CN101041620A

CN101041620A - 丹参丹酚酸a的制备方法

Info

Publication number: CN101041620A
Application number: CN 200610165779
Authority: CN
Inventors: 黎豫杭; 柴建国; 张善飞; 潘迎锋; 张建兵
Original assignee: ZHENGDA QINGCHUNBAO PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: ZHENGDA QINGCHUNBAO PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2006-07-13
Filing date: 2006-12-18
Publication date: 2007-09-26
Anticipated expiration: 2026-12-18
Also published as: CN100567249C

Abstract

本发明公开了一种丹参丹酚酸A的制备方法。将丹参药材用水或醇提取。初步除去固体杂质，柱色谱纯化丹酚酸A，浓缩洗脱液，再经调pH值有机溶剂萃取，浓缩干燥，即得丹酚酸A。用本发明方法制备丹酚酸A提取率高，纯度好，提取物中丹酚酸A含量可达90％以上，且质量稳定，可大规模生产。

Description

丹参丹酚酸A的制备方法

技术领域

本发明涉及一种丹参丹酚酸A的制备方法，丹酚酸A的结构如下：

技术背景

丹参是最常用的药材之一，用于治疗心绞痛、高血压、冠心病和中风等心脑血管疾病。但一般用的都是从丹参中提取的粗提物或直接用丹参饮片。近二十多年，丹参的主要活性成分丹酚酸类化合物陆续被发现。体外实验结果显示，丹酚酸类化合物除了用于治疗心脑血管疾病，还可治疗多种疾病，如肝病、肾病、消化溃疡、肿瘤等。丹参总酚酸中以丹酚酸B含量最高，因此，人们开发的重点集中于丹酚酸B，而含量较低而活性较强的丹酚酸A被人们忽略。

杜冠华等人对丹酚酸A的活性进行了大量研究，发现丹酚酸A对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用，对小鼠脑缺血再灌注引起的脑损伤有保护作用，对樟柳碱或东莨菪碱引起的小鼠记忆获得障碍具有明显的改善作用，对大鼠半乳糖性白内障形成有抑制作用，因此在心脑血管方向有良好的疗效。

中国专利CN1397276A，2003年公开了水或醇提、树脂层析，再经硅胶柱层析的纯化制备丹酚酸A的方法。中国专利CN1513848A，2004年公开了采用水温浸、离心、超滤、调酸、有机溶剂萃取再经反相柱层析制备丹酚酸A的方法。

由于丹酚酸A在药材中含量低，甚至没有，因此丹酚酸A产率低，生产成本高，在工业大生产上有一定的局限性，实际上并不能从根本上解决丹酚酸A的工业生产问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的缺陷，提供一种丹酚酸A的制备方法。

本发明丹参丹酚酸A的制备方法，其工艺步骤为：

1、提取

在水或乙醇水溶液作为提取溶剂时，温浸温度为50～99℃，采用乙醇水溶液作为提取溶剂时浓度为10％～95％。提取的方法可以采用回流法、温浸法。现以乙醇回流提取的方法为例进行说明。

丹参粗粉，加10倍量60％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，滤过。

合并提取液，采用过滤，自然沉淀或离心的方法，初步除去提取液中固体杂质。

2、柱层析纯化丹酚酸A

(1)采用特选填料制备色谱柱；

(2)色谱柱活化；

(3)溶液经色谱柱吸附，用水、稀醇水溶液或丙酮-水溶液洗脱，除去杂质；

(4)用适当浓度的醇水溶液或丙酮-水溶液或乙腈-水溶液洗脱，减压或常压浓缩至洗脱液无有机溶剂

在上述步骤(1)中，特选填料是大孔树脂类、离子交换树脂、MCI-GELCHP-20P、Sephadex LH-20凝胶、或C18、C8键合相等色谱柱填料，推荐方案为用非极性或弱极性的大孔树脂做色谱柱填料，优选为聚苯乙烯骨架大孔树脂。

上述步骤(2)中色谱柱活化的方法可用丙酮、甲醇、乙腈或其他有机溶剂与水的混合物，也可用碱-水溶液，或碱醇溶液活化。

上述步骤(3)中，洗脱用水可含微量的酸或无机盐。

上述步骤(3)中，可以单用水洗脱杂质或单用稀醇水溶液或低浓度的丙酮-水溶剂洗脱杂质，也可先用水洗脱然后再用稀醇水溶液或低浓度的丙酮-水溶液洗脱杂质。

上述步骤(3)中，稀醇水溶液等溶剂可以为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等醇的水溶液，也可采用乙腈的水溶液，或它们的混合物。

上述步骤(3)中，稀醇水溶液等溶剂的浓度一般在40％以下，最好用20-30％的浓度，低浓度的丙酮-水溶液常用的丙酮含量一般在50％以下，最好为10-30％的浓度。

上述步骤(4)中，适当浓度的丙酮-水、醇水溶液或乙腈-水溶液中，有机相所占比例一般大于20％，最好用35％～60％的浓度。所述醇水溶液等溶剂可以为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等醇的水溶液，或它们的混合物。

3、调PH值有机溶剂萃取

将如上溶液用酸或碱调PH值至2～7，经有机溶剂萃取，然后分离有机溶剂得含高含量丹酚酸A溶液。优选PH值范围为3～5。有机溶剂优选为乙酸酯类，可以是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯等乙酸酯类溶剂，或它们的混合物。

4、干燥

萃取液的干燥可采用一步法，也可采用两步法。两步法为先在常压或减压条件下浓缩，然后采用真空干燥或冷冻干燥等方法干燥。一步法采用减压浓缩干燥得到丹酚酸A成品。

本发明丹参丹酚酸A的制备方法，用水或醇提取，主要是把丹参酚酸类化合物提取完全，是丹酚酸A产率提高的基础。柱层析时由于在洗脱去杂质的过程采用水和低浓度醇溶剂，使提取液中的杂质得到进一步除去。在丹酚酸A的洗脱过程中，由于采用适当浓度的有机溶剂-水溶液，使丹酚酸A与其它成分得到较好分离；经过柱层析后，还有少量杂质存在，经过调节PH值有机溶剂萃取，最终制得了纯度较高的丹酚酸A。最终提取物得量达3‰以上，丹酚酸A含量达到90％以上，且质量稳定、工艺成熟、可以大规模生产。与其它丹酚酸A的制备方法相比，产率大大提高，成本降低。对于提高丹参疗效，充分利用中药材资源等具有很重要的意义。

具体实施例

下面结合具体实施例，对本发明及一步详细说明

实施例一：丹酚酸A的制备方法，其工艺步骤为：

1、水提取(温浸法)：丹参粗粉，加8倍量水80℃温浸3次，每次1.0小时，滤过。

2、柱层析纯化丹酚酸A：合并滤液离心(4000转/分钟)10分钟，取上清液过1400大孔吸附树脂柱，先用水洗至糖检测反应为阴性，改用20％乙醇洗脱至FeCl₃反应为阴性。

3、再用40％乙醇洗脱至FeCl₃反应为阴性，收集洗脱液，60℃减压浓缩至无醇味。

4、调PH值，有机溶剂萃取：加盐酸调节PH值至3～5，用药液1.5倍量体积的乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯相。

5、浓缩干燥：减压浓缩萃取液至浸膏状，60℃真空干燥6小时，得淡黄色粉末，即为丹参丹酚酸A。

实施例二：与实施例一基本相同，所不同的是提取过程为60％乙醇水溶液回流提取。具体方法如下：

实施例三：与实施例一基本相同，所不同的是提取液离心后采用过滤初步除去固体杂质。

实施例四：与实施例一基本相同，所不同的是实施例一中的工艺步骤2中，直接用10％乙醇水溶液洗脱，除去杂质。

实施例五：与实施例一基本相同，所不同的是实施例一中的工艺步骤3中，用80％乙醇水溶液洗脱丹酚酸A。

实施例六：与实施例一基本相同，所不同的是浓缩洗脱液时采用常压浓缩。

实施例七：与实施例一基本相同，所不同的是调PH值有机溶剂萃取时调PH值至2～3。

实施例八：与实施例一基本相同，所不同的是调PH值有机溶剂萃取时采用的有机溶剂为乙酸丁酯。

实施例九：与实施例一基本相同，所不同的是浓缩干燥采用一步法直接减压浓缩干燥得到丹酚酸A成品。

实施例十：与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的是甲醇水溶液。

实施例十一：与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的是丙酮-水溶液。

实施例十二：与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的是乙腈水溶液。

实施例十三：与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的MCI-GEL CHP-20P作色谱柱填料。

实施例十四：与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用C18键合相作色谱柱填料。

实施例十五：与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的C8键合相作色谱柱填料。

实施例十六：与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的Sephadex LH-20作色谱柱填料。

本发明所要求保护的具体技术方案，不限于上述实施例(具体试验结果见下页附表1)所表达的技术方案的具体组合。

附表1

产品序号	丹酚酸A含量
产品序号	丹酚酸A含量	实施例一产品	96.3％
实施例二产品	97.3％	实施例一产品	96.3％
实施例二产品	97.3％	实施例三产品	94.5％
实施例四产品	94.5％	实施例三产品	94.5％
实施例四产品	94.5％	实施例五产品	97.8％
实施例六产品	96.1％	实施例五产品	97.8％
实施例六产品	96.1％	实施例七产品	97.5％
实施例八产品	96.9％	实施例七产品	97.5％
实施例八产品	96.9％	实施例九产品	97.0％
实施例十产品	97.0％	实施例九产品	97.0％
实施例十产品	97.0％	实施例十一产品	96.8％
实施例十二产品	96.0％	实施例十一产品	96.8％
实施例十二产品	96.0％	实施例十三产品	97.8％
实施例十四产品	97.2％	实施例十三产品	97.8％
实施例十四产品	97.2％	实施例十五产品	97.8％
实施例十六产品	96.9％	实施例十五产品	97.8％

附图说明

使用仪器类型：高效液相色谱仪梯度方法：恒流

检测器：紫外检测器仪器型号：Agilent 1100

检测波长：285nm

柱型号：Kromasil KR100-7C18柱(250×4.6mm)

积分方法：面积归一法

图1实施例四产品高效液相含量测定图

图2实施例六产品高效液相含量测定图

图3实施例八产品高效液相含量测定图

图4实施例十六产品高效液相含量测定图

Claims

1、一种丹参丹酚酸A的制备方法，其工艺步骤为：

步骤一、提取

提取为将丹参饮片或粉碎的丹参采用水或浓度10-95％的乙醇作为提取溶剂，采用温浸、回流法提取，采用过滤、自然沉淀或离心方法初步除去固体杂质。

步骤二、柱层析纯化丹酚酸A

(1)采用填料制备色谱柱；

(2)色谱柱活化；

(3)溶液经色谱柱吸附，用水、40％以下浓度的稀醇水溶液或50％以下浓度的丙酮水溶液洗脱，除去杂质。

(4)再用有机相占比例大于20％的醇水溶液或丙酮-水溶液或乙腈-水溶液洗脱，减压或常压浓缩至洗脱液无有机溶剂。

步骤三、调PH值有机溶剂萃取

将如上溶液用酸或碱调PH值至2～7，经有机溶剂萃取，然后分离有机溶剂得高含量丹酚酸A溶液。

步骤四、浓缩干燥。浓缩采用减压浓缩或常压浓缩，干燥采用真空干燥或冷冻干燥。

2、权利要求1所述的丹参丹酚酸A的制备方法，其特征是：水或乙醇水溶液作为提取溶剂时，温浸温度为50～99℃。

3、权利要求1所述的丹参丹酚酸A的制备方法，步骤二柱层析纯化丹酚酸A(1)采用填料制各色谱柱，所采用的用于制备色谱柱的填料是大孔树脂类、离子交换树脂、MCI-GEL CHP-20P、Sephadex LH-20凝胶、或C18、C8键合相色谱柱填料。

4、权利要求1所述的丹参丹酚酸A的制备方法，步骤二柱层析纯化丹酚酸A(1)采用填料制备色谱柱，采用的填料为非极性或弱极性的大孔树脂。

5、权利要求3或权利要求4所述的丹参丹酚酸A的制备方法，所选用的是聚苯乙烯骨架的大孔树脂。

6、权利要求1所述的丹参丹酚酸A的制备方法，步骤三调PH值有机溶剂萃取中，PH值范围为3～5，有机溶剂为乙酸酯类。

7、权利要求6所述的丹参丹酚酸A的制备方法，乙酸酯类是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯或它们的混合物。

8、权利要求1所述的丹参丹酚酸A的制备方法，步骤二中所述的稀醇水溶液或醇水溶液指的是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇的水溶液，或它们的混合物。

9、权利要求1所述的丹参丹酚酸A的制备方法，步骤二(3)中的稀醇水溶液和丙酮水溶液是：稀醇水溶液20-30％的浓度；丙酮水溶液10-30％的浓度。

10、权利要求1所述的丹参丹酚酸A的制备方法，步骤二(4)中的丙酮-水、醇水溶液或乙腈-水溶液中，有机相浓度为35～60％。