CN101138392A

CN101138392A - 一种饲用微生态制剂

Info

Publication number: CN101138392A
Application number: CNA2007100354735A
Authority: CN
Inventors: 黄兴国; 贺建华; 杨承剑; 李宗军; 黄璜; 文利新
Original assignee: CHANGSHA GREEN LEAF BIOTECHNOLOGY Co Ltd; Hunan Agricultural University
Current assignee: CHANGSHA LVYE BIOTECHNOLOGY CO.,LTD.
Priority date: 2007-07-30
Filing date: 2007-07-30
Publication date: 2008-03-12
Anticipated expiration: 2027-07-30
Also published as: CN101138392B

Abstract

本发明提供了一种饲用微生态制剂。该制剂含有益活菌总数为9×10⁸CFU/g～1×10¹⁰CFU/g，其中德氏乳杆菌为4×10⁸CFU/g～1×10¹⁰CFU/g，枯草芽胞杆菌为4×10⁸CFU/g～1×10¹⁰CFU/g，奇异酵母为1×10⁸CFU/g～1×10¹⁰CFU/g。本发明的饲用微生态制剂含有的活菌是针对动物肠道特性而筛选出来的，对动物消化道环境有很强的适应性，有利于维持动物肠道内环境的微生态平衡，在保证畜禽产品的安全性、保护生态环境方面具有重要意义。

Description

一种饲用微生态制剂

技术领域

本发明涉及饲料工业和畜牧养殖业领域，具体涉及一种利用啤酒糟为主要原料发酵生产的饲用微生态制剂。

背景技术

目前，我国主要采用化学药品和抗生素对畜禽的慢性和亚急性腹泻病进行治疗和预防，由于发病原因复杂而收效不大，因此造成用药品种不断更换、药品用量越来越大，由此细菌耐药性大大增强，结果使得畜禽产品中抗生素和化学物质残留量严重超标，在国际市场上明显缺乏竞争力。比如我国向日本出口的肉鸡就因“克球粉”超标，向德国出口的蜂蜜因“杀虫咪”超标被相继退回；运往香港的生猪也被检出了β-兴奋剂，此外，我国出口的畜产品还有因安眠酮类药物、雌激素、抗菌素类药物超标而被取消出口资格的先例。因此，开发和应用能够替代抗生素的绿色饲料添加剂成为目前亟待解决的问题。

饲用微生态制剂是采用已知有益微生物，经培养、发酵、干燥、加工等特殊工艺制成的含有活菌并用于动物饲养的生物制剂或活菌制剂。其他名称如饲用微生物添加剂、益生素、益生菌剂、益生元、合生素等都属于饲用微生态制剂范畴。饲用微生态制剂属于营养保健类饲料添加剂，具有无副作用、无残留污染、不产生抗药性等优点，具有抗病、治病、促生长等多种功能。从其内的有益菌种来讲，美国发布了40种安全有效的有益菌种，我国农业部允许使用的有益菌种有干酪乳杆菌、嗜乳酸杆菌、乳链球菌、枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、啤酒酵母菌、沼泽红假单胞菌等12种。依活菌种的组成，有单一菌制剂和复合菌制剂。市售的多为复合菌制剂，只是其中的菌种种类和数量有别而异。

目前国内外关于利用啤酒糟生产饲料蛋白的报道较多：以糖糟和啤酒糟为原料，接入酵母菌生产蛋白饲料，实验结果表明，在糖糟70％、啤酒糟30％的配比条件下，固态法发酵发酵基质粗蛋白从25％提高到36％[郭建华，窦少华，邱然，等.利用糖糟与啤酒糟生产蛋白饲料的研究.饲料工业，2005，26(21)：48～50.]。也有利用不同原料配比进行混菌发酵啤酒糟来提高其蛋白质的量的研究，结果表明，利用木霉、黑曲霉和酵母混菌发酵，啤酒糟和麦夫皮配比为4∶1时，在28～30℃，含水量65％～70％条件下，发酵3天后蛋白质质量分数提高到35％以上[全艳玲，解生权，孟素华.混菌固态发酵啤酒糟的研究.鞍山钢铁学院学报，2002，25(3)：180～182.]。还有研究以啤酒糟为主要原料，经过初筛、复筛和多菌株优化组合发酵，筛选到7株发酵啤酒糟的优良菌株，最优发酵产物的粗蛋白含量高大40.9％，比对照提高42.5％[何佳，田娟，赵启美.啤酒糟发酵蛋白饲料优良菌种的筛选.洛阳农业高等专科学校学报，1999，19(4)：29～30.]。

以上技术方案涉及的菌株主要是为了提高饲料中的蛋白含量而筛选出来的，活菌所起作用单一且对动物消化道环境的适应性不强，在动物消化道内的低酸性及胆盐和不同酶的共同作用下很快死亡。目前尚未见多菌固态发酵啤酒糟生产饲用微生态制剂的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有微生态制剂中活菌所起作用单一且对动物消化道环境的适应性不强的缺点，提供了一种多菌种配合使用的饲用微生态制剂，该制剂对动物消化道环境有很强的适应性，有利于维持动物肠道内环境的微生态平衡并能极大地提高动物免疫力。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

本发明的微生态制剂呈黄褐色粉状，含水量≤10％，含有益活菌总数为9×10⁸CFU/g～1×10¹⁰CFU/g，其中德氏乳杆菌(保藏号CCTCC M 207096)为4×10⁸CFU/g～1×10¹⁰CFU/g，枯草芽胞杆菌(保藏号CCTCC M 207097)为4×10⁸CFU/g～1×10¹⁰CFU/g，奇异酵母(保藏号CCTCC M 207098)为1×10⁸CFU/g～1×10¹⁰CFU/g。

本发明的饲用微生态制剂的制备方法为：

1)制备种子液：将德氏乳杆菌(保藏号CCTCC M 207096)、枯草芽胞杆菌(保藏号CCTCC M 207097)、奇异酵母(保藏号CCTCC M 207098)分别接种至MRS液体培养基、肉汤液体培养基、马铃薯葡萄糖液体培养基中，37℃下恒温培养18～24小时；

2)制备发酵用固体培养基：按重量比将风干后啤酒糟100份、麸皮10～15份、葡萄糖3～5份、豆渣5～8份、尿素1～2份、硫酸铵0.5～1.0份、磷酸二氢钾0.5～1份、硫酸镁0.2～0.3份、硫酸锰0.2～0.3份、氯化钙0.2～0.3份，粉碎，过40目筛后混合均匀，加入蒸馏水100～120份，充分拌匀后121℃下高压灭菌15分钟，冷却至室温备用；

3)固态发酵：将步骤1)制备的三种菌种子液按体积比1～2∶1～2∶1～2混合，以10％～15％(V/W)的接种量将混合菌液加入到已灭菌的啤酒糟培养基中，30～34℃下发酵36～48小时，制得发酵产物；

4)将发酵产物进行真空冷冻干燥，即制得饲用微生态制剂。

本发明的优势在于：

1)本制剂为多菌联合制成的复合型微生态制剂，与单一菌制剂相比较，多种占优势的生理性细菌所起的协同作用更有利于恢复和维持动物肠道内环境的微生态平衡；

2)本制剂所用菌种是针对动物肠道特性筛选出来的，对动物消化道环境有很强的适应性，能够在动物消化道内长时间存活，对大肠杆菌等有害菌的生长繁殖具有很强的抑制能力，而对于乳酸菌、双歧杆菌等有益菌的生长繁殖则具有促进作用，因此比一般的微生态制剂具有更强的适应性及针对性；

3)本制剂含有的益菌及其在生长代谢过程中所产生的诸多有益代谢产物，它们共同作用于动物消化道，更有利于促进动物生长及免疫力的提高；

4)本发明的饲用微生态制剂不仅能为动物的生长提供营养，还能提高动物机体免疫力，从而避免了化学药品和抗菌素滥用问题，保证了畜禽产品的安全性。

具体实施方式

实施例1：

1、三种菌的保藏情况：

D、E、F三种菌已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏日期均为2007年3月16日。

CCTCC保藏号	菌株号	菌种名称
CCTCC保藏号	菌株号	菌种名称	CCTCC M 207096CCTCC M 207097CCTCC M 207098	菌株D菌株E菌株F	德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)枯草芽胞杆菌(Bacillussubtilis)奇异酵母(Saccharomyces paradozus)

德氏乳杆菌属于乳杆菌，枯草芽孢杆菌属于芽孢杆菌；奇异酵母属于酵母。

2、D、E、F三种菌的形态、生理生化及代谢特征：

菌株D的形态、生理生化及代谢特征

检测项目	结果	检测项目	结果	检测项目	结果
检测项目	结果	检测项目	结果	检测项目	结果	革兰氏染色细胞形状细胞直径＞1.0μm形成内生孢子芽孢形成孢囊膨大芽孢形状伴孢晶体接触酶氧化酶淀粉水解D-葡萄糖D-木糖L-阿拉伯糖D-甘露醇D-甘露糖吐温80明胶	+长杆状++偏端生-卵圆形---++---++-	β-半乳糖苷酶龙胆二糖α-D-乳糖麦芽糖鼠李糖D-松三糖D-密二糖D-阿洛酮糖D-棉籽糖水杨苷七叶苷D-山梨糖蔗糖D-海藻糖木糖醇乙酸α-羟基丁酸	+/---+/--------+++/-+++/-	D-阿拉伯醇D-纤维二糖D-果糖墨角藻糖利用柠檬酸盐硝酸盐还原D-半乳糖核糖丙酮酸甲基琥珀酸甲基丙酸丙酮酸琥珀酸L-丙氨酸甘油m-肌醇β-羟基丁酸	--+++--+-+++-+/-+/-+/-+/-

菌株E的形态、生理生化及代谢特征

检测项目	结果	检测项目	结果	检测项目	结果
检测项目	结果	检测项目	结果	检测项目	结果	革兰氏染色细胞形状细胞直径＞1.0μm形成内生孢子芽胞形成孢囊膨大芽胞形状伴孢晶体接触酶淀粉水解明胶液化D-葡萄糖D-木糖L-阿拉伯糖D-甘露醇D-甘露糖吐温80明胶	+长杆状++偏端生-卵圆形-+++++-+/-+++	β-半乳糖苷酶龙胆二糖α-D-乳糖麦芽糖鼠子糖D-松三糖D-密二糖D-阿洛酮糖D-棉籽糖水杨苷七叶苷D-山梨糖蔗糖D-海藻糖木糖醇乙酸α-羟基丁酸	+/-+-+-+++-+++/-++---	D-阿拉伯醇D-纤维二糖D-果糖墨角藻糖利用柠檬酸盐硝酸盐还原D-半乳糖核糖丙酮酸甲基琥珀酸甲基丙酸丙酮酸琥珀酸L-丙氨酸甘油m-肌醇β-羟基丁酸	-++-+--+++-++++++

菌株F的形态、生理生化及代谢特征

检测项目	结果	检测项目	结果	检测项目	结果
检测项目	结果	检测项目	结果	检测项目	结果	菌苔生长表面颜色状态边缘细胞形态繁殖方式假菌丝可溶性淀粉吐温80L-阿拉伯糖麦芽糖D-山梨糖D-半乳糖D-阿拉伯醇D-纤维二糖	圆形、凸起白色光滑全缘椭圆形芽殖-+/---+/--+/---	i-赤藻糖醇麦芽三糖D-松三糖核糖醇D-甘露糖D-甘露醇D-棉籽糖L-鼠李糖蔗糖山梨醇D-核糖D-木糖D-海藻糖乙酸琥珀酸	-++/--++/-+/--+------	D-蜜二糖α-D-葡萄糖D-甘露醇水苏糖龙胆二糖松二糖N-乙酰-D-葡萄糖胺山梨醇乙酸甘油尿素1，5-酮戊二酸L-亮氨酸L-天冬氨酸水杨苷	-++/-+/--+/-+/---+/------

3、发酵用固体培养基的制备：

按重量比将风干后啤酒糟100份、麸皮10～15份、葡萄糖3～5份、豆渣5～8份、尿素1～2份、硫酸铵0.5～1.0份、磷酸二氢钾0.5～1份、硫酸镁0.2～0.3份、硫酸锰0.2～0.3份、氯化钙0.2～0.3份粉碎，过40目筛后混合均匀，加入蒸馏水100～120份，充分拌匀后121℃下高压灭菌15分钟，冷却至室温备用。

4、多菌固态发酵：

将D、E、F菌分别从试管斜面上各取一环菌苔接种至50mlMRS液体培养基、50ml肉汤液体培养基、50ml马铃薯葡萄糖液体培养基中，37℃恒温培养18小时，然后将各菌悬液按1∶2∶1(D菌∶E菌∶F菌)体积混合，按10％(V/W)的比例加入到已灭菌的以啤酒糟为主要原料的培养基中，混合均匀，然后在30℃下发酵36小时，再经过冷冻干干燥后即可。

最终产物的理化特征及生物性质：黄褐色，粉状；含水量≤10％；含有益活菌总数9×10⁸CFU/g～1×10¹⁰CFU/g，其中D菌含量为4×10⁸CFU/g～1×10¹⁰CFU/g，E菌含量为4×10⁸CFU/g～1×10¹⁰CFU/g，F菌含量为1×10⁸CFU/g～1×10¹⁰CFU/g。

实施例2：

其它同实施例1。将D、E、F菌分别从试管斜面上取一环菌苔接种至50mlMRS液体培养基、50ml肉汤液体培养基、50ml马铃薯葡萄糖液体培养基中，37℃恒温培养21小时，然后将各菌悬液按2∶1∶2(D菌∶E菌∶F菌)的体积比混合，按12％(V/W)的比例加入到已灭菌的以啤酒糟为主要原料的培养基中，混合均匀，然后在32℃下发酵42小时，再经过冷冻干燥后即可。

实施例3：

其它同实施例1。将D、E、F菌分别从试管斜面上取一环菌苔接种至50mlMRS液体培养基、50ml肉汤液体培养基、50ml马铃薯葡萄糖液体培养基中，37℃恒温培养24小时，然后将各菌悬液按1∶1∶2(D菌∶E菌∶F菌)的体积比混合，按15％(V/W)的比例加入到已灭菌的以啤酒糟为主要原料的培养基中，混合均匀，然后在34℃下发酵48小时，再经过冷冻干燥后即可。

实施例4：

本发明所研制的微生态制剂在湖南网岭园艺场工厂化猪场以0.1％的比例应用于84头初始体重20kg左右的生长猪的日粮当中，试验期为28天，试验结果表明，与抗生素组(吉它霉素和土霉素)相比，本发明所研制的微生态制剂有利于降低生长猪的料肉比，平均降低了0.34，而腹泻率则降低了4.94％，日粮中粗脂肪和粗纤维的利用率分别提高了4.54％、5.33％，猪粪样中的大肠杆菌显著降低，降低幅度为0.63×10⁷CFU/g，同时乳酸菌和双歧杆菌数量都分别提高了4.87×10⁷、0.7×10⁷CFU/g。

实施例5：

本发明所研制的微生态制剂在湖南农科院种猪场以0.3％的比例应用于60头初始体重为10kg左右的断奶仔猪的日粮当中，试验期为28天，试验结果表明，与抗生素组(金霉素)相比，本发明所研制的微生态制剂有利于提高仔猪的生长性能，降低其料肉比，平均降低了0.22，而腹泻率则降低了3.16％，粗蛋白、粗脂肪、粗纤维的利用率分别提高了2.86％、4.25％、4.14％，仔猪粪样中的大肠杆菌降低幅度为0.44×10⁷CFU/g，同时乳酸菌和双歧杆菌数量都有升高，其升高幅度分别为3.04×10⁷、1.42×10⁷CFU/g。

Claims

1.一种多菌种配合使用的饲用微生态制剂，其特征在于：该微生态制剂呈黄褐色粉状，含水量≤10％，含有益活菌总数为9×10⁸CFU/g～1×10¹⁰CFU/g，其中德氏乳杆菌为4×10⁸CFU/g～1×10¹⁰CFU/g，保藏号为CCTCC M 207096；枯草芽胞杆菌为4×10⁸CFU/g～1×10¹⁰CFU/g，保藏号CCTCC M 207097；奇异酵母1×10⁸CFU/g～1×10¹⁰CFU/g，保藏号CCTCC M 207098。