CN101102788A

CN101102788A - 移植器官纤维化抑制剂

Info

Publication number: CN101102788A
Application number: CNA200580046955XA
Authority: CN
Inventors: 天野纯; 伊藤研一; 山浦一宏; 松本邦夫; 中村敏一
Original assignee: Kringle Pharma Inc
Current assignee: Kringle Pharma Inc
Priority date: 2005-01-24
Filing date: 2005-09-09
Publication date: 2008-01-09
Also published as: US8076289B2; EP1852124A4; US20100137217A1; WO2006077675A1; US7696170B2; EP1852124A1; CA2594629C; CA2594629A1; JPWO2006077675A1; US20080274960A1; US8383588B2; JP2011173900A; US20120149642A1

Abstract

本发明涉及一种可在器官移植之后抑制移植器官纤维化的药剂，该药剂含有肝细胞生长因子或编码所述肝细胞生长因子的DNA等。该药剂可用于器官移植领域和再生医学领域。

Description

移植器官纤维化抑制剂

技术领域

本发明涉及一种含有肝细胞生长因子(下文简称为“HGF”)的药剂，该药剂可用于抑制由长期给予免疫抑制剂引起的移植器官纤维化。此外，本发明特别涉及含有HGF中的缺失5个氨基酸的HGF的免疫耐受获得剂，该免疫耐受获得剂可以使器官移植患者获得免疫耐受。

背景技术

器官移植作为一种医疗实践已建立起来，其除了器官替换以外不提供治疗作用。但是，近年来，根据器官移植存活数的增加以及对器官移植接受者或进行过器官移植的患者的追踪调查等显示人们对器官移植后随时间推移移植器官逐步纤维化的问题更为关注。在器官移植中，使用免疫抑制剂以抑制移植片或移植组织的排异反应。除了自体移植外，患者必须在一生中持续服用免疫抑制剂，在连续服用免疫抑制剂的情况下发现移植器官的纤维化。虽然还有待阐明免疫抑制剂与移植器官纤维化之间的因果关系，但迄今为止尚未获知给予免疫抑制剂时抑制移植器官纤维化的方法。

迄今认为患者必须在其一生中持续服用免疫抑制剂，因为这种免疫抑制剂对于移植片或移植组织的植入十分必要。尤其是免疫抑制剂环孢霉素和FK506(他克莫司，Taclolimus)以其强有力的免疫抑制活性，在器官(例如肾脏、肝脏、心脏、胰脏等)移植后抑制移植排异反应中获得极好效果，引起了更多的关注。即其可以显著降低器官移植后的急性排异反应发生率，并且，在器官移植中经常应用减少骨髓抑制发生率的环孢霉素等，可以提供如下优点：能防止由白细胞数目减少引起的严重感染的发展，从而使器官移植后的管理变得更容易，因而能够显著提高器官移植的存活性能。但是，也注意到这些免疫抑制剂例如环孢霉素等生产副作用或有害反应，包括除移植部位之外的部位或全身性副作用或有害反应，例如肾毒性、肝毒性、神经病、高血压、股骨头坏死、白内障、糖尿病、急性胰腺炎、巨细胞病毒感染等。已知HGH能够减轻由免疫抑制剂引起的这些全身性副作用(参见特开平08-89869号公报)。HGF是由本发明者Nakamura等人发现的蛋白质，其存在于大鼠再生肝脏的血清中，并发现其能作为在体外增殖成熟肝细胞的因子(参见Biochemical and Biophysical Research Communications，1984，122卷，1450-1459页)。此外，Nakamura等人成功地从大鼠的血小板中分离得到HGF(参见Proc.Natl.Acad.Sci.，1986，83卷，6489页和FEBS Letters，1987，22卷，311页)，并部分鉴定了其氨基酸序列。随后，Nakamura等人根据已阐明的氨基酸序列克隆了来自人和大鼠HGF的cDNA，并用DNA重组技术将得到的cDNA导入动物细胞中成功地制备出蛋白质形式的HGF(例如，参见Nature，1989，342卷，440-443页)。

但是，上述这些文献都没有提及HGF抑制移植器官的纤维化。

发明内容

本发明涉及一种在长期给予免疫抑制剂的器官移植患者中，用于抑制移植器官逐渐纤维化以及诱发器官机能不全的药剂。此外，本发明还涉及一种免疫耐受获得剂，当将器官从供体移植到接受者时，使器官移植患者获得对移植排异反应具有免疫耐受的免疫耐受获得剂。

本发明者发现给予HGF可以在接受器官移植的动物中成功抑制移植器官纤维化，并且给予缺失5个氨基酸的HGF使接受器官移植的动物获得对移植器官的免疫耐受。基于这些发现，本发明者进行了进一步的研究，从而完成了本发明。

即本发明涉及：

(1)一种由给予免疫抑制剂引起的移植器官纤维化抑制剂，其特征在于：所述移植器官纤维化抑制剂含有HGF。

(2)如(1)所述的移植器官纤维化抑制剂，其特征在于：所述HGF是含有SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽、含有与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列实质相同的氨基酸序列的肽且该肽作为HGF或者其部分多肽作为HGF的肽；

(3)一种由给予免疫抑制剂引起的移植器官纤维化抑制剂，其特征在于：所述移植器官纤维化抑制剂含有编码HGF的DNA分子；

(4)如(3)所述的移植器官纤维化抑制剂，其特征在于：所述编码HGF的DNA分子是含有SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子，或者是在严格条件下与含有互补于所述的含有SEQ IDNO：3或SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子的碱基序列的DNA分子杂交并编码作为HGF的肽的DNA分子；

(5)如(1)-(4)任一项所述的移植器官纤维化抑制剂，其特征在于：所述免疫抑制剂是他克莫司；

(6)一种免疫耐受获得剂，其特征在于：所述免疫耐受获得剂包含含有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽、含有与SEQ ID NO：2所示氨基酸序列实质相同的氨基酸序列的肽且该肽作为HGF或者其部分多肽作为HGF的肽；以及

(7)一种免疫耐受获得剂，其特征在于：所述免疫耐受获得剂含有SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子，或者是在严格条件下与含有互补于所述的含有SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子的碱基序列的DNA分子杂交并编码作为HGF的肽的DNA分子。

本发明还涉及：

(8)一种用于抑制移植器官纤维化的方法，其特征在于：所述方法包括向进行了器官移植并接受着免疫抑制剂治疗的哺乳动物给予HGF；

(9)如(8)所述的方法，其特征在于：所述HGF是含有SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽、或含有与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列实质相同的氨基酸序列的肽且该肽作为HGF或者其部分多肽作为HGF的肽；

(10)一种用于抑制移植器官纤维化的方法，其特征在于：所述方法含有向进行了器官移植并接受着免疫抑制剂治疗的哺乳动物给予编码HGF的DNA分子；

(11)如(10)所述的方法，其特征在于：所述编码HGF的DNA分子是含有SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子，或者是在严格条件下与含有互补于所述的含有SEQ ID NO：3或SEQ IDNO：4所示碱基序列的DNA分子的碱基序列的DNA分子杂交并编码作为HGF的肽的DNA分子；

(12)如(8)-(11)的任一项所述的方法，其特征在于：所述免疫抑制剂是他克莫司；

(13)一种使接受器官移植的哺乳动物获得免疫耐受的方法，其特征在于：所述方法包括向将要进行器官移植的哺乳动物给予含有SEQ IDNO：2所示氨基酸序列的肽、含有与SEQ ID NO：2所示氨基酸序列实质相同的氨基酸序列的肽且该肽作为HGF或者其部分多肽作为HGF的肽；以及

(14)一种使接受器官移植的哺乳动物获得免疫耐受的方法，其特征在于：所述方法含有向将要进行器官移植的哺乳动物给予含有SEQ IDNO：4所示碱基序列的DNA分子，或者给予在严格条件下与含有互补于所述的含有SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子的碱基序列的DNA分子杂交并编码作为HGF的肽的DNA分子。

此外，本发明涉及：

(15)HGF在制备用于抑制由免疫抑制剂给药引起的移植器官纤维化的药剂中的应用；

(16)如(15)所述的应用，其特征在于：所述HGF是含有SEQ IDNO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽、含有与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列实质相同的氨基酸序列的肽且该肽作为HGF或者其部分多肽作为HGF的肽；

(17)编码HGF的DNA分子在制备用于抑制由免疫抑制剂给药引起的移植器官纤维化的药剂中的应用；

(18)如(17)所述的应用，其特征在于：编码HGF的DNA分子是含有SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子，或者是在严格条件下与含有互补于所述的含有SEQ ID NO：3或SEQ IDNO：4所示碱基序列的DNA分子的碱基序列的DNA分子杂交并编码作为HGF的肽的DNA分子；

(19)如(15)-(18)的任一项所述的应用，其特征在于：所述免疫抑制剂是他克莫司；

(20)HGF在制备用于使器官移植患者获得对移植器官具有免疫耐受的药剂中的应用；

(21)如(20)所述的应用，其特征在于：所述HGF是含有SEQ IDNO：2所示氨基酸序列的肽、含有与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列实质相同的氨基酸序列的肽且该肽作为HGF或者其部分多肽作为HGF的肽；

(22)编码HGF的DNA在制备用于使器官移植患者获得对移植器官具有免疫耐受的药剂中的应用；以及

(23)如(22)所述的应用，其特征在于：所述DNA是含有SEQ IDNO：4所示碱基序列的DNA分子，或者是在严格条件下与含有互补于所述的含有SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子的碱基序列的DNA分子杂交并编码作为HGF的肽的DNA分子。

本文使用的术语“纤维化”指在移植器官中过度蓄积细胞外基质物质例如胶原纤维，导致该移植器官的病态硬化，而术语“免疫耐受”指抑制由接受者的免疫系统产生的破坏行为，以使在器官移植期间供体的细胞或组织等可以不受接受者免疫系统的攻击。

对于进行了器官移植并长期给予免疫抑制剂的动物，本发明的移植器官纤维化抑制剂对移植器官的纤维化起抑制作用，可以阻止移植器官逐渐纤维化而最终导致器官机能不全。

可以在将供体的器官移植后，立即将本发明的免疫耐受获得剂给予接受移植的动物(患者)，从而使接受移植的动物(患者)获得对于该移植器官的免疫耐受，结果可以抑制对于该移植器官的排异反应。本发明的免疫耐受获得剂可以给予接受移植的动物，使该动物获得对于供体的免疫耐受，从而能诱导该动物获得其后对于供体或供体器官的任何免疫应答不产生反应的状态，并可以降低免疫抑制剂的剂量或中止给予这类药物。此外，器官移植之前，在植入移植器官以外的供体组织(例如下述的免疫相关组织等)的同时，向接受者给予本发明的免疫耐受获得剂，从而使接受者获得对于供体器官的免疫耐受。或者，器官移植之前，在植入接受者的组织(例如下述的免疫相关组织等)的同时，向供体给予该免疫耐受获得剂，从而使供体获得对接受者的免疫耐受。通过上述方法中的任意一种获得免疫耐受，可以在由于没有或缺少组织相容性抗原配对而迄今不能实行器官移植的供体和接受者之间进行器官移植。同时，在已获得对供体具有免疫耐受的接受者体内移植供体的器官，或者所述接受者从已获得对接受者具有免疫耐受的供体移植了器官，使得器官移植之后的排异反应得到抑制或降低。上述排异反应的抑制或降低可以中止免疫抑制剂的给予或使其剂量减少。此外，本发明中使用的术语“动物”是指人等哺乳动物。

附图说明

图1表示在移植之后60天仍存活的小鼠中，移植心脏的病理学照片(A)，以及显示移植心脏纤维化部分的面积与冠状横截面总面积的比值(B)。

图2表示将BALB/c小鼠的长着白毛的皮肤植入到C3H/He小鼠的长着黑毛的皮肤的图。

具体实施方式

用于本发明的HGF是已知物质，只要能将其纯化为可用作药剂的程度，可使用各种方法进行制备。作为制备HGF的方法，例如培养生产HGF的初级培养细胞和细胞株，随后从上清液中分离并纯化可得到HGF。或者按照遗传工程方法将编码HGF的基因插入适当的载体中，随后导入适当的宿主细胞中进行转化，培养转化体，随后从上清液中分离得到靶重组体HGF(例如，参见特开平5-111382号公报，Biochem.Biophys.Res.Commun.，1989，163卷，967页等)。对上述宿主细胞没有特别地限制，并可使用如在遗传工程方法中通常使用的各种宿主细胞，例如大肠杆菌、酵母或动物细胞等。只要具有与天然HGF实质相同的作用，可以使氨基酸序列中的一个到多个(例如几个(例如1-8个)；在下文中作相同的理解)氨基酸发生取代、缺失或添加，由此获得HGF变体，并可使糖链发生类似地取代、缺失或添加。该HGF变体可以下述的5个氨基酸缺失型HGF为例。本文中，对于氨基酸序列中的所述短语“使一个到多个氨基酸发生取代、缺失或添加”理解为根据例如遗传工程方法、位点特异性诱变方法等众所周知的操作方法，或者天然地使其缺失、取代或添加上述数目(一个到几个)。短语“糖链发生取代、缺失或添加的HGF”是指例如对添加在天然HGF上的糖链使用酶等处理使糖链缺失的HGF、以不添加糖链的方式使糖链添加位点的氨基酸序列发生突变的HGF、或以在不同于天然的糖链添加位点上添加糖链的方式使氨基酸序列发生突变的HGF。

所述变体HGF还包括与HGF的氨基酸序列至少具有约80％或更高同源性，优选至少约90％同源性，更优选至少约95％同源性的氨基酸序列的蛋白质，其可作为HGF。在上述氨基酸序列中的术语“同源性”是指当比较蛋白质的一级结构时，根据构成各自序列的氨基酸残基得到的氨基酸序列之间一致或相符的程度。

上述HGF包括，例如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。由SEQ ID NO：2表示的HGF是5个氨基酸缺失型HGF，其在由SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的位点161-165处缺失5个氨基酸。具有由SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的两个蛋白质分别是来自人的天然HGF，其与HGF一样，具有促细胞分裂剂活性和促细胞移动剂活性等。

含有与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列实质相同的氨基酸序列的肽优选含有与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列至少约80％或更高同源性，优选至少约90％同源性，更优选至少约95％同源性的氨基酸序列的肽，例如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列中的一个到几个氨基酸残基被不同的氨基酸残基插入、缺失或取代产生的肽，其可以作为HGF。插入或取代的氨基酸可以是基因编码的20种氨基酸之外的非天然氨基酸。只要其具有氨基和羧基，所述非天然氨基酸可以是任何氨基酸，可以γ-氨基丁酸等为例。

上述每种肽可以作为单一成分或其混合物使用。

用于本发明的HGF可以在C末端具有羧基(-COOH)、羧化物(-COO-)、酰胺基(-CONH₂)或酯(-COOR)基团。本文中，酯基所用的R可以C_1-6烷基基团，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基等；C_3-8环烷基基团，例如环戊基、环己基等；C_6-12芳基基团，例如苯基、α-萘基等；C_7-14芳烷基基团，例如苯基-C_1-2烷基基团，例如苯甲基、苯乙基等，或α-萘基-C_1-2烷基基团，例如α-萘甲基等为例，以及新戊酰氧甲基(pivaloyloxymethyl)经常用作口服制剂的酯。如果用于本发明的HGF在除了C末端以外的位点具有羧基(或羧化物)，将其羧基酰胺化或酯化的HGF也包括在本发明的HGF之内，其中该酯包括上述C末端酯等。此外，在上述蛋白质中，用于本发明的HGF包括将其N末端甲硫氨酸残基的氨基用保护基(例如，C_1-6酰基基团，例如包括甲酰基和乙酰基在内的C_2-6烷酰基基团等)保护的蛋白质、通过体内截短N末端侧所产生的谷氨酰基基团转变为焦谷氨酸的蛋白质、或者将其分子内的氨基酸侧链上的取代基(例如，-OH、-SH、氨基、咪唑基、吲哚基、胍基等)用适当的保护基(例如酰基，例如包括甲酰基和乙酰基的C_2-6烷酰基等)保护的蛋白质、或者例如结合了糖链的糖蛋白等结合蛋白质等。

只要用于本发明的HGF的部分多肽(在下文中在有些情况下简称“部分多肽”)是上述HGF的部分多肽，其可以是任意肽。本发明的所述的部分多肽的氨基酸数目为含有不少于来自上述HGF的构成氨基酸序列的约20个氨基酸，优选不少于约50个氨基酸，更优选不少于约100个氨基酸的肽。本发明的部分多肽在其C末端可以具有羧基(-COOH)、羧化物(-COO-)、酰胺(-CONH₂)和酯(-COOR)基团。此外，本发明的部分多肽与上述HGF相同，所述HGF包括其N末端甲硫氨酸残基的氨基用保护基保护的肽、通过体内截短N末端侧所产生的谷氨酰基基团转变为焦谷氨酸的肽、其分子内的氨基酸侧链上的取代基用适当的保护基保护的肽，或者结合了糖链的糖肽等结合肽等。

用于本发明的HGF及其部分多肽的盐可以添加了酸或碱的生理学可接受的盐为例，优选其中生理学可接受的酸加成盐。所述的酸加成盐盐包括：例如无机酸(例如盐酸、磷酸、氢溴酸、硫酸等)的盐，或有机酸(例如乙酸、甲酸、丙酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、草酸、苯甲酸、甲磺酸、苯磺酸等)的盐。

用于本发明的HGF的部分多肽或者其盐可以根据已知的肽合成法或通过适当的肽酶截短HGF进行制备。所述肽合成法可以是例如固相合成方法和液相合成方法。因此，如果存在保护基时，可以使组成HGF的部分多肽或氨基酸与其残余部分缩合，随后从缩合物中脱除所有保护基，可得到目标肽。已知的缩合和保护基脱除方法包括，例如M.Bodanszky和M.A.Ondetti，Peptide Synthesis，Interscience Publishers，NewYork(1966)，Schroeder和Luebke，The peptide，Academic Press，NewYork(1965)等记载的方法。在反应完成之后，将通常使用的纯化方法例如溶剂萃取、蒸馏、柱层析、液相色谱、重结晶等组合使用以分离和纯化HGF的部分多肽。当通过上述方法获得的部分多肽以游离态存在时，可使用已知的方法将该肽转变为适当的盐，或者相反地，当部分多肽以盐的形式存在时，可使用已知的方法将其转变为游离态。

在本发明中，可以含有编码HGF的DNA分子作为活性成分。

编码HGF的DNA分子包括，例如，含有SEQ ID NO：3或SEQ IDNO：4所示碱基序列的DNA分子，或者是在严格条件下与含有互补于所述的含有SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子的碱基序列的DNA分子杂交并且编码显示与HGF活性(例如促细胞分裂剂活性和促细胞移动剂活性等)实质相同的蛋白质的DNA分子。此外，与所述的含有SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子相杂交的DNA分子，是指例如以上述DNA分子作为探针进行菌落杂交、噬斑杂交或Southern印迹杂交等得到的DNA分子。具体地说，可涉及例如如下DNA分子：在约65℃、约0.7-1.0M氯化钠浓度范围内，使用固定有来自菌落或噬斑的DNA分子的滤器进行杂交后，使用约0.1-2倍浓度的SSC溶液(一倍浓度或标准浓度的SSC溶液由150mM的氯化钠和15mM的柠檬酸钠组成)，在约65℃条件下洗涤该滤器所鉴定出的DNA分子。

上述与含有SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA杂交的DNA分子的具体实例，包括显示与SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示碱基序列不少于约80％同源性，优选不少于约90％同源性，更优选不少于约95％同源性的DNA分子等。可根据已知的方法来进行杂交，例如在Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Third Edition(J.Sambrook等，Cold Spring Harbor Lab.Press，2001：下文简称为“MolecularCloning 3rd Edition”)中记载的方法等进行杂交。当使用商购的文库时，可根据其所附的使用说明书记载的方法进行杂交。

此外，本发明编码HGF的DNA分子不限于上述DNA分子，只要表达的蛋白显示与HGF实质相同的活性，都可用作编码HGF的DNA分子。例如，只要编码作为HGF的部分多肽，该DNA分子也属于本发明的保护范围。只要编码HGF部分多肽的DNA分子含有编码上述部分多肽的碱基序列，其可以是任意DNA分子。另外，其可以是基因组DNA、基因组DNA文库、上述源自细胞/组织的cDNA、上述源自细胞/组织的cDNA文库以及合成的DNA分子。文库中使用的载体可以是噬菌体、质粒、黏粒和噬菌粒的任意一种。从上述细胞/组织中制备的mRNA部分可通过RT-PCR直接进行扩增。本发明的编码部分多肽的DNA分子的具体实例包括：(a)包含含有SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA的部分碱基序列的DNA分子；(b)在严格条件下与含有互补于所述的含有SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子的部分碱基序列的DNA分子杂交且编码具有与HGF的活性实质相同的蛋白质的DNA分子；或者(c)含有如上述(a)或(b)所述的部分碱基序列的DNA分子等。

所述DNA可通过例如常规的杂交和PCR方法等容易地获得，具体可参考如上述Molecular Cloning等工具书进行。

此外，如果RNA分子能通过反转录酶表达本发明有用的HGF或其部分多肽，该编码HGF或其部分多肽的RNA分子也可用于本发明并属于本发明的保护范围。该RNA分子也可通过已知方法获得。

本发明的移植器官纤维化抑制剂或免疫耐受获得剂可用于人类，也可用于哺乳动物(例如：牛、马、猪、羊、狗、猫等)。

此外，所述移植器官纤维化抑制剂可适用的器官包括例如心脏、肾脏、肝脏、小肠、胰脏、皮肤或角质层，其中优选心脏。此外，本发明的免疫耐受获得剂除适用于上述移植器官外，还适用于造血细胞等的移植。

本发明的移植器官纤维化抑制剂或免疫耐受获得剂可采用各种剂型，例如液体制剂、固体制剂或胶囊剂等，其中通常将HGF单独或与常规载体一起制成注射剂、吸入剂、栓剂或口服制剂。所述注射剂可为水性注射剂或油性注射剂。制备水性注射剂时，可根据已知的方法，例如将水性溶剂(注射用水、净化水等)与药学可接受的添加剂适当混合在溶液中，将HGF溶解后，通过过滤器等过滤灭菌，并注入无菌容器中进行制备，所述添加剂包括例如等渗剂(氯化钠、氯化钾、甘油、甘露醇、山梨醇、硼酸、硼砂、葡萄糖、丙二醇等)、缓冲剂(磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、Tris缓冲液、谷氨酸盐缓冲液、ε-氨基己酸盐缓冲液等)、防腐剂(对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、氯代丁醇、苯甲醇、氯化苯甲烃铵、脱氢醋酸钠、乙二胺四乙酸四钠、硼酸、硼砂等)、增稠剂(羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚乙烯醇、聚乙二醇等)、稳定剂(例如亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、乙二胺四乙酸四钠、柠檬酸钠、抗坏血酸、二丁基羟基甲苯等)或pH调节剂(盐酸、氢氧化钠、磷酸、乙酸等)等。此外，可使用适当的增溶剂，例如醇类(乙醇等)、多元醇类(丙二醇、聚乙二醇等)或非离子型表面活化剂(聚山梨酯80、聚氧乙烯硬化蓖麻油50等)等。制备油性注射剂时，可使用油性溶剂，例如芝麻油或大豆油等，可使用增溶剂例如苯甲酸苄酯或苯甲醇等。制备的注射剂通常注入适宜的安瓿或小玻璃瓶中。通常将注射剂中HGF的含量调节为约0.0002-0.2w/v％，优选为约0.001-0.1w/v％。此外，注射剂等液体制剂最好通过冰冻或冻干等方法除去水分进行保存。在使用冷冻干燥的制剂时，加入注射用蒸馏水等，使其重新溶解后使用。

此外，口服制剂可以如下剂型为例：片剂、颗粒剂、微粒剂、散剂、胶囊剂、液体制剂、乳剂、悬浮剂或糖浆剂等。根据已知方法制备这些制剂。制备颗粒剂或片剂时，通过使用药学上可接受的添加剂制备，例如赋形剂(乳糖、白糖、葡萄糖、淀粉、结晶纤维素等)、润滑剂(硬脂酸镁、滑石、硬脂酸、硬脂酸钙等)、崩解剂(淀粉、羧甲基纤维素钠、碳酸钙等)或粘合剂(淀粉糊溶液、羟丙基纤维素溶液、羧甲纤维素溶液、阿拉伯树胶溶液、明胶溶液、海藻酸钠溶液等)等。此外，颗粒或片剂可具有使用适当的包衣剂(明胶、白糖、阿拉伯树胶、巴西棕榈蜡等)或肠溶包衣剂(邻苯二甲酸醋酸纤维素、甲基丙酸烯酸共聚物类、羟丙基纤维素邻苯二甲酸酯、羧甲基乙基纤维素等)等制备的涂层。制备胶囊剂时，使用适当的已知赋形剂例如硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石或轻质二氧化硅以增加流动性和润滑性，使用结晶纤维素和乳糖以提高加压流动性，或使用上述崩解剂等。可将HGF与上述赋形剂均匀混合或制成颗粒状，或使用适当的包衣剂对上述粒化颗粒进行包衣，随后装入胶囊或在胶囊基质中进行包封成型，所述胶囊基质为向适宜的胶囊基质(明胶等)中加入甘油或山梨醇等增塑后的胶囊基质。所述胶囊剂可加入着色剂或防腐剂(二氧化硫、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯等)等。所述胶囊剂可为普通胶囊剂的形式，也可为肠溶性包衣胶囊剂、胃内抵抗性胶囊剂或控释胶囊剂。对于肠衣胶囊，在将包有肠溶性包衣剂的HGF或与适当的赋形剂混合的HGF装入普通的胶囊中。或者，可以将HGF或者与适当的赋形剂混合的HGF装入包有肠溶性包衣剂的胶囊或以肠溶性聚合物为基质成型的胶囊中。制备糖浆剂时，可适当选用例如稳定剂(乙二胺四乙酸四钠等)、悬浮剂(阿拉伯树胶、羧甲纤维素等)、矫味剂(例如，单糖浆、葡萄糖等)或芳香剂等。

此外，可以使用常规的基质(例如可可脂、月桂脂、甘油胶冻、聚乙二醇、whitep sol等)通过常规的药物制备方法制备栓剂。

此外，可以通过常规的药物制备方法制备吸入剂。制备吸入剂时，使用的添加剂可为任意用于制备吸入剂的添加剂，并使用例如除喷射剂外的上述赋形剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、稳定剂、等渗剂、pH调节剂或矫味剂(柠檬酸、薄荷醇、甘草酸胺、甘氨酸、香料等)等。所述喷射剂可使用液化气体喷射剂或压缩气体等。所述液化气体喷射剂以氟代烃类(氟利昂类替代物等，例如HCFC22、HCFC-123、HCFC-134a、HCFC142等)、液化石油气、二甲醚为例。所述压缩气体包括例如可溶性气体(二氧化碳气体、氮的低氧化物气体等)或不溶性气体(氮气等)等。

可将本发明使用的HGF与生物体内可降解聚合物制备为缓释制剂。特别是当制备该缓释制剂时，可预期HGF会产生有益的效果，例如血药浓度的持续维持、给药次数的减少和副作用的减轻等。例如，所述缓释制剂可根据如ドラツグデリバリ一システム，第3章(CMC出版，1986)记载的已知方法制备。该缓释制剂中使用的生物体内可降解聚合物可在已知的生物体内可降解聚合物中适当选择，可以是多糖类，例如淀粉、右旋糖酐或壳聚糖等；蛋白质类，例如胶原或明胶等；聚氨基酸类，例如聚谷氨酸、聚赖氨酸、聚亮氨酸、聚丙氨酸或聚甲硫氨酸等；聚酯类，例如聚乳酸、聚羟基乙酸、乳酸/羟基乙酸的聚合物或共聚物、聚己内酯、聚(β-羟基丁酸)、聚苹果酸、多元酸酐或反丁烯二酸/聚乙烯乙二醇/乙烯吡咯烷酮的共聚物；聚烷基氰基丙烯酸类，例如聚原酸酯类或聚(甲基-α-氰基丙烯酸酯)；聚碳酸酯类，例如聚碳酸亚乙基酯或聚碳酸亚丙基酯等为例。优选聚酯类，更优选聚乳酸或乳酸/羟基乙酸的聚合物或共聚物。使用乳酸/羟基乙酸的聚合物或共聚物时，其组分的比例(乳酸/羟基乙酸)(摩尔％)随缓释时间而变化，当缓释时间为例如约2周-3个月时，优选约2周-1个月时，上述比例从约100/0-50/50变化。所述乳酸/羟基乙酸的聚合物或共聚物的重均分子量通常为约5,000-20,000。例如可通过已知的生产方法，例如特开昭61-28521号公报记载的方法制备乳酸/羟基乙酸的共聚物。对生物体内可降解聚合物与HGF的配比没有特别地限制，例如相对于生物体内可降解聚合物，HGF约占0.01-30w/w％。

上述各种剂型中的HGF含量可以依据剂型、治疗疾病、疾病的严重程度或患者的年龄等适当调整。

可根据常规使用方法将编码HGF的DNA给予患者。所述方法例如如下所记载的方法：別冊実験医学、遺伝子治療の基礎技術、羊土社、1996、別冊実酸医学、遺伝子導入&発現解析実験法、羊土社、1997、日本遺伝子治療学会編遺伝子治療開発研究ハンドブツク、エヌ·テイ一·エス、1999等。

对于剂型，可以采用任何已知的适合于上述给药方式的形式。例如对于微胶囊剂，根据已知方法(例如凝集法、界面聚合法或双头喷嘴法等)将核心物质使用已知的包衣膜物质进行包衣，所述核心物质为导入编码HGF的DNA或含有编码HGF的DNA的表达质粒的宿主细胞等，从而制备直径约为1-500μm，优选为约100-400μm的微粒形式的微胶囊剂，其中所述包衣膜物质包括成膜聚合物，例如羧甲基纤维素、邻苯二甲酸醋酸纤维素、乙基纤维素、藻酸或其盐、明胶、明胶/阿拉伯树胶、硝化纤维素、聚乙烯醇或羟丙纤维素、聚乳酸、聚羟基乙酸、壳聚糖-藻酸盐、纤维素硫酸酯-聚(二甲基二烯丙基)-氯化铵、羟乙基甲基丙烯酸酯/甲基丙烯酸甲酯、壳聚糖-羧甲基纤维素、藻酸盐-聚赖氨酸-藻酸盐等。

可以根据治疗的疾病、患者的年龄和体重等对制剂中DNA的含量进行适当调整，并且对于本发明的DNA，其日剂量通常约为0.0001-100mg，优选为约0.001-10mg。

此外，编码HGF的DNA以及HGF可单独使用，也可以并用。

所述免疫抑制剂被理解为所有可用于器官移植的免疫抑制剂。这些免疫抑制剂包括例如：钙调神经磷酸酶抑制剂环孢霉素和他克莫司(FK506)；IL-2抗体赛尼哌(Zenapax)和舒莱(Simulect)；TOR(雷帕霉素的靶点：一种构成调节对营养状况应答的涉及细胞生长的生理功能的信号转导通路的因子)抑制剂雷帕霉素等；代谢拮抗剂骁悉(Cellcept)等。其中，本发明的移植器官纤维化抑制剂对由长期给予他克莫司药引起的移植器官纤维化的预防、改善或治疗尤其有用。

此外，只要不违背本发明的目的，本发明的移植器官纤维化抑制剂或免疫耐受获得剂可适当含有其它药物活性成分。所述药物活性成分可以下列物质为例：冠状血管扩张剂(例如亚硝戊酯、硝酸异山梨酯、硝化甘油、曲匹地尔等)、β-受体阻滞剂类药物(例如氧烯洛尔、卡替洛尔、布库洛尔、布非洛尔、普萘洛尔、吲哚洛尔等)、钙拮抗剂(例如地尔硫卓、异搏定、硝苯地平、尼卡地平等)、外周循环紊乱治疗剂(例如α-环糊精包合的前列地尔(alprostadil alfadex)、激肽释放酶、生育酚、尼可莫尔等)、抗节律不齐药(例如阿义马林、普鲁卡因酰胺、利多卡因等)、抗高血压药(例如呋塞米、三氯噻嗪、肼苯哒嗪、拟交感神经抑制药物、钙阻滞剂等)、降脂药(例如氯贝丁酯、普伐他汀、辛伐他汀、洛伐他汀、尼可莫尔等)、抗凝血药(例如肝素、华法林、双香豆素、阿斯匹林等)、溶栓药(例如尿激酶等)、降糖药(例如甲苯磺丁脲、氯磺丙脲、醋磺己脲、格列本脲、二甲双胍、阿卡波糖等)、消炎药(例如双氯芬酸钠、布洛芬、吲哚美辛等)、抗生素药(例如头孢克肟、头孢地尼、氧氟沙星、托氟沙星等)或抗真菌药(例如氟康唑、伊曲康唑等)等。含有上述药物活性成分的药剂可与本发明的制剂并用。只要可以达到本发明的目的，对这些药物活性成分不进行特别地限制，并可使用适当的配比或并用比例。

可以根据其剂型通过适当的给药途径将本发明的移植器官纤维化抑制剂给予患者。例如可将该移植器官纤维化抑制剂制成用于静脉内、动脉内、皮下或肌内注射的注射剂剂型。可以根据患者的症状、年龄或体重等对剂量进行适当调整，并且对于HGF，通常给予每一成年患者约0.001-1000mg，优选为约0.01-100mg，其可以每天一次或分几次适当给予患者。此外，本发明的移植器官纤维化抑制剂可在器官移植之后与免疫抑制剂同时给予、在给予免疫抑制剂之前给予或在给予免疫抑制剂之后立即给予。此外，本发明的移植器官纤维化抑制剂可以在器官移植之前开始给予患者。

本发明的免疫耐受获得剂在器官移植同时、之前或之后给予器官移植患者，而关于术语“给予”，在器官移植之后，最好将所述免疫耐受获得剂给予患者至少两周。此外，在器官移植之前，最好将不同于移植器官的供体动物的组织(例如移植心脏时为供体动物的淋巴细胞)移植到接受移植的动物体内，将本发明的免疫耐受获得剂和免疫抑制剂一起给予接受移植的动物至少大约两周的时间。或者，在器官移植之前，将接受移植者的组织(例如淋巴细胞等)移植到供体体内，然后将本发明的免疫耐受获得剂和免疫抑制剂一起给予供体，从而使供体的器官获得对接受者的免疫耐受。通过后一种方法，可将已获得对接受者具有免疫耐受的供体器官移植到接受者体内，从而使接受者抑制移植器官的排异反应。

与本发明的移植器官纤维化抑制剂相同的给药途径、给药方法和给药剂量，将本发明的免疫耐受获得剂给予患者。

上述供体的组织或接受者的组织中的术语“组织”是指与免疫有关的组织，包括例如骨髓、胸腺、脾脏、淋巴结、扁桃腺、血管、皮肤、肠道等器官和组织，或者例如白细胞、巨噬细胞、淋巴细胞(NK(自然杀伤)细胞、辅助T-细胞、杀伤T-细胞、B细胞)、树状细胞等免疫细胞、细胞因子、抗体(免疫球蛋白(Ig)G、IgA、IgM、IgD、IgE等)、粒细胞(嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞)等。

以下通过实施例对本发明进行描述，但对本发明并不限于此。

除非进行另外的特别规定，“％”表示“质量％”。此外，以下实施例中所用的HGF是缺失5个氨基酸的HGF(SEQ ID NO：2表示的HGF)。

实施例1：对心脏移植的小鼠心肌纤维化的抑制效果

(1)心脏移植模型的建立：

使用8周龄、体重约20g的两种雄性小鼠(BALB/c小鼠和C3H/He小鼠)。使用氯胺酮(100μg/kg)和甲苯噻嗪(10μg/kg)的混合药物麻醉作为供体的BALB/c小鼠。在上述麻醉下，用1mL补充有7.5质量％肝素的生理盐水注入其心脏后，摘除心脏用于移植。使用氯胺酮(100μg/kg)和甲苯噻嗪(10μg/kg)的混合药物麻醉C3H/He小鼠后，对其剖腹，在显微镜下将从BALB/c小鼠体内摘除的用于移植的心脏异位移植到C3H/He小鼠的腹主动脉和腹下腔静脉之间的腹部。

(2)免疫抑制剂和HGF的给予

作为免疫抑制剂，可使用5mg普乐可复注射液(含有5mg/mL的他克莫司，由藤沢薬品工業株式会社制造)。

在如(1)所述的移植之后，立即使用27号注射针对小鼠皮下注射他克莫司，剂量为0.1mg/kg/天，每天一次，连续注射60天。另外，在移植之后，立即使用27号注射针将溶解有1mg HGF的20mL生理盐水溶液皮下注射给予HGF给予组的动物(0.2mL；250μg HGF/kg)，每次间隔12小时(500μg/kg/天)，连续给予14天，类似地，使用27号注射针将生理盐水(0.2mL)皮下注射给予对照动物，连续给予14天。

(3)组织病理学分析

以外科移植手术的当天作为第0天，在第14天将移植的心脏摘除，按照常规方法将其固定于福尔马林并包埋在石蜡中，制备心脏组织切片。将组织切片进行Masson-trichrome染色。将染色的组织图像输入配有显微CCD照相机(Olympus公司制造)的计算机中，用NIH图像分析程序包(免费软件)计算移植心脏纤维化的绿色染色部分的面积与冠状横截面图像总面积的比值。

(4)结果

在对照组的动物中，显示移植心脏的纤维化率为22.3±7.7％，而HGF给予组中，使纤维化率抑制为15.6±1.3％的水平(参见图1)。

这表明人重组HGF可抑制移植心脏的纤维化。

实施例2：免疫耐受的获得

方法：

用与实施例1的(1)所述相同的方法，使用BALB/c小鼠作为供体动物，将心脏从BALB/c小鼠体内移植到C3H/He小鼠的腹主动脉和腹下腔静脉之间的腹部。在移植之后，使用27号注射针立即将溶解有1mgHGF的20mL生理盐水溶液给予HGF治疗组的动物(0.2mL；250μgHGF/kg)，每次间隔12小时(500μg/kg/天)，连续给予14天。切除移植之后60天仍存活的小鼠背部的皮肤，随后将由BALB/c或C57BL/10小鼠身上取下的1cm²的皮肤移植到皮肤切除的部位。

结果：

心脏移植之后60天仍存活的C3H/He小鼠随后移植了来自BALB/c小鼠的皮肤。虽然没有给予免疫抑制剂，在移植了皮肤的C3H/He小鼠的长着黑毛的皮肤上植入了BALB/c小鼠的长着白毛的皮肤。这表明移植了BALB/c小鼠心脏的C3H/He小鼠获得了对于BALB/c小鼠的免疫耐受。

工业实用性

本发明的移植器官纤维化抑制剂和免疫耐受获得剂可用于器官移植领域和再生医学领域。

序列表

<110>KRINGLE PHARMA CO.，LTD.

<110>Nakamura，Toshikazu

<120>Fibrosis inhibitor to a transplanted organ

<130>K12F1778

<160>4

<210>1

<211>728

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<400>1

Met Trp Val Thr Lys Leu Leu Pro Ala Leu Leu Leu Gln His Val Leu

1 5 10 15

Leu His Leu Leu Leu Leu Pro Ile Ala Ile Pro Tyr Ala Glu Gly Gln

20 25 30

Arg Lys Arg Arg Asn Thr Ile His Glu Phe Lys Lys Ser Ala Lys Thr

35 40 45

Thr Leu Ile Lys Ile Asp Pro Ala Leu Lys Ile Lys Thr Lys Lys Val

50 55 60

Asn Thr Ala Asp Gln Cys Ala Asn Arg Cys Thr Arg Asn Lys Gly Leu

65 70 75 80

Pro Phe Thr Cys Lys Ala Phe Val Phe Asp Lys Ala Arg Lys Gln Cys

85 90 95

Leu Trp Phe Pro Phe Asn Ser Met Ser Ser Gly Val Lys Lys Glu Phe

100 105 110

Gly His Glu Phe Asp Leu Tyr Glu Asn Lys Asp Tyr Ile Arg Asn Cys

115 120 125

Ile Ile Gly Lys Gly Arg Ser Tyr Lys Gly Thr Val Ser Ile Thr Lys

130 135 140

Ser Gly Ile Lys Cys Gln Pro Trp Ser Ser Met Ile Pro His Glu His

145 150 155 160

Ser Phe Leu Pro Ser Ser Tyr Arg Gly Lys Asp Leu Gln Glu Asn Tyr

165 170 175

Cys Arg Asn Pro Arg Gly Glu Glu Gly Gly Pro Trp Cys Phe Thr Ser

180 185 190

Asn Pro Glu Val Arg Tyr Glu Val Cys Asp Ile Pro Gln Cys Ser Glu

195 200 205

Val Glu Cys Met Thr Cys Asn Gly Glu Ser Tyr Arg Gly Leu Met Asp

210 215 220

His Thr Glu Ser Gly Lys Ile Cys Gln Arg Trp Asp His Gln Thr Pro

225 230 235 240

His Arg His Lys Phe Leu Pro Glu Arg Tyr Pro Asp Lys Gly Phe Asp

245 250 255

Asp Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Gln Pro Arg Pro Trp Cys Tyr

260 265 270

Thr Leu Asp Pro His Thr Arg Trp Glu Tyr Cys Ala Ile Lys Thr Cys

275 280 285

Ala Asp Asn Thr Met Asn Asp Thr Asp Val Pro Leu Glu Thr Thr Glu

290 295 300

Cys Ile Gln Gly Gln Gly Glu Gly Tyr Arg Gly Thr Val Asn Thr Ile

305 310 315 320

Trp Asn Gly Ile Pro Cys Gln Arg Trp Asp Ser Gln Tyr Pro His Glu

325 330 335

His Asp Met Thr Pro Glu Asn Phe Lys Cys Lys Asp Leu Arg Glu Asn

340 345 350

Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Ser Glu Ser Pro Trp Cys Phe Thr Thr

355 360 365

Asp Pro Asn Ile Arg Val Gly Tyr Cys Ser Gln Ile Pro Asn Cys Asp

370 375 380

Met Ser His Gly Gln Asp Cys Tyr Arg Gly Asn Gly Lys Asn Tyr Met

385 390 395 400

Gly Asn Leu Ser Gln Thr Arg Ser Gly Leu Thr Cys Ser Met Trp Asp

405 410 415

Lys Asn Met Glu Asp Leu His Arg His Ile Phe Trp Glu Pro Asp Ala

420 425 430

Ser Lys Leu Asn Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asp Asp Ala His

435 440 445

Gly Pro Trp Cys Tyr Thr Gly Asn Pro Leu Ile Pro Trp Asp Tyr Cys

450 455 460

Pro Ile Ser Arg Cys Glu Gly Asp Thr Thr Pro Thr Ile Val Asn Leu

465 470 475 480

Asp His Pro Val Ile Ser Cys Ala Lys Thr Lys Gln Leu Arg Val Val

485 490 495

Asn Gly Ile Pro Thr Arg Thr Asn Ile Gly Trp Met Val Ser Leu Arg

500 505 510

Tyr Arg Asn Lys His Ile Cys Gly Gly Ser Leu Ile Lys Glu Ser Trp

515 520 525

Val Leu Thr Ala Arg Gln Cys Phe Pro Ser Arg Asp Leu Lys Asp Tyr

530 535 540

Glu Ala Trp Leu Gly Ile His Asp Val His Gly Arg Gly Asp Glu Lys

545 550 555 560

Cys Lys Gln Val Leu Asn Val Ser Gln Leu Val Tyr Gly Pro Glu Gly

565 570 575

Ser Asp Leu Val Leu Met Lys Leu Ala Arg Pro Ala Val Leu Asp Asp

580 585 590

Phe Val Ser Thr Ile Asp Leu Pro Asn Tyr Gly Cys Thr Ile Pro Glu

595 600 605

Lys Thr Ser Cys Ser Val Tyr Gly Trp Gly Tyr Thr Gly Leu Ile Asn

610 615 620

Tyr Asp Gly Leu Leu Arg Val Ala His Leu Tyr Ile Met Gly Asn Glu

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Lys Cys Ser Gln His His Arg Gly Lys Val Thr Leu Asn Glu Ser Glu

645 650 655

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660 665 670

Tyr Gly Gly Pro Leu Val Cys Glu Gln His Lys Met Arg Met Val Leu

675 680 685

Gly Val Ile Val Pro Gly Arg Gly Cys Ala Ile Pro Asn Arg Pro Gly

690 695 700

Ile Phe Val Arg Val Ala Tyr Tyr Ala Lys Trp Ile His Lys Ile Ile

705 710 715 720

Leu Thr Tyr Lys Val Pro Gln Ser

725

<210>2

<211>723

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<400>2

Met Trp Val Thr Lys Leu Leu Pro Ala Leu Leu Leu Gln His Val Leu

1 5 10 15

Leu His Leu Leu Leu Leu Pro Ile Ala Ile Pro Tyr Ala Glu Gly Gln

20 25 30

Arg Lys Arg Arg Asn Thr Ile His Glu Phe Lys Lys Ser Ala Lys Thr

35 40 45

Thr Leu Ile Lys Ile Asp Pro Ala Leu Lys Ile Lys Thr Lys Lys Val

50 55 60

Asn Thr Ala Asp Gln Cys Ala Asn Arg Cys Thr Arg Asn Lys Gly Leu

65 70 75 80

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Leu Trp Phe Pro Phe Asn Ser Met Ser Ser Gly Val Lys Lys Glu Phe

100 105 110

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Ser Gly Ile Lys Cys Gln Pro Trp Ser Ser Met Ile Pro His Glu His

145 150 155 160

Ser Tyr Arg Gly Lys Asp Leu Gln Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Arg

165 170 175

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180 185 190

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Leu Pro Glu Arg Tyr Pro Asp Lys Gly Phe Asp Asp Asn Tyr Cys Arg

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Gly Glu Gly Tyr Arg Gly Thr Val Asn Thr Ile Trp Asn Gly Ile Pro

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Thr Arg Ser Gly Leu Thr Cys Ser Met Trp Asp Lys Asn Met Glu Asp

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Ser Cys Ala Lys Thr Lys Gln Leu Arg Val Val Asn Gly Ile Pro Thr

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Asn Val Ser Gln Leu Val Tyr Gly Pro Glu Gly Ser Asp Leu Val Leu

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Pro Gln Ser

<210>3

<211>2187

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<400>3

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ctgctcccca tcgccatccc ctatgcagag ggacaaagga aaagaagaaa tacaattcat 120

gaattcaaaa aatcagcaaa gactacccta atcaaaatag atccagcact gaagataaaa 180

accaaaaaag tgaatactgc agaccaatgt gctaatagat gtactaggaa taaaggactt 240

ccattcactt gcaaggcttt tgtttttgat aaagcaagaa aacaatgcct ctggttcccc 300

ttcaatagca tgtcaagtgg agtgaaaaaa gaatttggcc atgaatttga cctctatgaa 360

aacaaagact acattagaaa ctgcatcatt ggtaaaggac gcagctacaa gggaacagta 420

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ccattcactt gcaaggcttt tgtttttgat aaagcaagaa aacaatgcct ctggttcccc 300

ttcaatagca tgtcaagtgg agtgaaaaaa gaatttggcc atgaatttga cctctatgaa 360

aacaaagact acattagaaa ctgcatcatt ggtaaaggac gcagctacaa gggaacagta 420

tctatcacta agagtggcat caaatgtcag ccctggagtt ccatgatacc acacgaacac 480

agctatcggg gtaaagacct acaggaaaac tactgtcgaa atcctcgagg ggaagaaggg 540

ggaccctggt gtttcacaag caatccagag gtacgctacg aagtctgtga cattcctcag 600

tgttcagaag ttgaatgcat gacctgcaat ggggagagtt atcgaggtct catggatcat 660

acagaatcag gcaagatttg tcagcgctgg gatcatcaga caccacaccg gcacaaattc 720

ttgcctgaaa gatatcccga caagggcttt gatgataatt attgccgcaa tcccgatggc 780

cagccgaggc catggtgcta tactcttgac cctcacaccc gctgggagta ctgtgcaatt 840

aaaacatgcg ctgacaatac tatgaatgac actgatgttc ctttggaaac aactgaatgc 900

atccaaggtc aaggagaagg ctacaggggc actgtcaata ccatttggaa tggaattcca 960

tgtcagcgtt gggattctca gtatcctcac gagcatgaca tgactcctga aaatttcaag 1020

tgcaaggacc tacgagaaaa ttactgccga aatccagatg ggtctgaatc accctggtgt 1080

tttaccactg atccaaacat ccgagttggc tactgctccc aaattccaaa ctgtgatatg 1140

tcacatggac aagattgtta tcgtgggaat ggcaaaaatt atatgggcaa cttatcccaa 1200

acaagatctg gactaacatg ttcaatgtgg gacaagaaca tggaagactt acatcgtcat 1260

atcttctggg aaccagatgc aagtaagctg aatgagaatt actgccgaaa tccagatgat 1320

gatgctcatg gaccctggtg ctacacggga aatccactca ttccttggga ttattgccct 1380

atttctcgtt gtgaaggtga taccacacct acaatagtca atttagacca tcccgtaata 1440

tcttgtgcca aaacgaaaca attgcgagtt gtaaatggga ttccaacacg aacaaacata 1500

ggatggatgg ttagtttgag atacagaaat aaacatatct gcggaggatc attgataaag 1560

gagagttggg ttcttactgc acgacagtgt ttcccttctc gagacttgaa agattatgaa 1620

gcttggcttg gaattcatga tgtccacgga agaggagatg agaaatgcaa acaggttctc 1680

aatgtttccc agctggtata tggccctgaa ggatcagatc tggttttaat gaagcttgcc 1740

aggcctgctg tcctggatga ttttgttagt acgattgatt tacctaatta tggatgcaca 1800

attcctgaaa agaccagttg cagtgtttat ggctggggct acactggatt gatcaactat 1860

gatggcctat tacgagtggc acatctctat ataatgggaa atgagaaatg cagccagcat 1920

catcgaggga aggtgactct gaatgagtct gaaatatgtg ctggggctga aaagattgga 1980

tcaggaccat gtgaggggga ttatggtggc ccacttgttt gtgagcaaca taaaatgaga 2040

atggttcttg gtgtcattgt tcctggtcgt ggatgtgcca ttccaaatcg tcctggtatt 2100

tttgtccgag tagcatatta tgcaaaatgg atacacaaaa ttattttaac atataaggta 2160

ccacagtcat ag 2172

Claims

1.一种由给予免疫抑制剂引起的移植器官纤维化抑制剂，其特征在于：所述移植器官纤维化抑制剂含有肝细胞生长因子。

2.根据权利要求1所述的移植器官纤维化抑制剂，其特征在于：所述肝细胞生长因子是含有SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽、含有与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列实质相同的氨基酸序列的肽且所述肽作为肝细胞生长因子或者其部分多肽作为肝细胞生长因子的肽。

3.一种由给予免疫抑制剂引起的移植器官纤维化抑制剂，其特征在于：所述移植器官纤维化抑制剂含有编码肝细胞生长因子的DNA分子。

4.根据权利要求3所述的移植器官纤维化抑制剂，其特征在于：所述编码肝细胞生长因子的DNA分子是含有SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子，或者是在严格条件下与含有互补于所述的含有SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子的碱基序列的DNA分子杂交并编码作为肝细胞生长因子的肽的DNA分子。

5.根据权利要求1-4之任一项所述的移植器官纤维化抑制剂，其特征在于：所述免疫抑制剂是他克莫司。

6.一种免疫耐受获得剂，其特征在于：所述免疫耐受获得剂包含含有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽、含有与SEQ ID NO：2所示氨基酸序列实质相同的氨基酸序列的肽且所述肽作为肝细胞生长因子或者其部分多肽作为肝细胞生长因子的肽。

7.一种免疫耐受获得剂，其特征在于：所述免疫耐受获得剂含有SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子，或含有在严格条件下与含有互补于所述的含有SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子的碱基序列的DNA分子杂交并编码作为肝细胞生长因子的肽的DNA分子。

8.一种用于抑制移植器官纤维化的方法，其特征在于：所述方法含有向进行了器官移植并接受着免疫抑制剂治疗的哺乳动物给予肝细胞生长因子。

9.根据权利要求8的方法，其特征在于：所述肝细胞生长因子是含有SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽、或含有与SEQID NO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列实质相同的氨基酸序列的肽且所述肽作为肝细胞生长因子或者其部分多肽作为肝细胞生长因子的肽。

10.一种用于抑制移植器官纤维化的方法，其特征在于：所述方法含有向进行了器官移植并接受着免疫抑制剂治疗的哺乳动物给予编码肝细胞生长因子的DNA分子。

11.根据权利要求10的方法，其特征在于：所述编码肝细胞生长因子的DNA分子是含有SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子，或者是在严格条件下与含有互补于所述的含有SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子的碱基序列的DNA分子杂交并编码作为肝细胞生长因子的肽的DNA分子。

12.根据权利要求8-11之任一项的方法，其特征在于：所述免疫抑制剂是他克莫司。

13.一种使将要进行器官移植的哺乳动物获得免疫耐受的方法，其特征在于：所述方法包括向将要进行器官移植的哺乳动物给予含有SEQID NO：2所示氨基酸序列的肽、含有与SEQ ID NO：2所示氨基酸序列实质相同的氨基酸序列的肽且所述肽作为肝细胞生长因子或者其部分多肽作为肝细胞生长因子的肽。

14.一种使将要进行器官移植的哺乳动物获得免疫耐受的方法，其特征在于：所述方法含有向将要进行器官移植的哺乳动物给予含有SEQID NO：4所示碱基序列的DNA分子，或者给予在严格条件下与含有互补于所述的含有SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子的碱基序列的DNA分子杂交并编码作为肝细胞生长因子的肽的DNA分子。

15.肝细胞生长因子在制备用于抑制由免疫抑制剂给药引起的移植器官纤维化的药剂中的应用。

16.根据权利要求15所述的应用，其特征在于：所述肝细胞生长因子是含有SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽、含有与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列实质相同的氨基酸序列的肽且所述肽作为肝细胞生长因子或者其部分多肽作为肝细胞生长因子的肽。

17.编码肝细胞生长因子的DNA分子在制备用于抑制由免疫抑制剂给药引起的移植器官纤维化的药剂中的应用。

18.根据权利要求17所述的应用，其特征在于：编码肝细胞生长因子的DNA分子是含有SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子，或者是在严格条件下与含有互补于所述的含有SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子的碱基序列的DNA分子杂交并编码作为肝细胞生长因子的肽的DNA分子。

19.根据权利要求15-18之任一项所述的应用，其特征在于：所述免疫抑制剂是他克莫司。

20.肝细胞生长因子在制备用于使器官移植患者获得对移植器官具有免疫耐受的药剂中的应用。

21.根据权利要求20所述的应用，其特征在于：所述肝细胞生长因子是含有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的肽、含有与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示氨基酸序列实质相同的氨基酸序列的肽且所述肽作为肝细胞生长因子或者其部分多肽作为肝细胞生长因子的肽。

22.编码肝细胞生长因子的DNA在制备用于使器官移植患者获得对移植器官具有免疫耐受的药剂中的应用。

23.根据权利要求22所述的应用，其特征在于：所述DNA是含有SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子，或者是在严格条件下与含有互补于所述的含有SEQ ID NO：4所示碱基序列的DNA分子的碱基序列的DNA分子杂交并编码作为肝细胞生长因子的肽的DNA分子。