CN101060835B - 包含粘膜粘附性配制的核酸活性成分的多颗粒状药物剂型以及制备所述药物剂型的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含尺寸为50至2500μm的丸粒的口服多颗粒药物剂型，这些丸粒基本上由下列部分构成：a)包含纳米颗粒的内部基质层，这些纳米颗粒含有核酸活性成分并被包埋在由具有粘膜粘附作用的聚合物构成的基质中，和b)外部成膜化包衣，其基本上由可任选与制药常规辅料，尤其是增塑剂一起配制的阴离子聚合物或共聚物构成。

Description

包含粘膜粘附性配制的核酸活性成分的多颗粒状药物剂型以及制备所述药物剂型的方法
技术领域
本发明涉及包含粘膜粘附性配制的核酸活性成分的多颗粒状药物剂型以及制备该药物剂型的方法。
背景技术
WO 02/64148描述了包含粘多糖的配制剂及其制备方法。在此，粘多糖，例如肝素，与吸附增强剂，例如壳聚糖一起配制，随后向其提供可溶于肠液的包衣，使得活性成分可以在小肠的中段或下段释放。合适的可溶于肠液的包衣的例子是
Figure G05837293X20070508D000011
L、S、L100-55型阴离子丙烯酸系共聚物。该配制剂可以包括胶囊、片剂和粒剂。
端粒酶是一种在细胞分裂时促进DNA加倍，尤其是在染色体末端区域中的DNA加倍的酶。该酶因此对于保持完好的染色体结构是重要的。端粒酶活性在大多数成人体细胞中受到抑制，仅在生殖细胞中，但也在许多肿瘤细胞类型中观察到提高的端粒酶活性。据推测，端粒酶在细胞的直至它们的遗传预程序化细胞死亡的正常生命周期的分子控制中起到重要作用。肿瘤细胞中不同于正常细胞的高端粒酶活性被认为是正常的细胞分裂控制已丧失的征兆。端粒酶或与其相关的基因结构被视为是肿瘤细胞的基因治疗的出发点。
WO 99/38964描述了用于基因治疗的核酸，其特别包含端粒酶基因启动子。这种DNA可以与外源基因，例如细胞毒素编码基因结合。该核酸构建体可用作具有提高的端粒酶活性的肿瘤细胞的转染用的活性成分。期望这会抑制肿瘤细胞分裂直至特异性杀死这些细胞。提到了WO 99/38964中所述的活性成分类型或由其衍生的药物剂型的口服可能性。
Roy等人(1999)在Nature Medicine，第5卷，第4期，第387-391页，“Oral gene delivery with chitosan-DNA nanoparticlesgenerates immunologic protection in murine model of peanutallergy(具有壳聚糖-DNA纳米颗粒的口服基因递送在鼠性模型中产生对花生过敏反应的免疫保护)”中描述了DNA活性成分在小鼠中的口服给药。通过复合聚生将质粒DNA上存在的显性花生过敏原基因(pCMVArah2)与Mw为大约390000的壳聚糖一起配制成尺寸为100至200纳米的纳米颗粒。将这些纳米颗粒口服给药给AKR/J小鼠，在此可以检测肠上皮细胞中的转导基因表达。由此处理的小鼠产生过敏原特异性分泌IgA抗体和血清IgG2a抗体，并表现出与对照组相比降低的过敏原诱发的过敏性反应。
Leong等人(1998)在Journal of Controlled Release 53，第183-193页，“DNA-polycation nanospheres as non-viral genedelivery vehicles(作为非病毒基因递送载体的DNA聚阳离子纳米球)”中描述了基因转移载体，其在BALB/c小鼠体内产生外源基因表达。纳米球作为DNA与明胶或尺寸为200至700纳米的壳聚糖的配合物形式制备。
WO 02/094983描述了由核酸、对DNA具有特异性的抗体和与此相关的阳离子大分子配合物组成的配制剂。配制以纳米颗粒形式完成，其中在体外和体内均检测到提高的转染速率。提到了具有活性成分缓释的口服用配制剂。
WO 03/007913描述了口服多颗粒状药物剂型，其包含以大量所谓膜片(Patches)形式的活性成分。膜片是由生物相容性材料构成的直径为500微米至5毫米且高度为100至1000微米的圆盘形物体。膜片由两层或两面构成，一面对水或体液仅具有低渗透性，例如由乙基纤维素构成，第二面包含活性成分，例如蛋白质、多糖或小分子，其可以与粘膜粘附性聚合物，例如壳聚糖、CMC、聚丙烯酸或果胶混合存在。这些膜片可以被压制形成片剂或被填充到胶囊中，该胶囊另外具有可溶于肠液的包衣。该活性成分制剂还可以与所谓的增强剂(例如脂肪酸、脂肪醇、酯、表面活性物质和蛋白酶抑制剂)组合。在作用位点，例如在肠的特定段，胶囊溶解并释放出膜片。释放出的膜片能够以它们的粘膜粘附面粘附到肠粘膜上，并在那里缓释活性成分和向肠粘膜靶向释放。膜片的仅低可渗透的第二面旨在为活性成分提供一定保护以免肠腔一面的化学或酶促失活，并防止活性成分向这一面上逸出。
WO 03/092732描述了基于具有1000至50000的比较低的分子量Mw的阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物的pH敏感聚合物。该pH敏感聚合物尤其还适于配合核酸。该pH敏感聚合物在pH7.0或略高的范围中仅在高浓度下具有细胞毒素性质或完全没有细胞毒素性质，但在低于pH6.5时在低浓度下就已在体内具有细胞毒素或溶血或膜溶解(membranolytisch)作用。
发明内容
问题和解决方案
WO 99/38964描述了与人类端粒酶基因或该基因的启动子有关的核酸和载体。其中所述的核酸可以被视为用于肿瘤细胞的基因治疗的潜在活性成分。WO 99/38964中仅非常一般性地提出所述的活性成分类型的口服给药。需要提出使本领域技术人员能够以不会发生过早失活(尤其是由核酸酶引起的)且足够比例的活性成分成功转染目标细胞的方式将这种类型的活性成分输送到作用位点的配制剂。开头提到的描述了纳米颗粒中的抗体-DNA共轭配合物的WO 02/094983也仅对口服药物剂型的配制给出相当一般性的暗示。
WO 03/007913描述了对提供口服药物剂型的可能解决方案，该剂型在肠腔中释放并意于在此发挥作用。这种解决方案的一个缺点可尤其认为是两层膜片结构的复杂构造和制备。以具有耐胃液并可溶于肠液的包衣的胶囊形式提供药物剂型似乎特别不利。当尺寸明显大于2.5毫米时，会担心治疗再现性不足。胶囊通过胃的时间可能变化很大。在任何情况下都预期作用会延迟发生。此外，胶囊本身可能在包衣出现部分溶解后就已迅速或缓慢地溶解。包衣和胶囊两种原理在这种情况下以不利方式重叠，使得膜片的释放预计会总体上不受控。胶囊可在至少已部分可接触到肠液的情况下，取决于这时的肠内容物或肠蠕动而保持完好或基本上被机械破坏。视最初包衣的胶囊形成物的崩解或机械应力而定，一方面可能突然释放出大量膜片，或另一方面也可能出现不希望的延迟释放。因此，很希望总体上可更好地控制活性成分的释放。
本发明涉及用于核酸活性成分的可口服给药的药物剂型，特别是用于基因治疗目的。这方面的一般性问题是以有利于活细胞在作用位点上的转染并同时确保活性成分或至少足量活性成分以能够转染的形式到达作用位点的剂型配制活性成分。本发明的问题之一被认为是提供适用于核酸活性成分的靶向和有效释放的药物剂型。这种药物剂型旨在提供高的剂量可靠性并在迅速通过胃后在肠腔中良好分布。所含核酸活性成分在此应受到保护以在很大程度上避免物理、化学或溶核失活，并在指定作用位点释放，使得高比例活性成分可以被机体吸收。释放位点应视治疗目的而定是可变的并可以可靠地调节。药物剂型除了DNA活性成分外仅应包含药理学可接受的非毒性成分，这样即使在药物剂型的频繁或定期摄取时，在最初开始就预计没有不希望的副作用。
该问题由包含平均直径为50至2500微米的丸粒的口服多颗粒状药物剂型解决，这些丸粒由下列部分构成：
a)包含纳米颗粒的内部基质层，这些纳米颗粒含有核酸活性成分并包埋在由具有粘膜粘附作用的聚合物构成的基质中，其中该基质可任选包含其它制药常用辅料，
b)外部成膜化包衣，其基本上由可任选与制药常用辅料，尤其是增塑剂一起配制的阴离子聚合物或共聚物构成，
其特征在于
将该多颗粒状药物剂型配制使得所含丸粒在胃的pH范围内释放，通过阴离子聚合物或共聚物或其与辅料的配制剂及其层厚的选择调节外部包衣使得该包衣在肠内在4.0至8.0的pH范围内在15至60分钟内溶解，从而暴露出含活性成分的粘膜粘附性基质层，可以粘合到肠粘膜上并在那里释放出活性成分，其中选择具有粘膜粘附作用的聚合物，使得其在基于外部包衣开始溶解时的pH值计±0.5个pH单位的范围内，表现出至少ηb＝150至1000mPa·s的粘膜粘附作用和在15分钟内10至750％的水吸收，且基质层中纳米颗粒的活性成分含量最多为具有粘膜粘附作用的聚合物含量的40wt％。
本发明的实施方案
本发明涉及口服多颗粒状药物剂型，特别是以片剂、微型片剂、装入胶囊中的丸粒、囊剂或重构用粉末(
Figure G05837293X20070508D000051
)，其包含平均尺寸或平均直径为50至2500，优选100至1000微米的丸粒，这些丸粒由下列部分构成：
a)包含纳米颗粒的内部基质层，这些纳米颗粒含有核酸活性成分并包埋在由具有粘膜粘附作用的聚合物构成的基质中，其中该基质可任选包含其它制药常用辅料，
b)外部成膜化包衣，其基本上由可任选与制药常用辅料，尤其是增塑剂一起配制的阴离子聚合物或共聚物构成。
配制多颗粒状药物剂型以使得所含丸粒在胃的pH范围内释放。
本发明意义中的术语丸粒包括圆形至球形附聚物，其也可以被称作微粒、珠粒或微型片剂，只要它们具有本发明中所述的结构和尺寸。
通过阴离子聚合物或共聚物或其与辅料的配制剂及其层厚的选择调节外部包衣，以使得该包衣在肠内在4.0至8.0，优选5.5至7.8，特别优选5.8至7.5的pH范围内，在15至60分钟，优选20至40分钟内溶解，从而暴露出含活性成分的粘膜粘附性基质层，可以粘合到肠粘膜上并在那里释放出活性成分。
选择具有粘膜粘附作用的聚合物或共聚物，以使得其在基于外部包衣开始溶解时的pH值计±0.5，优选±0.3个pH单位的范围内，表现出至少ηb＝150至1000，优选150至600mPa·s的粘膜粘附作用和在15分钟内10至750％，优选10至250％，特别优选10至160％的水吸收，且基质层中的活性成分含量为具有粘膜粘附作用的聚合物含量的最大40wt％，特别是0.001至15wt％，或0.05至5wt％。
内部基质层
内部基质层充当活性成分载体。内部基质层还具有借助所含粘膜粘附性聚合物使活性成分粘合到肠粘膜上的功能，从而使活性成分可以由那里进入机体。内部基质层还具有保护活性成分以免物理、化学或酶促失活的功能。
内部基质还可以包含制药辅料，尤其是G-蛋白质偶联受体和配体(参见，例如WO 02/102407，第74-76页)，尤其是8-OH-DPAT、Aminoketanserin(氨基酮色林)、阿托品、布他拉莫、氯丙嗪、Chloroprozhixen、辛那色林、Cyanopindolol(氰基吲哚洛尔)、赛庚啶、哌双咪酮、Epi-depride(依匹必利)、肾上腺素、非诺多泮、氟哌噻吨、氟奋乃静、氟哌啶醇、Hexocyclium(己环铵)、Himbacin(喜巴辛)、Iodomelatonin(碘代褪黑素)、酮色林、麦角酸衍生物、美索达嗪、Mesulerigin(美舒麦角)、Methoctramin(美索曲明)、Methylsergid、胃复安、米安色林、Molindonem(吗茚酮)、毒蕈碱、纳洛酮、N-甲基螺环哌啶酮、去甲肾上腺素、培高利特、酚妥拉明、哌仑西辛、PPHT-香豆素、PPHT-罗丹明、PPHT-Texas红、哌唑嗪、丙嗪、雷氯必利、5-羟色胺、Speperone、Spriroxatrine、舒必利、舒马普坦、替尼拉平和Trifluprimazin(三氟丙嗪)。
内部基质还可以包含促渗剂，例如增塑剂，例如柠檬酸三乙酯、乙酰基柠檬酸三乙酯、癸二酸二乙酯、癸二酸二丁酯；聚合物，例如卡波姆(Carbomer)、壳聚糖、壳聚糖-半胱氨酸、羧甲基纤维素钠、N-三甲基化壳聚糖、聚卡波非(carbophil)-半胱氨酸，长链脂肪酸、它们的酯(例如，单和二酸甘油酯)及它们的盐，例如月桂酸、月桂磺酸、棕榈酸、辛酸、癸酸、油酸、酰基肉碱；螯合剂，例如EDTA、水杨酸酯、环糊精、聚丙烯酸、胆汁酸如胆酸、胆牛黄酸、胆肌氨酸、鹅脱氧胆酸及它们的盐，例如胆酸钠、甘胆酸钠、牛磺胆酸钠、牛磺双氢褐霉酸钠、糖双氢褐霉酸钠；表面活性剂和乳化剂，特别例如聚乙烯-660-12-羟基硬脂酸酯(HS15)、(Solutol HS15)、Polysorbat 80(吐温80)、聚氧乙基化蓖麻油(Cremophor EL)、聚氧乙烯-聚氧丙二醇(
Figure G05837293X20070508D000072
F68)、毒素紧密连接毒素(ZOT)，和维生素，例如维生素E(生育酚)或维生素B12。
内部基质层中优选不存在或仅存在少量，例如0.01至10wt％，优选0.05至2wt％，特别优选0.1至1wt％的制药辅料、促渗剂和/或G-蛋白偶联受体和配体。
核酸活性成分
基质层包含含有核酸活性成分的纳米颗粒。核酸活性成分具有在体内的目标位点引发与哺乳动物细胞，特别是人类细胞的DNA的相互作用的任务，这导致细胞内改变的DNA结构或非常一般性地导致改变的细胞性质。在这点上，首先应该提到所谓的基因治疗，其目标是修复在基因决定的病症中有缺陷的基因结构。这可能是指，例如，不希望的基因活性(例如肿瘤细胞中的端粒酶活性)的失活或中断。其也可以是指通常在健康细胞中存在的基因活性(例如p53基因活性，一种长期已知并已深入研究的肿瘤抑制基因)的恢复。本发明因此涉及用于核酸活性成分，特别是用于基因治疗的可口服给药的药物剂型。
核酸活性成分可以是单链或双链DNA(脱氧核糖核酸)或RNA(核糖核酸)或DNA-RNA嵌合体，在此可以存在天然存在和/或非天然存在的合成改性核苷酸。核酸活性成分可以线型或环状存在。其可以是寡核苷酸单元，例如长度为10至200个碱基或碱基对。其还可以是更长单元，例如，超过200至100000，500至10000或1000至5000个碱基或碱基对。除了充当真正活性成分的序列(例如目标细胞中存在的或应增补的核酸序列)外，核酸活性成分中在适当时还可以包含载体序列，其通常不存在于目标细胞中且不应与后者相互作用。
已知例如基于双链DNA的载体体系，其涉及质粒或基于病毒体系的载体。已知例如重组腺相关病毒载体(rAAV)。其它双链载体可以包含源自巨细胞病毒(CMV)或SV40病毒的启动子或调节序列。其它载体可以涉及单链DNA，其借助于附加的RNA单元而被保护以免降解。同样已知的是所谓的RDOI和RDOII构建体，其中短DNA片段，例如30至60个碱基，在末端提供有1至4个碱基的短RNA片段。可以通过向RNA或DNA中引入非天然存在的核苷酸以额外提高半衰期或对核酸酶的抗性。在这点上，例如单个氧原子可以被硫原子替代，从而获得磷-硫桥(MSO)。在例如Nature Reviews第4卷，2003，第679-689页，Li Liu等人中描述了适合用作基因修复或基因替代载体的可以在本发明意义中用作活性成分的多种核酸形式。优选基本上仅含有充当活性成分的核酸序列和仅含有小比例或不含有载体DNA的核酸片段。
核酸活性成分可以存在于例如与阳离子聚合物或蛋白质(例如抗体)形成的配合物或共轭物中。配合或共轭物结合可以通过化学桥键而可逆或不可逆地共价进行或经由范德华力、离子键、疏水键而非共价进行。但在配合物或共轭物中除核酸活性成分外展现的分子本身不发挥治疗作用，并因此被视为配制助剂而不视为活性成分或活性成分的一部分。
核酸活性成分可以在适当时借助于蛋白质或肽配制。但是，它们本身不发挥任何治疗作用并因此被视为配制助剂而不视为活性成分或活性成分的一部分。
核酸可以，例如根据WO 02/094983，为与特异性结合到核酸上的抗体或与阳离子物质形成的配合物形式。已可能表明，这种方法可有助于提高的体外和体内转染速率。这可能优选是指完整或以片段，Fc抗体片段、Fab′抗体片段、F(a，b)′2抗体片段或半抗体片段形式的单克隆IgG抗体或IgM抗体，但它们在每种情况下必须包含至少一个抗DNA结合位点。核酸与抗DNA抗体的分子比率可以例如为1∶20至1∶5。
核酸活性成分可以例如以血友病的治疗为目的并包含凝血因子基因，例如人类凝血因子IX的cDNA基因(参见，例如，WO 03/028657或Palmer等人，Blood，1989，73(2)，第438-445页或Yao等人，Proc Natl Acad Sci，USA，1992，89(8)：第3357-3361页)。核酸活性成分可以除了治疗有效的基因部分外还包含免疫耐受性诱导基因，例如Fas配体。共表达的Fas配体或Fas基因片段可以在T细胞中引起细胞凋亡，这些细胞可以在基因转移到目标细胞中之后被特异性激活。也可以从Walensky等人，2004，“Activation of Apoptosisin Vivo by a Hydrocarbon-Stapled BH3 Helix(通过烃固定BH3螺旋进行的体内细胞凋亡的激活)”，Science，305，第1466-1470页中推知与白血病细胞中的细胞凋亡诱导有关的载体。核酸活性成分可以包含，例如，人类端粒酶基因的基因片段，尤其是启动子区域。合适的例子是WO 99/38964中所述的基因治疗载体pGT62-codAupp，或本领域技术人员可以从WO 99/38964中推知的其它载体。核酸活性成分可以包含肿瘤抑制剂基因片段，例如p53肿瘤抑制剂基因或其片段。US6,451,593B1描述了用于基因治疗的表达载体的构建原理，其适用于制备本发明意义中的核酸活性成分。
纳米颗粒
药物剂型包含优选可具有尺寸为20至1000，优选50至250，特别优选80至220，特别是100至200纳米的纳米颗粒。
纳米颗粒中存在的核酸可优选以与阳离子物质形成的配合物的形式存在。
阳离子物质可以是阳离子脂质、阳离子多肽和/或阳离子聚合物。聚乙烯亚胺或衍生物也可以是合适的。
阳离子脂质可以是例如N-[1-(2，3-二油基氧基)丙基]-N，N，N-三甲基氯化铵(DOTMA)和二油基磷脂酰基乙醇胺(DOPE)的市售混合物。适合的例子还有甲基硫酸N-[1-(2，3-二油基氧基)丙基]-N，N，N-三甲铵(DOTAP)、二油基磷脂酰基胆碱(DOPC)、双十八烷基酰氨基甘氨酰基精胺(DOGS)。
阳离子多肽优选为具有阳离子侧基的氨基酸的合成制备的均聚物。可提及聚赖氨酸、聚精氨酸、聚鸟氨酸和聚组氨酸。链长可以为几个单位至大量单位，例如3至20，10至50，50至100或高至500或高至1000个氨基酸。还可以使用天然存在的主要具有阳离子性质的蛋白质，例如组蛋白。
与具有相对较少药理学经验的其它物质相比，优选(甲基)丙烯酸酯共聚物，因为它们已经在口服药物中安全使用了数十年。阳离子聚合物因此优选可为(甲基)丙烯酸酯共聚物，特别是具有叔或季氨基的(甲基)丙烯酸酯共聚物。阳离子(甲基)丙烯酸酯共聚物的玻璃化转变温度(ISO 11357-2，细目3.3.3)优选为40至60℃，分子量Mw(重均)为100000至200000(分子量Mw可以例如通过凝胶渗透色谱法或通过散射光法测定(参见，例如，H.F.Mark等人，Encyclopedia ofPolymer Science and Engineering(聚合物科学与工程大全)，第二版，第10卷，第1页及后几页，J.Wiley，1989)。为了改进经肾或胆道的排泄，优选具有低分子量Mw，例如具有50000或更低，5000至40000，10000至30000或15000至25000的Mw的阳离子(甲基)丙烯酸酯共聚物。
分子量Mw(重均)可以例如通过粘度测定法或凝胶排阻色谱法(GPC)测定。粘度测定值(特性粘数)可以在氯仿中或在DMF(二甲基甲酰胺)中在23℃下测定，并应该优选为10至20，优选11至15nspez/c(立方厘米/克)。粘数可以例如按ISO 1628-6中所规定测量。
特别优选的是由20-30wt％甲基丙烯酸甲酯、20-30wt％甲基丙烯酸丁酯和60-40wt％甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯形成的自由基聚合单元构成的(甲基)丙烯酸酯共聚物。(甲基)丙烯酸酯共聚物特别可以以平均粒度为10至30微米的微粉化形式使用。具体合适的具有叔氨基的市售(甲基)丙烯酸酯共聚物是，例如，由25wt％甲基丙烯酸甲酯、25wt％甲基丙烯酸丁酯和50wt％甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯构成的(
Figure G05837293X20070508D000101
E100)。平均粒度为10至20微米的微粉化形式(
Figure G05837293X20070508D000102
E PO，粉末)是特别优选的。这种形式可以特别好地加工成含核酸的纳米颗粒。这种情况下获得明显特别有利的与核酸分子的配合物形成，其可有利于提高的转染速率。
包含核酸活性成分和阳离子和阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物的纳 米颗粒
通过在包含核酸活性成分和阳离子(甲基)丙烯酸酯共聚物的纳米颗粒的制备中另外添加基于核酸活性成分和阳离子(甲基)丙烯酸酯共聚物计的比例为0.1至40wt％，特别是1至30wt％，特别优选2至25wt％的阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物，可以进一步优化各核酸对目标细胞类型的转染速率。随后必须在体外试验法中用目标细胞类型的细胞培养物(在可得的情况下)或用至少类似的或能类似地反应的细胞类型检测纳米颗粒的转染速率。由此方式可以调节配合物中核酸的结合力与其从配合物中释放到活细胞中之间的适当平衡。如果单独由阳离子(甲基)丙烯酸酯共聚物引起的结合作用最初过强，使得核酸的转染速率不令人满意地低，则添加阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物弱化所述结合作用直至转染速率达到对所用核酸和对目标细胞类型为特异性的最佳值。这种类型的配制剂具有下述优点--阳离子和阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物均是药理学可接受的，使得预计仅几乎没有或完全没有副作用。
合适的阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物优选是也可用于外部包衣的相同类型，即含阴离子基团的单体的含量为5至60wt％的(甲基)丙烯酸酯共聚物(
Figure G05837293X20070508D000111
类型L、S、L100-55、FS)。在许多情况下，当使用如下构成的阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物时，可以实现转染速率的令人惊奇的提高：
20至33wt％甲基丙烯酸和/或丙烯酸
5至30wt％丙烯酸甲酯和
20至40wt％丙烯酸乙酯和
高于10至30wt％甲基丙烯酸丁酯和
在适当时，
0至10wt％能够进行乙烯基共聚的其它单体，
其中单体的比例合计达100wt％，
条件是根据ISO 11357-2，细目3.3.3的共聚物玻璃化转变温度(中点温度Tmg)为55至70℃。
上述共聚物特别由下列物质形成的经自由基聚合的单元构成：
20至33，优选25至32，特别优选28至31wt％甲基丙烯酸或丙烯酸，优选甲基丙烯酸，
5至30，优选10至28，特别优选15至25wt％丙烯酸甲酯，
20至40，优选25至35，特别优选18至22wt％丙烯酸乙酯，和
高于10至30，优选15至25，特别优选18至22wt％甲基丙烯酸丁酯，
其中选择单体组成，使得共聚物的玻璃化转变温度为55至70℃，优选59至66，特别优选60至65℃。
为了改进经由肾或胆道的排泄，具有低分子量的阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物是优选的，例如，具有Mw为50000或更低，5000至40000，10000至30000或15000至25000的那些是优选的。
分子量Mw(重均)可以例如通过粘度测定法或凝胶排阻色谱法(GPC)测定。粘度测定值(特性粘数)可以在氯仿中或在DMF(二甲基甲酰胺)中在23℃下测定并应该优选为10至20，优选11至15nspez/c(立方厘米/克)。粘数可以例如按ISO 1628-6中所规定测量。
具有低分子量的阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物是pH敏感聚合物，其在pH7.0或略高的范围内仅在高浓度下具有细胞毒素性质，或完全没有细胞毒素性质，但在低于pH6.5时在体内在低浓度下就已具有溶血或膜溶解作用。聚合物可以在纳米颗粒中用作核酸活性成分与阳离子(甲基)丙烯酸酯共聚物之间的结合强度的调节剂，并同时对转染速率具有有利影响。具有低分子量的阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物在纳米颗粒中的比例可特别有助于核酸活性成分在摄入核内体中之后通过其随后的去稳定或溶胞被进行细胞内释放。
用于纳米包囊的具有低分子量的阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物
在优选实施方案中，具有低分子量，例如具有50000或更低，5000至40000，10000至30000或15000至25000的Mw的阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物通过纳米包囊而作为壳施加到包含核酸活性成分和阳离子聚合物，优选阳离子(甲基)丙烯酸酯共聚物的纳米颗粒上。具有低分子量的阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物在纳米颗粒表面上的比例可特别有助于核酸活性成分在摄入核内体中之后通过其随后的去稳定或溶胞而被进行细胞内释放。此外，核酸活性成分在内部受到更好保护以免溶核降解，从而更多活性成分可到达目标位点。
活性成分的比例
纳米颗粒在基质层中的比例基于具有粘膜粘附作用的聚合物含量计优选最大40，特别是0.001至15或0.05至5wt％。核酸活性成分在纳米颗粒中的比例可以为例如1至50，优选2至25wt％。
纳米颗粒的制备
纳米颗粒的制备是已知的。已知方法是团聚，配合物形成，乳液沉淀，从油包水乳液中蒸发有机溶剂级分，从而在水相中产生纳米颗粒，从水包油乳液中蒸发有机溶剂级分，从而在水相中产生纳米颗粒。Leong等人(1998)在Journal of Controlled Release 53，第183-193页“DNA-polycation nanospheres as non-viral gene deliveryvehicles(作为非病毒基因递送载体的DNA聚阳离子纳米球)”中描述了纳米颗粒的制备。Roy等人(1999)在Nature Medicine，第5卷，第4期，第387-391页，“Oral gene delivery with chitosan-DNAnanoparticles generates immunologic protection in murine modelof peanut allergy”中描述了纳米颗粒的制备。
纳米包囊是指边界层聚合法(参见，例如Chouinard F.等人，Pharm Res.，1994，6月11日(6)：869-874)。纳米胶囊可以通过使纳米颗粒作为不溶配合物分散在水介质中并将该分散体在有机溶剂中乳化制成。在有机溶剂中的分散体包含，例如，(甲基)丙烯酸酯共聚物。在有机溶剂蒸发时，(甲基)丙烯酸酯共聚物沉淀并在纳米颗粒周围形成外壳。纳米颗粒的包囊是有利的，因为在被肠细胞和肝吸收的过程中确保对配合的核酸活性成分的额外保护。
具有粘膜粘附作用的聚合物
基质层进一步包含具有粘膜粘附作用的聚合物。合适的具有粘膜粘附作用的聚合物特别是壳聚糖(壳聚糖和衍生物，多种壳聚糖)，由20-45wt％甲基丙烯酸甲酯和55至80wt％甲基丙烯酸构成的(甲基)丙烯酸酯共聚物，纤维素，尤其是甲基纤维素，例如羧甲基纤维素钠(例如或)。与具有相对较少药理学经验的其它物质相比，优选(甲基)丙烯酸酯共聚物，因为它们已经在口服药物中安全使用了数十年。
选择具有粘膜粘附作用的聚合物，以使得其在基于外部包衣开始溶解时的pH值计±0.5，优选±0.3个pH单位的范围内在15分钟内表现出10至750％，优选10至250％，特别优选10至160％的水吸收。
粘膜粘附性质的测量
适合表征粘膜粘附性质的测量方法存在于Hassan和Gallo(1990)中(参见Hassan E.E.和Gallo J.M.，“A Simple Rheological Methodfor the in Vitro Assessment of Mucin-Polymer Bioadhesive BondStrength(用于粘蛋白聚合物生物粘接强度的体外评定的简单流变学方法)”，Pharma Res.7(5)，491(1990))。该方法基于下述假定：聚合物与粘蛋白的混合物的粘度(η，动态粘度或粘度系数)与各组分粘度的总和不同。适用关系式η聚合物与粘蛋白的混合物＝η粘蛋白+η聚合物+ηb，其中ηb代表差值。ηb越高，粘膜粘附性质越高。首先使用旋转粘度计测量单个组分的粘度。使用0.5％浓度(w/w)的粘膜粘附性聚合物的水溶液和15％浓度的猪胃粘蛋白的溶液。为了测定粘膜粘附性质ηb，单独测量粘蛋白和聚合物并以它们的以所述浓度的混合物形式测量。
选择具有粘膜粘附作用的聚合物，以使得其在基于外部包衣开始溶解时的pH值计±0.5，优选±0.3个pH单位的范围内表现出150至1000，优选150至600mPa·s的作为粘度ηb形式测得的粘膜粘附作用。
水合作用和水吸收
聚合物的水合作用基于待吸收水的聚合物的亲合力。聚合物由于这种水吸收而溶胀。这与水在聚合物中和水在周围介质中的化学势之间的不平衡有关。由于聚合物的渗透压，水被吸收，直至在内相和外相之间已达到平衡。聚合物随后100％水合。对于具有低平均分子量的聚合物，随之呈溶液形式。对于用具有较高分子量的聚合物或交联聚合物，产生凝胶。直至建立平衡之前的水吸收量可例如最多为固有重量的10倍，相当于聚合物重量的1000％。
水吸收百分比的测量
水吸收百分比的测量是本领域技术人员熟悉的。例如在Lehrbuchder pharmazeutischen Technologie(制药技术教科书)/Rudolf Voigt，Basel：Verlag Chemie(化学出版社)，第5完全修订版，1984，第151页，7.7.6，“(吸收能力)”部分中描述了合适的方法。该方法利用所谓的Enslin装置，其中玻璃吸滤器通过软管与带刻度的吸移管连通。吸移管精确水平地安装，使得它处于与玻璃料过滤器板相同的高度。在本发明情况下100％的水吸收被定义为每1克具有粘膜粘附作用的聚合物在15分钟内的水吸收为1毫升水。
由相对快速的水吸收或水合作用和高水合度确保在外部包衣开始溶解的时刻对活性成分的迅速保护和向肠粘膜上的直接结合。活性成分在粘膜粘附基质中的结合应该仅仅是低的，这样活性成分可以直接从肠粘膜转移入机体中。
基质pH值的控制
对于许多粘膜粘附聚合物，粘膜粘附作用是pH依赖性的。可以通过酸、碱或缓冲体系的添加针对性地控制基质中的pH值。内部基质可以包含例如，与乙酸盐缓冲体系一起使用的壳聚糖作为具有粘膜粘附作用的聚合物。例如调节至pH 5.0至5.5的乙酸盐/乙酸钠缓冲剂可以作为添加剂存在于基质中或施涂到芯体(在该芯体上施涂有基质)上。由此方式也可以与在较高pH值，例如pH6.0至8.0下开始溶解的成膜化包衣结合使用壳聚糖。尽管周围pH值高，但在基质的微环境中保持低pH值。由此可以在其它情况下无粘膜粘附作用或没有到达该程度的粘膜粘附作用的pH范围内利用聚合物的粘膜粘附性质。这具有下述优点：可以实现相对于其pH最佳值处于较高pH范围内的核酸酶而提供一定保护。也可以通过添加碱提高基质的pH值并与在较低pH值下溶解的成膜化包衣结合，以相反方式应用相同的原理。
合适的粘膜粘附性聚合物的选择的例子
合适的粘膜粘附性聚合物的选择是基于它们的粘膜粘附性质和它们的水吸收能力。聚合物应该在各自pH范围内具有至少ηb＝150至1000mPa·s的粘膜粘附作用和在15分钟内10至750％的水吸收。下表给出作为例子的列表。
壳聚糖例如适用于pH5.5的环境pH区域(十二指肠)或另一环境pH区域(回肠或结肠)，只要已经例如借助缓冲体系将基质pH范围调节至大约pH5.5的区域。
与大约pH5.5的pH区域相比，表中所列的(甲基)丙烯酸酯共聚物更适于pH7.2的pH区域。
藻酸钠适于大约pH5.5的pH区域，但不适于pH7.2。
羧甲基纤维素钠和交联聚丙烯酸在5.5至7.2的整个宽pH范围内合适。
  粘膜粘附性聚合物   粘膜粘附作用ηb[mPa·s]在pH5.5下   粘膜粘附作用ηb[mPa·s]在pH7.2下   H2O吸收[％，在15分钟内]在pH5.5下   H2O吸收[％，在15分钟内]在pH6.0下   H2O吸收[％，在15分钟内]在pH7.2下
  壳聚糖   220   0   140   320   320
  (甲基)丙烯酸酯共聚物*   150   480   170   50   125
  藻酸钠   580   0   40   50   50
  羧甲基纤维素钠   300   250   55   50   50
  聚丙烯酸，交联的   350   340   50   25   25
*＝由30wt％甲基丙烯酸甲酯和70wt％甲基丙烯酸构成的(甲基)丙烯酸酯共聚物
由阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物构成的外部包衣
由阴离子聚合物或共聚物构成的外部包衣充当抗胃液包衣以保护内部基质层免受胃液影响。外部包衣还用于保护活性成分免受溶核酶的影响，直至该包衣到达其开始溶解所处的肠段(十二指肠、空肠、回肠或结肠)的那一时刻。外部包衣在这种情况下特别用于所谓的“胃肠靶向”，即内部基质层在由其在那里占优势的pH值决定的肠段的靶向释放。为了不阻碍内部基质层的输送，外部包衣的(甲基)丙烯酸酯共聚物应该表现出说可能小或仅低的与内部基质层的活性成分或粘膜粘附聚合物的相互作用。
合适的阴离子聚合物或共聚物是乙醇酸纤维素(
Figure G05837293X20070508D000171
)、乙酸邻苯二甲酸纤维素(CAP、Cellulosi acetas、PhEur、乙酸邻苯二甲酸纤维素、NF、
Figure G05837293X20070508D000172
)、乙酸琥珀酸纤维素(CAS)、乙酸偏苯三酸(trimeliat)纤维素(CAT)、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素(HPMCP、HP50、HP55)、乙酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素(HPMCAS-LF、-MF、-HF)、聚乙酸邻苯二甲酸乙烯酯(PVAP，
Figure G05837293X20070508D000173
)、乙酸乙烯酯-乙烯基吡咯烷酮共聚物(PVAc，VA64)、乙酸乙烯酯∶巴豆酸9∶1共聚物(VAC:CRA，
Figure G05837293X20070508D000181
VAC)和/或虫胶。所述聚合物或共聚物在许多情况下可以以完全令人满意的方式配制，以可实现pH特异性溶解。
外部成膜化包衣特别优选基本上由具有含阴离子基团的单体含量为5至60wt％的(甲基)丙烯酸酯共聚物构成，该共聚物任选与制药常规辅料，尤其是增塑剂一起配制。与开头提及的聚合物相比，本发明范围内所提到的阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物导致在许多情况下可以调节更精确且更可再现的溶解pH值的pH特异性设定。操作和应用通常也被认为不太复杂。
外部包衣的(甲基)丙烯酸酯共聚物优选由40至95wt％，优选45至90wt％，特别是30至wt％的自由基聚合的丙烯酸或甲基丙烯酸的C1-至C4-烷基酯构成，并可以包含5至60wt％，优选8至40wt％，特别是20至35wt％含阴离子基团的(甲基)丙烯酸酯单体。
所提到的比例通常合计达100wt％。但是，此外，在不会导致基本性质受损或改变的情况下，可以存在0至10，例如1至5wt％范围内的少量的能够进行乙烯基共聚的其它单体，例如甲基丙烯酸羟乙酯或丙烯酸羟乙酯。
丙烯酸或甲基丙烯酸的C1-至C4-烷基酯特别是甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸丁酯、丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯和丙烯酸丁酯。
含阴离子基团的(甲基)丙烯酸酯单体可以是，例如，丙烯酸，但优选为甲基丙烯酸。
同样适合的是由40至60wt％甲基丙烯酸和60至40wt％甲基丙烯酸甲酯或60至40wt％丙烯酸乙酯构成的阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物(L或L100-55类型)。这种类型的玻璃化转变温度(ISO 11357-2，细目3.3.3)为105至160℃，且分子量Mw为100000至300000(分子量Mw可以例如通过凝胶渗透色谱法或通过散射光法测定(参见，例如，H.F.Mark等人，Encyclopedia of PolymerScience and Engineering，第二版，第10卷，第1页及后几页，J.Wiley，1989)。
Figure G05837293X20070508D000191
L是由50wt％甲基丙烯酸甲酯和50wt％甲基丙烯酸构成的共聚物。这种(甲基)丙烯酸酯共聚物特别适于在大约pH6.0至6.5的pH范围内(空肠)溶解。
Figure G05837293X20070508D000192
L100-55是由50wt％丙烯酸乙酯和50wt％甲基丙烯酸构成的共聚物。L 30D-55是包含30wt％
Figure G05837293X20070508D000194
L 100-55的分散体。这种(甲基)丙烯酸酯共聚物特别适于在大约pH5.5至6.0的pH范围内(十二指肠)溶解。
同样适合的是由20至40wt％甲基丙烯酸和80至60wt％甲基丙烯酸甲酯构成的阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物(
Figure G05837293X20070508D000195
S类型)。这种(甲基)丙烯酸酯共聚物特别适于在大约pH6.5至7.0的pH范围内(空肠或回肠)溶解。这种类型的玻璃化转变温度为140至180℃，且分子量Mw为100000至150000。
特别适合的(甲基)丙烯酸酯共聚物是由10至30wt％甲基丙烯酸甲酯、50至70wt％丙烯酸甲酯和5至15wt％甲基丙烯酸构成的那些。
Figure G05837293X20070508D000196
FS类型是由25wt％甲基丙烯酸甲酯、65wt％丙烯酸甲酯和10wt％甲基丙烯酸构成的共聚物。
Figure G05837293X20070508D000197
FS 30D是包含30wt％FS类型共聚物的分散体。这种(甲基)丙烯酸酯共聚物特别适于在大约pH7.0至7.8的pH范围内(回肠或结肠)溶解。
另外适合的是由如下物质构成的共聚物：
20至34wt％甲基丙烯酸和/或丙烯酸
20至69wt％丙烯酸甲酯和
0至40wt％丙烯酸乙酯和/或，在适当时
0至10wt％的能够进行乙烯基共聚的其它单体，
条件是，根据ISO 11357-2细目3.3.3的共聚物的玻璃化转变温度为最高60℃。这种(甲基)丙烯酸酯共聚物由于其良好的断裂伸长性能而特别适合将丸粒压制成片剂。
另外适合的是由如下物质构成的共聚物：
20至33wt％甲基丙烯酸和/或丙烯酸，
5至30wt％丙烯酸甲酯和
20至40wt％丙烯酸乙酯和
大于10至30wt％甲基丙烯酸丁酯和
在适当时
0至10wt％能够进行乙烯基共聚的其它单体，
其中单体的比例合计达100wt％，
条件是，根据ISO 11357-2，细目3.3.3的共聚物的玻璃化转变温度(中点温度Tmg)为55至70℃。这种类型共聚物由于其良好的机械性能而特别适于将丸粒压制成片剂。
上述共聚物特别由下列物质的经自由基聚合的单元构成：
20至33，优选25至32，特别优选28至31wt％甲基丙烯酸或丙烯酸，优选甲基丙烯酸，
5至30，优选10至28，特别优选15至25wt％丙烯酸甲酯，
20至40，优选25至35，特别优选18至22wt％丙烯酸乙酯，和
大于10至30，优选15至25，特别优选18至22wt％甲基丙烯酸丁酯，
其中选择单体组成以使得共聚物的玻璃化转变温度为55至70℃，优选59至66，特别优选60至65℃。
还可以使用所提到的共聚物的混合物以调节特定的释放分布曲线或释放位点。
在此，玻璃化转变温度特别是指根据ISO 11357-2，细目3.3.3的中点温度Tmg。测量在不添加增塑剂的情况下，在低于100ppm的残留单体含量(REMO)下，在10℃/分钟的加热速率下并在氮气气氛下进行。
共聚物优选基本上至完全，以90、95或99至100wt％由在上述数量范围内的单体甲基丙烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯和甲基丙烯酸丁酯构成。
但是，在这不会必然导致基本性质受损的情况下，可以还存在0至10，例如1至5wt％范围内的少量的能够进行乙烯基共聚的其它单体，例如甲基丙烯酸甲酯、丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸羟乙酯、乙烯基吡咯烷酮、乙烯基丙二酸、苯乙烯、乙烯醇、乙酸乙烯酯和/或其衍生物。
共聚物以本身已知的方式通过自由基本体聚合、溶液聚合、成珠聚合或乳液聚合获得。它们必须在加工之前通过合适的研磨、干燥或喷雾过程达到本发明的粒度范围。这可以通过经挤出并冷却的颗粒线料的简单破碎，或热击碎(abschlag)进行。
尤其在与其它粉末或液体混合的情况下，使用粉末可能是有利的。合适的制备粉末的装置(
Figure G05837293X20070508D000211
)是本领域技术人员熟悉的，例如空气喷射磨机、棒磨机、扇形磨机。在适当时，可以包括相应的筛分步骤。适于工业大量规模的磨机是，例如，以大约6巴的超压操作的对冲射流磨机(Multi No.4200)。
共聚物制备
提到的所有(甲基)丙烯酸酯共聚物可以通过单体在聚合引发剂和分子量调节剂存在下借助嵌段、成珠或乳液聚合的自由基聚合和聚合产物的排料获得(参见，例如，EP 0704207A2、EP 0704208A2或WO 03/092732)。(甲基)丙烯酸酯共聚物可以以本身已知的方式通过自由基乳液聚合，在水相中，在优选阴离子乳化剂存在下制备，例如按DE-C 2135073中所述的方法制备。适合的其它制备方法原则上还有“基团转移聚合”(GTP)或“原子转移自由基聚合”(ATRP)(参见，例如，Matyjaszews ki，K.等人，Chem.Rev.2001，101，2921-2990)。所得聚合物结构是无规共聚物或嵌段共聚物。
优选的是在2至15wt％分子量调节剂、0.1至2wt％的乳化剂比例、0.02至0.4wt％的聚合引发剂数量的存在下，并在65至90℃温度下的乳液聚合。优选的是乳化剂混合物，优选由月桂基硫酸钠(例如0.1至0.5wt％)和聚氧乙烯-20失水山梨糖醇单油酸酯(例如0.4至1.5wt％)构成。特别合适的引发剂是过氧二硫酸钠或过氧二硫酸铵。由此方式可以制备例如固含量为20至40wt％的分散体，并可以通过喷雾干燥或通过水在挤出机中的凝结和压挤出而获得共聚物。聚合产物随后溶解，优选溶解在有机溶剂中，通过相对于水的多次透析而提纯，并优选冻干。
可以提到的聚合引发剂的例子是：偶氮化合物，例如2，2’-偶氮双(异丁腈)或2，2’-偶氮双(2，4-二甲基戊腈)；氧化还原体系，例如叔胺与过氧化物的组合，或优选过氧化物(在这点上参见例如H.Rauch-Puntigam，Th.
Figure G05837293X20070508D000221
“Acryl-und Methacrylverbindungen(丙烯酸类与甲基丙烯酸类化合物)”，Springer，Heidelberg，1967，或Kirk-Othmer，Encyclopedia of Chemical Technology(化学技术大全)，第1卷，第386页以及后几页，J.Wiley，New York，1978)。合适的过氧化物型聚合引发剂的例子是过氧化二月桂酰、过辛酸叔丁酯、过异壬酸叔丁酯、过氧二碳酸二环己酯、过氧化二苯甲酰或2，2-双(叔丁基过氧基)丁烷。
聚合还可优选用具有不同半衰期的各种不同的聚合引发剂的混合物进行，例如过氧化二月桂酰和2，2-双(叔丁基过氧基)丁烷，以使自由基流在聚合进程中和在各种不同的聚合温度下保持恒定。聚合引发剂的用量通常为基于单体混合物计0.01至最多1wt％。
可以通过使单体混合物在分子量调节剂存在下聚合而调节分子量Mw。合适的分子量调节剂特别是硫醇，例如正丁基硫醇、正十二烷基硫醇、2-巯基乙醇或巯基乙酸2-乙基己基酯，其中分子量调节剂通常以基于单体混合物计0.05至15wt％的量，优选以基于单体混合物计0.1至10wt％，特别优选2至12wt％的量使用(参见，例如，H.Rauch-Puntigam，Th.
Figure G05837293X20070508D000222
“Acryl-undMe thacrylverbindungen”，Springer，Heidelberg，1967；Houben-Weyl，Methoden der organischen Chemie(有机化学方法)，第XIV/1卷，第66页，Georg Thieme，Heidelberg，1961或Kirk-Othmer，Encyclopedia of Chemical Technology，第1卷，第296页及后几页，J.Wiley，New York，1978)。优选使用的分子量调节剂为正十二烷基硫醇或巯基乙酸2-乙基己基酯。巯基乙酸乙基己基酯提供了可以影响(甲基)丙烯酸酯共聚物的疏水性的优点，因为该调节剂在末端引入分子中。优选用量为5至15wt％十二烷基硫醇或2至10wt％巯基乙酸2-乙基己基酯。
有机溶液
所提到的(甲基)丙烯酸酯共聚物可以以有机溶液，例如10至30wt％浓度的有机溶液形式提供。可用溶剂是，例如，丙酮、异丙醇或乙醇或其混合物，其在适当时可以包含比例最多为大约10wt％的水。但是，水分散体是优选的。
分散体
所提到的(甲基)丙烯酸酯共聚物可以作为乳液聚合物，优选以10至50wt％，特别是20至40％浓度的水分散体的形式制备并使用。作为市售形式，30wt％的固含量是优选的。对加工而言，甲基丙烯酸单元的部分中和过程是非必需的；但是，例如，如果需要包衣组合物分散体的稳定化或增稠，则其可以为最高至5或10摩尔％的程度。胶乳粒子的重均尺寸通常为40至100纳米，优选50至70纳米，确保低于1000mPa·s的在加工技术方面有利的粘度。
在较高的中和度，例如10至50摩尔％，或完全中和的情况下，可以将共聚物转化成溶解状态。
为了制备阴离子共聚物的溶液，通常需要部分或完全中和酸基团。阴离子共聚物可以，例如，以1至40wt％的最终浓度逐渐搅拌加入水中，并在此通过添加碱性物质，例如NaOH、KOH、氢氧化铵或有机碱，例如三乙醇胺而被部分或完全中和。还可以使用共聚物的粉末，在其制备过程中已经为了(部分)中和的目的而向其中添加了碱，例如NaOH，使得该粉末是已经(部分)中和的聚合物。溶液的pH值通常高于4，例如为4至大约7。
分散体也可以例如以本身已知的方式喷雾干燥或冻干，并以可再分散的粉末形式提供(参见，例如，EP-A 0262326)。另选方法是冻干或水在挤出机中凝结并压挤出，随后造粒(参见，例如，EP-A 0683028)。
已经令人惊奇地发现，由经喷雾干燥或冻干和再分散的粉末制成的共聚物分散体表现出提高的剪切稳定性。这在喷涂的情况下特别有利。当分散体中存在的共聚物以被部分中和至2至10摩尔％的形式存在(基于共聚物中存在的酸基团计)时，这种优点特别增强地显现出来。为此目的通过添加NaOH实现的部分中和是优选的。阴离子乳化剂优选以0.1至2wt％的量存在。月桂基硫酸钠特别优选作为乳化剂。
层厚
外部包衣的层厚优选为20至200，优选50至120微米。
多颗粒状药物剂型的制备
本发明还涉及以如下方式制备多颗粒状药物剂型的方法：
a)以本身已知的方式将核酸活性成分与辅料配制成纳米颗粒，
b)通过喷涂到芯体上或在无芯体时通过旋转团聚(Rotagglomeration)、沉淀或喷雾法制备内部基质层，其包含纳米颗粒形式的核酸活性成分和具有粘膜粘附作用的聚合物，并在适当时包含其它制药常用辅料，和随后
c)通过喷涂法施涂基本上由任选可与制药常用辅料，尤其是增塑剂一起配制的阴离子聚合物构成的外部成膜化包衣，从而获得含活性成分的包覆丸粒，和
d)借助制药常用辅料并以本身已知的方式将所得丸粒加工成多颗粒状药物剂型，特别是含丸粒的片剂、微型片剂、胶囊、囊剂或重构用粉末，其被配制成使得所含丸粒在胃的pH范围内被释放。
预制丸粒和丸粒的制备
可以在无活性成分的球粒(Nonpareilles)上进行造粒，或可以制备无芯体丸粒。
首先，制备含活性成分的纳米颗粒。
随后，制备含或不含芯体的内部基质层。这种尚未包衣的成圆形的层可以被称作预制丸粒(丸粒芯)。
可以通过流化床法将包含含核酸活性成分的纳米颗粒的粘膜粘附性聚合物的溶液或悬浮液施涂到空白对照剂丸粒或其它合适的载体材料上，在此蒸发掉溶剂或悬浮剂。在这种制备过程之后可进行干燥步骤。
将核酸活性成分以含有具有粘膜粘附作用的聚合物的纳米颗粒形式加入有机溶剂或加入水中，并混合。为了确保混合物的令人满意的可喷雾性，通常必须配制低粘度混合物。为此目的可能有利的是以相对低浓度使用具有粘膜粘附作用的聚合物，例如1至最多10，优选2至5wt％。此外，以0.1至20，优选0.5至10wt％的浓度添加洗涤剂，例如吐温，对降低表面张力可能是有利的。
除活性成分外，还可以存在其它制药辅料：粘结剂(例如纤维素及其衍生物)、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)、保湿剂、促崩解剂、润滑剂、崩解剂、(甲基)丙烯酸酯、淀粉及其衍生物、糖、增溶剂或其它。
例如由Bauer，Lehmann，Os terwald，Rothgang，“
Figure G05837293X20070508D000251
Arzneiformen(包衣药物剂型)”，Wissenschaftliche Verlags-gesellschaft mbH Stuttgart，第7章，第165-196页中已知相应的施涂方法。
此外，本领域技术人员从教科书中可获知详细情况。参见，例如：
-Voig t，R.(1984)：Lehrbuch der pharmazeutischenTechnologie；Verlag Chemie Weinheim-Beerfield Beach/Florida-Basel
-Sucker，H.，Fuchs，P.，Speiser，P.：PharmazeutischeTechnologie(制药技术)，Georg Thieme Verlag Stuttgart(1991)，特别是第15和16章，第626-642页
-Gennaro，A.，R.(编者)，Remington′s PharmaceuticalSciences(Remington制药科学)，Mack Publishing Co.，EastonPennsylvania(1985)，第88章，第1567-1573页
-List，P.H.(1982)：Arzneiformenlehre(药物剂型指南)，Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft mbH，Stuttgart。
内部基质还可以不借助惰性芯体(Nonpareilles)制备。内部基质的成分在这种情况下可以通过旋转团聚、沉淀或喷雾法之类的方法，尤其是超声流化喷雾法成圆为具有指定尺寸，例如50至1000微米的尚未包衣的丸粒(预制丸粒)。这具有整个芯体体积可供活性成分加载的优点。活性成分的加载因此与具有惰性芯体的实施方案相比可进一步提高。
在内部基质芯(或预制丸粒)制成之后，再次优选在喷雾法中向它们提供外部包衣，从而获得成品丸粒。由有机溶液，或优选由水分散体，通过喷涂制备丸粒。在这种情况下，产生均匀的无孔包衣对于实施是决定性的。
面涂层
另外可向丸粒提供着色包衣，但其必须不影响溶解pH值。合适的例子是由经着色的羟丙基甲基纤维素或其它可溶于水或能在水中快速崩解的聚合物构成的包衣。
制药常用辅料
在制备过程中可以向本发明的配制剂中添加常用辅料或添加剂。当然，原则上所有所用物质必须是毒物学上无问题的，并特别是在药物中对患者应用没有风险。
常用添加剂在药物包衣或涂层中的用量和应用是本领域技术人员熟悉的。常用添加剂的可能例子是增塑剂、隔离剂、颜料、稳定剂、抗氧化剂、成孔剂、促渗剂、光泽剂、芳香物质、洗涤剂、润滑剂或增味剂。它们充当加工助剂并意于保可靠和可再现的制备方法和良好的长期贮存稳定性，或它们在药物剂型中实现附加的有利性质。它们在加工之前添加到聚合物制剂中，并可以影响包衣的渗透性，这在适当时可以用作附加的控制参数。
●隔离剂：
隔离剂通常具有亲脂性质并通常添加到喷雾悬浮液中。它们防止芯体在薄膜包衣过程中团聚。优选使用滑石、硬脂酸镁或硬脂酸钙、研磨二氧化硅(
Figure G05837293X20070508D000271
)、高岭土或HLB值为3至8的非离子乳化剂。隔离剂在本发明的包衣组合物和粘结剂中的通常用量为基于共聚物计0.5至100wt％。
●颜料：
与包衣组合物不相容的颜料特别是如下颜料：其如果以基于(甲基)丙烯酸酯共聚物的干重量计例如20至400wt％的通常用量直接添加到(例如通过搅拌加入)(甲基)丙烯酸酯共聚物分散体中则会导致分散体失稳定，凝聚，导致离析现象或类似的不希望的效果。此外，所用颜料当然是无毒的并适于制药目的。关于这一点，还参见，例如，Deutsche Forschungsgemeinschaft(德国科学研究协会)，Farbstoffe für Lebensmittel(食品用染料)，Harald Boldt VerlagKG，Boppard(1978)；Deutsche Lebensmittelrundschau 74，第4期，第156页(1978)；Arzneimittelfarbstoffverordnung AmFarbV，1980年8月25日。
与包衣组合物不相容的颜料可以是，例如，氧化铝颜料。不相容颜料的例子是黄橙色、胭脂虫红色淀、基于氧化铝或偶氮染料的有色颜料、磺酸染料、黄橙色S(E110，C.I.15985，FD&C黄6)、靛胭脂红(E132，C.I.73015，FD&C蓝2)、酒石黄(E 102，C.I.19140，FD&C黄5)、丽春红4R(E 125，C.I.16255，FD&C胭脂虫红A)、喹啉黄(E 104，C.I.47005，FD&C黄10)、赤藓红(E 127，C.I.45430，FD&C红3)、偶氮玉红(E 122，C.I.14720，FD&C Carmoisine)、苋菜红(E 123，C.I.16185，FD&C红2)、亮酸性绿(E 142，C.I.44090，FD&C绿S)。
所给出的颜料的E号码涉及EU编号。关于这一点，还参见“Deutsche Forschungsgemeinschaft，Farbstoffe fürLebensmittel，Harald Boldt Verlag KG，Boppard(1978)；DeutscheLebensmittelrundschau 74，第4期，第156页(1978)；Arzneimittelfarbstoffverordnung AmFarbV，1980年8月25日。FD&C号码涉及由美国食品和药品管理局(FDA)给出的在食品、药品和化妆品方面的许可，其描述于：美国食品和药品管理局，食品安全和应用营养中心，化妆品和色料办公室：联邦法规汇编(Code of FederalRegulations)-第21篇Color Additive Regulations(色料添加剂规范)第82部分，Listing of Certified Provisionally ListedColors and Specifications(已检定的暂时列出的色料和技术规范列表)(CFR 21 Part 82)。
●增塑剂：
其它添加剂也可以是增塑剂。常用量为0至50，优选2至20，特别是5至10wt％。
增塑剂可以根据类型(亲脂或亲水)和添加量而定影响聚合物层的功能性。增塑剂通过与聚合物的物理相互作用实现玻璃化转变温度的降低并取决于添加量而促进成膜。合适的物质通常具有100至20000的分子量并在分子中包含一个或多个亲水基团，例如羟基、酯基或氨基。
合适的增塑剂的例子是柠檬酸烷基酯、甘油酯、邻苯二甲酸烷基酯、癸二酸烷基酯、蔗糖酯、失水山梨糖醇酯、癸二酸二乙酯、癸二酸二丁酯和聚乙二醇200至12000。优选增塑剂是柠檬酸三乙酯(TEC)和乙酰基柠檬酸三乙酯(ATEC)。还可提到通常在室温下为液体的酯，例如柠檬酸酯、邻苯二甲酸酯、癸二酸酯或蓖麻油。优选使用柠檬酸酯和癸二酸酯。
向配制剂中添加增塑剂可以按已知方式，直接在水溶液中进行，或在混合物热预处理之后进行。还可以使用增塑剂的混合物。
多颗粒状药物剂型的制备
含活性成分的包衣丸粒可以借助制药常用辅料并以本身已知的方式加工成多颗粒状药物剂型，特别是加工成含丸粒的片剂、微型片剂、胶囊、囊剂或重构用粉末，其可以被配制成使得所含丸粒在胃的pH范围内被释放。作为多颗粒状药物剂型形式的制备提供高剂量可靠性，并提供了丸粒在肠腔内良好分布的优点。本发明的多颗粒状药物剂型还可以包含具有不同活性成分和/或不同丸粒结构的各种不同的丸粒类型。
压制片剂
例如在Beckert等人(1996)，“Compression of enteric-coatedpellets to disintegrating tablets”(enteric包衣丸粒压制成解碎片剂)，International Journal of Pharmaceutics 143，第13-23页和在WO 96/01624中描述了通过将制药常用粘结剂与含活性成分的颗粒一起压制而制备多颗粒状药物剂型。
含活性成分的丸粒的膜包衣通常在流化床设备中施涂。通常通过合适的方法将成膜剂与增塑剂和隔离剂混合。在这种情况下，成膜剂可以作为溶液或悬浮液形式存在。用于成膜的辅料同样可以经溶解或悬浮。可以使用有机或水性溶剂或分散剂。此外可以使用稳定剂以使分散体稳定化(例子：吐温80或其它合适的乳化剂或稳定剂)。
隔离剂的例子是甘油单硬脂酸酯或其它合适的脂肪酸衍生物、硅酸衍生物或滑石。增塑剂的例子是丙二醇、邻苯二甲酸酯、聚乙二醇、癸二酸酯或柠檬酸酯，以及文献中提到的其它物质。
可以在含活性成分的层和肠可溶性共聚物层之间施涂隔离层，其用于隔离活性成分和包衣材料以防止相互作用。这种层可以由惰性成膜剂(例如HPMC、HPC或(甲基)丙烯酸共聚物)或例如滑石或另一合适的制药物质构成。同样可以使用成膜剂和滑石或类似物质的组合。还可以施涂由经部分或完全中和的(甲基)丙烯酸酯共聚物分散体构成的隔离层。
隔离层还可以由与位于下方的基质层中相同或不同的粘膜粘附性聚合物构成。可以由此方式预防活性成分或粘膜粘附性聚合物与成膜性(甲基)丙烯酸酯共聚物层的可能的相互作用或不相容性。
通过将丸粒与适用于压片的粘结剂混合，如果必要则添加崩解促进性物质和如果必要则添加润滑剂，配制用于制备由包衣颗粒构成的片剂的混合物。混合可以在合适的机器中进行。对包衣颗粒造成损害的混合器是不合适的，例如犁铧混合器。为了实现合适的短崩解时间，特定次序可能在向包衣颗粒中添加辅料时是必要的。通过与包衣颗粒与润滑剂或脱模剂硬脂酸镁预混，可以使其表面疏水化并由此避免粘附。
适用于压片的混合物通常包含3至15wt％崩解助剂，例如KollidonCL，和例如0.1至1wt％润滑剂和脱模剂，例如硬脂酸镁。按照所要求的包衣颗粒的比例确定粘结剂比例。
典型的粘结剂是例如
Figure G05837293X20070508D000301
微晶纤维素、磷酸钙、
Figure G05837293X20070508D000302
乳糖或其它合适的糖、硫酸钙或淀粉衍生物。低堆密度的物质是优选的。
典型的崩解助剂(崩解剂)是交联的淀粉衍生物或纤维素衍生物，和交联聚乙烯基吡咯烷酮。纤维素衍生物同样适合。可以通过合适的粘结剂的选择省去崩解助剂的使用。
典型的润滑剂和脱模剂是硬脂酸镁或其它合适的脂肪酸盐或在文献中举出的用于此目的的物质(例如月桂酸、硬脂酸钙、滑石等)。利用合适的机器(例如具有外部润滑的压片机)或合适的配方，可以省去润滑剂和脱模剂在混合物中的使用。
适当时可以向混合物中添加用于改进流动性的助剂(例如高度分散的硅酸衍生物、滑石等)。
压片可以在常用压片机，偏心或回转压片机上，在5至40kN，优选10-20kN的压力下进行。压片机可以配有用于外部润滑的系统。在适当时使用用于填充模具的特定系统，其避免借助搅拌桨的模具填充过程。
其它多颗粒状药物剂型
作为压制片剂或微型片剂的替代物，还可以将含活性成分的包衣丸粒加工成任何其它可口服多颗粒状药物剂型。包衣丸粒可以，例如，填充到胶囊，例如明胶胶囊中，或配制成囊剂或重构用粉末。
本发明的有利效果
本发明的药物剂型适用于核酸活性成分的靶向和有效释放。药物剂型表现出高剂量可靠性并在胃中和在肠腔中良好分布。在此，所含核酸活性成分很大程度上受到保护以免物理或溶核失活，并可以以高比例活性成分能够被机体吸收的方式在指定作用位点释放。药物剂型因此使用少量活性成分也足够，因为仅有少量的活性成分损失。通过靶向输送整体上降低了副作用的风险。可以根据治疗目的而定可变地调节作用位点。因此，可以更好地控制活性成分吸收的时间点。因为它是口服药物剂型，其与其它给药形式相比总体上更好地被患者接受(患者依从性)。因此，可以使大量核酸活性成分用于通过口服的应用。给药风险通常小于特别在肠胃外给药的情况下。给药成本也可以保持较低，因为给药不需要熟练技术人员。
亲脂基质
当活性成分以纳米颗粒形式包埋入熔点高于37℃，优选高于45℃，特别优选高于55℃的亲脂基质中且含活性成分的亲脂基质包埋入由具有粘膜粘附作用的聚合物构成的基质中时，得到本发明的特别方面。在亲脂基质中配制的目的是改进活性成分，优选微溶或难溶活性成分(DAB 10，2003的意义上)的溶解度或生物利用率。
亲脂基质在本发明意义中是指这样的物质或物质混合物：活性成分可以在其中溶解、悬浮或乳化。所述亲脂基质的一种或多种物质不同于常用制药辅料和具有粘膜粘附作用的聚合物。所述亲脂基质的一种或多种物质优选具有疏水或两亲特征。亲脂基质还可以被称作两亲基质或类脂基质。
亲脂基质可以由单一物质(例如脂质)或物质混合物(例如脂质混合物)构成。在混合物的情况下，下文对根据DAB 10的水溶性、分配系数和/或HLB值所述的性质在每种情况下由重量份数的算术平均值和混合物中的物质的值计算。所用物质必须是无毒的。
亲脂基质/具有粘膜粘附作用的聚合物
在优选实施方案中，亲脂基质与具有粘膜粘附作用的聚合物的可能的相互作用被考虑。为了避免不可控制的相互作用，形成亲脂基质的所述一种或多种物质与具有粘膜粘附作用的聚合物应该优选具有相同的离子性质，即两者应该一致地至少主要具有阳离子特征或一致地具有阴离子特征。在选择具有相反离子性质的物质时，具有粘膜粘附作用的聚合物应该优选以至少50，特别优选100％的比例以被中和的形式存在。中和可以通过以已知方式添加酸或碱进行。
用于组配亲脂基质的一种或多种物质
亲脂基质优选包含80至100，优选90至100，特别优选100wt％的具有(平均)HLB值为0至15，优选2至10的物质或物质混合物。亲脂基质可以包含0至20，优选0至10wt％的制药常用辅料，尤其是稳定剂、增稠剂或吸附剂。特别优选不存在任何制药常用辅料。
所述形成亲脂基质的一种或多种物质可以例如属于如下物质组：油、脂肪、单-、二-或三酸甘油酯、脂肪酸、脂肪醇，尤其是C6至C20脂肪酸和/或C6至C20醇，包括它们的盐、醚、酯或酰胺衍生物，磷脂、卵磷脂、乳化剂、类脂、脂质可溶性维生素或表面活性剂。
亲脂基质可以包含例如下列脂质制剂之一：(Imwitor 308)单酯含量大于80％的甘油单辛酸酯、(Imwitor 312)单酯含量大于90％的甘油单月桂酸酯、(Imwitor 491)单酯含量大于90％的甘油单硬脂酸(sterate)(C16+C18)酯、(Imwitor 900P)单酯含量为40-55％且C18含量为40-60％的甘油单硬脂酸酯、(Imwitor 900K)单酯含量为40-55％且C18含量为60-80％的甘油单硬脂酸酯、(Imwitor 742)单酯含量为45-55％的中等链长C8和C10甘油酯、(Imwitor 928)主要含C12且单酯含量为34-36％的饱和植物C10-C18脂肪酸的偏甘油酯、C8和C10甘油酯、辛酸钠或癸酸钠。
亲脂基质可以包含例如下列脂质制剂之一：
脂肪，例如饱和和不饱和脂肪酸的单-、二-、三-甘油酯及其混合物。特别是甘油硬脂酸酯、甘油棕榈酸酯、甘油肉豆蔻酸酯、甘油棕榈酸硬脂酸酯、甘油月桂酸酯、甘油辛酸酯、甘油油酸酯，这些酯的例子是
Figure G05837293X20070508D000331
-308、-312、-491、-742、-900、-928、-988和
Figure G05837293X20070508D000332
44/14、-50/13、Geleol、Compritol E ATO、Dynasan114、Softisan、Witepsol、Dynacet 212、椰油脂肪，油，例如蓖麻油、芝麻油、葵花油、棉籽油、玉米油、杏仁油、花生油、橄榄油、椰子油、胡萝卜油、小麦胚芽油、胡桃油，中性油，例如肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、中等链长甘油三酯(
Figure G05837293X20070508D000333
)，
短链脂族和芳族羧酸酯，例如邻苯二甲酸二丁酯、癸二酸二乙酯、癸二酸二丁酯、柠檬酸三丁酯、乙酰基柠檬酸三丁酯、甘油三乙酸酯，
蜡，例如巴西棕榈蜡、蜂蜡、羊毛蜡，
甘油山萮酸酯，
脂肪酸酰胺，例如硬脂酰胺、棕榈酰胺、月桂酰胺，
脂族长链羧酸，例如硬脂酸、棕榈酸、月桂酸、肉豆蔻酸、油酸、辛酸、亚油酸、亚麻酸，以及，例如，它们的Na、Al和Mg盐，
脂肪醇，例如硬脂醇、月桂醇、鲸蜡醇、肉豆蔻醇、甘油缩甲醛，
W/O乳化剂，例如胆固醇、甘油单硬脂酸酯、乙二醇单硬脂酸酯、失水山梨糖醇单油酸酯(80)、失水山梨糖醇单棕榈酸酯(40)、失水山梨糖醇单月桂酸酯(
Figure G05837293X20070508D000336
20)、失水山梨糖醇单硬脂酸酯(
Figure G05837293X20070508D000337
60)、失水山梨糖醇三油酸酯(
Figure G05837293X20070508D000338
85)、失水山梨糖醇三硬脂酸酯(
Figure G05837293X20070508D000339
65)、失水山梨糖醇倍半油酸酯(
Figure G05837293X20070508D0003310
83)、硬脂酸钙、硬脂酸铝、硬脂酸镁、聚氧乙烯失水山梨糖醇三硬脂酸酯(
Figure G05837293X20070508D000341
65)、聚氧乙烯失水山梨糖醇三油酸酯(
Figure G05837293X20070508D000342
85)，
非离子O/W乳化剂，例如聚乙二醇(Macrogol)硬脂酸酯400(
Figure G05837293X20070508D000343
A)、聚乙二醇月桂基醚、聚乙二醇-20-失水山梨糖醇-单月桂酸酯、-单硬脂酸酯、-单棕榈酸酯、-单油酸酯、聚乙二醇-1500-甘油三蓖麻醇酸酯、聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯(RH)、聚乙二醇-1000-甘油-单月桂酸酯、-单硬脂酸酯、-单油酸酯、蔗糖单硬脂酸酯、Polysorbat 60(
Figure G05837293X20070508D000345
60)、聚氧乙烯单硬脂酸酯(Myrj49)、Polysorbat 80(
Figure G05837293X20070508D000346
80)、Polysorbat 40(
Figure G05837293X20070508D000347
40)、Polysorbat 20(20)、泊洛沙姆(Poloxamer)407(
Figure G05837293X20070508D000349
F 127)、泊洛沙姆188(
Figure G05837293X20070508D0003410
F 68)、聚氧乙烯蓖麻醇酸酯(
Figure G05837293X20070508D0003411
EL)、聚氧乙烯-5-硬脂基硬脂酸酯，
离子型O/W乳化剂，例如鲸蜡基硬脂基硫酸盐(
Figure G05837293X20070508D0003412
E)、月桂基硫酸钠(
Figure G05837293X20070508D0003413
Z)、甘氨胆酸钠、常春藤苷配基，
两亲乳化剂，例如鸡蛋磷脂酰胆碱(鸡蛋卵磷脂)、大豆磷脂酰胆碱(大豆卵磷脂)、甜菜碱、磺基甜菜碱、神经酰胺(鞘磷脂)，
维生素，例如，视黄醇(维生素A)、胆钙化醇(维生素D)、α-生育酚和α-生育酚乙酸酯(维生素E)、叶绿醌(微生物K)，
其它辅料是半乳糖脂，例如单半乳糖基二酰基甘油、单半乳糖基二酰基甘油、三半乳糖基二酰基甘油，和芳香油，例如茴香油、香茅油、桉叶油、小茴香油、春黄菊油、小豆蔻油、松针油、苋蒿油、矮松油、薰衣草油、薄荷油、肉豆蔻油、丁香油、胡椒薄荷油、迷迭香油、鼠尾草油，和萜类，例如薄荷醇、芳樟醇、1，4-桉树脑、除虫菊酯、冰片、桉叶油醇、叶绿醇、泪柏醇、印苦楝素(Azadirachtin)、印楝素。
含活性成分的脂质基质在内部基质层a)中的含量可以为1至50，优选10至20wt％。
亲脂基质优选包含至少50wt％甘油单辛酸酯，最多10wt％胆酸钠，最多10wt％生育酚琥珀酸酯，在活性成分是PgP外排泵的底物的情况下含有1至5wt％的外排泵抑制剂，例如Solutol HS 15，甘油三酯，特别是三硬脂酸酯，其中这些组分合计为100％。这种亲脂基质可以直接引入粘膜粘附性聚合物中或以在水中乳化形式引入粘膜粘附性聚合物中。在后一种情况下，水相可以包含弱酸，例如柠檬酸。
方法
本发明还涉及具有下列步骤的制备多颗粒状药物剂型的方法
a)通过剧烈混合或使成分熔融，用所述形成亲脂基质的一种或多种物质并在适当时用其它制药常用辅料使包含核酸活性成分的纳米颗粒悬浮，由此制备含活性成分的亲脂基质，
b)通过在芯体上喷涂与含活性成分的亲脂基质混合的粘膜粘附性聚合物或在无芯体时通过旋转团聚、沉淀或喷雾法，制备预制丸粒(丸粒芯)，
c)通过从分散体或有机溶液在得自步骤b)的预制丸粒上，喷涂任选可包含制药常用辅料，尤其是增塑剂和隔离剂掺混物的阴离子聚合物或共聚物包衣，而制备丸粒，
d)通过以本身已知的方式，在适当时使用制药常用辅料，填充或引入得自步骤c)的丸粒，特别是通过加工成含丸粒的片剂、微型片剂、胶囊、囊剂或重构用粉末，而制备多颗粒状药物剂型。
优选方法
工艺步骤a)和b)优选如下进行：
a)如下制备内部基质层：通过在水中剧烈混合各成分，用所述亲脂基质的一种或多种物质和在适当时的其它制药常用辅料制备包含核酸活性成分的纳米颗粒的乳液或悬浮液，并制备平均粒度不大于60，优选不大于20微米的水包油制剂，
b)将得自步骤a)的水包油制剂喷涂到任选可包含其它制药常用辅料掺混物的粘膜粘附性聚合物上，由此制备预制丸粒，其中这些成分是以通过旋转团聚、挤出或制粒产生的微粉化粉末形式存在，所述粉末例如具有10至100微米的平均粒度。
具体实施方式
实施例
实施例阐述了本发明的典型实施方式。
实施例1
包含阳离子(甲基)丙烯酸酯共聚物的纳米颗粒的制备
将2毫克DNA(核酸活性成分)，例如由具有例如3000至10000个碱基对的双链质粒DNA构成的基因治疗载体，其包含将要在人类细胞中表达并具有意图的治疗作用的基因，溶于4毫升pH 7.4的磷酸盐缓冲剂，并与2毫升小鼠单克隆抗人DNA IgM溶液(1毫克/毫升)混合并在37℃培养1小时。然后将1毫升LipofectinTM或优选3毫升(1毫克/毫升)改性E(由25wt％甲基丙烯酸甲酯、25wt％甲基丙烯酸丁酯和50wt％甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯构成的(甲基)丙烯酸酯共聚物，低分子量，肾脏可通过的(
Figure G05837293X20070508D000362
)Mw＝21000)混合并在缓慢搅拌下在37℃下保持大约30分钟。此段时间后测量pH值并用0.001N HCl调节至7.4。在例如漩涡振荡器(Vortex)上的剧烈混合后，在使用时产生平均直径为大约250纳米的纳米颗粒，在使用改性E时，产生平均直径大约150nm的纳米颗粒。通过透析提纯纳米颗粒的悬浮液。该悬浮液可以直接进一步加工，或可以通过冻干分离纳米颗粒。
实施例2
包含阳离子和阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物的纳米颗粒
在用合适的人类细胞培养物的初步试验中发现，当在阳离子
Figure G05837293X20070508D000365
E(改性的)中添加例如10％比例的阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物
Figure G05837293X20070508D000366
L(改性的)时，可以实现核酸活性成分的最佳转染速率。
将2毫克DNA(核酸活性成分)，例如由具有例如3000至10000个碱基对的双链质粒DNA构成的基因治疗载体，其包含将要在人类细胞中表达并具有意图治疗作用的基因，溶于4毫升pH7.4的磷酸盐缓冲剂，并与2毫升小鼠单克隆抗人DNA IgM溶液(1毫克/毫升)混合并在37℃下培养1小时。然后将1.1毫升、4毫升(1毫克/毫升)改性
Figure G05837293X20070508D000371
E(由25wt％甲基丙烯酸甲酯、25wt％甲基丙烯酸丁酯和50wt％甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯构成的(甲基)丙烯酸酯共聚物，低分子量，肾脏可通过的Mw＝大约21000)和0.4毫升(1毫克/毫升)改性
Figure G05837293X20070508D000372
L(由50wt％甲基丙烯酸甲酯和50wt％甲基丙烯酸构成的共聚物，低分子量，肾脏可通过的Mw＝21000)混合并在缓慢搅拌下在37℃下保持大约30分钟。在例如漩涡振荡器上的剧烈混合后产生平均直径为大约250纳米的纳米颗粒。通过透析提纯纳米颗粒的悬浮液。该悬浮液可以直接进一步加工，或可以通过冻干分离纳米颗粒。
实施例3
表面改性纳米颗粒(包含阳离子(甲基)丙烯酸酯共聚物并具有阴 离子(甲基)丙烯酸酯共聚物壳的纳米颗粒)
将2毫克DNA(核酸活性成分)，例如由具有例如3000至10000个碱基对的双链质粒DNA构成的基因治疗载体，其包含将要在人类细胞中表达并具有意图治疗作用的基因，溶于4毫升pH7.4的Dulbecco磷酸盐缓冲剂，并与2毫升小鼠单克隆抗人DNA IgM溶液(1毫克/毫升)混合并在37℃下培养1小时。然后将4毫升(1毫克/毫升)改性
Figure G05837293X20070508D000373
E(由25wt％甲基丙烯酸甲酯、25wt％甲基丙烯酸丁酯和50wt％甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯构成的(甲基)丙烯酸酯共聚物，低分子量，肾脏可通过的Mw＝21000)混合并在缓慢搅拌下在37℃下保持大约30分钟。此段时间后测量pH值并用0.001N HCl调节至7.4。
混合入由改性
Figure G05837293X20070508D000374
L(由50wt％甲基丙烯酸甲酯和50wt％甲基丙烯酸构成的(甲基)丙烯酸酯共聚物，低分子量，肾脏可通过的，Mw＝大约21000)在磷酸盐缓冲剂(pH7.4，0.5毫克/毫升)中形成的1毫升溶液(1mg/ml)，并且所得胶乳状缓冲分散体通过添加0.001M柠檬酸而达到直至pH5.0。通过透析提纯纳米颗粒的悬浮液。该悬浮液可以直接进一步加工，或可以通过冻干分离包覆的纳米颗粒。
实施例4
通过将得自实施例1、2或3的纳米颗粒包埋入包含壳聚糖并用酸 调节至pH5.0至5.5的内部基质层中，制备粘膜粘附性的尚未包衣的 丸粒(预制丸粒)
粘膜粘附性溶液的制备：
将4克壳聚糖乙酸酯溶于20克水中。然后在快速搅拌下，加入2克柠檬酸一水合物。设定5.2的pH值。然后，在所得澄清的泛黄色粘稠溶液中添加0.4克十二烷酸钠。在缓慢搅拌下向该溶液中混入得自实施例1、2或3的悬浮液。
预制丸粒的制备
使用流化床设备(Hüttling的Micro-Lab)，以5-8克/分钟/千克的喷涂速率，在30℃的进入空气温度下将经混合的悬浮液喷涂到直径为大约400-600微米的40克中性丸粒上。进入空气在这种情况下被调节为35-45方米/小时。这种情况下的收率为85-90％。
实施例5
(包衣)丸粒的制备
在流化床法中用
Figure G05837293X20070508D000381
L 12.5(由50wt％甲基丙烯酸甲酯和50wt％甲基丙烯酸构成的(甲基)丙烯酸酯共聚物，Mw＝大约200000，在异丙醇/丙酮3∶2中的12.5％浓度有机溶液)将根据实施例4制成的预制丸粒包衣。聚合物涂覆量为基于芯体重量计的40wt％。包衣用的悬浮液由以下物质组成：
Figure G05837293X20070508D000382
L 12.55   3.3％
柠檬酸三乙酯               1.33％
异丙醇                    38.3％
滑        2.0％
水        5.0％
获得均匀包覆的抗胃液丸粒，其包覆层在十二指肠或空肠中在pH6.0以上快速溶解并释放出粘膜粘附性预制丸粒。
实施例6
胶囊形式的多颗粒状药物制剂的制备
用胶囊填充装置将按实施例5制成的丸粒直接装入硬明胶胶囊，尺寸0的胶囊，以产生具有550毫克填充重量的单位剂型。在口服后，胶囊在胃的pH范围内快速溶解并释放出丸粒，其在胃中已均匀分布。
实施例7
片剂形式的多颗粒状药物剂型的制备
将按实施例5制成的丸粒与压片助剂、粘结剂、崩解促进剂和润滑剂一起配制。将550克丸粒与390克微晶纤维素、150克羧甲基淀粉钠和10克硬脂酸镁混合。将混合物在压片机中压制成总重量为1100毫克的小压制件。在口服后，片剂在胃的pH范围内崩解并释放出丸粒，其在胃中已均匀分布。

Claims (26)

1.口服多颗粒状药物剂型，其包含平均直径为50至2500微米的丸粒，这些丸粒基本上由下列部分构成：
a)包含纳米颗粒的内部基质层，这些纳米颗粒含有核酸活性成分并被包埋入由具有粘膜粘附作用的聚合物构成的基质中，所述具有粘膜粘附作用的聚合物是壳聚糖，由20-40wt％甲基丙烯酸甲酯和60至80wt％甲基丙烯酸构成的(甲基)丙烯酸酯共聚物，和/或纤维素，交联和/或未交联聚丙烯酸，凝集素，藻酸钠和/或果胶，其中该基质任选包含其它制药常用辅料，
b)外部成膜化包衣，其基本上由任选与制药常用辅料一起配制的阴离子聚合物或共聚物构成，所述外部成膜化包衣是乙醇酸纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素、乙酸琥珀酸纤维素、乙酸偏苯三酸纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、乙酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素、聚乙酸邻苯二甲酸乙烯酯、乙酸乙烯酯-乙烯基吡咯烷酮共聚物、乙酸乙烯酯∶巴豆酸9∶1共聚物和/或虫胶，或由具有阴离子基团的单体含量为5至60wt％的(甲基)丙烯酸酯共聚物构成，
其特征在于，
将该多颗粒状药物剂型配制使得所含丸粒在胃的pH范围内被释放，通过阴离子聚合物或共聚物或其与辅料的配制剂及其层厚的选择调节外部包衣，以使该包衣在肠中在4.0至8.0的pH范围内在15至60分钟内溶解，从而暴露出含活性成分的粘膜粘附性基质层，并且该层能够接合到肠粘膜上并在那里释放出活性成分，其中选择具有粘膜粘附作用的聚合物以使其在基于外部包衣开始溶解时的pH值计±0.5pH单位的范围内表现出至少ηb＝150至1000mPa·s的粘膜粘附作用和在15分钟内10至750％的水吸收，且基质层中纳米颗粒的活性成分含量最多为具有粘膜粘附作用的聚合物含量的40wt％。
2.根据权利要求1的药物剂型，其特征在于b)中所述制药常用辅料为增塑剂。
3.根据权利要求1的药物剂型，其特征在于纳米颗粒具有20至1000纳米的大小。
4.根据权利要求1-3中任一项的药物剂型，其特征在于纳米颗粒中所含的核酸以与阳离子物质形成的配合物形式存在。
5.根据权利要求4的药物剂型，其特征在于阳离子物质是阳离子脂质、阳离子多肽和/或阳离子聚合物。
6.根据权利要求5的药物剂型，其特征在于阳离子聚合物是具有叔或季氨基的(甲基)丙烯酸酯共聚物。
7.根据权利要求6的药物剂型，其特征在于(甲基)丙烯酸酯共聚物由20-30wt％甲基丙烯酸甲酯、20-30wt％甲基丙烯酸丁酯和60-40wt％甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯形成的经自由基聚合的单元构成。
8.根据权利要求4的药物剂型，其特征在于纳米颗粒中所含的核酸活性成分以与阳离子和阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物形成的配合物形式存在。
9.根据权利要求8的药物剂型，其特征在于阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物含有5至60wt％的含阴离子基团的单体。
10.根据权利要求8的药物剂型，其特征在于存在阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物，其由如下物质构成：
20至33wt％甲基丙烯酸和/或丙烯酸，
5至30wt％丙烯酸甲酯和
20至40wt％丙烯酸乙酯和
大于10至30wt％甲基丙烯酸丁酯和
非必要的
0至10wt％能够进行乙烯基共聚的其它单体，
其中单体的比例合计为100wt％，条件是根据ISO 11357-2，细目3.3.3的共聚物玻璃化转变温度，即中点温度Tmg，为55至70℃。
11.根据权利要求4的药物剂型，其特征在于纳米颗粒包含平均分子量Mw为50000或更低的阳离子或阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物。
12.根据权利要求1-3中任一项的药物剂型，其特征在于纳米颗粒具有采用平均分子量Mw为50000或更低的阴离子(甲基)丙烯酸酯共聚物的包囊。
13.根据权利要求1-3中任一项的药物剂型，其特征在于核酸活性成分是单链或双链DNA或RNA或DNA-RNA嵌合体，其中可以存在有天然存在和/或非天然存在的合成改性核苷酸。
14.根据权利要求1-3中任一项的药物剂型，其特征在于核酸以与抗体和阳离子物质形成的配合物形式存在，所述抗体与核酸特异性结合。
15.根据权利要求1-3中任一项的药物剂型，其特征在于外部包衣的层厚为20至200微米。
16.根据权利要求1-3中任一项的药物剂型，其特征在于内部基质包含C10至C20脂肪酸和/或C10至C20醇，包括它们的盐、醚、酯或酰胺衍生物，和/或脂质和/或脂质可溶性维生素和/或促渗剂。
17.根据权利要求16的药物剂型，其特征在于所述脂质是磷脂。
18.根据权利要求1-3中任一项的药物剂型，其特征在于，所述具有粘膜粘附作用的聚合物是羧甲基纤维素钠。
19.根据权利要求1的药物剂型，其特征在于内部基质包含壳聚糖作为具有粘膜粘附作用的聚合物，其与在基质中或在其上涂覆有基质的芯体中或在该芯体上存在的酸或缓冲体系一起使用。
20.根据权利要求19的药物剂型，其特征在于内部基质层包含壳聚糖并用酸或缓冲体系调节至pH 5.0至5.5，并与在pH 6.0至8.0的范围中开始溶解的外部成膜化包衣组合。
21.根据权利要求1-3中任一项的药物剂型，其特征在于在含活性成分的基质层和外部成膜化包衣层之间施加隔离层。
22.制备根据权利要求1至21任一项的多颗粒状药物剂型的方法，其通过下列步骤进行：
a)以本身已知的方式将核酸活性成分与辅料一起配制成纳米颗粒，
b)通过喷涂到芯体上或在无芯体时通过旋转团聚、沉淀或喷雾法，配制包含纳米颗粒形式的核酸活性成分和具有粘膜粘附作用的聚合物并非必要地包含其它制药常用辅料的内部基质层，以形成预制丸粒，并随后
c)通过喷涂将外部成膜化包衣施涂到预制丸粒上，其中包衣基本上由任选与制药常用辅料一起配制的阴离子聚合物构成，从而获得含活性成分的包覆丸粒，和
d)借助制药常用辅料并通过本身已知的方式，将所得丸粒加工成多颗粒状药物剂型，其被配制使得所含丸粒在胃的pH范围内被释放。
23.根据权利要求22的方法，其特征在于，步骤c)中所述制药常用辅料为增塑剂。
24.根据权利要求22的方法，其特征在于，所述多颗粒状药物剂型为含丸粒的片剂、囊剂或重构用粉末。
25.根据权利要求24的方法，其特征在于，所述片剂是微型片剂。
26.根据权利要求22的方法，其特征在于，所述多颗粒状药物剂型为含丸粒的胶囊。
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