CN101092603B - 一种生产共轭亚油酸的方法及其专用菌株 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种生产共轭亚油酸的方法及其专用菌株。本发明所提供的用于生产共轭亚油酸的菌株是植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974。本发明所提供的生产共轭亚油酸的方法，是在发酵培养基中培养植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974，得到共轭亚油酸。本发明生产共轭亚油酸的方法，使用葵花籽油替代纯亚油酸，原料来源广泛，价格便宜，降低了生产成本，并具有较高的共轭亚油酸转化率。
Description
技术领域
本发明涉及一种生产共轭亚油酸的方法及其专用菌株。
背景技术
共轭亚油酸(Conjugated Linoleic Acid，CLA)是由必需脂肪酸亚油酸(LinoleicAcid，LA)衍生的18碳共轭双稀酸的多种位置和几何异构体的总称。CLA的异构体十分丰富，其主要位置异构体有四种即：C8，C10；C9，C11；C10，C12和C11，C13，而每种位置异构体又有四种几何异构体即：cc，ct，tc和tt，其中c9，t11和t10，c12两种异构体被证实具有很强的生理活性，因为它们能够结合到动物细胞的磷脂层中，其结构见图1所示。
天然的CLA主要存在于反刍动物牛、羊等的乳脂及其肉制品中，山羊肉中CLA的含量是猪肉和鸡肉中的10倍。Dhiman等报道了牛奶中CLA的含量为7.3～9.0mg/g脂肪，其中90％为c9，t11-CLA，CLA的含量与奶牛饮食有关，通过调整奶牛的饮食，牛奶中CLA的含量能够得到明显的提高。奶制品中的CLA主要来源于以下四个方面：(1)直接从饲料中吸收CLA；(2)瘤胃细菌在瘤胃中异构化作用形成CLA；(3)乳腺组织和脂肪组织中含有脱氢酶将生物氢化中间产物11t-18:1转化成CLA；(4)直接利用脂肪组织中的CLA。
共轭亚油酸(Conjugated Linoleic Acid，CLA)是一种非常令人感兴趣的营养添加剂，大量的体内体外试验证明CLA能诱导能量利用并导致体重的下降，且不储存脂肪；能缓和如厌食、蛋白质分解等免疫反应的副作用；具有抗突变、抑制癌细胞中的蛋白质和核酸的合成，此外CLA还可提高人类某些生理状态，如提高体内维生素A的水平。由于CLA具有丰富的营养价值，同时食品中含量很低，所以如何低成本、高纯度地制备CLA成为研究焦点，CLA的商业化生产方法为亚油酸的碱异构化法。碱异构化法的原料是含有77％亚油酸的葵花籽油，经过KOH(或NaOH)强碱的作用转化成CLA，这种方法比较简单，且产物易于处理，在商业上应用较广，但其缺点是产生一系列具有位置和几何异构的CLA混合物。相比之下，利用乳酸菌中提取的亚油酸异构酶生产CLA具有重要意义。因为CLA的微生物异构化具有选择性，其亚油酸异构酶能专一地作用于脂肪酸的12C双键，而不是9C双键，因而能把亚油酸主要转化为c9，t11-CLA，而且微生物在培养方面较为灵活、方便。而乳酸菌兼性厌氧，培养条件易于控制，是人体益生菌，可直接用于食品、保健品和药品。同时乳酸菌含有的亚油酸异构酶对作用底物具有很强的专一性。
微生物生成CLA的机理是微生物能够利用自身的酶将LA转化成CLA，Jiang等认为细菌产生CLA是为了消除亚油酸对细胞的危害作用。1969年Kepler等采用亚油酸异构酶催化亚油酸得到c9，t11-CLA，亚油酸异构酶可来源于多种微生物如乳酸杆菌(Lactobacillus)、丁酸弧菌(Butyrivibrio)、丙酸杆菌(Propionibacterium)、真杆菌属(Eubacterium)等，其中Lactobacillus、Eubacterium、Butyrivibrio的微生物具有c9，t11亚油酸异构酶的活性，而Propionibacterium有t10，c12亚油酸异构酶的活性。因此自20世纪90年代末国内外开始了乳酸菌发酵生产CLA的培养条件的研究，目前，国内外乳酸菌合成CLA的研究尚处在筛选和转化条件研究阶段。研究表明在MRS培养基中，嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、干酪乳杆菌(L.casei)Bs5、Bs7等具有将亚油酸转化为CLA的能力有差别，L.acidophilus产量最高。产生CLA的最佳条件为：亚油酸加量0.1％(m/v)，培养时间24h，CLA的含量达8.247μg/mL，即使增加亚油酸量，延长培养时间也不能提高CLA的产量。培养基的成分对不同的乳酸菌发酵亚油酸生成CLA也有影响，在MRS培养基中亚油酸含量大于0.5mg/mL时，乳酸乳球菌(Lactobacillus lactis)停止生长。
发明内容
本发明的目的是提供一种生产共轭亚油酸的方法及其专用菌株。
本发明所提供的生产共轭亚油酸的菌株是植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)SY，已于2007年03月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市海淀区中关村北一条13号)，保藏登记号为CGMCC No.1974。
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974，是从市售发酵乳制品中分离得到的。其分离方法如下：取10g发酵乳制品加入内装100ml无菌水和玻璃珠的三角瓶中，于100转/min摇床上振荡20min，取0.5ml加入4.5ml无菌水中，再依次稀释10-2，10-3，10-4，10-5，10-6倍，分别取以上细菌悬液0.1ml在MRS培养基平板上均匀涂布，超净工作台内吹至略干；每浓度3个重复，置于37℃恒温箱中培养1-2天，挑取单菌落进行稀释划线分离纯化。接种于含有CaCO3的MRS培养基中，37℃培养24h，挑取具有溶钙圈的单菌落，进行革兰氏染色和触酶实验。对初筛获得的具有触酶阳性和G+的菌株进行发酵培养，最终筛选出性状优良菌种，接种API 50CHL试纸条观察糖代谢情况，鉴定结果如表1所示：
表1.植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974的生理生化特性
注：“+”表示阳性结果，即可利用该产物进行代谢；“-”表示阴性结果，即不可利用该产物进行代谢。“对照”为API 50CHL V.5.0乳酸菌鉴定系统中自带的对照。
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974呈革兰氏阳性，短杆状，能在中性和偏酸的环境中生长。结合形态特征和生理生化特性，将植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)。
本发明所提供的生产共轭亚油酸的方法，是在发酵培养基中培养植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974，得到共轭亚油酸。
所述发酵培养基可为含有植物油乳化液的脱脂乳培养基。
所述植物油可为现有的植物油，优选为亚油酸含量较高的葵花籽油。
当所述植物油乳化液为葵花籽油乳化液时，所述发酵培养基中所述葵花籽油的终浓度为6～10mg/ml。
所述葵花籽油乳化液按照如下方法配制：将300-600mg葵花籽油与0.2-0.5ml吐温-80(Tween-80)混合乳化，得到葵花籽油乳化液。
所述脱脂乳培养基按照如下方法配制：将12g脱脂奶粉溶解于100ml水中。
所述方法中，培养温度为37℃，培养时间8-24小时。
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974能产生较高酶活力的亚油酸异构酶。本发明利用植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCCNo.1974生产共轭亚油酸的方法，使用葵花籽油替代纯亚油酸，原料来源广泛，价格便宜，降低了生产成本，并具有较高的共轭亚油酸转化率。
附图说明
图1为实施例1的DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析洗脱图谱
图2为实施例1的酶活检测图
图3为实施例1的凝胶过滤层析洗脱及酶活检测图谱
图4为实施例2的DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析洗脱图谱
图5为实施例2的酶活检测图
图6为实施例2的凝胶过滤层析洗脱及酶活检测图谱
图7为实施例3的DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析洗脱图谱
图8为实施例3的酶活检测图
图9为实施例3的凝胶过滤层析洗脱及酶活检测图谱
具体实施方式
本发明研究了植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974在培养基质中转化葵花籽油生成CLA的方法，从培养基种类，葵花籽油浓度，培养时间，氧气浓度等多方面综合考虑，优化出了适宜的反应条件，确定发酵生产CLA的影响因素，获得CLA高产菌株，以保证CLA的高转化率。
本发明中设定个组分设定及含量分别如下：
培养基： MRS培养基、脱脂乳培养基
葵花籽油浓度 0～12mg/ml
培养时间 0～36h
氧气条件 微氧、未充N2驱除空气条件
在以上各个组分设定的含量范围内，通过试验进行优化。优化指标为CLA生成量，采用紫外分光光度法测定CLA。优选出的各个组分别为：
培养基： 脱脂乳培养基
葵花籽油浓度 6～10mg/ml
培养时间 8～24h
氧气条件 微氧(充N2驱除空气)
下面结合实施实例对本发明的内容作进一步的说明：
下述实施例中的种子培养基为MRS培养基：蛋白胨10.0g，肉浸膏10.0g，酵母抽提物5.0g，葡萄糖20.0g，三水醋酸钠晶体5.0g，Tween 801ml，柠檬酸二铵2.0g，K2HPO42.0g，琼脂150g，MgSO4·7H2O 0.2g，MnSO4·2H2O 0.05g，蒸馏水1000ml。
实施例1、植物乳杆菌(Lactobaciilus plantarum)SY CGMCC No.1974生产共轭亚油酸及亚油酸异构酶的提取纯化
一、共轭亚油酸的生产
该实施例中所用的发酵培养基按照如下方法配制：
(1)葵花籽油乳化液的配制：葵花籽油(上海佳格食品有限公司，多力牌100％纯正葵花籽油)300mg，吐温-80(Tween-80)0.36ml，去离子水5ml，超声波乳化(25℃，超声频率40KHz)10min，0.22μm微孔过滤膜过滤除菌，得到葵花籽油乳化液。
(2)脱脂乳培养基的配制：将12g脱脂奶粉(三元乳品股份有限公司)溶解于100ml水中，115℃、10min灭菌备用。
(3)发酵培养基的配制：将(1)的葵花籽油乳化液加入到(2)的脱脂乳培养基中，使葵花籽油的终浓度为10mg/ml，得到发酵培养基。
将经活化的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974用接种环挑取2环于种子培养基中，37℃培养8h后，取2％(体积比)种子培养液转接至装有4L发酵液的5L发酵罐中，37℃培养24小时。其中，发酵罐的通风量(通氮气)：0-24小时，0.5vvm(即2L氮气/min)。
发酵结束后，采用紫外分光光度法测定CLA异构体的总量，具体方法如下：1、将CLA标准品用正己烷配成不同浓度梯度溶液，测定233nm处吸光度值，以CLA浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。2、10ml发酵液中加入20ml V(氯仿)/V(甲醇)＝2∶1，4500r/min(2000g)离心5min，收集下层液体，用无水Na2SO4干燥，并真空干燥脱除有机溶剂。将上述脂肪酸提取物用10ml正己烷溶解，待测。3、紫外分光光度计在200～350nm范围内扫描，并读取233nm处的吸收值，参比为不接种的培养基加入于样品同量的葵花籽油，其他步骤同样品。
结果表明在发酵培养基中37℃培养24小时CLA异构体的总生成量为109.235μg/mL发酵液。
二、亚油酸异构酶的提取纯化
1、亚油酸异构酶的提取
将步骤一得到的发酵液进行10000×g，15min的离心，收集细胞。向收集的细胞中加入0.1M磷酸钾缓冲液(pH6.0)和溶菌酶，使菌体的最终含量为2×1011CFU/ml，溶菌酶的终浓度为40g/L。用纳米NCJJ0.005/150型超高压均质机(河北廊坊通用机械有限公司)进行细胞破碎。其中，超高压均质的均质工作压力为140MPa，均质阀片直径0.1mm，重复四次，每次处理10分钟，处理温度为0℃。均质液经10000×g离心60min，取上清液部分，作为进一步纯化的粗酶液。
2、亚油酸异构酶的纯化
a.(NH4)2SO4分级沉淀
在冰水浴条件下，向步骤1得到的粗酶液中加入(NH4)2SO4至饱和度为80％(在冰浴中将研磨细的(NH4)2SO4边搅拌边缓慢的加入到粗酶液中，每升粗酶液加入(NH4)2SO4516克)4℃静置过夜、离心(10000×g，30min)收集沉淀(蛋白)，将每次所得沉淀用2-3倍体积的磷酸钾缓冲液(0.1M，pH6.0)悬浮，用聚乙二醇浓缩，得到酶液。
b.离子交换层析
所得的酶液上样到用磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)预平衡的DEAE-Sepharose FastFlow层析柱(1.0cm×20cm)(Pharmacia公司)，用0～0.8mol/L NaCl的缓冲液以3ml/min流速进行线性洗脱每管收集5mL，NaCl线性洗脱出4个蛋白峰，如图1。其中峰III为酶活力峰，如图2所示，即NaCl摩尔浓度为0.3-0.5mol/L洗脱峰具有亚油酸异构酶活性。
其中，亚油酸异构酶酶活，以在最适条件(30℃，5h，pH6.0)下，以亚油酸为底物进行反应，每小时生成1μg共轭亚油酸的酶量定义为一个酶活力单位。其中，共轭亚油酸采用紫外分光光度法测定，具体方法如下：1)将CLA标准品用正己烷配成不同浓度梯度溶液，测定233nm处吸光度值，以CLA浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。2)5ml洗脱液中加入10ml V(氯仿)/V(甲醇)＝2∶1，4500r/min(2000g)离心5min，收集下层液体，用无水Na2SO4干燥，并真空干燥脱除有机溶剂。将上述提取物用10ml正己烷溶解，待测。3)紫外分光光度计在200～350nm范围内扫描，并读取233nm处的吸收值，参比为正己烷溶液，其他步骤同样品。
c.酶液透析脱盐
将步骤b中收集的具有亚油酸异构酶活性的酶液装入透析袋中，浸入1000ml磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)中，4℃下磁力搅拌12h，用10mM的NaCl缓冲液(pH6.0)检查脱盐情况，至无沉淀产生时，达到透析平衡。
d.凝胶过滤层析
将步骤c中到达到透析平衡的酶液上样到用磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)预平衡的Sephacryl200HR凝胶层析柱(1.6cm×100cm)(Pharmacia公司)，以0.3ml/min流速，用磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)洗脱，每管收集3mL，对每管洗脱液进行酶活检测，收集具有亚油酸异构酶活性的部分。结果如图3所示，第30-37管洗脱液具有亚油酸异构酶活性。该具有亚油酸异构酶活性的洗脱峰酶液的酶比活力为246.24U/mg洗脱峰酶液。经换算，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCCNo.1974菌体的亚油酸异构酶活性为241.32U/108CFU。其中，亚油酸异构酶活性的测定方法同步骤b。
实施例2、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974生产共轭亚油酸及亚油酸异构酶的提取纯化
一、共轭亚油酸的生产
该实施例中所用的发酵培养基按照如下方法配制：
(1)葵花籽油乳化液的配制：葵花籽油(上海佳格食品有限公司，多力牌100％纯正葵花籽油)400mg，吐温-80(Tweenum 80)0.44ml，去离子水5ml，超声波乳化(25℃，超声频率40KHz)10min，0.22μm微孔过滤膜过滤除菌，得到葵花籽油乳化液。
(2)脱脂乳培养基的配制：将12g脱脂奶粉(北京三元乳品股份公司提供)溶解于100ml水中，115℃、10min灭菌备用。
(3)发酵培养基的配制：将(1)的葵花籽油乳化液加入到(2)的脱脂乳培养基中，使葵花籽油的终浓度为8mg/ml，得到发酵培养基。
将经活化的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974用接种环挑取2环于种子培养基中，37℃培养8h后，取2％(体积比)种子培养液转接至装有4L发酵液的5L发酵罐中，37℃微氧(充N2驱除空气)培养12小时。其中，发酵罐的通风量(通氮气)：0-12小时，0.5vvm(即2L氮气/min)。
发酵结束后，采用紫外分光光度法测定CLA异构体的总量，测定方法同实施例1的步骤一。
结果表明在发酵培养基中37℃微氧培养12小时CLA异构体总生成量为118.336μg/mL发酵液。
二、亚油酸异构酶的提取纯化
1、亚油酸异构酶的提取
将步骤1中的发酵液进行10000×g，15min的离心，收集细胞。向收集的细胞中加入0.08M磷酸钾缓冲液(pH5.5)和溶菌酶，使细胞的最终含量为5×1010CFU/ml，溶菌酶的终浓度为20g/L。用纳米NCJJ0.005/150型超高压均质机(河北廊坊通用机械有限公司)进行细胞破碎。其中，超高压均质的均质工作压力为130MPa，均质阀片直径0.05mm，重复四次，每次处理10min，处理温度为0℃。均质液经10000×g离心60min，取上清液部分，作为进一步纯化的粗酶液。
2、亚油酸异构酶的纯化
a.(NH4)2SO4分级沉淀
在冰水浴条件下，向步骤1得到的粗酶液中加入(NH4)2SO4至饱和度为90％(在冰浴中将研磨细的(NH4)2SO4边搅拌边缓慢的加入到粗酶液中，每升粗酶液加入(NH4)2SO4603克，4℃静置过夜、离心(10000×g，30min)收集沉淀(蛋白)，将每次所得沉淀用2-3倍体积的磷酸钾缓冲液0.08M pH5.5悬浮，用聚乙二醇浓缩，得到酶液。
b.离子交换层析
所的酶液上样到用磷酸钾缓冲液(0.08M pH5.5)预平衡的DEAE-Sepharose FastFlow层析柱(1.0cm×20cm)(Pharmacia公司)，用0～0.8MNaCl的缓冲液以3ml/min流速进行线性洗脱每管收集5mL，NaCl线性洗脱出4个蛋白峰，如图4。其中峰III为酶活力峰，如图5所示，即NaCl摩尔浓度为0.3-0.5mol/L洗脱峰具有亚油酸异构酶活性。
其中，亚油酸异构酶酶活的测定方法同实施例1。
c.酶液透析脱盐
将步骤b中收集的具有亚油酸异构酶活性的酶液装入透析袋中，浸入1000ml磷酸钾缓冲液(0.08M pH5.5)中，4℃下磁力搅拌12h，用10mM的NaCl缓冲液(pH5.5)检查脱盐情况，至无沉淀产生时，达到透析平衡。
d.凝胶过滤层析
将步骤c中到达到透析平衡的酶液上样到用磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)预平衡的Sephacryl 200HR凝胶层析柱(1.6cm×100cm)(Pharmacia公司)，以0.3ml/min流速，用磷酸钾缓冲液(0.08M pH5.5)洗脱，每管收集3mL，对每管洗脱液进行酶活检测，收集具有亚油酸异构酶活性的部分。结果如图6所示，第30-36洗脱液具有亚油酸异构酶活性。该具有亚油酸异构酶活性的洗脱峰酶液的酶比活力235.11U/mg洗脱峰酶液。经换算，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCCNo.1974菌体的亚油酸异构酶活性为228.05U/108CFU。其中，亚油酸异构酶活性的测定方法同实施例1。
实施例3、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974生产共轭亚油酸及亚油酸异构酶的提取纯化
一、共轭亚油酸的生产
该实施例中所用的发酵培养基按照如下方法配制：
(1)葵花籽油乳化液的配制：葵花籽油(上海佳格食品有限公司，多力牌100％纯正葵花籽油)600mg，吐温-80(Tween-80)0.5ml，去离子水5ml，超声波乳化(25℃，超声频率40KHz)10min，0.22μm微孔过滤膜过滤除菌，得到葵花籽油乳化液。
(2)脱脂乳培养基的配制：将12g脱脂奶粉(三元乳品股份有限公司)溶解于100ml水中，115℃、10min灭菌备用。
(3)发酵培养基的配制：将(1)的葵花籽油乳化液加入到(2)的脱脂乳培养基中，使葵花籽油的终浓度为6mg/ml，得到发酵培养基。
将经活化的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974用接种环挑取2环于种子培养基中，37℃培养8h后，取2％(体积比)种子培养液转接至装有4L发酵液的5L厌氧发酵罐中，37℃微氧培养(充N2驱除空气)培养8小时。其中，发酵罐的通风量(通氮气)：0-8小时，0.5vvm(即2L氮气/min)。
发酵结束后，采用紫外分光光度法测定CLA异构体总量，测定方法同实施例1的步骤一。
结果表明在发酵培养基中37℃微氧(充N2驱除空气)培养8小时CLA的生成量为100.895μg/mL发酵液。
二、亚油酸异构酶的提取纯化
将步骤1中的发酵液进行10000×g，15min的离心，收集细胞。向收集的细胞中加入0.15M磷酸钾缓冲液(pH7.0)和溶菌酶，使细胞的最终含量为2×1012CFU/ml，溶菌酶的终浓度为50g/L。用纳米NCJJ0.005/150型超高压均质机(河北廊坊通用机械有限公司)进行细胞破碎。其中，超高压均质的均质工作压力为150MPa，均质阀片直径0.15mm，重复四次，每次处理10min，处理温度为0℃。均质液经10000×g离心60min，取上清液部分，作为进一步纯化的粗酶液。
a.(NH4)2SO4分级沉淀
在冰水浴条件下，向步骤1得到的粗酶液中加入(NH4)2SO4至饱和度为60％(在冰浴中将研磨细的(NH4)2SO4边搅拌边缓慢的加入到粗酶液中，每升粗酶液加入(NH4)2SO4361克，4℃静置过夜、离心(10000×g，30min)收集沉淀(蛋白)，将每次所得沉淀用2-3倍体积的磷酸钾缓冲液(0.15M pH7.0)悬浮，用聚乙二醇浓缩，得到酶液。
b.离子交换层析
所的酶液上样上样到用磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)预平衡的DEAE-SepharoseFast Flow层析柱(1.0cm×20cm)(Pharmacia公司)，用0～0.8MNaCl的缓冲液以3ml/min流速进行线性洗脱每管收集5mL，NaCl线性洗脱出4个蛋白峰，如图7。其中峰III为酶活力峰，如图8所示，即NaCl摩尔浓度为0.3-0.5mol/L洗脱峰具有亚油酸异构酶活性。
其中，亚油酸异构酶酶活的测定方法同实施例1。
c.酶液透析脱盐
将步骤b中收集的具有亚油酸异构酶活性的酶液装入透析袋中，浸入1000ml磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)中，4℃下磁力搅拌12h，用10mM的NaCl缓冲液(pH6.0)检查脱盐情况，至无沉淀产生时，达到透析平衡。
d.凝胶过滤层析
将步骤c中到达到透析平衡的酶液上样到用磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)预平衡的Sephacryl 200HR凝胶层析柱(1.6cm×100cm)(Pharmacia公司)，以0.3ml/min流速，用磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)洗脱，每管收集3mL，对每管洗脱液进行酶活检测，收集具有亚油酸异构酶活性的部分。结果如图9所示，第31-36管洗脱液具有亚油酸异构酶活性。该具有亚油酸异构酶活性的洗脱峰酶液的酶比活力219.33U/mg洗脱峰酶液。经换算，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCCNo.1974菌体的亚油酸异构酶活性为210.92U/108CFU。其中，亚油酸异构酶活性的测定方法同实施例1。
Claims (4)
1.植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974。
2.一种生产共轭亚油酸的方法，是在发酵培养基中培养植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974，得到共轭亚油酸；
所述发酵培养基为含有植物油乳化液的脱脂乳培养基；所述植物油乳化液为葵花籽油乳化液，所述葵花籽油乳化液按照如下方法配制：将300-600mg葵花籽油与0.2-0.5ml吐温-80混合乳化，得到葵花籽油乳化液；所述脱脂乳培养基按照如下方法配制：将12g脱脂奶粉溶解于100ml水中，得到脱脂乳培养基；
所述发酵培养基中葵花籽油的终浓度为10mg/ml，培养温度为37℃，培养时间24小时，所述发酵的通风量为1.5-3L氮气/min。
3.一种生产共轭亚油酸的方法，是在发酵培养基中培养植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974，得到共轭亚油酸；
所述发酵培养基为含有植物油乳化液的脱脂乳培养基；所述植物油乳化液为葵花籽油乳化液，所述葵花籽油乳化液按照如下方法配制：将300-600mg葵花籽油与0.2-0.5ml吐温-80混合乳化，得到葵花籽油乳化液；所述脱脂乳培养基按照如下方法配制：将12g脱脂奶粉溶解于100ml水中，得到脱脂乳培养基；
所述发酵培养基中葵花籽油的终浓度为6mg/ml，培养温度为37℃，培养时间12小时，所述发酵的空气流量为1.5-3L氮气/min。
4.一种生产共轭亚油酸的方法，是在发酵培养基中培养植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974，得到共轭亚油酸；
所述发酵培养基为含有植物油乳化液的脱脂乳培养基；所述植物油乳化液为葵花籽油乳化液，所述葵花籽油乳化液按照如下方法配制：将300-600mg葵花籽油与0.2-0.5ml吐温-80混合乳化，得到葵花籽油乳化液；所述脱脂乳培养基按照如下方法配制：将12g脱脂奶粉溶解于100ml水中，得到脱脂乳培养基；
所述发酵培养基中葵花籽油的终浓度为4mg/ml，培养温度为37℃，培养时间8小时，所述发酵的空气流量为1.5-3L氮气/min。
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