CN101062086B - 一种降低血脂、溶解血栓的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种降低血脂、溶解血栓药物组合物及其制备方法。该药物组合物主要由大豆、葛根100重量份组成。本组合物经过常规工艺直接或间接加入药学上可接受的赋型剂制成临床可接受的剂型，如片剂、口服液、颗粒剂、胶囊、注射剂等，本组合物能够治疗原发性帕金森病，本发明药物组合物具有溶解血栓、防止骨质疏松症、抗菌消毒、预防高血压、抑制高血糖、防止脑的老化、提高免疫力和美容养颜的作用。

Description

一种降低血脂、溶解血栓的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其制备方法和质量控制方法，特别涉及一种降低血脂、溶解血栓的药物组合物及其制备方法和质量控制方法。

背景技术

血脂异常可导致动脉粥样硬化和冠心病、脑中风已被公认。近十几年来，国内开展的有关血脂的流行病学研究发现，全国血脂异常的成人高达42.9％。由此推断，我国人群中具有血脂异常的人群总数应逾亿人。由于血脂异常很少出现临床症状，长期服用药物治疗大多数人难以接受，因此，探索如何有效地通过饮食保健干预或改变生活方式来控制和预防人群中血脂代谢异常是我们面对的巨大挑战。

随着人们生活水平的提高，血脂异常的发病率逐年增高，在中青年人群中尤为明显。我国血脂异常治疗现状的调查报告指出，目前血脂异常治疗三项指标全部达标者仅占10.1％。血脂异常危害性大，发病率高，趋向年轻化，控制率低是目前现状。

高脂血症早期多数没有临床表现，这也是很多人不重视的主要原因。该病对身体的损害是隐匿、逐渐、进行性和全身性的。它的直接损害是加强全身动脉粥样硬化，因为全身的重要器官是依靠动脉供血、供氧的，一但粥样斑块堵塞动脉，就会造成严重后果。动脉硬化引起肾功能衰竭等都与高脂血症密切相关。大量研究表明，高脂血症是脑卒中、冠心病、心肌梗塞、心脏猝死的重要的危险因素。高脂血症患者体内产生大量的脂质过氧化物，使该物质沉积在血管内皮，造成内皮细胞破坏逐步形成动脉粥样硬化和微血管病变。高血脂还可增加血浆的粘稠度，造成血细胞聚集性增强，从而引起高凝和高粘状态，有形成血栓和出现微循环障碍之倾向。由于高脂血症患者血中纤溶系统平衡失调，这可能是高脂血症患者出现高凝状态或血栓的重要因素。

大多数患者的血脂异常是由于饮食不当造成的。因此，对于由于饮食因素所致的高脂血症患者来说，采取适当的饮食措施结合长期规律的体育锻炼和维持理想的体重，高脂血症是可以预防的。对由于内分泌或代谢因素及少数遗传因素引起的高脂血症，只有通过药物和综合治疗措施加以控制和改善，才能纠正脂质代谢紊乱，并减轻临床症状。

目前，我国保健品市场正处于快速发展时期，每年的销售额都高达几百亿，调节血脂类保健品品种较多占市场比重较大，达到16％左右。然而在调节血脂类保健品中绝大多数降血脂作用较差，并且只注重表面症状没有考虑到高血脂会引起微血栓的形成，现代医学认为微血栓对人体的危害远大于高脂血症。

纳豆作为一种大豆发酵制品，在日本作为主要佐餐食品已有1000多年的历史了。目前，纳豆已盛行于日本、加拿大、美国和欧洲一些国家。纳豆含有丰富的纳豆激酶、卵磷脂、亚油酸以及生理活性蛋白质和肽，它们降低血液粘稠度、降血脂、降血清胆固醇及维护血管弹性，进而预防冠心病、脑中风、高血压，这已是广为认知的。因此，纳豆已成为举世公认的医疗保健食品。

葛根是一种既食又药的药材，近年来广大学者对其进行了深入的研究，发现其具有(1)调节血脂的作用：可降低高脂血症中已升高的胆固醇、甘油三脂、LDL水平，减少脂质沉积.(2)改善血液流变学的作用：可降低血液黏滞度，减少红细胞电泳时间，减慢血沉和降低纤维蛋白原含量.(3)葛根素对脂质过氧化所致的内皮细胞损害具有保护作用，可提高内皮细胞的活性，促进内皮细胞的增殖.

该产品具有确切的降低血脂、防治血栓形成及溶栓的功能等特点，这具有重要保健意义。它不但具有传统保健品降低血脂的优势，同时还具备激活纤溶系统清除血管中微血栓、防止血栓再形成的作用。

发明内容

本发明目的在于提供一种药物组合物及其制剂制备方法，本发明另一目的在于提供该药物组合物制剂的质量控制方法及用途。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

本发明药物组合物的原料药组成如下：

大豆100-500重量份        葛根100-200重量份。

上述原料药的优选重量配比如下：

大豆500重量份    葛根100重量份；

大豆400重量份    葛根100重量份；

大豆300重量份    葛根100重量份；

大豆200重量份    葛根100重量份或

大豆100重量份    葛根200重量份。

本发明中药组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床可接受的剂型，如：胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂、口服液体制剂。

本发明组合物的具体制备工艺如下：

大豆经过精选，洗净，在30℃温水中浸泡8-12小时，然后于110℃-121℃灭菌30-40分钟，放置室温，接入纳豆菌种1，2，3级菌种(由中国农业微生物菌种保藏管理中心提供编号ACCC10614)，接种量0.3-2％，于36-38℃发酵，培养24-48小时，冷置室温；用组织捣碎机将其破碎，装入自制层析柱，上样体积为柱高的1/3-1/2，加入1-3倍体积份90％-95％乙醇后自然沉降2-4小时，在恒流泵的帮助下进行逆时针循环2-3次，流速3-5ml/min，每次提取3-4小时，抽滤后药粉用90％-95％乙醇脱水，脱水药粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，备用；

葛根去杂质洗净，70℃-90℃低温干燥12-16小时，破碎，过20目筛，药粉上提取罐，用7-8倍重量份80％乙醇回流提取2-4次，板框过滤。乙醇液回收乙醇至无醇味。药渣加水7-10倍重量份煎煮2-4次，过滤，弃渣，保留药液；乙醇提取药液合并水煎液浓缩成膏，40-60℃真空干燥36-48小时，粉碎成粉与上述大豆备用粉混匀，加入常规辅料，按常规方法制成胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂、口服液体制剂。

本发明组合物的优选制备工艺如下：

大豆经过精选，洗净，在30℃温水中浸泡10小时，然后于121℃灭菌35分钟，放置室温，接入纳豆菌种1，2，3级菌种(由中国农业微生物菌种保藏管理中心提供编号ACCC10614)，接种量0.5％，于37℃发酵，培养36小时，冷置室温.用组织捣碎机将其破碎，装入自制层析柱，上样体积为柱高的1/3，加入2倍体积份95％乙醇后自然沉降3小时，在恒流泵的帮助下进行逆时针循环2次，流速4ml/min，每次提取4小时，抽滤后药粉用95％乙醇脱水，脱水药粉放入50℃真空干燥，粉碎，备用.

葛根去杂质洗净，80℃低温干燥12小时，破碎，过20目筛，药粉上提取罐，用8倍重量份80％乙醇回流提取2次，板框过滤。乙醇液回收乙醇至无醇味。药渣加水7倍重量份煎煮2次，过滤，弃渣，保留药液。乙醇提取药液合并水煎液浓缩成膏，50℃真空干燥48小时，粉碎成粉与上述纳豆备用粉混匀，制成胶囊剂。

上述重量份和体积份的关系为：g/ml。

本发明的质量检测方法包括如下鉴别和/或含量测定

鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种：

A.取本发明药物组合物制剂1.5g，加甲醇10ml，放置2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以7∶2.5∶0.25氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑；

B.取本发明药物组合物制剂1.5g，加甲醇10ml，放置2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取大豆苷元对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以8∶2氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑。

质量检测方法中的含量测定包括如下一种或几种：

A.高效液相法测定：色谱条件与系统适应性试验；色谱柱：大连依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以23∶77甲醇-水为流动相；检测波长为250nm；理论板数按葛根素峰计算应不低于3000；对照品溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，加甲醇制成1ml含80μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本发明药物组合物0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，功率250w，频率33kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；每克药物组合物含葛根素不低于1.5mg。

B.高效液相法测定：色谱条件与系统适应性试验；色谱柱：大连依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以30∶8∶62甲醇-加腈-0.1磷酸为流动相；检测波长为250nm；对照品溶液的制备：取大豆苷元对照品适量，精密称定，加甲醇制成1ml含60μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，功率250w，频率33kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；每克药物组合物含大豆苷元不低于5mg。

C.纤维蛋白平板法测定：供试品溶液的制备：取本发明药物组合物制剂10g，用3倍量生理盐水浸提10小时，离心取上清液，80％乙醇沉淀，沉淀用无水乙醇脱水后，用生理盐水定溶至5ml，备用；Uk标准曲线制定：将Uk精密配成10U/ml、20U/ml、30U/ml、40U/ml、50U/ml、60U/ml的溶液；用纤维蛋白原、凝血酶和琼脂糖制成琼脂糖纤维蛋白平板，待平板凝结后，各取50μl不同浓度的Uk标准液点在平板上，37温箱中放置2h，根据溶圈面积及浓度，制定标准曲线；活性测定：取供试品50μl点在用纤维蛋白原、凝血酶和琼脂糖制成琼脂糖纤维蛋白平板上，重复5次，将平板置37温箱中放置2h，测定溶圈面积，取平均值；将其与Uk标准曲线对比测定活性；然后，换算为每克含有纳豆激酶不低于33个活性单位。

本发明药物组合物胶囊剂药效学实验表明本发明药物组合物胶囊能够降低高脂血症大鼠血中TG、TC、LDL-C含量，升高HDL-C含量；具有延长动脉血栓形成时间、降低静脉血栓重量、加速体外血栓溶解的作用。

下述实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例1  对高脂血症大鼠血脂的影响实验

动物模型的建立：给大鼠喂以高脂饲料(胆固醇1％，甲基硫氧啥陡0.2％，猪胆盐0.3％a，猪油7.5％，蛋黄粉10％n，基础饲料81％)，42d后，受试动物血中TC，TG，LDL一C显著升高，同时HDL一C显著降低，说明高脂血症模型复制成功。

动物分组及给药方法：取上述大鼠50只适应性饲养1周，按体重和血脂水平随机分成5组，即空白对照组、模型对照组、本发明药物组合物胶囊低剂量组、本发明药物组合物胶囊中剂量组、本发明药物组合物胶囊高剂量组。除空白对照组喂基础饲料外，其余各组均喂高脂饲料；每天在给予高脂饲料同时，给药组按2ml/100g体积灌胃给予本发明药物组合物胶囊低剂量0.378g/kg、中剂量0.756g/kg、高剂量1.512g/kg，空白对照组和模型对照组每日给予同体积水，连续给药15d；每周称量体重1次，以便调整给药剂量。末次给药后，禁食12h，摘取眼球取血。按试剂盒操作，在半自动生化分析仪上测定大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C。结果见表1：

表1本发明药物组合物胶囊对高脂血症大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C的影响(X±SD n＝10)

注：与空白组比较#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较△P＜0.05，△△P＜0.01

实验结果：

与空白组比较，在TC、TG、LDL-C、HDL-C个指标中模型组差异具有极为显著性意义(p＜0.01)；与模型组比较在TC、TG只有本发明药物组合物胶囊高、中剂量差异具有极为显著性意义(p＜0.01)，本发明药物组合物胶囊低剂量组虽降低但无统计学意义；与模型组比较在LDL-C中本发明药物组合物胶囊各剂量差异具有极为显著性意义(p＜0.01)；与模型组比较在HDL-C只有本发明药物组合物胶囊高剂量差异具有极为显著性意义(p＜0.01)，本发明药物组合物胶囊中剂量差异具有显著性意义(p＜0.05)，本发明药物组合物胶囊低剂量组虽升高但无统计学意义.

实验例2  对大鼠体内动脉血栓形成的影响实验

取大鼠40只，体重在180～220g，雌雄各半，将其随机分为4组，每组10只，雌雄各5只，即本发明药物组合物胶囊高剂量组1.13g/kg；本发明药物组合物胶囊中剂量组0.568g/kg；本发明药物组合物胶囊低剂量组0.284g/kg；空白对照组给予等容量生理盐水。采用灌胃给药，每天一次，连续七天，末次给药后30分钟，将大鼠用20％乌拉但麻醉，剥离大鼠颈总动脉，在远心端进行动脉插管用四道生理记录仪加测血压，在近心端用45％的三氯化铁溶液浸泡的0.5cm宽的滤纸条包裹动脉，记录从包裹到血压降为0时的时间为动脉血栓形成时间，记录数据，各组进行组间t检验统计分析。结果见表2

表2本发明药物组合物胶囊对大鼠体内动脉血栓形成的影响(X±SD)

注：与空白对照组比较△p＜0.05  △△p＜0.01

实验结果：

本发明药物组合物胶囊各剂量及脉血康胶囊组与空白对照组比较均能延长动脉血栓形成时间，本发明药物组合物胶囊高、中剂量组差异有显著性意义(p＜0.05)。实验结论：统计结果分析表明，本发明药物组合物胶囊具有延长动脉血栓形成时间的作用。

实验例3  对大鼠体内静脉血栓形成的影响实验

取大鼠40只，体重在180-220g，雌雄各半，将其随机分为4组，每组10只，雌雄各5只，即本发明药物组合物胶囊高剂量组1.13g/kg；本发明药物组合物胶囊中剂量组0.568g/kg；本发明药物组合物胶囊低剂量组0.284g/kg；空白对照组给予等容量生理盐水。采用灌胃给药，每天一次，连续七天，末次给药后30分钟，将大鼠用20％乌拉但麻醉，剥离大鼠下腔总静脉，在左肾静脉下端用线结扎下腔总静脉，3h后打开下腔总静脉取出血栓称重，记录数据，各组进行组间t检验统计分析。结果见表3

表3本发明药物组合物胶囊对大鼠体内静脉血栓形成的影响(X±SD)

注：与空白对照组比较△p＜0.05  △△p＜0.01，

实验结果：本发明药物组合物胶囊各剂量与空白对照组比较均能减少静脉血栓重量，本发明药物组合物胶囊高、中剂量组差异有显著性意义(p＜0.05)。实验结论：统计结果分析表明，本发明药物组合物胶囊具有降低静脉血栓重量的作用。

实验例4  对家兔体内外血栓溶解的影响实验

取健康家兔一只，颈动脉采血，静止2小时，用手术刀仔细分取0.5g血块40粒，称重后放入试管中。将试管分为5组，即空白对照组、本发明药物组合物胶囊低剂量组、本发明药物组合物胶囊中剂量组、本发明药物组合物胶囊高剂量组。每只试管加5ml相应试药。空白对照组家蒸馏水，本发明药物组合物胶囊低、中、高剂量组分别加2.8％、5.6％、11.2％的本发明药物组合物胶囊混悬液。放入37水浴箱中水浴3h，取出吸去水分后称重，按下列公式计算溶解率：溶解率＝(溶解前重量-溶解后重量)/溶解前重量×100％结果见表5，

表4本发明药物组合物胶囊对体外血栓溶解的影响(X±SD)

注：与空白对照组比较△p＜0.05  △△p＜0.01，

实验结果：

本发明药物组合物胶囊各剂量与空白对照组比较均能增加体外血栓溶解率，本发明药物组合物胶囊各剂量组差异有极为显著性意义(p＜0.01)。实验结论：统计结果分析表明，本发明药物组合物胶囊具有加速体外血栓溶解的作用。

下述实施例均能实现上述实验例的效果。

具体实施方式

实施例1：颗粒剂的制备

大豆500kg    葛根100kg

大豆经过精选，洗净，在30℃温水中浸泡12小时，然后于121℃灭菌40分钟，放置室温，接入纳豆菌种1，2，3级菌种(由中国农业微生物菌种保藏管理中心提供编号ACCC10614)，接种量0.5％，于37℃发酵，培养40小时，冷置室温.用组织捣碎机将其破碎，装入自制层析柱上样体积为柱高的1/3，加入2倍体积份90％乙醇后自然沉降3小时，在恒流泵的帮助下进行逆时针循环3次，流速3-5ml/min，每次提取3小时，抽滤后药粉用90％乙醇脱水，脱水药粉放入60℃真空干燥，粉碎，备用.

葛根去杂质洗净，70℃低温干燥12小时，破碎，过20目筛，药粉上提取罐，用7倍重量份80％乙醇回流提取2次，板框过滤。乙醇液回收乙醇至无醇味。药渣加水7倍重量份煎煮2次，过滤，弃渣，保留药液；乙醇提取药液合并水煎液浓缩成膏，40℃真空干燥36小时，粉碎成粉与上述大豆备用粉混匀，加入常规辅料，按常规方法制成颗粒剂。

实施例2：胶囊剂的制备

大豆400kg    葛根100kg

大豆经过精选，洗净，在30℃温水中浸泡10小时，然后于121℃灭菌35分钟，放置室温，接入保藏号ACCC10614的纳豆菌种1，2，3级菌种，接种量0.5％，于37℃发酵，培养36小时，冷置室温；用组织捣碎机将其破碎，装入自制层析柱，上样体积为柱高的1/3，加入2倍体积份95％乙醇后自然沉降3小时，在恒流泵的帮助下进行逆时针循环2次，流速4ml/min，每次提取4小时，抽滤后药粉用95％乙醇脱水，脱水药粉放入50℃真空干燥，粉碎，备用；

葛根去杂质洗净，80℃低温干燥12小时，破碎，过20目筛，药粉上提取罐，用8倍重量份80％乙醇回流提取2次，板框过滤；乙醇液回收乙醇至无醇味；药渣加水7倍重量份煎煮2次，过滤，弃渣，保留药液；乙醇提取药液合并水煎液浓缩成膏，50℃真空干燥48小时，粉碎成粉与上述纳豆备用粉混匀，制成胶囊剂。

实施例3：丸剂的制备

大豆300kg    葛根100kg

大豆经过精选，洗净，在30℃温水中浸泡12小时，然后于121℃灭菌40分钟，放置室温，接入纳豆菌种1，2，3级菌种(由中国农业微生物菌种保藏管理中心提供编号ACCC10614)，接种量0.5％，于37℃发酵，培养40小时，冷置室温。用组织捣碎机将其破碎，装入自制层析柱上样体积为柱高的1/3，加入2倍体积份90％乙醇后自然沉降3小时，在恒流泵的帮助下进行逆时针循环3次，流速3-5ml/min，每次提取3小时，抽滤后药粉用90％乙醇脱水，脱水药粉放入60℃真空干燥，粉碎，备用。

葛根去杂质洗净，70℃低温干燥12小时，破碎，过20目筛，药粉上提取罐，用7倍重量份80％乙醇回流提取2次，板框过滤。乙醇液回收乙醇至无醇味。药渣加水7倍重量份煎煮2次，过滤，弃渣，保留药液；乙醇提取药液合并水煎液浓缩成膏，40℃真空干燥36小时，粉碎成粉与上述大豆备用粉混匀，加入常规辅料，按常规方法制成丸剂。

实施例4：片剂的制备

大豆200kg    葛根100kg

大豆经过精选，洗净，在30℃温水中浸泡11小时，然后于121℃灭菌35分钟，放置室温，接入保藏号ACCC10614的纳豆菌种1，2，3级菌种，接种量1％，于36℃发酵，培养45小时，冷置室温；用组织捣碎机将其破碎，装入自制层析柱上样体积为柱高的1/2，加入2倍体积份95％乙醇后自然沉降2小时，在恒流泵的帮助下进行逆时针循环2-3次，流速3-5ml/min，每次提取4小时，抽滤后药粉用95％乙醇脱水，脱水药粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，备用；

葛根去杂质洗净，90℃低温干燥14小时，破碎，过20目筛，药粉上提取罐，用8倍重量份80％乙醇回流提取3次，板框过滤。乙醇液回收乙醇至无醇味；药渣加水10倍重量份煎煮4次，过滤，弃渣，保留药液；乙醇提取药液合并水煎液浓缩成膏，55℃真空干燥40小时，粉碎成粉与上述大豆备用粉混匀，加入常规辅料，按常规方法制成片剂。

实施例5：口服液的制备

大豆100kg    葛根200kg

大豆经过精选，洗净，在30℃温水中浸泡10小时，然后于121℃灭菌40分钟，放置室温，接入保藏号ACCC10614的纳豆菌种1，2，3级菌种，接种量0.8％，于38℃发酵，培养48小时，冷置室温；用组织捣碎机将其破碎，装入自制层析柱上样体积为柱高的1/2，加入3倍体积份90％乙醇后自然沉降4小时，在恒流泵的帮助下进行逆时针循环3次，流速5ml/min，每次提取3小时，抽滤后药粉用90％乙醇脱水，脱水药粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，备用；

葛根去杂质洗净，70℃低温干燥16小时，破碎，过20目筛，药粉上提取罐，用7倍重量份80％乙醇回流提取4次，板框过滤。乙醇液回收乙醇至无醇味；药渣加水7倍重量份煎煮4次，过滤，弃渣，保留药液；乙醇提取药液合并水煎液浓缩成膏，40℃真空干燥48小时，粉碎成粉与上述大豆备用粉混匀，加入常规辅料，按常规方法制成口服液体制剂。

实施例6：质量检测中的鉴别方法

取实施例3的内容物进行鉴别：

A.取本发明药物组合物制剂1.5g，加甲醇10ml，放置2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以7∶2.5∶0.25氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑；

B.取本发明药物组合物粉末1.5g，加甲醇10ml，放置2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取大豆苷元对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以8∶2氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑。

实施例7：质量检测中的含量测定方法

取实施例2的内容物进行含量测定：

A.高效液相法测定：色谱条件与系统适应性试验；色谱柱：大连依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以23∶77甲醇-水为流动相；检测波长为250nm；理论板数按葛根素峰计算应不低于3000；对照品溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，加甲醇制成1ml含80μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本发明药物组合物适量，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，功率250w，频率33kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

B.高效液相法测定：色谱条件与系统适应性试验；色谱柱：大连依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以30∶8∶62甲醇-加腈-0.1磷酸为流动相；检测波长为250nm；对照品溶液的制备：取大豆苷元对照品适量，精密称定，加甲醇制成1ml含60μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，功率250w，频率33kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

C.纤维蛋白平板法测定：供试品溶液的制备：取本发明药物组合物10g，用3倍量生理盐水浸提10小时，离心取上清液，80％乙醇沉淀，沉淀用无水乙醇脱水后，用生理盐水定溶至5ml，备用；Uk标准曲线制定：将Uk精密配成10U/ml、20U/ml、30U/ml、40U/ml、50U/ml、60U/ml的溶液；用纤维蛋白原、凝血酶和琼脂糖制成琼脂糖纤维蛋白平板，待平板凝结后，各取50μl不同浓度的Uk标准液点在平板上，37温箱中放置2h，根据溶圈面积及浓度，制定标准曲线；活性测定：取供试品50μl点在用纤维蛋白原、凝血酶和琼脂糖制成琼脂糖纤维蛋白平板上，重复5次，将平板置37温箱中放置2h，测定溶圈面积，取平均值；将其与Uk标准曲线对比测定活性；然后，换算为每克含有纳豆激酶的活性单位。

实施例8：质量检测方法

取实施例1的内容物进行鉴别：

A.取本发明药物组合物制剂1.5g，加甲醇10ml，放置2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以7∶2.5∶0.25氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑；

B.取本发明药物组合物粉末1.5g，加甲醇10ml，放置2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取大豆苷元对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以8∶2氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑。

取实施例2的内容物进行含量测定：

A.高效液相法测定：色谱条件与系统适应性试验；色谱柱：大连依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以23∶77甲醇-水为流动相；检测波长为250nm；理论板数按葛根素峰计算应不低于3000；对照品溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，加甲醇制成1ml含80μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本发明药物组合物适量，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，功率250w，频率33kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

B.高效液相法测定：色谱条件与系统适应性试验；色谱柱：大连依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以30∶8∶62甲醇-加腈-0.1磷酸为流动相；检测波长为250nm；对照品溶液的制备：取大豆苷元对照品适量，精密称定，加甲醇制成1ml含60μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，功率250w，频率33kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

C.纤维蛋白平板法测定：供试品溶液的制备：取本发明药物组合物10g，用3倍量生理盐水浸提10小时，离心取上清液，80％乙醇沉淀，沉淀用无水乙醇脱水后，用生理盐水定溶至5ml，备用；Uk标准曲线制定：将Uk精密配成10U/ml、20U/ml、30U/ml、40U/ml、50U/ml、60U/ml的溶液；用纤维蛋白原、凝血酶和琼脂糖制成琼脂糖纤维蛋白平板，待平板凝结后，各取50μl不同浓度的Uk标准液点在平板上，37温箱中放置2h，根据溶圈面积及浓度，制定标准曲线；活性测定：取供试品50μl点在用纤维蛋白原、凝血酶和琼脂糖制成琼脂糖纤维蛋白平板上，重复5次，将平板置37温箱中放置2h，测定溶圈面积，取平均值；将其与Uk标准曲线对比测定活性；然后，换算为每克含有纳豆激酶的活性单位。

Claims (22)

1.一种降低血脂、溶解血栓的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下方法制成：

原料药：大豆 100-500重量份    葛根 100-200重量份；

工艺步骤：大豆经过精选，洗净，在30℃温水中浸泡8-12小时，然后于110℃-121℃灭菌30-40分钟，放置室温，接入保藏号ACCC10614的纳豆菌种1，2，3级菌种，接种量0.3-2％，于36-38℃发酵，培养24-48小时，冷置室温；用组织捣碎机将其破碎，装入自制层析柱，上样体积为柱高的1/3-1/2，加入1-3倍体积份90％-95％乙醇后自然沉降2-4小时，在恒流泵的帮助下进行逆时针循环2-3次，流速3-5ml/min，每次提取3-4小时，抽滤后药粉用90％-95％乙醇脱水，脱水药粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，备用；

葛根去杂质洗净，70℃-90℃低温干燥12-16小时，破碎，过20目筛，药粉上提取罐，用7-8倍重量份80％乙醇回流提取2-4次，板框过滤；乙醇液回收乙醇至无醇味；药渣加水7-10倍重量份煎煮2-4次，过滤，弃渣，保留药液；乙醇提取药液合并水煎液浓缩成膏，40-60℃真空干燥36-48小时，粉碎成粉与上述大豆备用粉混匀，加入常规辅料，按常规方法制成胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂或口服液体制剂。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于其中的原料药为：

大豆 500重量份    葛根 100重量份。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于其中的原料药为：

大豆 400重量份    葛根 100重量份。

4.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于其中的原料药为：

大豆 100重量份    葛根 200重量份。

5.如权利要求1-4任一所述的药物组合物，其特征在于其中的工艺步骤为：

大豆经过精选，洗净，在30℃温水中浸泡10小时，然后于121℃灭菌35分钟，放置室温，接入保藏号ACCC10614的纳豆菌种1，2，3级菌种，接种量0.5％，于37℃发酵，培养36小时，冷置室温；用组织捣碎机将其破碎，装入自制层析柱，上样体积为柱高的1/3，加入2倍体积份95％乙醇后自然沉降3小时，在恒流泵的帮助下进行逆时针循环2次，流速4ml/min，每次提取4小时，抽滤后药粉用95％乙醇脱水，脱水药粉放入50℃真空干燥，粉碎，备用；

葛根去杂质洗净，80℃低温干燥12小时，破碎，过20目筛，药粉上提取罐，用8倍重量份80％乙醇回流提取2次，板框过滤；乙醇液回收乙醇至无醇味；药渣加水7倍重量份煎煮2次，过滤，弃渣，保留药液；乙醇提取药液合并水煎液浓缩成膏，50℃真空干燥48小时，粉碎成粉与上述纳豆备用粉混匀，制成胶囊剂。

6.如权利要求1-4任一所述的药物组合物，其特征在于其中的工艺步骤为：

大豆经过精选，洗净，在30℃温水中浸泡10小时，然后于121℃灭菌40分钟，放置室温，接入保藏号ACCC10614的纳豆菌种1，2，3级菌种，接种量0.8％，于38℃发酵，培养48小时，冷置室温；用组织捣碎机将其破碎，装入自制层析柱上样体积为柱高的1/2，加入3倍体积份90％乙醇后自然沉降4小时，在恒流泵的帮助下进行逆时针循环3次，流速5ml/min，每次提取3小时，抽滤后药粉用90％乙醇脱水，脱水药粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，备用；

葛根去杂质洗净，70℃低温干燥16小时，破碎，过20目筛，药粉上提取罐，用7倍重量份80％乙醇回流提取4次，板框过滤；乙醇液回收乙醇至无醇味；药渣加水7倍重量份煎煮4次，过滤，弃渣，保留药液；乙醇提取药液合并水煎液浓缩成膏，40℃真空干燥48小时，粉碎成粉与上述大豆备用粉混匀，加入常规辅料，按常规方法制成口服液体制剂.

7.如权利要求1-4任一所述的药物组合物，其特征在于其中的工艺步骤为：

大豆经过精选，洗净，在30℃温水中浸泡11小时，然后于121℃灭菌35分钟，放置室温，接入保藏号ACCC10614的纳豆菌种1，2，3级菌种，接种量1％，于36℃发酵，培养45小时，冷置室温；用组织捣碎机将其破碎，装入自制层析柱上样体积为柱高的1/2，加入2倍体积份95％乙醇后自然沉降2小时，在恒流泵的帮助下进行逆时针循环2-3次，流速3-5ml/min，每次提取4小时，抽滤后药粉用95％乙醇脱水，脱水药粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，备用；

葛根去杂质洗净，90℃低温干燥14小时，破碎，过20目筛，药粉上提取罐，用8倍重量份80％乙醇回流提取3次，板框过滤；乙醇液回收乙醇至无醇味；药渣加水10倍重量份煎煮4次，过滤，弃渣，保留药液；乙醇提取药液合并水煎液浓缩成膏，55℃真空干燥40小时，粉碎成粉与上述大豆备用粉混匀，加入常规辅料，按常规方法制成片剂。

8.一种降低血脂、溶解血栓的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：

原料药：大豆 100-500重量份    葛根 100-200重量份；

工艺步骤：大豆经过精选，洗净，在30℃温水中浸泡8-12小时，然后于110℃-121℃灭菌30-40分钟，放置室温，接入保藏号ACCC10614的纳豆菌种1，2，3级菌种，接种量0.3-2％，于36-38℃发酵，培养24-48小时，冷置室温；用组织捣碎机将其破碎，装入自制层析柱，上样体积为柱高的1/3-1/2，加入1-3倍体积份90％-95％乙醇后自然沉降2-4小时，在恒流泵的帮助下进行逆时针循环2-3次，流速3-5ml/min，每次提取3-4小时，抽滤后药粉用90％-95％乙醇脱水，脱水药粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，备用；葛根去杂质洗净，70℃-90℃低温干燥12-16小时，破碎，过20目筛，药粉上提取罐，用7-8倍重量份80％乙醇回流提取2-4次，板框过滤；乙醇液回收乙醇至无醇味；药渣加水7-10倍重量份煎煮2-4次，过滤，弃渣，保留药液；乙醇提取药液合并水煎液浓缩成膏，40-60℃真空干燥36-48小时，粉碎成粉与上述大豆备用粉混匀，加入常规辅料，按常规方法制成胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂或口服液体制剂。

9.如权利要求8所述的的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法中原料药为：大豆 300重量份    葛根 100重量份。

10.如权利要求8所述的的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法中原料药为：大豆 500重量份    葛根 100重量份。

11.如权利要求8所述的的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法中原料药为：大豆 200重量份    葛根 100重量份。

12.如权利要求8所述的的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法中的工艺步骤为：

大豆经过精选，洗净，在30℃温水中浸泡10小时，然后于121℃灭菌35分钟，放置室温，接入保藏号ACCC10614的纳豆菌种1，2，3级菌种，，接种量0.5％，于37℃发酵，培养36小时，冷置室温；用组织捣碎机将其破碎，装入自制层析柱，上样体积为柱高的1/3，加入2倍体积份95％乙醇后自然沉降3小时，在恒流泵的帮助下进行逆时针循环2次，流速4ml/min，每次提取4小时，抽滤后药粉用95％乙醇脱水，脱水药粉放入50℃真空干燥，粉碎，备用；

葛根去杂质洗净，80℃低温干燥12小时，破碎，过20目筛，药粉上提取罐，用8倍重量份80％乙醇回流提取2次，板框过滤；乙醇液回收乙醇至无醇味；药渣加水7倍重量份煎煮2次，过滤，弃渣，保留药液；乙醇提取药液合并水煎液浓缩成膏，50℃真空干燥48小时，粉碎成粉与上述纳豆备用粉混匀，制成胶囊剂。

13.如权利要求8所述的的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法中的工艺步骤为：

大豆经过精选，洗净，在30℃温水中浸泡10小时，然后于121℃灭菌40分钟，放置室温，接入保藏号ACCC10614的纳豆菌种1，2，3级菌种，接种量0.8％，于38℃发酵，培养48小时，冷置室温；用组织捣碎机将其破碎，装入自制层析柱上样体积为柱高的1/2，加入3倍体积份90％乙醇后自然沉降4小时，在恒流泵的帮助下进行逆时针循环3次，流速5ml/min，每次提取3小时，抽滤后药粉用90％乙醇脱水，脱水药粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，备用；

葛根去杂质洗净，70℃低温干燥16小时，破碎，过20目筛，药粉上提取罐，用7倍重量份80％乙醇回流提取4次，板框过滤；乙醇液回收乙醇至无醇味；药渣加水7倍重量份煎煮4次，过滤，弃渣，保留药液；乙醇提取药液合并水煎液浓缩成膏，40℃真空干燥48小时，粉碎成粉与上述大豆备用粉混匀，加入常规辅料，按常规方法制成口服液体制剂。

14.如权利要求8所述的的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法中的工艺步骤为：

大豆经过精选，洗净，在30℃温水中浸泡11小时，然后于121℃灭菌35分钟，放置室温，接入保藏号ACCC10614的纳豆菌种1，2，3级菌种，接种量1％，于36℃发酵，培养45小时，冷置室温；用组织捣碎机将其破碎，装入自制层析柱上样体积为柱高的1/2，加入2倍体积份95％乙醇后自然沉降2小时，在恒流泵的帮助下进行逆时针循环2-3次，流速3-5ml/min，每次提取4小时，抽滤后药粉用95％乙醇脱水，脱水药粉放入40-60℃真空干燥，粉碎，备用；

葛根去杂质洗净，90℃低温干燥14小时，破碎，过20目筛，药粉上提取罐，用8倍重量份80％乙醇回流提取3次，板框过滤；乙醇液回收乙醇至无醇味；药渣加水10倍重量份煎煮4次，过滤，弃渣，保留药液；乙醇提取药液合并水煎液浓缩成膏，55℃真空干燥40小时，粉碎成粉与上述大豆备用粉混匀，加入常规辅料，按常规方法制成片剂。

15.如权利要求1、2、3或4所述药物组合物在制备降低血脂、溶解血栓药物中的应用。

16.如权利要求5所述药物组合物在制备降低血脂、溶解血栓药物中的应用。

17.如权利要求6所述药物组合物在制备降低血脂、溶解血栓药物中的应用。

18.如权利要求7所述药物组合物在制备降低血脂、溶解血栓药物中的应用。

19.如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别中的一种和/或几种：

A.取本发明药物组合物制剂1.5g，加甲醇10ml，放置2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以7∶2.5∶0.25氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑；

B.取本发明药物组合物制剂1.5g，加甲醇10ml，放置2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取大豆苷元对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点子同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以8∶2氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑。

20.如权利要求5所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下含量测定：

A.高效液相法测定：色谱条件与系统适应性试验；色谱柱：大连依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以23∶77甲醇-水为流动相；检测波长为250nm；理论板数按葛根素峰计算应不低于3000；对照品溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，加甲醇制成1ml含80μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本发明药物组合物0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，功率250w，频率33kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

B.高效液相法测定：色谱条件与系统适应性试验；色谱柱：大连依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以30∶8∶62甲醇-加腈-0.1磷酸为流动相；检测波长为250nm；对照品溶液的制备：取大豆苷元对照品适量，精密称定，加甲醇制成1ml含60μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，功率250w，频率33kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

C.纤维蛋白平板法测定：供试品溶液的制备：取本发明药物组合物制剂10g，用3倍量生理盐水浸提10小时，离心取上清液，80％乙醇沉淀，沉淀用无水乙醇脱水后，用生理盐水定溶至5ml，备用；Uk标准曲线制定：将Uk精密配成10U/ml、20U/ml、30U/ml、40U/ml、50U/ml、60U/ml的溶液；用纤维蛋白原、凝血酶和琼脂糖制成琼脂糖纤维蛋白平板，待平板凝结后，各取50μl不同浓度的Uk标准液点在平板上，37温箱中放置2h，根据溶圈面积及浓度，制定标准曲线；活性测定：取供试品50μl点在用纤维蛋白原、凝血酶和琼脂糖制成琼脂糖纤维蛋白平板上，重复5次，将平板置37温箱中放置2h，测定溶圈面积，取平均值；将其与Uk标准曲线对比测定活性。

21.如利要求6所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下含量测定：

A.高效液相法测定：色谱条件与系统适应性试验；色谱柱：大连依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以23∶77甲醇-水为流动相；检测波长为250nm；理论板数按葛根素峰计算应不低于3000；对照品溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，加甲醇制成1ml含80μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本发明药物组合物0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，功率250w，频率33kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

B.高效液相法测定：色谱条件与系统适应性试验；色谱柱：大连依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以30∶8∶62甲醇-加腈-0.1磷酸为流动相；检测波长为250nm；对照品溶液的制备：取大豆苷元对照品适量，精密称定，加甲醇制成1ml含60μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，功率250w，频率33kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

C.纤维蛋白平板法测定：供试品溶液的制备：取本发明药物组合物制剂10g，用3倍量生理盐水浸提10小时，离心取上清液，80％乙醇沉淀，沉淀用无水乙醇脱水后，用生理盐水定溶至5ml，备用；Uk标准曲线制定：将Uk精密配成10U/ml、20U/ml、30U/ml、40U/ml、50U/ml、60U/ml的溶液；用纤维蛋白原、凝血酶和琼脂糖制成琼脂糖纤维蛋白平板，待平板凝结后，各取50μl不同浓度的Uk标准液点在平板上，37温箱中放置2h，根据溶圈面积及浓度，制定标准曲线；活性测定：取供试品50μl点在用纤维蛋白原、凝血酶和琼脂糖制成琼脂糖纤维蛋白平板上，重复5次，将平板置37温箱中放置2h，测定溶圈面积，取平均值；将其与Uk标准曲线对比测定活性。

22.如利要求7所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下含量测定：

A.高效液相法测定：色谱条件与系统适应性试验；色谱柱：大连依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以23∶77甲醇-水为流动相；检测波长为250nm；理论板数按葛根素峰计算应不低于3000；对照品溶液的制备：取葛根素对照品适量，精密称定，加甲醇制成1ml含80μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本发明药物组合物0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，功率250w，频率33kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

B.高效液相法测定：色谱条件与系统适应性试验；色谱柱：大连依利特，5μm，4.6mm×150mm十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以30∶8∶62甲醇-加腈-0.1磷酸为流动相；检测波长为250nm；对照品溶液的制备：取大豆苷元对照品适量，精密称定，加甲醇制成1ml含60μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，功率250w，频率33kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

C.纤维蛋白平板法测定：供试品溶液的制备：取本发明药物组合物制剂10g，用3倍量生理盐水浸提10小时，离心取上清液，80％乙醇沉淀，沉淀用无水乙醇脱水后，用生理盐水定溶至5ml，备用；Uk标准曲线制定：将Uk精密配成10U/ml、20U/ml、30U/ml、40U/ml、50U/ml、60U/ml的溶液；用纤维蛋白原、凝血酶和琼脂糖制成琼脂糖纤维蛋白平板，待平板凝结后，各取50μl不同浓度的Uk标准液点在平板上，37温箱中放置2h，根据溶圈面积及浓度，制定标准曲线；活性测定：取供试品50μl点在用纤维蛋白原、凝血酶和琼脂糖制成琼脂糖纤维蛋白平板上，重复5次，将平板置37温箱中放置2h，测定溶圈面积，取平均值；将其与Uk标准曲线对比测定活性.