发明内容
本发明目的在于提供一种药物组合物;本发明另一目的在于提供该药物组合物的制备方法;本发明的第三个目的在于提供该药物组合物的检测方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现:
本发明药物组合物的原料药按重量份组成及配比如下:
三七10-50重量份、苎麻根10-100重量份、浙贝母10-50重量份、冬虫夏草0.2-10重量份、甘草3-30重量份、桔梗10-30重量份。
上述六味原料药按重量份优选组成及配比如下:
三七30重量份、苎麻根30重量份、浙贝母30重量份、冬虫夏草3重量份、甘草9重量份、桔梗20重量份。
上述六味原料药按重量份优选组成及配比如下:
三七45重量份、苎麻根25重量份、浙贝母40重量份、冬虫夏草0.3重量份、甘草25重量份、桔梗15重量份。
上述六味原料药按重量份优选组成及配比如下:
三七15重量份、苎麻根90重量份、浙贝母25重量份、冬虫夏草9重量份、甘草3重量份、桔梗25重量份。
上述六味原料药还可以加入如下重量份的丹参、川芎、人参、郁金由十味原料药制成:丹参20-100重量份、川芎10-50重量份、人参10-50重量份、郁金10-50重量份。优选组成及配比分别为:丹参60重量份、川芎30重量份、人参30重量份、郁金30重量份;丹参30重量份、川芎40重量份、人参40重量份、郁金20重量份;丹参90重量份、川芎20重量份、人参20重量份、郁金40重量份。
上述六味原料药还可以加入如下重量份的法半夏、海蛤壳、蝉衣、牛蒡子、黄芪由十一味原料药制成:
法半夏10-50重量份、海蛤壳30-150重量份、蝉衣5-30重量份、牛蒡子10-100重量份、黄芪10-50重量份。优选组成及配比分别为:法半夏30重量份、海蛤壳90重量份、蝉衣15重量份、牛蒡子60重量份、黄芪30重量份;法半夏20重量份、海蛤壳140重量份、蝉衣25重量份、牛蒡子30重量份、黄芪40重量份;法半夏40重量份、海蛤壳30重量份、蝉衣10重量份、牛蒡子90重量份、黄芪20重量份。
取上述组合物原料药,加入常规辅料,按照常规工艺,制成临床接受的浓缩丸剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂等。
本发明药物组合物(十一味原料药)制备方法任选如下一种:
A、三七与冬虫夏草粉碎成细粉,过筛,混匀;浙贝母加40-95%乙醇回流提取1-4次,每次0.5-3小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-70℃下相对密度1.01~1.30的清膏;海蛤壳加水2-30倍,煎10-120分钟后加入法半夏、桔梗、蝉衣、牛蒡子、黄芪、苎麻根、甘草一起煎煮,煎煮1-4次,每次0.5-3小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至40-70℃下相对密度为1.01~1.25的清膏,放冷,加乙醇使含醇量为10-90%,静置24小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-60℃下相对密度为1.01~1.30的清膏;上述两种清膏经常规减压或喷雾干燥处理,制成细粉,与上述细粉混匀,即得混合药粉;混合药粉加入常规辅料,经常规方法,制成临床接受的制剂;
B、冬虫夏草粉碎成细粉,过筛,混匀;三七与浙贝母加40-95%乙醇回流提取1-4次,每次0.5-3小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-70℃下相对密度1.01~1.30的清膏;海蛤壳加水2-30倍,煎10-120分钟后加入法半夏、桔梗、蝉衣、牛蒡子、黄芪、苎麻根、甘草一起煎煮,煎煮1-4次,每次0.5-3小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至40-70℃下相对密度为1.01~1.25的清膏,放冷,加乙醇使含醇量为10-90%,静置24小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-60℃下相对密度为1.01~1.30的清膏;上述两种清膏经常规减压或喷雾干燥处理,制成细粉,与上述细粉混匀,即得混合药粉;混合药粉加入常规辅料,经常规方法,制成临床接受的制剂。
本发明药物组合物(十一味原料药)制备方法优选如下一种:
A、三七与冬虫夏草粉碎成细粉,过筛,混匀;浙贝母加70%乙醇回流提取3次,每次1.5小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-70℃下相对密度1.15的清膏;海蛤壳加水16倍,煎30分钟后加入法半夏、桔梗、蝉衣、牛蒡子、黄芪、苎麻根、甘草一起煎煮,煎煮3次,每次1.5小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至40-70℃下相对密度为1.13的清膏,放冷,加乙醇使含醇量为50%,静置24小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-60℃下相对密度为1.15的清膏;上述两种清膏经常规减压或喷雾干燥处理,制成细粉,与上述细粉混匀,即得混合药粉;混合药粉加入常规辅料,经常规方法,制成临床接受的口服固体制剂;
B、冬虫夏草粉碎成细粉,过筛,混匀;三七与浙贝母加70%乙醇回流提取3次,每次1.5小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-70℃下相对密度1.15的清膏;海蛤壳加水16倍,煎30分钟后加入法半夏、桔梗、蝉衣、牛蒡子、黄芪、苎麻根、甘草一起煎煮,煎煮3次,每次1.5小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至40-70℃下相对密度为1.13的清膏,放冷,加乙醇使含醇量为50%,静置24小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-60℃下相对密度为1.15的清膏;上述两种清膏经常规减压或喷雾干燥处理,制成细粉,与上述细粉混匀,即得混合药粉;混合药粉加入常规辅料,经常规方法,制成临床接受的口服固体制剂。
本发明药物组合物(十味原料药)制备方法任选如下一种:
A、三七、人参、冬虫夏草粉碎成细粉,过筛,混匀;丹参、浙贝母加40-95%乙醇回流提取1-4次,每次0.5-3小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-70℃下相对密度1.01-1.30的清膏;川芎、郁金加水6-20倍,采用常规水蒸气蒸馏的方法提取挥发油,挥发油另存备用,药液滤过浓缩成清膏,药渣与桔梗、苎麻根、甘草加水煎煮1-4次,每次0.5-3小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至40-70℃下相对密度为1.01-1.25的清膏,放冷,加乙醇使含醇量为10-90%,静置24小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-60℃下相对密度为1.01-1.30的清膏;上述两种清膏经常规减压或喷雾干燥处理,与上述细粉混匀,即得混合药粉;混合药粉加入常规辅料,经常规方法,制成临床接受的制剂;
B、冬虫夏草粉碎成细粉,过筛,混匀;三七、人参、丹参、浙贝母加40-95%乙醇回流提取1-4次,每次0.5-3小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-70℃下相对密度1.01-1.30的清膏;川芎、郁金加水6-20倍,采用常规水蒸气蒸馏的方法提取挥发油,挥发油另存备用,药液滤过浓缩成清膏,药渣与桔梗、苎麻根、甘草加水煎煮1-4次,每次0.5-3小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至40-70℃下相对密度为1.01-1.25的清膏,放冷,加乙醇使含醇量为10-90%,静置24小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-60℃下相对密度为1.01-1.30的清膏;上述两种清膏经常规减压或喷雾干燥处理,与上述细粉混匀,即得混合药粉;混合药粉加入常规辅料,经常规方法,制成临床接受的制剂。
本发明药物组合物(十味原料药)制备方法优选如下一种:
A、三七、人参、冬虫夏草粉碎成细粉,过筛,混匀;丹参、浙贝母加40-95%乙醇回流提取3次,每次1.5小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-70℃下相对密度1.15的清膏;川芎、郁金加水15倍,采用常规水蒸气蒸馏的方法提取挥发油,挥发油另存备用,药液滤过浓缩成清膏,药渣与桔梗、苎麻根、甘草加水煎煮3次,每次1.5小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至40-70℃下相对密度为1.13的清膏,放冷,加乙醇使含醇量为10-90%,静置24小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-60℃下相对密度为1.15的清膏;上述两种清膏经常规减压或喷雾干燥处理,与上述细粉混匀,即得混合药粉;混合药粉加入常规辅料,经常规方法,制成临床接受的口服固体制剂;
B、冬虫夏草粉碎成细粉,过筛,混匀;三七、人参、丹参、浙贝母加40-95%乙醇回流提取3次,每次1.5小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-70℃下相对密度1.15的清膏;川芎、郁金加水15倍,采用常规水蒸气蒸馏的方法提取挥发油,挥发油另存备用,药液滤过浓缩成清膏,药渣与桔梗、苎麻根、甘草加水煎煮3次,每次1.5小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至40-70℃下相对密度为1.13的清膏,放冷,加乙醇使含醇量为10-90%,静置24小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-60℃下相对密度为1.15的清膏;上述两种清膏经常规减压或喷雾干燥处理,与上述细粉混匀,即得混合药粉;混合药粉加入常规辅料,经常规方法,制成临床接受的口服固体制剂。
本发明药物组合物质量控制方法包括如下鉴别和/或含量测定:
上述含量测定如下:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基键合硅胶为填充剂;以乙腈和水为流动相,梯度洗脱方式为0-12分钟,乙腈∶水=19∶81;12-60分钟,乙腈∶水=19-36∶81-64;检测波长为203nm;理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于4000;
对照品溶液的制备:精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品和三七皂苷R1对照品适量,加甲醇制成对照品溶液;
供试品溶液的制备:取按上述处方和制法制备的本发明药物组合物制剂,精密称定,精密加入甲醇50ml称定重量,放置过夜,置80℃水浴上保持微沸2小时,防冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul,注入液相色谱仪,测定,即得;本发明药物组合物制剂按干燥品计算,含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1三者的总量为0.01-50%。
上述含量测定优选如下:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基键合硅胶为填充剂;以乙腈和水为流动相,梯度洗脱方式为0-12分钟,乙腈∶水=19∶81;12-60分钟,乙腈∶水=28∶73;检测波长为203nm;理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于4000;
对照品溶液的制备:精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品和三七皂苷R1对照品适量,加甲醇制成对照品溶液;
供试品溶液的制备:取按上述处方和制法制备的本发明药物组合物制剂,精密称定,精密加入甲醇50ml称定重量,放置过夜,置80℃水浴上保持微沸2小时,防冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul,注入液相色谱仪,测定,即得;本发明药物组合物制剂按干燥品计算,含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1三者的总量为4%。
上述鉴别方法包括如下一种或几种:
A、三七薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取1g,,加水5滴,搅匀,再加以水饱和正丁醇10ml,密塞,振摇约10分钟,放置2小时,滤过,滤液加以正丁醇饱和的水25ml,摇匀,放置使分层;取正丁醇层,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇溶解,使成1ml,作为供试品溶液;
另取人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1对照品,加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液0.5μl,对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5-25∶20-60∶10-30∶5-15比例的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
B、苎麻根薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取20g,加水100ml超声提取15分钟,滤过,滤液用氯仿萃取3次,每次15ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加无水乙醇溶解,使成0.5ml,作为供试品溶液;
另取对照药材6g,加水100ml,煎煮30分钟,滤过,滤液用氯仿萃取3次,每次15ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加无水乙醇溶解,使成使成0.5ml,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照药材溶液1μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5-15∶0.5-5∶0.1-1.0比例的石油醚-乙酸乙酯-丁酮溶液为展开剂,展距8cm,展开,晾干,在紫外灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
C、浙贝母薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取10g,加80%乙醇30ml,加热回流1小时,滤过,滤液置分液漏斗中,用氨水调至碱性,用氯仿萃取2次,每次10ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加无水乙醇溶解使成0.5ml,作为供试品溶液;
另取贝母素甲对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液5~10μl,对照品溶液4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以1-10∶2-6∶0.5-1.5比例的甲苯-乙酸乙酯-二乙胺溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾溶液,至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D、甘草薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取1~5g,加甲醇20~150ml,加热回流1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水30ml使溶解,取用水饱和的正丁醇萃取3次,每次15ml,合并正丁醇液,再取用正丁醇饱和的水洗涤3次,每次10ml,蒸干,残渣加甲醇溶解,使成2ml,作为供试品溶液;
另取甘草对照药材1g,同上法制备,使成1ml,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液1μl,对照药材溶液2μl,分别点于同一1%氢氧化钠硅胶G薄层板上,以5-25∶0.1-5∶0.1-5∶1-3比例的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E、桔梗薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取5~25g,加1∶3比例的7%硫酸乙醇-水混合液20~250ml,加热回流3小时,放冷,用三氯甲烷振摇提取2次,每次20ml,合并三氯甲烷,加水30ml洗涤,弃去洗液,三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水,滤过,滤液蒸干,残渣甲醇溶解,作为供试品溶液;
另取桔梗对照药材,同法制备成对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品和对照药材溶液1~15μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以0.1-5∶0.1-5比例的三氯甲烷-乙醚溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
F、丹参薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取5g,加乙醚20ml,超声处理5~10分钟,滤过,滤液蒸干,残渣乙酸乙酯使溶解,作为供试品溶液;
另取丹参酮II A对照品,加乙酸乙酯制成对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品和对照品溶液1~5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以10-30∶0.1-5比例的苯-乙酸乙酯溶液为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与对照品丹参酮II A色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
G、川芎薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取1~5g,加乙醚20~100ml,超声处理5~10分钟,滤过,滤液蒸干,残渣乙酸乙酯使溶解,作为供试品溶液;
另取阿魏酸对照品,加甲醇制成对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品和对照品溶液1~15μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5-15∶30-70∶0.1-5比例的乙醚-三氯甲烷溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照品阿魏酸色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
H、人参薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取1g,,加水5滴,搅匀,再加以水饱和正丁醇10ml,密塞,振摇约10分钟,放置2小时,滤过,滤液加以正丁醇饱和的水25ml,摇匀,放置使分层;取正丁醇层,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇溶解,使成1ml,作为供试品溶液;
另取人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1对照品,加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液0.5μl,对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5-25∶20-60∶10-30∶5-15比例的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
I、牛蒡子薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取5~25g,加乙醇200ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣乙醇溶解,作为供试品溶液;
另取牛蒡子对照药材,同法制备成对照药材溶液,再取牛蒡苷对照品,加乙醇制成对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品和对照药材溶液1~15μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以20-60∶5-15∶0.1-5比例的三氯甲烷-甲醇-水溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
上述鉴别优选如下一种或几种:
A、三七薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取1g,加水5滴,搅匀,再加以水饱和正丁醇10ml,密塞,振摇约10分钟,放置2小时,滤过,滤液加以正丁醇饱和的水25ml,摇匀,放置使分层;取正丁醇层,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇溶解,使成1ml,作为供试品溶液;
另取人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1对照品,加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液0.5μl,对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以15∶40∶22∶10比例的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
B、苎麻根薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取20g,加水100ml超声提取15分钟,滤过,滤液用氯仿萃取3次,每次15ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加无水乙醇溶解,使成0.5ml,作为供试品溶液;
另取对照药材6g,加水100ml,煎煮30分钟,滤过,滤液用氯仿萃取3次,每次15ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加无水乙醇溶解,使成使成0.5ml,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照药材溶液1μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以8∶2.5∶0.5比例的石油醚-乙酸乙酯-丁酮溶液为展开剂,展距8cm,展开,晾干,在紫外灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
C、浙贝母薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取10g,加80%乙醇30ml,加热回流1小时,滤过,滤液置分液漏斗中,用氨水调至碱性,用氯仿萃取2次,每次10ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加无水乙醇溶解使成0.5ml,作为供试品溶液;
另取贝母素甲对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液5~10μl,对照品溶液4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5∶4∶1比例的甲苯-乙酸乙酯-二乙胺溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾溶液,至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D、甘草薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取1~5g,加甲醇20~150ml,加热回流1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水30ml使溶解,取用水饱和的正丁醇萃取3次,每次15ml,合并正丁醇液,再取用正丁醇饱和的水洗涤3次,每次10ml,蒸干,残渣加甲醇溶解,使成2ml,作为供试品溶液;
另取甘草对照药材1g,同上法制备,使成1ml,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液1μl,对照药材溶液2μl,分别点于同一1%氢氧化钠硅胶G薄层板上,以15∶1∶1∶2比例的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E、桔梗薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取5~25g,加1∶3比例的7%硫酸乙醇-水混合液20~250ml,加热回流3小时,放冷,用三氯甲烷振摇提取2次,每次20ml,合并三氯甲烷,加水30ml洗涤,弃去洗液,三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水,滤过,滤液蒸干,残渣甲醇溶解,作为供试品溶液;
另取桔梗对照药材,同法制备成对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品和对照药材溶液1~15μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以1∶1比例的三氯甲烷-乙醚溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
F、丹参薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取5g,加乙醚20ml,超声处理5~10分钟,滤过,滤液蒸干,残渣乙酸乙酯使溶解,作为供试品溶液;
另取丹参酮II A对照品,加乙酸乙酯制成对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品和对照品溶液1~5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以19∶1比例的苯-乙酸乙酯溶液为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与对照品丹参酮II A色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
G、川芎薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取1~5g,加乙醚20~100ml,超声处理5~10分钟,滤过,滤液蒸干,残渣乙酸乙酯使溶解,作为供试品溶液;
另取阿魏酸对照品,加甲醇制成对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品和对照品溶液1~15μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以10∶50∶1比例的乙醚-三氯甲烷-甲酸溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照品阿魏酸色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
H、人参薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取1g,加水5滴,搅匀,再加以水饱和正丁醇10ml,密塞,振摇约10分钟,放置2小时,滤过,滤液加以正丁醇饱和的水25ml,摇匀,放置使分层;取正丁醇层,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇溶解,使成1ml,作为供试品溶液;
另取人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1对照品,加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液0.5μl,对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以15∶40∶22∶10比例的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
I、牛蒡子薄层色谱鉴别
取本药物组合物制剂研细,称取5~25g,加乙醇200ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣乙醇溶解,作为供试品溶液;
另取牛蒡子对照药材,同法制备成对照药材溶液,再取牛蒡苷对照品,加乙醇制成对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品和对照药材溶液1~15μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以40∶8∶1比例的三氯甲烷-甲醇-水溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
本发明药物组合物根据打鼾的病因,从中医的血瘀、痰滞、气结、本虚立论,予以活血化瘀,化痰降浊,利咽散结,培本固元之方药,以达到标本兼治,祛除打鼾。本发明药物组合物经临床实验室小白鼠对比实验证实:可明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀,明显降低肿胀率;明显减轻角叉菜胶所致大鼠的足跖肿胀程度,明显降低肿胀率;可明显减轻大鼠皮下棉球的干、湿重;可明显减少小鼠自主活动;可延长小鼠在常压耐缺氧环境中的存活时间;说明本发明有明显的消肿作用。因此,同样在人体睡眠时对上气道软组织有收敛消肿效果,气道通畅,自然祛除打鼾。
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1对二甲苯致小白鼠耳廓肿胀的影响
小鼠随机分为5组,即对照组,取本发明药物组合物胶囊剂11.1、5.55、2.78g/kg组,地塞米松2mg/kg组。对照组给予等量的饮用水,连续给药四次,1次/日。末次给药1小时,于小鼠右耳两面涂二甲苯约0.05ml/只致肿,左耳不涂为正常耳。30min后脱颈椎处死,用7.5mm打孔器冲下左耳和右耳同一部位的圆片,分析天平上称重,计算肿胀率。肿胀率=(右耳片重量-左耳片重量)/左耳片重量×100%,结果见表1。
注:*与对照组相比较P<0.05
结果表明:本发明药物组合物胶囊剂11.1、5.55g/kg可明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀,明显降低肿胀率(与对照组相比较P<0.05)。
实验例2对棉球肉芽肿的影响
将大鼠随机分为五组即对照组、地塞米松1mg/kg组、本发明药物组合物浓缩丸5.55g/kg组,2.78g/kg组,1.39g/kg组。灌胃给药,每日一次,连续10天,对照组给予等量(1ml/100g体重)的饮用水;动物用水合氯醛(350mg/kg)麻醉,于腹部正中作一开口,用止血钳剥离皮肤至腹股沟处,将预先高压灭菌并加入庆大霉素0.1ml的50mg棉球植入腹股沟处,缝合皮肤,带动物清醒后开始给药;末次给药后1小时,断椎处死大鼠,打开腹部皮肤,仔细剥离棉球,置于电子天平上称重,即为棉球湿重,将棉球置于60℃烘箱中,干燥24小时,取出称量即为干重。分别用棉球湿重、干重减去棉球重作为肉芽多少的指标,各组计算均值、SD,并与对照组进行t检验,结果见表2。
注:*、**表示同模型组比较P<0.05、0.01
结果表明:本发明药物组合物浓缩丸11.1、5.55g/kg可明显减轻大鼠皮下棉球的干、湿重。
下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果
实施例1:
三七30kg、苎麻根30kg、浙贝母30kg、冬虫夏草3kg、甘草9kg、桔梗20kg
本药物组合物通过常规工艺制成浓缩水丸。
实施例2:
三七45kg、苎麻根25kg、浙贝母40kg、冬虫夏草0.3kg、甘草25kg、桔梗15kg
本药物组合物通过常规工艺制成片剂。
实施例3:
三七15kg、苎麻根90kg、浙贝母25kg、冬虫夏草9kg、甘草3kg、桔梗25kg
本药物组合物通过常规工艺制成颗粒剂。
实施例4:
三七30kg、苎麻根30kg、浙贝母30kg、冬虫夏草3kg、甘草9kg、桔梗20kg、丹参60kg、川芎30kg、人参30kg、郁金30kg
本药物组合物通过常规工艺制成浓缩水丸。
实施例5:
三七45kg、苎麻根25kg、浙贝母40kg、冬虫夏草0.3kg、甘草25kg、桔梗15kg、丹参30kg、川芎40kg、人参40kg、郁金20kg
本药物组合物通过常规工艺制成片剂。
实施例6:
三七15kg、苎麻根90kg、浙贝母25kg、冬虫夏草9kg、甘草3kg、桔梗25kg、丹参90kg、川芎20kg、人参20kg、郁金40kg
本药物组合物通过常规工艺制成颗粒剂。
实施例7:
三七30kg、苎麻根30kg、浙贝母30kg、冬虫夏草3kg、甘草9kg、桔梗20kg、法半夏30kg、海蛤壳90kg、蝉衣15kg、牛蒡子60kg、黄芪30kg
本药物组合物通过常规工艺制成浓缩水丸。
实施例8:
三七45kg、苎麻根25kg、浙贝母40kg、冬虫夏草0.3kg、甘草25kg、桔梗15kg、法半夏20kg、海蛤壳140kg、蝉衣25kg、牛蒡子30kg、黄芪40kg
本药物组合物通过常规工艺制成片剂。
实施例9:
三七15kg、苎麻根90kg、浙贝母25kg、冬虫夏草9kg、甘草3kg、桔梗25kg、法半夏40kg、海蛤壳30kg、蝉衣10kg、牛蒡子90kg、黄芪20kg
本药物组合物通过常规工艺制成颗粒剂。
实施例10:
三七30kg、苎麻根30kg、浙贝母30kg、冬虫夏草3kg、甘草9kg、桔梗20kg、丹参60kg、川芎30kg、人参30kg、郁金30kg
三七、人参、冬虫夏草粉碎成细粉,过筛,混匀;丹参、浙贝母加40-95%乙醇回流提取3次,每次1.5小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-70℃下相对密度1.15的清膏;川芎、郁金加水15倍,采用常规水蒸气蒸馏的方法提取挥发油,挥发油另存备用,药液滤过浓缩成清膏,药渣与桔梗、苎麻根、甘草加水煎煮3次,每次1.5小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至40-70℃下相对密度为1.13的清膏,放冷,加乙醇使含醇量为10-90%,静置24小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-60℃下相对密度为1.15的清膏;上述两种清膏经常规减压或喷雾干燥处理,与上述细粉混匀,即得混合药粉;混合药粉加入常规辅料,经常规方法,制成临床接受的胶囊剂。
实施例11:
三七45kg、苎麻根25kg、浙贝母40kg、冬虫夏草0.3kg、甘草25kg、桔梗15kg、丹参30kg、川芎40kg、人参40kg、郁金20kg
冬虫夏草粉碎成细粉,过筛,混匀;三七、人参、丹参与浙贝母加40-95%乙醇回流提取3次,每次1.5小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-70℃下相对密度1.15的清膏;川芎、郁金加水13倍,采用常规水蒸气蒸馏的方法提取挥发油,挥发油另存备用,药液滤过浓缩成清膏,药渣与桔梗、苎麻根、甘草加水煎煮3次,每次1.5小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至40-70℃下相对密度为1.13的清膏,放冷,加乙醇使含醇量为10-90%,静置24小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-60℃下相对密度为1.15的清膏;上述两种清膏经常规减压或喷雾干燥处理,与上述细粉混匀,即得混合药粉;混合药粉加入常规辅料,经常规方法,制成临床接受的浓缩丸。
实施例12:
三七30kg、苎麻根30kg、浙贝母30kg、冬虫夏草3kg、甘草9kg、桔梗20kg、法半夏30kg、海蛤壳90kg、蝉衣15kg、牛蒡子60kg、黄芪30kg
三七与冬虫夏草粉碎成细粉,过筛,混匀;浙贝母加70%乙醇回流提取3次,每次1.5小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-70℃下相对密度1.15的清膏;海蛤壳加水16倍,煎45分钟后加入法半夏、桔梗、蝉衣、牛蒡子、黄芪、苎麻根、甘草一起煎煮,煎煮3次,每次1.5小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至40-70℃下相对密度为1.13的清膏,放冷,加乙醇使含醇量为25%,静置24小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-60℃下相对密度为1.15的清膏;上述两种清膏经常规减压或喷雾干燥处理,制成细粉,与上述细粉混匀,即得混合药粉;混合药粉加入常规辅料,经常规方法,制成临床接受的胶囊剂。
实施例13:
三七15kg、苎麻根90kg、浙贝母25kg、冬虫夏草9kg、甘草3kg、桔梗25kg、法半夏40kg、海蛤壳30kg、蝉衣10kg、牛蒡子90kg、黄芪20kg
冬虫夏草粉碎成细粉,过筛,混匀;三七与浙贝母加70%乙醇回流提取3次,每次1.5小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-70℃下相对密度1.15的清膏;海蛤壳加水16倍,煎30分钟后加入法半夏、桔梗、蝉衣、牛蒡子、黄芪、苎麻根、甘草一起煎煮,煎煮3次,每次1.5小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至40-70℃下相对密度为1.13的清膏,放冷,加乙醇使含醇量为50%,静置24小时,滤过,滤液回收乙醇并浓缩至40-60℃下相对密度为1.15的清膏;上述两种清膏经常规减压或喷雾干燥处理,制成细粉,与上述细粉混匀,即得混合药粉;混合药粉加入常规辅料,经常规方法,制成临床接受的颗粒剂。
实施例14:本发明制剂的质量控制方法
取实施例10内容物进行含量测定:
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基键合硅胶为填充剂;以乙腈和水为流动相,梯度洗脱方式为0-12分钟,乙腈∶水=19∶81;12-60分钟,乙腈∶水=28∶73;检测波长为203nm;理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于4000;
对照品溶液的制备:精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品和三七皂苷R1对照品适量,加甲醇制成对照品溶液;
供试品溶液的制备:取按上述处方和制法制备的本发明药物组合物制剂,精密称定,精密加入甲醇50ml称定重量,放置过夜,置80℃水浴上保持微沸2小时,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul,注入液相色谱仪,测定,即得;本发明药物组合物制剂按干燥品计算,含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1三者的总量为4%。
实施例15:本发明制剂的质量控制方法
取实施例12内容物进行鉴别:
A、三七薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
对照品:购于中国药品生物制品检定所的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1;
取本药物组合物制剂研细,称取1g,,加水5滴,搅匀,再加以水饱和正丁醇10ml,密塞,振摇约10分钟,放置2小时,滤过,滤液加以正丁醇饱和的水25ml,摇匀,放置使分层;取正丁醇层,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇溶解,使成1ml,作为供试品溶液;
另取人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1对照品,加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液0.5μl,对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以15∶40∶22∶10比例的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
B、苎麻根薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
对照药材:苎麻根
取本药物组合物制剂研细,称取20g,加水100ml超声提取15分钟,滤过,滤液用氯仿萃取3次,每次15ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加无水乙醇溶解,使成0.5ml,作为供试品溶液;
另取对照药材6g,加水100ml,煎煮30分钟,滤过,滤液用氯仿萃取3次,每次15ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加无水乙醇溶解,使成使成0.5ml,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照药材溶液1μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以8∶2.5∶0.5比例的石油醚-乙酸乙酯-丁酮溶液为展开剂,展距8cm,展开,晾干,在紫外灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
C、浙贝母薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
对照品:购于中国药品生物制品检定所
批号:贝母素甲110750-200305取本药物组合物制剂研细,称取10g,加80%乙醇30ml,加热回流1小时,滤过,滤液置分液漏斗中,用氨水调至碱性,用氯仿萃取2次,每次10ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加无水乙醇溶解使成0.5ml,作为供试品溶液;
另取贝母素甲对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液5~10μl,对照品溶液4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5∶4∶1比例的甲苯-乙酸乙酯-二乙胺溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾溶液,至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D、甘草薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
对照药材:购于中国药品生物制品检定所
批号:甘草120904-200410
取本药物组合物制剂研细,称取1~5kg,加甲醇20~150l(ml),加热回流1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水30l使溶解,取用水饱和的正丁醇萃取3次,每次15ml,合并正丁醇液,再取用正丁醇饱和的水洗涤3次,每次10ml,蒸干,残渣加甲醇溶解,使成2ml,作为供试品溶液;
另取甘草对照药材1g,同上法制备,使成1ml,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液1μl,对照药材溶液2μl,分别点于同一1%氢氧化钠硅胶G薄层板上,以15∶1∶1∶2比例的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E、桔梗薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
桔梗对照药材:购于中国药品生物制品检定所
取本药物组合物制剂研细,称取5~25g,加1∶3比例的7%硫酸乙醇-水混合液20~250ml,加热回流3小时,放冷,用三氯甲烷振摇提取2次,每次20ml,合并三氯甲烷,加水30ml洗涤,弃去洗液,三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水,滤过,滤液蒸干,残渣甲醇溶解,作为供试品溶液;
另取桔梗对照药材,同法制备成对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品和对照药材溶液1~15μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以1∶1比例的三氯甲烷-乙醚溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
F、丹参薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
对照品丹参酮II A:购于中国药品生物制品检定所
取本药物组合物制剂研细,称取5g,加乙醚20ml,超声处理5~10分钟,滤过,滤液蒸干,残渣乙酸乙酯使溶解,作为供试品溶液;
另取丹参酮II A对照品,加乙酸乙酯制成对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品和对照品溶液1~5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以19∶1比例的苯-乙酸乙酯溶液为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与对照品丹参酮II A色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
G、川芎薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
对照品阿魏酸:购于中国药品生物制品检定所
取本药物组合物制剂研细,称取1~5g,加乙醚20~100ml,超声处理5~10分钟,滤过,滤液蒸干,残渣乙酸乙酯使溶解,作为供试品溶液;
另取阿魏酸对照品,加甲醇制成对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品和对照品溶液1~15μl,分别点于同一硅胶KG薄层板上,以10∶50∶1比例的乙醚-三氯甲烷-甲酸溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照品阿魏酸色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
H、人参薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
对照品:购于中国药品生物制品检定所的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1;
取本药物组合物制剂研细,称取1g,,加水5滴,搅匀,再加以水饱和正丁醇10ml,密塞,振摇约10分钟,放置2小时,滤过,滤液加以正丁醇饱和的水25ml,摇匀,放置使分层;取正丁醇层,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇溶解,使成1ml,作为供试品溶液;
另取人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1对照品,加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液0.5μl,对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以15∶40∶22∶10比例的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
I、牛蒡子薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
牛蒡子对照药材和牛蒡苷对照品:购于中国药品生物制品检定所
取本药物组合物制剂研细,称取5~25g,加乙醇200ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣乙醇溶解,作为供试品溶液;
另取牛蒡子对照药材,同法制备成对照药材溶液,再取牛蒡苷对照品,加乙醇制成对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品和对照药材溶液1~15μl,分别点于同一硅胶KG薄层板上,以40∶8∶1比例的三氯甲烷-甲醇-水溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
实施例16:本发明制剂的质量控制方法
取实施例13内容物进行鉴别和含量测定:
含量测定:色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基键合硅胶为填充剂;以乙腈和水为流动相,梯度洗脱方式为0-12分钟,乙腈∶水=19∶81;12-60分钟,乙腈∶水=28∶73;检测波长为203nm;理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于4000;
对照品溶液的制备:精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品和三七皂苷R1对照品适量,加甲醇制成对照品溶液;
供试品溶液的制备:取按上述处方和制法制备的本发明药物组合物制剂,精密称定,精密加入甲醇50ml称定重量,放置过夜,置80℃水浴上保持微沸2小时,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul,注入液相色谱仪,测定,即得;本发明药物组合物制剂按干燥品计算,含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1三者的总量为25%;
鉴别:A、三七薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
对照品:购于中国药品生物制品检定所的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1;
取本药物组合物制剂研细,称取1g,,加水5滴,搅匀,再加以水饱和正丁醇10ml,密塞,振摇约10分钟,放置2小时,滤过,滤液加以正丁醇饱和的水25ml,摇匀,放置使分层;取正丁醇层,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇溶解,使成1ml,作为供试品溶液;
另取人参皂苷Rkg1、Rb1及三七皂苷R1对照品,加甲醇制成每1l各含1mg的混合溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液0.5μl,对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以15∶40∶22∶10比例的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
B、苎麻根薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
对照药材:苎麻根
取本药物组合物制剂研细,称取20g,加水100ml超声提取15分钟,滤过,滤液用氯仿萃取3次,每次15ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加无水乙醇溶解,使成0.5ml,作为供试品溶液;
另取对照药材6g,加水100ml,煎煮30分钟,滤过,滤液用氯仿萃取3次,每次15ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加无水乙醇溶解,使成使成0.5ml,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl,对照药材溶液1μl,分别点于同一硅胶KG薄层板上,以8∶2.5∶0.5比例的石油醚-乙酸乙酯-丁酮溶液为展开剂,展距8cm,展开,晾干,在紫外灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
C、浙贝母薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
对照品:购于中国药品生物制品检定所
批号:贝母素甲110750-200305
取本药物组合物制剂研细,称取10g,加80%乙醇30ml,加热回流1小时,滤过,滤液置分液漏斗中,用氨水调至碱性,用氯仿萃取2次,每次10ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加无水乙醇溶解使成0.5ml,作为供试品溶液;
另取贝母素甲对照品,加甲醇制成每1ml含1mkg的溶液,作为对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液5~10μl,对照品溶液4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以5∶4∶1比例的甲苯-乙酸乙酯-二乙胺溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾溶液,至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
D、甘草薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
对照药材:购于中国药品生物制品检定所
批号:甘草120904-200410
取本药物组合物制剂研细,称取1~5kg,加甲醇20~150ml,加热回流1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水30ml使溶解,取用水饱和的正丁醇萃取3次,每次15ml,合并正丁醇液,再取用正丁醇饱和的水洗涤3次,每次10ml,蒸干,残渣加甲醇溶解,使成2ml,作为供试品溶液;
另取甘草对照药材1g,同上法制备,使成1ml,作为对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液1μl,对照药材溶液2μl,分别点于同一1%氢氧化钠硅胶G薄层板上,以15∶1∶1∶2比例的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
E、桔梗薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
桔梗对照药材:购于中国药品生物制品检定所
取本药物组合物制剂研细,称取5~25g,加1∶3比例的7%硫酸乙醇-水混合液20~250ml,加热回流3小时,放冷,用三氯甲烷振摇提取2次,每次20ml,合并三氯甲烷,加水30ml洗涤,弃去洗液,三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水,滤过,滤液蒸干,残渣甲醇溶解,作为供试品溶液;
另取桔梗对照药材,同法制备成对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品和对照药材溶液1~15μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以1∶1比例的三氯甲烷-乙醚-甲酸溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
F、丹参薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
对照品丹参酮IIA:购于中国药品生物制品检定所
取本药物组合物制剂研细,称取5g,加乙醚20ml,超声处理5~10分钟,滤过,滤液蒸干,残渣乙酸乙酯使溶解,作为供试品溶液;
另取丹参酮IIA对照品,加乙酸乙酯制成对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品和对照品溶液1~5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以19∶1比例的苯-乙酸乙酯溶液为展开剂,展开,取出,晾干,供试品色谱中,在与对照品丹参酮II A色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
G、川芎薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
对照品阿魏酸:购于中国药品生物制品检定所
取本药物组合物制剂研细,称取1~5g,加乙醚20~100ml,超声处理5~10分钟,滤过,滤液蒸干,残渣乙酸乙酯使溶解,作为供试品溶液;
另取阿魏酸对照品,加甲醇制成对照品溶液,照薄层色谱法试验,吸取供试品和对照品溶液1~15μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以10∶50∶1比例的乙醚-三氯甲烷-甲酸溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照品阿魏酸色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
H、人参薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
对照品:购于中国药品生物制品检定所的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1;
取本药物组合物制剂研细,称取1g,,加水5滴,搅匀,再加以水饱和正丁醇10ml,密塞,振摇约10分钟,放置2小时,滤过,滤液加以正丁醇饱和的水25ml,摇匀,放置使分层;取正丁醇层,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇溶解,使成1ml,作为供试品溶液;
另取人参皂苷Rkg1、Rb1及三七皂苷R1对照品,加甲醇制成每1l各含1mg的混合溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液0.5μl,对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以15∶40∶22∶10比例的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
I、牛蒡子薄层色谱鉴别
样品来源:按上述处方和制法制备本发明药物组合物制剂
牛蒡子对照药材和牛蒡苷对照品:购于中国药品生物制品检定所
取本药物组合物制剂研细,称取5~25g,加乙醇200ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣乙醇溶解,作为供试品溶液;
另取牛蒡子对照药材,同法制备成对照药材溶液,再取牛蒡苷对照品,加乙醇制成对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品和对照药材溶液1~15μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以40∶8∶1比例的三氯甲烷-甲醇-水溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。