CN102216330B - 用于病毒所致的疾病的抗体药物组合物 - Google Patents

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Abstract

用于预防或治疗病毒感染的药物组合物，其包括特异于以下肽序列之至少一种的全抗体或所述抗体的片段的制剂：3型Toll-样受体的肽序列：FYWNVSVHRVLGFKE，EYAAYIIHAYKD，或干扰素γ受体β链的肽序列：LIKYWFHTPPSIPLQIEEYL，或干扰素γ受体α链的肽序列：SIILPKSLISVV。

Description

用于病毒所致的疾病的抗体药物组合物
【技术领域】
本发明涉及治疗及预防病毒所致的疾病，包括病毒感染。更具体而言，本发明涉及设计为调节抗病毒宿主反应及降低病毒感染及病毒感染的并发症的严重性及持续时间的新治疗剂。
【背景技术】
有几种对抗病毒感染(除了治疗个体症状之外)的基本方法：(1)疫苗接种-诱导免疫以阻止病毒感染，(2)用小分子试剂或治疗性抗体靶向病毒复制循环，及(3)活化宿主反应(主要使用干扰素类或干扰素诱导物)WAGNER，E.K.，et al.Basic Virology.2nd edition.Oxford：Blackwell Publishing，2004.ISBN 1405103469.p.96-116。
各提及的方法均具有某些限制或缺点。疫苗接种仅对疫苗-可阻止的感染有利；天然的病原体(例如，流感病毒)存活力可最小化疫苗接种功效；最后，疫苗接种偶尔相关于不期望的反应。各靶向病毒复制循环的治疗剂仅在窄范围的共有共同的分子靶的疾病病原体所致的疾病中有效；所述试剂的使用可相关于抗性和/或不期望的反应的发展。也值得注意的是，病毒所致的疾病的严重性及持续时间取决于2组因素：一方面是关联于病毒清除率的靶器官中的病毒浓度(有相应直接的致细胞病变效果)，而另一方面是宿主先天性和获得性免疫应答的适当。因此，甚至相对低剂量的高度病原性病毒可导致非常严重的疾病，严重性常为一种不合时宜的宿主防御反应所致的′细胞因子风暴′的结果(SZRETTER，K.J.，et al.Role of host cytokine responses inthe pathogenesis of avian H5N1 influenza viruses in mice.J Virol.2007，vol.81，no.6，p.2736-44.)。
能活化宿主反应的试剂(生物反应修饰物，免疫调节剂)关于它们的′天然的′作用模式及独立于病毒感染的特定原因似乎是有希望的一组抗病毒治疗剂。此组治疗剂可以干扰素类(例如，聚乙二醇化的干扰素α-2a)，咪喹莫特(发挥Toll-样受体7的激动剂的作用的干扰素诱导物)，替洛隆(经口活跃的干扰素诱导物)为例。但是，全部已知的干扰素制剂具有显著的不利效果，及合成的干扰素诱导物具有安全性或生物利用度问题。
有多种包括全抗体或抗体片段的设计用于治疗不同疾病的治疗剂(Brekke OH，Sandlie I.Therapeutic antibodies for human diseases atthe dawn of the twenty-first century.Nat Rev Drug Discov.2003Jan；2(1)：52-62.)。其中一些设计用于病毒所致的疾病：例如，在HIV感染中，抗体片段被提议阻断病毒蛋白gp120(Danishefsky et al.，USpatent application 20060229432，published October 12，2006)；在呼吸道合胞病毒(RSV)感染中，已知单克隆抗体(帕利珠单抗)靶向RSV，预防、治疗或改善相关于RSV感染的症状。提及的试剂旨在阻断/抑制它们的靶分子，它们以实质性剂量(至少0.001mg/kg)施用。理论上，现有技术包括口服施用，但由于此途径对基于蛋白的医学提供的差的生物利用度，既有的产品不可用于口服剂型。次多的基于抗体或抗体片段的经口药物制剂(US专利申请20060002927(10513109)，20050136103(10942300)，20030153022(10287821)，等)靶向消化道内的分子或细菌外源肽，及以实质性剂量施用必要于在消化道内达到一定浓度及阻断它们的靶。
除了抗病毒剂之外，现有技术基本上涵盖针对在特定疾病状态上调的分子靶的抗体，旨在降低它们的水平至正常。最接近本申请的主题的实施例是Carton等人的US专利申请US20060115475，″Toll likereceptor 3 antagonists，methods and uses″。其公开通过拮抗TLR3来抑制细胞的促炎细胞因子产生的在治疗及预防炎症条件(包括相关于感染的条件)中有效的抗-TLR3(Toll样受体3型)抗体。如可从该申请的说明书总结出，作者提议使用针对具有703个氨基酸的长度的TLR3的细胞外配体-结合结构域的多种表位之一的单克隆抗体。在亚致死流感感染后，在用肺炎链球菌攻击之前不久(预防注射)及在用肺炎链球菌攻击之后不久(治疗性注射)腹膜内注射这些抗体，以阻止在平息的流感感染背景上细菌病原体所致的脓毒性休克。因此，US20060115475申请更关注通过拮抗TLR3的细胞外结构域预防及治疗细菌感染的致死炎症并发症，相比展示病毒感染中抗-TLR3抗体的任何预防性或治疗性用途。
另一通用的方法是使用抗体或抗体片段来靶向由恶性或别样地患病的细胞特异性地表达的标记物。基于抗体的模仿(受体激动剂)为本领域所知，但无一实际用于实践。
除了以上-提及的抗病毒方法及多种对于病毒感染的症状性治疗剂之外，有几种用于预防及治疗病毒感染(主要是流感及普通感冒)的注册的顺势疗法药剂。其中多数由医生根据顺势疗法传统基于患者特异性症状个别开处方。但是，几种产品要求待在上呼吸道感染中有效的通用指示剂的权利。其中最值得注意的是欧斯洛可舒能(Oscillococcinum)(在法国销售，几个其他EU国家及北美洲)及Anaferon(在俄罗斯销售及几个相邻国家，但不在EU)。欧斯洛可舒能由鸭的心脏及肝脏制得(顺势疗法稀释K200)，Anaferon由针对干扰素γ的抗体制得(顺势疗法稀释液的混合物(RUWO2005000350A(EPSHTEIN OI)06.01.2005))。然而顺势疗法治疗剂通常被认为是安全的，提及的产品的功效仍不确定，至少，从公开研究判断。对于欧斯洛可舒能而言，无公开的病毒感染的动物模型中的功效的证据，及其在治疗流感及流感-样综合征中的临床益处被认为非常中等(VICKERS，A.J.，et al.Homoeopathic Oscillococcinumfor preventing and treating influenza and influenza-like syndromes.Cochrane Database Syst Rev.2006 JuI，vol.19，no.3，p.CD001957.)。对于Anaferon而言，公开了动物功效数据(SERGEEV，A.N.，et al.[Antiviral activity of oral ultralow doses of antibodies togamma-interferon：experimental study of influenza infection in mice].Antibiot Khimioter.2004，vol.49，no.11，p.7-11.；SUSLOPAROV，M.A.，et al.[Efficacy of therapeutic and prophylactic actions ofultralow doses of antibodies to gamma-interferon in experimentalmurine model of herpes virus].Antibiot Khimioter.2004，vol.49，no.10，p.3-6.)；产物在人临床试验中的益处仅可从科学会议摘要评估。
提议通用的方法用来使用″antibodies to an antigen acting as adirect cause of a pathological syndrome or involved in regulation ofmechanisms of its formation″(EP1295606A(EPSHTEIN O.I.)26.03.2003)制备顺势疗法产品。但引用的专利申请不提示任何线索以选择特定疾病中的特定分子靶。当考虑数百种蛋白涉及宿主抗病毒感染防御的调节(各蛋白均包括数十个表位以产生抗体)时，必需从数千种可能的选项选择最佳药物候选物。
【发明内容】
本发明旨在开发可发挥活化及调节对广普病毒病原体的宿主反应的免疫调节剂的作用的有效及安全的药品，因此在广范围的病毒所致的疾病中提供预防及治疗性益处。
【技术问题】
病毒感染及病毒所致的疾病一般而言存在普遍未满足的医学需求：可用的有确证的功效的治疗剂或者仅在非常窄范围的感染中有效，或它们具有不利的安全性特征，或它倾向于由于病毒抗性放松功效。
【技术方案】
设计在广普病毒感染中有效及安全的药物组合物的技术问题通过将下列物质合入所述组合物而解决：
有效治疗量或制剂的特异于选自以下序列的至少一种肽序列的全抗体或所述抗体的抗原-结合片段：
3型Toll-样受体序列(NH2)FYWNVSVHRVLGFKE(COOH)[FYW h，SEQ ID NO：1]，
3型Toll-样受体序列(NH2)EYAAYIIHAYKD(COOH)[EYAh，SEQ ID NO：2]，
干扰素γ受体β链序列(NH2)LIKYWFHTPPSIPLQIEEYL(COOH)[LIK h，SEQ ID NO：3]，
干扰素γ受体α链序列(NH2)SIILPKSLISVV(COOH)[SIIh，SEQ ID NO：4]，或
有效治疗量的包括下列的混合物：
(a)至少一或更多种特异于选自以下序列的第一肽序列的全抗体或所述抗体的抗原-结合片段：
3型Toll-样受体序列(NH2)FYWNVSVHRVLGFKE(COOH)[FYW h，SEQ ID NO：1]，
3型Toll-样受体序列(NH2)EYAAYIIHAYKD(COOH)[EYAh，SEQ ID NO：2]，
干扰素γ受体β链序列(NH2)LIKYWFHTPPSIPLQIEEYL(COOH)[LIK h，SEQ ID NO：3]，
干扰素γ受体α链序列(NH2)SIILPKSLISVV(COOH)[SIIh，SEQ ID NO：4]，及
(b)至少一或更多种特异于选自以下序列的第二肽序列的全抗体或所述抗体的抗原-结合片段：
3型Toll-样受体序列(NH2)FYWNVSVHRVLGFKE(COOH)[FYW h，SEQ ID NO：1]，
3型Toll-样受体序列(NH2)EYAAYIIHAYKD(COOH)[EYAh，SEQ ID NO：2]，
干扰素γ受体β链序列(NH2)LIKYWFHTPPSIPLQIEEYL(COOH)[LIK h，SEQ ID NO：3]，
干扰素γ受体α链序列(NH2)SIILPKSLISVV(COOH)[SIIh，SEQ ID NO：4]，
其中所述第二肽序列不同于所述第一肽序列。
本发明涉及所述用于治疗或预防脊椎动物及人中，尤其是人中病毒或不同病毒的混合物所致的疾病的药物组合物。
在本发明的另一实施方式中，所述药物组合物用作旨在用于肠内，肠胃外，口服，经口，经腹膜或局部施用的药物。
本发明的药物组合物可用于任何已知的或新出现的病毒且尤其是选自下列的病毒所致的疾病：腺病毒；杆状病毒(尤其是，诺如病毒)；冠状病毒；柯萨奇病毒；爱泼斯坦-巴尔病毒；黄病毒(尤其是，西尼罗病毒，登革热病毒，蜱传脑炎病毒，黄热病毒)；甲型肝炎病毒；乙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒；1、2和8型单纯疱疹病毒；巨细胞病毒；人免疫缺陷病毒(HIV)；流感病毒；麻疹病毒；人变性肺病毒；腮腺炎病毒；人乳头瘤病毒；副流感病毒；脊髓灰质炎病毒；狂犬病病毒；呼吸道合胞病毒；鼻病毒；轮状病毒；风疹病毒；水痘-带状疱疹病毒。
在其中一个实施方式中，药物组合物含有效治疗量的使用包括多个循环的连续稀释及垂直摇动的技术-尤其是通过描述于顺势疗法药典的制备方法制备的顺势疗法制剂。
或者，在设计药物组合物中，可使用具有至少70％相同或85％类似于3型Toll-样受体或干扰素γ受体的所列氨基酸序列之至少一个的氨基酸序列的靶肽。
在本发明的另一实施方式中，所用抗体片段是Fab，F(ab)2片段，或含一条重免疫球蛋白链及一条轻免疫球蛋白链的抗体单体。本发明的抗体片段可通过用内肽酶处理全抗体得到，所述内肽酶例如：木瓜蛋白酶，胃蛋白酶，或无花果蛋白酶，及也通过遗传加工方法制备。
在本发明的其中一个实施方式中，药物组合物中的制剂可通过设计用于口服施用的顺势疗法稀释液(势液)或几种顺势疗法稀释液(势液)的混合物呈现。
在本发明的另一实施方式中，药物组合物包括针对提及的肽中的2或3种产生的全抗体或抗体片段的混合物。
在设计本发明的药学试剂中，在试剂设计用于不同于人的脊椎动物的情况中，被靶向的肽序列可就物种特异性进行修正。
在本发明的其中一个实施方式中，公开了药物组合物的制备方法，其至少包括以下步骤，有利地与一或多个经典病毒降低步骤组合，如酸处理，纳米过滤或UV曝光：
(1)肽合成，
(2)与匙孔青贝血蓝蛋白偶联(Keyhole Limpet Haemocyanin)，
(3)用肽-KLH缀合物免疫动物，
(4)免疫血清的收集及初步纯化，
(5)在蛋白A上亲和纯化，
(6)在KLH-BrCN-琼脂糖上纯化或在肽上亲和纯化，
(7)任选通过离子交换层析纯化
(8)可能重复的连续稀释及根据描述于顺势疗法药典的技术势能化，
(9)制备液体或固体剂型。
方法可包括一或多个进一步步骤，例如：加入一或多种赋形剂，粒化步骤，压片步骤等。在连续稀释及根据描述于顺势疗法药典的技术势能化的情况中，通过常规筛选选择最有效的势液或的势液的组合。
【本发明的有益效果】
由于其作用模式涉及针对病毒的先天性和获得性宿主反应的调节，根据本发明设计的药物组合物能使广范围的病毒所致的疾病的有效及安全的治疗或预防，基本上无关于负责疾病的确切的病毒类型，这使用其他治疗剂目前还不可能。
【定义】
本文所用的术语″抗体″指单克隆或多克隆抗体(免疫球蛋白)分子。如本文所用术语全长抗体的″抗原-结合片段″(或简单为″抗体部分″或″片段″)指保留特异性地结合目的靶的能力的全长抗体的一或多种片段。术语全长抗体的″抗原-结合片段″所涵盖的结合片段之例包括(i)Fab片段，由VL，VH，CL及CH1结构域构成的单价片段；(ii)F(ab′).sub.2片段，包括于铰链区通过二硫键连接的2个Fab片段的二价片段；(iii)由VH及CH 1结构域构成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL及VH结构域构成的Fv片段，(v)dAb片段(Wardet al.，(1989)Nature 341：544-546)，其由VH结构域构成；及(vi)保持功能性的分离的互补性决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的2个结构域，VL及VH被分离的基因编码的，但它们可使用重组方法通过能使它们制成为单个蛋白链的合成的接头连接，其中VL及VH区成对形成单价分子，它称为单链Fv(scFv)。见例如，Bird et al.(1988)Science 242：423-426；and Huston et al.(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883。任选地，根据本发明，抗体是IgG抗体，特别是IgG1。F(ab′)2指可在胃蛋白酶切割后获得的抗体片段，及由经铰链区二硫键连接的轻链及部分重链构建。Fab片段可从完整的抗体或从F(ab′)2，通过铰链区的木瓜蛋白酶消化获得，及含一条轻链及一部分重链。抗体片段也可通过合成或通过本领域中描述的重组方法得到。
″抗体特异性″是抗体固有的性质，其表征它们以高亲和性(结合)常数(Ka)结合相应抗原的相应表位的能力。可认为特异于特定抗原的抗体的Ka位于105～1010M-1的范围内(Foote J，Eisen HN.Kineticand affinity limits on antibodies produced during immune responses.Proc Natl Acad Sci U S A.1995Feb 28；92(5)：1254-6.)。Ka可通过均对于单克隆抗体及对于多克隆抗体的平衡透析或Biacore技术测量，其中认为是混合物的平均Ka(Murphy KM，Travers P，Walport M.Janeway′s Immunobiology.5th edition.Garland Science Textbooks，2001，Appendix I，paragraph A-9，Figure A.11)。
″肽序列相似性″。蛋白序列比较以序列同一性或序列相似性的方式指定。其中根据本发明进行靶肽氨基酸序列之间的比较，2个序列之间的序列同一性或相似性水平可包括2个序列之间具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％，甚至更优选至少95％，及最优选至少99％序列同一性或相似性。″同一″氨基酸序列指当比对2个序列时，序列同一性百分率，即具有同一氨基酸的位置数除以序列的较短者中的氨基酸数，高于70％，优选至少90％，甚至更优选至少95％，最优选至少99％。2个氨基酸序列的比对及比较使用Altschul等人(1997)描述的BLAST算法进行(Altschul S.F.，Madden T.L.，A.A.，Zhang J.，Zhang Z.，Miller W.，Lipman D.J.GappedBLAST and PSI-BLAST：a new generation of protein database searchprograms.Nucleic Acids Res.25：3389-3402(1997).)。
本发明的药物组合物的施用途径包括：肠内(任何形式的涉及从口到肛门的消化道任何部分的施用，例如：口服，经口，等)，肠胃外(通过注射，输注，经粘膜，经皮，或吸入性应用)，或局部途径。
本发明中的″制剂″指″药物物质与不同化学物质组合产生药品的处理产物″。
″顺势疗法技术″或″描述于顺势疗法药典的制备方法″，包括制备顺势疗法药品实践中采用的全部技术及方法，例如，详细描述于德国顺势疗法药典(GHP，Homoopathisches Arzneibuch，Translation ofthe 5th Supplement(1991)to the 1978 edition，DeutscherApotheker-Verlag Stuttgart，pp.27-82)或任何其他EU国家或美国的国家顺势疗法药典。对于液体剂型的顺势疗法技术通常包括将起始物质(也称为′浓储物′，或′母酊剂′)暴露于用醇或水稀释的重复的循环，然后通过至少10次强撞击弹性体来剧烈摇动，此处理也称为″势能化″，″稀释增效法″，或″振荡″。通过所述方法产生的溶液称为′顺势疗法稀释液′，或′势液′。顺势疗法中规则使用3种势液规格：厘米或″C规格″，其中物质在各阶段稀释100倍；十分或″X规格″，其中物质在各阶段稀释10倍；及″LM规格″，其中物质在各阶段稀释50000倍。稀释可在对于各新势液的新容器中发生(传统方法)，或除去99％的之前稀释液后在相同玻璃容器中发生(所谓的Korsakovian稀释液，其有时缩写为K或″K规格″)。通常将C12以下的顺势疗法势液称为′低度稀释液′，C12及C30的顺势疗法势液称为′中度稀释液′，C30以上的顺势疗法势液称为′高度稀释液′。
【最佳实施方式】
本发明的最佳实施方式示于以下实施例。
【实施例1】药物组合物的制备
制备方法包括以下基本步骤，偶有的试剂灭活及除去步骤未提及：
(1)肽合成。
(2)与KLH偶联。
(3)用肽-KLH缀合物免疫兔。
(4)免疫血清的收集及初步纯化(硫酸铵沉淀)。
(5)蛋白A纯化，以移除非-IgG蛋白。
(6)在KLH-BrCN-琼脂糖上纯化，以移除抗-KLH抗体。或者，此步骤可进行在靶肽上亲和纯化，以及额外的离子交换层析。
(7)片段化(通过使用内肽酶，及随后除去Fc部分以产生Fab，F(ab)2片段，或通过重链间二硫键的还原及S-烷化反应产生抗体半)。步骤7是可选的。
(8)可能地，通过记载于既有的顺势疗法药典(德国，法国，欧洲，英国，美国，印度)之一的方法之一稀释及势能化。
(9)根据顺势疗法药典制备液体或固体剂型。
如此制备的药物组合物含有效治疗量或量的一或多种针对一或多种选自下列的肽的全多克隆兔抗体及抗体Fab片段：
3型Toll-样受体序列(NH2)FYWNVSVHRVLGFKE(COOH)[FYW h，SEQ ID NO：1]，
3型Toll-样受体序列(NH2)EYAAYIIHAYKD(COOH)[EYAh，SEQ ID NO：2]，
干扰素γ受体β链序列(NH2)LIKYWFHTPPSIPLQIEEYL(COOH)[LIK h，SEQ ID NO：3]，
干扰素γ受体α链序列(NH2)SIILPKSLISVV(COOH)[SIIh，SEQ ID NO：4]，及
(5)它们的混合物。
【实施例2】病毒感染动物模型中药物组合物的功效
在鼠流感宿主抗性模型中评价基于特异性抗体及抗体片段的本发明的药物组合物的功效，及与非本发明的组合物的功效比较。
根据顺势疗法技术用水稀释后测试以下起始物质(将相应人靶肽的小鼠对应物用于产生抗体)；水溶液制剂中活性剂的浓度为0.1％以下：针对下列肽的全多克隆兔抗体及抗体Fab片段：
(1)自Toll样受体3的FYWNVSVHRILGFKE(′FYW′)(发明)(FYW m，SEQ ID NO：5)；
(2)自Toll样受体3的EYTAYIIHAHKD(′EYT′)(发明)(EYTm，SEQ ID NO：6)；
(3)自干扰素γ受体2的KYWFQAPPNIPEQIEEYL(′KYW′)(发明)(KYW m，SEQ ID NO：7)；
(4)自干扰素γ受体1的SIMLPKSLLSVV(′SIM′)(发明)(SIM m，SEQ ID NO：8)；
(5)自干扰素γ受体1的MASGYDKPHMLVD(′MAS′)(非本发明的)(MAS，SEQ ID NO：9)；
(6)自Toll样受体3的LEERDFEAGVLG(′LEE′)(非本发明的)(LEE，SEQ ID NO：10)；
(7)针对小鼠干扰素γ(IFNg)的全多克隆兔抗体(非本发明的)；
(8)兔免疫前血清(阴性对照)。
将试剂在饮用水中稀释1∶2，及在病毒攻击Balb/c雌性小鼠(8周龄，14～20g)之前5天及之后10天自由供给。阳性对照组小鼠接受2个鼻内剂量的重组小鼠干扰素α(IFNa)，4×103U/小鼠，2×(感染之前24小时及4小时)。
在第0天，动物用异氟烷麻醉，及用小鼠-适应的流感病毒，作为浓储物病毒的10-2稀释液(大致4×104噬斑形成单位)，以50mcL(50μl)的体积经鼻内感染。
病毒攻击前一天起始，每天对各小鼠评价体重及临床状态。临床观察分值是0(健康)，1(稍微皱皮)，2(皱皮)，3(皱皮/驼背的姿势)，4(垂死/死亡)。
通过以下端点判断所测试剂的功效：(1)临床感染的持续时间(有临床观察分值＞0的天数)；(2)临床感染的总体严重性(连续的临床分值之和)。通过ANOVA评价全部所测组之间的差异的统计学意义，及Turkey测试用于评估成对的组内差异。对于两个端点的ANOVA显示，组间结果差异统计学显著。详细的结果列于以下表1。
表1
Figure BDA0000044151660000121
*-Ab代表′抗体′。
结果显示，相当意外地，使用针对几种靶肽(FYW，EYT，KYW，及SIM)的以已高度稀释的组合物的形式全抗体及抗体Fab片段可显著降低小鼠中的流感宿主抗性模型(其最接近地重现相应人疾病)中的临床感染的严重性和/或持续时间(中等流感，伴随体重减轻＞10％)。
对于抗体的正确的肽靶选择似乎对于功效是关键的，WO2005000350A(EPSHTEIN OI)06.01.2005公开的及EP1295606A(EPSHTEIN O.I.)26.03.2003中提及的产品，以及针对LEE及MAS肽的全抗体或抗体片段在模型中均不呈现任何显著的治疗效果。
用本发明的组合物治疗小鼠的发现可外推到治疗人，用于治疗或预防病毒或病毒混合物(尤其是人抗性病毒)所致的疾病。
【实施例3】不同施用途径的功效
在鼠流感宿主抗性模型中评价基于用2种不同施用途径使用的抗体的药物组合物的功效。
测试以下样品(如实施例2中指定肽靶)：
样品1。用盐溶液稀释的针对FYW肽的全抗体。将此制剂以2次腹膜内注射施用(各10ng/kg)：病毒攻击之前24小时及病毒攻击后24小时。
样品2。用盐溶液稀释的针对FYW肽的全抗体，浓度10ng/mL。将此制剂鼻内供给，0.05mL(0.5ng)/小鼠，每天两次，病毒攻击之前持续5天及病毒攻击后持续10天。
样品3。如样品1配制及施用的兔免疫前血清(阴性对照)。
样品4。如样品2配制及施用的兔免疫前血清(阴性对照)。
阳性对照组小鼠接受2个鼻内剂量的重组小鼠干扰素α(IFNa)，4×103U/小鼠，2×(感染之前24小时及4小时)。
用异氟烷麻醉Balb/c雌性小鼠(8周龄，14～20g)，及用小鼠-适应的流感病毒，作为浓储物病毒的10-2稀释液(大致4×104噬斑形成单位)，以50mcL的体积经鼻内感染。
每天监控感染的临床过程，与实施例2使用相同评分及端点。详细的结果列于以下表2。
表2
Figure BDA0000044151660000131
结果显示，用腹膜内途径(以10ng/kg的剂量)及鼻内制剂(以0.5ng/小鼠的剂量)的针对特异性TLR3肽的全抗体在小鼠的非-致死流感治疗中有效。
也用更高治疗性剂量观察了本发明的组合物的效率。
【实施方式】
针对肽的全抗体的高度稀释的组合物(可能以顺势疗法组合物的形式)的使用不是本发明的唯一的实施方式，但是，此方法的明显的优点是成本效益(由于制备相对简单及起始物质经济)及内在于得到的旨在用于口服施用的药品的安全性。
作对描述于以上实施例的本发明的实施方式的替代，抗体片段可通过遗传加工方法得到。治疗剂也可同时包括针对最佳靶肽中的2，3或4种产生的抗体或抗体片段。或者，抗体或抗体片段的几种高度稀释的组合物(可能为顺势疗法势液)的混合物可用于一个治疗剂/组合物和/或在一个治疗性处理中，例如：施用一种活性剂之后施用另一活性剂。如实施例中所示，在不同动物物种治疗中，可考虑靶肽的物种特异性。也可使用不同于口服的高度稀释的组合物(可能为顺势疗法剂型)。
由于本发明的治疗剂的分子靶代表涉及针对病毒感染的先天性和获得性宿主反应的通用的调控分子，根据本发明的药学试剂可用于不同于流感病毒的已知的或新出现的病毒，及所述不同病毒的混合物所致的疾病，所述病毒选自但不限于以下列表：腺病毒；冠状病毒；柯萨奇病毒；爱泼斯坦-巴尔病毒；黄病毒(西尼罗病毒，登革热病毒，蜱传脑炎病毒，黄热病毒)；甲型肝炎病毒；乙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒(黄病毒)；1，2，8型单纯疱疹病毒；巨细胞病毒；人免疫缺陷病毒(HIV)；流感病毒；麻疹病毒；人变性肺病毒；腮腺炎病毒；诺如病毒(及其他杆状病毒)；人乳头瘤病毒；副流感病毒；脊髓灰质炎病毒；狂犬病病毒；呼吸道合胞病毒；鼻病毒(普通感冒的主要原因)；轮状病毒；风疹病毒；水痘-带状疱疹病毒。
剂量方案可取决于药品的选定的药物制剂，确切的病毒感染的性质及待治疗的确切疾病选择或调节。一般而言，顺势疗法制剂的情况中，预防性使用将要求欠频繁的摄取(每天1～3次)；在急性条件下，可用更频繁的摄取(每天达7～10次)开始治疗，及随后减至每天3～4次直到完全解决症状。最佳剂量方案的选择在药物开发期间进行的适当的实验的限制内。
【工业实用性】
本发明可应用于制备用于预防及治疗人及兽医学实践中广范围的医疗状况的有效及安全的药物组合物及药物。
Figure IDA0000046763610000021
Figure IDA0000046763610000031

Claims (12)

1.用于治疗人及其他脊椎动物中流感病毒所致的疾病的药物组合物，所述组合物含有效治疗量或制剂的特异于3型Toll-样受体肽序列（NH2）FYWNVSVHRVLGFKE（COOH）的全抗体或所述抗体的抗原-结合片段。
2.权利要求1中定义的药物组合物，其用作旨在肠内，肠胃外或局部施用的药物，所述肠内施用包括口服施用，所述肠胃外施用包括舌下施用。
3.权利要求1的药物组合物，其中所述制剂使用包括多个循环的连续稀释及垂直摇动的技术制备。
4.权利要求1的药物组合物，其中所述制剂使用包括多个循环的连续稀释及垂直摇动的技术，通过描述于顺势疗法药典的制备方法制备。
5.权利要求1的药物组合物，其中所述抗体的抗原-结合片段是Fab，F（ab）2片段，或含一条重免疫球蛋白链及一条轻免疫球蛋白链的抗体单体。
6.权利要求1的药物组合物，其中所述抗体的抗原-结合片段通过用内肽酶处理全抗体而得到。
7.权利要求1的药物组合物，其中所述抗体的抗原-结合片段通过用木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或无花果蛋白酶处理全抗体而得到。
8.权利要求1的药物组合物，其中所述抗体或所述抗体的抗原-结合片段通过遗传加工方法得到。
9.权利要求1的药物组合物，其中所述‘制剂’指设计用于口服施用的顺势疗法稀释液或几种顺势疗法稀释液的混合物。
10.权利要求1的药物组合物，其中所述被靶向的肽序列在所述全抗体或所述抗体的抗原-结合片段设计用于不同于人的脊椎动物的情况中就物种特异性被修正。
11.特异于3型Toll-样受体肽序列（NH2）FYWNVSVHRVLGFKE（COOH）的一或多种全抗体或所述抗体的抗原-结合片段用于制备治疗人及其他脊椎动物中流感病毒所致的疾病的药物组合物的用途。
12.制备权利要求1的药物组合物的方法，至少包括以下步骤：
（1）肽合成，
（2）与KLH偶联，
（3）用肽-KLH缀合物免疫实验动物，
（4）免疫血清的收集及初步纯化，
（5）在蛋白A或G或免疫球蛋白结合配体上亲和纯化，
（6）在KLH-BrCN-琼脂糖上纯化，或在所述肽上亲和纯化，及任选的离子交换纯化，
（7）重复的连续稀释，及有利地根据描述于顺势疗法药典的技术势能化，
（8）制备液体或固体剂型。
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