CN101107265A - 环状九肽酰胺类 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及环状九肽酰胺类，它们的制备方法，和它们在制备用于治疗和/或预防疾病、特别是细菌感染性疾病的药物中的应用。
Description
本发明涉及环状九肽酰胺类，和它们的制备方法，以及它们在制备用于治疗和/或预防疾病、特别是细菌感染性疾病的药物中的应用。
细菌细胞壁是通过许多酶合成的(细胞壁生物合成)并且对微生物的生存和繁殖是必要的。该大分子的结构，还有涉及它的合成的蛋白质，在细菌内是高度保守的。由于它的关键本性和一致性，细胞壁生物合成是新抗生素理想的攻击点(D.W.Green，The bacterial cell wall as a source ofantibacterial targets，Expert Opin.Ther.Targets，2002，6，1-19)。
万古霉素和青霉素是细菌细胞壁生物合成的抑制剂并且代表该作用原理的抗生素功效的成功实例。它们已经在临床上使用了数十年，用于治疗细菌感染，特别是革兰氏阳性病原体的细菌感染。由于耐药微生物的不断出现，例如耐甲氧西林的葡萄球菌(Staphylococci)、耐青霉素的肺炎双球菌(pneumococci)和耐万古霉素的肠球菌(enterococci)(F.Baquero，Gram-positive resistance：challenge for the development of new antibiotics，J.Antimicrob.Chemother.，1997，39，Suppl A：1-6；A.P.Johnson，D.M.Livermore，G.S.Tillotson，Antimicrobial susceptibility of Gram-positive bacteria：what′scurrent，what′s anticipated？，J.Hosp.Infect.，2001，(49)，Suppl A：3-11)和最近也首次出现的耐万古霉素的葡萄球菌(B.Goldrick，First reported case ofVRSA in the United States，Am.J.Nurs.，2002，102，17)，这些物质正日益丧失它们的治疗功效。
本发明描述了一类新的对于已知类别的抗生素没有交叉抗性的细胞壁生物合成抑制剂。
在US 4,754,018中将天然产物溶杆菌素(lysobactin)和一些衍生物描述为具有抗菌活性。在EP-A-196 042和JP 01132600中还描述了溶杆菌素的分离和抗菌活性。WO 04/099239描述了具有抗菌活性的溶杆菌素衍生物。
在O’Sullivan，J.等，J.Antibiot.1988，41，1740-1744，Bonner，D.P.等，J.Antibiot.1988，41，1745-1751，Shoji，J.等，J.Antibiot.1988，41，713-718和Tymiak，A.A.等，J.Org.Chem.1989，54，1149-1157中还描述了溶杆菌素和片野菌素A的抗菌活性。
活性化合物的稳定性对于它作为药物的适合性是一个重要参数。连同其它因素一起，稳定性在药物的贮存和给药中发挥作用。许多天然产品显示对药物而言不足够的稳定性。
抗菌活性缩肽(depsipeptide)溶杆菌素在中性至碱性水性介质(pH＞7)中在数天内水解。这形成无抗菌活性的“开口式-溶杆菌素”，其已经在内酯处打开。因此，具有更高环稳定性的溶杆菌素的活性类似物是理想的。
本发明的一个目的是提供具有可比较的或改善的抗菌活性、更好的耐受性(例如，更低的肾毒性)、和改善的在中性至碱性水性介质中的稳定性的备选化合物，该化合物用于人和动物中细菌疾病的治疗。
在本发明的上下文中，已经意外地发现，溶杆菌素酰胺类(环状九肽酰胺类)具有与溶杆菌素类似的抗菌活性并且在中性至碱性水性介质中对水解稳定。溶杆菌素酰胺类是溶杆菌素的氮杂类似物，其迄今还未被描述并且其中中央内酯官能度已经被内酰胺官能度替代。
本发明涉及式(Ib)的化合物，
其中
R6表示氢或甲基，
R7表示下式的基团：
其中
*是与所述胺的键合位点，
R1表示C1-C6-烷基，C2-C6-链烯基，C3-C6-环烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、链烯基、环烷基和芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苄氧基，C3-C6-环烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元杂环基，5-至10-元杂芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和苄氧羰基氨基，
其中对于它们的部分的环烷基、芳基、杂环基和杂芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元杂环基，
R2表示C1-C6-烷基，C2-C6-链烯基，C3-C6-环烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、链烯基、环烷基和芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苄氧基，C3-C6-环烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元杂环基，5-至10-元杂芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和苄氧羰基氨基，
其中对于它们的部分的环烷基、芳基、杂环基和杂芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元杂环基，
R4表示C1-C6-烷基，C2-C6-链烯基，C3-C6-环烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、链烯基、环烷基和芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苄氧基，C3-C6-环烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元杂环基，5-至10-元杂芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和苄氧羰基氨基，
其中对于它们的部分的环烷基、芳基、杂环基和杂芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元杂环基，
R5表示C1-C6-烷基，C2-C6-链烯基，C3-C6-环烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、链烯基、环烷基和芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苄氧基，C3-C6-环烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元杂环基，5-至10-元杂芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和苄氧羰基氨基，其中对于它们的部分的环烷基、芳基、杂环基和杂芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元杂环基，
和它们的盐、它们的溶剂合物和它们的盐的溶剂合物。
本发明的化合物是式(I)，(Ia)和(Ib)的化合物和它们的盐、溶剂合物及其盐的溶剂合物和前药，由式(I)，(Ia)和(Ib)包括的以下提及的各式的化合物和它们的盐、溶剂合物、所述盐的溶剂合物和前药，以及由式(I)，(Ia)和(Ib)包括的作为示例性实施方案的在下文提及的化合物和它们的盐、溶剂合物、所述盐的溶剂合物和前药，就由式(I)，(Ia)和(Ib)所涵盖并且在后来提及的化合物而言，它们还不是盐、溶剂合物、所述盐的溶剂合物和前药。
取决于它们的结构，本发明的化合物以立体异构型(对映异构体，非对映异构体)存在。因此，本发明涉及对映异构体或非对映异构体及其各自的混合物。从对映异构体和/或非对映异构体的这些混合物中，立体异构纯的组分可以以已知方式分离出来是可能的。
如果本发明的化合物可以以互变异构形式存在，本发明包括所有的互变异构形式。
优选用于本发明的目的盐是本发明的化合物的生理可接受的盐。然而，本身不适合于药物应用但是可以用于例如分离或纯化本发明的化合物的盐也被包括在内。对于本发明的目的而言，混合盐是指含有两种或多种不同酸或碱的加成盐，例如三氟乙酸盐甲磺酸盐。
本发明化合物的生理可接受的盐包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、马来酸和苯甲酸的盐。
本发明的化合物的生理可接受的盐还包括常用的碱的盐，诸如，作为实例，并且优选地碱金属盐(例如，钠和钾盐)，碱土金属盐(例如钙和镁盐)和衍生自氨或具有1-16个碳原子的有机胺的铵盐，所述有机胺诸如作为实例，并且优选地，乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二异丙胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己胺、二甲基氨基乙醇、普鲁卡因、二苄基胺、N-甲基吗啉、精氨酸、赖氨酸、乙二胺和N-甲基哌啶。
对于本发明的目的而言，溶剂合物指通过与溶剂分子的配位作用形成固体或液体状态的复合物的本发明的化合物的那些形式。水合物是溶剂合物的特殊形式，其中与水发生配位作用。
对于本发明的目的而言，除非另外指出，取代基具有下列含义：
烷基本身以及烷氧基，烷基氨基，烷基羰基，烷氧基羰基和烷基羰基氨 基中的“alk(烷基)”和“alkyl(烷基)”表示通常具有1至6个、优选1至4个、特别优选1至3个碳原子的直链或支链烷基基团，作为实例并且优选甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基、2，2-二甲基丙-1-基、2，2-二甲基丁-1-基、正戊基和正己基。
烷氧基，作为实例并且优选表示甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、叔丁氧基、正戊氧基和正己氧基。
链烯基表示具有2至6个碳原子的直链或支链链烯基基团。优选具有2至4个、特别优选具有2至3个碳原子的直链或支链链烯基基团。例如并且优选，可以提及下列各项：乙烯基，烯丙基，正-丙-1-烯-1-基，正-丁-2-烯-1-基，2-甲基丙-1-烯-1-基和2-甲基丙-2-烯-1-基。
烷基氨基表示具有一个或两个(彼此独立地选择)烷基取代基的烷基氨基，例举并且优选甲基氨基，乙基氨基，正-丙基氨基，异丙基氨基，叔-丁基氨基，正-戊基氨基，正-己基氨基，N，N-二甲基氨基，N，N-二乙基氨基，N-乙基-N-甲基氨基，N-甲基-N-正-丙基氨基，N-异丙基-N-正-丙基氨基，N-叔-丁基-N-甲基氨基，N-乙基-N-正-戊基氨基和N-正-己基-N-甲基氨基。C1-C3-烷基氨基，例如，表示具有1至3个碳原子的单烷基氨基基团或每个烷基取代基具有1至3个碳原子的二烷基氨基基团。
芳基氨基表示经由氨基键合的芳基取代基，另一个取代基任选地与所述氨基键合，如例如芳基或烷基，例举并优选为苯基氨基，萘基氨基，苯基甲基氨基或二苯基氨基。
烷基羰基例举并优选表示甲基羰基，乙基羰基，正-丙基羰基，异丙基羰基，叔-丁基羰基，正-戊基羰基和正-己基羰基。
烷氧基羰基例举并优选表示甲氧基羰基，乙氧基羰基，正-丙氧基羰基，异丙氧基羰基，叔-丁氧羰基，正-戊氧基羰基和正-己氧基羰基。
芳基羰基表示经由羰基键合的芳基取代基，例举并优选为苯基羰基，萘基羰基和菲基羰基。
烷基羰基氨基例举并优选表示，甲基羰基氨基，乙基羰基氨基，正-丙基羰基氨基，异丙基羰基氨基，叔-丁基羰基氨基，正-戊基羰基氨基和正-己基羰基氨基。
芳基羰基氨基例举并优选表示，苯基羰基氨基，萘基羰基氨基和菲基羰基氨基。
环烷基表示通常具有3至6个碳原子的环烷基基团，例举并优选为环丙基，环丁基，环戊基和环己基。
芳基表示通常具有6至10个碳原子的单环至三环芳族、碳环基团；例举并优选为苯基和萘基。
杂环基表示单环-或多环、优选单环-或二环的杂环基团，通常具有5至7个环原子和最多3个、优选最多2个选自N，O，S，SO，SO2的杂原子和/或杂基团。杂环基基团可以是饱和的或部分饱和的。优选具有最多2个选自O，N和S的杂原子的5-至7-元单环饱和杂环基基团，诸如，例举并优选为四氢呋喃基，吡咯烷基，吡咯啉基，哌啶基，四氢吡喃基，哌嗪基，吗啉基和全氢氮杂革基(perhydroazepinyl)。
杂芳基表示通常具有5至10个、优选5至6个环原子和最多5个、优选最多4个选自S、O和N的杂原子的芳族、单环-或二环基团，例举并优选为噻吩基，呋喃基，吡咯基，噻唑基，噁唑基，咪唑基，吡啶基，嘧啶基，哒嗪基，吲哚基，吲唑基，苯并呋喃基，苯并噻吩基，喹啉基和异喹啉基。
卤素表示氟，氯，溴和碘，优选氟和氯。
附图简述：
图1：实施例12A的单晶X射线结构，Ortep图(50％)。
图2：实施例21A的1H NMR(500MHz，d5-吡啶)
优选式(Ib)的化合物，其中
R6表示甲基，
R7表示下式的基团：
其中
*是与所述胺的键合位点，
R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羟基-2-甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基丁-1-基，1-羟基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羟基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羟基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，
R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羟基-2-甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基丁-1-基，1-羟基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羟基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羟基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，
R4表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羟基-2-甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基丁-1-基，1-羟基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羟基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羟基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，
R5表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羟基-2-甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基丁-1-基，1-羟基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羟基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羟基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，和它们的盐，它们的溶剂合物和它们的盐的溶剂合物。
还优选式(Ib)的化合物，其中
R6表示甲基，
R7表示下式的基团：
其中
*是与所述胺的键合位点，
R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，
R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，
R4表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，
R5表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，
和它们的盐，它们的溶剂合物和它们的盐的溶剂合物。
还优选式(Ib)的化合物，其中
R6表示甲基，
R7表示下式的基团：
其中
*是与所述胺的键合位点，
并且R1和R2具有以上给出的含义。
还优选式(Ib)的化合物，其中
R6表示甲基，
R7表示下式的基团：
其中
*是与所述胺的键合位点，
并且R4和R5具有以上给出的含义。
本发明还涉及式(I)的化合物，
其中
R1表示C1-C6-烷基，C2-C6-链烯基，C3-C6-环烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、链烯基、环烷基和芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苄氧基，C3-C6-环烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元杂环基，5-至10-元杂芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和苄氧羰基氨基，
其中对于它们的部分的环烷基、芳基、杂环基和杂芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元杂环基，
R2表示C1-C6-烷基，C2-C6-链烯基，C3-C6-环烷基或C6-C10-芳基，
其中烷基、链烯基、环烷基和芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苄氧基，C3-C6-环烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元杂环基，5-至10-元杂芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和苄氧羰基氨基，
其中对于它们的部分的环烷基、芳基、杂环基和杂芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元杂环基，和它们的盐，它们的溶剂合物和它们的盐的溶剂合物。
还优选式(I)的化合物，其中
R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羟基-2-甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基-丁-1-基，1-羟基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羟基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羟基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，
R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羟基-2-甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基-丁-1-基，1-羟基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羟基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羟基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，和它们的盐，它们的溶剂合物和它们的盐的溶剂合物。
还优选式(I)的化合物，其中
R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，
R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，和它们的盐，它们的溶剂合物和它们的盐的溶剂合物。
本发明还涉及式(Ia)的化合物，
其中
R1表示C1-C6-烷基，C2-C6-链烯基，C3-C6-环烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、链烯基、环烷基和芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苄氧基，C3-C6-环烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元杂环基，5-至10-元杂芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和苄氧羰基氨基，
其中对于它们的部分的环烷基、芳基、杂环基和杂芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元杂环基，
R2表示C1-C6-烷基，C2-C6-链烯基，C3-C6-环烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、链烯基、环烷基和芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苄氧基，C3-C6-环烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元杂环基，5-至10-元杂芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和苄氧羰基氨基，
其中对于它们的部分的环烷基、芳基、杂环基和杂芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元杂环基，和它们的盐，它们的溶剂合物和它们的盐的溶剂合物。
本发明还涉及制备式(Ib)的化合物的方法，其中
[A]式(II)的化合物，
其中
R6具有以上所示含义，
首先与下式的化合物反应，
其中
R1，R2，R4和R5具有以上所示含义，
R3表示叔-丁氧羰基或苄氧羰基，并且
X1表示卤素，优选溴，氯或氟，或羟基，并然后与酸和/或通过氢解反应，
或
[B]式(IV)的化合物，
其中
R6具有以上所示含义，
首先与下式的化合物反应，
其中
R1，R2，R4和R5具有以上所示含义，
并且然后，在4-步合成中，
a)与氟化物试剂如氟化四丁基铵反应，
b)与酸反应，
c)当适合时在碱的存在下与脱水剂反应，和
d)通过氢解反应。
方法[A]：
如果X1是卤素，第一步的反应通常在惰性溶剂中发生，当合适时存在碱，优选在大气压下在-30℃至50℃的温度范围内。
惰性溶剂是，例如，四氢呋喃、二氯甲烷、吡啶、二噁烷、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷或二甲基甲酰胺；优选吡啶或二甲基甲酰胺。
碱是，例如，三乙胺、二异丙基乙胺或N-甲基吗啉；优选二异丙基乙胺。
如果X1是羟基，第一步的反应一般在脱水剂存在下在惰性溶剂中进行，当合适时在碱存在下，优选在大气压下在-30℃至50℃的温度范围内。
惰性溶剂是，例如，卤代烃诸如二氯甲烷或三氯甲烷，烃诸如苯、硝基甲烷、二噁烷、二甲基甲酰胺或乙腈。同样可以采用这些溶剂的混合物。特别优选二氯甲烷或二甲基甲酰胺。
适合的脱水剂的实例有碳二亚胺诸如N，N′-二乙基-，N，N′-二丙基-，N，N′-二异丙基-，N，N′-二环已基碳二亚胺，N-(3-二甲基氨基异丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，N-环已基碳二亚胺-N’-丙基氧基甲基聚苯乙烯(PS-碳二亚胺)或羰基化合物诸如羰二咪唑，或1，2-噁唑鎓(oxazolium)化合物诸如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓-3-硫酸盐或2-叔-丁基-5-甲基异噁唑鎓高氯酸盐，或酰基氨基化合物诸如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉，或丙烷膦酸酐，或氯甲酸异丁酯，或二(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯，或苯并三唑基氧基-三-(二甲基氨基)六氟膦酸鏻，或O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)，2-(2-氧代-1-(2H)-吡啶基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TPTU)或O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)，或1-羟基苯并三唑(HOBt)，或苯并三唑-1-基氧基三-(二甲基氨基)六氟磷酸鏻(BOP)，或N-羟基琥珀酰亚胺，或这些与碱的混合物。
碱是，例如，碱金属碳酸盐，诸如，例如，碳酸钠或碳酸钾，或碳酸氢盐，或有机碱诸如三烷基胺，例如，三乙胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、4-二甲基氨基吡啶或二异丙基乙胺。
优选利用HATU或利用EDC在HOBt存在下进行所述缩合。
该方法第二步中与酸的反应优选在0℃至40℃的温度范围内在大气压下发生。
因此适当的酸是二噁烷中的氯化氢，乙酸中的溴化氢或二氯甲烷中的三氟乙酸。
该方法第二步中的氢解通常在溶剂中在氢和披钯活性碳的存在下、优选在0℃至40℃的温度范围内在大气压下进行。
溶剂例如有醇，如甲醇，乙醇，正丙醇或异丙醇，混合以水和乙酸或盐酸水溶液；乙醇、水和乙酸的混合物，或异丙醇和盐酸水溶液的混合物是优选的。
方法[B]：
式(IV)化合物与式(V)或(VII)化合物的反应通常在惰性溶剂中、在脱水剂的存在下发生，当合适时存在碱，优选在大气压下在-30℃至50℃的温度范围内。
惰性溶剂是，例如，卤代烃诸如二氯甲烷或三氯甲烷，烃诸如苯、硝基甲烷、二噁烷、二甲基甲酰胺或乙腈。同样可以采用这些溶剂的混合物。特别优选二氯甲烷或二甲基甲酰胺。
适合的脱水剂的实例有碳二亚胺诸如N，N′-二乙基-，N，N′-二丙基-，N，N′-二异丙基-，N，N′-二环已基碳二亚胺，N-(3-二甲基氨基异丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，N-环已基碳二亚胺-N’-丙基氧基甲基聚苯乙烯(PS-碳二亚胺)或羰基化合物诸如羰二咪唑，或1，2-噁唑鎓(oxazolium)化合物诸如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓-3-硫酸盐或2-叔-丁基-5-甲基异噁唑鎓高氯酸盐，或酰基氨基化合物诸如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉，或丙烷膦酸酐，或氯甲酸异丁酯，或二(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯，或苯并三唑基氧基-三-(二甲基氨基)六氟膦酸鏻，或O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)，2-(2-氧代-1-(2H)-吡啶基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TPTU)或O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)，或1-羟基苯并三唑(HOBt)，或苯并三唑-1-基氧基三-(二甲基氨基)六氟磷酸鏻(BOP)，或苯并三唑-1-基氧基三-(吡咯烷子基)六氟磷酸鏻(PyBOP)，或N-羟基琥珀酰亚胺，或这些与碱的混合物。
碱是，例如，碱金属碳酸盐，诸如，例如，碳酸钠或碳酸钾，或碳酸氢盐，或有机碱诸如三烷基胺，例如，三乙胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、4-二甲基氨基吡啶或二异丙基乙胺。
优选利用HATU或利用EDC在HOBt存在下进行所述缩合。
该另外的方法的第一步(a)中与氟化四丁基铵的反应通常在惰性溶剂中、优选在0℃至40℃的温度范围内在大气压下发生。
惰性溶剂是，例如，卤代烃诸如二氯甲烷或三氯甲烷，或醚如四氢呋喃或二噁烷。特别优选四氢呋喃。
该方法第二步(b)中与酸的反应优选在0℃至40℃的温度范围内在大气压下发生。
其中适当的酸是二噁烷中的氯化氢，乙酸中的溴化氢或二氯甲烷中的三氟乙酸。
该方法第三步(c)中的反应的发生类似于式(IV)化合物与式(V)或(VII)化合物的反应。
该方法第四步(d)中的氢解通常在溶剂中在氢和披钯活性碳的存在下、优选在0℃至40℃的温度范围内在大气压下发生。
溶剂例如有醇，如甲醇，乙醇，正丙醇或异丙醇，混合以水和乙酸或盐酸水溶液；乙醇、水和乙酸的混合物，或异丙醇和盐酸水溶液的混合物是优选的。
可以从溶杆菌素(实施例1A)或片野菌素A通过氢化、酶促裂解和再环化合成式(II)的化合物，如实验部分中实施例2A，3A和20A至26A的实验部分中所述。式(IV)化合物是该合成顺序中的中间体。
式(III)，(V)，(VI)和(VII)的化合物是已知的或者可以从相应的原材料通过已知方法或通过以下所述方法合成。
本发明化合物的制备可以通过下列合成反应路线举例说明。
合成反应路线2：
本发明另外涉及制备下式化合物的方法：2-(三甲代甲硅烷基)乙基-(3R)-3-氨基-N2-[(苄氧基)羰基]-L-苯丙氨酸酯三氟乙酸盐(实施例19A)
其特征在于：在6-步合成中，将下式化合物：(rac)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-3-苯基丙酸甲酯
a)在碱(优选六甲基二硅叠氮化锂(lithium hexamethyldisilazide))的存在下，与氮杂二羧酸二苄酯反应，
b)与N，N，N，N，-四甲基胍反应，
c)在阮内镍的存在下与氢反应，
d)在碱(优选N-甲基吗啉)的存在下与N-苄氧基羰氧基琥珀酰亚胺酯反应，
e)与碱(优选氢氧化锂)反应和随后色谱法分离对映体，和
f)与在二氯甲烷中的三氟乙酸或二噁烷中的氯化氢反应。
在实施例12A至实施例19A的实验部分描述了详细合成。
本发明进一步涉及下式化合物：
(3R)-N2-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸(实施例17A和实施例35A)
或
(3R)-N-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯(实施例18A)
或
(3R)-3-氨基-N2-[(苄氧基)羰基]-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯三氟乙酸盐(实施例19A)
或
(2S，3R)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(实施例33A)
或
(2S，3R)-N-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(实施例34A)
或
(3S)-N2-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-D-苯丙氨酸(实施例36A)
或
(3S)-N-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-D-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯(实施例37A)
或
(3S)-3-氨基-N2-[(苄氧基)羰基]-D-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯三氟乙酸盐(实施例38A)
本发明的化合物显示有价值的药理学活性谱。它们显示抗菌活性。
它们因此适用于用作治疗和/或预防人和动物中疾病的药物。
本发明的化合物特征在于与溶杆菌素相比更低的肾毒性。
本发明化合物的特征在于在中性至碱性水性介质中改善的稳定性。该性质改善了本发明化合物的贮存和作为药物的给药。
所述九酯肽类作为细菌细胞壁生物合成的抑制剂。
本发明的制剂针对细菌和类细菌的微生物是特别有效的。它们因此特别适于由这些病原体在人和兽医学中所引起的局部和全身感染的预防和化学疗法。
原则上，可以将本发明的制剂用于针对具有细菌细胞壁(胞壁质球囊)或相应酶系统的全部细菌和类细菌的微生物，例如下列病原体或下列病原体的混合物：
革兰氏阴性球菌(淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhoeae))还有革兰氏阴性杆菌诸如肠杆菌科(Enterobacteriaceae)，例如大肠杆菌(Escherichia coli)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、假单胞菌属(Pseudomonas)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)(弗氏柠檬酸杆菌(C.freundii)、C.divernis)、沙门氏菌属(Salmonella)和志贺氏杆菌属(Shigella)；此外还有肠杆菌属(Enterobacter)(产气肠杆菌(E.aerogenes)、成团肠杆菌(E.agglomerans))、哈夫尼菌属(Hafnia)、沙雷氏菌属(Serratia)(粘质沙雷氏菌(S.marcescens)、普罗威登斯菌属(Providencia)、耶尔森氏菌属(Yersinia)，还有不动杆菌属(Acinetobacter)、布兰汉氏球菌属(Branhamella)和衣原体(Chlamydia)。而且，所述抗菌谱包括严格厌氧菌诸如，例如，脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)，消化球菌属(Peptococcus)、消化链球菌属(Peptostreptococcus)、以及梭状芽胞杆菌属(Clostridium)的代表；此外还有分枝杆菌属(Mycobacteria)，例如结核分枝杆菌(M.tuberculosus)。本发明的化合物对于革兰氏阳性球菌显示特别显著的效果，所述革兰氏阳性球菌例如葡萄球菌(Staphylococci)(金黄色葡萄球菌(S.aureus)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、溶血葡萄球菌(S.haemolyticus)、肉葡萄球菌(S.carnosus))、肠球菌属(enterococci)(粪肠球菌(E.faecalis)、屎肠球菌(E.faecium))和链球菌属(streptococci)(无乳链球菌(S.agalactiae)、肺炎链球菌(S.pneumoniae)、化脓链球菌(S.pyogenes))。
上述病原体列表仅应被解释为是例举性的而绝非限制性的。可以提到的由所述病原体或混合感染所引起并且可以通过本发明的制剂预防、改善或治愈的疾病例如有：
在人中的感染性疾病，例如，无并发症的和并发的尿路感染，无并发症的皮肤和表皮感染，并发的皮肤和软组织感染，医院中获得性肺炎和作为门诊患者、医院的肺炎，慢性支气管炎的急性恶化和继发细菌感染，急性中耳炎，急性鼻窦炎，链球菌咽炎，细菌性脑膜炎，无并发症的淋球菌和非-淋球菌尿道炎/宫颈炎，急性前列腺炎，心内膜炎，无并发症的和并发的腹内感染，妇科感染，盆腔炎疾病，细菌性阴道病，急性和慢性骨髓炎，急性细菌性关节炎，发热性中性白细胞减少患者(febrile neutropenicpatients)中的经验疗法，还有菌血症(bacteraemias)，MRSA感染，急性传染性腹泻，幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)感染，手术后的感染，牙原性感染(odontogenic infections)，眼科感染，手术后的感染(包括门静脉周脓肿、创伤感染、胆道感染，乳腺炎和急性阑尾炎)，囊性纤维化病和支气管扩张症。
除人之外，还可以在其它物种中治疗细菌感染。可以提到的实例是：
猪：腹泻、肠源性毒血症(enterotoxaemia)、败血症、痢疾、沙门氏菌病、子宫炎-乳腺炎-乳泌缺乏综合征(agalactiae syndrome)、乳腺炎；
反刍动物(牛、绵羊、山羊)：腹泻、败血症、支气管性肺炎、沙门氏菌病、巴斯德菌病、生殖器感染；
马：支气管性肺炎、关节病、分娩的和分娩后感染、沙门氏菌病；
狗和猫：支气管肺炎、腹泻、皮炎、耳炎、尿路感染、前列腺炎；
家禽(小鸡、火鸡、鹌鹑、鸽子、观赏鸟类及其它)：大肠杆菌感染、慢性呼吸道疾病、沙门氏菌病、巴斯德菌病、鹦鹉热。
它同样可以在饲养和抚养生产性和观赏用鱼类中治疗细菌病，所述抗菌谱从而在上述病原体上还延伸到病原体诸如，例如，巴斯德菌属(Pasteurella)、布鲁氏菌属(Brucella)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、李斯特菌属(Listeria)、丹毒丝菌属(Erysipelothris)、棒状杆菌(Corynebacteria)、疏螺旋体属(Borellia)、密螺旋体(Treponema)、诺卡氏菌属(Nocardia)、立克次氏体(Rickettsia)、耶尔森氏菌属(Yersinia)。
本发明还涉及本发明的化合物用于治疗和/或预防疾病，特别是细菌感染性疾病的应用。
本发明还涉及本发明的化合物用于治疗和/或预防疾病，特别是上述疾病的应用。
本发明还涉及本发明的化合物用于生产治疗和/或预防疾病、特别是上述疾病的药物的应用。
优选将本发明的化合物用于生产适于预防和/或治疗细菌疾病的药物。
本发明还涉及利用抗菌有效量的本发明化合物治疗和/或预防疾病的方法，所述疾病特别是上述疾病。
本发明还涉及包含至少一种本发明化合物和至少一种或多种另外的活性化合物的药物，特别是用于治疗和/或预防上述疾病。组合用的优选活性化合物是抗菌活性的化合物，其具有不同的活性谱，特别是补充的活性谱，和/或对本发明的化合物是有协同作用的。
本发明的化合物可以全身和/或局部起作用。为此目的，它们可以以适合的方式进行施用，所述方式诸如，例如通过口服的、肠胃外的、经肺的、经鼻的、舌下的、舌的、颊的、直肠的、皮肤的、透皮的、结膜的、耳的途径，或作为植入物或支架。
本发明的化合物可以以适合于这些给药途径的给药形式进行施用。
适合于口服给药的是这样的给药形式，其按照现有技术发挥功能并且快速地和/或以改进的方式递送本发明的化合物，并且其包括晶体形式和/或非晶形形式和/或溶解形式的本发明的化合物，诸如，例如片剂(未包衣的或包衣片剂，例如具有延迟溶解或者是不可溶的并且控制本发明化合物释放的肠溶衣或包衣)，快速在口腔中崩解的片剂或薄膜/糯米纸囊剂，薄膜/冻干物，胶囊(例如硬或软明胶胶囊)，糖衣片剂，颗粒剂，丸剂，粉末，乳剂，混悬剂，气溶胶或溶液。
肠胃外给药的发生可以避免吸收步骤(例如，静脉内、动脉内、心脏内、脊髓内或腰椎内)，或包含吸收(例如，肌内、皮下、皮内、经皮或腹膜内)。适合于肠胃外给药的给药形式特别是，用于注射和输注的，以溶液、混悬液、乳剂、冻干物或无菌粉末形式存在的制剂。
适合于其它给药途径的实例是用于吸入的药物形式(特别是粉末吸气器，喷雾器)，滴鼻剂，溶液，喷雾剂；可以通过舌、舌下或颊施用的片剂，薄膜/糯米纸囊剂或胶囊；栓剂，用于眼和耳的制剂，阴道胶囊，水性混悬液(洗剂，振摇混合物)，亲脂性混悬液，软膏剂，乳膏剂，透皮治疗系统(如，例如贴片)，乳，糊剂，泡沫，扑粉，植入物或支架。
可以将本发明的化合物转化成为所述的给药形式。这可以以本身已知的方式通过混合以惰性、非毒性的药用的赋形剂来进行。这些赋形剂包括，特别是，载体(例如微晶纤维素，乳糖，甘露醇)，溶剂(例如液体聚乙二醇)，乳化剂和分散剂或湿润剂(例如十二烷基硫酸钠，聚氧基失水山梨糖醇油酸酯)，粘合剂(例如聚乙烯吡咯烷酮)，合成的和天然的聚合物(例如白蛋白)，稳定剂(例如抗氧化剂诸如抗坏血酸)，颜料(例如无机颜料诸如氧化铁)或味道和/或气味矫正剂。
本发明还涉及这样的药物和将其用于前述目的的应用，所述药物包括至少一种本发明的化合物，以及通常地一种或多种惰性、非毒性药用的赋形剂。
通常，以约0.001到100mg/kg，优选地约0.1到10mg/kg体重的静脉内给药量施用从而获得有效效果被证明有利的，并且口服给药所用的剂量是约0.01到50mg/kg，优选地0.5到10mg/kg体重。
然而，可能需要的是，当需要时偏离提及的量，其具体地作为体重、给药途径、对活性成分的个体行为、制剂类型和在施用发生过程中的时间或间隔的函数。因此，在某些情形中以少于前述最小量进行的施用可以是充分的，而在其它情形中，必须超过提及的上限。在更大量的施用的情形中，可以推荐将这些分成一天内的多个单独剂量。
除非另外指出，在下述测试和实施例中的百分比是重量百分比；份是重量份。液体/液体溶液的溶剂比率、稀释比率和浓度在每种情形中都是基于体积。
A.实施例
缩写
aq. 水性
面积(Area) (峰)面积
BHI 脑心浸液
Boc 叔-丁氧羰基
br. 宽信号(在NMR光谱中)
calc. 计算值
conc. 浓缩的
d 双峰(在NMR光谱中)
DCC 二环己基碳二亚胺
DCI 直接化学电离(在MS中)
DCM 二氯甲烷
DIEA N，N-二异丙基乙胺
DMAP 4-N，N-二甲基氨基吡啶
DMF N，N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
EA 乙酸乙酯(乙酸乙基酯)
EDC 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(也为
EDCI)
EDCxHCl 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐
EDTA 乙二胺四乙酸
EI 电子碰撞电离(MS中)
ESI 电喷雾电离(MS中)
Ex. 实施例
h 小时
HATU 邻-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六
氟磷酸盐
HOBt 1-羟基苯并三唑
HPLC 高压或高效液相色谱法
HR 高分辨率
i.V 真空
LC-MS 液相色谱-偶联质谱法
LDA 二异丙基氨基化锂
LLA(3-环己基) D-Leu-Leu-(3-环己基)Ala
LLF D-Leu-Leu-Phe
m 中间(在UV和IR光谱中)
m 多重峰(在NMR光谱中)
MALDI 基体-辅助的激光脱附/电离
MIC 最低抑制浓度
min 分钟(单数)/分钟(复数)
Mp. 熔点
MRSA 耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌
MS 质谱法
NCCLS 国家临床实验室标准委员会(National Committee
for Clinical Laboratory Standards)
neg. 负的
NMM N-甲基吗啉
NMR 核磁共振光谱法
p.a. 分析级(pro analysi)
Pd 钯
Pd-C 披钯碳
pos. 正的
PTFE 聚四氟乙烯
quant. 定量
RP-HPLC 反相HPLC
RT 室温
Rt 保留时间(在HPLC中)
s 强(在UV和IR光谱中)
s 单峰(在NMR光谱中)
sat. 饱和的
TBAF 氟化四丁基铵
TBTU 邻-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓四氟硼酸
盐
TCTU 邻-(1H-6-氯苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四
氟硼酸盐
TFA 三氟乙酸
TFE 2，2，2-三氟乙醇
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱法
TMG N，N，N，N-四甲基胍
TMSE 2-(三甲代甲硅烷基)乙基
TOF 飞行时间
UV 紫外线
vis 可见的
VRSA 耐万古霉素的金黄色葡萄球菌
w 弱(在UV和IR光谱中)
Z，Cbz 苄氧羰基
文献
对于肽和环酯肽(cyclodepsipeptides)的命名法，参考：
1.A Guide to IUPAC Nomenclature of Organic Compounds(Recommendations 1993)，1993，Blackwell Scientific publications.
2.Nomenclature and symbolism for氨基acids and peptides.Recommendations 1983.IUPAC-IUB Joint Commission on BiochemicalNomenclature，UK.Biochemical Journal 1984，219，345-373.以及引用的文献。
通用方法GC-MS，LC-MS，HR-MS，HPLC和凝胶色谱法
方法1(TOF-HR-MS)：使用Micromass LCT仪器(毛细管电压：3.2KV，锥形电压(cone voltage)：42V，源极温度：120℃，去溶剂化温度：280℃)记录TOF-HR-MS-ESI+光谱。为此，将输液泵(来自Harvard Instrument)用于进样。将亮氨酸脑磷脂(enkephalin)(Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu)用作标准。
方法2(分析HPLC；Synergi)：仪器类型HPLC：HP 1100系列；UV DAD；柱：Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20mmx4mm；洗脱剂A：1l水+1.0ml的50％甲酸，洗脱剂B：1l的乙腈；梯度：0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；流速：0.0min 1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min.2ml/min；炉：50℃；UV检测：210nm.
方法3(分析HPLC；Synergi)：仪器类型HPLC：HP 1050系列；UV DAD；柱：Phenomenex Synergi 2μ Max-RP Mercury 20mm×4mm；洗脱剂A：1l水+0.05％三氟乙酸，洗脱剂B：1 l的乙腈；梯度：0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；流速：0.0min 1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min.2ml/min；炉：50℃；UV检测：210nm.
方法4(分析HPLC)：仪器类型HPLC：HP 1050系列；UV DAD 1100系列；柱：Kromasil C18，60×2mm，3.5μm；洗脱剂A：水/0.5％高氯酸，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-0.5min 2％B，0.5-4.5min 2-90％B，4.5-6.5min 90％B，6.5-6.7min 90-2％ B，6.7-7.5min 2％B；流速：0.75ml/min，炉：30℃，UV检测210nm.
方法5(LC-MS)：仪器类型MS：Micromass LCT(ESI pos./neg.)；仪器类型HPLC：HP 1100系列；UV DAD 1100系列；柱SymmetryPrepTMC18，Waters，50×2.1mm，3.5μm；洗脱剂A：水/0.1％甲酸，洗脱剂B：乙腈/0.1％甲酸；梯度：0-1min 0％B，1-6min 0-90％B，6-8min 90-100％B，8-10min100％B，10-10.1min 100-0％B，10.1-12min 0％B，然后将色谱柱再生。炉：40℃，流速：0.5ml/min(在10.1min简短地至1ml/min)，UV检测：210nm.
方法6(制备HPLC；Xterra，C18，0.1％TFA)：仪器：Gilson Abimed HPLC；双泵系统；柱：Xterra，Waters，5μm；150×10mm；洗脱剂A：水/0.1％三氟乙酸，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-7min 5％B，7-9min 5-40％B，9-11min40％B，11-18min 40-90％B，然后将色谱柱再生；流速：8ml/min；UV检测器210nm.
方法7(LC-MS)：仪器类型MS：Micromass ZQ；仪器类型HPLC：WatersAlliance 2795；柱：Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20mmx4mm；洗脱剂A：1l水+0.5ml的50％甲酸，洗脱剂B：1l的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度：0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；流速：0.0min 1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min 2ml/min；炉：50℃；UV检测：210nm.
方法8(LC-MS)：仪器：Micromass Quattro LCZ with HPLC Agilent系列1100；柱：Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20mm×4mm；洗脱剂A：1l水+0.5ml的50％甲酸，洗脱剂B：1l的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度：0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；流速：0.0min 1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min 2ml/min；炉：50℃；UV检测：208-400nm.
方法9(氨基酸分析)：用来自Eppendorf/Biotronik的LC3000氨基酸分析仪进行氨基酸分析。使用稍微改进的来自Eppendorf/Biotronik的标准分离程序。分离程序和分析仪的功能在仪器手册中详细描述(Handbuch desAmniosureanalysators LC 3000[Handbook of the LC 3000 Amino AcidAnalyzer]，Wissenschaftliche Gerte GmbH Biotronik，Maintal，1996)。
方法10(制备HPLC，Nucleodur，TFA)：仪器：Gilson Abimed HPLC；双泵系统；柱：NucleodurC18 Gravity，Macherey-Nagel，5μm；250x21mm；洗脱剂A：水/0.1％三氟乙酸，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-8min 5％B，8-40min5-60％B，40-60min 60％B，60-75min 60-100％B，75-80min 100％B，然后将色谱柱再生；流速：7-15ml/min；UV检测器210nm.
方法11(制备HPLC，Nucleodur，乙酸)：仪器：Gilson Abimed HPLC；双泵系统；柱：Nucleodur C18 Gravity，Macherey-Nagel，5μm；250×40mm；洗脱剂A：水/0.2％乙酸，洗脱剂B：乙腈/0.2％乙酸；梯度：0-10min 10％B，10-24min 10-30％B，24-28min 30-50％B，28-35min 50％B，35-45min50-60％B，45-53min 60-70％B，53-60min 60-90％B，60-70min 100％B，然后将色谱柱再生；流速：15-45ml/min；UV检测器210nm.
方法12(制备HPLC，Symmetry，乙酸)：仪器：Gilson Abimed HPLC；双泵系统；柱：SymmetryPrepTMC18，Waters，7μm；300x19mm；洗脱剂A：水/0.5-0.25％乙酸，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-2min 5％B，2-60min 5-90％B，60-80min 100％B，然后将色谱柱再生；流速：7ml/min；UV检测器210nm.
方法13(制备HPLC；Kromasil，乙酸)：仪器：Gilson Abimed HPLC；双泵系统；柱：Kromasil-100A C18，5μm；250×30mm；洗脱剂A：水/0.25％乙酸，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-3min 5％B，3-30min 5-100％B，30-38min100％B，然后将色谱柱再生；流速：25ml/min；UV检测器210nm.
方法14(在Sephadex LH-20上的凝胶色谱法)：在不加压下在Sephadex LH-20(来自Pharmacia)上进行凝胶色谱分离。根据UV活性(UV检测器，254nm，Knauer)进行分级(ISCO Foxy 200级分收集器)，柱尺寸：32×7cm(1000-100μmol规模)；30×4cm(100-10μmol规模)；25×2cm(10-1μmol规模)。将甲醇或甲醇/0.2％乙酸用作洗脱剂。
方法15(手性制备HPLC)：柱(钢柱，尺寸250×30mm)；固定相(手性硅石/聚酰胺复合物KBD 5326，基于选择剂聚(N-异丁烯酰基-L-亮氨酸-二环丙基甲基-酰胺)；洗脱剂：乙酸乙酯，恒溶剂；流速：25ml/min；温度：24℃；UV检测：225nm；样品：重复注射2000μl。
方法16(对映体纯度的测定)：柱(钢柱，尺寸250×4.6mm)；固定相(手性硅石/聚酰胺复合物KBD 5326，基于选择剂聚(N-异丁烯酰基-L-亮氨酸-二环丙基甲基-酰胺)；洗脱剂：乙酸乙酯，恒溶剂；流速：1ml/min；温度：25℃；UV检测：220nm；样品：注射10μl。
方法17(分析HPLC)：仪器类型HPLC：HP 1100系列；UV DAD柱：Zorbax Eclipse XBD-C8(Agilent)，150mmx4.6mm，5μm；洗脱剂A：5ml的HClO4/l水，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-1min 10％B，1-4min 10-90％B，4-5min 90％B；流速：2.0ml/min；炉：30℃；UV检测：210和254nm.
方法18(分析HPLC)：柱：Kromasil RP-18，60mmx2mm，3.5μm；洗脱剂A：5ml的HClO4/l水，洗脱剂B：乙腈；梯度：0min 2％B，0.5min 2％B，4.5min 90％B，9min 90％B；流速：0.75ml/min；炉：30℃；UV检测：210nm.
方法19(分析HPLC)：柱：Kromasil RP-18，250mmx4mm，5μm；洗脱剂A：5ml的HClO4/l水，洗脱剂B：乙腈；梯度：0min 5％B，10min 95％B；流速：1ml/min；炉：40℃；UV检测：210nm.
方法20(分析HPLC)：柱：Kromasil RP-18，250mmx4mm，5μm；洗脱剂A：2ml的HClO4/l水，洗脱剂B：乙腈；恒溶剂：45％B，55％A；流速：1ml/min；炉：40℃；UV检测：210nm.
方法21(制备HPLC；Nucleodur，0.05-0.1％TFA)：仪器：Gilson AbimedHPLC；双泵系统；柱：Nucleodur C18 Gravity，Macherey-Nagel，5μm，250x21mm；洗脱剂A：水/0.05-0.1％TFA，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-8min 5％B，8-40min 5-60％B，40-60min 60％B，60-75min 60-100％B，75-80min 100％B，然后将色谱柱再生；流速：7-15ml/min；UV检测：210nm.
方法22(分析HPLC)：仪器类型HPLC：HP 1050系列；UV DAD 1100系列；柱：Kromasil C18，60mmx2mm，3.5μm；洗脱剂A：水/0.5％高氯酸，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-0.5min 2％B，0.5-4.5min 2-90％B，4.5-9.0min 90％B，9.0-9.2min 90-2％B，9.2-10.0min 2％B；流速：0.75ml/min，炉：30℃，UV检测210nm.
方法23(分析HPLC)：Agilent 1100，具有DAD(G1315B)，双泵(G1312A)，自动进样器(G1313A)，脱气器(G1379A)和柱恒温器(G1316A)；柱：Synergi 4μHydro-RP 80A，4.6x150x5mm；洗脱剂A：水+0.05％70％高氯酸；洗脱剂B：乙腈；梯度：0-1min 10％B，坡度，4-5min 90％B，坡度，5.5min 10％B；流速：2.00ml/min；炉温：30℃.
方法24(分析HPLC)：仪器：Agilent 1100，具有DAD(G1315B)，双泵(G1312A)，自动进样器(G1313A)，溶剂脱气器(G1379A)和柱恒温器(G1316A)；柱：Agilent Eclipse XDB-C8 4.6x150x5mm；洗脱剂A：0.05％水中的70％高氯酸；洗脱剂B：甲醇；恒溶剂：0-7min 55％B；流速：2.00ml/min；柱温度：40℃.
方法25(分析HPLC)：仪器类型HPLC：HP 1050系列；UV DAD；柱：Zorbax 300 mSB-C18 3.5μ，4.6mm×150mm；洗脱剂A：11水+0.1％三氟乙酸，洗脱剂B：400ml的乙腈/600ml水+0.1％三氟乙酸；梯度：0.0min 100％A，1.3min 10％B，18.0min 80％B，20.0min 80％B，21.0min100％B，25.0min 100％B，26.0min 0％B，30.0min 0％B.流速：1ml/min；炉：40℃；UV检测：210nm.
方法26(手性HPLC)：Gilson Abimed HPLC；柱：Daicel Chiralpak AD-H5μm；250mm×20mm；洗脱剂A：异己烷，洗脱剂B：0.2％乙酸/1％水/2-丙醇；恒溶剂；流速：15ml/min；UV检测器212nm.
方法27(对映体纯度的测定)：钢柱：尺寸250mm×4.6mm；固定相：Daicel Chirapak AD-H，5μm；洗脱剂∶乙醇/水/乙酸1000∶10∶2，恒溶剂；流速：0.7ml/min；温度：45℃；UV检测：215nm；样品：注射5μl.
方法28(对映体纯度的测定)：柱(钢柱：尺寸250mm×4.6mm)；固定相(Chirapak IA)；洗脱剂：异己烷/异丙醇4∶1，恒溶剂；流速：1ml/min；温度：25℃；UV检测：254nm；样品：注射10μl.
方法29(LC-MS)：UV检测：210nm.仪器类型MS：Micromass ZQ；仪器类型HPLC：Waters Alliance 2795；柱：Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RPMercury 20mmx4mm；洗脱剂A：1l水+0.5ml的50％甲酸，洗脱剂B：1l的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度：0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；流速：0.0min 1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min 2ml/min；炉：50℃；UV检测：210nm.
方法30(LC-MS)：仪器：Micromass Platform LCZ，具有HPLC Agilent系列1100；柱：Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20mmx4mm；洗脱剂A：1l水+0.5ml的50％甲酸，洗脱剂B：1l的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度：0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min5％A；流速：0.0min 1ml/min，2.5min/3.0min/4.5min 2ml/min；炉：50℃；UV检测：210nm.
方法31(MALDI-MS)：使用装配了TOF/TOF离子光学系统和200HzNd:YAG激光器(355nm)的4700 Proteomics Analyzer(Applied Biosystems，Framingham，MA，USA)上进行MALDI-MS/MS研究。准分子离子在离子源中使用8kV加速，使用电子偏转器(MS1)选择，并在布置在MS1和MS2之间的冲击室中与氩原子撞击。获得的碎片离子使用15kV再加速，并使用第二次飞行质量分析仪(MS2)进行表征。
方法32(手性制备HPLC)：钢柱：尺寸420mm×75mm；固定相：硅胶相，具有选择剂聚(N-异丁烯酰基-L-亮氨酸-二环丙基甲基-酰胺)；洗脱剂A：叔-丁基甲基醚，洗脱剂B：甲醇；梯度：0-22.17min 100％A，22.18-27.24min 100％B，27.25-40.30min 100％A；流速：100ml/min；温度：24℃；UV检测：260nm；样品：重复注射50000μl.
方法33(制备HPLC，Nucleodur，0.05-0.1％TFA)：仪器：Gilson AbimedHPLC；双泵系统；柱：Nucleodur C18 Gravity，Macherey-Nagel，5μm；250mm×40mm；洗脱剂A：水/0.05-0.1％三氟乙酸，洗脱剂B：乙腈；梯度：0-10min 10％B，10-24min 10-30％B，24-28min 30-50％B，28-35min50％B，35-45min 50-60％B，45-53min 60-70％B，53-60min 60-90％B，60-70min 100％B，然后将色谱柱再生；流速：15-45ml/min；UV检测器210nm.
方法34(制备HPLC Kromasil 0.05％TFA)：仪器：Gilson Abimed HPLC；UV-检测器210nm；双泵系统；柱：Kromasil C18，5μm，100，250mmx20mm；洗脱剂A：在水中0.05％三氟乙酸，洗脱剂B：在乙腈中0.05％三氟乙酸：流速：20ml/min；0-3min 10％B，坡度，30-38min 90％B，38-45min 10％B.
方法35(制备HPLC，Nucleodur C18 Gravity，0.05-0.1％TFA)：仪器：Gilson Abimed HPLC；双泵系统；柱：Nucleodur C18 Gravity，5μm；250mmx40mm；洗脱剂A：水/0.05-0.1％三氟乙酸，洗脱剂B：乙腈；0-10min10％B，坡度，10.01-55min 100％B；流速：10-60ml/min；UV检测器210nm.
方法36(制备HPLC，Kromasil，0.05％TFA)：仪器：Gilson Abimed HPLC；双泵系统；柱：Kromasil-100A C18，5μm；250mm×30mm；洗脱剂A：水/0.05％三氟乙酸，洗脱剂B：乙腈；0-10min 10％B，坡度，10.01-55min100％B；流速：30ml/min；UV检测器210nm.
方法37(制备HPLC，Kromasil，0.05％TFA)：仪器：Gilson Abimed HPLC；双泵系统；柱：Kromasil-100A C18，5μm；250mmx21mm；洗脱剂A：水/0.05％三氟乙酸，洗脱剂B：乙腈；0-10min 10％B，坡度，10.01-55min100％B；流速：20ml/min；UV检测器210nm.
方法38(制备HPLC，Kromasil，0.05％TFA)：仪器：Gilson Abimed HPLC；双泵系统；柱：Kromasil-100A C18，5μm；250mmx21mm；洗脱剂A：水/0.05％三氟乙酸，洗脱剂B：乙腈/水50/50；0-10min 10％B，坡度，10.01-55min 100％B；流速：20ml/min；UV检测器210nm.
方法39(制备HPLC，Kromasil，0.05％TFA)：仪器：Gilson Abimed HPLC；双泵系统；柱：Kromasil-100A C18，5μm；250mmx30mm；洗脱剂A：水/0.05％三氟乙酸，洗脱剂B：乙腈；0-10min 10％B，坡度，10.01-55min100％B；流速：10-60ml/min；UV检测器210nm.
方法40(制备HPLC)：仪器：Gilson Abimed HPLC；UV-检测器210nm；双泵系统；柱：Waters Symmetry-PrepTM C18，7μm，300mmx19mm；洗脱剂A：在水中0.05％三氟乙酸，洗脱剂B：在乙腈中0.05％三氟乙酸：流速：20ml/min；0-3min 10％B，坡度，30-38min 90％B，38-45min 10％B.
方法41(制备HPLC，Grom-Sil，0.1％TFA)：仪器：Gilson Abimed HPLC；UV-检测器210nm；双泵系统；柱：Grom-Sil SNr.4051 120 ODS-4HE，10μm，250mmx40mm；洗脱剂A：在水中0.1％三氟乙酸，洗脱剂B：在乙腈中0.1％三氟乙酸；流速：50ml/min；0-3min 10％B，3-27min梯度坡度，27-35min 95％B，35-40min 10％B.
方法42(手性制备HPLC)：柱(钢柱，尺寸500mm×50mm)；固定相(Chirapak AD，20μm)；洗脱剂A：异己烷，洗脱剂B：异丙醇；梯度：0-11.74min 15％B，11.74-11.75min 100％B，15.74min 100％B，15.75min15％B，21.25min 15％B；样品制备：溶解于50ml异丙醇/200ml异己烷中；注射体积：30ml，温度：24℃；UV检测：220nm.
方法43(制备HPLC)：仪器：Gilson Abimed HPLC；UV检测器254nm；双泵系统；柱：Nucleosil RP-18，7μm；250x50mm；流速：30ml/min；洗脱剂A：水/0.1％三氟乙酸，洗脱剂B：乙腈/0.1％三氟乙酸；梯度：0-40min20-25％B，40-60min 25％B，60-110min 25-50％B，110-120min 50％B，120-130min 50-100％B，130-160min 100％B，然后将色谱柱再生。
方法44(制备HPLC)：仪器：Gilson Abimed HPLC；UV检测器254nm；双泵系统；柱：Nucleosil RP-18，7μm；250x50mm；流速：40ml/min；洗脱剂A：水/0.05％三氟乙酸，洗脱剂B：乙腈/0.05％三氟乙酸；梯度：0-105min 20-25％B，105-111min 25％B，111-131min 25-27％B，131-157min27-35％B，157-192min 35-40％B，192-207min 40-45％B，然后将色谱柱再生。
一般工作步骤
工作步骤1(用TFA去除Boc保护基)
将Boc-保护的化合物悬浮在二氯甲烷(1/5-l/10的反应溶液)中，然后在氩气保护气氛下加入二氯甲烷中的三氟乙酸(30％；在100-1毫摩尔的级别上约1ml/10mg的原材料，在100-1微摩尔的基本上约1ml/1mg)，将混合物在室温下搅拌直至HPLC色谱图显示完全转化(方法2)。然后真空蒸馏掉溶剂，其中浴温应当超过30℃。将粗产物悬浮在甲苯中，在旋转蒸发仪上再次浓缩并在高真空下干燥。用甲苯或用二氯甲烷重复该步骤数次(2-5次)。
工作步骤2(去除N-叔-丁氧羰基保护基，二噁烷，4N氯化氢)
在氩气保护气氛下将N-(叔-丁氧羰基)-保护的化合物(1mmol)提供到二噁烷(2-3ml)中。在RT和剧烈搅拌下，滴加二噁烷(30ml)中的4N盐酸。搅拌混合物直至分析HPLC(方法2)显示完全转化(约2h)。将反应混合物在RT下真空蒸发。将粗产物置入少量二氯甲烷并再次在真空中去除溶剂。用甲苯(两次)和用二氯甲烷(两次)重复该操作数次。最后，将粗产物冻干或在高真空干燥后直接进一步反应。
工作步骤3(氢解酯裂解，去除Cbz保护基)
将肽苄基酯或肽N-Cbz-保护的胺(1.2mmol)溶解在甲醇(60ml)中，在氩气保护气氛下加入10％披钯碳(100mg)。将混合物在RT和大气压下氢化直至分析HPLC(方法2)显示完全转化。将反应混合物过滤(例如通过硅藻土，Celite)，真空浓缩并在高真空下干燥。
工作步骤4(水解性酯裂解，水解)
在氩气保护气氛下将羧酸酯(3mmol)提供到THF/水/DMF 200/100/2.5(20ml)中。在严格温度控制0℃下，将粉末氢氧化锂(3.6mmol，1.2当量)分份加入剧烈搅拌的溶液中。当在2h后通过分析HPLC观察到没有完全转化时，再次加入固体氢氧化锂(3.3mmol，1.1当量)。重复该操作直至完全转化，于是将反应混合物在0℃下用0.1N盐酸调整到pH3-4，然后冷冻干燥。然后将粗产物凝胶-色谱分离(方法14)和/或通过制备HPLC(方法13)精纯化。
工作步骤5(酰胺偶联)
将HATU(1.5-1.8当量)首先在-20℃下在氩气保护气氛下加入胺(aminic)环肽(1.0当量)、二肽酸(1.5-1.8当量)和NMM(1.0-2.0当量)在无水DMF中的溶液。将反应混合物搅拌(约15min)，再次加入NMM(2.5-3.0当量)。将反应混合物缓慢从-10℃升温至RT，将混合物在该温度下进一步搅拌直至发现胺组分的完全转化。加入固体磷酸二氢钾(10当量，500μmol)，然后在高真空下蒸发反应混合物，通过色谱法纯化。
备选地，在转化完成后，可以将水和甲醇加入反应，然后在经由制备RP-HPLC或凝胶色谱法纯化之后获得产物。
起始化合物
实施例1A
D-亮氨酰-Nl-{(3S，6S，12S，15S，18R，21S，24S，27S，28R)-6-[(1S)-2-氨基-1-羟基-2-氧代乙基]-18-(3-{[氨基(亚氨基)甲基]氨基}丙基)-12-[(1S)-1-羟基乙基]-3-(羟基甲基)-24-[(1R)-1-羟基-2-甲基丙基]-21-异丁基-15-[(1S)-1-甲基-丙基]-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧代-28-苯基-1-氧杂-4，7，10，13，16，19，22，25-八氮杂环二十八碳烷-27-基}-L-亮氨酰胺双三氟乙酸盐(溶杆菌素)
发酵：
培养基：
YM：酵母-麦芽琼脂：D-葡萄糖(4g/l)，酵母提取物(4g/l)，麦芽提取物(10g/l)，1升的离子交换树脂水(Lewatit water)。在灭菌(121℃下20分钟)之前将pH调节至7.2。
HPM：甘露糖醇(5.4g/l)，酵母提取物(5g/l)，肉蛋白胨(3g/l)。工作保藏：将冻干的菌株(ATCC 53042)在50ml的YM培养基中培养。烧瓶发酵：用2ml所述工作保藏接种物1升锥形瓶中的150ml的YM培养基或100ml的HPM培养基并且使其在28℃在240rpm的振荡器上培养30-48小时。
30l的发酵：将300ml的烧瓶发酵(HPM培养基)用于接种无菌的30l营养培养基溶液(每升1ml消泡剂SAG 5693)。将该培养物在28℃，300rpm并用0.3vvm的无菌空气通气下生长21小时。用1M盐酸将pH在pH＝7.2保持恒定。总计，在培养周期期间加入880ml的1M盐酸。
主要培养(200l)：将1l锥形瓶中的15×150ml的YM培养基用2ml的工作保藏接种并使其在振荡器上在28℃和240rpm下生长48小时。将2250ml的该培养物用于接种无菌的200l营养培养基溶液(YM)(每升1ml消泡剂SAG 5693)并使其在28℃，150rpm和用0.3vvm无菌空气通气下生长18.5小时。
每小时取样(50ml)以检验所述发酵过程。将1ml的甲醇(0.5％三氟乙酸)加入到2ml的该培养液并且将所述混合物通过0.45μm过滤器过滤。将30μl的该悬浮液通过HPLC(方法17和方法18)分析。
在18.5小时后，将主要培养物的培养液在17000rpm下分成上清液和沉淀物。
离析：
利用浓缩的三氟乙酸或氢氧化钠溶液将所述上清液(183l)调节到pH6.5-7并且装载到Lewapol柱(OC 1064，60l容量)上。随后用纯水、水/甲醇1∶1并随后用纯甲醇(含有0.1％三氟乙酸)进行洗脱。将该有机相真空浓缩成11.5l的残留水残液。
将残留的水相结合到硅胶C18并分离(MPLC，Biotage Flash 75，75×30cm，KP-C18-WP，15-20μm，流速：30ml；洗脱剂：含有0.1％三氟乙酸的乙腈/水；梯度：10％，15％和40％乙腈)。将含有实施例1A主要量的40％乙腈相真空浓缩并随后冷冻干燥(约13g)。将该固体混合物首先在制备HPLC(方法43)上，随后通过Sephadex LH-20(5×70cm，乙腈/水1∶1，在每个情况下含有0.05％三氟乙酸)上的凝胶过滤和进一步的制备HPLC(方法44)分离成1.2g的部分。
该过程提供2250mg的实施例1A。
将所述沉淀物置入4l的丙酮/水4∶1中，加入2kg的C盐，将所述混合物利用三氟乙酸调节到pH＝6，搅拌并离心。将所述溶剂真空浓缩，并且将残余物冷冻干燥。将获得的冻干物(89.9g)置入甲醇中，过滤，浓缩并在硅胶(方法20)上分离。然后将实施例1A通过凝胶过滤(Sephadex LH-20，5×68cm，水/乙腈9∶1(含有0.05％三氟乙酸)，流速：2.7ml/min，级分大小13.5ml)纯化而得到纯物质。
该过程得到447mg的实施例1A。
HPLC(方法17)：Rt＝6.19min
MS(ESIpos)：m/z＝1277(M+H)+
1H NMR(500.13MHz，d6-DMSO)：δ＝0.75(d，3H)，0.78(d，6H)，0.80(t，3H)，0.82(d，3H)，0.90(d，3H)，0.91(d，3H)，0.92(d，3H)，0.95(d，3H)，0.96(d，3H)，1.05(m，1H)，1.19(d，3H)，1.25(m，2H)，1.50(m，4H)，1.51(m，2H)，1.55(m，1H)，1.61(m，1H)，1.65(m，1H)，1.84(m，1H)，1.85(m，1H)，1.86(m，1H)，1.89(m，1H)，1.95(m，1H)，2.75(m，2H)，3.40(m，1H)，3.52(m，2H)，3.53(dd，1H)，3.64(m，2H)，3.66(m，1H)，3.68(dd，1H)，3.73(m，2H)，4.00(dd，1H)，4.02(br.，1H)，4.13(br.，1H)，4.32(dd，1H)，4.39(t，1H)，4.55(m，1H)，4.75(dd，1H)，5.19(t，1H)，5.29(d，1H)，5.30(br.，1H)，5.58(m，2H)，6.68(m，3H)，6.89(d，1H)，6.93(m，3H)，6.94(br.，1H)，6.98(d，1H)，7.12(br.，1H)，7.20(br.，2H)，7.23(m，2H)，7.42(m，2H)，7.54(d，1H)，7.58(d，1H)，8.32(br.，1H)，9.18(br.，1H)，9.20(m，2H)，9.50(br.，1H)。
13C NMR(125.77MHz，d6-DMSO)：δ＝10.3，15.3，19.0，19.2，19.6，20.0，20.9，22.0，22.4，23.0，23.2，24.3，24.4，25.0，25.4，26.0，27.8，30.9，35.4，39.5，40.8，40.9，41.6，44.1，51.5，52.7，55.9，56.2，56.4，57.9，58.8，60.2，61.1，62.6，70.1，71.6，71.7，75.5，128.1，128.6，136.7，156.8，168.2，170.1，170.4，171.2，171.5，171.9，172.2，172.4，173.7.
根据文献(T.Kato，H.Hinoo，Y.Terui，J.Antibiot.，1988，61，719-725)中描述的指定进行所述信号的指定(assignment)。
实施例2A
二氢溶杆菌素三氟乙酸盐{D-Leu-Leu-Phe-[(3R)-Leu(3-OH)]-Leu-D-Arg-Ile-aThr-Gly-[(3S)-3-Asn(3-OH)]-Ser三氟乙酸盐}和八氢溶杆菌素三氟乙酸盐{D-Leu-Leu-Ala(3-环己基)-[(3R)-Leu(3-OH)]-Leu-D-Arg-Ile-aThr-Gly-[(3S)-3-Asn(3-OH)]-Ser三氟乙酸盐}的混合物
将溶杆菌素双三氟乙酸盐(实施例1A，500mg，0.33mmol)溶解在异丙醇/水2∶1(30ml)中。在氩气保护气氛下，加入披钯碳(10％；100mg)。将反应混合物(在脱气后)在压力高压灭菌器中在80-70巴氢气压力下和在RT下搅拌48小时。对于该反应，再次加入披钯碳(10％；100mg)。将反应混合物(在脱气后)再次在压力高压灭菌器中在80-70巴氢气压力下和在RT下搅拌48小时。现在，通过HPLC(方法2)不能再检测到溶杆菌素。将反应混合物过滤通过玻璃粉(glass frit)(孔径4)或通过硅藻土，真空浓缩，再次置入甲醇/0.2％乙酸中，过滤通过注射器滤器(来自Biotage，PTFE)，真空浓缩并在高真空下干燥。获得496mg(quant.)的产物(80％二氢溶杆菌素，20％八氢溶杆菌素)。
实施例3A
[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸三氟乙酸盐{Edman3.0降解产物三氟乙酸盐}
将775mg的二氢溶杆菌素和八氢溶杆菌素溶解在77.5ml的甲醇中，然后加入667ml的裂解缓冲液(0.1M碳酸氢铵溶液/0.5M脲，pH8)。在加入酶之前，将溶液在干燥箱中加热至37℃。加入31mg的糜蛋白酶(在1∶1水/乙二醇中31ml的糜蛋白酶溶液，1mg/ml；1∶25；预热至37℃)，在37℃下进行反应。在60min后，用30ml的乙腈和约6ml的TFA终止酶反应。溶液的pH为1-2。溶液可以贮存在-20℃直至制备分离。
片段1-3和4-11的制备分离
将约800ml的裂解溶液过滤通过滤器(0.2μm)和以两份每份约400ml在Source 15RPC柱(40ml)上利用乙腈/TFA梯度色谱分离。条件：洗脱剂A：0.1％TFA，洗脱剂B：0.1％TFA/乙腈；梯度：在40min内0％B至45％B；流速：2ml/min；UV检测210nm；级分大小1.5ml。
将片段4-11(Rt＝约15min)和1-3(LLF)(Rt＝约25min)和1-3(LLA(3-环己基))(Rt＝约30min)合并和冻干。这样，获得作为片段4-11的标题化合物。
HPLC/UV-Vis(方法3)：Rt＝1.2min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.0min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝453.5(100)[M+2H]2+，906(10)[M+H]+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝904(100)[M-H]-.
LC-MS(方法5)：Rt＝3.6min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝453.5(100)[M+2H]2+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝904(100)[M-H]-.
实施例4A
(Z)-2-[(叔-丁氧羰基)氨基]-4，4-二甲基戊-2-烯甲酯
将新戊醛(303.2g，3.41mol，10当量)和{[叔-丁氧羰基]氨基}-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(101.5g，0.341mol，1.0当量)溶解在四氢呋喃(800ml)中并冷却至-70℃。在-70℃下，缓慢滴加N，N，N，N-四甲基胍(78.7g，0.683mmol，6.95ml，2.0当量)，然后将混合物在-70℃下搅拌4小时，随后，将混合物在RT下搅拌4天。浓缩反应混合物，然后用乙酸乙酯(2×500ml)对水萃取，将合并的有机相用饱和氯化钠溶液(100ml)洗涤并通过硫酸钠干燥。在浓缩后，将粗产物色谱分离(1.5kg的硅胶，洗脱剂：环己烷/乙酸乙酯5∶1)。获得67g(76％理论值)的标题化合物。
备选地，在水性后加工后，促产物可以通过从环己烷/乙酸乙酯结晶来纯化。
Rf(硅胶，4∶1环己烷/乙酸乙酯)＝0.5
LC-MS(方法7)：Rt＝2.5min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝158(100)[M-Boc+H]+，280(5)[M+Na]+.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ＝1.08(s，9H，C(CH3)3)，1.38(s，9H，OC(CH3)3)，3.61(s，3H，CO2CH3)，6.40(s，1H，CβH)，8.14(s，1H，NH)。HR-TOF-MS(方法1)：C13H23NO4[M+H]+实验值258.1696，计算值258.1700.
实施例5A
N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-D-丙氨酸甲酯
将(2Z)-2-[(叔-丁氧羰基)氨基]-4，4-二甲基戊-2-烯甲酯(实施例4A，60g，233.2mmol)溶解在乙醇p.a./二噁烷3∶1(1000ml)中。使用套管将氩气通过约10min。将溶液置入超声波槽(约5min)，加入(+)-1，2-双[(2R，5R)二乙基phospholano]苯(环辛二烯)铑(I)三氟甲磺酸盐(600mg，1重量％)。将混合物在3.5巴氢压力下和RT下氢化3天。将反应混合物过滤通过硅藻土并浓缩洗脱液。将粗产物色谱分离(硅胶，洗脱剂：环己烷/乙酸乙酯4∶1)。获得60g(99％理论值)的标题化合物。
[α]20 Na＝+5°(c＝0.33在CHCl3)。
DCI-MS(NH3)：m/z(％)＝221(100)，260(40)[M+H]+，277(100)
[M+NH4]+.
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝0.93(s，9H)，1.40(m，10H)，1.68(dd，J＝3.7，14.5Hz，1H)，3.68(s，3H)，4.30(t，J＝7.9Hz，1H)，4.81(d，br，J＝7.7Hz，1H)。
13C NMR(126MHz，CDCl3)：δ＝28.30(3C)，29.52(3C)，30.61，46.27，51.19，52.17，79.79，155.11，174.39.
HR-TOF-MS(方法1)：C26H51N2O8计算值519.3640，实验值519.3634[M+H]+.
实施例6A
N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-D-丙氨酸
将N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-D-丙氨酸甲酯(实施例5A，60g，231mmol)溶解在四氢呋喃p.a.(463ml)中。在RT下，缓慢滴加氢氧化锂一水合物(19.4g，462.7mmol)在水(463ml)中的溶液。当HPLC色谱图(方法2)显示完全转化(约20h)时，用1N盐酸水溶液在冰冷却下将反应混合物缓慢调节至pH 3-4。将氯化钠(150g)加入反应混合物以便随后用乙酸乙酯(2×500ml)萃取它。将合并的有机相用饱和氯化钠溶液干燥，然后用硫酸钠干燥并过滤。将滤液在旋转蒸发仪上浓缩并在高真空下干燥。获得55.4g(98％理论值)的标题化合物。
HPLC/UV-Vis(方法4)：Rt＝4.2min.
DCI-MS(NH3)：m/z(％)＝263(100)[M+NH4]+，280(5)[M+N2H7]+.
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ＝0.96(s，9H，C(CH3)3)，1.42(m，10H，OC(CH3)3，Hβ)，1.79(“d”，J＝14.4Hz，1H，Hβ)，4.31(t，J＝8.0Hz，1H，Hα)，4.82(d，J＝8.4Hz，1H，NH)。
13C NMR(126MHz，CDCl3)：δ＝28.32(3C)，29.54(3C)，30.74，45.92，51.24，80.19，155.41，178.93.
HR-TOF-MS(方法1)：C24H47N2O8计算值491.3327，实验值491.3328[2M+H]+.
实施例7A
3-叔-丁基-L-丙氨酸甲酯盐酸盐
为了制备标题化合物，参见S.D.Bull，S.G.Davies，A.C.Garner，M.D.O′Shea，J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，2001，3281-3287。按照工作步骤2，由N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-L-丙氨酸甲酯(28.0g，108mmol)和在二噁烷(280ml)中的4N盐酸获得标题化合物。产率22g(定量)。在不纯化下使产物进一步反应。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ＝0.95(s，br，9H，tBu)，1.65(dd，1H)，1.80(dd，1H)，3.75(s，3H，OCH3)，3.90(dd，1H)，8.60(s，br，3H)。
实施例8A
N-(叔-丁氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸甲酯
在-20℃下将HOBt(3当量，39.4g，292mmol)，N-甲基吗啉(3当量，32.1ml，291.8mmol)，N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-D-丙氨酸(实施例6A，1.0当量，97.3mmol)，EDC(2当量，37.3g，194.6mmol)和再次N-甲基吗啉(2当量，21.4ml，194.5mmol)连续加入3-叔-丁基-L-丙氨酸甲酯盐酸盐(1.1当量，21g，107mmol)在二氯甲烷p.a.(1.41)中的溶液。将反应混合物缓慢升温(约12h)至RT，其中通过HPLC观察到胺组分的完全转化。然后将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(300ml)，5％柠檬酸水溶液(2×500ml)，饱和碳酸氢钠水溶液(500ml)和饱和氯化钠溶液洗涤。将反应混合物通过硫酸钠干燥并过滤。将混合物真空浓缩至干燥，然后在高真空下进一步干燥。获得36g(96％理论值)的标题化合物，其在不进一步纯化下反应。
DCI-MS(NH3)：m/z(％)＝387(40)[M+H]+，404(100)[M+NH4]+.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ＝0.95(s，br，18H，tBu)，1.35(dd，1H)，1.45(s，9H，OtBu)，1.50(dd，1H)，1.65(dd，1H)，1.95(dd，br，1H)，3.70(s，3H，OCH3)，4.15(“t”，br，1H)，4.55(“t”，br，1H)，4.80(d，1H)，6.65(d，br，1H)。
实施例9A
N-(叔-丁氧羰基)-D-亮氨酰-L-亮氨酸苄酯
在-10℃下将HOBt(4当量，540mg，4mmol)，N-甲基吗啉(3当量，3mmol)，N-叔-丁氧羰基-D-亮氨酸(1.0当量，230mg，1mmol；Bachem)，EDC(2当量，380mg，2mmol)和再次N-甲基吗啉(2当量，2mmol)连续加入L-亮氨酸苄酯盐酸盐(1.1当量，300mg，1.1mmol；cf.T.Wakamiya，M.Kamata，S.Kusumoto，H.Kobayashi，Y.Sai，et al.，Bull.Chem.Soc.Jpn.，1998，71，699-710)在二氯甲烷p.a.(30ml)中的溶液。将反应混合物缓慢升温(约12h)至RT，将反应混合物缓慢升温(约12h)至RT，其中通过HPLC观察到胺组分的完全转化。将反应混合物真空浓缩，置入乙腈中并通过制备HPLC(方法13)纯化。获得362mg(80％理论值)的标题化合物。
HPLC/UV-Vis(方法4)：Rt＝5.3min.
[α]20 Na＝+19°(c＝0.10，在二氯甲烷中)。
实施例10A
N-(叔-丁氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸
将N-(叔-丁氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸甲酯(实施例8A，36g，93.1mmol)溶解在四氢呋喃p.a.(279ml)中。在约10℃，缓慢滴加氢氧化锂一水合物(7.82g，186.3mmol，2当量)在水(187ml)中的溶液。当HPLC色谱图(方法2)显示完全转化时(约20h)，在200毫巴下从反应混合物去除THF，然后用甲基叔-丁基醚(200ml)萃取。将有机相用乙酸乙酯(500ml)稀释有机相，然后加入水，随后用1N盐酸水溶液将混合物小心调节至pH3-4。用饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机相，通过硫酸钠干燥，过滤，真空蒸发并在高真空下干燥。加入97.4g(97％理论值)的标题化合物。
LC-MS(方法7)：Rt＝2.26min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝373(100)[M+H]+.
HR-TOF-MS(方法1)：C19H37N2O5计算值373.2702，实验值373.2717[M+H]+.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ＝0.83(s，br，18H，tBu)，1.31(s，9H，OtBu)，1.40(d，J＝6.1Hz，2H，ββ-CH2)，1.48(dd，J＝14.1，9.4Hz，1H，ββ-CH)，1.59(dd，J＝14.1，2.7Hz，1H，β-CH′)，3.98(m，1H，α-CH)，4.12(m，1H，α-CH)，6.73(d，J＝9.1Hz，1H，NH)，7.72(d，J＝7.9Hz，1H，NH)，12.42(s，br，1H，CO2H)。
13C NMR(125MHz，d6-DMSO)：δ＝28.49(3C)，29.66(3C)，29.78(3C)，30.52，30.58，44.63(β-CH2)，45.24(β-CH2)，49.67(α-CH)，52.40(α-CH)，78.29，155.05，172.97，174.61.
实施例11A
N-(叔-丁氧羰基)-D-亮氨酰-L-亮氨酸
根据工作步骤3将N-(丁氧羰基)-D-亮氨酰-L-亮氨酸苄酯(实施例9A，308mg，0.69mmol)反应。获得244.6mg(99％理论值)的标题化合物。
HPLC/UV-Vis(方法4)：Rt＝4.5min.
HR-TOF-MS(方法1)：C18H35N2O5[M+H]+实验值359.2535，计算值359.2546.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ＝0.85(m，14H，4×CH3，2×γ-CH)，1.35(m，10H，OtBu，β-CH)，1.50-1.65(m，3×β-CH)，4.00(dd，1H，α-CH)，4.20(“t”，1H，α-CH)，6.70(d，1H，NH)，7.90(d，1H，NH)，12.50(s，br，1H，CO2H)。
实施例12A
(2R*，3R*)-N2-[(苄氧基)羰基]-N2-[(苄氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯
在氩气保护气氛下，将THF中的1N六甲基二硅叠氮化锂溶液(157.5mmol，157.5ml，2.2当量)提供在反应溶剂THF(300ml)中。在-78℃下，缓慢滴加(rac)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-3-苯基丙酸甲酯(A.V.Rao Rama，A.K.Singh，Ch.V.N.S.Varaprasad，Tetrahedron Lett.，32，1991，4393-4396)(20g，71.2mmol)的溶液。将混合物在-25℃下搅拌10分钟，然后再次冷却至-78℃。将氮杂二羧酸二苄酯(34.2g，114.6mmol，1.6当量)一次性加入反应混合物。将混合物在-60至-45℃下搅拌3小时。为了终止反应，将混合物再次冷却至-78℃，加入乙酸(20.5ml，358mmol，5当量)，然后升温至0℃和最终RT。将反应混合物真空蒸发和置入乙酸乙酯(1000ml)。将悬浮液用饱和碳酸氢钠水溶液(两次)，水(一次)，5％柠檬酸水溶液(两次)和饱和氯化钠水溶液(一次)洗涤。所有水相单独地用乙酸乙酯反萃取。将所有的有机相真空蒸发并再次置入二氯甲烷(2000ml)中，过滤，通过硫酸钠干燥，再次过滤，真空蒸发并在高真空下干燥。获得作为固体的7.2g(18％理论值)的标题化合物。将二氯甲烷相的滤液(见上)浓缩并然后从甲醇中再次再结晶，获得13.2g(26％理论值)的标题化合物。
备选合成方法：在氩气保护气氛下，将在THF中的1N六甲基二硅叠氮化锂溶液(590.7mmol，590.7ml，2.2当量)提供给反应溶剂THF(2500ml)中。在-78℃下，缓慢滴加(rac)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-3-苯基丙酸甲酯(75g，268.5mmol)的溶液(内部温度约-70℃)。将混合物在-25℃下搅拌10分钟，然后再次冷却至-70℃。将无水氮杂二羧酸二苄酯(128.2g，429.6mmol，1.6当量)作为固体以四份加入反应混合物。将混合物在-60至-50℃下搅拌2小时。为了终止反应，将混合物再次冷却至-78℃，加入乙酸(76.9ml，1342mmol，5当量)，将混合物然后升温至0℃和最终RT。由此，标题化合物作为固体沉淀，其在真空干燥箱中干燥(4.1g，2.2％理论值，晶体1)。将反应混合物真空蒸发，将残余物在乙酸乙酯中再结晶，由此获得作为固体的标题化合物(38.8g，24.3％理论值，晶体2)。将母液用乙酸乙酯稀释，然后用水(两次)和饱和氯化钠水溶液(两次)洗涤。将有机相通过硫酸钠干燥，过滤，真空蒸发并在高真空下干燥。从乙酸乙酯-二乙基醚中再结晶粗产物。获得作为固体的标题化合物(50.4g，28％理论值，晶体3)。蒸发母液和通过快速色谱法纯化(1.5kg的硅胶，甲苯/乙酸乙酯4∶1)。获得4.7g(1.7％理论值)的标题化合物。总产率98.0g的标题化合物(56.2％理论值)。LC-MS(方法5)：Rt＝6.8min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝578(40)[M+H]+，1156(100)[2M+H]+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝576(100)[M-H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C31H36N3O8[M+H]+实验值578.2490，计算值578.2497.
通过X-射线结构(图1)证实标题化合物的相对立体化学。
实施例13A
(2S*，3R*)-N-[(苄氧基)羰基]-N-[(苄氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯
在氩气保护气氛下，在0℃下将N，N，N，N-四甲基胍(50ml，399mmol)加入(2R*，3R*)-N2-[(苄氧基)羰基]-N2-[(苄氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(实施例12A，20.5g，35.5mmol)在无水DMF p.a.(750ml)中的溶液。使得反应混合物解冻，并搅拌直至HPLC色谱图(方法2)显示完全转化(约60％产品)(约12h)，为了终止反应加入乙酸(pH4-6)。将反应混合物在RT下真空蒸发并置入乙酸乙酯。将有机相用水(两次)，5％柠檬酸(两次)，水(一次)，饱和碳酸氢钠水溶液(两次)，饱和氯化钠水溶液(一次)洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤，蒸发并在高真空下干燥。将粗产物通过制备HPLC(方法11)或快速色谱法(硅胶，环己烷/乙酸乙酯3∶1)纯化。获得7.7g(37％理论值)的标题化合物和5g的起始化合物(25％理论值)。
备选的合成方法：在氩气保护气氛下，在0℃下将N，N，N，N-四甲基胍(50ml，399mmol)加入(2R*，3R*)-N2-[(苄氧基)羰基]-N2-[(苄氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(实施例13A，22.0g，38.1mmol)在无水二氯甲烷p.a.(540ml)中的溶液。使得反应混合物解冻并搅拌直至HPLC色谱图显示完全转化(约65％产品)(约12h)，通过加入乙酸(23ml，pH4-6)以便终止反应。将有机相用水(两次)，饱和碳酸氢钠水溶液(两次)和饱和氯化钠水溶液(一次)洗涤。将水相用二氯甲烷反萃取。合并的有机相通过硫酸钠干燥，过滤，真空蒸发并在高真空下干燥。将粗产物通过快速色谱法纯化(6l的硅胶，环己烷/乙酸乙酯3∶1)。获得13.7g(62％理论值，基于回收的原材料69％)的标题化合物和3.1g的起始化合物(10％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝3.0min.
LC-MS(方法8)：Rt＝3.0min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝478(100)[M-Boc+H]+，578(30)[M+H]+.
LC-MS(方法5)：Rt＝7.0min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝578(40)[M+H]+，1156(100)[2M+H]+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝576(100)[M-H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C31H36N3O8[M+H]+实验值578.2483，计算值578.2497.
实施例14A
(2S*，3R*)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯
在氩气保护气氛下，将阮内镍(61mg，约10mol％)加入(2S*，3R*)-N-[(苄氧基)羰基]-N-[(苄氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(实施例13A，705mg，1.22mmol)在甲醇/二氯甲烷1∶1(42ml)中的溶液。将反应混合物在压力高压灭菌器中在80巴氢压力下和RT下氢化(40h)。HPLC色谱图显示完全转化。在氩气保护气氛下将反应混合物过滤通过玻璃粉；将玻璃粉用甲醇/水/0.2％乙酸洗涤数次。将滤液真空蒸发并在高真空下干燥。获得固体(约3g)，其然后在超声槽中悬浮在乙酸乙酯中。将EDTA(400mg)在7％碳酸氢钠水溶液(400ml)中的溶液加入悬浮液。用乙酸乙酯(100ml，三次)萃取水相。合并的有机相然后用饱和碳酸氢钠溶液(一次)和饱和氯化钠水溶液(两次)洗涤。所有水相单独地用乙酸乙酯反萃取。合并的有机相然后通过硫酸钠干燥，过滤并在高真空下干燥。获得的产品为固体(1.26g，quant.)，其在不精-纯化下进一步反应。
HPLC/UV-Vis(方法3)：Rt＝1.7min.
LC-MS(方法5)：Rt＝4.1min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝239(100)，295(80)[M+H]+.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ＝1.36(s，9H)，3.34(s，3H)，3.60(d，J＝5.3Hz，1H)，4.89(dd，J＝9.6，4.9Hz，1H)，7.20-7.34(m，5H)，7.41(d，J＝9.4Hz，1H)。
13C NMR(125MHz，d6-DMSO)：δ＝28.24(3C)，52.84，54.91，56.86，79.23，127.14(2C)，128.44，128.88(2C)，137.28，154.86，168.16.
HR-TOF-MS(方法1)：C15H22N2O4[M+H]+实验值295.1658，计算值295.1653.
实施例15A
(2S*，3R*)-N-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯
在氩气保护气氛下，在0℃下将N-甲基吗啉(260mg，2.6mmol，2.1当量)加入(2S*，3R*)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(实施例14A，360mg，1.2mmol)和N-苄氧羰基氧基琥珀酰亚胺酯(610mg，2.44mmol，2当量)在THF(25ml)中的溶液。将反应混合物缓慢升温(12h)，由此通过HPLC(方法2)观察到完全转化。随后，加入乙酸(0.7ml)，将混合物真空浓缩，通过制备HPLC(方法13)纯化。获得396mg(76％理论值)的标题化合物。
HPLC/UV-Vis(方法3)：Rt＝2.7min.
LC-MS(方法5)：Rt＝6.4min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝329(100)[M-Boc+H]+，429(80)[M+H]+，858(60)[2M+H]+.
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)：δ＝1.35(s，9H)，3.63(s，3H)，4.57(dd，J＝9.5，4.0Hz，1H)，4.93(m，2H)，5.27(dd，J＝10.1，4.1Hz，1H)，7.19-7.34(m，10H)，7.50(d，J＝10.2Hz，1H)，7.59(d，J＝10.2Hz，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)：δ＝28.26(3C)，52.33，54.67，59.06，65.73，78.73，126.66(2C)，127.42，127.65(2C)，128.00，128.44(2C)，128.53(2C)，136.91，139.26，154.98，156.25，170.91.
HR-TOF-MS(方法1)：C23H28N2O6Na[M+Na]+实验值451.1823，计算值451.1845.
实施例16A
(2S*，3R*)-N2-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸
在氩气保护气氛下，将(2S*，3R*)-N-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(实施例15A，755mg，1.76mmol)的溶液提供在THF/水2∶1(30ml)中。在0℃下在剧烈搅拌下，缓慢滴加脱气的氢氧化锂一水合物(86.5mg，3.6mmol，2当量)的1％水溶液。将混合物在RT下搅拌直至HPLC色谱图(方法2)显示完全转化(约1h)。随后，将乙酸(0.5ml)加入反应混合物，将反应混合物真空浓缩和用乙酸乙酯(100ml)分层。现在用5％柠檬酸(pH 2-3)将水相酸化，然后用乙酸乙酯(50ml，三次)萃取。用饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机相(20ml，两次)，通过硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩并在高真空下干燥。获得750mg(quant.)的粗产物标题化合物，其通过制备HPLC(方法13)精纯化。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝2.4min.
LC-MS(方法5)：Rt＝6.1min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝359(100)，415(60)[M+H]+，829(60)[2M+H]+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝413(100)[M-H]-.
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)：δ＝1.31(s，9H)，4.42(dd，J＝10.0，3.9Hz，1H)，4.87(s，2H)，5.22(dd，J＝10.0，3.7Hz，1H)，7.14-7.28(m，10H)，7.43-7.46(m，2H)，12.91(s，br，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)：δ＝28.33(3C)，54.84(Cα)，58.94(Cβ)，65.54，78.56，126.52(2C)，127.22，127.53(2C)，127.92，128.37(2C)，128.49(2C)，137.03，140.14，155.08，156.29，171.60.
HR-TOF-MS(方法1)：C22H26N2O6[M+H]+实验值415.1860，计算值415.1864.
实施例17A
(3R)-N2-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸
通过制备HPLC(方法15)分离(2S*，3R*)-N-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸(实施例16A，750mg，1.8mmol)的对映体混合物。获得334mg(98％ee，45％理论值)的(2S，3R)-N-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸(标题化合物)和275mg(98％ee，37％理论值)的(2R，3S)-N-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸(另一个对映体)。通过方法16测定对映体。
[α]20 Na＝+22°(c＝0.50，在氯仿中)(标题化合物)。
[α]20 Na＝-20°(c＝0.49，在氯仿中)(另外的对映体)。
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)：δ＝1.35(s，9H)，4.46(dd，J＝9.6，3.6Hz，1H)，4.91(s，2H)，5.26(dd，J＝9.9，3.6Hz，1H)，7.18-7.32(m，10H)，7.48-7.51(m，2H)，12.95(s，br，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)：δ＝28.34(3C)，54.84，58.96，65.55，78.56，126.53(2C)，127.23，127.55(2C)，127.93，128.39(2C)，128.51(2C)，137.05，140.16，155.09，156.30，171.62.
HR-TOF-MS(方法1)：C22H26N2O6[M+H]+实验值415.1864，计算值415.1864.
实施例18A
(3R)-N-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯
将(3R)-N2-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸(实施例17A，151mg，0.36mmol)，2-(三甲代甲硅烷基)乙醇(431mg，3.64mmol，10当量)和4分子筛(约10mg)在无水二氯甲烷p.a.(2.7ml)中的混合物在氩气保护气氛下在RT下搅拌30min。随后，在-30℃下加入DCC(150mg，0.73mmol，2当量)和DMAP(44.5mg，0.36mmol，1当量)。使得反应混合物解冻(约12h)并在RT下搅拌直至HPLC色谱图显示完全转化(12-72h)。将反应混合物在RT下真空蒸发并通过制备HPLC(方法13)纯化。获得145mR(77％理论值)的标题化合物。
[α]20 Na＝+7.8°(c＝0.45，在氯仿中)
HPLC/UV-Vis(方法3)：Rt＝3.3min.
LC-MS(方法5)：Rt＝7.3min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝515(100)[M+H]+，1030(60)[2M+H]+.
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)：δ＝-0.02(s，9H)，0.88(t，J＝8.6Hz，2H)，1.31(s，9H)，4.01-4.15(m，2H)，4.48(dd，J＝9.5，4.0Hz，1H)，4.86(d，J＝13.1Hz，1H)，4.90(d，J＝12.6Hz，1H)，5.25(dd，J＝10.0，4.0Hz，1H)，7.14-7.29(m，10H)，7.48(d，1H，J＝10.2Hz)，7.51(d，1H，J＝9.5Hz)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)：δ＝-1.67(3C)，16.78，27.96(3C)，54.38，58.83，62.95，65.34，78.30，126.29(2C)，127.06，127.30(2C)，127.66，128.13(2C)，128.20(2C)，136.63，139.17，154.58，155.95，170.02.
HR-TOF-MS(方法1)：C27H38N2O6Si[M+H]+实验值515.2564，计算值515.2572.
实施例19A
(3R)-3-氨基-N2-[(苄氧基)羰基]-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯三氟乙酸盐
根据工作步骤1将(3R)-N-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯(实施例18A，550mg，1.7mmol)反应(保留时间：10min)。将粗产物通过制备HPLC(方法21)纯化。获得424mg(75％理论值)的标题化合物。
[α]20 Na＝-11.2°(c＝0.47，在氯仿中)
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝1.9min.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.0min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝387.2(60)，415(100)[M+H]+.
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)：δ＝-0.07(s，9H)，0.52(m，2H)，3.77(m，1H)，3.88(m，1H)，4.50(d，J＝9.0Hz，1H)，4.58(“t”，J＝约8.2Hz，1H)，5.08(s，2H)，7.34-7.43(m，10H)，8.12(d，1H，J＝8.5Hz，1H)，8.67(s，br，2H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)：δ＝-1.46(3C)，16.51，55.14，57.92，63.36，66.28，128.02(2C)，128.18，128.22(2C)，128.56(2C)，128.95(2C)，129.54，134.00，136.70，156.14，169.06.
HR-TOF-MS(方法1)：C22H30N2O4Si[M+H]+实验值415.2036，计算值415.2048.
实施例20A
N2.1-叔-丁氧羰基[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸三氟乙酸盐
在氩气保护气氛下，将二碳酸二叔丁酯(369mg，1.69mmol，2.5当量)和N-甲基吗啉(68mg，680μmol，1当量)加入Edman3.0前体(实施例3A，690mg，680μmol，1当量)在水/二噁烷1∶2(30ml)中的溶液。搅拌反应混合物直至HPLC色谱图显示完全转化(约48h)。将磷酸二氢钾(5当量)加入反应混合物，将混合物真空浓缩并通过制备HPLC(方法21或方法11接着随后通过加入TFA(2000μmol，作为在乙腈-水1∶1中的0.05％溶液)将色谱产物进行盐交换)纯化。获得531mg(70％理论值)的标题化合物。
HPLC/UV-Vis(方法3)：Rt＝1.7min.
LC-MS(方法5)：Rt＝4.6min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝453.5(60)[M-Boc+2H]2+，1006(100)[M+H]+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1004(100)[M-H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C42H77N12O16[M+H]+实验值1005.5560，计算值1005.5576.
实施例21A
N2-(苄氧羰基)-N3-{N2.1-叔-丁氧羰基[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酰}-(3R)-3-氨基-1-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙基酯三氟乙酸盐
在氩气保护气氛下，在0℃下首先将HATU(1.5当量，38.2mg，100μmol)加入二氨基酸(实施例19A，1.2当量，42.5mg，80μmol)，八肽酸(实施例20A，1.0当量，75.0mg，70μmol)和N-甲基吗啉(1.0当量，70μmol)在无水二甲基甲酰胺(2ml)中的溶液。将反应混合物搅拌(约15min)和再次加入N-甲基吗啉(2.5当量，175μmol)。将反应混合物缓慢升温(约12h)至室温和然后显示胺组分的完全转化(HPLC监视)。将固体磷酸二氢钾(5当量，350μmol)加入反应混合物和在高真空下将混合物然后蒸发，并通过色谱法(方法21或方法13接着随后通过加入TFA(200μmol，作为在乙腈-水1∶1中的0.05％溶液)将色谱产物进行盐交换)纯化。获得73.5mg(72％理论值)的产物。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝2.3min.
LC-MS(方法5)：Rt＝5.5min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝637.6(60)，1402(100)[M+H]+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1400(100)[M-H]-，1447(20)[M-HCO2H-H]-.
实施例22A
N2-(苄氧羰基)-N3-{N2.1-叔-丁氧羰基[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸三氟乙酸盐
在氩气保护气氛下将九肽三甲代甲硅烷基酯(实施例21A，70mg，46μmol)和4分子筛(约10mg)提供于无水THF(3ml)中。在RT下，在剧烈搅拌下滴加1N TBAF-THF溶液(320μl，7当量)，将混合物搅拌直至HPLC色谱图(方法2)显示完全转化(约1h)。现在将反应混合物用乙酸(50μl，约20当量)中和。将反应混合物真空蒸发，通过制备HPLC(方法21或方法13，接着随后通过加入TFA(200μmol，作为在乙腈-水1∶1中的0.05％溶液)将色谱产品进行盐交换。获得50.2mg(77％理论值)的标题化合物。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝2.1min.
LC-MS(方法5)：Rt＝5.2min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝601.6(60)[M-Boc+2H]2+，1302(100)[M+H]+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1300(100)[M-H]-.
实施例23A
N2-(苄氧羰基)-N3-{N2.1-叔-丁氧羰基[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸五氟苯基酯三氟乙酸盐
在氩气保护气氛下将九肽酸(实施例22A，54.4mg，38μmol)提供在二氯甲烷(1ml)中。在-20℃下，连续加入五氟苯酚(71mg，380μmol，10当量)，EDC(17mg，192μmol，2.3当量)和DMAP(1mg，8μmol，0.2当量)。使得混合物缓慢解冻(约3h)并在RT下搅拌(约12h)直至HPLC色谱图显示完全转化(方法2)。将促产物在不纯化下进一步反应。
LC-MS(方法8)：Rt＝2.3min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝685(100)[M-Boc+2H]2+，1468(10)[M+H]+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1282(100)，1465(40)[M-H]-.
实施例24A
N2-(苄氧羰基)-N3-{[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸五氟苯基酯二盐酸盐
根据工作步骤2，在氩气保护气氛下使得N-(叔-丁氧羰基)环肽(实施例23A，60mg，40μmol)反应。在冰冻干燥后，获得50mg(96％理论值)的产物，其在不进一步纯化下直接反应。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝1.9min，
λmax(定性)＝210nm(s)，255-270(w)。
LC-MS(方法5)：Rt＝4.7min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝684.3(100)[M+2H]2+，1368(50)[M+H]+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1366(100)[M-H]-.
实施例25A
N2.1-(苄氧羰基)-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.9-N3.1-内酰胺三氟乙酸盐
将五氟苯酚酯(实施例24A，15.8mg，11μmol)在DMF(1ml)中的溶液用二噁烷(20ml)稀释，然后在剧烈搅拌下在氩气保护气氛下滴加(作为悬浮液)到预热至80℃的吡啶p.a.(80ml)中。在85℃下搅拌反应混合物直至HPLC色谱图(方法2)显示完全转化(约1h)。将混合物然后真空浓缩。将粗产物首先凝胶色谱分离(方法14)和然后通过制备HPLC(方法10)精纯化。获得4.3mg(33％理论值)的标题化合物。
备选的合成方法(游离九肽氨基酸的直接环化)：
在0℃下将HATU(245mg，0.65mmol，3当量)加入游离的九肽(N2-(苄氧羰基)-N3-{[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸三氟乙酸盐，280mg，0.22mmol)在DMF(70ml)和NMM(142μl，6当量)中的溶液。搅拌反应混合物直至完全转化(1.5h，HPLC监视)。随后，反应混合物用甲醇(10ml)猝灭，真空浓缩和直接通过制备HPLC(方法35)纯化。获得作为固体的产品(201.5mg，70％理论值)。
LC-MS(方法5)：Rt＝4.8min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝592.6(20)[M+2H]2+，1184(100)[M+H]+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1182(100)[M-H]-.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.8min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝592.7(50)[M+2H]2+，1184(100)[M+H]+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝536.6(100)，1182(50)[M-H]-，1229[M-H+HCO2H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C54H83N14O16[M+H]+实验值1183.6122，计算值1183.6106.
实施例26A
[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸-C1.9-N3.1-内酰胺二盐酸盐
将Cbz-保护的环肽(实施例25A，4.3mg，3.3μmol)溶解在甲醇(4ml)中并在氩气保护气氛下加入10％披钯碳(100mg)和1N盐酸水溶液(200μl)。将混合物在RT和大气压下氢化(约1h)直至分析HPLC(方法2)显示完全转化。将反应混合物过滤(通过硅藻土，Celite或注射器滤器，Biotage，PTFE)，真空浓缩并在高真空下干燥。获得4mg(quant.)的标题化合物。
备选的制备方法(标题化合物，为三氟乙酸盐)：将Cbz-保护的环肽(实施例25A，330mg，254μmol)溶解在甲醇(200ml)中，在氩气保护气氛下加入10％披钯碳(127mg)和盐酸(1526μl，6当量)。将混合物氢化约1h，再次加入催化剂(100mg)和盐酸(3当量，760μl)。在RT下和大气压下继续氢化，直至(约1h)分析HPLC(方法2)显示完全转化。将反应混合物过滤(通过硅藻土，Celite)，真空浓缩并在高真空下干燥。将粗产物通过制备HPLC(方法33)纯化。获得作为三氟乙酸盐的250mg(77％理论值)的标题化合物。
HPLC/UV-Vis(方法3)：Rt＝1.4min，
λmax(定性)＝210nm(s)，255-270(w)。
LC-MS(方法7)：Rt＝1.1min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝525.6(100)[M+2H]2+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1048(100)[M-H]-，1095[M-H+HCO2H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C46H77N14O14[M+H]+实验值1049.5728，计算值1049.5739.
实施例27A
N2.1-(叔-丁氧羰基)-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-[3-叔-丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺三氟乙酸盐
在氩气保护气氛下，在0℃下首先将HATU(4.1当量，14.6mg，40μmol)加入环肽(实施例26A，1.0当量，11.0mg，10μmol)，二肽酸N-(叔-丁氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸(4.0当量，14.6mg，40μmol)和N-甲基吗啉(2.0当量，20μmol)在无水二甲基甲酰胺(270μl)中的溶液。将反应混合物搅拌(约15min)并再次加入N-甲基吗啉(5.0当量，50μmol)。将反应混合物缓慢升温(约12h)至室温和然后显示胺组分的完全转化(HPLC监视，方法3)。将固体磷酸二氢钾(10当量，500μmol)加入反应混合物和然后将混合物在高真空下蒸发并通过色谱法纯化(方法21或方法13，接着通过加入TFA(100μmol，作为在乙腈-水1∶1中的0.05％溶液)随后将色谱产品进行盐交换)。获得10.5mg(70％理论值)的产物。
HPLC/UV-Vis(方法3)：Rt＝2.5min，
λmax(定性)＝210nm(s)，255-270(w)。
LC-MS(方法5)：Rt＝5.5min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝702.6(30)[M+2H]2+，1404(20)[M+H]+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝700.7(50)[M-2H]2-，1402(10)[M-H]-，1448[M-H+HCO2H]-.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.3min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝653(100)[M-Boc+2H]2+，1404(50)[M+H]+.
HR-TOF-MS(方法1)：C65H111N16O18[M+H]+实验值1403.8232，计算值1403.8257.
实施例28A
N2.1-(苄氧羰基)-D-亮氨酰-L-亮氨酰-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-n3.3-内酰胺三氟乙酸盐
类似于实施例27A，由来自实施例26A的化合物(900μg，0.8μmol)和N-(苄氧羰基)-D-亮氨酰-L-亮氨酸(实施例30A，1200μg，3.2μmol，4当量)制备。将粗产物通过凝胶色谱法纯化(方法14)，由此在冷冻干燥后获得作为固体的500μg(41％理论值)的产物。
HPLC/UV-Vis(方法3)：Rt＝2.3min，
LC-MS(方法5)：Rt＝5.2min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝706.2(100)[M+2H]2+，1410(20)[M+H]+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1408(100)[M-H]-.
实施例29A
N-(苄氧羰基)-D-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯
在-10℃下将HOBt(4当量，2038mg，15.08mmol)，N-甲基吗啉(3当量，11.3mmol)，N-苄氧羰基-D-亮氨酸(1.0当量，1000mg，3.8mmol)，EDC(2当量，1441mg，7.5mmol)和再次N-甲基吗啉(2当量，7.5mmol)连续加入L-亮氨酸甲酯盐酸盐(1.1当量，753.2mg，4.15mmol)在二氯甲烷p.a.(20ml)中的溶液。将反应混合物缓慢升温(约12h)至RT，由此通过HPLC观察到胺组分的完全转化。浓缩反应混合物，置入乙酸乙酯(约200ml)和然后用饱和碳酸氢钠水溶液(一次)，5％柠檬酸水溶液(两次)，饱和碳酸氢钠水溶液(一次)和饱和氯化钠溶液洗涤。将混合物通过硫酸钠干燥和过滤。将混合物真空蒸发至干燥和然后进一步在高真空下干燥。获得1483mg(93％理论值)的标题化合物，使其在不进一步纯化下反应。
LC-MS(方法7)：Rt＝2.59min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝393(100)[M+H]+.
实施例30A
N-(苄氧羰基)-D-亮氨酰-L-亮氨酸
在0℃下将N-(苄氧羰基)-D-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯(实施例29A，1.12g，2.85mmol)提供在THF/水2∶1(15ml)中和然后加入氢氧化锂一水合物(140mg，5.71mmol，2当量)。当HPLC色谱图(方法2)显示完全转化时(约1h)，用乙酸将反应混合物调节至pH 3-4，在冷却条件下真空浓缩和然后通过冷冻干燥过夜去除溶剂。将粗产物通过制备HPLC(方法13)纯化，由此获得958mg(88.7％理论值)的标题化合物。
LC-MS(方法7)：Rt＝2.33min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝379(100)[M+H]+.
HR-TOF-MS(方法1)：C20H31N2O5[M+H]+实验值379.2227，计算值379.2233.
实施例31A
(2R，3R)-N2-[(苄氧基)羰基]-N2-[(苄氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯
方法A(5g级别)：在氩气保护气氛下，将1N六甲基二硅叠氮化锂(39.4mmol，39.4ml，2.2当量)在THF中的溶液提供在反应溶剂THF(200ml)中。在-78℃下，缓慢滴加(S)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-3-苯基丙酸甲酯(5.0g，17.9mmol)的溶液。将混合物在-25℃下搅拌10分钟，然后再次冷却至-78℃。将氮杂二羧酸二苄酯(8.54g，28.6mmol，1.6当量)一次性加入反应混合物。将混合物在-50至-60℃下搅拌3小时。为了终止反应，将混合物再次冷却至-78℃和加入乙酸(5.1ml，89.5mmol，5当量)，将混合物然后升温至0℃和最终RT。类似于实施例12A(方法B)后加工。获得作为固体的4.8g(44％理论值)的标题化合物。
方法B(50g级别)：在氩气保护气氛下，将1N六甲基二硅叠氮化锂(452.9mmol，452.9ml，2.2当量)在THF中的溶液提供在反应溶剂THF(1800ml)中。在-70℃下，缓慢滴加(S)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-3-苯基丙酸甲酯(57.5g，205.8mmol)在THF(600ml)中的溶液。将混合物在-25℃下搅拌10分钟，然后再次冷却至-70℃。将氮杂二羧酸二苄酯(98.2g，329.4mmol，1.6当量)以4份加入反应混合物。将混合物在-50至-60℃下搅拌2小时。为了终止反应，将混合物再次冷却至-70℃和加入乙酸(61.7ml，1mol，5当量)，将混合物然后升温至RT过夜。通过抽吸过滤收集反应溶液中的沉淀。将滤器残余物在50℃下在高真空下干燥(46.1g，粗产物1)。将过滤的母液(反应混合物)真空浓缩(粗产物2)。将两种粗产物1和2从热乙酸乙酯(2×500ml)(回流，1h；产品级分1(31.7g)和2(37.4g))中再结晶。将母液再次蒸发和从叔-丁基甲基醚(370ml)中再结晶。由此获得产品级分3(14.5g)。总共，获得作为固体的83.6g(70％理论值)的标题化合物。
[α]20 Na＝-13°(c＝0.20，在氯仿中)。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝2.88min.
LC-MS(方法29)：Rt＝2.8min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝478(100)[M-Boc+H]+，578(70)[M+H]+，1156(20)[2M+H]+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝576(100)[M-H]-.
1H NMR(500MHz，d6-DMSO，335K，宽信号)：δ＝1.35(s，9H)，3.15(s，3H)，3.30(s，3H)，4.90-5.15(m，6H)，7.20-7.40(m，10H)，8.30，8.95(3s，br，2H)。
实施例32A
(2S，3R)-N-[(苄氧基)羰基]-N-[(苄氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯
在氩气保护气氛下，在0℃下将N，N，N，N-四甲基胍(16.6ml，132mmol)加入(2R，3R)-N2-[(苄氧基)羰基]-N2-[(苄氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(3.95g，6.84mmol)在无水二氯甲烷p.a.(170ml)中的溶液。使得反应混合物解冻并搅拌直至HPLC色谱图(方法2)显示完全转化(约60％产品)(约12h)，通过加入乙酸(10.5ml，pH4-6)以便终止反应。将有机相用水(两次)，饱和碳酸氢钠水溶液(两次)和饱和氯化钠水溶液(一次)洗涤。将水相用二氯甲烷反萃取。合并的有机相通过硫酸钠干燥，过滤，真空蒸发并在高真空下干燥。将粗产物通过快速色谱法纯化(硅胶，甲苯/乙酸乙酯4∶1)。获得2.4g(61％理论值，基于回收的原材料68％)的标题化合物和490mg的起始化合物(12％理论值)。
[α]20 Na＝-120.7°(c＝0.52，在氯仿中)。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝2.99min.
LC-MS(方法29)：Rt＝2.9min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝478(100)[M-Boc+H]+，578(50)[M+H]+，1156(10)[2M+H]+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝502(100)，576(40)[M-H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C31H36N3O8[M+H]+实验值578.2505，计算值578.2497.
实施例33A
(2S，3R)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯
在氩气保护气氛下，将阮内镍(86mg)加入(2S，3R)-N-[(苄氧基)羰基]-N-[(苄氧基)羰基氨基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(600mg，1.04mmol)在甲醇/二氯甲烷1∶1(12ml)中的溶液。将反应混合物在压力高压灭菌器中在80巴氢压力下和RT下氢化(72h)。HPLC色谱图显示完全转化。在氩气保护气氛下将反应混合物过滤通过(硅藻土-成层的)玻璃粉。将玻璃粉重复用甲醇/水/0.2％乙酸洗涤。将滤液用水(两次)洗涤并然后真空蒸发。获得作为固体的粗产物(280mg，92％理论值)，其在不精纯化下进一步反应。为了分析目的，可以进行凝胶色谱精纯化(方法14，甲醇/0.1％TFA)。
[α]20 Na＝+11°(c＝0.25，在氯仿中)(TFA盐)。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝1.5min.
LC-MS(方法29)：Rt＝1.2min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝239(100)，295(40)[M+H]+.
1H NMR(500MHz，d6-DMSO，TFA盐)：δ＝1.36(s，9H)，3.50(s，3H)，4.30(d，J＝7.2Hz，1H)，5.05(“t”，J＝8.0Hz，1H)，7.30-7.39(m，5H)，7.60(d，J＝9.7Hz，1H)。
13C NMR(125MHz，d6-DMSO，TFA盐)：δ＝28.25(3C)，52.87，54.88，56.87，79.29，127.12(2C)，128.45，128.89(2C)，137.18，154.83，168.14.
HR-TOF-MS(方法1)：C15H22N2O4[M+H]+实验值295.1663，计算值295.1653.
实施例34A
(2S，3R)-N-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯
在氩气保护气氛下，将固体碳酸氢钠(80mg，0.93mmol，1.5当量)在0℃下加入(2S，3R)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(250mg，0.62mmol)和N-苄氧羰基氧基琥珀酰亚胺酯(180mg，0.71mmol，1.15当量)在二氯甲烷(20ml)和水(45ml)的混合物中的溶液。将反应混合物缓慢升温(12h)，由此通过HPLC(方法2)观察到完全转化。将水相用二氯甲烷反萃取，然后用5％柠檬酸水溶液，饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。随后，通过快速色谱法(硅胶，甲苯/乙酸乙酯4∶1)进行纯化。获得144mg(47％理论值)的标题化合物。
[α]20 Na＝+13.3°(c＝0.70，在氯仿中)。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝2.6min.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.7min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝329(100)[M-Boc+H]+，373(80)，429(60)[M+H]+，858(10)[2M+H]+.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ＝1.37(s，9H)，3.62(s，3H)，4.58(dd，J＝9.5，4.2Hz，1H)，4.94(m，2H)，5.27(dd，J＝10.4，4.0Hz，1H)，7.21-7.35(m，10H)，7.50(d，J＝10.5Hz，1H)，7.59(d，J＝9.4Hz，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)：δ＝28.25(3C)，52.31，54.66，59.03，65.71，78.72，126.64(2C)，127.40，127.63(2C)，127.99，128.42(2C)，128.51(2C)，136.90，139.24，154.97，156.23，170.89.
HR-TOF-MS(方法1)：C23H29N2O6[M+H]+实验值429.2011，计算值429.2021.
实施例35A
(3R)-N2-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸
在氩气保护气氛下提供(2S，3R)-N-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(152mg，0.30mmol)在THF/水2∶1(22.5ml)中的溶液。在0℃下，在剧烈搅拌下缓慢滴加脱气的1％的氢氧化锂一水合物(14.8mg，0.62mmol，2当量)水溶液。将混合物在RT下搅拌直至HPLC色谱图(方法2)显示完全转化(约1h)。随后，将乙酸(0.1ml)加入反应混合物和将反应混合物真空浓缩，将残余物冷冻干燥。将粗产物通过制备HPLC(方法13)精纯化。获得作为产物的74mg(59％理论值)的标题化合物。
[α]20 Na＝+22°(c＝0.50，在氯仿中)(通过手性色谱法)；
[α]20 Na＝+21.5°(c＝0.51，在氯仿中)(通过对映体选择性合成)
LC-MS(方法7)：Rt＝2.4min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝315(90)，359(100)，415(80)[M+H]+，729(30)，829.5(50)[2M+H]+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝413(100)[M-H]-.
手性HPLC/UV-Vis(方法24)：Rt＝5.4min(窄峰)。
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)：δ＝1.35(s，9H)，4.46(dd，J＝9.6，3.6Hz，1H)，4.91(s，2H)，5.26(dd，J＝9.9，3.6Hz，1H)，7.18-7.32(m，10H)，7.48-7.51(m，2H)，12.95(s，br，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)：δ＝28.34(3C)，54.84，58.96，65.55，78.56，126.53(2C)，127.23，127.55(2C)，127.93，128.39(2C)，128.51(2C)，137.05，140.16，155.09，156.30，171.62.
HR-TOF-MS(方法1)：C22H26N2O6[M+H]+实验值415.1864，计算值415.1864.
实施例36A
(3S)-N2-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-D-苯丙氨酸
关于制备方法参见实施例35A。
[α]20 Na＝-20°(c＝0.49，在氯仿中)。
手性HPLC/UV-Vis(方法24)：Rt＝11.4min(宽峰)。
LC-MS(方法7)：Rt＝2.5min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝315(40)，359(40)，415(50)[M+H]+，729(20)，829.5(10)[2M+H]+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝413(100)[M-H]-.
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)：δ＝1.35(s，9H)，4.45(dd，J＝9.6，3.2Hz，1H)，4.91(s，2H)，5.26(dd，J＝9.4，3.6Hz，1H)，7.18-7.30(m，10H)，7.47-7.52(m，2H)，12.95(s，br，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)：C22H26N2O6[M+H]+实验值415.1869，计算值415.1864.
实施例37A
(3S)-N-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-D-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯
将(3S)-N2-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-D-苯丙氨酸(3.96g，9.55mmol)，2-(三甲代甲硅烷基)乙醇(11.3g，95.6mmol，10当量)和4分子筛(约200mg，新鲜粉碎)在无水二氯甲烷p.a.(77ml)中的混合物在RT下在氩气保护气氛下搅拌3小时。随后，在-30℃下加入DCC(3.94g，19.11mmol，2当量)和DMAP(1.17g，9.55mmol，1当量)。使得反应混合物解冻(约12h)并在RT下搅拌直至HPLC色谱图(方法2)显示完全转化(约12h)。将反应混合物过滤通过硅藻土和然后在RT下真空蒸发。将粗产物在RP18柱体(洗脱剂：水，然后乙腈)上预分级并通过制备快速色谱法(1.5kg的硅胶，甲苯/乙酸乙酯4∶1)纯化。获得3.6g(73％理论值)的标题化合物。
[α]20 Na＝-8.0°(c＝0.52，在氯仿中)
HPLC/UV-Vis(方法3)：Rt＝3.2min.
LC-MS(方法7)：Rt＝3.3min；MS(ESIpos.)：m/z(％)＝387(100)，515(90)[M+H]+.
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)：δ＝-0.02(s，9H)，0.88(t，J＝8.0Hz，2H)，1.31(s，9H)，4.02-4.15(m，2H)，4.48(dd，J＝9.6，4.3Hz，1H)，4.86(d，J＝12.6Hz，1H)，4.90(d，J＝12.6Hz，1H)，5.25(dd，J＝10.0，3.8Hz，1H)，7.14-7.29(m，10H)，7.47(d，J＝10.3Hz，1H)，7.50(d，J＝9.7Hz，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)：C27H38N2O6Si[M+H]+实验值515.2567，计算值515.2572.
实施例38A
(3S)-3-氨基-N2-[(苄氧基)羰基]-D-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯三氟乙酸盐
根据工作步骤1使得(3S)-N-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-D-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯(3600mg，7.0mmol)反应(保留时间：10min)。将粗产物通过制备HPLC(方法13，方法21)纯化。获得3060mg(83％理论值)的标题化合物。
[α]20 Na＝+15.0°(c＝0.22，在氯仿中)
HPLC/UV-Vis(方法3)：Rt＝1.9min.
LC-MS(方法8)：Rt＝1.8min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝387.2(60)，415(100)[M+H]+.
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)：δ＝-0.06(s，9H)，0.52(m，2H)，3.76(m，1H)，3.88(m，1H)，4.49(d，J＝9.3Hz，1H)，4.58(“t”，J＝9.0Hz，1H)，5.08(s，2H)，7.34-7.44(m，10H)，8.12(d，J＝8.5Hz，1H)，8.62(s，br，2H)。
HR-TOF-MS(方法1)：C22H30N2O4Si[M+H]+实验值415.2042，计算值415.2048.
实施例39A
(3S)-N-Boc-β-苯丙氨酸甲酯
将(rac)-N-Boc-β-苯丙氨酸甲酯(62.8g，224.8mmol)的对映体混合物通过制备HPLC(方法32)分离成对映体。获得29.1g的(3R)-N-Boc-β-苯丙氨酸甲酯(95.7％ee，46％理论值，实施例40，较后洗脱物)和30.5g的(3S)-N-Boc-β-苯丙氨酸甲酯(＞99％ee，49％理论值，标题化合物，较早洗脱物)。
[α]20 Na＝-30°(c＝0.52，在氯仿中)。
HPLC/UV-Vis(方法3)：Rt＝2.5min.
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)：δ＝1.35(s，9H)，2.67(dd，J＝15.4，6.0Hz，1H)，2.75(dd，J＝15.7，8.6Hz，1H)，3.55(s，3H)，4.92(m，1H)，7.23(m，1H)，7.29-7.33(m，4H)，7.48(d，J＝8.3Hz，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)：δ＝28.38(3C，(C(CH3)3))，41.19(CβH2)，51.25(CαH)，51.54(OCH3)，78.07(C(CH3)3)，126.47(2C)，127.17，128.46(2C)，142.95，154.90，170.86.
HR-TOF-MS(方法1)：C15H22NO4[M+H]+实验值280.1533，计算值280.1544.
实施例40A
(3R)-N-Boc-β-苯丙氨酸甲酯
根据实施例39A进行合成。
[α]20 Na＝+30°(c＝0.52，在氯仿中)。
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)：δ＝1.35(s，9H)，2.68(dd，J＝15.2，6.0Hz，1H)，2.75(dd，J＝15.6，8.8Hz，1H)，3.55(s，3H)，4.92(m，1H)，7.23(m，1H)，7.30-7.33(m，4H)，7.48(d，J＝8.7Hz，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)：C15H21NO4[M+H]+实验值280.1555，计算值280.1544.
实施例41A
3-(6-甲基吡啶-2-基)-L-丙氨酸甲酯
将N-(苄氧羰基)-3-(6-甲基吡啶-2-基)-L-丙氨酸甲酯(7.25g，22.1mmol)[S.W.Jones，C.F.Palmer，J.M.Paul，P.D.GIFfin，TetrahedronLett.1999，40，1211-1214]和10％披钯碳(0.690g)在乙醇(80ml)中的混合物在RT和在大气压下氢化1小时。将反应混合物通过注射器滤器(Millipore，0.45μ，疏水PTFE)，用乙醇(2×10ml)洗涤。将残余物在旋转蒸发仪上浓缩(通过用甲苯夹带去除溶剂残余物，两次)并在高真空下干燥。获得作为油的产物(3.89g，产率91％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝0.3min.
LC-MS(方法30)：Rt＝0.70min，宽峰；MS(ESIpos.)：m/z(％)＝195(100)[M+H]+.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ＝1.95(m，2H)，2.41(s，3H)，2.86(dd，J＝7.4Hz，1H)，2.99(dd，J＝5.9Hz，1H)，3.59(s，3H)，3.73(dd，J＝7.4，5.7Hz，1H)，7.02(d，J＝7.5Hz，1H)，7.06(d，J＝7.1Hz，1H)，7.56(t，J＝7.5Hz，1H)。
实施例42A
N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-(6-甲基吡啶-2-基)-L-丙氨酸甲酯
在0℃下将NMM(2当量，13.1mmol)和最终HATU(1.3当量，3.2g，8.5mmol)缓慢加入N-(叔-丁氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酸(实施例6A，1.0当量，1.6g，6.6mmol)和3-(6-甲基吡啶-2-基)-L-丙氨酸甲酯(实施例41A，1.1当量，1.4g，7.2mmol)在无水DMF(26ml)中的溶液。将反应混合物缓慢升温(约12h)至RT，由此通过HPLC(方法2)观察到完全转化。对于后处理，在旋转蒸发仪(水浴35℃)上浓缩反应混合物，用乙酸乙酯(100ml)稀释和随后用饱和碳酸氢钠溶液(2×20ml)、5％柠檬酸(2×20ml)和饱和氯化钠水溶液洗涤。将有机相通过硫酸钠干燥，过滤和浓缩。获得作为固体的产物(2.88g，99％理论值)，其可以通过制备HPLC(方法13)精纯化。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝2.1min.
LC-MS(方法29)：Rt＝1.73min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝422(100)[M+H]+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝420(20)[M-H]-，466(100)[M-H+HCO2H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C21H34N3O5[M+H]+计算值408.2498，实验值408.2503.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ＝0.79(s，9H)，1.23-1.43(m，11H)，2.42(s，3H)，2.99-3.13(m，2H)，3.60(s，3H)，3.95(dt，J＝8.9，3.8Hz，1H)，4.64(m，1H)，6.83(d，J＝8.9Hz，1H)，7.02(d，J＝7.8Hz，1H)，7.07(d，J＝7.7Hz，1H)，7.54(t，J＝7.7Hz，1H)，8.18(d，J＝7.9Hz，1H)。
实施例43A
N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-(6-甲基-2-吡啶基)-L-丙氨酸
根据一般工作步骤4转化N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-(6-甲基-2-吡啶基)-L-丙氨酸甲酯(实施例42A，850mg，2.02mmol)。获得766mg(93％理论值)的产物。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝1.8min.
LC-MS(方法8)：Rt＝1.63min；MS(ESIpos.)：m/z(％)＝353(100)，408(90)
[M+H]+；MS(ESIneg.)：m/z(％)＝332(70)，406(100)[M-H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C21H34N3O5[M+H]+计算值408.2498，实验值408.2503.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ＝0.79(s，9H)，1.26-1.37(m，11H)，2.43(s，3H)，3.01(dd，J＝8.6Hz，1H)，3.10(dd，J＝5.3Hz，1H)，3.94(dt，J＝9.2Hz，3.4Hz，1H)，4.57(m，1H)，6.81(d，J＝8.9Hz，1H)，7.02(d，J＝7.7Hz，1H)，7.07(d，J＝7.1Hz，1H)，7.54(t，J＝7.7Hz，1H)，8.08(d，J＝7.9Hz，1H)。
实施例44A
N2.1-(叔-丁氧羰基)-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-[3-(6-甲基吡啶-2-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺双三氟乙酸盐
根据工作步骤5，将环肽(实施例26A，40.0mg，31.32μmol)和二肽酸(实施例43A，22.9mg，56.37μmol，1.8当量)，借助NMM(17.2μl，156.58μmol，5当量)和HATU(21.43mg，56.36μmol，1.8当量)，在-10℃在DMF(15ml)中在2.5小时内反应为酰胺。在色谱纯化(方法37)后获得作为固体的标题化合物(29.4mg，55％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝2.25min.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.05 min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝1439(5)[M+H]+，720(100)[M+2H]2+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1436(100)[M-H]-，718[M-2H]2-.
HR-TOF-MS(方法1)：C67H108N17O18[M+H]+计算值1438.8053，实验值1438.8060.
实施例45A
N2.1-(叔-丁氧羰基)-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-[3-(吡啶-2-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺双三氟乙酸盐
根据工作步骤5，将环肽(实施例26A，100.0mg，78.29μmol)和N-(叔-丁氧羰基)-4-甲基-D-亮氨酰-3-吡啶-2-基-L-丙氨酸(55.5mg，140.63μmol，1.8当量)(参见WO2004099239)，借助NMM(43.0μl，156.58μmol，5当量)和HATU(21.43mg，391.46μmol，1.8当量)，在DMF(8ml)中在RT下反应过夜为酰胺。在色谱分离(方法35)后获得作为固体的标题化合物(111.3mg，86％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法25)：Rt＝19.44min.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.15min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝1424(25)[M+H]+，713(100)[M+2H]2+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1422(100)[M-H]-，711[M-2H]2-.
HR-TOF-MS(方法1)：C66H106N17O18[M+H]+计算值1424.7897，实验值1424.7906.
实施例46A
4-甲基-D-亮氨酸三氟乙酸盐
如工作步骤1所述，由Boc-保护的氨基酸(实施例6A，20.0g，81.53mmol)获得标题化合物，粗产率为21.7g(quant.)。
MS(ESIpos)：m/z(％)＝146(100)[M+H]+.
HR-TOF-MS(方法1)：C7H16N2O2·C2H3N[M+CH3CN+H]+计算值187.1442，实验值187.1450.
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)：δ＝0.95(m，9H)，1.58(dd，J＝14.5Hz，5.2Hz，1H)，1.81(dd，J＝14.5Hz，6.3Hz，1H)，3.79(t，J＝5.4Hz，1H)，8.32(s，br.，3H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)：δ＝29.27(3C)，30.26，44.30，50.01，172.23.
实施例47A
N-[(苄氧基)羰基]-4-甲基-D-亮氨酸
将氨基酸(实施例46A，10.0g，38.6mmol)和N-苄氧羰基氧基琥珀酰亚胺酯(11.1g，44.4mmol，1.15当量)溶解在二氯甲烷/水4∶1(250ml)中。将固体碳酸氢钠(4.86g，57.9mmol，1.5当量)和固体溴化四-正丁基铵(1.2g.3.9mmol，0.1当量)在0℃下加入反应混合物，以便在RT下搅拌反应混合物过夜。HPLC色谱图显示完全转化。用二氯甲烷(六次)洗涤碱性水相。随后，用1N盐酸水溶液将pH调节至2-3。然后用乙酸乙酯萃取水相(三次)。合并的有机相用浓氯化钠水溶液洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。将获得的粗产物通过制备HPLC(方法35)纯化。获得6.86g(64％理论值)的标题化合物。
[α]20 Na＝+2°(c＝0.17在CHCl3)。
HPLC/UV-Vis(方法3)：Rt＝2.2min.
LC-MS(方法29)：Rt＝2.0min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝236(100)，280(50)[M+H]+；
MS(ESIneg)：m/z(％)＝170(100)，278(40)[M-H]-.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ＝0.81(d，J＝6.3Hz，3H)，0.86(d，J＝6.4Hz，3H)，0.89(s，9H)，1.48(m，3H)，1.57(m，2H)，3.61(s，3H)，4.14(m，1H)，4.23(m，1H)，5.03(s，2H)，7.27-7.40(m，6H)，8.19(d，J＝7.9Hz，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)：δ＝29.53(3C)，30.50，44.11，51.49，65.47，127.75(2C)，127.95，128.51(2C)，137.34，156.03，174.97.
HR-TOF-MS(方法1)：C15H22NO4计算值280.1544，实验值280.1535[M+H]+.
实施例48A
N-[(苄氧基)羰基]-4-甲基-D-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯
将甲基-L-亮氨酸酯盐酸盐(600.9mg，3.31mmol，1.1当量)在氩气保护气氛下提供在二氯甲烷(250ml)中，在-10℃下将HOBt(1625.3mg，12.03mmol，4当量)，NMM(992μl，9.02mmol，3当量)，苄氧羰基-保护的氨基酸(实施例47A，840.0mg，3.0mmol，1当量)，EDC(1149.7mg，6.01mmol，2当量)和另外NMM(661μl，6.02mmol，2当量)加入到该溶液中，在搅拌下使得反应混合物过夜完全转化。对于后处理，将反应溶液在30℃浴温下在旋转蒸发仪上浓缩，将残余物溶解在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液中，将分离的水相用乙酸乙酯萃取，将合并的有机相连续用5％柠檬酸溶液，用饱和碳酸氢钠溶液和用饱和氯化钠溶液洗涤，通过硫酸钠干燥。在去除干燥剂后，在30℃浴温下在旋转蒸发仪上完全去除溶剂。在冻干后，获得产品，产率为1200mg(98％理论值)。
HPLC(方法2)：Rt＝2.65min.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.84min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝407(100)，813(27)[2M+H]+.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ＝0.81(d，J＝6.3Hz，3H)，0.86(d，J＝6.3Hz，3H)，0.89(s，9H)，1.42-1.55(m，5H)，3.61(s，3H)4.15(m，1H)，4.23(m，H)，5.03(s，2H)，7.28-7.41(m，6H)，8.01(d，J＝7.9Hz，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)：C22H35N2O5计算值407.2541，实验值407.2534[M+H]+.
实施例49A
N-[(苄氧基)羰基]-4-甲基-D-亮氨酰-L-亮氨酸
通过根据工作步骤4水解，由甲酯(实施例48A，1.1g，2.71mmol)制备标题化合物。在4小时的保留时间后，HPLC色谱图(方法2)显示几乎完全转化。对于精纯化，将粗产物经由制备RP-HPLC(方法36)色谱分离，随后获得980mg(92％理论值)的产物。
HPLC(方法2)：Rt＝2.40min.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.56min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝393(100)[M+H]+，785(72)[2M+H]+，
MS(ESIneg)：m/z(％)＝391(57)[M-H]-，783(100)[2M-H]-.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ＝0.81(d，J＝6.3Hz，3H)，0.86(d，J＝6.3Hz，3H)，0.88(s，9H)，1.42-1.55(m，5H)，4.11-4.23(m，2H)，5.03(s，2H)，7.27-7.39(m，6H)，8.01(d，J＝8.0Hz，1H)，12.52(s，br.，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)：C21H33N2O5计算值393.2384，实验值393.2383[M+H]+.
实施例50A
N2.1-(苄氧羰基)-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-L-亮氨酰-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺三氟乙酸盐
根据工作步骤5，环肽(实施例26A，120.0mg，93.95μmol)和二肽酸(实施例49A，63.38mg，169.11μmol，1.8当量)，借助NMM(52μl，469.75μmol，5当量)和HATU(64.3mg，169.11μmol，1.8当量)，在RT下在在DMF(15ml)中过夜反应为酰胺。在色谱分离后获得标题化合物(方法35)，产率为138mg(96％理论值)。
HPLC(方法25)：Rt＝21.46min.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.19min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝1424(25)[M+H]+，712(100)[M+2H]2+，
MS(ESIneg)：m/z(％)＝1422(22)[M-H]-，710(100)[M-2H]2-.
HR-TOF-MS(方法1)：C67H107N16O18计算值1423.7944，实验值1423.7964[M+H]+.
实施例51A
(2Z)-2-{[(苄氧基)羰基]氨基}-3-(6-三氟甲基吡啶-3-基)丙烯酸甲酯
将6-三氟甲基吡啶-3-甲醛(4.85g，27.70mmol)和{[苄氧羰基]氨基}(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(9.17g，27.70mmol，1.0当量)溶解在THF(70ml)中并冷却至-70℃。在-70℃下，缓慢滴加N，N，N，N-四甲基胍(6.38g，55.39mmol，6.95ml，2.0当量)，然后将混合物在-70℃下搅拌4小时，随后在RT下搅拌12小时。浓缩反应混合物，用乙酸乙酯(2×100ml)对水萃取。用饱和氯化钠溶液洗涤合并的有机相，通过硫酸钠干燥和过滤。在浓缩后，将粗产物色谱分离(硅胶，洗脱剂：甲苯，然后甲苯∶乙酸乙酯10∶1)。获得6.93g(66％理论值)的标题化合物。
HPLC/UV-Vis(方法22)：Rt＝4.60min.
HPLC/UV-Vis(方法17)：Rt＝4.54min.
LC-MS(方法29)：Rt＝2.44min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝381(100)[M+H]+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝379(100)[M-H]-.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ＝3.74(s，3H)，5.10(s，2H)，7.27(s，1H)，7.33-7.38(m，5H)，7.94(d，J＝8.5Hz，1H)，8.27(d，J＝8.5Hz，1H)，8.93(s，1H)，9.51(s，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)：C18H16N2O4F3[M+H]+计算值381.1062，实验值381.1065.
实施例52A
N-[(苄氧基)羰基]-3-(6-三氟甲基吡啶-3-基)-L-丙氨酸甲酯
将实施例化合物51A(10.15g，26.69mmol)溶解在甲醇p.a.(100ml)中。使用套管将氩气通过约5min，然后加入(+)-1，2-双[(2S，5S)二乙基phospholano]苯(环辛二烯)铑(I)三氟甲磺酸盐(289mg，400μmol，0.015当量)。将混合物在4巴氢压力和RT下在12小时内氢化。将混合物然后过滤通过硅藻土(甲醇)和将洗出液浓缩。将粗产物色谱分离(硅胶，洗脱剂：甲苯∶乙酸乙酯5∶1)。获得9.9g(97％理论值)的标题化合物。
[α]20 Na＝-24°(c＝0.093在甲醇)。
HPLC/UV-Vis(方法22)：Rt＝4.5min.
HPLC/UV-Vis(方法17)：Rt＝4.49min.
LC-MS(方法29)：Rt＝2.40min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝383(100)[M+H]+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝273(100)，381(50)[M-H]-.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ＝2.99(dd，J＝3.5和11.0Hz，1H)，3.22(dd，J＝3.5和11.0Hz，1H)，3.66(s，3H)，4.40(m，1H)，4.97(s，2H)，7.23(d，J＝5.5Hz，1H)，7.29-7.33(m，3H)，7.83(d，J＝6.5Hz，1H)，7.93-7.98(m，2H)，8.65(s，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)：C18H18N2O4F3[M+H]+计算值383.1219，实验值383.1223.
实施例53A
3-(6-三氟甲基吡啶-3-基)-L-丙氨酸甲酯
将实施例化合物52A(9.90g，25.89mmol)溶解在甲醇(100ml)中。使用套管将氩气通过约5min，然后加入披钯碳(10％，990mg)。将混合物在4巴氢压力和RT下氢化12小时。将混合物然后过滤通过硅藻土，浓缩并在高真空下干燥。产率：5.8g(90％理论值)的标题化合物。
[α]19.9 Na＝+3°(c＝0.186在甲醇)。
HPLC/UV-Vis(方法22)：Rt＝3.34min.
HPLC/UV-Vis(方法17)：Rt＝3.22min.
IR vmax(NaCl，cm-1)：3415，1734，1339，1136，1087.
LC-MS(方法29)：Rt＝1.74min；
MS(ESIpoS.)：m/z(％)＝249(100)[M+H]+.
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)：δ＝2.85(dd，J＝5.5和13.5Hz，1H)，3.01(dd，J＝5.5和13.5Hz，1H)，3.61(s，3H)，3.63-3.69(m，1H)，7.82(d，J＝7.5Hz，1H)，7.93(d，J＝7.5Hz，1H)，8.61(s，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)：C12H15N3O2F3[M+H]+计算值290.1116，实验值290.1122.
实施例54A
N-(叔-丁氧羰基)-3-(叔-丁基)-D-丙氨酰-3-(6-三氟甲基吡啶-3-基)-L-丙氨酸甲酯
在-30℃下将NMM(12.92g，127.72mmol，14.04ml，5当量)和HATU(9.71g，25.54mmol，1当量)缓慢加入实施例化合物53A(6.34g，25.54mmol)和N-(叔-丁氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酸(6.27g，25.54mmol，1.0当量)在无水DMF(240ml)中的溶液。将反应混合物缓慢升温(约3h)至RT，由此通过HPLC(方法17)观察到完全转化。加入磷酸二氢钾(34.76g，255.44mmol，10当量)，将反应混合物搅拌20min，然后过滤，加入乙酸乙酯并用饱和碳酸氢钠溶液(10ml)洗涤混合物。将有机相通过硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将粗产物通过快速色谱法纯化(硅胶，洗脱剂：环己烷∶乙酸乙酯梯度10∶1至2∶1)，由此获得9.74g(73％理论值)的标题化合物。
[α]19.9 Na＝+7.0°(c＝0.044在甲醇)。
HPLC/UV-Vis(方法22)：Rt＝4.89min.
HPLC/UV-Vis(方法17)：Rt＝4.75min.
LC-MS(方法29)：Rt＝2.67min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝476(100)，[M+H]+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝400(80)，474(40)[M-H]-.
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)：δ＝0.74(s，9H)，0.97-1.00(m，1H)，1.20-1.25(m，1H)，1.35(s，9H)，2.99-3.05(m，1H)，3.23-3.26(m，1H)，3.66(s，3H)，3.94(m，1H)，4.60(m，1H)，6.82(d，J＝8.5Hz，1H)，7.78(d，J＝8.0Hz，1H)，7.94(d，J＝8.0Hz，1H)，8.34(d，J＝8.5Hz，1H)，8.64(s，1H)。
IR vmax(NaCl，cm-1)：2959，1742，1655，1520，1336，1160，1136，1087，1050，1027.
HR-TOF-MS(方法1)：C22H33N3O5F3[M+H]+计算值476.2372，实验值476.2364.
实施例55A
N2.1-(叔-丁氧羰基)-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-[3-(6-三氟甲基吡啶-3-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺三氟乙酸盐
根据工作步骤5，环肽(实施例26A，175.0mg，0.14mmol)和二肽酸(实施例54A，113.8mg，0.25μmol，1.8当量)，借助NMM(75μl，0.69mmol，5当量)和HATU(93.8mg，0.25mmol，1.8当量)，在-10℃在DMF(15ml)中过夜反应为酰胺。在色谱分离后获得标题化合物(方法35)，产率为190mg(86％理论值)。
HPLC(方法25)：Rt＝21.51min.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.27min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝1494(33)[M+H]+，747(100)[M+2H]2+，
MS(ESIneg)：m/z(％)＝1492(10)[M-H]-，745(100)[M-2H]2-.
HR-TOF-MS(方法1)：C67H105N17O18F3计算值1492.7771，实验值1492.7778[M+H]+.
实施例56A
(2Z)-2-[(叔-丁氧羰基)氨基]-3-环戊基丙烯酸甲酯
将{[叔-丁氧羰基]氨基}(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(39.2g，132.00mmol)和环戊烷甲醛(38.9g，396.00mmol，3当量)提供于THF(320ml)中，在-70℃下将N，N，N，N-四甲基胍(24.8ml，22.81g，198.00mmol，1.5当量)加入该溶液。当冷却浴解冻时，使得反应缓慢至RT。在2天内，实现完全转化。对于后处理，将乙酸乙酯(1600ml)和水(800ml)加入反应，通过硫酸钠干燥分离的有机相。通过过滤分离干燥剂和将滤液在旋转蒸发仪上浓缩。通过柱色谱法(硅胶60∶1kg，洗脱剂：环己烷/乙酸乙酯4∶1)从残余物中分离产物，产率为34.8g(98％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法4)：Rt＝4.76min.
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ＝1.28-1.43(m，2H)，1.46(s，9H)，1.52-1.78(m，4H)，1.83-1.97(m，2H)，2.71(m，1H)，3.78(s，3H)，5.79(s，br.，1H)，6.50(d，J＝9.9Hz，1H)。
实施例57A
N-(叔-丁氧羰基)-3-环戊基-L-丙氨酸甲酯
将实施例化合物56A(13.0g，48.27mmol)溶解在乙醇(220ml)中，将溶液用氩气冲洗10分钟，并置入超声槽中5分钟。在加入(+)-1，2-双[(2S，5S)二乙基phospholano]苯(环辛二烯)铑(I)三氟甲磺酸盐(100.0mg，0.13mmol)后，将混合物再次用氩气冲洗一次30分钟，在超声槽中脱气5分钟，然后在RT下在3.5巴的氢压力下氢化3天。对于后处理，在旋转蒸发仪上完全去除溶剂，将残余物在硅胶60(300ml，洗脱剂：环己烷/乙酸乙酯2/1)上色谱分离。获得标题化合物12.9g(94％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法4)：Rt＝4.88min.
DCI-MS(NH3)：m/z＝289(100)[M+NH4]+，560(15)[2M+NH4]+.
1H NMR(200MHz，CDCl3)δ＝1.00-1.25(m，2H)，1.45(s，9H)，1.48-1.95(m，9H)，3.72(s，3H)，4.28(m，1H)，4.95(d，J＝8.4Hz，1H)。
实施例58A
3-环戊基-L-丙氨酸甲酯盐酸盐
根据工作步骤2，由N-保护的氨基酸(实施例57A，5.0g，18.43mmol)获得标题化合物，粗产率为3.9g(quant.)。
LC-MS(方法30)：Rt＝2.02min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝172(100)[M+H]+.
1H NMR(300MHz，d6)δ＝0.98-1.18(m，2H)，1.40-1.67(m，4H)1.68-1.85(m，4H在there 1.82(d，J＝6.6Hz，2H))，1.92(m，1H)，3.75(s，3H)，3.90(t，J＝8.4Hz，1H)，8.63(s，br.，3H)。
实施例59A
N-(叔-丁氧羰基)-3-环戊基-D-丙氨酸甲酯
如实施例57A的方法所述，将丙烯酸酯(实施例56A，13.0g，48.27mmol)和(+)-1，2-双[(2R，5R)二乙基phospholano]苯(环辛二烯)铑(I)三氟甲磺酸盐(100.0mg，0.13mmol)用于制备12.6g(96％理论值)的标题化合物。
MS(DCI，NH3)：m/z(％)＝289(100)[M+NH4]+，560(15)[2M+NH4]+.
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ＝1.00-1.21(m，2H)，1.45(s，9H)，1.48-1.93(m，9H)，3.73(s，3H)，4.28(m，1H)，4.95(m，1H)。
实施例60A
N-(叔-丁氧羰基)-3-环戊基-D-丙氨酸
根据工作步骤4，在2小时内实施例化合物59A(5.0g，18.43mmol)反应为N-保护的氨基酸。获得5.11g(quant.)的标题化合物。
[α]20 Na＝+7°(c＝0.13在CH2Cl2)。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝2.33min.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.26min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝158(100)[M-C4H8-CO2+H]+；
MS(ESIneg)：m/z(％)＝256(58)[M-H]-.
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ＝1.05(m，2H)，1.38(s，9H)，1.42-1.78(m，8H)，1.83(m，1H)，3.85(m，1H)，7.04(d，J＝8.2Hz，1H)，12.27(s，br.，1H)。
实施例61A
N-(叔-丁氧羰基)-3-环戊基-D-丙氨酰-3-环戊基-L-丙氨酸甲酯
在氩气保护气氛下将肽胺(实施例58A，0.9g，4.27mmol，1.1当量)提供在二氯甲烷(250ml)中，将溶液冷却至-10℃，连续加入HOBt(2.1g，15.54mmol，4当量)，NMM(1.3ml，1.2g，11.67mmol，3当量)，肽酸(实施例60A，1.0g，3.89mmol)，EDC(1.5g，7.77mmol，2当量)和再次NMM(0.8ml，0.8g，7.76mmol，2当量)。在冷却浴中将反应缓慢达到RT，过夜完全转化。对于后处理，将水加入反应，将混合物在旋转蒸发仪(水浴35℃)上浓缩，加入乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取分离的水相两次，合并的有机相随后用饱和5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液连续洗涤。将有机相通过硫酸钠干燥，过滤和浓缩。获得1.64g(quant.)的标题化合物作为粗产物。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝2.97min.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.94min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝411(100)[M+H]+，311(57)[M-C4H8-CO2+H]+.
实施例62A
N-(叔-丁氧羰基)-3-环戊基-D-丙氨酰-3-环戊基-L-丙氨酸
根据工作步骤4，将二肽(实施例61A，1.5g，3.65mmol)在1小时内反应为二肽羧酸。在精纯化(方法13)冻干粗产物后，分离标题化合物923.4mg(64％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝2.65min.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.60min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝397(100)[M+H]+，297(60)[M-C4H8-CO2+H]+，793(46)[2M+H]+；
MS(ESIneg)：m/z(％)＝395(57)[M-H]-，791(100)[2M-H]-.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.05(m，4H)1.38(s，9H)，1.43(m，4H)，1.55(m，6H)，1.61-1.86(m，8H)，3.96(m，1H)，4.16(m，1H)，6.75(d，J＝8.5Hz，1H)，7.96(d，J＝7.9Hz，1H)12.55(s，br.，1H)。
HR-TOF-MS(方法1)：C21H38N2O5计算值397.2702，实验值397.2697[M+H]+.
实施例63A
N2.1-(叔-丁氧羰基)-[3-环戊基-D-丙氨酰]-[3-环戊基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺三氟乙酸盐
根据工作步骤5，环肽(实施例26A，30.0mg，23.49μmol)和二肽酸(实施例62A，16.8mg，42.28μmol，1.8当量)，借助NMM(13μl，117.43μmol，5当量)和HATU(16.1mg，40.54mmol，1.8当量)，在-10℃下在DMF(2ml)中在2.5小时内反应为酰胺。在色谱分离(方法37)后获得标题化合物，产率为26.6mg(67％理论值)。
HPLC(方法2)：Rt＝2.30min.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.21min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝1428(35)[M+H]+，664(100)[M+2H]2+，
MS(ESIneg)：m/z(％)＝1426(100)[M-H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C67H111N16O18计算值1427.8257，实验值1427.8242[M+H]+.
实施例64A
N-[(苄氧基)羰基]-3-(叔-丁基)-D-丙氨酰-3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酸甲酯三氟乙酸盐
在0℃下将3-吡啶-3-基-L-丙氨酸(800mg，3.16mmol)和N-(苄氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酸(1.47g，3.16mmol，1当量)溶解在DMF(12ml)中。然后加入4-甲基吗啉(1.74ml，15.8mmol，5当量)和HATU(1.8g，4.74mmol，1.5当量)，将混合物在RT下搅拌约2小时。将混合物用乙酸乙酯(两次)针对浓碳酸氢钠萃取，将合并的有机相用1M柠檬酸洗涤和再次用浓碳酸氢钠洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。在色谱纯化(方法39)后，获得1.1g(63％理论值)的标题化合物。
[α]19.9 Na＝+6°(c＝0.13在甲醇)。
HPLC(方法17)：Rt＝3.92min.
HPLC(方法23)：Rt＝4.06min.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.03min，MS(ESIpos.)：m/z(％)＝442(100)[M+H]+.
IR vmax(NaCl，cm-1)：3295，2952，2359，1715，1659，1522，1435，1365，1283，1243，1138，1048，1326.
HR-TOF-MS(方法1)：C24H32N3O5[M+H]+计算值442.2342，实验值442.2342.
实施例65A
N-(苄氧羰基)-3-(叔-丁基)-D-丙氨酰-3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酸
将实施例64A(1.1g，1.98mmol)置入THF-水3∶1(48ml)中并冷却至-20℃。加入氢氧化锂(119mg，2.5mmol，4.95当量)，将混合物在RT下搅拌12小时。通过加入磷酸二氢钾(1.35g)终止反应并真空浓缩。在色谱纯化(方法14)后，获得作为固体的0.57g(67％理论值)的标题化合物。
[α]20 Na＝+44°(c＝0.15在甲醇)。
HPLC(方法17)：Rt＝3.73min.
HPLC(方法23)：Rt＝3.88min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.72min，
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝428(100)[M+H]+.
IR vmax(NaCl，cm-1)：3290，2956，1659，1613，1537，1414，1251，1205，1184，1136，1050，1028.
HR-TOF-MS(方法1)：C23H29N3O5[M+H]+计算值428.2180，实验值428.2169.
实施例66A
N2.1-(苄氧羰基)-[3-(叔-丁基)-D-丙氨酰]-[3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺双三氟乙酸盐
根据工作步骤5，环肽(实施例26A，20.0mg，15.66μmol)和二肽酸(实施例65A，12.0mg，28.19μmol，1.8当量)，借助NMM(9μl，78.3μmol，5当量)和HATU(10.7mg，28.19μmol，1.8当量)，在-20℃至-10℃下在DMF(6ml)中在2.5小时内反应为酰胺。在色谱分离(例如方法36)后，获得16.5mg(61％理论值)的标题化合物。
HPLC(方法25)：Rt＝18.55min.
LC-MS(方法29)：Rt＝1.73min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝1458(20)[M+H]+，730(100)[M+2H]2+，
MS(ESIneg)：m/z(％)＝1456(27)[M-H]-，728(100)[M-2H]2-.
HR-TOF-MS(方法1)：C69H104N17O18计算值1458.7740，实验值1458.7739[M+H]+.
实施例67A
3-(叔-丁基)-L-丙氨酸甲酯三氟乙酸盐
将三氟乙酸/二氯甲烷3∶1(220ml)加入N-(叔-丁氧羰基)-3-(叔-丁基)-L-丙氨酸甲酯(16g，61.70mmol)[J.A.Bajgrowicz，et al.，TetrahedronLett.，1984，2759-2762]，将混合物在RT下搅拌1.5小时。将混合物随后真空浓缩并将残余物在HV下干燥。将产率定量(16.5g)。
MS(DCI，NH3)：m/z＝160(100)[M+H]+.
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)：δ＝0.92(s，9H)，1.59(dd，J＝4.7，14.5Hz，1H)，1.80(dd，J＝7.6，14.5Hz，1H)，3.75(s，3H)，3.95(dd，J＝4.7，7.6Hz，1H)，8.5-8.3(br.s，3H)。
实施例68A
N-(叔-丁氧羰基)-D-亮氨酰-3-(叔-丁基)-L-丙氨酸甲酯
在氩气保护气氛下将肽胺(实施例77A，4.0g，14.68mmol，1.1当量)提供在二氯甲烷(365ml)中，在-10℃下向该溶液中连续加入HOBt(7.2g，53.23mmol，4当量)，NMM(4.3ml，39.92mmol，3当量)，N-(叔-丁氧羰基)-D-亮氨酸(3.1g，13.31mmol，1当量)[T.Kato，N.Izumiya，Bull.Chem.Soc.Jpn.，1966，39，2242-2249]，EDC(5.1g，26.62mmol，2当量)和另外NMM(3ml，26.61mmol，2当量)，在搅拌过夜下使得混合物完全转化。对于后处理，将反应溶液在30℃浴温下在旋转蒸发仪上浓缩，然后通过制备HPLC(例如方法35)色谱分离。获得5.5g(80％理论值)的标题化合物。
LC-MS(方法7)：Rt＝2.72min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝373(78)[M+H]+，273(100)[M-C4H8-CO2+H]+.
实施例69A
N-(叔-丁氧羰基)-D-亮氨酰-3-(叔-丁基)-L-丙氨酸
根据工作步骤4，在1小时内使得实施例化合物68A(400mg，1.07mmol)反应为二肽羧酸。对于后处理，将磷酸二氢钾(219.2mg，1.61mmol，1.5当量)加入溶液，将混合物在冷却条件下在旋转蒸发仪上浓缩，通过制备HPLC(例如方法35)精纯化。获得标题化合物，为冻干物(282.0mg，65％理论值)。(关于分析数据参见WO2004099239)。
实施例70A
N2.1-(叔-丁氧羰基)-D-亮氨酰-[3-(叔-丁基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺氟乙酸酯
根据工作步骤5，环肽(实施例26A，30.0mg，23.49μmol)和二肽酸(实施例69A，15.2mg，42.28μmol，1.8当量)，借助NMM(13μl，117.45μmol，5当量)和HATU(16.1mg，42.28μmol，1.8当量)，在RT下在DMF(10ml)中过夜反应为酰胺。在色谱分离(方法36)后获得标题化合物，产率为34.0mg(96％理论值)。
HPLC(方法2)：Rt＝2.25min.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.18min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝1390(77)[M+H]+，645(100)[M-C4H8-CO2+2H]2+，
MS(ESIneg)：m/z(％)＝1387(73)[M-H]-，693(100)[M-2H]2-.
HR-TOF-MS(方法1)：C64H109N16O18计算值1389.8101，实验值1389.8101[M+H]+.
实施例71A和实施例72A
(2S)-N-(叔-丁氧羰基)-3-(三甲代甲硅烷基)-D-丙氨酸(71A)和(2R)-N-(叔-丁氧羰基)-3-(三甲代甲硅烷基)-L-丙氨酸(72A)
根据M.Merget，et al.，J.Organomet.Chem.2001 628，183-194进行合成。通过在手性相上的制备HPLC(方法26)进行对映体的分离。通过与N-(叔-丁氧羰基)-L-3-三甲代甲硅烷基丙氨酸的真实样品(2R化合物，Mercachem AMR 39.260)HPLC比较，指定异构体。
实施例71A，N-(叔-丁氧羰基)-3-三甲代甲硅烷基-D-丙氨酸
手性HPLC(方法26)：Rt＝4.16min，e.e.＞99％.
[α]D 20＝+1.1(c＝0.83，甲醇)
实施例72A，N-(叔-丁氧羰基)-3-三甲代甲硅烷基-L-丙氨酸
手性HPLC(方法26)：Rt＝9.27min，e.e.＞99％
[α]D 20＝-1.6(c＝0.66，甲醇)
实施例73A
3-三甲代甲硅烷基-L-丙氨酸甲酯盐酸盐
将来自实施例72A(300mg)的化合物溶解在甲醇(3ml)中并冷却至0℃。在30分钟内滴加氯化三甲基硅烷(590mg，4.7当量)，将混合物升温至RT过夜。将挥发性组分在旋转蒸发仪上和随后在高真空下去除。获得目标化合物(224mg，92％理论值)。
1H NMR(d6-DMSO，300MHz)：δ＝0.03(s，9H)，0.97-1.71(m，2H)，3.73(s，3H)，3.93(dd，J＝5.3，10.9Hz，1H)，8.40(br s，3H)。
实施例74A
N-苄氧羰基-3-三甲代甲硅烷基-L-丙氨酸甲酯
在0℃下在氩气下将来自实施例73A的化合物(2.0g)提供在THF(40ml)中。加入三乙胺(2.3g，2.4当量)，然后滴加N-苄氧羰基氧代琥珀酰亚胺(2.83g，1.2当量)在THF(20ml)中的溶液。将混合物然后在RT下搅拌过夜，浓缩一半，用乙酸乙酯稀释，用水洗涤两次和用饱和氯化钠溶液洗涤一次。将有机相通过硫酸钠干燥和在旋转蒸发仪上浓缩。将残余物通过制备HPLC(方法41)纯化。获得目标化合物(2.32g，79％理论值)。
HPLC(方法18)：Rt＝4.96min.
MS(DCI，NH3)：m/z＝327[M+NH4]+(100)，310(3)[M+H]+.
实施例75A
(2R)-N-苄氧羰基-3-三甲代甲硅烷基-L-丙氨醇(alaninol)
将氯化锂(0.64g，15mmol)和硼氢化钠(0.57g，15mmol)和然后乙醇(22ml)加入实施例74A(2.32g，7.5mmol)在THF(14ml)中的溶液。将混合物在RT下搅拌过夜。对于后处理，用柠檬酸溶液(10％在水)将混合物调节至pH 4，同时用冰水冷却，然后用200ml水稀释，用二氯甲烷萃取三次。通过硫酸镁干燥合并的有机相，过滤和真空浓缩。将残余物通过HPLC(方法41)分离残余物，将适当的级分真空浓缩。获得作为油的标题化合物(1.24g，59％理论值)。
HPLC(方法4)：Rt＝4.48min.
MS(DCI，NH3)：m/z＝299[M+NH4]+(100)，282(13)[M+H]+.
1H NMR(CDCl3，300MHz)：δ＝0.03(s，9H)，0.58-0.84(m，2H)，2.13(br.s，1H)，3.45(br.m，1H)，3.65(br.m，1H)，3.83(br.m，1H)，4.72(br.m，1H)，5.08(s，2H)，7.33(m，5H)。
实施例76A
(2R)-N-苄氧羰基-3-三甲代甲硅烷基-L-丙氨醛(alaninal)
将吡啶-SO3复合物(2.04g，12.8mmol)在无水DMSO(12ml)中的溶液在10℃在氩气下加入实施例75A(0.36g，1.28mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(1.65g，12.8mmol)在7ml的DMSO中的溶液。去除冷却浴，搅拌混合物另外20分钟。加入400ml的冰-水并用二乙基醚萃取溶液三次。合并的有机相用柠檬酸溶液(10％在水)洗涤两次，用水洗涤一次，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤一次，和用饱和氯化钠溶液洗涤一次，通过硫酸镁干燥，过滤和在旋转蒸发仪上浓缩。获得作为油的标题化合物(0.39g，93％理论值)并作为粗产物直接使用。
MS(DCI，NH3)：m/z＝297[M+NH4]+(100)，280(25)[M+H]+.
1H NMR(CDCl3，300MHz)：δ＝0.07(s，9H)，0.78(dd，J＝9.4，14.0Hz，1H)，1.12(dd，J＝5.8，14.0Hz，1H)，5.13(s，2H)，7.35(m，5H)，9.53(s，1H)。
实施例77A
3-(叔-丁基)-L-丙氨酸甲酯三氟乙酸盐
在RT下在TFA/二氯甲烷1∶3(3ml)中搅拌(2S)-N-叔-丁氧羰基-3-叔-丁基-L-丙氨酸甲酯(529mg，2.04mmol)，将溶液在旋转蒸发仪上浓缩并在高真空下干燥。获得540mg(97％理论值)的产物。
1H NMR(d6-DMSO，300MHz)：δ＝0.92(s，9H)，1.59(dd，J＝4.7，14.4Hz，1H)，1.80(dd，J＝7.5，14.4Hz，1H)，3.76(s，3H)，3.95(dd，J＝4.7，7.5Hz，1H)，8.33(br.s，3H)。
实施例78A
N-[(2R)-2-苄氧羰基氨基-3-三甲代甲硅烷基丙基]-3-(叔-丁基)-L-丙氨酸甲酯三氟乙酸氢盐
在氩气下，将实施例化合物77A(4.33g，15.9mmol)，实施例化合物76A(7.2g，20.6mmol)和乙酸钠(1.3g，15.9mmol)在0℃下提供于DMF(140ml)中。加入氰基硼氢钠(1.99g，31.7mmol)，将混合物在0℃下搅拌2小时。对于后处理，将混合物用1l的乙酸乙酯稀释，用5％溶液的碳酸氢钠洗涤两次。水相用乙酸乙酯反萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，通过硫酸镁干燥，过滤和浓缩。通过制备HPLC(方法39)纯化残余物。获得作为晶体的6.02g(71％理论值)的标题化合物。
HPLC(方法4)：Rt＝4.8min.
ESI-MS(pos.)：m/z＝423(100)[M+H]+.
1H NMR(CDCl3，300MHz)：δ＝0.03(s，9H)，0.76(dd，J＝5.1，14.7Hz，1H)，0.94(s，9H)，0.95(dd，J＝10.2，14.7Hz，1H)，1.95-1.80(m，2H)，2.93(dd，J＝2.5，12.5Hz，1H)，3.35(dd，J＝9.8，11.3Hz，1H)，3.81(s，3H)，3.85(dd，J＝4.5，7.9Hz，1H)，4.07-3.90(m，1H)，5.05(d，J＝11.5Hz，1H)，5.16(d，J＝11.5Hz，1H)，5.63(d，J＝0.9Hz，1H)，7.33(s，5H)。
实施例79A
N-[(2R)-2-苄氧羰基氨基-3-三甲代甲硅烷基丙基]-3-(叔-丁基)-L-丙氨酸盐酸盐
将实施例化合物78A(6.02g，11.2mmol)溶解在甲醇(225ml)中，加入在水(9当量)中的1N氢氧化锂溶液(101ml)。在RT下将反应混合物在RT下搅拌过夜(18h)，然后用1N盐酸酸化并在旋转蒸发仪上去除甲醇。将剩余的悬浮液用200ml水稀释，用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机相通过硫酸钠干燥，过滤和浓缩。在高真空下干燥残余物。获得5.3g(定量)的标题化合物，其在不纯化下进一步反应。
HPLC(方法4)：Rt＝4.6min.
MS(ESIpos)：m/z(％)＝409(100)[M+H]+，
MS(ESIneg)：m/z(％)＝407(10)[M-H]-.
1H-NMR(d6-DMSO，400MHz)：δ＝0.03(s，9H)，0.82(m，2H)，0.95(s，9H)，1.68(br.d，J＝14.5，1H)，1.84(dd，J＝9.0，14.5，1H)，2.88(m，1H)，3.10(m，1H)，3.80-4.03(m，2H)，5.01(d，J＝12，1H)，5.13(d，J＝12，1H)，7.29(d，J＝9.0，1H)，7.43-7.56(m，5H)，8.7-9.2(br，2H，NH2 +)。
实施例80A
N2.1-[(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-3-(三甲代甲硅烷基)丙基]-[3-(叔-丁基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.10-N3.2-内酰胺双氟乙酸酯
根据工作步骤5，环肽(实施例26A，30.0mg，23.49μmol)和二肽酸(实施例69A，18.8mg，42.28μmol，1.8当量)，借助NMM(13μl，117.45μmol，5当量)和HATU(16.1mg，42.28μmol，1.8当量)，在-20℃至-10℃在DMF(15ml)中在2.5小时内转化为酰胺。在色谱分离后获得标题化合物(方法36)，产率为34.0mg(96％理论值)。
HPLC(方法25)：Rt＝19.59min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.97min；MS(ESIpos.)：m/z(％)＝720(100)[M+2H]2+.
HR-TOF-MS(方法1)：C67H111N16O17计算值1439.8077，实验值1439.8036[M+H]+.
实施例81A
(2S)-N-苄氧羰基-3-叔-丁基-L-丙氨醛
类似于实施例75A和实施例76A的反应顺序，由Z-β-叔-丁基-丙氨酸甲酯制备化合物。
MS(DCI，NH3)：m/z＝281[M+NH4]+(100)；264(20)[M+H]+.
1H NMR(CDCl3，300MHz)：δ＝1.00(s，9H)，1.30(dd，J＝8.3，14.7Hz，1H)，1.83(dd，J＝3.8，14.6Hz，1H)，4.33(dt，J＝3.8，8.7Hz，1H)，5.06(m，1H)，5.12(s，2H)，7.36(m，5H)，9.58(s，1H)。
实施例82A
N-[(2S)-2-苄氧羰基氨基-4，4-二甲基戊基]-3-(叔-丁基)-L-丙氨酸甲酯三氟乙酸盐
类似于实施例78A，由实施例81A和实施例77A制备化合物。产率：860mg(36％理论值)。
HPLC(方法4)：Rt＝4.7min.
MS(ESI pos)：m/z＝407(100)[M+H]+.
1H NMR(CDCl3，300MHz)：δ＝0.91(s，1H)，0.93(s，9H)，1.34(br.d，J＝15，1H)，1.53(dd，J＝8.7，14.7，1H)，1.68-1.95(m，2H)，2.89(dd，J＝3.5，12Hz，1H)，3.33(dd，J＝10.5，12Hz，1H)，3.84(m，1H)，3.80(s，3H)，3.99(m，1H)，5.04(d，J＝12Hz，1H)，5.13(d，J＝12Hz，1H)，5.73(br.d，J＝8.5Hz，1H)，7.32(m，5H)。
实施例83A
N-[(2S)-2-苄氧羰基氨基-4，4-二甲基戊基]-3-叔-丁基-L-丙氨酸三氟乙酸盐
类似于实施例79A，由实施例83A(1.10g，2.11mmol)和1N氢氧化锂溶液(19ml)制备该化合物。产率：895mg(83％理论值)。
HPLC(方法4)：Rt＝4.47min.
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝393(100)[M+H]+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝391(4)[M-H]-.
1H NMR(d6-DMSO，300MHz)：δ＝0.89(s，9H)，0.93(s，9H)，1.30-1.45(m，2H)，1.64(dd，J＝2，14Hz，1H)，1.81(dd，J＝9.7，14Hz，1H)，2.88(m，1H)，2.98(m，1H)，3.85-3.99(m，2H)，4.99(d，J＝12.7Hz，1H)，5.12(d，J＝12.7Hz，1H)，7.07(d，J＝9.0Hz，1H)，7.27-7.40(m，5H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)：δ＝29.00(3C)，29.38(3C)，29.96(2C)，42.22，45.10，45.64，50.52，56，97，65，39，127.56(2C)，127.73，128.23(2C)，136.83，155.47，171.47.
HR-TOF-MS(方法1)：C22H37N2O4[M+H]+实验值393.2753，计算值393.2748
实施例84A
N2.1-[(2S)-2-(苄氧羰基氨基)-3-(叔-丁基)丙基]-[3-(叔-丁基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.10-N3.2-内酰胺双三氟乙酸盐
根据工作步骤5，环肽(实施例26A，170.0mg，0.13mmol)，二肽酸(实施例83A，121.4mg，0.24mmol，1.8当量)，NMM(73μl，0.67μmol，5当量)和HATU(91.1mg，42.28μmol，1.8当量)在-20℃至-10℃在DMF(6ml)中在2.5小时内反应为酰胺。将标题化合物色谱分离(例如方法35)，由此获得34.0mg(96％理论值)的标题化合物。
HPLC(方法2)：Rt＝2.08min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.9min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝712.7(100)[M+2H]2+，1424(5)[M+H]+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1422.7(100)[M-H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C68H111N16O17[M+H]+实验值1423.8318，计算值1423.8313.
实施例85A
N2.1-[(2R)-2-(苄氧羰基氨基)-3-(叔-丁基)丙基]-[3-(叔-丁基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.10-N3.2-内酰胺双氟乙酸酯
根据工作步骤5，环肽(实施例26A，42.0mg，32.88μmol)，N-((2R)-2-{[(苄氧基)羰基]氨基}-4，4-二甲基戊基)-3-(叔-丁基)-L-丙氨酸三氟乙酸盐(29.98mg，59.18μmol，1.8当量)，NMM(18μl，164.40μmol，5当量)和HATU(22.5mg，59.18μmol，1.8当量)在-20℃至-10℃在DMF(15ml)中在2.5小时内反应为酰胺。在色谱分离后获得标题化合物(方法10)(37.5mg，69％理论值)。
类似于实施例82A的顺序，由化合物77A和N-苄氧羰基-3-(叔-丁基)-D-丙氨醛和随后水解(参见实施例83A)可以制备二肽酸，
N-((2R)-2-{[(苄氧基)羰基]氨基}-4，4-二甲基戊基)-3-(叔-丁基)-L-丙氨酸三氟乙酸氢盐。
HPLC(方法2)：Rt＝2.13min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.98min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝712(100)[M+2H]2+，
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1422(100)[M-H]-，710(40)[M-2H]2-.
HR-TOF-MS(方法1)：C68H111N16O17[M+H]+实验值1423.8282，计算值1423.8308.
实施例86A
N-(叔-丁氧羰基)-3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酸甲酯
在氩气下将(2S)-N-(叔-丁氧羰基)-3-(吡啶-3-基)丙氨酸(25.00g，93.88mmol)溶解在300ml的二氯甲烷中。加入甲醇(11.4ml，9.02g，281mmol，3当量)和一粒DMAP。将混合物然后冷却至0℃。加入EDC(19.80g，103mmol，1.1当量)。在5分钟后，去除冰浴，将混合物在RT下搅拌1小时。将混合物然后真空浓缩，将乙酸乙酯加入残余物，将混合物针对饱和碳酸氢钠溶液萃取。用乙酸乙酯反萃取水相一次，然后合并的有机相用0.5M柠檬酸洗涤和然后再次用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。将有机相通过硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。剩下油，其在油泵真空干燥期间结晶。产率：23.60g(90％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法17)：Rt＝3.28min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.21min，MS(ESIpos.)：m/z(％)＝281(100)[M+H]+.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.30(s，9H)，2.86(m，1H)，3.04(m，1H)，3.63(s，3H)，4.22(m，1H)，7.28-7.39(m，2H)，7.69(d，1H)，8.43(m，2H)。
实施例87A
3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酸甲酯双三氟乙酸盐
将来自实施例86A的化合物(11.8g，42.09mmol)溶解在二氯甲烷中的三氟乙酸(160ml；30％溶液)中，在RT下搅拌30分钟。将混合物然后真空浓缩。将残余物置入少量水中并冻干。然后将甲苯加入冻干物并将混合物真空浓缩。最终，将产物在油泵真空中干燥至恒重。产率：17.15g(quant.)。
HPLC/UV-Vis(方法23)：Rt＝0.88min.
LC-MS(方法7)：Rt＝0.46min，
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝181(100)[M+H]+.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝2.79(dd，1H)，2.92(dd，1H)，3.60(s，3H)，3.63(m，1H)，7.30(m，1H)，7.62(d，1H)，8.41(m，2H)。
实施例88A
N-(叔-丁氧羰基)-3-(三甲代甲硅烷基)-D-丙氨酰-3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酸甲酯
将来自实施例87A的化合物(10.31g，39.4mmol)和来自实施例71A的化合物(16.10g，39.4mmol，1当量)在0℃下溶解在DMF(186ml)中。然后加入NMM(17.34ml，16.00g，4当量)和HATU(22.49g，59.16mmol，1.5当量)。将混合物在RT下搅拌2小时。将叔丁基甲基醚加入混合物，将混合物用饱和碳酸钠溶液洗涤。将水相用叔丁基甲基醚反萃取一次，合并的有机相然后用1M柠檬酸水溶液洗涤和再次用饱和碳酸钠溶液洗涤，通过硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。将混合物过滤通过硅胶(环己烷/乙酸乙酯2∶1)。产率：14.1g(84％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法17)：Rt＝3.91min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.90min，
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝424(100)[M+H]+.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝-0.09(s，9H)，0.56-0.75(m，2H)，1.47(s，9H)，2.90(dd，1H)，3.09(dd，1H)，3.62(s，3H)，3.98(m，1H)，4.49(m，1H)，6.68(d，1H)，7.26(dd，1H)，7.61(m，1H)，8.20(d，1H)，8.40(m，2H)。
实施例89A
N-(叔-丁氧羰基)-3-(三甲代甲硅烷基)-D-丙氨酰-3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酸
将来自实施例88A(7.4g，17.56mmol)的化合物置入THF-水(6∶4)中，冷却至0℃，加入氢氧化锂一水合物(1.47g，35.13mmol，2当量)。将混合物在0℃下搅拌。在1小时后，加入另一当量(0.74g)的氢氧化锂一水合物，将混合物搅拌另一小时。在真空中蒸馏掉大部分THF，将残余物用两份MTBE洗涤，然后通过加入柠檬酸将水相调节至pH4。固体沉淀。将混合物用三份乙酸乙酯萃取，由此固体溶解。合并的有机相通过硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将粗产物通过凝胶色谱法(方法3，洗脱剂：甲醇)纯化。产率：6.67g(93％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法17)：Rt＝3.73min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.68min，
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝410(40)[M+H]+.
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ＝-0.090(s，9H)，0.56-0.75(m，2H)，1.35(s，9H)，2.90(dd，1H)，3.09(dd，1H)，3.98(m，1H)，4.41(m，1H)，6.70(d，1H)，7.26(dd，1H)，7.60(m，1H)，8.00(d，1H)，8.37(m，2H)。
实施例90A
N-(叔-苄氧羰基)-3-(三甲代甲硅烷基)-D-丙氨酰-3-吡啶-3-基-L-丙氨酸
将来自实施例89A的化合物(500mg，1.22mmol)溶解在二氯甲烷(20ml)中的30％TFA中，并在RT下搅拌30分钟。将混合物然后浓缩，将残余物置入水中并冻干。将冻干物(600mg的固体)在氩气下提供在THF(25ml)中，然后在0℃下加入N-(苄氧羰基氧基)琥珀酰亚胺(320mg，1.28mmol，1.15当量)和最终4-甲基吗啉(150μl，1.34mmol，1.2当量)。使得混合物升温至RT并进一步搅拌过夜。通过加入冰醋酸终止反应并真空浓缩。将残余物置入乙酸乙酯中并对0.5M的柠檬酸振荡两次。将有机相通过硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。通过色谱法(方法34)纯化残余物。产率：395mg(0.71mmol，58％理论值)。
HPLC(方法17)：Rt＝3.79min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.84min，MS(ESIpos.)：m/z(％)＝444.1(100)[M+H]+.
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝-0.07(s，9H)，0.60-0.75(m，2H)，2.97-3.03(m，1H)，3.28(m，1H)，3.88(m，1H)，4.54(m，1H)，4.98(d，J＝12.7，1H)，4.98(d，J＝12.7，1H)，5.07(d，J＝12.7，1H)7.27-7.35(m，6H)，7.65(m，1H)，8.08(d，J＝7.04，1H)，8.19(d，J＝8.8，1H)，8.62(s，2H)。
实施例91A
N2.1-(苄氧羰基)-[3-(三甲代甲硅烷基)-D-丙氨酰]-[3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺双三氟乙酸盐
将HATU(1.6当量，8.9mg，23μmol)首先在氩气保护气氛下在-20℃下加入环肽(实施例26A，1.0当量，18.6mg，15μmol)，二肽酸(实施例90A，1.5当量，9.7mg，22μmol)和NMM(1.0当量，15μmol)在无水DMF(200μl)中的溶液。将反应混合物搅拌(约15min)和再次加入NMM(2.5当量，38μmol)。将反应混合物缓慢升温(约12h)至RT和然后显示胺组分的完全转化(HPLC监视，方法2)。将固体磷酸二氢钾(10当量，500μmol)加入反应混合物，将混合物然后真空蒸发并通过色谱法纯化(方法21)。获得15.8mg(63％理论值)的产物。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝1.9min，λmax(定性)＝210nm(s)，255-270(m)。
LC-MS(方法7)：Rt＝2.0min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝738(100)[M-Boc+2H]2+，1475(15)[M+H]+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝682(100)，736(80)[M-2H]2-，1473(60)[M-H]-.
实施例92A
3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸盐酸盐
将N-(叔-丁氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸(4.5g，12.1mmol，实施例10A)预溶解在二噁烷(3ml)中。在RT下，滴加氯化氢在二噁烷(30.2mmol，120mmol，10当量)中的4N溶液。将反应混合物搅拌30分钟，真空蒸发并在高真空下干燥。获得作为固体的标题化合物(3.5g，99％理论值)。
LC-MS(方法7)：Rt＝1.52min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝273.6(100)[M+H]+；
MS(ESIneg)：m/z(％)＝271.5(100)[M-H]-.
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)：δ＝0.85(s，9H)，0.86(s，9H)，1.49(dd，J＝14.3，1.6Hz，1H)，1.50(d，J＝13.8Hz，1H)，1.64(dd，J＝14.3，4.0Hz，1H)，1.71(dd，J＝14.3，6.9Hz，1H)，3.77(“t”，J＝6.5Hz，1H)，4.14(m，1H)，8.27(s，br，3H)，8.94(d，J＝8.2Hz，1H)，12.58(s，br，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)：δ＝28.41(3C)，29.50(3C)，30.08，30.38，44.46，44.80，50.03，50.30，169.10，173.98.
HR-TOF-MS(方法1)：C14H29N2O3计算值273.2173，实验值273.2167[M+H]+.
实施例93A
N-(苄氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸
在氩气保护气氛下将3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸(3.73g，12.1mmol，实施例92A)溶解在THF(170ml)中。在0℃下加入水(170ml)，苄氧羰基氧基琥珀酰亚胺酯(4.52g，18.1mmol，1.5当量)和N-甲基吗啉(4.28g，4.23mmol，3.5当量)以后，将混合物在RT下剧烈搅拌直至所有原材料已经转化(数小时，HPLC监视，方法2)。将混合物用冰醋酸猝灭。真空抽掉THF。将剩余水相用乙酸乙酯分层，用4N盐酸调节至pH＜3，然后用乙酸乙酯萃取数次。用盐水洗涤有机相，通过硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将获得的泡沫用乙腈搅拌，由此形成固体，其通过过滤收集，然后用少量乙腈洗涤。一旦已经浓缩，该过程可以用滤液再重复数次。将合并的固体在高真空下干燥，由此获得作为固体的标题化合物。将剩余的母液浓缩并通过制备HPLC(方法10)纯化。获得标题化合物(合并的固体和来自HPLC分离的纯化产物)，为固体(3.49g，71％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝2.6min.
LC-MS(方法8)：Rt＝2.46min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝363(60)，407(100)[M+H]+.
MS(ESIneg)：m/z(％)＝297(100)，405.5(40)[M-H]-.
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)：δ＝0.81(s，9H)，0.83(s，9H)，1.40-1.44(m，2H)，1.49(dd，J＝14.3，9.7Hz，1H)，1.58(dd，J＝13.5，1.4Hz，1H)，4.07(m，1H)，4.13(m，1H)，4.94(d，J＝12.3Hz，1H)，4.99(d，J＝12.5Hz，1H)，7.25-7.32(m，5H)，7.92(d，J＝8.5Hz，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)：δ＝29.49(3C)，29.75(3C)，30.41，30.46，44.52，45.11，49.55，52.73，65.49，127.70(2C)，127.91，128.48(2C)，137.31，155.59，172.52，174.50.
HR-TOF-MS(方法1)：C22H34N2O5计算值407.2541，实验值407.2531[M+H]+.
实施例94A
N2-(苄氧羰基-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-3-叔-丁基-L-丙氨酰)-[(3R)-3-叔-丁基氨基-L-苯丙氨酸]甲酯
将HOBt(4当量，5.51g，40.77mmol)，N-甲基吗啉(4当量，40.77mmol)，N-苄氧羰基二肽(N-苄氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸，1.1当量，4.56g，11.21mmol，实施例93A)和EDC(2当量，3.91g，20.38mmol)在-30℃下连续加入外消旋氨基酸甲酯(1.0当量，4.16g，10.19mmol，实施例14)在二氯甲烷p.a.(100ml)中的溶液。将反应混合物缓慢升温(约12h)至RT，由此通过HPLC(方法2)观察到胺组分的完全转化。将反应混合物用磷酸二氢钾(5.0当量，6.93g，50.96mmol)猝灭，真空浓缩，置入乙酸乙酯(约400ml)并然后用5％柠檬酸水溶液(两次)、蒸馏水和饱和氯化钠溶液洗涤。将混合物通过硫酸钠干燥和过滤。将粗产物随后过滤通过硅胶。将溶液真空浓缩至干燥，然后进一步在高真空下干燥。获得5.36g(77％理论值)的标题化合物，为外消旋混合物，在氨基苯丙氨酸上具有相对(2S*，3R*)立体化学。在进一步的色谱分离步骤(方法42)上将非对映体彼此分离。获得2.87g(41％理论值)的标题化合物(de＞99％，方法28)。用对映体纯的氨基酸甲酯也可以类似地进行该反应。可以直接获得非对映体纯的产物。
HPLC/UV-Vis(方法3)：Rt＝3.1min.
HPLC/UV-Vis(方法28)：Rt＝4.84min.
LC-MS(方法8)：Rt＝2.7min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝583.5(100)[M+H-CO2-C4H8]+，683.5(60)[M+H]+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝681.6(10)[M-H]-，727.6(100)[M-H+HCO2H]-.LC-MS(方法7)：Rt＝3.1min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝583.5(100)[M+H-CO2-C4H8]+，683.5(40)[M+H]+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝573(100)，681.6(5)[M-H]-，727.6(40)[M-H+HCO2H]-.
实施例95A
N2-(苄氧羰基-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-3-叔-丁基-L-丙氨酰)-[(3R)-3-叔-丁基氨基-L-苯丙氨酸]
在氩气保护气氛下，将三肽甲酯(实施例94A，1.00g，1.46mmol)溶液提供在THF/水2∶1(300ml)中。在0℃下，在剧烈搅拌下缓慢滴加脱气的5％氢氧化锂(59.6mg，2.5mmol，1.7当量)水溶液。将混合物在0℃下搅拌直至HPLC色谱图(方法2)显示完全转化(约6h)。如果保留时间过长，存在差向异构化的风险。随后，加入乙酸(0.4ml)，将反应混合物真空浓缩和用乙酸乙酯(100ml)分层。现在将水相用5％柠檬酸(pH2-3)酸化，然后用乙酸乙酯(50ml，三次)萃取。用饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机相(20ml，两次)，通过硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩并在高真空下干燥。将粗产物通过制备HPLC(方法38)精纯化。获得682mg(56％理论值)的标题化合物。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝2.9min.
HPLC/UV-Vis(方法25)：Rt＝24.6min.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.9min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝569.2(100)，669.3(50)[M+H]+，1337.4(40)；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝667.2(100)[M-H]-，1335.4(80)。
HR-TOF-MS(方法1)：C36H53N4O8[M+H]+实验值669.3881，计算值669.3858.
实施例96A
N2-(苄氧羰基-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-3-叔-丁基-L-丙氨酰)-[(3R)-3-叔-丁基氨基-L-苯丙氨酸]2-(三甲代甲硅烷基)乙基酯
将三肽酸(实施例96A，733mg，1.10mmol)，2-(三甲代甲硅烷基)乙醇(1.30g，11.0mmol，10当量)和4分子筛(约100mg)在无水二氯甲烷p.a.(6.5ml)中的混合物在氩气保护气氛下在RT下搅拌30min。随后，在-30℃下加入DCC(452mg，2.20mmol，2当量)和DMAP(134mg，1.10mmol，1当量)。使得反应混合物解冻(约12h)并在RT下搅拌直至HPLC色谱图(方法2)显示完全转化(约12h)。将反应混合物用冰醋酸(125μl)猝灭，然后在RT下真空蒸发，悬浮在少量二氯甲烷(6.5ml)中，过滤通过ecRP18-HPLC柱体(Macherey Nagel)，再次浓缩并然后通过制备HPLC(方法35)精纯化。获得706mg(84％理论值)的标题化合物。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝3.4min.
LC-MS(方法7)：Rt＝3.4min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝669.5(80)，769.6(100)[M+2H]2+，1556(30)。
HR-TOF-MS(方法1)：C41H65N4O8Si[M+H]+实验值769.4548，计算值769.4567.
实施例97A
N2-(苄氧羰基-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-3-叔-丁基-L-丙氨酰)-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙基酯三氟乙酸盐
在氩气保护气氛下提供N-(叔-丁氧羰基)-保护的三肽(720mg，0.94mmol，实施例96A)。在RT和在剧烈搅拌下，滴加在二噁烷(40ml)中的4N盐酸。搅拌混合物直至分析HPLC(方法2)显示完全转化(约30min)。将反应混合物在RT下真空蒸发。将粗产物通过制备HPLC(方法10)纯化并冻干。获得标题化合物，为冻干物(394mg，54％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法25)：Rt＝25.2min.
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝2.4min.
LC-MS(方法8)：Rt＝2.3min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝669.6(100)[M+H]+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝703.6(100)[M-H+HCO2H]-.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.6min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝669.4(100)[M+H]+.
实施例98A
N2-(苄氧羰基-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-3-叔-丁基-L-丙氨酰)-N3-{叔-丁氧羰基-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙基酯三氟乙酸盐
将HATU(1.5当量，58.3mg，0.15mmol)首先在-15℃、在氩气保护气氛下加入Boc-八肽(实施例20A，1.0当量，114.4mg，0.10mmol)，三肽(实施例97A，1.0当量，80.0mg，0.10mmol，实施例97A)和N-甲基吗啉(1.0当量，0.10mmol)在无水DMF(3.0ml)中的溶液。将反应混合物搅拌(约15min)和再次加入NMM(1.0当量，0.10mmol)。将反应混合物升温至0℃和再次加入HATU(2.5当量，0.25mmol)。将反应混合物缓慢升温(约12h)至RT和然后显示胺组分的完全转化(HPLC监视，方法3)。将固体磷酸二氢钾(5当量，0.50mmol)加入反应混合物和然后将混合物在高真空下蒸发并通过色谱法纯化(方法21或13)，接着通过加入TFA(100μmol，作为在乙腈-水1∶1中的0.05％溶液)将色谱产物随后进行盐交换。获得140.5mg(78％理论值)的产物。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝2.6min.
HPLC/UV-Vis(方法25)：Rt＝26.6min.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.5min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝1656.8(100)[M+H]+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1655(100)[M-H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C78H131N16O21Si[M+H]+实验值1655.9467，计算值1655.9439.
实施例99A
N2-(苄氧羰基-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-3-叔-丁基-L-丙氨酰)-N3-{叔-丁氧羰基-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸三氟乙酸盐
将4分子筛加入TMSE酯(460mg，0.260mmol，实施例98A)在无水THF(8ml)中的溶液，将混合物在RT下在氩气保护气氛下搅拌(15min)。随后在2小时的时期内将1N氟化四丁基铵溶液(4.16ml，4.16mmol，16当量)以两份加入干燥的溶液中。将混合物搅拌直至观察到完全转化(HPLC，方法2)。将反应混合物用冰醋酸(298μl，5.198mmol，20当量)猝灭，真空浓缩和通过制备HPLC(方法21)直接纯化。在冻干后，获得作为冻干物的产物(375mg，86％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝2.4min.
LC-MS(方法7)：Rt＝2.3min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝728.8(100)[M+2H-CO2-C4H8]2+，778.8(30)[M+2H]2+，1556.9(40)[M+H]+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1554(100)[M-H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C73H119N16O21[M+H]+实验值1555.8737，计算值1555.8731.
实施例100A
N2-(苄氧羰基-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-3-叔-丁基-L-丙氨酰)-N3-{(3R)-3-羟基-L-亮氨酰-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸双三氟乙酸盐
在氩气保护气氛下提供N-(叔-丁氧羰基)-保护的化合物(100mg，0.06mmol，实施例99A)。在RT和在剧烈搅拌下，滴加在二噁烷(15ml)中的4N盐酸。搅拌混合物直至分析HPLC(方法2)显示完全转化(约30min)。将反应混合物在RT下真空蒸发。将粗产物通过制备HPLC(方法35)纯化并冻干。获得标题化合物，为冻干物(85.5mg，85％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝1.9min.
HPLC/UV-Vis(方法25)：Rt＝18.4min，λmax(定性)＝210nm(s)，255-270(w)。
LC-MS(方法7)：Rt＝1.8min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝728.7(100)[M+2H]2+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1454(100)[M-H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C68H111N16O19[M+H]+实验值1455.8192，计算值1455.8206.
实施例101A
N2-(苄氧羰基)-N3-{[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸三氟乙酸盐
在氩气保护气氛下提供在二噁烷(10ml)中的N-(叔-丁氧羰基)-保护的九肽(实施例22A，1200mg，0.848mmol)。在RT和在剧烈搅拌下，滴加在二噁烷(230ml)中的4 N盐酸。搅拌混合物直至分析HPLC(方法2)显示完全转化(约1h)。在旋转蒸发仪上浓缩反应混合物，然后将残余物在RT下与水混合，然后真空蒸发。将粗产物通过制备HPLC(方法11)纯化并冻干。获得标题化合物，为无色固体(918mg，95％纯度，83％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝1.6min.
HPLC/UV-Vis(方法25)：Rt＝14.3min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.4min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝601.6(100)[M+2H]2+，1201.7(20)[M+H]+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1199.8(100)[M-H]-.
实施例102A
N2.1-(苄氧羰基)-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-[3-叔-丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺三氟乙酸盐
将HATU(1.6当量，9.4mg，25μmol)首先在0℃、在氩气保护气氛下加入环肽(实施例26A，1.0当量，16.1mg，15μmol)，二肽酸N-(苄氧羰基)-3-叔-丁基-D-丙氨酰-3-叔-丁基-L-丙氨酸(9.4mg，23μmol，1.5当量，实施例93A)和N-甲基吗啉(1.0当量，15μmol)在无水DMF(250μl)中的溶液。将反应混合物搅拌(约15min)和再次加入N-甲基吗啉(3.5当量，54μmol)。将反应混合物缓慢升温(约12h)至RT和然后显示胺组分的完全转化(HPLC监视，方法3)。将固体磷酸二氢钾(10当量，150μmol)加入反应混合物和然后将混合物在高真空下蒸发并通过色谱法纯化(方法10)。获得17.7mg(74％理论值)的产物。
备选制备方法：在0℃下，将HATU(47mg，125μmol，3当量)加入游离的十一肽(N2-(苄氧羰基-[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-3-叔-丁基-L-丙氨酰)-N3-{(3R)-3-羟基-L-亮氨酰-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酰}-(3R)-3-氨基-L-苯丙氨酸双三氟乙酸盐，实施例100A，70mg，42μmol)在DMF(30ml)和NMM(32μl，6当量)中的溶液。将反应混合物搅拌直至完全转化(12h，HPLC监视)。随后，将反应混合物用磷酸二氢钾(10当量，56.6mg)猝灭，真空浓缩和通过制备HPLC(方法36)直接纯化。获得的产物为固体(74.4mg，73％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝2.3min.
HPLC/UV-Vis(方法25)：Rt＝24.0min，λmax(定性)＝210nm(s)，255-270(w)。
1H NMR(500MHz，d5-吡啶)δ0.98-1.21(m，39H，12CH3)，1.36(m，1H)，1.52(s，br，1H)，1.60(d，J＝4.1Hz，3H，CH3)，1.89(m，1H)，1.96-2.03(m，2H)，2.09-2.35(m，5H)，2.47(“d”，J＝15.3Hz，1H)，3.15(s，br，2H)，3.87(“d”，J＝14.2Hz，1H)，4.04(“d”，J＝9.5Hz，1H)，4.17(s，br，1H)，4.37-4.55(m，4H)，4.66(s，br，1H)，4.74(q，J＝5.2Hz，1H)，4.83(“t”，J＝9.3Hz，1H)，4.91(s，br，1H)，5.20(s，1H)，5.36-5.42(m，2H)，5.62(d，J＝12.1Hz，1H)，5.70(d，J＝12.5Hz，1H)，5.99-6.06(m，2H)，6.73(s，br，2H)，7.24(“t”，J＝7.6Hz，1H)，7.28(d，J＝6.8Hz，1H)，7.34(“t”，J＝7.6Hz，2H)，7.40(m，1H)，7.46(“t”，J＝7.2Hz，2H)，7.57(m，2H)，7.62(s，br，1H)，7.68(s，br，1H)，7.82(s，br，1H)，7.97(“d”，J＝6.5Hz，2H)，8.19(s，br，1H)，8.24-8.29(m，2H)，8.35(s，1H)，8.52(s，1H)，8.57(m，1H)，8.63(m，1H)，8.85(s，br，1H)，9.05(s，1H)，9.75(s，1H)，11.30(s，br，1H)。对于8质子，不能对信号赋值。
LC-MS(方法7)：Rt＝2.1min；MS(ESIpos.)：m/z(％)＝719.8(100)[M+2H]2+，1437.9(30)[M+H]+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝663.7(100)，1435.9(100)[M-H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C68H109N16O18[M+H]+实验值1437.8135，计算值1437.8101.
实施例103A
D-亮氨酰-N1-{(3S，6S，12S，15S，18R，21S，24S，27S，28R)-6-[(1S)-2-氨基-1-羟基-2-氧代乙基]-18-(3-{[氨基(亚氨基)甲基]氨基}丙基)-12-[(1S)-1-羟基乙基]-3-(羟基甲基)-24-[(1R)-1-羟基-2-甲基丙基]-21-异丁基-15-异丙基-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧代-28-苯基-1-氧杂-4，7，10，13，16，19，22，25-八氮杂环二十八碳烷-27-基}-L-亮氨酰胺双三氟乙酸盐
关于片野菌素A的合成，参见WO 04/099239实施例2A。
例举性实施方案
实施例1
[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-[3-叔-丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺双三氟乙酸盐
根据工作步骤1，使得N-(叔-丁氧羰基)环肽(实施例27A，10mg，10μmol)反应。在通过制备HPLC(方法10)色谱纯化后，通过冷冻干燥获得6.5mg的产物(64％理论值)。
在备选方法中，根据工作步骤3，由Cbz-保护的环肽(实施例102A)制备标题化合物。
HPLC/UV-Vis(方法3)：Rt＝1.9min，
λmax(定性)＝210nm(s)，265(m)。
LC-MS(方法5)：Rt＝4.51min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝652.8(100)[M+2H]2+，1304.9(10)[M+H]+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝650.7(10)，1301.9(10)[M-H]-，1347.9[M-H+HCO2H]-.
1H NMR(500MHz，d5-吡啶)δ＝0.82(3H)，0.95(3H)，0.99(3H)，1.05(9H)，1.07(3H)，1.11(9H)，1.12(3H)，1.18(3H)，1.32，1.46，1.61(3H)，1.93，1.97，2.02，2.03，2.13(2H)，2.19(2H)，2.27，2.32，2.35，2.35，2.35，3.18(2H)，3.94，4.02，4.15，4.31，4.36，4.37，4.47，4.50，4.58，4.59，4.75，4.99，5.17，5.33，5.38，6.00，6.00，6.40，7.21(2H)，7.45(2H)，7.64，7.72，7.73，7.92，8.02，8.17，8.23，8.30，8.50，8.55，8.85，9.09，11.29.对于：tBuAla1 NH2，tBuAla2 NH，HyLeu4NH，HyLeu4 OH，Arg6 NζH，Arg6 NζH2，allo Thr8 OH，HyAsn10 OH，Ser11 OH，没有发现明确的1H信号。
13C NMR(126MHz，d5-吡啶)δ＝10.40，16.00，19.20，19.20，20.70，21.30，23.90，24.70，26.20，26.50，28.60，29.40(3C)，29.80(3C)，30.90，36.00，41.10，41.30，44.00，44.23，44.60，47.00，47.20，51.50，52.80，54.30，55.50，55.60，56.60，57.70，58.40，60.30，60.60，62.60，63.00，70.20，71.90，75.20，128.20(2C)，128.30，129.10(2C)，137.70，158.23，169.38，171.04，172.23，172.43(2C)，173.12，174.04，174.29，174.66，174.84，175.41，176.64.
HR-TOF-MS(方法1)：C60H103N16O16[M+H]+实验值1303.7719，计算值1303.7733.
通过单晶X-射线结构分析，证实结构。
实施例2
D-亮氨酰-L-亮氨酰-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺双三氟乙酸盐
在氩气保护气氛下，将Cbz-保护的环肽(实施例28A，800μg，0.5μmol)溶解在甲醇(1ml)中，然后加入1N盐酸水溶液(50μl)和10％披钯碳(1mg)。将混合物在RT和在大气压下氢化直至(约1h)分析HPLC(方法2)显示完全转化。将反应混合物过滤(注射器滤器Biotage，PTFE)，真空浓缩并在高真空下干燥。将粗产物通过制备HPLC(方法10)纯化。获得600μg(76％理论值)的固体产物。
[α]20 Na＝-66.0°(c＝0.24在甲醇)。
HPLC/UV-Vis(方法3)：Rt＝1.7min，
λmax(定性)＝210nm(s)，265(m)。
LC-MS(方法5)：Rt＝4.3min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝638.7(100)[M+2H]2+.
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1274(100)[M-H]-.
1H NMR(500MHz，d5-吡啶)δ＝0.72(3H)，0.77(3H)，0.89(3H)，0.96(3H)，0.99(3H)，1.02(3H)，1.02(3H)，1.08(3H)，1.09(3H)，1.22(3H)，1.29，1.44，1.58(3H)，1.75，1.99，2.00，2.09(2H)，2.10，2.14(2H)，2.17，2.21(2H)，2.21，2.29，2.29，2.39，2.39，3.18，3.33，4.00，4.10，4.21，4.35，4.35，4.48，4.53，4.61，4.71，4.80，5.06，5.17，5.35，5.36，6.04，6.05，6.63，7.25(2H)，7.50(2H)，7.67，7.70，7.88，8.07，8.11，8.24，8.24，8.26，8.47，8.54，8.95，9.23，9.31，11.26.对于：Leu1NH2，Leu2 NH，HyLeu4 OH，Arg6 NζH，Arg6 NζH2，allo Thr8 OH，HyAsn10 OH，Ser11 OH没有发现明显的1H信号。
13C NMR(126MHz，d5-吡啶)δ＝16.27，19.17，19.90，20.49，20.87，21.11，21.70，22.63，23.40，24.19，24.81，25.23，25.23，26.06，26.61，21.70，28.97，31.04，36.52，40.00，41.3 1，41.94，42.40，45.43，52.60，53.26，53.72，56.09，56.62，57.94，58.53，58.75，60.83，60.83，62.61，63.47，70.50，72.11，75.39，128.09(2C)，128.19，128.99(2C)，138.52，158.12，169.39，170.44，172.25，172.46，173.13，173.58，174.16，174.32，174.59，174.59，174.69，176.64.
MALDI-MS：m/z(％)＝1275(100)[M+H]+，1297(5)[M+Na]+，1313(5)[M+K]+.
MALDI-MS/MS@1275：m/z(％)＝86(100)，199(50)，1049(20)。
HR-TOF-MS(方法1)：C58H99N16O16[M+H]+实验值1275.7424，计算值1275.7420.
通过单晶X-射线结构分析，证实结构。
进行氨基酸分析(方法9)(表A)。
表A
1mg/ml溶解在20％甲醇中
| AA- | 因式分解的氨基酸nmol/20 | 溶杆菌素的理论数 | 没有TR的百分数 |
| Hy- | 1 | ||
| AS | |||
| allo- | 0.8 | 1 | 10.62 |
| SE | 1.0 | 1 | 12.46 |
| GL | |||
| GLY | 1.2 | 1 | 15.76 |
| AL | |||
| VA | |||
| ME | |||
| ILE*参比 | 1.0 | 1 | 12.40 |
| LEU | 2.9 | 3 | 36.50 |
| TY | |||
| β-Amino- | 1 | ||
| HI | |||
| Hy- | 1 | ||
| LY | |||
| AR | 0.9 | 1 | 12.26 |
| PR | |||
| TR | |||
| 总共 | 1 | ||
| Hy- | n.d.无标准 | ||
| βNH2Ph | 在AA中不能染色 | ||
| Hy- | n.d.无标准 |
Hy-Asn，Hy-Leu不能定量，因为没有标准。
Hy-Asn很可能作为Hy-Asp存在。
实施例3
[3-(三甲代甲硅烷基)-D-丙氨酰]-[3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺三(三氟乙酸盐)
根据工作步骤3使得Cbz-保护的环肽(实施例91A，19.9mg，12μmol)反应。在通过制备HPLC(方法21)色谱纯化后，通过冷冻干燥获得14.7mg(99％理论值)的产物。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝1.4min，λmax(定性)＝210nm(s)，265(m)。
LC-MS(方法5)：Rt＝1.50min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝671.0(100)[M+2H]2+，1340.4(10)[M+H]+；
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝668.8(100)，1338.4(10)[M-H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C60H97N17O16Si[M+H]+实验值1340.7117，计算值1340.7142.
通过单晶X-射线结构分析，证实结构。
实施例4
[3-(叔-丁基)-D-丙氨酰]-[3-(吡啶-3-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺三(三氟乙酸盐)
根据工作步骤3使得Cbz-保护的环肽(实施例66A，15.0mg，8.89μmol)反应。在通过制备HPLC(方法38)色谱纯化后，通过冷冻干燥获得11.7mg(79％理论值)的产物。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝1.51min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.36min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝1326(10)[M+H]+，663(100)[M+2H]2+，
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1324(28)[M-H]-，662(100)[M-2H]2-.
HR-TOF-MS(方法1)：C61H98N17O16[M+H]+实验值1324.7352，计算值1324.7372.
实施例5
N2.1-[(2S)-2-氨基-3-(叔-丁基)丙基]-[3-(叔-丁基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.10-N3.2-内酰胺三(三氟乙酸盐)
类似于工作步骤3，使得Cbz-保护的环肽(实施例84A，169.0mg，0.11mmol)反应。在通过制备RP-HPLC(例如方法35)精纯化后，分离产物，产率为140.0mg(84％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法25)：Rt＝15.01min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.54min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝645(100)[M+2H]2+，
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1288(100)[M-H]-，643.8(16)[M-2H]2-.
HR-TOF-MS(方法1)：C60H105N16O15[M+H]+实验值1289.7950，计算值1289.7940.
实施例6
[3-(叔-丁基)-D-丙氨酰]-[3-(6-甲基吡啶-2-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺三(三氟乙酸盐)
类似于工作步骤1，使得叔-丁氧羰基-保护的环肽(实施例44A，142.0mg，85.20μmol)反应。在通过制备RP-HPLC(方法39)精纯化后，分离产物，产率为118.0mg(82％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法25)：Rt＝12.88min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.58min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝1339(5)[M+H]+，670(100)[M+2H]2+，
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1337(100)[M-H]-，668(6)[M-2H]2-.
HR-TOF-MS(方法1)：C62H101N17O16[M+H]+实验值1338.7507，计算值1338.7529.
实施例7
[3-(叔-丁基)-D-丙氨酰]-[3-(6-三氟甲基吡啶-3-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺双三氟乙酸盐
类似于工作步骤1，使得叔-丁氧羰基-保护的环肽(实施例55A，180.0mg，0.11mmol)反应。在通过制备RP-HPLC(方法39)精纯化后，分离产物，产率为182.0mg(97％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法2)：Rt＝1.71min.
LC-MS(方法29)：Rt＝1.30min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝1392(10)[M+H]+，697(100)[M+2H]2+，
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1391(20)[M-H]-，695(100)[M-2H]2-.
HR-TOF-MS(方法1)：C62H97N17O16F3[M+H]+实验值1392.7267，计算值1392.7260.
实施例8
N2.1-[(2R)-2-氨基-3-(三甲代甲硅烷基)丙基]-[3-(叔-丁基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.10-N3.2-内酰胺三(三氟乙酸盐)
类似于工作步骤3，使得苄氧羰基-保护的环肽(实施例80A，32mg，19.19μmol)反应。在通过制备RP-HPLC(方法39)精纯化后，分离产物，产率为21.3mg(67％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法25)：Rt＝15.60min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.74min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝653(100)[M+2H]2+，
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1304(100)[M-H]-，651(95)[M-2H]2-.
HR-TOF-MS(方法1)：C59H105N16O15Si[M+H]+实验值1305.7667，计算值1305.7710.
实施例9
D-亮氨酰-[3-叔-丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺双三氟乙酸盐
类似于工作步骤3，使得苄氧羰基-保护的环肽(实施例70A，32.0mg，21.28μmol)反应。在通过制备RP-HPLC(方法35)精纯化后，分离产物，产率为22.7mg(70％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法25)：Rt＝14.00min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.63min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝1289(4)[M+H]+，645(100)[M+2H]2+，
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1287(100)[M-H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C59H101N16O16[M+H]+实验值1289.7583，计算值1289.7576.
实施例10
[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-[3-(吡啶-2-基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺三(三氟乙酸盐)
类似于工作步骤1，使得叔-丁氧羰基-保护的环肽(实施例45A，105.0mg，63.53μmol)反应。在通过制备RP-HPLC(方法35)精纯化后，分离产物，产率为84.4mg(80％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法25)：Rt＝14.16min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.30min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝1325(15)[M+H]+，663(100)[M+2H]2+，
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1323(100)[M-H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C61H98N17O16[M+H]+实验值1324.7351，计算值1324.7372.
实施例11
[3-叔-丁基-D-丙氨酰]-L-亮氨酰-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺三(三氟乙酸盐)
类似于工作步骤1，使得叔-丁氧羰基-保护的环肽(实施例50A，131.0mg，85.19μmol)反应。在通过制备RP-HPLC(方法35)精纯化后，分离产物，产率为49.5mg(38％理论值)。
HPLC/UV-Vis(方法25)：Rt＝14.56min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.58min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝1290(5)[M+H]+，645(100)[M+2H]2+，
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1288(100)[M-H]-，643(100)[M-2H]2-.
HR-TOF-MS(方法1)：C59H101N16O16[M+H]+实验值1289.7567，计算值1289.7576.
实施例12
[3-环-戊基-D-丙氨酰]-[3-环-戊基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰)]-[(3R)-3-羟基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-异亮氨酰-L-别苏氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羟基-L-天冬酰胺酰]-L-丝氨酸C1.11-N3.3-内酰胺双三氟乙酸盐
类似于工作步骤1，使得叔-丁氧羰基-保护的环肽(实施例63A，25.0mg，15μmol)反应。在通过制备RP-HPLC(方法35)精纯化后，分离产物，产率为24.5mg(quant.)。
HPLC/UV-Vis(方法25)：Rt＝17.2min.
LC-MS(方法7)：Rt＝1.66min；
MS(ESIpos.)：m/z(％)＝664.8(100)[M+2H]2+，1328(10)[M+H]+，
MS(ESIneg.)：m/z(％)＝1326(100)[M-H]-.
HR-TOF-MS(方法1)：C62H103N16O16[M+H]+实验值1327.7761，计算值1327.7733.
B.生理活性的评价
可以在下列测定中显示本发明化合物的体外活性：
最低抑制浓度(MIC)的测定：
根据NCCLS准则在液体稀释试验中测定MIC。将金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)133、屎肠球菌(Entercococcus.faecalis)27159、粪肠球菌(E.faecium)4147和肺炎链球菌(S.pneumoniae)G9a的过夜培养物在1∶2的稀释系列中与所述的测试物质温育。用Isosensitest培养基(Difco，Irvine/USA)中每ml细胞数为105微生物进行MIC测定，除肺炎链球菌在含有10％牛血清的BHI肉汤(Difco，Irvine/USA)中以每ml细胞数为106微生物以外。将所述培养在37℃温育18-24小时，肺炎链球菌在10％CO2的存在下。
将不再有可见的细菌生长发生的每种情况中的最低物质浓度定义为MIC。MIC的值以μg/ml报道。
在表B中显示了本发明化合物的典型体外活性数据：
表B
| 实施例no. | MICS.aureus133[μg/ml] | MICS.pneumoniaeG9a[μg/ml] | MICE.faeciumL4001[μg/ml] | MICE.faecalisICB 27159[μg/ml] |
| 1 | 0.5 | 0.063 | 0.25 | 0.25 |
| 3 | 0.125 | 0.25 | -- | 2 |
| 6 | 0.25 | 0.25 | -- | 0.5 |
| 7 | 0.125 | 0.125 | -- | 0.25 |
| 9 | 0.25 | 0.125 | -- | 0.5 |
| 1A | 0.5 | 0.063 | 0.5 | 0.5 |
可以在下列动物模型中显示本发明化合物对于细菌感染治疗的适合性：
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)133的全身感染：
将金黄色葡萄球菌(S.aureus)133的细胞在BHI肉汤(Oxoid，New York/USA)中过夜培养。将过夜的培养物在新鲜BHI肉汤中1∶100稀释并温育3小时。将当时在对数生长期中的细胞离心出并用缓冲的生理盐水洗涤两次。然后将盐水中的细胞悬浮液光度测定地调节到50个消光单位。在稀释步骤(1∶15)后，将所述悬浮液与10％粘蛋白溶液1∶1混合。腹膜内给药0.25ml/20g小鼠的该感染溶液(相当于1×106微生物/小鼠)。在感染后30分钟在腹膜内或静脉内进行治疗。将雌性CFW1小鼠用于感染实验。在6天的时期内记录所述动物的存活率。
本发明化合物的肾耐受性的性质可以在下列动物模型中显示：
用于测定肾毒性作用的小鼠模型：
通过组织学观察在多次给药具体剂量后的小鼠的肾来分析九酯肽的肾毒性副作用。为此，用溶解在水溶液或加入Solutol的物质每日静脉内(i.v.)或腹膜内(i.p.)处理5-6只动物。通过光学显微镜评估肾脏的苏木精和曙红(H&E)染色石蜡切片来确定肾毒性作用。任选地进行′高碘酸Schiff(PAS)反应来更好地显示糖蛋白。作为管型嗜碱粒细胞增多和变性/再生发生的严重程度(严重程度：0＝无作用；1＝最小作用；2＝轻微作用；3＝中度作用；4＝严重损伤)，对于每只动物半定量地确定肾毒性作用。每个动物组或衍生系计算管型变性/再生的平均严重程度和发生率(涉及的动物的数目)。超出这的肾脏变化，如管膨胀和坏死以及坏死物质的累积也被列出。
C.药物组合物的例举性实施方案
本发明的化合物可以以下列方式转化成药物制剂：
片剂：
组成：
100mg实施例1的化合物，50mg乳糖(一水合物)，50mg玉米淀粉(天然的)，10mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP 25)(BASF，Ludwigshafen，德国)和2mg硬脂酸镁。
片剂重量212mg。直径8mm，曲率半径12mm。
制备：
将活性化合物、乳糖和淀粉的混合物用水中的5％PVP溶液(m/m)造粒。将所述粒剂干燥然后与硬脂酸镁混合5分钟。将该混合物用常规压片机挤压(参见上面用于片剂的形式)。用于压缩的压缩力指标是15kN。
可以口服给药的混悬剂：
组成：
1000mg实施例1的化合物，1000mg乙醇(96％)，400mg的Rhodigel(来自FMC的黄原胶，宾夕法尼亚，USA)和99g水。
10ml的口服混悬剂对应于100mg本发明化合物的单一剂量。
制备：
将Rhodigel悬浮在乙醇中，并将所述活性化合物加入到所述悬浮液。搅拌的同时加入水。将所述混合物搅拌约6h直到Rhodigel的溶胀是完全的。
可以静脉内给药的溶液剂：
组成：
100-200mg实施例1的化合物，15g聚乙二醇400和250g注射用水。
制备：
在搅拌下将实施例1的化合物和聚乙二醇400一起溶解在水中。通过过滤(孔径0.22μm)将所述溶液消毒并在无菌条件之下分配到热灭菌的输液瓶中。将后者用输注塞和卷曲帽封闭。
Claims (12)
1.式(Ib)的化合物，
其中
R6表示氢或甲基，
R7表示下式的基团：
其中
*是与所述胺的键合位点，
R1表示C1-C6-烷基、C2-C6-链烯基、C3-C6-环烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、链烯基、环烷基和芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苄氧基，C3-C6-环烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元杂环基，5-至10-元杂芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和苄氧羰基氨基，
其中对于它们的部分的环烷基、芳基、杂环基和杂芳基可以被0、1、2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元杂环基，
R2表示C1-C6-烷基、C2-C6-链烯基、C3-C6-环烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、链烯基、环烷基和芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苄氧基，C3-C6-环烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元杂环基，5-至10-元杂芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和苄氧羰基氨基，
其中对于它们的部分的环烷基、芳基、杂环基和杂芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元杂环基，
R4表示C1-C6-烷基、C2-C6-链烯基、C3-C6-环烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、链烯基、环烷基和芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苄氧基，C3-C6-环烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元杂环基，5-至1 0-元杂芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基-氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和苄氧羰基氨基，
其中对于它们的部分的环烷基、芳基、杂环基和杂芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元杂环基，
R5表示C1-C6-烷基、C2-C6-链烯基、C3-C6-环烷基或C6-C10-芳基，其中烷基、链烯基、环烷基和芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，三甲代甲硅烷基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苄氧基，C3-C6-环烷基，C6-C10-芳基，5-至7-元杂环基，5-至10-元杂芳基，C1-C6-烷基氨基，C6-C10-芳基氨基，C1-C6-烷基羰基氨基，C6-C10-芳基羰基-氨基，C1-C6-烷基羰基，C1-C6-烷氧基羰基，C6-C10-芳基羰基和苄氧羰基氨基，
其中对于它们的部分的环烷基、芳基、杂环基和杂芳基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：卤素，羟基，氨基，氰基，硝基，三氟甲基，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，苯基和5-至7-元杂环基，
或它的盐、它的溶剂合物或它的盐的溶剂合物中的一种。
2.根据权利要求1的化合物，其特征在于
R6表示甲基，
R7表示下式的基团：
其中
*是与所述胺的键合位点，
R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羟基-2-甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基丁-1-基，1-羟基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羟基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羟基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，
R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羟基-2-甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基丁-1-基，1-羟基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羟基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羟基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，
R4表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羟基-2-甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基-丁-1-基，1-羟基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羟基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羟基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，
R5表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲代甲硅烷基甲基，1-羟基-2-甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基丙-1-基，1-羟基-2，2-二甲基丁-1-基，1-羟基-2-乙基-2-甲基丁-1-基，1-羟基-2，2-二乙基丁-1-基，苯基甲基，1-羟基-1-苯基甲基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基可以被0，1，2或3个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，或它的盐、它的溶剂合物或它的盐的溶剂合物中的一种。
3.根据权利要求1或2的化合物，其特征在于：
R6表示甲基，
R7表示下式的基团：
其中
*是与所述胺的键合位点，
R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，
R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，
R4表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，
R5表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，三甲代甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
其中3-吡啶基甲基可以被0、1或2个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组：羟基，氨基，三氟甲基，甲基，甲氧基和吗啉基，或它的盐、它的溶剂合物或它的盐的溶剂合物中的一种。
4.制备根据权利要求1的式(Ib)化合物的方法，其特征在于：[A]式(II)的化合物，
其中
R6具有在权利要求1中指出的含义，
首先与下式的化合物反应，
其中
R1，R2，R4和R5具有在权利要求1中指出的含义，
R3表示叔-丁氧羰基或苄氧羰基，并且
X1表示卤素，优选溴，氯或氟，或羟基，并然后与酸和/或通过氢解反应，或
[B]式(IV)的化合物，
其中
R6具有在权利要求1中指出的含义，
首先与下式的化合物反应，
其中
R1，R2，R4和R5具有在权利要求1中指出的含义，
并且然后，在4-步合成中，
a)与氟化物试剂反应，
b)与酸反应，
c)当适合时在碱的存在下与脱水剂反应，和
d)通过氢解反应。
5.用于治疗和/或预防疾病的根据权利要求1至3任一项的化合物。
6.根据权利要求1至3任一项的化合物在制备用于治疗和/或预防疾病的药物中的应用。
7.根据权利要求1至3任一项的化合物在制备用于治疗和/或预防细菌感染的药物中的应用。
8.药物，其含有与惰性的、非毒性的药用赋形剂组合的根据权利要求1至3任一项的化合物。
9.根据权利要求8的药物，其用于治疗和/或预防细菌感染。
10.用于在人和动物中控制细菌感染的方法，其中施用抗菌有效量的根
据权利要求1至3任一项的至少一种化合物、根据权利要求8的药
物或根据权利要求6或7获得的药物。
11.用于制备下式化合物的方法，2-(三甲代甲硅烷基)乙基-(3R)-3-氨基-N2-[(苄氧基)羰基]-L-苯丙氨酸酯三氟乙酸盐(实施例19A)
其特征在于：在6-步合成中，下式的化合物：(rac)-3-[(叔-丁氧羰基)氨
基]-3-苯基丙酸甲酯
a)在碱的存在下，与氮杂二羧酸二苄酯反应，
b)N，N，N，N，-四甲基胍反应，
c)在阮内镍的存在下与氢反应，
d)在碱的存在下与N-苄氧基羰氧基琥珀酰亚胺酯反应，
e)与碱反应和随后色谱法对映体分离，和
f)与在二氯甲烷中的三氟乙酸或二噁烷中的氯化氢反应。
12.下式的化合物：
(3R)-N2-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸(实施例17A和实施例35A)
或
(3R)-N-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯(实施例18A)
或
(3R)-3-氨基-(N2-[(苄氧基)羰基]-L-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯三氟乙酸盐(实施例19A)
或
(2S，3R)-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(实施例33A)
或
(2S，3R)-N-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(实施例34A)
或
(3S)-N2-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-D-苯丙氨酸(实施例36A)
或
(3S)-N-[(苄氧基)羰基]-3-[(叔-丁氧羰基)氨基]-D-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯(实施例37A)
或
(3S)-3-氨基-N2-[(苄氧基)羰基]-D-苯丙氨酸2-(三甲代甲硅烷基)乙酯三氟乙酸盐(实施例38A)
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