CN101085981B - 一种食用菌液体菌种的固化处理方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种食用菌液体菌种的固化处理方法，包括以下方法：(1)试管保藏母种扩管活化：将保藏的母种转接到试管斜面上，在适温下培养；(2)制作摇瓶液体菌种；(3)发酵罐深层培养；(4)载体物质处理；(5)液体菌种固化。本发明的方法是在开放环境下离心制得固体菌种，突破了液体菌种的应用常规及其局限，省去了用液体菌种生产固体菌种必须经过培养这一阶段，实现了液体菌种便于使用的创新。因此，在食用菌的生产中，尤其对于促进我国食用菌产业从传统模式向工业化模式的转变具有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种食用菌菌种处理方法，尤其一种食用菌液体菌种的固化处理方法。
背景技术
食(药)用菌是惟一的在世界范围内被大量消费且市场走势一直看好的非光合作用植物性食(药)品，它以富含天然的蛋白质、氨基酸、维生素、多种矿质元素以及药理作用而倍受世人青睐。由于它的生产依赖于农、林业有机废弃物质，因而可将这些废弃的有机物质分解转化成优质蛋白。这既消除环境污染营造良好的生态环境，实现零的排放(zero emmision)，又提供人类需要的食(药)品，创造可观的经济效益和社会效益，所以食(药)用菌产业得以迅猛发展。现有的食(药)用菌生产过程包括：菌种的制备，培养基的处理，接种养菌，出菇，在这一系列过程中，菌种的制备尤为关键，菌种质量的优劣，不但直接关系到栽培的产量和质量，甚至还会影响到生产的成败。食(药)用菌菌种根据用途的不同分为：母种(一级菌种)、原种(二级菌种)、栽培种(三级菌种)。根据培养基的不同分为：固体菌种、液体菌种。固体菌种包括粪草菌种、木屑菌种、木块菌种、枝条菌种、谷粒菌种、颗粒菌种等；液体菌种是通过人工控制生长条件，使菌丝在培养液内快速繁殖而获得的。目前的食(药)用菌深层发酵主要应用在一下几个方面：①菌类多糖的生产②菌丝体产品及保健饮品的加工③生产液体菌种。固体菌种虽然具有便于操作，所需设备简单，成本低廉，利于运输而普遍被菇农和食(药)用菌栽培厂所接受的优点，但还存在着：培养时间长，菌种传代次数多，不耐保藏，个别菌种在培养过程中会出现子实体的缺点。而通常液体菌种则具有发菌时间短，菌种质量较高，生产成本较低的优点，但却存在具有以下缺点：(1)不耐储藏，液体菌种一旦发酵好，应尽快使用，否则时间稍长，菌种将会迅速老化，失去活力。就目前的研究数据看，液体菌种在4℃条件下可保存11天，室温条件下可保存2天；(2)产量不稳定，一般情况下，产量均较低，而且出现子实体较小，颜色不正常，潮次少，抗逆性差等现象；(3)对专业人员的技术水平要求比较高，目前液体菌种仅应用于大的科研院所，而对于分散式的菇农来说，则难于普及。
科学技术的日新月异促进了食(药)用菌产业的飞速发展，使食(药)用菌业正由传统的一家一户的栽培模式逐渐向工厂化、规模化栽培模式转变。食(药)用菌规模化生产除了要有充足的用于栽培原材料以外，还要满足规模化生产对菌种质、量的要求。传统的固体菌种生产方法费工费时，就拿食(药)用菌中菌丝生长较快的品种来说，从制作试管母种到栽培种能够使用就需要60天左右，加之培养室内不仅要夏季降温冬季升温以满足菌丝生长所需的最适温度，而且还要花费大量的人力物力进行挑杂、翻袋，这显然不适应规模化生产对菌种的要求。而现有的液体菌种的生产方法需要对专业人员的技术水平要求比较高，这就使得其仅应用于大的科研院所，而对于分散式的菇农来说，则难于普及。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的在于提供一种食用菌液体菌种的固化处理方法，以使生产出的菌种萌发力强，耐保藏，操作更加方便。
为了实现上述目的，本发明的技术方案在于采用了一种食用菌液体菌种的固化处理方法，包括以下方法：
(1)试管保藏母种扩管活化：将保藏的母种转接到试管斜面上，在室温下培养；
(2)制作摇瓶液体菌种：配制适宜的液体培养基，将液体培养基以100ml--150ml/250ml--500ml的装液量装入相应的三角瓶，在温度为115--130℃，压力为0.5-1.5公斤/平方厘米的条件下，灭菌25--35分钟，冷却后，接入0.5-1.5平方厘米菌种块，在20--30℃的温度，140--160r/min条件下摇床培养；
(3)发酵罐深层培养：按发酵罐总容量的75％配制液体培养基，在121℃，1公斤/平方厘米压力下，蒸汽灭菌20分钟。当温度降至25℃时，接入培养好的液体菌种，接种量为培养基总体积的10％--15％，在适宜条件下培养；
(4)载体物质处理：载体物质的处理方法为：向载体物质中加水，使其含水量达35％--65％，然后在温度为110--125℃，0.5-1.5公斤/平方厘米压力下，灭菌25--35分钟，冷却至室温；
(5)液体菌种固化：经发酵罐培养的液体菌种排放至干净消毒过的容器内，向液体菌种中加入处理好的载体物质，其中载体物质的加入量以1∶0.01～1∶0.1(载体物质干重/液体菌种体积)为宜，搅拌均匀，以2000r/min--5000r/min的转速离心去除部分水分，以湿度为40％--65％为宜，分装入塑料袋中，0℃--4℃或室温保存。
所述的步骤(4)中载体物质的处理方法还可以为：生料直接使用或者发酵后加以使用。
所述的步骤(4)中的载体物质为颗粒状有机物质。
所述的颗粒状有机物质为干燥、新鲜、无霉变的棉仔壳、木屑、植物秸秆、玉米芯、颗粒饲料、农作物种子或草炭中的一种或几种组合。
本发明的方法不同于常规的用液体菌种接种到固体基质上再经过培养生产固体菌种，而是利用深层发酵技术快速生产食用菌固体菌种，该方法生产栽培种最快的仅需5天左右，生产出的菌种萌发力强，耐保藏，保藏时间在4℃条件下可达60天之久，使用之前不需要活化；室温条件下可保存30天，操作及其方便。利用本发明的方法生产的固体菌种集合了常规固体菌种与液体菌种的优点，操作方便、容易掌握，生产过程省工省时，从源头上降低了生产成本，而且大大降低了用液体菌种直接进行生产所带来的风险，经过实验室小试、中试以及大田试验，均得到了理想的效果，无论从菌丝萌发及吃料速度、菌丝生长速度还是经栽培所得到的食(药)用菌子实体的生物学转化率均不低于常规水平；在生产中已经体现出很大的实用性与优越性。本发明的方法具有以下优点：
(1)降低了菌种成本、提高了菌种质量：利用农作物下脚料、某些工业废弃液等都可以作为原材料进行菌种生产，大大降低了菌种的生产成本；减少了菌种的传代次数，避免了菌种因传代次数过多引起的菌种退化，而且由于向液体菌种中加入了固体基质，能够诱导菌丝分泌某些胞外酶，这样就大大增加了菌种的活力，使菌种萌发快、吃料快、出菇早、产量可观；
(2)在短时间内就能生产大量菌种，能够满足食用菌的规模化生产：充足的菌种是食用菌规模化生产的关键，传统的菌种生产方法因费工费时已经跟不上食用菌产业的快速发展，而且会进一步成为食用菌规模化进程的障碍。该方法能够在短时间内生产出大量菌种，以平菇为例：平菇母种转管培养需6天，原种(750ml原种瓶)培养需25天左右，栽培种(18cm×35cm聚丙烯袋)培养需25天左右，因此传统方法生产平菇栽培种约需56天左右；而用液体菌种固化方法生产栽培种平菇母种转管培养需6天，三角瓶液体菌种培养需6天左右，发酵罐培养需5天左右，液体菌种固化所需时间可以忽略不计，因此用本发明的方法生产栽培种仅需17天左右，大大缩短了菌种生产时间；
(3)弥补了液体菌种的不足，能够促进深层发酵技术在食用菌中的推广应用：本方法在液体菌种的基础上做了改进，弥补了液体菌种的不足，生产出的菌种具有多重优点，因此将会对深层发酵技术在食用菌中的应用起到巨大的促进作用。
本发明的方法是在开放环境下离心制得固体菌种，突破了液体菌种的应用常规及其局限，省去了用液体菌种生产固体菌种必须经过培养这一阶段，实现了液体菌种便于使用的创新。因此，在食用菌的生产中，尤其对于促进我国食用菌产业从传统模式向工业化模式的转变具有重要意义。
具体实施方式
本发明的食用菌液体菌种的固化处理方法如下：
(1)试管保藏种扩管活化，将保藏的母种(平菇、香菇、双孢蘑菇、金针菇、鸡腿菇、灵芝、白灵菇、木耳、姬菇、杏鲍菇、茶薪菇中的任一种)转接到试管斜面上，在室温下培养；
(2)制作摇瓶液体菌种
配制适宜的液体培养基，将液体培养基以100ml/250ml或150ml/500ml装液量装入相应三角瓶，在121℃，1公斤/平方厘米压力下，灭菌30分钟，冷却后接入1平方厘米左右菌种块，在25℃，150r/min条件下摇床培养；
(3)发酵罐深层培养
按发酵罐总容量的75％配制液体培养基，在121℃，1公斤/平方厘米压力下，蒸汽灭菌20分钟，当温度降至25℃时，接入培养好的液体菌种，接种量为培养基总体积的10％，在适宜条件下培养；
(4)载体物质处理
好的载体是液体菌种固化过程中的关键，载体物质可以是棉仔壳、木屑、植物秸秆、玉米芯、颗粒饲料、农作物种子、草炭等颗粒状有机物质，但必须保证载体干燥、新鲜、无霉变，载体物质的处理方法为：向载体物质中加水，使其含水量达40％，然后在121℃，1公斤/平方厘米压力下，灭菌30分钟，冷却至室温；
(5)液体菌种固化
经发酵罐培养的液体菌种排放至干净消毒过的容器内，向液体菌种中加入处理好的载体物质，载体物质是干燥、新鲜、无霉变的棉仔壳、木屑、植物秸秆、玉米芯、颗粒饲料、农作物种子、草炭中的任一种，载体物质的处理为：向载体物质中加水，使其含水量达40％，然后在121℃，1公斤/平方厘米压力下，灭菌30分钟，冷却至室温，载体物质加入量以1∶0.01(液体菌种体积/载体物质干重)为宜，搅拌均匀，3000r/min离心去除部分水分，以湿度为50％为宜，分装入15cm～25cm×33cm～50cm、厚度0.06～0.02cm的低压聚乙烯塑料袋中，0℃～4℃或室温保存.室温下可保存20～35天，0℃～4℃下可保存45天～60天.
最后所应说明的是：以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (2)
1.一种食用菌液体菌种的固化处理方法，其特征在于：包括以下方法：
(1)试管保藏母种扩管活化：将保藏的母种转接到试管斜面上，在适温下培养；
(2)制作摇瓶液体菌种：配制适宜的液体培养基，将液体培养基以100ml-150ml/250ml--500ml的装液量装入相应的三角瓶，在温度为115--130℃，压力为0.5--1.5公斤/平方厘米的条件下，灭菌25--35分钟，冷却后，接入0.5-1.5平方厘米菌种块，在20--30℃的温度，140--160r/min条件下摇床培养；
(3)发酵罐深层培养：按发酵罐总容量的75％配制液体培养基，在121℃，1公斤/平方厘米压力下，蒸汽灭菌20分钟。当温度降至25℃时，接入培养好的液体菌种，接种量为培养基总体积的10％--15％，在适宜条件下培养；
(4)载体物质处理：载体物质的处理方法为：向载体物质中加水，使其含水量达35％--65％，然后在温度为110--125℃，0.5-1.5公斤/平方厘米压力下，灭菌25--35分钟，冷却至室温；所述的载体物质为颗粒状有机物质，所述的颗粒状有机物质为干燥、新鲜、无霉变的棉仔壳、木屑、植物秸秆、玉米芯、颗粒饲料、农作物种子或草炭中的一种或几种组合；
(5)液体菌种固化：经发酵罐培养的液体菌种排放至干净消毒过的容器内，向液体菌种中加入处理好的载体物质，其中载体物质的加入量以载体物质干重/液体菌种体积为1∶0.01～1∶0.1为宜，搅拌均匀，以2000r/min--5000r/min的转速离心去除部分水分，以湿度为40％--65％为宜，分装入塑料袋中，0℃～4℃或室温保存。
2.根据权利要求1所述的食用菌液体菌种的固化处理方法，其特征在于：所述的步骤(4)中载体物质的处理方法为：生料直接使用或者发酵后加以使用。
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