CN101103036B

CN101103036B - 青蒿素衍生物、其制备方法和应用、以及包括该衍生物的药物组合物

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Publication number: CN101103036B
Application number: CN2006800023685A
Authority: CN
Inventors: 李英; 左建平; 杨忠顺; 周文亮; 隋毅; 王峻霞; 张瑜; 周宇; 吴锦明
Original assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Current assignee: About Jiangsu Biological Medicine Ltd By Share Ltd
Priority date: 2005-02-04
Filing date: 2006-01-27
Publication date: 2010-05-19
Anticipated expiration: 2026-01-27
Also published as: JP4891926B2; EP1845099A1; US7910750B2; WO2006081771A1; CN101103036A; US20080139642A1; CN1814601A; EP1845099A4; EP1845099B1; JP2008528641A

Abstract

本发明涉及一种具有以下结构式I所示结构的青蒿素衍生物、其制备方法、用途，以及包括该青蒿素衍生物的药物组合物及用途。本发明的青蒿素衍生物以及包含该青蒿素衍生物的药物组合物具有免疫抑制作用，可以更安全地使用。包括该青蒿素衍生物的药物组合物可以制成片剂、丸剂等方便长期使用的剂型，具有更广泛的生产和实用价值。

Description

青蒿素衍生物、其制备方法和应用、以及包括该衍生物的药物组合物

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体地，本发明涉及新的萜类青蒿素衍生物、其制备方法和应用，以及包括该青蒿素衍生物的药物组合物。

背景技术

青蒿素是从中药青蒿(植物黄花蒿Artemisia annua L.)提取出的抗疟有效成分，一种罕见的含有过氧基团的倍半萜内酯。青蒿素和其衍生物青蒿琥酯的化学结构式分别为：

青蒿素不但具有卓越的抗疟作用，对其他寄生虫(如血吸虫，华支睾吸虫等)也有效。还发现它具有免疫抑制作用，曾用于红斑狼疮临床试验。随着研究工作的深入，发现青蒿素的衍生物-青蒿琥酯具有更强的免疫抑制作用，可治疗红斑狼疮和某些皮肤病，取得较好疗效。这些临床试验说明青蒿琥酯比青蒿素的免疫抑制作用更强，但病人需要长期静脉注射，使用十分不便。当前临床常用免疫抑制剂环孢素A价格昂贵，而且对肾、肝有毒性，导致有些病人不能坚持用药。因此，本发明者展开了寻找更高效、更安全的免疫抑制剂的研究。

发明内容

技术领域

背景技术

发明内容

X为O、O(CH₂)_n或OCHR₁，其中所述R₁为C₁-C₄烃基、CN、COOH、COOMe、或COOEt，n为1～4的整数；

P为Ar-Y-Z或Ar-Z，其中，

Ar为苯基或萘基；

Y为O(CH₂)_n、OCHMe、C₁-C₄烃基，其中n为1～4的整数；

Z为H、卤素、OR’、COOR’或CONH CH₂COOR’，其中R’为H、C₁-C₄烷基、邻甲氧基苯基或C₁-C₄烷胺基。

具体地，对于本发明提供的青蒿素衍生物，

X为O或OCH₂；

P为Ar-Y-Z，其中，

所述Ar为苯基；

Y为O(CH₂)_n、OCHMe、C₁-C₄烃基，其中n为1或2；

Z为COOR’，其中，所述R’为H、Me、Et或邻甲氧基苯基。

优选地，根据本发明的青蒿素衍生物可以为4-甲氧羰甲基苯基-二氢青蒿素醚、4-羧基甲基苯基-二氢青蒿素醚、4-乙氧羰甲氧基苯基-二氢青蒿素醚、3-琥珀酸单酰基苯基-二氢青蒿素醚、4-乙氧羰甲胺基羰基苯基-二氢青蒿素醚、4-甲氧羰基(α-甲基)次甲基苯基-二氢青蒿素醚、4-邻甲氧基苯氧羰基(α-甲基)次甲基苯基-二氢青蒿素醚、4-乙氧羰基(α-甲基)次甲基氧苯基-二氢青蒿素醚、4-羧基(α-甲基)次甲基氧苯基-二氢青蒿素醚、4-邻甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氢青蒿素醚、或3-邻甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氢青蒿素醚。

根据本发明的技术方案，本发明还提供了上述青蒿素衍生物的制备方法，所述方法包括以下步骤：

1)以具有结构式II所示结构的二氢青蒿素或具有结构式III所示结构的乙酰二氢青蒿素为原料，在酸催化条件下与含有羧酸酯的酚或醇反应，得到相应的二氢青蒿素的醚类产物，

2)然后将二氢青蒿素的醚类产物水解，得到游离酸形式的中间产物或游离胺形式的中间产物；

3)将步骤2)中的游离酸形式或游离胺形式的中间产物制备为终产物，

或者该方法包括以下步骤：

1)在酸催化条件下将具有结构式II所示结构的二氢青蒿素或具有结构式III所示结构的乙酰二氢青蒿素与二元酚反应，得到具有结构式IV所示结构的化合物；

2)然后进一步修饰上述具有结构式IV所示结构的化合物，生成终产物。

具体制备方法可参照本发明者以前的专利ZL 94113982.4、ZL01113407.0和申请号为99807416专利申请中的内容。

本发明进一步提供了含有上述青蒿素衍生物的药物组合物，所述药物组合物包含安全、有效剂量范围内的式I所示化合物或其药用盐和药学上可接受的载体。优选地，所述药物组合物包括1～85wt％的权利要求1中所述的青蒿素衍生物或其药用盐、15～99wt％的赋形剂、0～60wt％的其它常规辅料。

“安全、有效剂量”的含义是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。化合物的安全、有效剂量根据治疗对象的年龄、体重、治疗适应症、给药途径、疗程及任何相关的治疗等具体情况来确定。成人一般为0.1mg/天至500mg/天，分一次或多次给药。儿童酌减。

“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填充剂或赋形剂，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有糖(如葡萄糖、蔗糖、乳糖等)、淀粉(如玉米淀粉、马铃薯淀粉等)、纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯、微晶纤维素等)、丙烯酸树脂、聚丙烯酸钠、聚维酮、聚乙二醇、聚氧乙烯单硬脂酸酯、明胶、硅胶、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、硫酸钙，植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)。还可以是乳化剂(如吐温

)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、增塑剂(如癸二酸二丁酯)、着色剂、调味剂、稳定剂、防腐剂、无热原水等。本发明的组合物对载体的选择取决于化合物的给药方式，而且，本领域普通技术人员可以依据现有技术选择适于特定给药方式的载体。

本发明还提供了上述药物组合物的剂型，所述剂型为经口服、经胃肠外、经鼻、经舌、经眼、经呼吸道或经直肠给药的剂型。优选地，所述剂型为肠溶丸、舌下片剂、贴剂、栓剂、霜剂、油膏剂、或皮肤用凝胶剂。

本发明还提供了上述青蒿素衍生物在制备用于治疗或预防免疫系统疾病的药物中的应用；以及用于治疗或预防免疫系统疾病的应用。

本发明提供了含有上述青蒿素衍生物的药物组合物在制备用于治疗或预防免疫系统疾病的药物中的应用；以及用于治疗或预防免疫系统疾病的应用。

本发明的青蒿素衍生物具有高效的免疫抑制剂活性，可以更安全地使用。包括该青蒿素衍生物的化合物可以制成片剂、丸剂等方便长期使用的剂型，具有更广泛的生产和实用价值。

附图说明

图1表明本发明的化合物对非特异性淋巴细胞毒性的影响；抑制ConA诱导的T细胞增殖反应的作用；抑制LPS诱导的B细胞增殖反应的作用；以及抑制同种异体混合淋巴细胞培养引起增殖反应的作用。

图2表明本发明的化合物在体内用药可抑制小鼠B细胞(抗体形成细胞)的抗体和补体产生。

图3表明本发明的化合物能抑制DNFB诱导DTH反应。

图4表明本发明的化合物在佐剂性大鼠关节炎动物模型中有一定的防治作用。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步阐述，但这些实施例绝不是对本发明的任何限制。

在下列实施例中，青蒿素母核用Q代表

波纹线(

)代表β取代或/和α取代

直线()代表β取代

虚线(

)代表α取代

制备实施例

制备实施例1 4-甲氧羰甲基苯基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物1)的制备

(化合物1)

将乙酰二氢青蒿素和4-羟基苯乙酸甲酯溶解于二氯甲烷中，滴加三氟醋酸，反应结束后，经常规处理，用硅胶柱层析分离，再重结晶，得到白色结晶的标题化合物。熔点：108-112℃。

元素分析(C₂₄H₃₂O₇)：

计算值：C 66.65 H 7.45

实测值：C 67.03 H 7.21。

制备实施例2 4-羧甲基苯基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物2)的制备

(化合物2)

将制备实施例1所得化合物倒入KOH/C₂H₅OH溶液中进行水解反应，然后粗产品经重结晶得到白色结晶的标题化合物。熔点：154-156℃。

元素分析(C₂₃H₃₀O₇)：

计算值：C 66.01 H 7.23

实测值：C 65.95 H 7.29。

制备实施例3 3-琥珀酸单酰基苯基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物3)的制备

(化合物3)

3-酚基苯基-二氢青蒿素醚和丁二酸酐反应，经硅胶柱层分析得为白色无定型固体的标题化合物。

元素分析(C₂₅H₃₂O₉·1/2H₂O)：

计算值：C 61.84 H 6.85

实测值：C 62.09 H 6.86。

制备实施例4 4-(二甲胺基乙氧羰甲氧基)苯基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物4)的制备

(化合物4)

4-羧甲氧基苯基-二氢青蒿素醚与N，N-二甲基乙醇胺缩合得标题化合物。

元素分析(C₂₇H₃₉NO₈)：

计算值：C 64.14 H 7.77 N 2.77

实测值：C 64.30 H 7.79 N 2.65。

制备实施例5 4-乙氧羰甲胺基羰基苯基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物5)的制备

(化合物5)

4-羧基苯基-二氢青蒿素醚和甘氨酸乙酯缩合，得到标题化合物。

元素分析(C₂₆H₃₅NO₈)：

计算值：C 63.78 H 7.21 N 2.96

实测值：C 64.04 H 7.26 N 3.30。

制备实施例6 4-乙酰氧基(α-甲基)苄基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物6)的制备

(化合物6)

二氢青蒿素和4-乙酰氧基-α-甲基苄醇缩合，得到标题化合物。

元素分析(C₂₅H₃₄O₇)：

计算值：C 67.24 H 7.67

实测值：C 67.14 H 7.61。

制备实施例7 4-羟基(α-甲基)苄基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物7)的制备

(化合物7)

将制备实施例6所得化合物进行碱性水解，得到标题化合物。

元素分析(C₂₃H₃₂O₆)：

计算值：C 68.29 H 7.97

实测值：C 68.23 H 8.27。

制备实施例8 4-乙氧羰甲氧基(α-甲基)苄基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物8)

(化合物8)

将制备实施例7所得化合物与氯甲酸乙酯反应，得到标题化合物。

元素分析(C₂₇H₃₈O₈)：

计算值：C 66.10 H 7.81

实测值：C 65.91 H 8.17。

制备实施例9 4-羧甲氧基(α-甲基)苄基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物9)的制备

(化合物9)

将制备实施例8所得化合物进行碱性水解，得到标题化合物。

元素分析(C₂₅H₃₄O₈)：

计算值：C 64.92 H 7.41

实测值：C 64.66 H 7.50。

制备实施例10 4-羟基(α-氰基)苄基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物10)的制备

(化合物10)

二氢青蒿素与4-乙酰氧基-α-氰基苄醇缩合，然后进行碱性水解，生成标题化合物。

元素分析(C₂₃H₂₉NO₆)：

计算值：C 66.49 H 7.04 N 3.37

实测值：C 66.53 H 7.04 N 3.16。

制备实施例11 3-羟基(α-氰基)苄基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物11)的制备

(化合物11)

二氢青蒿素与3-乙酰氧基-α-氰基苄醇缩合，然后进行碱性水解，生成标题化合物。

元素分析(C₂₃H₂₉NO₆)：

计算值：C 66.49 H 7.04 N 3.37

实测值：C 66.38 H 6.84 N 3.01。

制备实施例12 (S)-2-乙氧羰甲氧基(α-氰基)苄基-二氢青蒿素醚(化合物12)和(R)-2-乙氧羰甲氧基(α-氰基)苄基-二蒿素醚(β型)(化合物13)的制备

(化合物12) (化合物13)

二氢青蒿素和2-乙氧羰甲氧基(α-氰基)苄醇缩合。待反应结束，经常规处理后用硅胶柱层析分离。

第一馏分为(S)-2-乙氧羰甲氧基(α-氰基)苄基-二氢青蒿素醚，白色结晶，熔点：70-71℃。

元素分析：(C₂₇H₃₅NO₈)

计算值：C 64.65 H 7.03 N 2.79

实测值：C 64.63 H 7.33 N 2.85。

第二馏分为(R)-2-乙氧羰甲氧基(α-氰基)苄基-二氢青蒿素醚，白色结晶，熔点：88-90℃。

元素分析：(C₂₇H₃₅NO₈)

计算值：C 64.65 H 7.03 N 2.79

实测值：C 65.08 H 7.33 N 2.71。

制备实施例13 (S)-2-羧甲氧基(α-氰基)苄基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物14)的制备

(化合物14)

将制备实施例12所得化合物(S)-2-乙氧羰甲氧基(α-氰基)苄基-二氢青蒿素醚进行碱性水解，得到白色结晶的标题化合物，熔点：143-144℃。

元素分析(C₂₅H₃₁NO₈)：

计算值：C 63.41 H 6.60 N 2.96

实测值：C 63.27 H 6.52 N 2.97。

制备实施例14 2-溴-5-羟基(α-氰基)苄基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物15)的制备

(化合物15)

以二氢青蒿素与2-溴-5-乙酰氧基(α-氰基)苄醇为原料，经酸性缩合和碱性水解，制得白色结晶的标题化合物，熔点：90-92℃。

元素分析(C₂₃H₂₈BrNO₆)：

计算值：C 55.88 H 5.71 N 2.83

实测值：C 55.52 H 5.76 N 2.82。

制备实施例15 4-氟(α-甲酸甲酯基)苄基二氢青蒿素醚(β型)(化合物16)的制备

(化合物16)

二氢青蒿素与4-氟(α-甲酸甲酯基)苄醇缩合生成标题化合物。

元素分析(C₂₄H₃₁FO₇)：

计算值：C 63.99 H 6.93

实测值：C 64.29 H 6.98。

制备实施例16 4-溴(α-甲酸乙酯基)苄基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物17)的制备

(化合物17)

二氢青蒿素与4-溴(α-甲酸乙酯基)苄醇进行缩合，生成标题化合物。

元素分析(C₂₅H₃₃BrO₇)：

计算值：C 57.15 H 6.33

实测值：C 56.87 H 6.16。

制备实施例17 (S)-α-甲酸甲酯基-1-萘甲基-二氢青蒿素醚(化合物18)和(R)-α-甲酸甲酯基-1-萘甲基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物19)的制备

(化合物18) (化合物19)

二氢青蒿素与α-甲酸甲酯基萘甲醇-1缩合、并且经柱层析分离得到两个标题化合物。

(S)-α-甲酸甲酯基-1-萘甲基-二氢青蒿素醚，无定型固体。

元素分析(C₂₈H₃₄O₇)：

计算值：C 69.69 H 7.10

实测值：C 69.72 H 7.17。

(R)-α-甲酸甲酯基-1-萘甲基-二氢青蒿素醚，无定型固体。

元素分析(C₂₈H₃₄O₇)：

计算值：C 69.69 H 7.10

实测值：C 70.06 H 6.97。

制备实施例18(S)-α-羧基-1-萘甲基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物20)的制备

(化合物20)

将制备实施例17所得化合物(S)-α-甲酸甲酯基-1-萘甲基-二氢青蒿素醚进行碱性水解，得到为无定型固体的标题化合物。

元素分析(C₂₇H₃₂O₇)：

计算值：C 69.21 H 6.88

实测值：C 69.29 H 6.90。

制备实施例19 4-甲氧羰基-(α-甲基)次甲基苯基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物21)的制备

(化合物21)

乙酰二氢青蒿素和2-(4-羟基苯基)异丙酸甲酯缩合，经常规处理后用硅胶柱层析分离，得到无色油状的标题化合物。

元素分析(C₂₅H₃₄O₇)：

计算值：C 67.24 H 7.67

实测值：C 67.05 H 7.82。

制备实施例20 4-羧基-(α-甲基)次甲基苯基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物22)的制备

(化合物22)

将制备实施例19所得化合物进行碱性水解，经重结晶，得到白色结晶的标题化合物。熔点：152-154℃。

元素分析(C₂₄H₃₂O₇)：

计算值：C 66.65 H 7.46

实测值：C 66.63 H 7.53。

制备实施例21 4-邻甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基苯基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物23)的制备

(化合物23)

将制备实施例20所得化合物和2-甲氧基酚缩合得标题化合物，为白色无定型固体。

元素分析(C₃₁H₃₈O₈)：

计算值：C 69.13 H 7.11

实测值：C 69.08 H 7.00。

制备实施例22 4-乙氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物24)的制备

(化合物24)

乙酰二氢青蒿素和2-(4-羟基苯氧基)丙酸乙酯缩合，待反应结束，经常规处理后用硅胶柱层析分离，得到无色油状标题化合物。

元素分析(C₂₆H₃₆O₈)：

计算值：C 65.53 H 7.61

实测值：C 65.46 H 7.66。

制备实施例23 4-羧基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物25)的制备

(化合物25)

将制备实施例22所得化合物进行碱性水解，得到白色无定型固体标题化合物。

元素分析(C₂₄H₃₂O₈)：

计算值：C 64.27 H 7.19

实测值：C 64.25 H 7.40。

制备实施例24 4-邻甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物26)的制备

(化合物26)

将4-羧基-(α-甲基)次甲基苯基-二氢青蒿素醚进行羧基的芳香酯化，得到标题化合物。白色结晶，熔点，142-144℃。

元素分析(C₃₁H₃₈O₉)：

计算值：C 67.13 H 6.91

实测值：C 67.09 H 6.92。

制备实施例253-邻甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物27)的制备

(化合物27)

将3-羧基-(α-甲基)次甲基苯基-二氢青蒿素醚进行羧基的芳香酯化，得到标题化合物，为白色无定型固体。

元素分析(C₃₁H₃₈O₉)：

计算值：C 67.13 H 6.91

实测值：C 67.12 H 7.04。

制备实施例26 3-乙氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氢青蒿素醚(α型)(化合物28)的制备

(化合物28)

乙酰二氢青蒿素和2-(3-羟基苯氧基)丙酸乙酯缩合，待反应结束，经常规处理后用硅胶柱层析分离，得到无色油状的标题化合物。

元素分析(C₂₆H₃₆O₈)：

计算值：C 65.53 H 7.61

实测值：C 65.17 H 7.76。

制备实施例27 3-羧基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氢青蒿素醚(α型)(化合物29)的制备

(化合物29)

将制备实施例26所得化合物进行碱性水解，得到白色无定型固体的标题化合物。

元素分析(C₂₄H₃₂O₈)：

计算值：C 64.27 H 7.19

实测值：C 64.42 H 7.50。

制备实施例28 3-邻甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氢青蒿素醚(α型)(化合物30)的制备

(化合物30)

将制备实施例27所得游离酸酯化得标题化合物，白色无定型固体。

元素分析(C₃₁H₃₈O₉)：

计算值：C 67.13 H 6.91

实测值：C 67.52 H 7.33。

制备实施例29 3-乙氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苄基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物31)和3-乙氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苄基-二氢青蒿素醚(α型)(化合物32)的制备

(化合物31) (化合物32)

二氢青蒿素和2-(3-羟甲基苯氧基)丙酸乙酯缩合，常规处理后用硅胶柱层析分离，得到两个无色油状的标题化合物。

元素分析(C₂₇H₃₈O₈)：

计算值：C 66.10 H 7.81

(β型)实测值：C 66.31 H 7.67。

(α型)实测值：C 66.15 H 7.91。

制备实施例30 3-羧基-(α-甲基)次甲基氧苄基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物33)和3-羧基-(α-甲基)次甲基氧苄基-二氢青蒿素醚(α型)(化合物34)的制备

(化合物33) (化合物34)

将制备实施例29所得化合物进行碱性水解，得到两个标题化合物，均为白色无定型固体。

元素分析(C₂₅H₃₄O₈)：

计算值：C 64.92 H 7.41

(β型)实测值：C 64.64 H 7.61。

(α型)实测值：C 66.76 H 7.66。

制备实施例31 3-邻甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苄基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物35)的制备

(化合物35)

将制备实施例30所得β型标题化合物进行羧基的芳香酯化，得到无色油状的标题化合物。

元素分析(C₃₂H₄₀O₉)

计算值：C 67.59 H 7.09

实测值：C 67.54 H 7.17。

制备实施例32 4-乙氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苄基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物36)和4-乙氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苄基-二氢青蒿素醚(α型)(化合物37)的制备

(化合物36) (化合物37)

二氢青蒿素和2-(4-羟甲基苯氧基)丙酸乙酯缩合，常规处理后用硅胶柱层析分离，得到两个无色油状的标题化合物。

元素分析(C₂₇H₃₈O₈)：

计算值：C 66.10 H 7.81

(β型)实测值：C 66.03 H 7.70

(α型)实测值：C 66.18 H 7.49。

制备实施例33 4-羧基-(α-甲基)次甲基氧苄基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物38)和4-羧基-(α-甲基)次甲基氧苄基-二氢青蒿素醚(α型)(化合物39)的制备

(化合物38) (化合物39)

将制备实施例32所得化合物进行碱性水解，得到两个标题化合物，均为白色无定型固体。

元素分析(C₂₅H₃₄O₈)：

计算值：C 64.92 H 7.41

(β型)实测值：C 64.72 H 7.67

(α型)实测值：C 64.56 H 7.75。

制备实施例34 4-邻甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苄基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物40)

(化合物40)

将制备实施例33所得β-标题化合物进行羧基的芳香酯化，得到无色油状标题化合物。

元素分析(C₃₂H₄₀O₉)：

计算值：C 67.59 H 7.09

实测值：C 67.55 H 7.21。

制备实施例35 4-乙氧羰基-(α-甲基)次甲基氧(α-甲基)苄基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物41)和4-乙氧羰基-(α-甲基)次甲基氧(α-甲基)苄基-11-α甲基二氢青蒿素醚(化合物42)的制备

(化合物41) (化合物42)

二氢青蒿素和2-[4-(α-甲基)羟甲基苯氧基]丙酸乙酯缩合，经常规处理后用硅胶柱层析分离，得到两个无色油状的标题化合物。

元素分析(C₂₈H₄₀O₈)：

计算值：C 66.65 H 7.99

(11-β)实测值：C 66.60 H 7.88

(11-α)实测值：C 66.77 H 8.11。

制备实施例36 4-乙氧羰基甲氧苯基-二氢青蒿素醚(β型)(化合物43)的制备

(化合物43)

将4-羧甲氧苯基-二氢青蒿素醚乙酯化，得到白色无定型固体的标题化合物。

元素分析(C₂₅H₃₄O₈)：

计算值：C 64.92 H 7.41

实测值：C 64.62 H 7.40

制备实施例37 4-羧基(α-甲基)次甲基苯基-二氢青蒿素醚(β型)片剂的制备

处方如下：各组分的含量均为重量百分比

4-羧基(α-甲基)次甲基苯基-二氢青蒿素醚(β型) 35％

淀粉 25％

微晶纤维素 30％

羧甲基淀粉钠 3％

淀粉浆(10％) 6％

硬脂酸镁 1％

将活性成分粉碎，100目过筛后，与微晶纤维素、淀粉、羧甲基淀粉钠混合均匀后，加入10％淀粉浆适量，制软材；经20目筛制粒，60℃干燥后，整粒，加入润滑剂硬脂酸镁混匀，压片，即得。

制备实施例38 3-琥珀酸单酰基苯基-二氢青蒿素醚(β型)的片剂的制备

处方如下：各组分的含量均为重量百分比

3-琥珀酸单酰基苯基-二氢青蒿素醚(β型) 30％

微晶纤维素 65％

交联聚维酮 1.5％

微粉化的聚乙二醇4000 3％

微粉硅胶 0.5％

将活性成分粉碎，100目过筛后，与填充剂微晶纤维素、崩解剂交联聚维酮、润滑剂微粉化的聚乙二醇4000、助流剂微粉硅胶混合均匀后，直接压片，即得。

制备实施例39 4-(2-甲氧基苯氧)羰基(α-甲基)次甲氧基苯基-二氢青蒿素醚盐肠溶片的制备

处方如下：各组分的含量均为重量百分比

4-(2-甲氧基苯氧)羰基(α-甲基)次甲氧基苯基-二氢青蒿素 35％醚

预胶化淀粉 20％

微晶纤维素 35％

交联羧甲基纤维素钠 4％

聚维酮水溶液(8％) 4％

滑石粉 2％

将活性成分粉碎，100目过筛后，与微晶钎维素、预胶化淀粉、交联羧甲基纤维素钠混合均匀后，加入8％聚维酮水溶液适量，制软材；经20目筛制粒，60℃干燥后，整粒，加入润滑剂滑石粉混匀，压片，即得片心。

随后，对于片心采用3％羟丙甲纤维素(E5)醇的水溶液包隔离衣，直至增重8％；再用Eudragit L30D包肠溶衣至增重10％，即得。

制备实施例40 4-甲氧羰甲基苯基-二氢青蒿素醚(β型)的硬胶囊的制备

处方如下：各组分的含量均为重量百分比

4-甲氧羰甲基苯基-二氢青蒿素醚(β型) 50％

预胶化淀粉 40％

滑石粉 9％

微粉硅胶 1％

把活性成分及辅料充分混合均匀，装入空胶囊中即可。

制备实施例41 4-乙氧羰甲氧基苯基-二氢青蒿素醚(β型)的软胶囊的制备

处方如下：各组分含量均为重量百分比

4-乙氧羰甲氧基苯基-二氢青蒿素醚(β型) 45％

聚乙二醇400-1000 30％

助悬剂(10～30％油腊混合物) 25％

将活性成分研磨过筛，加其余成分、并充分混和，于制丸机中制成软胶囊。

制备实施例42 4-甲氧羰基(α-甲基)次甲基苯基-二氢青蒿素醚(β型)的凝胶剂的制备

处方如下：各组分的含量均为重量百分比

4-甲氧羰基(α-甲基)次甲基苯基-二氢青蒿素醚(β型) 5％

交联型聚丙烯酸钠 2％

聚乙二醇4000 8％

甘油 10％

苯扎溴铵 1％

水 74％

将聚乙二醇4000、甘油加热熔合后，加入研磨过筛的活性成分，混匀；另将交联型聚丙烯酸钠加入适量水(60℃)充分搅拌均匀后，将基质与活性成分、聚乙二醇4000、甘油混匀，加水至足量即得。

制备实施例43 3-(2-甲氧基苯氧)羰基(α-甲基)次甲氧基苯基-二氢青蒿素醚栓剂的制备

处方如下：各组分的含量均为重量百分比

3-(2-甲氧基苯氧)羰基(α-甲基)次甲氧基苯基-二氢青蒿素 15％醚

聚氧乙烯(40)单硬脂酸酯 85％

将活性成分研磨过筛，先加少量熔融的基质，充分研磨混和后，再与其余熔融的基质混和，保温然后注入栓剂模中。

制备实施例44 4-乙氧羰甲胺基羰基苯基-二氢青蒿素醚乳膏剂的制备

处方如下：各组分的含量均为重量百分比

4-乙氧羰甲胺基羰基苯基-二氢青蒿素醚 2.5％

单硬脂酸甘油酯 8.5％

硬脂酸 15％

白凡士林 10％

甘油 8％

吐温-80 3％

水 53％

将活性成分溶入少量的丙酮中，加入单硬脂酸甘油酯、硬脂酸、白凡士林一起加热熔融，并保持80℃，另将吐温-80、甘油和水也加热至80℃，然后慢慢加入到上述油相中，按同一方向搅拌至呈白色细腻乳膏。

制备实施例45 4-(二甲胺基乙氧羰甲氧基)苯基-二氢青蒿素醚(β型)的贴剂的制备

处方如下：各组分的含量均为重量百分比

4-(二甲胺基乙氧羰甲氧基)苯基-二氢青蒿素醚(β型) 15％

丙烯酸树脂 55％

癸二酸二丁酯 25％

丙酮 5％

以丙烯酸树脂为基质，加入处方量的增塑剂癸二酸二丁酯，并以适量丙酮为溶剂，使之混合均匀；随后再加入分散在丙酮中的活性成分，在微热条件下搅拌均匀，使成澄明溶液，均匀涂布在基材或防粘层上，60℃下烘干，按剂量分割，即得。

试验实施例

本发明的发明人采用下列方法，对本发明的青蒿素衍生物进行了体外和体内的免疫抑制活性的筛选和研究(参见：现代药理实验方法，张均田主编，北京医科大学/中国协和医科大学联合出版社，1998年出版)。

一、实验材料

试验动物：纯系Balb/c雄性小鼠，6-8周龄。

RPMI-1640培养液(购自Gibco，pH7.2)添加10％胎牛血清(FBS)、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、10mM HEPES(N-2-羟基乙酯呱嗪乙烷硫酸2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonicacid)、及50μM 2-ME(2-巯基乙醇2-Mercaptoethanol)。

刺激剂：伴刀豆蛋白(Concanavalin A，ConA)、细菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS，来自Escherichia Coli 055：B5)，临用前以RPMI-1640培养液稀释至合适浓度。

二、实验方法

A、淋巴细胞毒性实验

1、脊椎处死小鼠，无菌取其脾脏，磨碎制成单细胞悬液，用MTT溶解液(10％SDS，50％二甲基甲酰胺；pH7.2)去除红细胞后，用含10％FBS的RPMI-1640培养液将细胞浓度调成5×10⁶/mL。

2、96孔培养板中加入80μL的细胞悬液、40μL的样品、40μL含10％FBS的培养液；对照加80μL培养液，总体积为160μL，并设空白对照。

3、放入37℃、5％CO₂培养箱中培养48小时。在结束培养前6-7小时的时候，每孔加16μL的MTT(5mg/mL)。

4、结束培养时，每孔加80μL MTT溶解液(10％SDS，50％二甲基甲酰胺；pH7.2)，在培养箱中放置6-7小时后，用酶标仪于570nm处测定OD₅₇₀值。

B、淋巴细胞增殖实验

1、脱脊椎处死小鼠，无菌取脾脏制成单细胞悬液，用含10％FBS的RPMI-1640培养液将细胞浓度调成4×10⁶/mL。

2、于96孔板中加入100μL的细胞悬液、50μL的样品溶液、50μL ConA(伴刀豆蛋白，Concanavalin A)或LPS(细菌脂多糖，lipopolysaccharide)，对照孔加50μL含10％FBS的培养液。总体积为200μL。

3、于37℃、5％CO₂得培养箱中培养48小时。在结束培养前7-8小时的时候，每孔加0.5μCi[³H]-胸腺嘧啶核苷(25μL/孔)。

4.结束培养，用细胞收集仪(

，TOMTEC)收集细胞于玻璃纤维膜上，加入闪烁液，用液体闪烁记数仪(MicroBetaPerkinElmer)检测细胞DNA中[³H]-胸腺嘧啶核苷的掺入量，反映细胞增殖情况。

C、同种异体混合淋巴细胞增殖反应(MLR)

1、脱脊椎处死C57BL/6和Balb/c小鼠，无菌取其脾脏，磨碎制成单细胞悬液，去除红细胞后，用含10％小牛血清的RPMI-1640培养液将细胞浓度调成6×10⁶/mL。

2、C57BL/6脾细胞为反应细胞，Balb/c脾细胞(经钴60照射，3000rads)为刺激细胞，两种细胞等体积混合。

3、于96孔板中加入细胞混合液100μL，样品100μL，对照加100μL含10％血清的培养液。并做两种细胞的单独培养对照。

4、于37℃、5％CO₂的培养箱中培养3、4、或5天。在结束培养前1天，加入³H稀释液25μL(即，3.8×10¹⁰Bq的[³H]-胸腺嘧啶核苷)。

5、结束培养时，将培养板冻存于-20℃冰箱。

6、细胞收集仪(

，TOMTEC)收集细胞于玻璃纤维膜上，用液闪记数仪(MicroBeta

PerkinElmer)检测DNA对[³H]-胸腺嘧啶核苷的掺入量，反映细胞增殖情况。

D、细胞因子产生的诱导和检测

1、脱脊椎处死小鼠，无菌取其脾脏，磨碎制成单细胞悬液，去除红细胞后，用含10％小牛血清的RPMI-1640培养液将细胞浓度调成5×10⁶/mL。

2、于24孔板中加入细胞悬液1mL、样品及ConA(终浓度5μg/mL)或Sac(含葡萄球菌A蛋白的菌体staphylococcus aureus)(终浓度0.01％)各0.5mL，对照加0.5mL含10％小牛血清的培养液，终体积2mL。

3、于37℃、5％CO₂的培养箱中培养24或48小时后，收集培养上清，冻存于-20℃冰箱，细胞因子待测。

4、双抗夹心酶联免疫吸附实验(ELISA法)检测细胞因子的产生，以TMB作为酶反应底物，OD₄₅₀nM检测吸光度，根据标准曲线换算样品细胞因子生成量。

E、迟发性超敏反应动物模型(DTH)

1、0日时，Balb/c小鼠(雌性，6-8周龄)的每只后脚以20μL0.5％DNFB(2，4-二硝基氟苯2，4-dinitrofluorobenzene)致敏。次日加强。(DNFB溶于[丙酮∶橄榄油＝4∶1]油剂中)；

2、7-9日时，鼠左耳内外两侧各以10μL 0.4％DNFB进行攻击；

3、攻击前1小时腹腔注射或灌胃一次。12小时后，再给药一次；

4.攻击后24-48小时，检测各指标。

注：Balb/c小鼠(雌性，6-8周龄)，致敏剂浓度为0.7％，攻击剂浓度为0.6％。

F、小鼠B细胞抗羊红细胞特异性抗体的产生

1、新鲜绵羊红血细胞(SRBC，sheep red blood cells)经pH7.2PBS洗3次，1∶20稀释；

2、新鲜豚鼠血清1∶10稀释；

3、配制2×10⁷/mL小鼠脾脏细胞悬液；

4、三者分别取1mL混合，37℃，1.5小时；2500rpm×15min离心，取上清，520nM测OD值。

Balb/c小鼠在给药后第三天致敏：将羊红细胞用生理盐水洗涤三次，按5％比例稀释SRBC压积，每只小鼠腹腔注射0.2mL，于致敏后第六天解剖取脾脏细胞测定其抗体生成量。

G、大鼠佐剂性关节炎模型

雄性SD大鼠60只，随机分成5组，将灭活的BCG用灭菌的液体石蜡配成10g/L，震荡混匀，皮内注射0.1mL于大鼠左后足垫内。注射后连续观察28天，以注射对侧继发性足肿胀为关节炎发生的指征。从第12天起每隔四天用排水法测踝关节以下足体积。同时，对多发性关节炎病变的严重程度按以下标准进行评分：0：无红肿；1：小趾关节稍肿；2：趾关节和足跖肿胀；3：踝关节以下的足爪肿胀；4：包括踝关节在内全部足爪肿胀。每只大鼠的最大得分为16。从免疫前2天开始腹腔注射给药，一直持续至免疫后第28天。观察药物对佐剂性大鼠关节炎动物模型的诱发及防治。

实验发现本发明的实施例制备的化合物的淋巴细胞毒性较低，有的比对照品青蒿素和青蒿琥酯的毒性更低。同时，这一系列化合物都能显著抑制T和B淋巴细胞受丝裂原诱导而引发的增殖反应。附表中列出了一些化合物的半数淋巴细胞毒性值(CC₅₀，其数值越大毒性越低)，以及在抑制ConA诱导T淋巴细胞和LPS抑制B淋巴细胞的增殖反应的半数抑制活性浓度(IC₅₀，其数值越小抑制活性就越强)，可以看出有些化合物的免疫抑制活性明显好于对照品青蒿素和青蒿琥酯。具体试验结果，请参见以下表1。

表1

有多个化合物经体内用药(腹腔用药)后可显著抑制二硝基氟苯诱发的小鼠耳肿胀反应和绵羊红细胞引起的小鼠特异性抗羊红细胞抗体的分泌，表明这些化合物在体内的实验系统中显示了良好的免疫抑制活性。

例如，以制备实施例3中制备的3-琥珀酸单酰基苯基-二氢青蒿素醚(β型)(SM735)进行药理学试验。如图1所示，如图1中的A所示，用MTT方法检测SM735与BALB/c小鼠脾细胞共培养48小时的细胞毒性，CC₅₀为53.1±7.8μM。如图1中的B所示，SM735抑制ConA诱导的脾细胞48小时增殖反应，IC₅₀为0.33±0.06μM。如图1中的C所示，SM735抑制LPS诱导的脾细胞48小时增殖反应，IC₅₀为0.27±0.02μM。如图1中的D所示，SM735抑制单向混合淋巴细胞反应，IC₅₀为0.86±0.18μM。用丝裂霉素C灭活的BALB/c小鼠脾细胞与C57BL/6小鼠脾细胞共培养96小时，加入SM735。三次不同的实验显示相同的结果。所有数据显示为平均数±标准误。数据经过对数化处理后用

统计软件进行计算。相关系数，(A)R²＝0.960；(B)R²＝0.993；(C)R²＝0.997；(D)R²＝0.984。如图2所示，BALB/c小鼠在实验起始日和第一天以2，4-二硝基氟苯致敏，第九天进行攻击。实验第7～10天给予溶剂对照，环孢霉素A和SM735，持续给药4天。攻击后48小时取耳片，测定耳肿胀度，即左耳片体积(DNFB处理)减去右耳片体积(未处理)。数据显示为平均值±标准误，^*P＜0.05，^**P＜0.01，n＝10小鼠/组。三次独立实验显示相同的结果。如图3所示，用绵羊红细胞免疫BALB/c小鼠，测定小鼠B淋巴细胞产生抗体的能力。每组(6只)小鼠分别给予溶剂对照，25mg/kg的环磷酰胺或SM735，持续给药四天。小鼠脾细胞悬液与绵羊红细胞及豚鼠补体在37℃共孵育半小时。用520nm波长测定培养上清的吸光度反映B淋巴细胞产生抗体的能力。数据显示平均值±标准误。^*P＜0.05，^**p＜0.01(双尾Student’s t-test)。

试验结果表明3-琥珀酸单酰基苯基-二氢青蒿素醚(β型)(SM735)具有如下体内外免疫抑制活性：

1)非特异性淋巴细胞毒性非常低，CC₅₀(Cytotoxicity concentration50％；半数细胞毒性浓度)值为53.1±7.8μM，IC₅₀为27μg/mL(图1A)；

2)强烈抑制ConA诱导的T细胞增殖反应，IC₅₀(Inhibitoryconcentration半数抑制浓度)值为0.33±0.06μM，IC₅₀为0.13μg/mL(图1B)；

3)强烈抑制LPS诱导的B细胞增殖反应，IC₅₀值为0.27±0.02μM，IC₅₀为0.12μg/mL(图1C)；

4)强烈抑制同种异体混合淋巴细胞培养引起增殖反应，IC₅₀值为0.86±0.18μM，IC₅₀为2.1μg/mL(图1D)；

5)对淋巴细胞激活时细胞因子的分泌有抑制作用，用PMA刺激时，对TNF-α，尤其是IL-6的产生抑制明显，呈剂量依赖性，对IFN-γ和IL-12这两种重要的Th1型T细胞分化促进因子的产生也有抑制作用(结果参见表2)；

6)在体内用药可抑制小鼠B细胞(抗体形成细胞)的抗体和补体产生(图2)；

7)能抑制DNFB诱导DTH反应(图3)；

8)在佐剂性大鼠关节炎动物模型中有一定的防治作用(图4)。

表2SM735对被激活的脾淋巴细胞产生细胞因子的影响

注：刺激物与BALB/c小鼠脾细胞共培养24小时。培养上清用ELISA方法测定其中细胞因子的产生。数据显示平均值±标准误。^*p＜0.05，^**p＜0.01(双尾Student’s t-test)。

Claims

1.一类具有以下结构式I所示结构的青蒿素衍生物，

其中，

X为O、O(CH₂)_n或OCHR₁，其中所述R₁为C₁-C₄烃基、CN、COOH、COOMe、或COOEt，n为1～4；

P为Ar-Y-Z，其中，

Ar为苯基；

Y为O(CH₂)_n、OCHMe、或C₁-C₄烃基，其中n为1～4；

Z为H、卤素、OR’、COOR’或CONH CH₂COOR’，其中R’为H、C₁-C₄烷基、邻甲氧基苯基或C₁-C₄烷胺基；

且在X为O，P为Ar-Y-Z，Ar为苯基，Y为OCH₂或CH₂CH₂，Z为COOR’，X与Y处于苯基上的间位和对位时，R’不为H或甲基。

2.如权利要求1所述的青蒿素衍生物，其特征在于，

X为O或OCH₂；

P为Ar-Y-Z，其中，

所述Ar为苯基；

Y为O(CH₂)_n、OCHMe，C₁-C₄烃基，其中n为1或2；

Z为COOR’，其中，所述R’为H、Me、Et或邻甲氧基苯基。

3.如权利要求1所述的青蒿素衍生物，其特征在于，所述青蒿素衍生物为：4-甲氧羰甲基苯基-二氢青蒿素醚、4-羧基甲基苯基-二氢青蒿素醚、4-乙氧羰甲氧基苯基-二氢青蒿素醚、3-琥珀酸单酰基苯基-二氢青蒿素醚、4-乙氧羰甲胺基羰基苯基-二氢青蒿素醚、4-甲氧羰基(α-甲基)次甲基苯基-二氢青蒿素醚、4-邻甲氧基苯氧羰基(α-甲基)次甲基苯基-二氢青蒿素醚、4-乙氧羰基(α-甲基)次甲基氧苯基-二氢青蒿素醚、4-羧基(α-甲基)次甲基氧苯基-二氢青蒿素醚、4-邻甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氢青蒿素醚、3-邻甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氢青蒿素醚、4-羧基-(α-甲基)次甲基苯基-二氢青蒿素醚或3-乙氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氢青蒿素醚。

4.一种制备权利要求1所述的青蒿素衍生物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

2)然后将二氢青蒿素的醚类产物水解，得到游离酸形式的中间产物；

3)将步骤2)中的游离酸形式的中间产物制备为终产物，

或者，该方法包括以下步骤：

2)然后进一步修饰上述具有结构式IV所示结构的化合物，生成终产物，

5.一种药物组合物，其特征在于，包括安全、有效剂量的权利要求1所述的青蒿素衍生物或其药用盐，和药学上可接受的载体。

6.如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括1～85wt％的权利要求1中所述的青蒿素衍生物或其药用盐、15～99wt％的赋形剂、0～60wt％的其它常规辅料。

7.权利要求5所述药物组合物，其特征在于，所述药物组合物被制备为经口服、经胃肠外、经鼻、经舌、经眼、经呼吸道或经直肠给药的剂型。

8.如权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述剂型为片剂、肠溶丸、舌下片剂、贴剂、栓剂、霜剂、油膏剂、或皮肤用凝胶剂。

9.一类具有以下结构式I所示结构的青蒿素衍生物在制备用于治疗或预防免疫系统疾病的药物中的应用，

其中，

P为Ar-Y-Z或Ar-Z，其中，

Ar为苯基或萘基；

Y为O(CH₂)_n、OCHMe、或C₁-C₄烃基，其中n为1～4；

10.权利要求5所述的药物组合物在制备用于治疗或预防免疫系统疾病的药物中的应用。