的抗体含有包含SYAMS的氨基酸序列(SEQ IDNO: 1)的可变重链互补决定区1 (VH CDR1)；包含AISGSGGSTYYADSVKG的氨基酸序列(SEQID NO: 2)的可变重链互补决定区2 (VH CDR2)和包含DGSSGWYVPHWFDP的氨基酸序列(SEQID NO: 3)的可变重链互补决定区3 (VH CDR3)；包含TRSSGSIASNYVQ的氨基酸序列(SEQ IDNO: 4)的可变轻链互补决定区1 (VL CDR1)；包含EDNQRPS的氨基酸序列(SEQ ID NO: 5)的可变轻链互补决定区2 (VL CDR2)和包含QSYDGSNRWM的氨基酸序列(SEQ ID NO: 6)的可变轻链互补决定区3 (VL CDR3)。

70. 权利要求68的制剂，其中所述抗体包含SEQ ID NO: 47的氨基酸序列的重链可变氨基酸序列和SEQ ID NO: 48的氨基酸序列的轻链可变氨基酸序列。

71. 权利要求68的制剂，其中所述制剂包含5 mg抗体、1.55 mg L-组氨酸、3.14 mg L-组氨酸盐酸盐一水合物、7.31 mg氯化钠(NaCl)和0.05 mg。

72.权利要求68或权利要求71的制剂，其中所述制剂的pH为6.0。

73.权利要求68的制剂，其中所述制剂是用于输注的无菌浓缩制剂。