JPH01132600A - カタノシンａおよびｂならびにその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １見上座上月至且 本発明は、ペプチド系抗生物質力タノシンＡおよびカタ
ノシンＢとその製造法に関する。

藍氷立及春 本発明のペプチド系抗生物質力タノシンＡおよびカタノ
シンＢに類似したペプチド系抗生物質としては、例えば
、リソバクターが産生ずるＥＭＳ５８７（特開昭６１−
２２７７８８）やシュードモナスが産生するＢＮ−１６
５（特開昭５２−７２８９２）などが知られている。一
般に使用されるペプチド系抗生物質としては、バイオマ
イシン、パンツマイシン、グラミシジン、ポリミキシン
などが挙げられる。

明が解決しようとする間　。

ペプチド系抗生物質としては、上記のものが知られてい
るが、排泄、耐性菌の問題などで、その使用は限定され
ている。よって、全く新規なペプチド系抗生物質を提供
することは、医薬の充実に大いに貢献するものと考えら
れる。

−点を　決するための手段 本発明者らは、新規な抗生物質を得る為のスクリーニン
グ試験において、サイトファーガ（Ｃｙｔ。

ｐｈａｇａ　）属に近い菌株ＰＢＪ−５３５６が抗生物
質を生産する事を見出した。この抗生物質は、細胞壁合
成阻害作用を有する。この作用は、ジアミノピメリン酸
放射性同位体がバチルス（１３ａｃｉｌｌｕｓ）属の一
菌株の細胞壁ペプチド配糖体へ組み込まれるのを阻止す
る事によることによって判明した。この抗生物質は、成
分Ａと成分Ｂの複合体として単離されたのち、ＨＰＬＣ
により分離された。これらはペプチド系抗生物質であり
、それらの構造は第１図に示されている。

２つのペプチド系抗生物質、カタノシンＡ及びＢはＣｙ
ｔｏｐｈａｇａ属に近い菌株の液体培養液から単離した
。これらの抗生物質は塩基性のペプチドで、水含有アル
コールに可溶である。分子式はカタノシンＡがＣ１ｙＨ
＊ｓＮ＋ｉ０＋ｙ、カタノシンＢがＣａ５）Ｉ＊ｔＮｌ
ｓＣｈｙであることが判った。構成アミノ酸については
、カタノシンＡがＴｈｒ（１）、　５ｅｔ（１）。

Ｖａｌ（１）、　Ｌｅｕ（３）、　Ａｒｇ（１）、及び
３個の非通常アミノ酸から成ることが示きれた。一方、
カタノシンＢでは、カタノシンＡのＶａｌ基がＩＩｓで
置き換えられた構成となっている。カタノシンＡ及びＢ
はダラム陽性菌に対して、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ及びｉｎ　
ｖｉｖｏいずれに於ても有効である。

本発明の抗生物質産生菌ＰＢＪ−５３５６は、大阪府交
野市で採取した土壌より単離きれた。この菌は好気性ダ
ラム陰性菌であり、芽胞非形成タイプで、両端がややと
がった感じの桿菌（０，３〜０．４μ×１．２〜１．７
μ）である、又、鞭毛を持たず、滑り運動能による拡が
り成育（ｓｐｒｅａｄｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ）が認めら
れる。栄養寒天培地上では、黄色がかったクリーム色で
あり、円形金縁の、わずかに凸状の湿潤平滑なコロニー
を形成する。可溶色素や子実体は形成されない。

この菌は２８℃で良好な成長を示す、他の生理学的特徴
を表１に示す、Ｄ、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース
、Ｄ−フラクトース、ガラクトース、Ｄ−グルコース、
Ｄ−マンノース、Ｌ−ラムノース、叶セロビオース、ラ
クトース、マルトース、シュークロース、Ｄ−トレハロ
ース、Ｄ−マニトール等の炭水化４１１７の分解では酸
は生成しなかった。又、同上の炭水化物からはガスの生
成は認められなかった。

（以下余白） Ｂｅｒｇｅｙの’Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔａｒｍｉ
ｎａｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ。

ｇｙ第８版」を参照しつつ、上述の特徴点から判断する
と、この菌はＣ）ｒｔｏｐｈａｇａｌａｓ目に属するこ
とが判る。属としては、Ｃｙｔｏｐｈａｇａｊｌに最も
近いが、上述マニュアルに記された属のいづれの種もこ
の菌と同一ではなかった。

よって、本菌株はＣｙｔｏｐｈａｇａ　ｓｐ、　ＰＢＪ
−５３５６と命名きれ、昭和６２年１０月２９日から茨
城県筑波郡谷田部町東１丁目１番３号の微生物工業技術
研究所に微工研菌寄第９６７９号（ＦＥＲＭ　Ｐ−９６
７９）として寄託されている。

カタノシンＡ及びＢは共に塩基性物質であり、各々の塩
酸塩が無色の結晶として得られる。カタノシンＡ及びＢ
はＨＰＬＣでは明確に区別できる。典型的クロマトグラ
ムを第２図に示す。

カタノシンＡ及びＢの各々の塩酸塩は、水含有メタノー
ル、水含有エタノール、水含有ブタノール、及びジメチ
ルスルホキサイドに易溶であり、純粋なメタノール、エ
タノール、及び水に微溶である。アセトン、酢酸エチル
、クロロホルム、及びｐＨ７，０の水には難溶もしくは
不溶である。ニンヒドリン反応、坂口反応には陽性を示
す、他のいくつかの物理化学的性質については、表２に
示した。赤外線吸収スペクトル（第３図）には、ペプチ
ド結合（１６５０，１５３０ｃｎ＋−’）、ラクトン結
合（１７４５ｃ＋ｎ−’）の各々の特性吸収帯が観測さ
れる。カタノシンＡの酸性加水分解生成物についてのア
ミノ酸分析結果は、アミノ酸基としてＴｈｒ（１）、　
５ｅｒ（１）。

Ｇｌｙ（１）、　Ｖａｌ（１）、　Ｌａｕ（３）、　Ａ
ｒｇ（１）及び３つの非通常アミノ酸の存在を示してい
る。非通常アミノ酸の内の２つは明確なピークとして観
測される（Ｕ−１とＵ−２）が、他の１つ（Ｕ−３）は
低いピークにとどまっている（第４図）、カタノシンＡ
とＢの唯一の違いはカタノシンＢにはカタノシンＡのＶ
ａｌの代わりにＩＩｅ基が存在することである。

上記の分析においては紫外線吸収スペクトルは、日立３
２３分光光度計で赤外線吸収スペクトルは、ＪＡＳＣＯ
ＤＳ−４０３Ｇ分光計で、［α］、は、ｐｅｒｋｉｎ−
Ｅ１ｍｅｒ２４１旋光計で、ＳＩ−ＭＳは、日立トロ８
質量分析計で、各々測定した。アミノ酸分析は、日立ア
ミノ酸自動分析装置８３５で実施した。

（以下余白） カタノシンＡおよびカタノシンＢは塩基性ペプチド抗生
物質であり、その分子式は、Ａ’　Ｃ５ｙＨｓａＮ目Ｏ
１ｔ、　Ｂ’　Ｃ５ａＨ−Ｊ＋ｓＯ＋ｔである。酸加水
分解生成物のアミノ酸分析によると、カタノシンＡの構
成成分はＡｓｐ（１）、　Ｔｈｒ（１）、　５ａｒ（１
）、　Ｇｌｙ（１）。

Ｖａｌ（１）、　Ｌｅｕ（３）、Ａｒｇ（１）及び３つ
の非通常アミノ酸（上記［１−１，Ｕ−２，Ｕ−３）か
ら成り、カタノシンＡとカタノシンＢの違いは、カタノ
シンＢではカタノシンＡのバリンがイソロイシンで置き
換っていることが判明した。

カタノシンＡ及びカタノシンＢについて、１Ｈおよび”
ＣＮＭＲ分析より、水素原子シグナルの帰属は’）Ｉ−
’ＨＣ０５Ｙスペクトルとスピンデカップリング実験に
より、又炭素原子シグナルの帰属は’Ｈ−”ＣＣ０５Ｙ
スペクトルと選択的デカップリング実験により、各々決
定した結果（表３）、上述の８個の通常アミノ酸の存在
が明らかになり、さらには、β−ヒドロキシアスパラギ
ン酸、β−ヒドロキシロイシン、β−フェニルセリンの
存在も示唆された。この３つのアミノ酸は、前記の３つ
の非通常アミノ酸（Ｕ−１，Ｕ−２，０−３＞に対応す
るものと考えられた。

（以下余白） これらの非通常アミノ酸は、カタノシンＡと力タノシン
Ｂの複合物の加水分解生成物をベーパークロマトグラフ
ィーにかける事により単離した。

単離したアミノ酸を’ＨＮＭＲ分析し、Ｌ−スレオ−β
−ヒドロキシアスパラギン酸、Ｌ−エリスローβ−ヒド
ロキシアスパラギン酸、Ｄ、Ｌ−スレオ−β−ヒドロキ
シロイシン、Ｄ、Ｌ−エリスローβ−ヒドロキシロイシ
ン、Ｄ、Ｌ−スレオ−β−フェニルセリン、Ｄ、Ｌ−エ
リスローβ−フェニルセリン、の各標準品と比較した。

又、ＣＤスペクトル分析も行なった。結論として、Ｕ−
１はＬ−スレオ−β−ヒドロキシアスパラギン酸（取Ａ
ｓｐ）、Ｕ−２はＬ−スレオ−β−ヒドロキシロイシン
（取Ｌｅｕ）、Ｕ−３はＬ−スレオ−β−フェニルセリ
ン（ＰｈＳｅｒ）であると決定した。

通常アミノ酸の立体配置は次の方法により検討した。抗
生物質の酸性加水分解により生成したアミノ酸混合物を
Ｌ−ロイシン化してジペプチド混合物を調製し、ＨＰＬ
Ｃ分析により各々の標準品と比較した。その結果、Ｄ−
アロースレオニン（ａＴｈｒ）、Ｌ−セリン、Ｌ−バリ
ン、Ｌ−イソロイシン、Ｄ−アルギニンが確認された。

３個のロイシン基は、１つがト体、２つがし一体である
ことが判った。

カタノシンＡ及びカタノシンＢは、ＩＲ吸収で１７４５
ｃｍ−’に吸収があり、ラクトン環結合の存在を示して
いる。カタノシンＡ及びカタノシンＢを希アルカリ液で
処理すると生物的不活性物質に変化する（アルカリ処理
力タノシンＡ及びＢ）。これらのものには上述のＩＲ吸
収帯が見られない（第５図）。

カタノシンＡとアルカリ処理カタノシンＡを水素化硼素
リチウムで還元した後、加水分解し、アミノ酸の分析を
行なった。その結果、カタノシンＡ中のセリンの含有量
が著しく減少したのに対して、アルカリ処理力タノシン
Ａでは含有量は変化しなかった。この事は、セリンのカ
ルボキシル基がカタノシンＡのラクトン環結合に関与し
ていることを意味している。

カタノシンＡとアルカリ処理カタノシンＡをクロム酸で
酸化し、この酸化生成物を加水分解し、アミノ酸分析を
行なうと、カタノシンＡではＨｙＡｓｐ、　ａＴｈｒ、
　Ｓｅｒ、　ＨｙＬｅｕが減少した。一方アルカリ処理
力タノシンＡでは、上のヒドロキシアミノ酸の他に、Ｐ
ｈ５ｅｒ　４３減少した。この事は、Ｐｈ５ｅｒ基の水
酸基がラクトン環結合に関与している事を示している。

カタノシンＡの’ＨＮＭＲでは、Ｐｈ５ｅｒ基の水酸基
に帰属きれる水素原子のシグナルは認められなかった。

又、Ｐｈ５ｅｒのβ−ＣＨは非常に低磁場のδ値（＆＝
６．８４）を示した。

アルカリ処理力タノシンＡをエドマン分解すると、順調
にＣ−末端迄分解が進み、以下に示すアミノ酸配列が明
らかとなった。

Ｌｅｕ’−Ｌｅｕ”−ＰｈＳｅｒ”−ＨｙＬｅｕ’−Ｌ
ａｕ’−Ａｒｇ’−Ｖａｌ　’−ａＴｈｒ”−Ｇｌｙ’
−ＨｙＡｓｐ”−５ｅｒ口既に述べた通り力タノシンＡ
の３つのロイシン基の内１つはＤ−型で他の２つはＬ−
型である。エドマン分解の第１段階での残存ペプチドを
加水分解し、加水分解生成物中のロイシンの立体構造を
上述の方法で調べたところ、Ｌ−型のみが検出された。

故に、Ｌｅｕ’はＤ−型、Ｌｅｕ　”とＬｅｕ　’はＬ
−型であることが明らかになった。

元素分析並びにＳＩ−ＭＳ分析により示されるカタノシ
ンＡとカタノシンＢの分子式、及びこれらの抗生物質が
塩基性のみを示す事、の双方から考えると、加水分解生
成物中に見られるＨｙＡｓｐはもとの抗生物質ではβ−
ヒドロキシアスパラギン残基（ＨｙＡｓｎ）として存在
していることは明らかである。

以上より、カタノシンＡとカタノシンＢの構造が第１図
のように決定きれた。

１Ｈ及び”ＣＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ　ＸＬ
−４００分光器で測定した。ＣＤ曲線は、Ｊａｓｃｏ　
Ｊ−４０Ｃ自動記録式旋光計により測定した。アミノ酸
分析は、８舒アミノ酸自動分析計８３５により実施した
。

非道　アミノ酸　　の同定 カタノシンＡとカタノシンＢの複合物的１３０１ｆｆｉ
ｇを、定沸塩酸中１１０℃で５時間加水分解した。この
加水分解生成物を蒸発乾固し、東洋濾紙Ｎｏ、５１及び
ｎ−ブタノール−酢酸−水（４：１：２）を使用するペ
ーパークロマトグラフィーにかけた。アルギニン及びＵ
−１を含んでいるニンヒドリン陽性領域（Ｒｆ＝約０．
２）とＵ−２、Ｕ−３及びバリンを含んでいる領域（Ｒ
ｆ＝約０．５５）、を各々５０％メタノールで抽出した
。

Ｒｆ＝約０．２０の領域からの抽出物をＤｏｗｅｘ　５
０Ｘ　８（Ｈ’″）カラムに吸着させ、０．３Ｎ　ＮＨ
，ＯＨで溶離した所、Ｕ−ｔの方がアルギニンより速く
溶出した。Ｕ−１留分を蒸発乾固すると、無色の粉末（
９，６ｍｇ）が得られた。

Ｒｆ＝約０．５５の領域からの抽出物をＭＣＩゲルＣＨ
Ｐ−２０Ｐカラム（三菱化成工業部）にかけ、水で溶離
した所、Ｕ−２とバリンがＵ−３よりも速く溶出した。

Ｕ−２とバリンの混合物は、東洋濾紙ＮＯ，５１とし一
ブタノール−メチルエチルケトン−濃アンモニア−水（
４：３：Ｌ：２）を使ったベーパークロマトグラフィー
により分離した。　ｔＪ−２（７）領域（Ｒｆ＝約０．
８０）を５０Ｘ　メタノール、ｐｕｚ、　０で抽出し、
抽出物をＤｏｗｅｘ　５０（Ｈｏ）カラムに吸着させ、
０．３ＮのＮＨ，ＯＨで溶離し、溶出液を濃縮すると無
色の粉末（８，５ｎ＋ｇ）が得られた。Ｕ−３の留分を
蒸発乾固すると、無色の粉末（１，９ｍ＆）が得られた
。

これらＵ−１、Ｕ−２、Ｕ−３のサンプルを各々標準品
と比較した。Ｕ−１を’ＨＮＭＲスペクトル測定により
Ｌ−スレオ−β−ヒドロキシアスパラギン酸及びＬ−エ
リスローβ−ヒドロキシアスパラギン酸と比較した。こ
のＮＭＲ測定では上述のジアステレオ異性体を明確に区
別でき、ＩＪ−１はスレオ異性体と一致した。同様にＬ
ｌ−２は、Ｄ、Ｌ−スレオ−β−ヒドロキシロイシンと
一致し、Ｄ、Ｌ−エリスローβ−ヒドロキシロイレンと
は一致しなかった。Ｕ−３は、Ｄ、Ｌ−スレオ−β−フ
ェニルセリンに対応したが、Ｄ、Ｌ−エリスローβ−フ
ェニルセリンには対応しなかった。

次に、これらのアミノ酸のＣＤを測定すると、Ｌ型立体
配置を有していることが判った６以上の知見より、Ｕ−
１はＬ−スレオ−β−ヒドロキシアスパラギン酸、Ｕ−
２はＬ−スレオ−β−ヒドロキシロイシン、Ｕ−３はＬ
−スレオ−β−フェニルセリンであると同定した。

Ｕ−１（ＨｙＡｓｐ）、　　ＣＤ’［θコ、。。＋５３
２０．［θコ、。、＋６９７０゜［θコ、、８０（ｅ　
　Ｏ，０６５２，０，５Ｎ　　ＨＣＩ＞Ｕ−２（ＨｙＬ
ｅｕ）、　　ＣＤ：［θコｘｅｅ”４３７０．［θ］！
。ｌ”５０５０゜［θ］！４１０（ＣＯ，０５７９，０
，５Ｎ　ＨＣＩ）Ｕ−３（ＰｈＳａｒ）、　　ＣＤ：［
θコｔｏｉ＋２２００．［θコｘ　＋　ｓ”１７３００
゜［θコ、６゜＋１４０（ｃ　　０．０５０３．０．５
Ｎ　　ＨＣＩ）通常アミノ　残　の立体イ学 約１００ｍｇのカタノシンＡとカタノシンＢの？１物を
定沸塩酸中１１０℃で５時間加水分解した。加水分解生
成物を、東洋濾紙Ｎｏ、５１、ｎ−プロパノ−ルーピリ
シン−酢酸−水（１５：１０：３：１２）を使ってペー
パークロマトグラフィーにかけた。Ｒｆが約０．４７の
Ｓｅｒ、　Ｇｕｙ、　Ａｒｇを含む領域、Ｒｆが約０．
６０の主としてＴｈｒを含む領域、Ｒｆが約０，７０の
Ｖａｌ、　Ｉｌｅ、　Ｌａｕを含む領域を、各々切り出
し、５ｏｚメタノールで抽出した。

各抽出液を蒸発乾固し、常法でＬ−ロイシン化した。Ｌ
−ロイシン化したアミノ酸混合物を、Ｎｕｃｌｅ。

ａｉｌ　１０　Ｃ１８カラム（４，６Ｘ　１５０ｍｍ）
及びアセトニトリル−５０ｍＭリン酸塩バッファー、　
ｐＨ４，５（アセトニトリルの含有量は各化合物につき
適当な保持時間を得る為に変化させた）を使ったＨＰＬ
Ｃにより、以下のジペプチド標準品と比較した。即ち、
Ｌ−Ｌｅｕ−Ｌ−５ｅｒ、　Ｌ−Ｌｅｕ−Ｄ−５ｅｒ、
　Ｌ−Ｌｅｕ−Ｌ−Ａｒｇ、　Ｌ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ａｒｇ
。

Ｌ−Ｌｅｕ−Ｌ−Ｔｈｒ、　Ｌ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ、
　Ｌ−Ｌｅｕ−Ｌ−ａＴｈｒ、　Ｌ−Ｌｅｕ−Ｄ−ａＩ
ｈｒ、Ｌ−Ｌａｕ−Ｌ−Ｖａｌ、Ｌ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｖａ
ｌ、Ｌ（ｅｕ−Ｌ−１１ｅ、Ｌ−Ｌｅｕ−Ｄ−１１ｅ、
Ｌ”Ｌｅｕ−Ｌ−Ｌｅｕ、Ｌ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｌｅｕ、そ
の結果、ＳｅｔはＬ型、Ｔｈｒは叶ａ１１０型、Ｖａｌ
はＬ型、ＩｌｅはＬ型、ＡｒｇはＤ−型、３個のり、ｅ
ｕについては１個がＤ型、２個がＬ型、の各立体配置構
造を持つことが明らかとなった。

アルカリ処理力タノシンＡ 約２３ｍｇのカタノシンＡを少量のメタノールに溶解し
、Ｏ，ｌＮ　ＮａＯ）１（１０ｍｌ）で希釈した。室温
で１０分間放貧後、溶液をｎ−ＢｕＯＨ（１０ｍｌ＞で
抽出した。抽出液を水洗し、水を加えて蒸発乾固し、凍
結乾燥すると、無色の粉末（１７ｍｇ）が得られた。加
水分解後、アミノ酸分析することにより、カタノシンＡ
に含まれる全てのアミノ酸残基が確認された。化スペク
トルを第５図に示す。

水素化側、リチウムによる− 約２ｍｇのカタノシンＡをメタノール（２＋ｙ＋１）に
溶かし、水素化硼素リチウム（２ｍｇ　）を加えた。溶
液を室温で２０時間放置した。次に、溶液を希塩酸で希
釈し、ＮａＨＣＯ，で中和し、ｎ−ＢｕＯＨで抽出した
。抽出液を濃縮し、加水分解し、アミノ酸分析にかけた
。アルカリ処理力タノシンＡも同様の処理を行なった。

結果を表４に示す。

（以下余白） 又Ｂノ１１隻進 クロム酸＜１０１００１Ｉ１をピリジン（０，１ｍ１）
と酢酸（３ａ１）の混合液に溶かし、少量の沈殿物を濾
過し除去した。カタノシンＡの約１ｍｇをクロム酸溶液
（０，１ｍ１〉に溶解し、室温で２０時間放置した。メ
タノール（１，５ｍ１）を加えた後、蒸発乾固した。残
渣を加水分解し、アミノ酸分析を行なった。アルカリ処
理力タノシンＡも同様の処理を実施した。結果を表５に
示す。

（以下余白） アルカリ処理力タノシンＡのニドマン分解約２ｍｇのア
ルカリ処理力タノシンＡをエドマン分解した。本実験で
は、ＰＴＣ−アミノ酸と残存ペプチドの分離は、酢酸エ
チル層と水着に分配することにより実施した。ＰＩＨ−
アミノ酸の同定はＴＬＣ分析により実施した。結果を表
６に示す。

（以下余白） カタノシンＡ及びＢは、表７に示すごと＜、怪ｖｉｔｒ
ｏでグラム陽性菌に対して効力を有しており、また、皮
下投与で病原菌を感染させたハツカネズミに対して治療
効果を示す。表７に、ハツカネズミを腹腔経由で試験生
物で感染きせ、化合物を感染後１および５時間後に皮下
投与することにより求めたＥＤ、。値を示す、ハッカネ
ズミに対する腹腔経由による急性毒性は、カタノシンＡ
塩酸塩ではＬＤ　ｓ　、　＝１００＝２００ｍｇ／ｋｇ
、カタノシンＢ塩酸塩ではＬＤａ　ｅ＝２００〜３００
ｍｇ／ｋｇである。

（以下余白） 衷皇忽 菌株ＰＢ、Ｔ−５３５６の菌体を殺菌した生理食塩水に
懸濁させ、５００ｍ１坂ロフラスコ中で培地１又は２．
１００ｍ１液に接種する。培養は通常の振とう培養方式
により２７°Ｃで２日間行なった。尚、培地１の組成は
、酵母エキス０．３χ、グ、Ｌ　コー７．１．０％、　
ｐＨ７，０’ｔ’あり、培地２は、酵母エキス０．３Ｘ
、グルツース１．０％、　Ｌ−ｚ＜　ｌ）　ンｏ、ＩＸ
、　ｐＨ７，０’ｔ’あった。

この培地１による発酵液＜ｔｏｐ＞に、ｎ−ブタノール
〈３！〉とメタノール（３００ｍｌ）を加えて激しく振
とうした。遠心分離法により分離した溶媒層を活性炭（
２０ｇ）により脱色し、続いて濃縮して油状の残渣を得
た。この残渣を石油エーテルで洗い、少量のメタノール
に溶解した。この溶液をＩＮ塩酸で弱酸性として、放置
すると、無色の結晶（２８０ｍｇ）が得られた。この結
晶はカタノシンＡとＢの複合体塩酸塩であり、ＨＰＬＣ
分析によりカタノシンＡとＢの含有比率が約２：８であ
ることが判明した。

培地２による発酵液（１０１２＞についても上述と同様
に処理し、カタノシンＡとＢの複合物が塩酸塩の形で結
晶（２２０ｍｇ）として得られた。複合物中のカタノシ
ンＡとＢの含有比は約７：３であった。

培地１から得られたカタノシンＡとＢの複合物の約２０
０ｍｇをＨＰＬＣにかけた（カラム：　Ｎｕｃｌａｏｓ
ｉ１３０　Ｃ１８，２，０Ｘ２５、Ｏｃｍ、移動相：Ｏ
，ｔＸのトリフルオロ酢酸を含む３５％アセトニトリル
）、ＡとＢの画分を各々蒸発乾固した。残渣をメタノー
ルに溶かし、ＬＨ−２０カラム中をメタノールで通過せ
しめた。溶出液を濃縮すると、カタノシンＡ塩酸塩（１
５ｍｇ　＞、カタノシンＢ塩酸塩（１１０ｍｇ）、が各
々結晶で得られた。同様の処理を培地２からの複合物的
２００ｍｇについて実施したところ、カタノシンＡ塩酸
塩結晶（１１０ｍｇ）及びカタノシンＢ塩酸塩結晶（３
０ｍｇ）が得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図はカタノシンＡ及びＢの構造を示す。第２図はカ
タノシンＡ及びＢのＨＰＬＣの結果を示す。 実験条件は次の通り。カラム：　Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ　
５　Ｃ１ｍ（４，６Ｘ　１５０ｍｍ）、移動相：０．１
％　トリフルオロ酢酸を含む３５Ｘアセトニトリル、２
２０ｎｍでモニター、流速：　０．９ｍｌ／ｍｉｎ、チ
ャート速度：　１．０ｃｍ／ｍｉｎ、（１）培地１より
の複合物、（２）培地２よりの複合物。第３図はカタノ
シンＡ及びＢの各塩酸塩のＩＲスペクトル（ＫＢｒ）を
示す。第４図はカタノシンＡの加水分解生成物のアミノ
酸分析を示す、第５図はアルカリ処理したカタノシンＡ
のＩＲスペクトル（ＫＢｒ）を示す。 特許出願人：塩野義製薬株式会社 １、′ １・−−・ 第４図

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）第１図に示されるカタノシンＡ、カタノシンＢま
   たはその塩。
2. （２）サイトファーガ属に属するカタノシンＡおよび／
   またはカタノシンＢ産生菌を培養液に培養し、該培養液
   からカタノシンＡおよび／またはカタノシンＢを分離採
   取することを特徴とするカタノシンＡおよび／またはカ
   タノシンＢの製造法。