CN104126734B - 一种兽用微生态制剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明要解决的技术问题是提供一种兽用微生物饲料添加剂。本发明的技术方案是一种兽用微生态制剂，包括枯草芽孢杆菌菌粉1～10份，地衣芽孢杆菌菌粉1～10份，酿酒酵母菌粉1～10份，EM菌菌粉1～3份。本发明还提供了所述兽用微生态制剂的制备方法。本发明的兽用微生物饲料添加剂可加快牲畜的生长，减少疾病的发生，替代抗生素的使用。

Description

一种兽用微生态制剂及其制备方法
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种兽用微生态制剂及其制备方法。
背景技术
由于抗生素在畜禽饲养上的滥用，近几年来不断出现了严重的食品安全事件，已引起各国政府的高度重视，欧盟和美国等许多国家都已立法限制抗生素在畜禽养殖上的使用。
饲用微生态制剂是作为饲料添加剂使用的微生态制剂。它不仅能促进动物肠道正常微生物区系的建立，增强畜禽免疫力，减少疾病的发生，促进生长，提高畜禽日增重，改善畜产品的质量，还能产生多种氨基酸、维生素及一些未知促生物质；还能刺激肠道内免疫功能，及时杀死入侵病菌，又能减少氨及其他腐败物质的产生，阻碍有害物质及废物的吸收。因此饲用微生态制剂被认为是最有潜力替代抗生素的产品。
2013年我国农业部第2045号公告公布了可以直接饲喂畜禽的饲用级微生物添加剂菌种34种，即地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、德式乳杆菌乳酸亚种、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母、沼泽红假单胞菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌、嗜热链球菌、罗伊氏乳杆菌、动物双歧杆菌、黑曲霉、米曲霉、迟缓芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、纤维二糖乳杆菌、发酵乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、产丙酸丙酸杆菌、布氏乳杆菌、副干酪乳杆菌、凝结芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌。依活菌种的组成，有单一菌制剂和复合菌制剂。市售的多为复合菌制剂，只是其中的菌种种类和数量有别而已。
目前，市场上的微生态制剂存在以下几个方面的问题：(1)活菌含量低；(2)对高温、胃酸和胆盐不稳定，致使只有少数菌株进入肠道后仍具有活性，达不到发挥作用所需的活菌数量；(3)不稳定，保存期短。由于微生态制剂存在的这些问题，从而影响了其在畜禽饲养上的应用效果，限制了微生态制剂的广泛应用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种兽用微生物饲料添加剂。
本发明的技术方案是一种兽用微生态制剂，由下述重量配比的成分组成：枯草芽孢杆菌菌粉1～10份，地衣芽孢杆菌菌粉1～10份，酿酒酵母菌粉1～10份，EM菌菌粉1～3份。
优选的，所述兽用微生态制剂由下述重量配比的成分组成：枯草芽孢杆菌菌粉3～5份，地衣芽孢杆菌菌粉3～5份，酿酒酵母菌粉3～5份，EM菌菌粉1～3份。
最优的，所述兽用微生态制剂由下述重量配比的成分组成：枯草芽孢杆菌菌粉3份，地衣芽孢杆菌菌粉3份，酿酒酵母菌粉3份，EM菌菌粉1份。
本发明还提供了所述兽用微生态制剂的制备方法，包括如下步骤：
在无菌条件下，将地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母各自接种到斜面培养基，培养得到斜面种；制备一级液体种；制备二级液体种；分别发酵，得到地衣芽孢杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液和酿酒酵母发酵液；分别将地衣芽孢杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液、酿酒酵母发酵液和液体状EM菌干燥为菌粉；按枯草芽孢杆菌菌粉1～10份，地衣芽孢杆菌菌粉1～10份，酿酒酵母菌粉1～10份，EM菌菌粉1～3份进行混合，即制得本发明的微生物饲料添加剂。
优选的，按照枯草芽孢杆菌菌粉3～5份，地衣芽孢杆菌菌粉3～5份，酿酒酵母菌粉3～5份，EM菌菌粉1～3份进行混合。
其中，所述的培养得到斜面种的操作如下：将地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，在无菌条件下接种于牛肉膏蛋白胨培养基斜面上，28～45℃培养36～48小时，得斜面种；将酿酒酵母在无菌条件下接种于麦芽汁培养基斜面上，28～45℃培养36～48小时，得斜面种。
其中，所述制备一级液体种的操作如下：将地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌与酿酒酵母斜面菌种分别接种至1L三角瓶装液体发酵培养基中，28～45℃，200rpm振荡培养12～36小时，得一级液体种。
其中，所述制备二级液体种的操作如下：将得到的一级液体种接种至300L液体发酵罐中，液体发酵培养基，28～45℃，200rpm，培养18～36小时，得二级液体种。
其中，所述发酵的操作如下：将得到的二级液体种分别接种至2T液体发酵罐，液体发酵培养基，28～45℃，200rpm振荡培养18～36小时，得发酵产物。
其中，所述干燥的操作如下：地衣芽孢杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液、酿酒酵母发酵液和液体状EM菌分别进行真空冷冻干燥，制得纯菌粉。
真空冷冻干燥可使用以下工艺：降温至4℃平衡30min，再降温至-30℃维持60min，降温至-60℃冷冻干燥14h。
进一步的，上述枯草芽孢杆菌的液体发酵培养基为：豆粕粉1～5％w/w，玉米粉1～5％w/w，酵母粉1～5％w/w，鱼粉1～5％，磷酸二氢钾0.1～0.5％w/w，七水硫酸镁0.1～0.5％w/w，碳酸钙0.1～1％w/w；pH7.45，121℃灭菌20min后备用。
进一步的，上述地衣芽孢杆菌的液体发酵培养基为：鱼粉1～％w/w，酵母粉1～5％w/w，大米粉1～5％w/w，七水硫酸镁0.1～0.5％w/w，磷酸二氢钾0.1～1％w/w，氯化钠0.1～0.5％w/w，氯化钾0.1～0.5％w/w，碳酸钙0.1～1％w/w；pH7.2～7.4，121℃灭菌20min后备用。
进一步的，上述酿酒酵母的液体发酵培养基为：葡萄糖1～5％w/w，尿素0.1～1％w/w，磷酸二氢钾0.1～0.5％w/w，硫酸镁0.1～0.5％w/w，玉米浆粉1～5％w/w，pH6.5～7.0；121℃灭菌20min。
本发明的有益效果在于：本发明兽用微生态制剂适当地地选择了合适的菌种进行配合，能很好促进家畜的生长。尤其是促进猪的生长。本发明产品采用全封闭液体发酵方式生产，不会污染杂菌，可完全达到饲料用无毒无害标准。本发明的发酵培养基和工艺使枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌能达到95％以上的芽孢率，所得到的产物基本都是抗逆性很强的芽孢形式，且这两种菌的发酵培养基都是采用农业副产物，生产成本低。本发明采用真空冷冻干燥方法将菌液干粉状态，易于储存和运输，也保证了终产品中有效活菌数的数量，养殖户使用起来也很方便，产品最终有效活菌数达到了50亿/g。
具体实施方式
本发明中，枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和酿酒酵母都是采用全封闭液体发酵方式生产，不会污染杂菌，可完全达到饲料用无毒无害标准。枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌采用本发明的发酵培养基和工艺，能达到95％以上的芽孢率，所得到的产物基本都是抗逆性很强的芽孢形式，且这两种菌的发酵培养基都是采用农业副产物，生产成本低。酿酒酵母发酵采用真空冷冻干燥方式收集发酵产物，能最大程度的保留酿酒酵母的活性，从而保证终产品中有效活菌数的数量。市售EM菌多为液体状态，储存、运输和使用都极为不便，本发明采用真空冷冻干燥方法将其浓缩为干粉状态，与另三种干菌粉配合制成微生态制剂，易于储存和运输，养殖户使用起来也很方便。
下述实施例中菌种选择：选用地衣芽孢杆菌(Baclicus lincheniformis)CICC20446、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CICC10453和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CICC1355。以上菌种均购买于中国普通微生物菌种保藏中心。EM原液为江苏绿科生物技术有限公司出品的EM原液，规格为1000ml/瓶。
以下实施例中：
枯草芽孢杆菌的液体发酵培养基为：豆粕粉1～5％w/w，玉米粉1～5％w/w，酵母粉1～5％w/w，鱼粉1～5％，磷酸二氢钾0.1～0.5％w/w，七水硫酸镁0.1～0.5％w/w，碳酸钙0.1～1％w/w；pH7.45，121℃灭菌20min后备用。
地衣芽孢杆菌的液体发酵培养基为：鱼粉1～％w/w，酵母粉1～5％w/w，大米粉1～5％w/w，七水硫酸镁0.1～0.5％w/w，磷酸二氢钾0.1～1％w/w，氯化钠0.1～0.5％w/w，氯化钾0.1～0.5％w/w，碳酸钙0.1～1％w/w；pH7.2～7.4，121℃灭菌20min后备用。
以下实施例的真空冷冻干燥均使用以下工艺：降温至4℃平衡30min，再降温至-30℃维持60min，降温至-60℃冷冻干燥14h。
酿酒酵母的液体发酵培养基为：葡萄糖1～5％w/w，尿素0.1～1％w/w，磷酸二氢钾0.1～0.5％w/w，硫酸镁0.1～0.5％w/w，玉米浆粉1～5％w/w，pH6.5～7.0；121℃灭菌20min后备用。
实施例1本发明微生态制剂的制备
1、枯草芽孢杆菌菌粉的生产
(1)将枯草芽孢杆菌接种至液体发酵培养基中，1L三角瓶装量100mL，37℃，200rpm振荡培养12小时，得一级液体种。
(2)二级液体种制备：将上述制备的一级液体种，接种至300L液体发酵罐中，装量210L液体发酵培养基，37℃，200rpm，培养12小时，得二级液体种。
(3)发酵生产：将上述制备的二级液体种，分别接种至2T液体发酵罐，装量1.4T液体发酵培养基，37℃，200rpm，培养18小时，得发酵产物。对该产物进行有效活菌数计数，菌浓度可达到100亿/mL，芽孢率为95％。
(4)将上述发酵产物进行离心得菌泥，与1/10原发酵液体积的5％麦芽糊精溶液相混合，置于真空冷冻干燥机中干燥，冷冻温度-60℃，制得该菌的纯菌粉。
2、地衣芽孢杆菌菌粉的生产
(1)将地衣芽孢杆菌接种至液体发酵培养基中，1L三角瓶装量100mL，37℃，200rpm振荡培养12小时，得一级液体种。
(2)二级液体种制备：将上述制备的一级液体种，接种至300L液体发酵罐中，装量210L液体发酵培养基，37℃，200rpm，培养12小时，得二级液体种。
(3)发酵生产：将上述制备的二级液体种，分别接种至2T液体发酵罐，装量1.4T液体发酵培养基，37℃，200rpm，培养18小时，得发酵产物。对该产物进行有效活菌数计数，菌浓度可达到120亿/mL，芽孢率为96％。
(4)将上述发酵产物进行离心得菌泥，与1/10原发酵液体积的5％麦芽糊精溶液相混合，置于真空冷冻干燥机中干燥，冷冻温度-60℃，制得该菌的纯菌粉。
3、酿酒酵母菌粉生产
(1)将酿酒酵母接种至液体发酵培养基中，1L三角瓶装量100mL，32℃，200rpm振荡培养15小时，得一级液体种。
(2)二级液体种制备：将上述制备的一级液体种，接种至300L液体发酵罐中，装量210L液体发酵培养基，32℃，200rpm，培养15小时，得二级液体种。
(3)发酵生产：将上述制备的二级液体种，分别接种至2T液体发酵罐，装量1.4T液体发酵培养基，32℃，200rpm，培养16小时，得发酵产物。对该产物进行有效活菌数计数，菌浓度可达到50亿/mL。
(4)将上述发酵产物进行离心得菌泥，与1/10原发酵液体积的5％麦芽糊精溶液相混合，置于真空冷冻干燥机中干燥，冷冻温度-60℃，制得该菌的纯菌粉。
4、EM菌菌粉生产
将EM原液进行离心得菌泥，与1/10原发酵液体积的5％麦芽糊精溶液相混合，置于真空冷冻干燥机中干燥，冷冻温度-60℃，制得EM菌纯菌粉。
5、配制
将枯草芽孢杆菌菌粉3份，地衣芽孢杆菌菌粉3份，酿酒酵母菌粉3份，EM菌菌粉1份混合，即得微生态制剂产品，产品最终有效活菌数为50亿/g。
实施例2微生态制剂制备
1、枯草芽孢杆菌菌粉的生产
(1)将枯草芽孢杆菌接种至液体发酵培养基中，1L三角瓶装量100mL，28℃，200rpm振荡培养16小时，得一级液体种。
(2)二级液体种制备：将上述制备的一级液体种，接种至300L液体发酵罐中，装量210L液体发酵培养基，28℃，200rpm，培养16小时，得二级液体种。
(3)发酵生产：将上述制备的二级液体种，分别接种至2T液体发酵罐，装量1.4T液体发酵培养基，28℃，200rpm，培养22小时，得发酵产物。对该产物进行有效活菌数计数，菌浓度可达到80亿/mL，芽孢率为95.5％。
(4)将上述发酵产物进行离心得菌泥，与1/10原发酵液体积的5％麦芽糊精溶液相混合，置于真空冷冻干燥机中干燥，冷冻温度-60℃，制得该菌的纯菌粉。
2、地衣芽孢杆菌菌粉的生产
(1)将地衣芽孢杆菌接种至液体发酵培养基中，1L三角瓶装量100mL，28℃，200rpm振荡培养16小时，得一级液体种。
(2)二级液体种制备：将上述制备的一级液体种，接种至300L液体发酵罐中，装量210L液体发酵培养基，28℃，200rpm，培养16小时，得二级液体种。
(3)发酵生产：将上述制备的二级液体种，分别接种至2T液体发酵罐，装量1.4T液体发酵培养基，28℃，200rpm，培养22小时，得发酵产物。对该产物进行有效活菌数计数，菌浓度可达到105亿/mL，芽孢率为95.1％。
(4)将上述发酵产物进行离心得菌泥，与1/10原发酵液体积的5％麦芽糊精溶液相混合，置于真空冷冻干燥机中干燥，冷冻温度-60℃，制得该菌的纯菌粉。
3、酿酒酵母菌粉生产
(1)将酿酒酵母接种至液体发酵培养基中，1L三角瓶装量100mL，28℃，200rpm振荡培养18小时，得一级液体种。
(2)二级液体种制备：将上述制备的一级液体种，接种至300L液体发酵罐中，装量210L液体发酵培养基，28℃，200rpm，培养18小时，得二级液体种。
(3)发酵生产：将上述制备的二级液体种，分别接种至2T液体发酵罐，装量1.4T液体发酵培养基，28℃，200rpm，培养24小时，得发酵产物。对该产物进行有效活菌数计数，菌浓度可达到45亿/mL。
(4)将上述发酵产物进行离心得菌泥，与1/10原发酵液体积的5％麦芽糊精溶液相混合，置于真空冷冻干燥机中干燥，冷冻温度-60℃，制得该菌的纯菌粉。
4、EM菌菌粉生产
将EM菌原液进行离心得菌泥，与1/10原发酵液体积的5％麦芽糊精溶液相混合，置于真空冷冻干燥机中干燥，冷冻温度-60℃，制得EM菌纯菌粉。
5、配制
将枯草芽孢杆菌菌粉3份，地衣芽孢杆菌菌粉3份，酿酒酵母菌粉3份，EM菌菌粉1份混合，即得微生态制剂产品，产品最终有效活菌数为50亿/g。
实施例3微生态制剂制备
1、枯草芽孢杆菌菌粉的生产
(1)将枯草芽孢杆菌接种至液体发酵培养基中，1L三角瓶装量100mL，40℃，200rpm振荡培养10小时，得一级液体种。
(2)二级液体种制备：将上述制备的一级液体种，接种至300L液体发酵罐中，装量210L液体发酵培养基，40℃，200rpm，培养10小时，得二级液体种。
(3)发酵生产：将上述制备的二级液体种，分别接种至2T液体发酵罐，装量1.4T液体发酵培养基，40℃，200rpm，培养16小时，得发酵产物。对该产物进行有效活菌数计数，菌浓度可达到86亿/mL，芽孢率为96％。
(4)将上述发酵产物进行离心得菌泥，与1/10原发酵液体积的5％麦芽糊精溶液相混合，置于真空冷冻干燥机中干燥，冷冻温度-60℃，制得该菌的纯菌粉。
2、地衣芽孢杆菌菌粉的生产
(1)将地衣芽孢杆菌接种至液体发酵培养基中，1L三角瓶装量100mL，40℃，200rpm振荡培养10小时，得一级液体种。
(2)二级液体种制备：将上述制备的一级液体种，接种至300L液体发酵罐中，装量210L液体发酵培养基，40℃，200rpm，培养10小时，得二级液体种。
(3)发酵生产：将上述制备的二级液体种，分别接种至2T液体发酵罐，装量1.4T液体发酵培养基，28℃，200rpm，培养16小时，得发酵产物。对该产物进行有效活菌数计数，菌浓度可达到110亿/mL，芽孢率为95.7％。
(4)将上述发酵产物进行离心得菌泥，与1/10原发酵液体积的5％麦芽糊精溶液相混合，置于真空冷冻干燥机中干燥，冷冻温度-60℃，制得该菌的纯菌粉。
3、酿酒酵母菌粉生产
(1)将酿酒酵母接种至液体发酵培养基中，1L三角瓶装量100mL，40℃，200rpm振荡培养15小时，得一级液体种。
(2)二级液体种制备：将上述制备的一级液体种，接种至300L液体发酵罐中，装量210L液体发酵培养基，40℃，200rpm，培养15小时，得二级液体种。
(3)发酵生产：将上述制备的二级液体种，分别接种至2T液体发酵罐，装量1.4T液体发酵培养基，40℃，200rpm，培养18小时，得发酵产物。对该产物进行有效活菌数计数，菌浓度可达到40亿/mL。
(4)将上述发酵产物进行离心得菌泥，与1/10原发酵液体积的5％麦芽糊精溶液相混合，置于真空冷冻干燥机中干燥，冷冻温度-60℃，制得该菌的纯菌粉。
4、EM菌菌粉生产
将EM原液进行离心得菌泥，与1/10原发酵液体积的5％麦芽糊精溶液相混合，置于真空冷冻干燥机中干燥，冷冻温度-60℃，制得EM菌的菌粉。
5、配制
按质量份将枯草芽孢杆菌菌粉3份，地衣芽孢杆菌菌粉3份，酿酒酵母菌粉3份，EM菌菌粉1份混合，制成微生态制剂产品，产品最终有效活菌数为50亿/g。
实施例4产品本发明微生态制剂的效果试验
本次试验的产品为实施例1制得的产品：按质量取枯草芽孢杆菌菌粉3份，地衣芽孢杆菌菌粉3份，酿酒酵母菌粉3份，EM菌菌粉1份，最终有效活菌数为50亿/g。
本发明所研制的微生态制剂在四川一猪场以每只猪每日摄入5000万有效活菌数的比例应用于100头初始体重10kg左右的幼猪的日粮中(实验组)，试验期为30天。并同时设置同样体重的饲喂基础日粮的对照组100头，以及设置基础日粮+10mg/kg抗生素(土霉素)的抗生素组100头。试验结果表明，本发明所研制的微生态制剂有利于增加幼猪的体重，使用1个月后，试验组比对照组每只幼猪平均体重要高4.5kg，且试验组的腹泻率比对照组低5.5％，猪粪样中的大肠杆菌显著降低，降低幅度为0.89×107CFU/g，同时双歧杆菌数量提高了3.5×107CFU/g。与添加抗生素的相比，试验组比抗生素组每只幼猪平均体重高4.03kg，且试验组的腹泻率比抗生素组低1.15，猪粪样中的大肠杆菌降低幅度为0.89×107CFU/g，双歧杆菌数量提高1.61×107CFU/g。具体数据见表1。实验表明，使用本发明菌剂能效果明显更优。
表1本发明制剂的使用效果
组别 30d均重(kg) 腹泻率％ 粪便中大肠杆菌(CFU/g) 粪便中双歧杆菌(CFU/g)
对照组 20 15.50 1.2×108 5.56×107
试验组 24.50 10.50 1.11×108 9.06×107
抗生素组 20.47 11.65 9.98×108 7.45×107

Claims (6)

1.兽用微生态制剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：在无菌条件下，将地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母各自接种到斜面培养基，培养得到斜面种；制备一级液体种；制备二级液体种；分别发酵，得到地衣芽孢杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液和酿酒酵母发酵液；分别将地衣芽孢杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液、酿酒酵母发酵液和液体状EM菌干燥为菌粉；按枯草芽孢杆菌菌粉1～10份，地衣芽孢杆菌菌粉1～10份，酿酒酵母菌粉1～10份，EM菌菌粉1～3份进行混合，即制得本发明的微生物饲料添加剂；
所述枯草芽孢杆菌的液体发酵培养基为：豆粕粉1～5％w/w，玉米粉1～5％w/w，酵母粉1～5％w/w，鱼粉1～5％w/w，磷酸二氢钾0.1～0.5％w/w，七水硫酸镁0.1～0.5％w/w，碳酸钙0.1～1％w/w；pH7.45，121℃灭菌20min后备用；
所述地衣芽孢杆菌的液体发酵培养基为：鱼粉1～5％w/w，酵母粉1～5％w/w，大米粉1～5％w/w，七水硫酸镁0.1～0.5％w/w，磷酸二氢钾0.1～1％w/w，氯化钠0.1～0.5％w/w，氯化钾0.1～0.5％w/w，碳酸钙0.1～1％w/w；pH7.2～7.4，121℃灭菌20min后备用；
所述酿酒酵母的液体发酵培养基为：葡萄糖1～5％w/w，尿素0.1～1％w/w，磷酸二氢钾0.1～0.5％w/w，硫酸镁0.1～0.5％w/w，玉米浆粉1～5％w/w，pH6.5～7.0；121℃灭菌20min。
2.如权利要求1所述的兽用微生态制剂的制备方法，其特征在于：将得到的地衣芽孢杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液、酿酒酵母发酵液和液体状EM菌干燥为菌粉；按枯草芽孢杆菌菌粉3～5份，地衣芽孢杆菌菌粉3～5份，酿酒酵母菌粉3～5份，EM菌菌粉1～3份进行混合，即制得本发明的微生物饲料添加剂。
3.如权利要求1所述的兽用微生态制剂的制备方法，其特征在于：所述的培养得到斜面种的操作如下：将地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，在无菌条件下接种于牛肉膏蛋白胨培养基斜面上，28～45℃培养36～48小时，得斜面种；将酿酒酵母在无菌条件下接种于麦芽汁培养基斜面上，28～45℃培养36～48小时，得斜面种。
4.如权利要求1所述的兽用微生态制剂的制备方法，其特征在于：制备一级液体种的操作如下：将地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌与酿酒酵母斜面菌种分别接种至1L三角瓶装液体发酵培养基中，28～45℃，200rpm振荡培养12～36小时，得一级液体种；制备二级液体种的操作如下：将得到的一级液体种接种至300L液体发酵罐中，液体发酵培养基，28～45℃，200rpm，培养18～36小时，得二级液体种。
5.如权利要求1所述的兽用微生态制剂的制备方法，其特征在于：发酵的操作如下：将得到的二级液体种分别接种至2T液体发酵罐，液体发酵培养基，28～45℃，200rpm振荡培养18～36小时，得发酵产物。
6.如权利要求1～5任一项所述的兽用微生态制剂的制备方法，其特征在于：干燥的操作如下：地衣芽孢杆菌发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液、酿酒酵母发酵液和液体状EM菌分别进行真空冷冻干燥，制得纯菌粉。
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