CN111763638A - 一种兽用微生态制剂及其制备方法 - Google Patents

一种兽用微生态制剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种兽用微生态制剂及其制备方法,该兽用微生态制剂中丁酸梭菌活菌数为25‑35亿CFU/g,粪肠球菌活菌数为95‑105亿CFU/g,枯草芽孢杆菌菌活菌数为45‑55亿CFU/g;制备方法包括以下步骤:取菌种和发酵添加剂,混合均匀后各自装入密闭容器,发酵,烘干,混合,即得兽用微生态制剂。本发明兽用微生态制剂适当地选择了合适的菌种进行配合,能很好促进家畜的生长,提高肠道益生菌的定殖率,提高饲料转化率,能有效的改善益生环境,促使有益菌的繁殖,抑制致病菌的繁殖增长,通过四年临床验证,有较好的提高免疫力的功效,通过改善反刍动物的胃肠道来提高免疫力,有效降低反刍动物发病率。

Description

一种兽用微生态制剂及其制备方法
技术领域
本发明属于微生物技术领域,具体涉及一种兽用微生态制剂及其制备方法。
背景技术
兽用微生态制剂是一种绿色、安全的饲料添加剂,具有防病、增强机体免疫力、促进生长、增加体重等多种功能,且无污染,无残留,不产生抗药性。由于抗生素在畜禽饲养上的滥用,近几年来不断出现了严重的食品安全事件,已引起各国政府的高度重视,欧盟和美国等许多国家都已立法限制抗生素在畜禽养殖上的使用。
兽用微生态制剂是作为饲料添加剂使用的微生态制剂。它不仅能促进动物肠道正常微生物区系的建立,增强畜禽免疫力,减少疾病的发生,促进生长,提高畜禽日增重,改善畜产品的质量,还能产生多种氨基酸、维生素及一些未知促生物质;还能刺激肠道内免疫功能,及时杀死入侵病菌,又能减少氨及其他腐败物质的产生,阻碍有害物质及废物的吸收。因此,兽用微生态制剂被认为是最有潜力替代抗生素的产品。2013年我国农业部第2045号公告公布了可以直接饲喂畜禽的饲用级微生物添加剂菌种34种,依活菌种的组成,有单一菌制剂和复合菌制剂。市售的多为复合菌制剂,只是其中的菌种种类和数量有别而已。
目前,市场上的微生态制剂存在以下几个方面的问题:(1)活菌含量低,而研究表明,如果一种菌在盲肠内容物中的浓度低于107个/g,则该菌产生的酶及代谢产物不足以影响宿主,难以满足治疗需要;(2)不耐抗生素;(3)对高温、胃酸和胆盐不稳定,致使只有少数菌株进入肠道后仍具有活性,达不到发挥作用所需的活菌数量;(4)不稳定,保存期短。由于微生态制剂存在的这些问题,从而影响了其在动物上的应用效果,限制了微生态制剂的广泛应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种兽用微生态制剂及其制备方法,解决目前技术存在的缺陷和不足。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下:
一种兽用微生态制剂,所述兽用微生态制剂中丁酸梭菌活菌数为25-35亿CFU/g,粪肠球菌活菌数为95-105亿CFU/g,枯草芽孢杆菌菌活菌数为45-55亿CFU/g。
进一步,所述兽用微生态制剂中丁酸梭菌活菌数为30亿CFU/g,粪肠球菌活菌数为100亿CFU/g,枯草芽孢杆菌菌活菌数为50亿CFU/g。
本发明的有益效果是:本发明兽用微生态制剂适当地选择了合适的菌种进行配合,能很好促进家畜的生长,提高肠道益生菌的定殖率,提高饲料转化率,能有效的改善益生环境,促使有益菌的繁殖,抑制致病菌的繁殖增长,通过四年临床验证,有较好的提高免疫力的功效,通过改善反刍动物的胃肠道来提高免疫力,有效降低反刍动物发病率。
本发明还提供了一种兽用微生态制剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)称取丁酸梭菌用无菌水配制成丁酸梭菌菌液,量取丁酸梭菌菌液接种到发酵添加剂中,在通二氧化碳或氮气的条件下静置15-30天进行厌氧发酵,获得丁酸梭菌发酵产物;
(2)称取粪肠球菌用无菌水配制成粪肠球菌菌液,量取粪肠球菌菌液接种到发酵添加剂中在发酵罐中好氧发酵7-15天,获得粪肠球菌发酵产物;
(3)称取枯草芽孢杆菌用无菌水配制成枯草芽孢杆菌菌液,量取枯草芽孢杆菌菌液接种到发酵添加剂中在发酵罐中好氧发酵7-15天,获得枯草芽孢杆菌发酵产物;
(4)将上述步骤(1)-(3)得到的丁酸梭菌发酵产物、粪肠球菌发酵产物和枯草芽孢杆菌发酵产物混合干燥,获得兽用微生态制剂。
本发明的有益效果是:本发明产品采用全封闭液体发酵方式生产,不会污染杂菌,可完全达到饲料用无毒无害标准,本发明的发酵培养基和工艺,保证了终产品中有效活菌数的数量。
进一步,所述发酵添加剂由下述重量份原料制得:豆粕粉2-5份,玉米粉1-6份,酵母粉1-5份,磷酸二氢钾0.1-0.5份,七水硫酸镁0.1-0.5份,碳酸钙0.1-1份,麦芽糖3-8份,乙酸钠1-3份。
进一步,所述发酵添加剂由下述重量份原料制得:豆粕粉3份,玉米粉4份,酵母粉3份,磷酸二氢钾0.2份,七水硫酸镁0.3份,碳酸钙0.5份,乙酸钠2份。
采用上述进一步的有益效果是:上述配比的发酵培养基可供丁酸梭菌菌种、粪肠球菌菌种和枯草芽孢杆菌菌种快速生长、繁殖和合成产物,合成的代谢产物能促进有益菌的繁殖,抑制致病菌的繁殖增长。
进一步,步骤(1)所述丁酸梭菌菌液中丁酸梭菌的质量百分比为3-5%,步骤(2)所述粪肠球菌菌液中粪肠球菌的质量百分比为3-5%,步骤(3)所述枯草芽孢杆菌菌液中枯草芽孢杆菌的质量百分比为3-5%。
采用上述进一步的有益效果是:上述有效活菌数可以保证本发明兽用微生态制剂最终有效活菌数,保证产品能够明显提高肠道益生菌的定殖率,提高饲料转化率,有效降低反刍动物发病率。
进一步,步骤(1)所述丁酸梭菌的接种量为每3-5ml丁酸梭菌菌液对应加入发酵添加剂1-4克。
进一步,步骤(2)所述粪肠球菌的接种量为每3-5ml粪肠球菌菌液对应加入发酵添加剂1-4克。
进一步,步骤(3)所述枯草芽孢杆菌的接种量为每3-5ml枯草芽孢杆菌菌液对应加入发酵添加剂1-4克。
进一步,所述发酵的温度为35-38℃。
进一步,所述发酵的温度为37℃。
采用上述进一步的有益效果是:本发明发酵温度和发酵时间可以明显提高产品最终有效活菌数,降低生产成本。
具体实施方式
以下的实施例在于详细说明本发明,只是本发明的较佳实施例,并非限制本发明。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1
(1)称取豆粕粉3克,玉米粉4克,酵母粉3克,磷酸二氢钾0.2克,七水硫酸镁0.3克,碳酸钙0.5克,乙酸钠2克制得发酵添加剂,称取丁酸梭菌用无菌水配制成质量百分比为4%的丁酸梭菌菌液,量取4ml丁酸梭菌菌液接种到3克发酵添加剂中,在37℃通二氧化碳或氮气的条件下静置20天进行厌氧发酵,获得丁酸梭菌发酵产物;
(2)称取粪肠球菌用无菌水配制成质量百分比为4%的粪肠球菌菌液,量取4ml粪肠球菌菌液接种到3克发酵添加剂中,在发酵罐中37℃好氧发酵10天,获得粪肠球菌发酵产物;
(3)称取枯草芽孢杆菌用无菌水配制成质量百分比为4%的枯草芽孢杆菌菌液,量取4ml枯草芽孢杆菌菌液接种到3克发酵添加剂中,在发酵罐中37℃好氧发酵10天,获得枯草芽孢杆菌发酵产物;
(4)将上述步骤(1)-(3)得到的丁酸梭菌发酵产物、粪肠球菌发酵产物和枯草芽孢杆菌发酵产物混合干燥,获得兽用微生态制剂中丁酸梭菌活菌数为30亿CFU/g,粪肠球菌活菌数为100亿CFU/g,枯草芽孢杆菌菌活菌数为50亿CFU/g。
实施例2
(1)称取豆粕粉2克,玉米粉1克,酵母粉1克,磷酸二氢钾0.1克,七水硫酸镁0.1克,碳酸钙0.1克,乙酸钠1克制得发酵添加剂,称取丁酸梭菌用无菌水配制成质量百分比为3%的丁酸梭菌菌液,量取3ml丁酸梭菌菌液接种到1克发酵添加剂中,在35℃通二氧化碳或氮气的条件下静置15天进行厌氧发酵,获得丁酸梭菌发酵产物;
(2)称取粪肠球菌用无菌水配制成质量百分比为3%的粪肠球菌菌液,量取3ml粪肠球菌菌液接种到1克发酵添加剂中,在发酵罐中35℃好氧发酵7天,获得粪肠球菌发酵产物;
(3)称取枯草芽孢杆菌用无菌水配制成质量百分比为3%的枯草芽孢杆菌菌液,量取3ml枯草芽孢杆菌菌液接种到1克发酵添加剂中,在发酵罐中35℃好氧发酵7天,获得枯草芽孢杆菌发酵产物;
(4)将上述步骤(1)-(3)得到的丁酸梭菌发酵产物、粪肠球菌发酵产物和枯草芽孢杆菌发酵产物混合干燥,获得兽用微生态制剂中丁酸梭菌活菌数为25亿CFU/g,粪肠球菌活菌数为95亿CFU/g,枯草芽孢杆菌菌活菌数为45亿CFU/g。
实施例3
(1)称取豆粕粉5克,玉米粉6克,酵母粉5克,磷酸二氢钾0.5克,七水硫酸镁0.5克,碳酸钙1克,乙酸钠3克制得发酵添加剂,称取丁酸梭菌用无菌水配制成质量百分比为5%的丁酸梭菌菌液,量取5ml丁酸梭菌菌液接种到4克发酵添加剂中,在38℃通二氧化碳或氮气的条件下静置30天进行厌氧发酵,获得丁酸梭菌发酵产物;
(2)称取粪肠球菌用无菌水配制成质量百分比为5%的粪肠球菌菌液,量取5ml粪肠球菌菌液接种到4克发酵添加剂中,在发酵罐中38℃好氧发酵15天,获得粪肠球菌发酵产物;
(3)称取枯草芽孢杆菌用无菌水配制成质量百分比为5%的枯草芽孢杆菌菌液,量取5ml枯草芽孢杆菌菌液接种到4克发酵添加剂中,在发酵罐中38℃好氧发酵15天,获得枯草芽孢杆菌发酵产物;
(4)将上述步骤(1)-(3)得到的丁酸梭菌发酵产物、粪肠球菌发酵产物和枯草芽孢杆菌发酵产物混合干燥,获得兽用微生态制剂中丁酸梭菌活菌数为35亿CFU/g,粪肠球菌活菌数为105亿CFU/g,枯草芽孢杆菌菌活菌数为55亿CFU/g。
实施例4
(1)称取豆粕粉3克,玉米粉2克,酵母粉2克,磷酸二氢钾0.2克,七水硫酸镁0.2克,碳酸钙0.3克,麦芽糖4克,乙酸钠1克制得发酵添加剂,称取丁酸梭菌用无菌水配制成质量百分比为4%的丁酸梭菌菌液,量取4ml丁酸梭菌菌液接种到2克发酵添加剂中,在36℃通二氧化碳或氮气的条件下静置18天进行厌氧发酵,获得丁酸梭菌发酵产物;
(2)称取粪肠球菌用无菌水配制成质量百分比为4%的粪肠球菌菌液,量取4ml粪肠球菌菌液接种到2克发酵添加剂中,在发酵罐中36℃好氧发酵9天,获得粪肠球菌发酵产物;
(3)称取枯草芽孢杆菌用无菌水配制成质量百分比为4%的枯草芽孢杆菌菌液,量取4ml枯草芽孢杆菌菌液接种到2克发酵添加剂中,在发酵罐中36℃好氧发酵9天,获得枯草芽孢杆菌发酵产物;
(4)将上述步骤(1)-(3)得到的丁酸梭菌发酵产物、粪肠球菌发酵产物和枯草芽孢杆菌发酵产物混合干燥,获得兽用微生态制剂中丁酸梭菌活菌数为28亿CFU/g,粪肠球菌活菌数为98亿CFU/g,枯草芽孢杆菌菌活菌数为48亿CFU/g。
实施例5
(1)称取豆粕粉4克,玉米粉5克,酵母粉4克,磷酸二氢钾0.4克,七水硫酸镁0.4克,碳酸钙0.8克,麦芽糖6克,乙酸钠2克制得发酵添加剂,称取丁酸梭菌用无菌水配制成质量百分比为4%的丁酸梭菌菌液,量取4ml丁酸梭菌菌液接种到3克发酵添加剂中,在37℃通二氧化碳或氮气的条件下静置25天进行厌氧发酵,获得丁酸梭菌发酵产物;
(2)称取粪肠球菌用无菌水配制成质量百分比为4%的粪肠球菌菌液,量取4ml粪肠球菌菌液接种到3克发酵添加剂中,在发酵罐中37℃好氧发酵12天,获得粪肠球菌发酵产物;
(3)称取枯草芽孢杆菌用无菌水配制成质量百分比为4%的枯草芽孢杆菌菌液,量取4ml枯草芽孢杆菌菌液接种到1克发酵添加剂中,在发酵罐中37℃好氧发酵12天,获得枯草芽孢杆菌发酵产物;
(4)将上述步骤(1)-(3)得到的丁酸梭菌发酵产物、粪肠球菌发酵产物和枯草芽孢杆菌发酵产物混合干燥,获得兽用微生态制剂中丁酸梭菌活菌数为33亿CFU/g,粪肠球菌活菌数为102亿CFU/g,枯草芽孢杆菌菌活菌数为52亿CFU/g。
对比例1
(1)称取豆粕粉3克,玉米粉4克,酵母粉3克,磷酸二氢钾0.2克,七水硫酸镁0.3克,碳酸钙0.5克,乙酸钠2克制得发酵添加剂;
(2)称取粪肠球菌用无菌水配制成质量百分比为4%的粪肠球菌菌液,量取4ml粪肠球菌菌液接种到3克发酵添加剂中,在发酵罐中37℃好氧发酵10天,获得粪肠球菌发酵产物;
(3)称取枯草芽孢杆菌用无菌水配制成质量百分比为4%的枯草芽孢杆菌菌液,量取4ml枯草芽孢杆菌菌液接种到3克发酵添加剂中,在发酵罐中37℃好氧发酵10天,获得枯草芽孢杆菌发酵产物;
(4)将上述步骤(1)-(3)得到的丁酸梭菌发酵产物、粪肠球菌发酵产物和枯草芽孢杆菌发酵产物混合干燥,获得兽用微生态制剂中粪肠球菌活菌数为100亿CFU/g,枯草芽孢杆菌菌活菌数为50亿CFU/g。
与实施例1相比,对比例1未添加丁酸梭菌菌种。
对比例2
(1)称取豆粕粉3克,玉米粉4克,酵母粉3克,磷酸二氢钾0.2克,七水硫酸镁0.3克,碳酸钙0.5克,乙酸钠2克制得发酵添加剂,称取丁酸梭菌用无菌水配制成质量百分比为4%的丁酸梭菌菌液,量取4ml丁酸梭菌菌液接种到3克发酵添加剂中,在37℃通二氧化碳或氮气的条件下静置20天进行厌氧发酵,获得丁酸梭菌发酵产物;
(2)称取枯草芽孢杆菌用无菌水配制成质量百分比为4%的枯草芽孢杆菌菌液,量取4ml枯草芽孢杆菌菌液接种到3克发酵添加剂中,在发酵罐中37℃好氧发酵10天,获得枯草芽孢杆菌发酵产物;
(4)将上述步骤(1)-(2)得到的丁酸梭菌发酵产物、粪肠球菌发酵产物和枯草芽孢杆菌发酵产物混合干燥,获得兽用微生态制剂中丁酸梭菌活菌数为30亿CFU/g,枯草芽孢杆菌菌活菌数为50亿CFU/g。
与实施例1相比,对比例2未添加粪肠球菌菌种。
对比例3
(1)称取豆粕粉3克,玉米粉4克,酵母粉3克,制得发酵添加剂,称取丁酸梭菌用无菌水配制成质量百分比为4%的丁酸梭菌菌液,量取4ml丁酸梭菌菌液接种到3克发酵添加剂中,在37℃通二氧化碳或氮气的条件下静置20天进行厌氧发酵,获得丁酸梭菌发酵产物;
(2)称取粪肠球菌用无菌水配制成质量百分比为4%的粪肠球菌菌液,量取4ml粪肠球菌菌液接种到3克发酵添加剂中,在发酵罐中37℃好氧发酵10天,获得粪肠球菌发酵产物;
(3)称取枯草芽孢杆菌用无菌水配制成质量百分比为4%的枯草芽孢杆菌菌液,量取4ml枯草芽孢杆菌菌液接种到3克发酵添加剂中,在发酵罐中37℃好氧发酵10天,获得枯草芽孢杆菌发酵产物;
(4)将上述步骤(1)-(3)得到的丁酸梭菌发酵产物、粪肠球菌发酵产物和枯草芽孢杆菌发酵产物混合干燥,获得兽用微生态制剂中丁酸梭菌活菌数为17亿CFU/g,粪肠球菌活菌数为80亿CFU/g,枯草芽孢杆菌菌活菌数为30亿CFU/g。
与实施例1相比,对比例3未添加磷酸二氢钾、七水硫酸镁、碳酸钙、乙酸钠。
本发明兽用微生态制剂的效果试验
在河北一牧场选择800头初始体重10kg左右的育肥羊羔分为8组,每组100头,试验组1-8每只羊羔每天摄入本发明实施例1-5和对比例1-3兽用微生态制剂各1000克,试验期为30天。分组情况如下表:
Figure BDA0002548091460000091
由表1可以看出,与试验组8相比,试验组1提高饲料转化率高达23.2%,因此本发明的发酵添加剂成分是不能改变的,减少发酵添加剂的原料会导致料肉比明显下降。
与试验组1相比,试验组6-7的料肉比明显下降,因此本发明兽用微生态制剂活菌种类和成分是一定的,在本发明兽用微生态制剂的活菌组成和配比下,料肉比最高,本发明兽用微生态制剂能有效的改善益生环境,促使有益菌的繁殖,通过四年临床验证,本发明有较好的提高免疫力的功效,本发明能促进有益菌的繁殖,抑制致病菌的繁殖增长,通过改善反刍动物的胃肠道来提高免疫力,试验组6降低育肥羊发病率为7%,试验组7降低育肥羊发病率为5%,而本发明有效降低育肥羊发病率27-30%,本发明较试验组6-7肠道益生菌的定殖率提高10-15%。

Claims (10)

1.一种兽用微生态制剂,其特征在于,所述兽用微生态制剂中丁酸梭菌活菌数为25-35亿CFU/g,粪肠球菌活菌数为95-105亿CFU/g,枯草芽孢杆菌菌活菌数为45-55亿CFU/g。
2.根据权利要求1所述的一种兽用微生态制剂,其特征在于,所述兽用微生态制剂中丁酸梭菌活菌数为30亿CFU/g,粪肠球菌活菌数为100亿CFU/g,枯草芽孢杆菌菌活菌数为50亿CFU/g。
3.一种兽用微生态制剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)称取丁酸梭菌用无菌水配制成丁酸梭菌菌液,量取丁酸梭菌菌液接种到发酵添加剂中,在通二氧化碳或氮气的条件下静置15-30天进行厌氧发酵,获得丁酸梭菌发酵产物;
(2)称取粪肠球菌用无菌水配制成粪肠球菌菌液,量取粪肠球菌菌液接种到发酵添加剂中在发酵罐中好氧发酵7-15天,获得粪肠球菌发酵产物;
(3)称取枯草芽孢杆菌用无菌水配制成枯草芽孢杆菌菌液,量取枯草芽孢杆菌菌液接种到发酵添加剂中在发酵罐中好氧发酵7-15天,获得枯草芽孢杆菌发酵产物;
(4)将上述步骤(1)-(3)得到的丁酸梭菌发酵产物、粪肠球菌发酵产物和枯草芽孢杆菌发酵产物混合干燥,获得兽用微生态制剂。
4.根据权利要求3所述的一种兽用微生态制剂的制备方法,其特征在于,所述发酵添加剂由下述重量份原料制得:豆粕粉2-5份,玉米粉1-6份,酵母粉1-5份,磷酸二氢钾0.1-0.5份,七水硫酸镁0.1-0.5份,碳酸钙0.1-1份,乙酸钠1-3份。
5.根据权利要求4所述的一种兽用微生态制剂的制备方法,其特征在于,所述发酵添加剂由下述重量份原料制得:豆粕粉3份,玉米粉4份,酵母粉3份,磷酸二氢钾0.2份,七水硫酸镁0.3份,碳酸钙0.5份,乙酸钠2份。
6.根据权利要求4所述的一种兽用微生态制剂的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述丁酸梭菌菌液中丁酸梭菌的质量百分比为3-5%,步骤(2)所述粪肠球菌菌液中粪肠球菌的质量百分比为3-5%,步骤(3)所述枯草芽孢杆菌菌液中枯草芽孢杆菌的质量百分比为3-5%。
7.根据权利要求4所述的一种兽用微生态制剂的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述丁酸梭菌的接种量为每3-5ml丁酸梭菌菌液对应加入发酵添加剂1-4克。
8.根据权利要求4所述的一种兽用微生态制剂的制备方法,其特征在于,步骤(2)所述粪肠球菌的接种量为每3-5ml粪肠球菌菌液对应加入发酵添加剂1-4克。
9.根据权利要求4所述的一种兽用微生态制剂的制备方法,其特征在于,步骤(3)所述枯草芽孢杆菌的接种量为每3-5ml枯草芽孢杆菌菌液对应加入发酵添加剂1-4克。
10.根据权利要求4所述的一种兽用微生态制剂的制备方法,其特征在于,所述发酵的温度为35-38℃。
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