CN101721468B - 一种丹参总酚酸制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种丹参总酚酸的制备方法，包括如下步骤：(1)丹参用含水低级醇提取；(2)提取液上聚酰胺或大孔树脂柱分离；(3)所得洗脱液用大孔吸附树脂或聚酰胺柱分离。采用本发明的制备方法丹酚酸B的转移率高，一般可达50～70％；有效成分损失少，得到的产品质量好，总酚酸含量≥80％，丹酚酸B的含量≥50％，疗效确切。本发明还公开了其药剂学上所说的制剂，及其制药用途。

Description

一种丹参总酚酸制备方法

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种丹参总酚酸制备方法。

背景技术

丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bunge的干燥根茎，是我国传统医学中应用最早且最为广泛的药物之一，经过长期的临床应用和现代医学研究，对其临床效果、药理作用有了全面的认识。传统中医药理论认为丹参能活血祛瘀；调经止痛；养血安神；凉血消痈，主治妇女月经不调；痛经；经闭；产后瘀滞腹痛；心腹疼痛；癥瘕积聚；热痹肿痛；跌打损伤；热入营血；烦躁不安；心烦失眠；痈疮肿毒。现代药理学研究表明，丹参具有脑缺血保护、改善冠脉血流量及微循环、促进组织修复、抗血小板聚集、抗肿瘤、抗炎抑菌等功效，临床上主要用于冠心病冠心病、急性心肌梗塞、脑梗塞、慢性肝炎等病。近年来研究还发现，丹参对失眠、慢性肝炎、肿瘤和消化道溃疡等病症也有一定疗效。(中国专利，申请号200710111232.4，申请日2007.6.18)。

丹参中的有效成分包括脂溶性成分和水溶性成分。脂溶性成分是以丹参酮为代表的醌类化合物，具有良好的抗炎作用；水溶性成份主要有丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、咖啡酸、丹酚酸(A、B)，总称为总酚酸，也有报道称为丹参多酚酸盐或丹参多酚酸。丹参总酚酸具有明显的抗血栓形成、溶纤和抗脂质过氧化等作用，是治疗心肌缺血、心绞痛、心肌梗死等心血管疾病的有效成分，其中丹酚酸B的含量最高，而且是其主要的活性成分。(丹参中总酚酸的分离纯化工艺研究，杨小宁等，中草药，2007，38(6)：843-846)。

丹参总酚酸的提取方法多为先用水提取，再用乙醇沉淀，大孔树脂纯化的方法，醇沉效率低、损失大(王志平等，丹参提取液的树脂吸附及醇沉工艺对比研究，离子交换与吸附，2003，19(6)：554-560)。杨小宁等对原有水提醇沉工艺进行了优化和改进，但因丹酚酸的稳定性差，水提取丹酚酸B的转移率低，而且总酚酸和丹酚酸B的含量均比较低，分别为51.62％和30.97％(丹参中总酚酸的分离纯化工艺研究，杨小宁等，中草药，2007，38(6)：843-846)。

发明内容

为了解决上述问题，本发明在不增加成本的基础上提供了一种丹参总酚酸的制备方法，采用该方法丹酚酸B转移率高，产品中总酚酸和丹酚酸B的含量高、质量好、易于产业化。

本发明的另一目的是提供以上述方法得到的丹参总酚酸。

本发明的又一个目的是提供以丹参总酚酸为活性成分的药物组合物。

本发明的再一个目的是提供丹参总酚酸的应用。

本发明基本包括以下步骤：

(a)丹参用含水低级醇提取；

(b)提取液上聚酰胺或大孔树脂柱分离；

(c)当步骤(b)采用聚酰胺柱分离时，所得洗脱液用大孔吸附树脂分离；当步骤(b)采用大孔吸附树脂分离时，所得洗脱液用聚酰胺柱分离。

本发明进一步通过下述技术方案实现：

(1)丹参去除杂质，粉碎或制成饮片，用含水低级醇提取；

(2)步骤(1)所得提取液上聚酰胺柱或大孔树脂柱，用重量百分比浓度为0～50％的含水低级醇ii冲洗，再用重量百分比浓度为40～95％的含水低级醇II或弱碱水溶液洗脱，收集洗脱液；对于同一次分离过程，含水低级醇ii浓度小于含水低级醇II。

(3)洗脱液上大孔吸附树脂或聚酰胺柱，先用重量百分比浓度为0～50％的含水低级醇iii冲洗，再用重量百分比浓度为40～100％的含水低级醇III洗脱或弱碱水溶液洗脱，收集洗脱液；对于同一次分离过程，含水低级醇iii浓度小于含水低级醇III。

(4)洗脱液浓缩，干燥，即得丹参总酚酸。

步骤(1)低级醇为C₁～C₄的直链或支链饱和烷基醇，包括甲醇(CH₃OH)、乙醇(CH₃CH₂OH)、正丙醇[CH₃(CH₂)OH]、异丙醇[(CH₃)₂CHOH]、CH₃(CH₂)₃OH、(CH₃)₂CH₂CHOH、CH₃CH₂CH(CH₃)OH、(CH3)₃COH；优选甲醇、乙醇、异丙醇；进一步优选甲醇、乙醇；最优选乙醇。含水低级醇重量百分比浓度为0～90％，优选为30～85％，最优选为50～80％。

提取的方法包括回流提取、煎煮、浸渍、渗漉、逆流萃取等本领域常规的提取方法，但不限于此。提取的具体参数，如提取液用量、时间、温度等，本领域人员可以根据本领域的常识和现有技术确定，无需创造性劳动。有关的名词术语参见(中药提取方法研究进展，赵孟春等，猪业科学，2007，2，32-33)。

由于提取液中可能会存在有色杂质，更好的，在进行步骤(2)之前，可以将提取液通过离子交换树脂，以除去色素。

步骤(2)中，由步骤(1)提取所得到的提取液可以直接上聚酰胺柱或大孔树脂柱进行分离，也可以先浓缩后再上聚酰胺柱或大孔树脂柱进行分离；更好的，在上柱分离前可以将提取液或浓缩液调pH值至5以下，优选为1.0～4.0，调节pH值可以采用常用的无机酸，如盐酸、硫酸等。所述含水低级醇ii的重量百分比浓度优选为0～40％，含水低级醇II重量百分比浓度优选为50～95％；弱碱优选为碳酸氢钠，弱碱水溶液重量百分比浓度为0.001％-2％，优选为0.01％-0.5％碳酸氢钠水溶液。

步骤(3)中，步骤(2)所得洗脱液可以直接上聚酰胺柱或大孔树脂柱进行分离，也可以先浓缩后再上聚酰胺柱或大孔树脂柱进行分离；更好的，在上柱分离前可以将洗脱液或浓缩液调pH值至5以下，优选为1.0～4.0，调节pH值可以采用常用的无机酸，如盐酸、硫酸等。所述含水低级醇iii的重量百分比浓度优选为0～40％，含水低级醇III重量百分比浓度优选为50～95％；弱碱优选为碳酸氢钠，弱碱水溶液重量百分比浓度为0.001％-2％，优选为0.01％-0.5％碳酸氢钠水溶液。

步骤(2)或(3)中所述的大孔吸附树脂可以是非极性、弱极性、中等极性、弱酸性或弱碱等任意一种类型，如D101、D4020、HPD400、AB-8、S-8、HZ-806等，优选弱极性或中等极性的树脂，如AB-8、HPD400、D101，最优选苯乙烯型，如AB-8型树脂；所述的聚酰胺材料为己内酰胺(尼龙-6)。采用聚酰胺柱或大孔吸附树脂柱分离时的参数，如上样量、洗脱速度、柱的径高比等，本领域人员可以根据本领域的常识和现有技术确定，无需创造性劳动。

依本发明方法制得的丹参总酚酸作为药物活性成分，可以加入药学上可接受的辅料制成任何一种药剂学上所说的药物组合物，也可以加入其他药物一起制成复合制剂。

本发明的药物组合物，是单位剂量的药物制剂形式，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，胶囊的每粒胶囊，口服液的每瓶，颗粒剂每袋等。

本发明的组合物其中的有效组分，其在制剂中所占重量百分比可以是0.1-99.9％，其余为药物可接受的载体。

本发明的组合物，通过将上述有效组分和药物可接受的载体混合制备得到。

本发明的组合物，其药物制剂形式可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。本发明的制剂，优选的是口服剂型，如：胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等；和注射剂，如：粉针剂、注射液、输液等。

本发明的组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。

适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。

可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。

口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。

对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。

本发明的组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β—环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。

本发明的组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量，可每日服三次，每次1-20剂，如：1-20袋或粒或片。

由于丹参总酚酸为丹参中的水溶性成分，所以本领域的技术人员多采用传统的水提醇沉方法，有效成分损失大。但是因丹酚酸的稳定性差，水提取丹酚酸B的转移率低，最高仅有35％，而且杂质含量高。本发明人通过大量的研究发现，采用一定浓度的含水C₁～C₄低级醇进行提取，丹酚酸B的转移率明显提高，一般可达50～70％(采用75％甲醇则高达95％以上)，同时HPLC显示提取液中丹参总酚酸的杂峰明显减少。所以采用本发明制备方法，有效成分损失少，得到的产品质量好，总酚酸含量≥80％，丹酚酸B的含量≥50％，疗效确切。同时由于聚酰胺柱层析和大孔树脂是生产中比较常用的分离手段，而且可以使产品得到有效的分离，所以相对于其他分离方法，不会增加成本。

采用本发明方法制得的丹参总酚酸，可应用于制备治疗以下疾病的药物，即心脑血管疾病、肾病、肝病、肺炎、肺心病、胰腺炎、糖尿病、颈椎病、眼底血管性疾病、眼底神经性疾病、偏头痛、慢性胃炎、眩晕、骨伤性疾病、高原疾病、老年痴呆等。

下面以按照实施例1的方法制备的丹参总酚酸为例，考察其对大鼠中脑动脉血栓的影响。

试验例：丹酚酸对大鼠中脑动脉血栓影响的实验研究

受试药物：丹参总酚酸，天津天士力之骄药业，用生理盐水配成所需浓度；复方丹参注射液，北京第四制药厂生产，批号20020101，以生理盐水稀释至所需浓度。

动物：雄性Wistar大鼠，二级，体重240—260g，共64只，由中国医学科学院实验动物中心提供，合格证：医动字第01—3008

实验仪器：SXP型手术显微镜为上海医用光学仪器厂产品；恒温水浴振荡器为江苏省太仓县医疗器械厂生产，SHZ—22型；石蜡切片机为美国AO公司。

试验方法：

1.大鼠大脑中动脉血栓模型

大鼠以12％水合氯醛350mg/kg ip.麻醉后，置于鼠板上，于手术显微镜下延右侧外耳道与眼眦连线中点切开皮肤，暴露出颧弓，用小牵张器将磷状骨和下颌骨间距撑开，于颅底开一1cm×1cm的骨窗，撕开硬脑膜，暴露出右侧位于嗅束和大脑下静脉之间的一段大脑中动脉，置一小片塑料薄膜保护血管周围脑组织，将吸有50％三氯化铁溶液(1mol/L盐酸)10μL的小片定量滤纸(2×2mm)敷在此段大脑中动脉上，30min后取下滤纸，用生理盐水冲洗局部组织，逐层缝合，回笼饲养。术中术后室温均严格控制在24—25℃。

2.动物分组

取Wistar雄性大鼠，随机分为8组，每组动物8只，假手术组(生理盐水)，模型组(生理盐水)，丹酚酸组(丹酚酸3、6、及10mg/kg)及复方丹参注射液组(丹参50、200mg/kg和2000mg/kg)假手术组除在大脑中动脉敷生理盐水外，其余手术操作同模型组。各组在术后30分钟由舌下静脉给药一次，24小时后参照文献方法判断神经症状，然后断头取脑，测定脑梗塞面积。

3.神经症状的评分

手术后24小时对每只动物进行评分，根据其症状严重程度分3级共10分。具体方法如下(表1)：

表1.神经症状评分

根据以上标准，满分为10分，分数越高，说明脑功能障碍越严重。

4.脑梗塞面积的测定

动物经神经症状评分后，断头取脑。剔除嗅脑、低位脑干及小脑，剩余部分在冰上沿冠状面切成厚度基本相同的5片，于37℃TTC染料中温浴30分钟，正常脑组织呈玫瑰红色，梗塞区呈白色。然后将脑片置于10％的甲醛中固定，将白色组织仔细取下称重，以梗塞组织重量占总脑重量的百分比作为梗塞面积。

5.脑组织形态学观察

动物于术后24小时，断头取材，取大脑中动脉血栓形成部位用4％多聚甲醛中固定，乙醇脱水，石蜡包埋，切片7μm，HE染色，光学显微镜下观察。

试验结果：

上述结果用X±S表示，组间比较用t检验。

1.丹酚酸对行为缺陷程度的影响

丹酚酸6、10mg/kg可明显减轻大鼠脑血栓24h后的神经症状，与模型组比较有明显差异(P<0.01，P<0.001)。而复方丹参注射液则无明显作用(P>0.05)。(表2)

表2.丹酚酸对大鼠中动脉血栓模型的大鼠神经症状的影响(n＝8，x±s)

与模型组比较：^**P<0.01，^***P<0.001

2.丹酚酸对脑梗塞范围的影响

如表3所示，丹酚酸6、10mg/kg可明显缩小大鼠脑栓塞24小时后的脑梗塞面积，与模型组比较有显著差异，丹酚酸剂量减至3mg/kg则无明显作用(P>0.05)。复方丹参注射液50、200和2000mg/kg均无明显作用(P>0.05)。(表3)

表3.丹酚酸对大脑中动脉血栓模型的大鼠脑梗塞面积的影响(n＝8，x±s)

与模型组比较：^**P<0.01，^***P<0.001

3.丹酚酸对脑组织形态学变化的影响

模型组大鼠在手术24小时后，肉眼观察病灶大脑中动脉皮层供血区苍白，脑表面血管较对侧充血，受损段大脑中动脉呈暗紫色，丹酚酸组6、10mg/kg大鼠经大脑中动脉血栓形成24小时后，病灶侧脑表面未呈现明显的苍白、无光，受损段大脑中动脉较模型组红润。光镜下观察，模型组大脑中动脉内充满血栓，丹酚酸组6、10mg/kg脉血管内血栓减少，大剂量组作用更为明显。复方丹参注射液各组与模型组比较未见明显差别。

试验结论：

本实验用三氯化铁局部涂抹损伤血管，从脑梗塞范围和行为障碍为观察指标判断，形成了大鼠大脑中动脉血栓模型。丹酚酸6、10mg/kg于术后30分钟静脉注射，可明显缩小脑血栓形成24小时后的脑梗塞范围，改善行为障碍。脑组织病理形态观察中，丹酚酸6，10mg/kg组动物大脑中动脉内血栓减少，大剂量组作用更为明显。复方丹参注射液50、200和2000mg/kg均无明显作用，说明丹酚酸可减轻脑血栓形成所致的脑缺血性损伤。

具体实施方式

下面通过具体的实施方式对本发明作进一步的说明，但不作为对本发明的限制。

丹参总酚酸和丹酚酸B的检测方法：按专利申请文献(中国专利，申请号01142288.2，申请日2001年9月)的方法进行测定。

(1)丹酚酸B：用HPLC法测定，检测波长288nm，标准品丹酚酸B由天津天士力集团现代中药研究所提供，纯度98.0％。

(2)丹参总酚酸：含量＝F(A—B)+B

其中：A为分光光度法测定以丹酚酸B为对照计算的总酚酸含量

B为高效液相色谱法测定的丹酚酸B含量

F为校正因子0.626

实施例1

丹参饮片1000克，7000ml80％乙醇回流提取四次，每次1小时。合并提取液，浓缩到无醇味。浓缩液用10％盐酸调pH值到3.2，离心，上清液通过400克聚酰胺，10000ml水冲洗，0.1％碳酸氢钠10000ml，洗脱，洗脱液10％盐酸调pH值到3.2，通过1000克AB-8大孔树脂，5000ml水冲洗，10000ml60％乙醇洗脱，浓缩乙醇洗脱液，喷雾干燥。得提取物52克，丹酚酸B含量65％、丹参总酚酸86％。

实施例2

丹参饮片1000克，6000ml75％甲醇回流提取四次，每次1小时。合并提取液，浓缩到无醇味。浓缩液调pH值到3.1，离心，上清液通过500克聚酰胺，10000ml水冲洗，80％乙醇20000ml洗脱，洗脱液浓缩到无醇，浓缩液，通过1000克AB-8大孔树脂，5000ml水冲洗，10000ml50％乙醇洗脱，浓缩乙醇洗脱液，冷冻干燥。得提取物48克，丹酚酸B含量60.2％、丹参总酚酸91％。

实施例3

丹参饮片1000克，6000ml水回流提取四次，每次0.5小时。合并提取液，离心，上清液通过500克聚酰胺，12000ml水冲洗，无水乙醇12000ml洗脱，洗脱液浓缩到无醇并加水到约1克药材/ml，浓缩液通过1000克的D101大孔树脂，4000ml水冲洗，8000ml50％乙醇洗脱，浓缩乙醇洗脱液，减压干燥。得提取物30克，丹酚酸B含量58.3％、丹参总酚酸87.5％。

实施例4

丹参饮片1000克，5000ml75％甲醇回流提取三次，每次2小时。合并提取液，浓缩至无醇，过滤，滤液用5％硫酸调pH值3.5后通过300克聚酰胺，12000ml水冲洗，70％甲醇12000ml洗脱，洗脱液浓缩到无醇并加水到约1克药材/ml，浓缩液通过1000克AB-8大孔树脂，4000ml水冲洗，6000ml无水乙醇洗脱，浓缩乙醇洗脱液，减压干燥。得提取物45克，丹酚酸B含量57.8％、丹参总酚酸88.2％。

实施例5

丹参饮片1000克，5000ml30％乙醇回流提取三次，每次1.5小时。合并提取液，过滤，滤液通过500克聚酰胺柱，10000ml30％乙醇冲洗，95％乙醇12000ml洗脱，洗脱液浓缩到无醇并加水到约1克药材/ml，浓缩液通过1000克AB-8大孔树脂，4000ml10％乙醇冲洗，6000ml60％乙醇洗脱，浓缩乙醇洗脱液，喷雾干燥。得提取物41克，丹酚酸B含量71％、丹参总酚酸92％。

实施例6

丹参饮片1000克，6000ml水煮沸提取三次，每次0.5小时。合并提取液，过滤，滤液用10％盐酸调pH值3.5后通过1000克AB-8大孔树脂柱，10000ml水冲洗，50％乙醇10000ml洗脱，洗脱液浓缩到无醇，浓缩液通过500克聚酰胺，12000ml30％乙醇冲洗，12000ml95％乙醇洗脱，浓缩乙醇洗脱液，喷雾干燥。得提取物28克，丹酚酸B含量59％、丹参总酚酸83.1％。

实施例7

丹参饮片1000克，10000ml60％乙醇采用逆流萃取提取。合并提取液，浓缩过滤，滤液用15％盐酸调pH值4.0后通过500克D380聚酰胺柱，10000ml水冲洗，0.1％碳酸氢钠溶液10000ml洗脱，洗脱液用50％磷酸调pH到3.6，通过1000克D101大孔树脂，10000ml水冲洗，12000ml60％乙醇洗脱，浓缩乙醇洗脱液，喷雾干燥。得提取物55克，丹酚酸B含量68.5％、丹参总酚酸87.5％。

实施例8

丹参饮片1000克，10000ml60％乙醇采用逆流萃取提取。合并提取液，浓缩过滤，滤液10％盐酸调pH值4.0后通过500克聚酰胺柱，10000ml20％乙醇冲洗，0.05％碳酸氢钠溶液10000ml洗脱，洗脱液20％盐酸调pH到3.6，通过1000克AB-8大孔树脂，5000ml水冲洗，7000ml40％乙醇溶液洗脱，浓缩洗脱液，干燥。得提取物50克，丹酚酸B含量62.0％、丹参总酚酸86.9％。

实施例9

丹参饮片1000克，5000ml60％乙醇回流提取三次。合并提取液，浓缩至无醇味，过滤，滤液10％盐酸调pH值4.0后通过500克聚酰胺柱，10000ml5％乙醇冲洗，95％乙醇10000ml洗脱，洗脱液浓缩到药液体积与药材重量比1：1，10％盐酸调pH到3.6，通过1000克AB-8大孔树脂，5000ml5％乙醇冲洗，7000ml45％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，干燥。得提取物45克，丹酚酸B含量59.8％、总酚酸86.9％。

实施例10

丹参饮片1000克，5000ml10％乙醇回流提取三次。合并提取液，浓缩至无醇味，过滤，滤液10％盐酸调pH值4.0后通过500克聚酰胺柱，10000ml5％乙醇冲洗，2％碳酸氢钠5000ml洗脱，洗脱液，20％磷酸调pH到2.9，通过1000克AB-8大孔树脂，5000ml5％乙醇冲洗，10000ml40％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，干燥。得提取物45克，丹酚酸B含量57.9％、总酚酸88.9％。

实施例11

丹参饮片1000克，5000ml20％乙醇回流提取三次。合并提取液，通过1000克聚酰胺柱，12000ml20％乙醇冲洗，0.01％碳酸氢钠20000ml洗脱，洗脱液，20％磷酸调pH到2.9，通过1000克ZTC-1大孔树脂，5000ml5％乙醇冲洗，7000ml0.01％碳酸氢钠洗脱，洗脱液20％磷酸调PH值到3.4，浓缩，干燥。得提取物48克，丹酚酸B含量56.2％、总酚酸83.5％。

实施例12冻干粉针

丹参总酚酸提取物200克，甘露醇200克，加注射用水500毫升溶解，加活性碳0.5克，搅拌20分钟，0.45微米微孔滤膜过滤，补加注射用水到2000毫升，分装成1000支，每支2毫升，冷冻干燥、压塞、压盖。

实施例13片剂

处方：

工艺：

1制粒

原料药丹参总酚酸提取物及处方中其它辅料分别过100目筛，称取处方量丹参总酚酸提取物与微晶纤维素、淀粉及羧甲基淀粉钠采用等量递加法混合均匀，用适量PVP无水乙醇溶液制软材，14目筛制粒，50～60℃干燥1小时，加入处方量的硬脂酸镁用14目筛整粒。

2压片

取上述颗粒用特制菱形异型冲模压片。

Claims (11)

1.一种丹参总酚酸的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)丹参用含水低级醇提取；

(2)提取液上聚酰胺或大孔树脂柱分离；

(3)当步骤(2)采用聚酰胺柱分离时，所得洗脱液用大孔吸附树脂分离；当步骤(3)采用大孔吸附树脂分离时，所得洗脱液用聚酰胺柱分离。

所述低级醇为C₁～C₄的直链或支链饱和烷基醇；

步骤(1)中，含水低级醇重量百分比浓度为30～85％；提取方法选自回流提取、煎煮、浸渍、渗漉和逆流萃取；

步骤(2)中还包括提取液上聚酰胺柱或大孔树脂柱，用重量百分比浓度为5～30％的含水低级醇ii冲洗，再用重量百分比浓度为40～95％的含水低级醇II或弱碱水溶液洗脱，收集洗脱液；

步骤(3)中还包括洗脱液上大孔吸附树脂或聚酰胺柱，先用重量百分比浓度为5～40％的含水低级醇iii冲洗，再用重量百分比浓度为40～100％的含水低级醇III洗脱或弱碱水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥。

2.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，

所述的低级醇为甲醇、乙醇或异丙醇；

步骤(2)中含水低级醇II重量百分比浓度为50～95％；弱碱水溶液重量百分比浓度为0.001％-2％；

步骤(3)中含水低级醇III重量百分比浓度为50～95％；弱碱水溶液重量百分比浓度为0.001％-2％。

3.权利要求2所述的制备方法，其特征在于，

所述低级醇为乙醇；

步骤(1)中，含水低级醇重量百分比浓度为50～80％；

步骤(2)或(3)中所述的弱碱水溶液0.01％-0.5％碳酸氢钠水溶液。

4.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的大孔吸附树脂为苯乙烯型，聚酰胺材料为己内酰胺。

5.权利要求1-4任意一项所述的制备方法，其特征在于，

步骤(2)在上柱分离前将提取液调pH值至5以下；

步骤(3)在上柱分离前将洗脱液调pH值至5以下。

6.权利要求5所述的制备方法，其特征在于，

步骤(2)在上柱分离前将提取液调pH值至1.0～4.0；

步骤(3)在上柱分离前将洗脱液调pH值至1.0～4.0。

7.权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)在上柱分离前，将提取液通过离子交换树脂。

8.以权利要求1-7任意一项制备方法制备的丹参总酚酸。

9.权利要求8所述的丹参总酚酸，其特征在于，其中的总酚酸含量≥80％，其中的丹酚酸B的含量≥50％。

10.以权利要求8所述的丹参总酚酸为活性成分，加入药学上可接受的辅料制成的任何一种药剂学上所说的剂型的药物组合物。

11.权利要求8所述的丹参总酚酸在制备治疗以下疾病的药物中的应用，所述疾病包括心脑血管疾病、肾病、肝病、肺炎、肺心病、胰腺炎、糖尿病、颈椎病、眼底血管性疾病、眼底神经性疾病、偏头痛、慢性胃炎、眩晕、骨伤性疾病、高原疾病、老年痴呆。