JPH08188595A - 化合物ｍｓ−２７１ - Google Patents
化合物ｍｓ−２７１Info
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- JPH08188595A JPH08188595A JP6013537A JP1353794A JPH08188595A JP H08188595 A JPH08188595 A JP H08188595A JP 6013537 A JP6013537 A JP 6013537A JP 1353794 A JP1353794 A JP 1353794A JP H08188595 A JPH08188595 A JP H08188595A
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- compound
- streptomyces
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 抗菌および抗エイズウイルス活性を有する新
規生理活性物質を提供する。 【構成】 式（Ｉ） （式中、ＡはAla 、ＣはCys 、ＤはAsp 、ＦはPhe 、Ｇ
はGly 、ＩはIle 、ＬはLeu 、ＮはAsp 、ＳはSer 、Ｖ
はVal 、ＹはTyr およびＷはTrp を表す）で表される化
合物ＭＳ−２７１。
規生理活性物質を提供する。 【構成】 式（Ｉ） （式中、ＡはAla 、ＣはCys 、ＤはAsp 、ＦはPhe 、Ｇ
はGly 、ＩはIle 、ＬはLeu 、ＮはAsp 、ＳはSer 、Ｖ
はVal 、ＹはTyr およびＷはTrp を表す）で表される化
合物ＭＳ−２７１。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ストレプトミセス属に
属する微生物により生産され、抗菌および抗エイズウイ
ルス活性を有する化合物ＭＳ−２７１に関する。
属する微生物により生産され、抗菌および抗エイズウイ
ルス活性を有する化合物ＭＳ−２７１に関する。
【０００２】
【従来の技術】本発明化合物ＭＳ−２７１と類似の構造
を有する化合物としては、式（ＩＩ）
を有する化合物としては、式（ＩＩ）
【０００３】
【化２】
【０００４】（式中、ＡはAla 、ＣはCys 、ＤはAsp 、
ＦはPhe 、ＧはGly 、ＩはIle 、ＬはLeu 、ＮはAsn 、
ＳはSer 、ＶはVal 、ＹはTyr およびＷはTrp を表す)
で表され、抗エイズウイルス活性を有する化合物ＲＰ71
955 が知られている [ジャーナル・オブ・アンチビオチ
ックス（Journal of Antibiotics),46,1756-1757(199
3)] 。
ＦはPhe 、ＧはGly 、ＩはIle 、ＬはLeu 、ＮはAsn 、
ＳはSer 、ＶはVal 、ＹはTyr およびＷはTrp を表す)
で表され、抗エイズウイルス活性を有する化合物ＲＰ71
955 が知られている [ジャーナル・オブ・アンチビオチ
ックス（Journal of Antibiotics),46,1756-1757(199
3)] 。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、抗菌
および抗エイズウイルス活性を有する新規生理活性物質
を提供することにある。
および抗エイズウイルス活性を有する新規生理活性物質
を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、式
（Ｉ）
（Ｉ）
【０００７】
【化３】
【０００８】（式中、ＡはAla 、ＣはCys 、ＤはAsp 、
ＦはPhe 、ＧはGly 、ＩはIle 、ＬはLeu 、ＮはAsn 、
ＳはSer 、ＶはVal 、ＹはTyr およびＷはTrp を表す)
で表される化合物ＭＳ−２７１が提供される。該化合物
はストレプトミセス属に属する微生物を培養することに
よって得られる。
ＦはPhe 、ＧはGly 、ＩはIle 、ＬはLeu 、ＮはAsn 、
ＳはSer 、ＶはVal 、ＹはTyr およびＷはTrp を表す)
で表される化合物ＭＳ−２７１が提供される。該化合物
はストレプトミセス属に属する微生物を培養することに
よって得られる。
【０００９】以下に本発明を詳細に説明する。化合物Ｍ
Ｓ―２７１の理化学的性質は以下に示すとおりである。
なお理化学的性質は以下の機器により測定した。 マススペクトル：日本電子 JMS-HX110A（高分解能FAB
法により測定）
Ｓ―２７１の理化学的性質は以下に示すとおりである。
なお理化学的性質は以下の機器により測定した。 マススペクトル：日本電子 JMS-HX110A（高分解能FAB
法により測定）
【００１０】アミノ酸分析は、BidlingmeyerB.A. 等
［ジャーナル・オブ・クロマトグラフー(J.Chromatog
r.),336,93(1984)］の方法で行った。なお、分子中のCy
s 残基については、HirsC.H.W.［メソッド・イン・エン
ザイモロジー・アカデミック・プレス・ニューヨーク(M
ethods in Enzymology Academic Press New York), 11,
199(1967)］の方法で、あらかじめＳ−カルボキシメチ
ル化し、塩酸蒸気中１２０℃で２０時間加水分解を行
い、得られた加水分解物のアミノ酸組成物をWaters Pic
o Tag アミノ酸分析計で分析した。
［ジャーナル・オブ・クロマトグラフー(J.Chromatog
r.),336,93(1984)］の方法で行った。なお、分子中のCy
s 残基については、HirsC.H.W.［メソッド・イン・エン
ザイモロジー・アカデミック・プレス・ニューヨーク(M
ethods in Enzymology Academic Press New York), 11,
199(1967)］の方法で、あらかじめＳ−カルボキシメチ
ル化し、塩酸蒸気中１２０℃で２０時間加水分解を行
い、得られた加水分解物のアミノ酸組成物をWaters Pic
o Tag アミノ酸分析計で分析した。
【００１１】なお、Trp のみは松原等［バイオケミカル
・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケイ
ションズ(Biochem.Biophys.Res.Commun.),35,175(196
9)］の方法で加水分解を行い、得られた加水分解物のア
ミノ酸組成物を上記アミノ酸分析計で分析した。実測値
はAla の値を2.00として表し、Cys はＳ−カルボキシメ
チルシステインとして同定した。
・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケイ
ションズ(Biochem.Biophys.Res.Commun.),35,175(196
9)］の方法で加水分解を行い、得られた加水分解物のア
ミノ酸組成物を上記アミノ酸分析計で分析した。実測値
はAla の値を2.00として表し、Cys はＳ−カルボキシメ
チルシステインとして同定した。
【００１２】質量分析：測定値 2062.8596 (M+H)+ 理論値 2062.8597 (12Ｃ97Ｈ131 Ｎ23Ｏ26Ｓ4 ＋Ｈとし
て） アミノ酸分析：実測値（理論値）：Cys 4.10(4)、Asp
1.73(2)、Ser 0.88(1)、Gly 4.06(4)、Ala 2.00(2)、Tr
p 0.97(1)、Val 2.10(2)、Ile 0.85(1)、Leu 1.09(1)、
Phe 1.91(2)、Trp 1.22(1) 赤外吸収スペクトル(KBr法) ν(cm -1) :1230,1338,137
1,1386,1407,1455,1515,1648,2931,2962,3062,3313.
て） アミノ酸分析：実測値（理論値）：Cys 4.10(4)、Asp
1.73(2)、Ser 0.88(1)、Gly 4.06(4)、Ala 2.00(2)、Tr
p 0.97(1)、Val 2.10(2)、Ile 0.85(1)、Leu 1.09(1)、
Phe 1.91(2)、Trp 1.22(1) 赤外吸収スペクトル(KBr法) ν(cm -1) :1230,1338,137
1,1386,1407,1455,1515,1648,2931,2962,3062,3313.
【００１３】薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値 ０．７
３ 薄層：キーゼルゲル６０Ｆ254(メルク社製、Art.5628） 展開溶媒：メタノール 展開方法：室温、上昇法、１５〜３０分 検出：ヨウ素反応
３ 薄層：キーゼルゲル６０Ｆ254(メルク社製、Art.5628） 展開溶媒：メタノール 展開方法：室温、上昇法、１５〜３０分 検出：ヨウ素反応
【００１４】アミノ酸の立体配置は、加水分解後、
（＋）−１−（９−フルオレニル）エチルクロロホルメ
ートで誘導体化し、逆相高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）で分析したところ、Trp がＤ型であり、Gl
y 以外の他のアミノ酸はすべてＬ型であった。
（＋）−１−（９−フルオレニル）エチルクロロホルメ
ートで誘導体化し、逆相高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）で分析したところ、Trp がＤ型であり、Gl
y 以外の他のアミノ酸はすべてＬ型であった。
【００１５】Ｓ−Ｓ結合の位置を含めたアミノ酸の一次
構造は、１規定水酸化ナトリウム中１１０℃で２時間、
またはトリフルオロ酢酸蒸気中９０℃で４時間部分加水
分解し、逆相ＨＰＬＣで分離して得た部分加水分解ペプ
チドの自動エドマン分解（PPSQ-10プロテインシークエ
ンサー、島津製作所）、ＦＡＢ−ＭＳスペクトル分析お
よび 1Ｈ- ＮＭＲスペクトル解析により決定した。また
Ｃ末端のTrp は気相ヒドラジン分解法［山本等，ジャー
ナル・オブ・バイオケミストリー(J.Biochem.),106,552
(1989)］により同定した。
構造は、１規定水酸化ナトリウム中１１０℃で２時間、
またはトリフルオロ酢酸蒸気中９０℃で４時間部分加水
分解し、逆相ＨＰＬＣで分離して得た部分加水分解ペプ
チドの自動エドマン分解（PPSQ-10プロテインシークエ
ンサー、島津製作所）、ＦＡＢ−ＭＳスペクトル分析お
よび 1Ｈ- ＮＭＲスペクトル解析により決定した。また
Ｃ末端のTrp は気相ヒドラジン分解法［山本等，ジャー
ナル・オブ・バイオケミストリー(J.Biochem.),106,552
(1989)］により同定した。
【００１６】以上のデータよりＭＳ−２７１は新規化合
物であることが判明した。
物であることが判明した。
【００１７】次にＭＳ−２７１の生物活性を試験例で説
明する。 試験例１． 抗菌活性 抗菌活性は、バクトトリプトン（Difco 社製) 3g/L、肉
エキス3g/L、酵母エキス 1g/L 、グルコース 1g/L 、寒
天 16g/Lの組成からなる培地（pH 7.0) を用いて寒天希
釈法により測定した。
明する。 試験例１． 抗菌活性 抗菌活性は、バクトトリプトン（Difco 社製) 3g/L、肉
エキス3g/L、酵母エキス 1g/L 、グルコース 1g/L 、寒
天 16g/Lの組成からなる培地（pH 7.0) を用いて寒天希
釈法により測定した。
【００１８】各種細菌に対する最小生育阻止濃度（ＭＩ
Ｃ）を第１表に示す。
Ｃ）を第１表に示す。
【００１９】
【表１】
【００２０】試験例２． ＭＴ−４細胞を用いた抗エイ
ズウイルス活性 ９６穴のマイクロタイタープレートに、種々の濃度のＭ
Ｓ−２７１とともにＨＴＬＶ[ タイプＩＩＩＢ、感染
価：３×１０5 プラークホーミングユニット（ＰＦＵ）
・ｍｌ] 感染ＭＴ−４細胞（２．５×１０4 ／ｗｅｌ
ｌ、ＭＯＩ：０．０１）を感染直後に加えた。これとと
もに、ＭＳ−２７１のＭＴ−４細胞に対する細胞毒性を
知るために、同様にしてウイルス非感染細胞をＭＳ−２
７１とともに培養した。炭酸ガスインキュベーターで３
７℃、５日間培養した後、ＭＴＴ（テトラゾリウム）法
で生存細胞数を測定した。
ズウイルス活性 ９６穴のマイクロタイタープレートに、種々の濃度のＭ
Ｓ−２７１とともにＨＴＬＶ[ タイプＩＩＩＢ、感染
価：３×１０5 プラークホーミングユニット（ＰＦＵ）
・ｍｌ] 感染ＭＴ−４細胞（２．５×１０4 ／ｗｅｌ
ｌ、ＭＯＩ：０．０１）を感染直後に加えた。これとと
もに、ＭＳ−２７１のＭＴ−４細胞に対する細胞毒性を
知るために、同様にしてウイルス非感染細胞をＭＳ−２
７１とともに培養した。炭酸ガスインキュベーターで３
７℃、５日間培養した後、ＭＴＴ（テトラゾリウム）法
で生存細胞数を測定した。
【００２１】抗ウイルス活性はＨＩＶ感染による細胞障
害を５０％防御する濃度（ＥＣ50）で、また、細胞毒性
はＭＳ−２７１による５０％細胞障害濃度（ＣＣ50）で
それぞれ表した。結果を第２表に示す。
害を５０％防御する濃度（ＥＣ50）で、また、細胞毒性
はＭＳ−２７１による５０％細胞障害濃度（ＣＣ50）で
それぞれ表した。結果を第２表に示す。
【００２２】
【表２】
【００２３】第２表から明らかなように、ＭＳ−２７１
は抗エイズウイルス活性を有することが確認された。
は抗エイズウイルス活性を有することが確認された。
【００２４】ＭＳ−２７１は、ストレプトミセス属に属
し、ＭＳ−２７１生産能を有する微生物を培地に培養
し、培養物中にＭＳ−２７１を生成蓄積させ、該培養物
からＭＳ−２７１を採取することによって製造される。
ＭＳ−２７１生産微生物としては、ストレプトミセス属
に属し、ＭＳ−２７１生産能を有する菌株であればいず
れの菌株でも用いることができる。また、これらの菌株
を人工的変異法、例えば紫外線照射、Ｘ線照射、変異誘
発剤処理などによって変異させた変異株あるいは自然的
に変異した変異株などでもＭＳ−２７１生産能を有して
いれば本発明に用いることができる。具体的に好適な例
としては、ストレプトミセス・エスピー（ Streptomyce
s sp.)Ｍ−２７１株があげられる。
し、ＭＳ−２７１生産能を有する微生物を培地に培養
し、培養物中にＭＳ−２７１を生成蓄積させ、該培養物
からＭＳ−２７１を採取することによって製造される。
ＭＳ−２７１生産微生物としては、ストレプトミセス属
に属し、ＭＳ−２７１生産能を有する菌株であればいず
れの菌株でも用いることができる。また、これらの菌株
を人工的変異法、例えば紫外線照射、Ｘ線照射、変異誘
発剤処理などによって変異させた変異株あるいは自然的
に変異した変異株などでもＭＳ−２７１生産能を有して
いれば本発明に用いることができる。具体的に好適な例
としては、ストレプトミセス・エスピー（ Streptomyce
s sp.)Ｍ−２７１株があげられる。
【００２５】ストレプトミセス・エスピー（ Streptomy
ces sp.)Ｍ−２７１株の菌学的性質は次のとおりであ
る。
ces sp.)Ｍ−２７１株の菌学的性質は次のとおりであ
る。
【００２６】1.形態的性質 1)菌糸： 気菌糸形成；有 気菌糸の分断および運動性；無 基生菌糸の分断および運動性；無 2)胞子： 胞子の形成の有無および着生位置；気菌糸に形成 胞子嚢の形成の有無および着生位置；無 胞子柄上で連鎖する胞子の数；１０個以上 多数の胞子が連鎖する場合の形状；螺旋状
【００２７】胞子の特徴 表面構造；平滑 形状および大きさ；長球形、約 0.70mm×0.95mm 運動性および鞭毛の存在；無 3)その他： 厚膜胞子；無 集束菌糸；無 疑似胞子嚢；無 菌糸の分裂様式；単純分枝
【００２８】2.培養的性質 Ｍ−２７１株は、一般に使用されている合成および天然
培地で普通もしくは旺盛な成育を示し、基生菌糸は茶灰
色系を示す。培地により茶色系統の可溶性色素が産生さ
れることもある。各種培地上で28℃、14日間培養したと
きの生育および色の特徴を下記に示す。なお、色の表示
はカラーハーモニーマニュアル( コンティナー・コーポ
レイション・オブ・アメリカ第４版（1958年）[Color H
armony Manual (Container Corporation of America)]
による色の分類に従った。
培地で普通もしくは旺盛な成育を示し、基生菌糸は茶灰
色系を示す。培地により茶色系統の可溶性色素が産生さ
れることもある。各種培地上で28℃、14日間培養したと
きの生育および色の特徴を下記に示す。なお、色の表示
はカラーハーモニーマニュアル( コンティナー・コーポ
レイション・オブ・アメリカ第４版（1958年）[Color H
armony Manual (Container Corporation of America)]
による色の分類に従った。
【００２９】1)シュクロース・硝酸塩寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；ライトアイボリー(2ca) 〜ダークオリ
ーブ(11/2nl) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、ホワイト(a) 〜グ
レー(f) 可溶性色素；無
ーブ(11/2nl) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、ホワイト(a) 〜グ
レー(f) 可溶性色素；無
【００３０】2)グルコース・アスパラギン寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；カバートタン(2ge) 気菌糸の着生状態とその色調；普通、ホワイト(a) 〜キ
ャメル(3ge) 可溶性色素；無
ャメル(3ge) 可溶性色素；無
【００３１】3)グリセリン・アスパラギン寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；オートミール(2ec) 〜ライトオリーブ
ドラブ(11/2li) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、ペールブルー(14c
a)〜カバートタン(2ge) 可溶性色素；わずかに産生（淡黄色）
ドラブ(11/2li) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、ペールブルー(14c
a)〜カバートタン(2ge) 可溶性色素；わずかに産生（淡黄色）
【００３２】4)スターチ・無機塩寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；ライトメイズ(2ea)〜カバートタン(2g
e) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、ホワイト(a)〜ス
レートタン(2ig) 可溶性色素；茶緑色
e) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、ホワイト(a)〜ス
レートタン(2ig) 可溶性色素；茶緑色
【００３３】5)チロシン寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；ブラック(o) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、カバートタン(2g
e)〜ミストブラウン(3ig) 可溶性色素；産生（茶黒色）
e)〜ミストブラウン(3ig) 可溶性色素；産生（茶黒色）
【００３４】6)栄養寒天培地 生育状態；貧弱 基生菌糸の色調；ライトマスタードタン(2ie) 気菌糸の着生状態とその色調；気菌糸の着生はほとんど
見られない 可溶性色素；無
見られない 可溶性色素；無
【００３５】7)イースト・麦芽寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；マスタードタン(2lg)〜カバートブラ
ウン(2li) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、ホワイト(a)〜ラ
イトオリーブグレー(11/2ge) 可溶性色素；わずかに産生（黄土色）
ウン(2li) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、ホワイト(a)〜ラ
イトオリーブグレー(11/2ge) 可溶性色素；わずかに産生（黄土色）
【００３６】8)オートミール寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；スレートタン(2ig) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、ホワイト(a)〜ミ
ストブラウン(3ig) 可溶性色素；産生（茶色）
ストブラウン(3ig) 可溶性色素；産生（茶色）
【００３７】3.生理学的性質 生育温度範囲は７日後の、その他の事項については２８
℃、２〜３週間後の結果を示す。 1)生育温度範囲；13〜45℃ 2)ゼラチンの液化；無 3)スターチの加水分解；有 4)脱脂牛乳の凝固およびペプトン化；ペプトン化する 5)メラニン様色素の生成 (1) ペプトン・イースト・鉄寒天培地；有 (2) チロシン寒天培地；有 6)炭素源の利用性 (基礎培地：プリードハム・ゴトリー
ブ寒天培地）
℃、２〜３週間後の結果を示す。 1)生育温度範囲；13〜45℃ 2)ゼラチンの液化；無 3)スターチの加水分解；有 4)脱脂牛乳の凝固およびペプトン化；ペプトン化する 5)メラニン様色素の生成 (1) ペプトン・イースト・鉄寒天培地；有 (2) チロシン寒天培地；有 6)炭素源の利用性 (基礎培地：プリードハム・ゴトリー
ブ寒天培地）
【００３８】以下に示す＋は利用することを、−は利用
しないことをそれぞれ表す。 L-アラビノース ；＋ D-キシロース ；＋ D-グルコース ；＋ シュクロース ；＋ ラフィノース ；＋ D-フルクトース ；＋ L-ラムノース ；＋ イノシトール ；＋ D-マンニトール ；＋
しないことをそれぞれ表す。 L-アラビノース ；＋ D-キシロース ；＋ D-グルコース ；＋ シュクロース ；＋ ラフィノース ；＋ D-フルクトース ；＋ L-ラムノース ；＋ イノシトール ；＋ D-マンニトール ；＋
【００３９】4.化学分類的性質 菌体中のジアミノピメリン酸の光学異性体；LL型 以上、形態的性質としては分枝した基生菌糸より伸張し
た気菌糸に螺旋状に10個以上の胞子からなる胞子鎖を形
成すること、また化学分類的性質としては細胞壁が I型
（LL−ジアミノピメリン酸）であることから、本菌株は
放線菌の中でストレプトミセス属に分類される。
た気菌糸に螺旋状に10個以上の胞子からなる胞子鎖を形
成すること、また化学分類的性質としては細胞壁が I型
（LL−ジアミノピメリン酸）であることから、本菌株は
放線菌の中でストレプトミセス属に分類される。
【００４０】本菌株はストレプトミセス・エスピー ( S
treptomyces sp. ) Ｍ−２７１と命名され、ブダペスト
条約に基づいて平成５年１１月２９日付けで工業技術院
生命工学工業技術研究所にFERM BP-4478号として寄託し
てある。本発明のＭ−２７１生産菌の培養に際しては放
線菌の培養に用いられる通常の培養方法が適用される。
用いられる培地は微生物の資化し得る炭素源、窒素源、
無機物などを程よく含有する培地であれば天然培地、合
成培地いずれでも用いることができる。
treptomyces sp. ) Ｍ−２７１と命名され、ブダペスト
条約に基づいて平成５年１１月２９日付けで工業技術院
生命工学工業技術研究所にFERM BP-4478号として寄託し
てある。本発明のＭ−２７１生産菌の培養に際しては放
線菌の培養に用いられる通常の培養方法が適用される。
用いられる培地は微生物の資化し得る炭素源、窒素源、
無機物などを程よく含有する培地であれば天然培地、合
成培地いずれでも用いることができる。
【００４１】炭素源としては、グルコース、シュクロー
ス、スタビロース、澱粉、デキストリン、マンノース、
マルトース、糖蜜などの炭水化物、クエン酸、リンゴ
酸、酢酸、フマール酸などの有機酸、メタノール、エタ
ノールなどのアルコール、メタン、エタン、プロパン、
ｎ−パラフィンなどの炭化水素、グルタミン酸などのア
ミノ酸あるいはグリセロールなどが用いられる。
ス、スタビロース、澱粉、デキストリン、マンノース、
マルトース、糖蜜などの炭水化物、クエン酸、リンゴ
酸、酢酸、フマール酸などの有機酸、メタノール、エタ
ノールなどのアルコール、メタン、エタン、プロパン、
ｎ−パラフィンなどの炭化水素、グルタミン酸などのア
ミノ酸あるいはグリセロールなどが用いられる。
【００４２】窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウムな
どのアンモニウム塩、アスパラギン酸、グルタミン、シ
スチン、アラニンなどのアミノ酸、尿素、ペプトン、肉
エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチープ・リ
カー、大豆粉、ソルブル・ベジタブル・プロテイン、綿
実粕、大豆カゼイン、カザミノ酸、ファーマメディアな
どが用いられる。
ンモニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウムな
どのアンモニウム塩、アスパラギン酸、グルタミン、シ
スチン、アラニンなどのアミノ酸、尿素、ペプトン、肉
エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチープ・リ
カー、大豆粉、ソルブル・ベジタブル・プロテイン、綿
実粕、大豆カゼイン、カザミノ酸、ファーマメディアな
どが用いられる。
【００４３】無機物としてはリン酸一水素カリウム、リ
ン酸二水素カリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸
マグネシウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マ
ンガン、硫酸銅、硫酸コバルト、硫酸亜鉛、パントテン
酸カルシウム、モリブデン酸アンモニウム、硫酸アルミ
ニウムカリウム、炭酸バリウム、炭酸カルシウム、塩化
コバルト、食塩などが用いられる。
ン酸二水素カリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸
マグネシウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マ
ンガン、硫酸銅、硫酸コバルト、硫酸亜鉛、パントテン
酸カルシウム、モリブデン酸アンモニウム、硫酸アルミ
ニウムカリウム、炭酸バリウム、炭酸カルシウム、塩化
コバルト、食塩などが用いられる。
【００４４】その他必要に応じて培地にビタミン、サイ
アミンなど菌体の増殖あるいはＭＳ−２７１の生産を促
進する物質を加えることができる。また微生物が特定の
物質を要求する場合は、生育に必要なものを加えること
が必要である。培養は振盪培養法、通気攪拌培養法など
により、１５〜３５℃の温度で、中性付近のpHで行われ
る。通常３〜１５日の培養によって、ＭＳ−２７１の蓄
積は最大に達する。
アミンなど菌体の増殖あるいはＭＳ−２７１の生産を促
進する物質を加えることができる。また微生物が特定の
物質を要求する場合は、生育に必要なものを加えること
が必要である。培養は振盪培養法、通気攪拌培養法など
により、１５〜３５℃の温度で、中性付近のpHで行われ
る。通常３〜１５日の培養によって、ＭＳ−２７１の蓄
積は最大に達する。
【００４５】培養液中に蓄積したＭＳ−２７１を培養液
から単離採取するに際しては、通常の生理活性物質を培
養液から採取する方法が適用される。例えば、アセト
ン、メタノールなどの有機溶媒による菌体成分の抽出、
ろ過、遠心分離などによる菌体除去、吸着樹脂、シリカ
ゲル、シラナイズドシリカゲル、逆層シリカゲル、アル
ミニウム、セルロース、ケイ藻土、ケイ酸マグネシウ
ム、ゲルろ過剤、イオン交換樹脂などを用いるカラムク
ロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーによる活性
物質の吸脱着処理もしくは適当な溶媒系による分配など
によってＭＳ−２７１を単離することができる。
から単離採取するに際しては、通常の生理活性物質を培
養液から採取する方法が適用される。例えば、アセト
ン、メタノールなどの有機溶媒による菌体成分の抽出、
ろ過、遠心分離などによる菌体除去、吸着樹脂、シリカ
ゲル、シラナイズドシリカゲル、逆層シリカゲル、アル
ミニウム、セルロース、ケイ藻土、ケイ酸マグネシウ
ム、ゲルろ過剤、イオン交換樹脂などを用いるカラムク
ロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーによる活性
物質の吸脱着処理もしくは適当な溶媒系による分配など
によってＭＳ−２７１を単離することができる。
【００４６】上記精製工程中のＭＳ−２７１の検出は、
蛍光剤入りシリカゲル（キーゲルゼルＦ254 メルク社
製）を用いた薄層クロマトグラフィーに付し、ヨウ素反
応により行う。以下に本発明の実施例を示す。
蛍光剤入りシリカゲル（キーゲルゼルＦ254 メルク社
製）を用いた薄層クロマトグラフィーに付し、ヨウ素反
応により行う。以下に本発明の実施例を示す。
【００４７】
実施例１ 種菌として、ストレプトミセス・エスピー（Streptomyc
es sp.) Ｍ−２７１株(FERM BP-4478)を用い、第一種培
地としてグルコース１g／dl、可溶性デンプン１g／dl、
バクトトリプトン（Difco 社製）０．５g／dl、酵母エ
キス０．５g／dl、肉エキス０．３g／dl、リン酸二水素
カリウム０．１g／dl、硫酸マグネシウム・７水塩０．
０５g／dlおよびリン酸マグネシウム・８水塩０．０５
ｇ／dl（pH 7.0〜7.2 ）の組成からなる培地を用いた。
種菌１白金耳を太型試験管に入れた上記第一種培地１０
mlに植菌し、２８℃で５日間振盪培養した（第一種培
養）。
es sp.) Ｍ−２７１株(FERM BP-4478)を用い、第一種培
地としてグルコース１g／dl、可溶性デンプン１g／dl、
バクトトリプトン（Difco 社製）０．５g／dl、酵母エ
キス０．５g／dl、肉エキス０．３g／dl、リン酸二水素
カリウム０．１g／dl、硫酸マグネシウム・７水塩０．
０５g／dlおよびリン酸マグネシウム・８水塩０．０５
ｇ／dl（pH 7.0〜7.2 ）の組成からなる培地を用いた。
種菌１白金耳を太型試験管に入れた上記第一種培地１０
mlに植菌し、２８℃で５日間振盪培養した（第一種培
養）。
【００４８】第一種培養により得られた培養液（第一種
培養液）１０mlを３００ml容三角フラスコに入った５０
mlの第二種培地に植菌した。第二種培地の組成は第一種
培地の組成と同じである。第二種培養は２８℃で２日間
行った。得られた第二種培養液５０mlを２Ｌ容三角フラ
スコに入った５００mlの主発酵培地に植菌した。主発酵
培地として、グルコース ２．５g／dl、コーン・スチー
プ・リカー１．５g／dl、サングロスＲ−５（白州フィ
ード社製、ソルブル・ベジタブル・プロテインを主成分
とする）１g／dl、綿実油０．５g／dl、塩化コバルト・
６水塩１０mg／dlおよびリン酸マグネシウム・８水塩５
０mg／dl（pH 7.0）の組成からなる培地を用いた。この
主発酵培養は２８℃で５日間振盪培養により行った。
培養液）１０mlを３００ml容三角フラスコに入った５０
mlの第二種培地に植菌した。第二種培地の組成は第一種
培地の組成と同じである。第二種培養は２８℃で２日間
行った。得られた第二種培養液５０mlを２Ｌ容三角フラ
スコに入った５００mlの主発酵培地に植菌した。主発酵
培地として、グルコース ２．５g／dl、コーン・スチー
プ・リカー１．５g／dl、サングロスＲ−５（白州フィ
ード社製、ソルブル・ベジタブル・プロテインを主成分
とする）１g／dl、綿実油０．５g／dl、塩化コバルト・
６水塩１０mg／dlおよびリン酸マグネシウム・８水塩５
０mg／dl（pH 7.0）の組成からなる培地を用いた。この
主発酵培養は２８℃で５日間振盪培養により行った。
【００４９】得られた発酵培養液８Ｌをろ過し、分別し
た菌体に８Ｌのメタノールを加え攪拌後ろ過した。ろ液
に８Ｌの脱イオン水を添加し、５０％メタノール水溶液
を用いて充填した１ＬのダイヤイオンＨＰ−２０カラム
（三菱化成社製）に通塔した。カラムを３Ｌの６０％メ
タノール水溶液で洗浄した後、３Ｌのメタノールで活性
物質を溶出した。溶出液をすべて集め、減圧下で濃縮乾
固して１．５８ｇの褐色の固体を得た。この物質を少量
の０．１％トリフルオロ酢酸を含む８０％メタノール水
溶液に溶解し、遠心分離（3500rpm 、１５分間）した
後、上清を同じ組成の溶媒を用いて充填した１５０ｍｌ
の逆相シリカゲルカラム（ＯＤＳ−ＡＱ１２０−Ｓ５
０、ワイエムシイ社製）の上端にのせ、同じ組成の溶媒
を用いて溶出した。溶出液を１５ｍｌずつ分取するとＭ
Ｓ−２７１は画分番号２３から３７に溶出された。これ
らの画分を集めた後、２１０ｍｌの脱イオン水を添加
し、脱イオン水を用いて充填した２０ｍｌのダイヤイオ
ンＨＰ−２０ｓｓカラム（三菱化成社製）に通塔した。
カラムを６０ｍｌの脱イオン水で洗浄した後、６０ｍｌ
のメタノールで溶出した。溶出画分をすべて集め、減圧
下で濃縮乾固し、白色粉末のＭＳ−２７１を９３．１ｍ
ｇ得た。
た菌体に８Ｌのメタノールを加え攪拌後ろ過した。ろ液
に８Ｌの脱イオン水を添加し、５０％メタノール水溶液
を用いて充填した１ＬのダイヤイオンＨＰ−２０カラム
（三菱化成社製）に通塔した。カラムを３Ｌの６０％メ
タノール水溶液で洗浄した後、３Ｌのメタノールで活性
物質を溶出した。溶出液をすべて集め、減圧下で濃縮乾
固して１．５８ｇの褐色の固体を得た。この物質を少量
の０．１％トリフルオロ酢酸を含む８０％メタノール水
溶液に溶解し、遠心分離（3500rpm 、１５分間）した
後、上清を同じ組成の溶媒を用いて充填した１５０ｍｌ
の逆相シリカゲルカラム（ＯＤＳ−ＡＱ１２０−Ｓ５
０、ワイエムシイ社製）の上端にのせ、同じ組成の溶媒
を用いて溶出した。溶出液を１５ｍｌずつ分取するとＭ
Ｓ−２７１は画分番号２３から３７に溶出された。これ
らの画分を集めた後、２１０ｍｌの脱イオン水を添加
し、脱イオン水を用いて充填した２０ｍｌのダイヤイオ
ンＨＰ−２０ｓｓカラム（三菱化成社製）に通塔した。
カラムを６０ｍｌの脱イオン水で洗浄した後、６０ｍｌ
のメタノールで溶出した。溶出画分をすべて集め、減圧
下で濃縮乾固し、白色粉末のＭＳ−２７１を９３．１ｍ
ｇ得た。
【００５０】
【発明の効果】本発明によれば、抗菌および抗エイズウ
イルス活性を有する化合物ＭＳ−２７１を提供すること
ができる。
イルス活性を有する化合物ＭＳ−２７１を提供すること
ができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ａ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 山▲崎▼ 基生 東京都町田市中町３−９−13 (72)発明者 安藤 勝彦 東京都町田市中町３−９−13 (72)発明者 茂田 士郎 福島県福島市大森字久保内147−28 (72)発明者 馬場 昌範 福島県福島市田沢字桜台15−17 (72)発明者 松田 譲 東京都小金井市貫井南町１−22−７
Claims (1)
- 【請求項１】 式（Ｉ） 【化１】 （式中、ＡはAla 、ＣはCys 、ＤはAsp 、ＦはPhe 、Ｇ
はGly 、ＩはIle 、ＬはLeu 、ＮはAsn 、ＳはSer 、Ｖ
はVal 、ＹはTyr およびＷはTrp を表す) で表される化
合物ＭＳ−２７１。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6013537A JPH08188595A (ja) | 1994-02-07 | 1994-02-07 | 化合物ｍｓ−２７１ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6013537A JPH08188595A (ja) | 1994-02-07 | 1994-02-07 | 化合物ｍｓ−２７１ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08188595A true JPH08188595A (ja) | 1996-07-23 |
Family
ID=11835913
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6013537A Withdrawn JPH08188595A (ja) | 1994-02-07 | 1994-02-07 | 化合物ｍｓ−２７１ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08188595A (ja) |
-
1994
- 1994-02-07 JP JP6013537A patent/JPH08188595A/ja not_active Withdrawn
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20010508 |