CN107963922A - 一种浒苔酵素有机肥的制备方法 - Google Patents

一种浒苔酵素有机肥的制备方法 Download PDF

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杨立军
李璐
尹凯欣
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    • Y02W30/40—Bio-organic fraction processing; Production of fertilisers from the organic fraction of waste or refuse

Abstract

本发明涉及肥料制备，特别涉及一种浒苔酵素有机肥的制备方法。本发明从腐熟浒苔中筛选菌种，其可产生抗菌物质，抑制有害微生物繁殖，改善土壤生态，产生纤维素酶、蛋白酶等多种酶，降解浒苔的多种组分，分泌淀粉酶、糖化酶、脂肪酶等酶系，具有生长速度快，产孢子量大，不产毒，分泌纤维素酶等特点，同样可高效降解浒苔，将浒苔中的纤维素、蛋白质、碳水化合物等有机物彻底降解成作物所能吸收的小分子物质，提高酵素菌的活力，增强肥效；此外发酵浒苔和腐植酸、黄腐酸钾等物质，不仅含有浒苔所特有的浒苔多糖、藻朊酸和脂肪酸等小分子物质，还具有活化生物体内多种转化酶和过氧化物酶，促进植物细胞分裂，刺激植物生长，形成营养全面有机肥料。

Description

一种浒苔酵素有机肥的制备方法
技术领域
本发明涉及肥料制备，特别涉及一种浒苔酵素有机肥的制备方法。
背景技术
当前农业的增产普遍依赖化肥，一方面会造成环境污染，事实上目前农村农田化肥污染已经相当严重，成为棘手的难题，另一方面还会影响农产品的品质。在中国加入WTO后，“有机绿色壁垒”也已成为农产品外贸出口的重要障碍。因此，人们逐渐认识到，在使用化肥的同时，必须提高有机肥的使用比例，增加土壤有机质含量，不断提高土地原有地力，特别对蔬菜、瓜果、烟草等经济类作物，使用有机肥料，既能增产，又能改善品质，起到保护生态环境的作用。随着国家对生态农业和可持续发展农业的需求，以及全球性绿色食品生产和消费的兴起，开发绿色无毒的生物肥料成了热潮。
酵素菌一词是日本人对酶的一种叫法，指具有生物催化功能的大分子物质，后来把经微生物发酵得到的具有生物活性物质的发酵液或发酵制品统称为酵素。
酵素菌肥料按其用途可以分为：酵素菌堆肥和作物重茬专用肥；酵素菌粒状肥和液体肥；酵素菌叶面喷肥三大类。酵素菌堆肥通常用作基肥，施入土壤后，能够控制土壤的各种病害传播，克服作物的重茬病害，并能产生大量的腐殖质，改善土壤的理化性状；能够增强土壤的保水保肥能力，提高地温，对各种保护地栽培的作物十分有利。作物重茬专用肥，是一种土壤活化剂和杀菌剂，不但能培肥地力，还能产生大量抗菌素，起到杀菌灭虫作用，能解决作物的重茬（烂根）问题。果园和蔬菜地使用一般用作基肥。酵素菌粒状肥适宜于以生食为主的蔬菜和水果，它既能作基肥，又能作追肥。磷酸粒状肥能有效地提高磷肥利用率，适宜于以果实和根茎为主的作物，利用该肥培育的幼苗，根系发达、抗逆性强，定植后缓苗快。酵素菌液体肥施入土壤后，能促进作物根系生长，增强根的活力，特别是重茬地或者是土壤板结、病虫害严重的地块，施用后效果尤为显著。酵素菌叶面喷肥又称黑砂糖农药。主要肥能改善农产品品质，施用后，可以克服过量氮引起的植株障碍，促进光合作用，消除由于不良天气对作物造成的减产或病害流行。
酵素菌发酵制成的生物有机肥具有成本低、增产幅度大、肥料综合效能高的优势，能全面预防各种病害，从而减少各种农药用量，使农产品的品质改善，有害化学物质和农药残留得到有效降低，达到无公害要求，是非常值得推广的农业实用技术，但是现如今所使用的酵素菌肥料的利用率较低，肥料在土壤中易流失。此外目前已开发的酵素菌肥产品存在见效慢，营养成分不全面，施入土壤中的酵素菌活力下降等问题。
因此，发明一种新型的酵素有机肥，以此来适应于农业发展的需求，是一件十分有必要的事情。
发明内容
6.本发明所要解决的技术问题：本发明的目的是针对目前酵素菌肥肥效低，营养成分不全面，施入土壤中的酵素菌活力低的问题，提供了一种浒苔酵素有机肥的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：
一种浒苔酵素生物肥的制备，该制备方法包括如下步骤：
（1）将腐烂浒苔加入无菌水，振荡，使之形成浒苔悬浊液，将浒苔悬浊液用无菌水进行梯度稀释至10-6的稀释级，取稀释后的浒苔悬浊液涂布于琼脂浒苔培养基培养，得浒苔培养液，取浒苔培养液分别涂布于放线菌培养基、真菌培养基、细菌琼脂培养基，培养，挑选出各平板上菌径最大的三种单菌落，将分离的三种单菌落进行划线分离2~3次，得到纯化后的细菌菌株、放线菌菌株和细菌菌株，将纯化后的细菌菌株，放线菌菌株和细菌菌株分别接种至放线菌液体培养基、细菌液体培养基、真菌液体培养基中培养，得细菌培养液、真菌培养液、放线菌培养液，干燥，得细菌粉末，真菌粉末，放线菌粉末；
（2）将浒苔、尿素和水混合均匀，得发酵原料，将细菌粉末、真菌粉末、放线菌粉末混合均匀，得混合菌剂，将混合菌剂接种至发酵原料中，发酵，每隔2天翻堆一次，得浒苔发酵物；
（3）将浒苔发酵物，腐植酸、黄腐酸钾、硅藻土、糠醛渣、膨润土等有机辅料
混合均匀，即为浒苔酵素有机肥。
1.所述步骤（1）中浒苔液体培养基：按质量份数计，取新鲜浒苔5~8份，酵母膏1~3份，氯化钠10~12份，氯化钙0.1~0.3份，磷酸氢二钾0.5~0.8份，硫酸镁1~2份，水1000份；放线菌培养基：按质量份数计，取蛋白胨5~9份，葡萄糖10~15份，无水硫酸镁0.5~1份，磷酸二氢钾1~3份，孟加拉红0.03~0.05份，氯霉素0.1~0.3份，琼脂20~25份，水1000份；细菌培养基：按质量份数计，取牛肉膏3~5份，蛋白胨10~14份，氯化钠5~7份，琼脂16~20份，水1000份；真菌琼脂培养基：按质量份数计，取马铃薯180~200份，加热煮沸后用纱布过滤，葡萄糖20~25份，琼脂18~20份，水1000份，pH自然；放线菌，真菌，细菌液体培养基；去掉相应固体培养基中的琼脂，其他组分不变。
所述步骤（1）中腐烂浒苔与无菌水的质量比为1:10，浒苔培养液的培养条件为30~35℃培养1~3天，纯化后的细菌菌株，放线菌菌株和细菌菌株分别与细菌液体培养基、放线菌液体培养基和细菌液体培养基的质量比分别为1:9，培养条件为30~35℃培养3~5天。
所述步骤（2）中浒苔和水的质量比为1:25，发酵原料与尿素的质量比为9:2，细菌粉末、真菌粉末、放线菌粉末的质量比为2:1:1，混合菌剂按质量分数为2%的接种量接种至发酵原料，发酵条件为25~30℃发酵14~16天。
所述步骤（2）中浒苔发酵物、腐植酸、黄腐酸钾、硅藻土、糠醛渣、膨润土的质量比为50:12:6::12:20:15。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
（1）本发明利用浒苔作为酵素肥发酵的原料，浒苔属于海藻的一种，具有海藻在营养上的多种优势，如富含海洋生物所特有的海藻多糖、高度不饱和脂肪酸、藻朊酸和天然生长调节物质如细胞分裂素、赤霉素等，另外，浒苔中还含有陆生作物所缺乏的各种矿质元素等多种营养物质，可以调节土壤酸碱度，增加农作物产量；
（2）本发明从腐熟浒苔中筛选得到高效的三类菌种，具有可以产生抗菌物质，抑制有害微生物的繁殖，改善土壤生态，产生纤维素酶、蛋白酶等多种酶，可以降解浒苔的多种组分，可以分泌淀粉酶、糖化酶、脂肪酶等多种酶系，具有生长速度快，产孢子量大，不产毒，可以分泌纤维素酶等特点，同样可以高效的降解浒苔，将浒苔中的纤维素、蛋白质、碳水化合物等有机物彻底降解成作物所能吸收的小分子物质，提高酵素菌的活力，增强了肥效；
（3）本发明通过发酵完全的浒苔和腐植酸、黄腐酸钾等有机辅料根据养分互补原则一起复合而成的，不仅含有浒苔所特有的浒苔多糖、藻朊酸和脂肪酸等小分子有机物质，还具有活化生物体内多种转化酶和过氧化物酶，促进植物细胞分裂，刺激植物生长等多种生理活性，形成了营养全面有机肥料。
具体实施方式
腐烂浒苔：青岛附近海域采集
浒苔液体培养基：按质量份数计，取新鲜浒苔5~8份，酵母膏1~3份，氯化钠10~12份，氯化钙0.1~0.3份，磷酸氢二钾0.5~0.8份，硫酸镁1~2份，水1000份。
放线菌培养基：按质量份数计，取蛋白胨5~9份，葡萄糖10~15份，无水硫酸镁0.5~1份，磷酸二氢钾1~3份，孟加拉红0.03~0.05份，氯霉素0.1~0.3份，琼脂20~25份，水1000份。
细菌培养基：按质量份数计，取牛肉膏3~5份，蛋白胨10~14份，氯化钠5~7份，琼脂16~20份，水1000份。
真菌琼脂培养基：按质量份数计，取马铃薯180~200份，加热煮沸后用纱布过滤，葡萄糖20~25份，琼脂18~20份，水1000份，pH自然。
放线菌，真菌，细菌液体培养基：去掉相应固体培养基中的琼脂，其他组分不变。
一种浒苔酵素生物肥的制备方法，包括如下步骤：
（1）将腐烂浒苔按质量比1:10加入无菌水，连续振荡1~2h，使之形成浒苔悬浊液，将浒苔悬浊液用无菌水进行梯度稀释至10-6的稀释级，取稀释后的浒苔悬浊液涂布于琼脂浒苔培养基30~35℃培养1~3天，得浒苔培养液，取浒苔培养液分别涂布于放线菌培养基、真菌培养基、细菌琼脂培养基，30~35℃培养3~5天，挑选出各平板上生长快，菌径最大的三种单菌落，将分离的三种单菌落进行划线分离2~3次，得到纯化后的细菌菌株、放线菌菌株和细菌菌株，将纯化后的细菌菌株，放线菌菌株和细菌菌株分别按质量比1:9接种至放线菌液体培养基、细菌液体培养基、真菌液体培养基中，30~35℃培养3~5天，得细菌培养液、真菌培养液、放线菌培养液，干燥，得细菌粉末，真菌粉末，放线菌粉末；
（2）将浒苔、尿素、水按质量比2:9:25混合，得发酵原料，将细菌粉末、真菌粉末、放线菌粉末按质量比2:1:1混合均匀，得混合菌剂，将混合菌剂按质量分数为2%的接种量接种至发酵原料中，25~30℃发酵14~16天，每隔2天翻堆一次，得浒苔发酵物；
（3）将浒苔发酵物、腐植酸、黄腐酸钾、硅藻土、糠醛渣、膨润土按质量比50:12:6::12:20:15混合均匀，即为浒苔酵素有机肥。
实施例1
腐烂浒苔：青岛附近海域采集
浒苔液体培养基：按质量份数计，取新鲜浒苔5份，酵母膏1份，氯化钠10份，氯化钙0.1份，磷酸氢二钾0.5份，硫酸镁1份，水1000份。
放线菌培养基：按质量份数计，取蛋白胨5份，葡萄糖10份，无水硫酸镁0.5份，磷酸二氢钾1份，孟加拉红0.03份，氯霉素0.1份，琼脂20份，水1000份。
细菌培养基：按质量份数计，取牛肉膏3份，蛋白胨10份，氯化钠5份，琼脂16份，水1000份。
真菌琼脂培养基：按质量份数计，取马铃薯180份，加热煮沸后用纱布过滤，葡萄糖20份，琼脂18份，水1000份，pH自然。
放线菌，真菌，细菌液体培养基：去掉相应固体培养基中的琼脂，其他组分不变。
一种浒苔酵素生物肥的制备方法，包括如下步骤：
（1）将腐烂浒苔按质量比1:10加入无菌水，连续振荡1h，使之形成浒苔悬浊液，将浒苔悬浊液用无菌水进行梯度稀释至10-6的稀释级，取稀释后的浒苔悬浊液涂布于琼脂浒苔培养基30℃培养1天，得浒苔培养液，取浒苔培养液分别涂布于放线菌培养基、真菌培养基、细菌琼脂培养基，30℃培养3天，挑选出各平板上生长快，菌径最大的三种单菌落，将分离的三种单菌落进行划线分离2次，得到纯化后的细菌菌株、放线菌菌株和细菌菌株，将纯化后的细菌菌株，放线菌菌株和细菌菌株分别按质量比1:9接种至放线菌液体培养基、细菌液体培养基、真菌液体培养基中，30℃培养3天，得细菌培养液、真菌培养液、放线菌培养液，干燥，得细菌粉末，真菌粉末，放线菌粉末；
（2）将浒苔和水按质量比1:25混合，得发酵原料，向发酵原料中按质量比9:2加入尿素，调节碳氮比，将细菌粉末、真菌粉末、放线菌粉末按质量比2:1:1混合均匀，得混合菌剂，将混合菌剂按质量分数为2%的接种量接种至发酵原料中，25℃发酵14天，每隔2天翻堆一次，得浒苔发酵物；
（3）将浒苔发酵物、腐植酸、黄腐酸钾、硅藻土、糠醛渣、膨润土按质量比50:12:6::12:20:15混合均匀，即为浒苔酵素有机肥。
实施例2
腐烂浒苔：青岛附近海域采集
浒苔液体培养基：按质量份数计，取新鲜浒苔6份，酵母膏2份，氯化钠11份，氯化钙0.2份，磷酸氢二钾0.6份，硫酸镁1份，水1000份。
放线菌培养基：按质量份数计，取蛋白胨7份，葡萄糖12份，无水硫酸镁0.7份，磷酸二氢钾2份，孟加拉红0.04份，氯霉素0.2份，琼脂22份，水1000份。
细菌培养基：按质量份数计，取牛肉膏4份，蛋白胨13份，氯化钠6份，琼脂18份，水1000份。
真菌琼脂培养基：按质量份数计，取马铃薯190份，加热煮沸后用纱布过滤，葡萄糖22份，琼脂19份，水1000份，pH自然。
放线菌，真菌，细菌液体培养基：去掉相应固体培养基中的琼脂，其他组分不变。
一种浒苔酵素生物肥的制备方法，包括如下步骤：
（1）将腐烂浒苔按质量比1:10加入无菌水，连续振荡1h，使之形成浒苔悬浊液，将浒苔悬浊液用无菌水进行梯度稀释至10-6的稀释级，取稀释后的浒苔悬浊液涂布于琼脂浒苔培养基33℃培养2天，得浒苔培养液，取浒苔培养液分别涂布于放线菌培养基、真菌培养基、细菌琼脂培养基，33℃培养4天，挑选出各平板上生长快，菌径最大的三种单菌落，将分离的三种单菌落进行划线分离2次，得到纯化后的细菌菌株、放线菌菌株和细菌菌株，将纯化后的细菌菌株，放线菌菌株和细菌菌株分别按质量比1:9接种至放线菌液体培养基、细菌液体培养基、真菌液体培养基中，33℃培养4天，得细菌培养液、真菌培养液、放线菌培养液，干燥，得细菌粉末，真菌粉末，放线菌粉末；
（2）将浒苔和水按质量比1:25混合，得发酵原料，向发酵原料中按质量比9:2加入尿素，调节碳氮比，将细菌粉末、真菌粉末、放线菌粉末按质量比2:1:1混合均匀，得混合菌剂，将混合菌剂按质量分数为2%的接种量接种至发酵原料中，27℃发酵15天，每隔2天翻堆一次，得浒苔发酵物；
（3）将浒苔发酵物、腐植酸、黄腐酸钾、硅藻土、糠醛渣、膨润土按质量比50:12:6::12:20:15混合均匀，即为浒苔酵素有机肥。
实施例3
腐烂浒苔：青岛附近海域采集
浒苔液体培养基：按质量份数计，取新鲜浒苔8份，酵母膏3份，氯化钠12份，氯化钙0.3份，磷酸氢二钾0.8份，硫酸镁2份，水1000份。
放线菌培养基：按质量份数计，取蛋白胨9份，葡萄糖15份，无水硫酸镁1份，磷酸二氢钾3份，孟加拉红0.05份，氯霉素0.3份，琼脂25份，水1000份。
细菌培养基：按质量份数计，取牛肉膏5份，蛋白胨14份，氯化钠7份，琼脂20份，水1000份。
真菌琼脂培养基：按质量份数计，取马铃薯180~200份，加热煮沸后用纱布过滤，葡萄糖25份，琼脂20份，水1000份，pH自然。
放线菌，真菌，细菌液体培养基：去掉相应固体培养基中的琼脂，其他组分不变。
一种浒苔酵素生物肥的制备方法，包括如下步骤：
（1）将腐烂浒苔按质量比1:10加入无菌水，连续振荡2h，使之形成浒苔悬浊液，将浒苔悬浊液用无菌水进行梯度稀释至10-6的稀释级，取稀释后的浒苔悬浊液涂布于琼脂浒苔培养基35℃培养3天，得浒苔培养液，取浒苔培养液分别涂布于放线菌培养基、真菌培养基、细菌琼脂培养基，35℃培养5天，挑选出各平板上生长快，菌径最大的三种单菌落，将分离的三种单菌落进行划线分离3次，得到纯化后的细菌菌株、放线菌菌株和细菌菌株，将纯化后的细菌菌株，放线菌菌株和细菌菌株分别按质量比1:9接种至放线菌液体培养基、细菌液体培养基、真菌液体培养基中，35℃培养5天，得细菌培养液、真菌培养液、放线菌培养液，干燥，得细菌粉末，真菌粉末，放线菌粉末；
（2）将浒苔和水按质量比1:25混合，得发酵原料，向发酵原料中按质量比9:2加入尿素，调节碳氮比，将细菌粉末、真菌粉末、放线菌粉末按质量比2:1:1混合均匀，得混合菌剂，将混合菌剂按质量分数为2%的接种量接种至发酵原料中，30℃发酵16天，每隔2天翻堆一次，得浒苔发酵物；
（3）将浒苔发酵物、腐植酸、黄腐酸钾、硅藻土、糠醛渣、膨润土按质量比50:12:6::12:20:15混合均匀，即为浒苔酵素有机肥。
对比例：山东某生物科技有限公司生产的酵素有机肥
方法：将西瓜种植区分为等面积的4个区域，每个区域100株；各使用由实施例与对比例所制备的酵素有机肥，施用量为每棵植物2g肥料，每10天施用一次，90天后检测农田内西瓜的具体生长情况。以此来表征酵素有机肥的肥效的性能好坏。
酵素有机肥肥效的具体检测情况如表1
表1
注：试验前，主根的平均长度为10cm，瓜蔓的平均长度为25cm。
酵素有机肥的活菌数和菌速活力具体检测情况如表2
表2
注：使用前实施例制备的酵素有机肥的菌速活力：实施例1为0.4358；实施例2为0.5627；实施例3为0.6157；对比例为0.4368。
由上表可知，本发明所制备的酵素有机肥，是一种安全且高效的酵素有机肥，值得推广和使用。

Claims (5)

1.一种浒苔酵素生物肥的制备，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：
（1）将腐烂浒苔加入无菌水，振荡，使之形成浒苔悬浊液，将浒苔悬浊液用无菌水进行梯度稀释至10-6的稀释级，取稀释后的浒苔悬浊液涂布于琼脂浒苔培养基培养，得浒苔培养液，取浒苔培养液分别涂布于放线菌培养基、真菌培养基、细菌琼脂培养基，培养，挑选出各平板上菌径最大的三种单菌落，将分离的三种单菌落进行划线分离2~3次，得到纯化后的细菌菌株、放线菌菌株和细菌菌株，将纯化后的细菌菌株，放线菌菌株和细菌菌株分别接种至放线菌液体培养基、细菌液体培养基、真菌液体培养基中培养，得细菌培养液、真菌培养液、放线菌培养液，干燥，得细菌粉末，真菌粉末，放线菌粉末；
（2）将浒苔、尿素和水混合均匀，得发酵原料，将细菌粉末、真菌粉末、放线菌粉末混合均匀，得混合菌剂，将混合菌剂接种至发酵原料中，发酵，每隔2天翻堆一次，得浒苔发酵物；
（3）将浒苔发酵物，腐植酸、黄腐酸钾、硅藻土、糠醛渣、膨润土等有机辅料
混合均匀，即为浒苔酵素有机肥。
2.根据权利要求1所述的浒苔酵素生物肥的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中浒苔液体培养基：按质量份数计，取新鲜浒苔5~8份，酵母膏1~3份，氯化钠10~12份，氯化钙0.1~0.3份，磷酸氢二钾0.5~0.8份，硫酸镁1~2份，水1000份；放线菌培养基：按质量份数计，取蛋白胨5~9份，葡萄糖10~15份，无水硫酸镁0.5~1份，磷酸二氢钾1~3份，孟加拉红0.03~0.05份，氯霉素0.1~0.3份，琼脂20~25份，水1000份；细菌培养基：按质量份数计，取牛肉膏3~5份，蛋白胨10~14份，氯化钠5~7份，琼脂16~20份，水1000份；真菌琼脂培养基：按质量份数计，取马铃薯180~200份，加热煮沸后用纱布过滤，葡萄糖20~25份，琼脂18~20份，水1000份，pH自然；放线菌，真菌，细菌液体培养基；去掉相应固体培养基中的琼脂，其他组分不变。
3.根据权利要求1所述的浒苔酵素生物肥的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中腐烂浒苔与无菌水的质量比为1:10，浒苔培养液的培养条件为30~35℃培养1~3天，纯化后的细菌菌株，放线菌菌株和细菌菌株分别与细菌液体培养基、放线菌液体培养基和细菌液体培养基的质量比分别为1:9，培养条件为30~35℃培养3~5天。
4.根据权利要求1所述的浒苔酵素生物肥的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中浒苔和水的质量比为1:25，发酵原料与尿素的质量比为9:2，细菌粉末、真菌粉末、放线菌粉末的质量比为2:1:1，混合菌剂按质量分数为2%的接种量接种至发酵原料，发酵条件为25~30℃发酵14~16天。
5.根据权利要求1所述的浒苔酵素生物肥的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中浒苔发酵物、腐植酸、黄腐酸钾、硅藻土、糠醛渣、膨润土的质量比为50:12:6::12:20:15。
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