CN101032322A - 余甘子提取物及其制备方法与应用 - Google Patents

余甘子提取物及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及余甘子提取物及其制备方法与应用，将余甘子干粉通过微波辅助溶剂萃取得到的原提取液，经过大孔树脂纯化后提取物多酚含量达93％以上。余甘子提取物分别进行乙醚、乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯相挥掉溶剂，得到一种以余甘子多酚为主要活性成分的天然抗氧化剂。此天然抗氧化剂与其它天然和合成抗氧化剂(Vc、VE和TBHQ)比较具有明显优势，余甘子天然抗氧化剂的清除DPPH自由基活性是Vc的2倍，是TBHQ的1～2倍；对脂质过氧化的抑制活性是VE的2～8倍，是TBHQ的1～6倍；在花生油中的抗过氧化能力是VE的2～4倍，是TBHQ的1～2倍；在猪油中的抗过氧化能力是VE的2～4倍，是TBHQ的1～2倍。

Description

余甘子提取物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及余甘子提取技术，具体是余甘子提取物及其制备方法与应用。
技术背景
食品中油脂的氧化将导致产品的酸败变质，不仅降低了食物的营养价值，有些氧化产物还具有毒副作用，给人类健康带来了极大的威胁。因此如何降低油脂氧化是食品和医学领域中一个重要课题，而防止油脂氧化酸败最常用的手段是添加抗氧化剂。
现有的抗氧化剂主要是人工合成抗氧化剂，如没食子酸丙酯(PG)、丁羟基茴香醚(BHA)和二丁基羟基甲苯(BHT)等虽然作用效果显著，但安全性存在着一些问题，畜禽摄入后对机体产生一定的毒性，动物实验表明它们有一定的毒性和致癌作用。而一些天然的抗氧化剂如Vc、VE及多酚类物质等，虽然安全性高，但使用效果不佳或在油脂中存在溶解性差等问题。
发明内容
本发明的目的在于针对现有产品和技术中存在的缺陷，提供一种余甘子提取物的制备方法，得到的提取物可用作天然抗氧化剂，用于食用动、植物油和含油食品中。
本发明的目的还在于提供所述方法制备的余甘子提取物。
本发明的目的还在于提供所述余甘子提取物的应用。
余甘子(Phyllanthus emblica)系大戟科(Euphorbiaceae)叶下珠属(Phyllanthus)热带、亚热带落叶小乔木的果实，俗名滇橄榄、油甘子、庵摩勒、庵婆罗果、喉甘子等。余甘子起源于印度和缅甸，主要分布于印度、中国、缅甸、马来西亚、巴基斯坦等地，以中国的产量最多，云南、广西、广东、福建、贵州、海南等省区都有野生余甘林分布。截止2002年，我国余甘子野生及栽培林面积大约在60 000hm2以上，野生余甘子在福建、云南、贵州、广西等省每年合计产量为100 000t。由于野生余甘林大多在山区，生产条件十分落后，对野生余甘子果实的开发利用率很低，约90％以上的余甘子果实从树上掉到地上烂掉，造成资源浪费。
余甘果中含有丰富的超氧化歧化酶(SOD)、Vc、多酚类物质及多糖等活性物质，具有抗炎、抗肿瘤、抗突变、抗高血压、降血脂、降血压、保肝等功效，余甘子超强的抗氧化活性是其生理功能的基础，而余甘子多酚是主要的抗氧化物质。
本发明利用余甘子的抗氧化特性，对其中多酚类物质进行提取，得到具有抗氧化性的提取物，用作食用天然抗氧化剂，取代现有人工合成的食品添加剂。
本发明的余甘子提取物的制备方法方法，包括如下步骤：
(1)将余甘子除杂、干燥、粉碎、过筛，制成余甘子干粉；
(2)以水与乙醇体积比为50∶100的比例配制提取液；
(3)按固液比1∶5～10将余甘子干粉浸泡于提取液中，然后放入微波萃取器进行微波辐射5～10min，功率为490～750W，微波压力为0.10～0.15MPa；
(4)抽滤，减压蒸馏得粗提物；
(5)将粗提物配制成2～5g/L溶液，按1克XDA-5大孔树脂加5～10毫升该溶液配制，在15～30℃振荡吸附达到平衡；
按1克树脂与8～20毫升体积浓度为70％乙醇在20～40℃进行树脂解吸2～4小时；
(6)步骤(5)处理得到的洗脱液减压蒸馏，回收乙醇，得到浓缩液，加入相当于浓缩液3～5倍体积的石油醚，分层后，弃去上层的石油醚相，保留水相；
(7)加入相当于水相3～5倍体积的乙醚进行萃取，分层后，弃去上层的乙醚相，保留水相；
(8)加入相当于步骤(7)得到的水相3～5倍体积的乙酸乙酯进行萃取，分层后，弃去下层的水相，保留乙酸乙酯相；
(9)将乙酸乙酯相减压蒸馏至干，回收乙酸乙酯，得余甘子提取物。
作为优选方案，步骤(3)中，所述浸泡是在35～45℃下浸泡2～4小时。
步骤(4)、(6)、(9)中，在40℃下抽滤，在压力0.07～0.08MPa下减压蒸馏。
步骤(1)中所述的干燥是在45℃通风干燥8小时，粉碎后过60～80目筛。
所述微波萃取装置可采用Microwave laboratory systems，意大利Milestone公司生产；
本发明与现有技术相比具有如下优点：
1、提供了一种新型的天然抗氧化剂——余甘子提取物，可食用动、植物油和含油食品的添加剂；
2、本发明方法得到的余甘子提取物与天然抗氧化剂维生素C(Vc)、维生素E(VE)和化学合成抗氧化剂特丁基对苯二酚(TBHQ)进行比较，结果显示：余甘子提取物清除DPPH自由基的活性是Vc的2倍，是TBHQ的1～2倍；对脂质过氧化活性的抑制力是VE的2～8倍，是TBHQ的1～6倍；在花生油中的抗过氧化能力是VE的2～4倍，是TBHQ的1～2倍；在猪油中的过氧化能力是VE的2～4倍，是TBHQ的1～2倍。
具体实施方式
实施例1
(1)余甘子鲜果500克，45℃通风干燥8小时，粉碎后过60目筛得到余甘子干粉100克；
(2)以水与乙醇体积比为50∶100的比例配制提取液；
(3)按固液比1∶5将余甘子干粉浸泡在提取液中35℃下浸泡2小时，然后放入微波萃取器进行微波辐射5min，功率为490W，微波压力为0.10MPa；
(4)提取液在40℃下抽滤，在压力0.07Mpa下减压蒸馏得粗提物；
(5)将粗提物配制成2g/L溶液，按1克XDA-5大孔树脂加5毫升该溶液，在15℃振荡吸附达到平衡；按1克树脂与8毫升体积浓度为70％乙醇在20℃下解吸2小时，得洗脱液；
(6)步骤(5)处理得到的洗脱液在40℃，压力0.07Mpa下减压蒸馏回收乙醇，得到浓缩液，加入相当于浓缩液3倍体积的石油醚，分层后，弃去上层的石油醚相，保留水相；
(7)加入相当于水相3倍体积的乙醚进行萃取，分层后，弃去上层的乙醚相，保留水相；
(8)加入相当于步骤(7)得到的水相3倍体积的乙酸乙酯进行萃取，分层后，弃去下层的水相，保留乙酸乙酯相；
(9)将乙酸乙酯相在40℃，压力0.07Mpa下减压蒸馏至干，回收乙酸乙酯，得到余甘子提取物10.6克，提取物中多酚含量达94％。
实施例2
(1)余甘子鲜果500克，45℃通风干燥8小时，粉碎后过70目筛得到余甘子干粉100克；
(2)以水与乙醇体积比为50∶100的比例配制提取液；
(3)按固液比1∶8将余甘子干粉浸泡在提取液中40℃下浸泡3小时，然后放入微波萃取器进行微波辐射8min，功率为550W，微波压力为0.13MPa；
(4)提取液在40℃下抽滤，在压力0.075Mpa下减压蒸馏得粗提物；
(5)将粗提物配制成3g/L溶液，按1克XDA-5大孔树脂加8毫升该溶液，在20℃振荡吸附达到平衡；按1克树脂与12毫升体积浓度为70％乙醇在30℃下解吸3小时；
(6)步骤(5)处理得到的洗脱液在40℃，压力0.075Mpa下减压蒸馏回收乙醇，得到浓缩液，加入相当于浓缩液4倍体积的石油醚，分层后，弃去上层的石油醚相，保留水相；
(7)加入相当于水相4倍体积的乙醚进行萃取，分层后，弃去上层的乙醚相，保留水相；
(8)加入相当于步骤(7)得到的水相4倍体积的乙酸乙酯进行萃取，分层后，弃去下层的水相，保留乙酸乙酯相；
(9)将乙酸乙酯相在40℃，压力0.075Mpa下减压蒸馏至干，回收乙酸乙酯，得到余甘子提取物11.2克，提取物中多酚含量达95％。
实施例3
(1)余甘子鲜果500克，45℃通风干燥8小时，粉碎后过80目筛得到余甘子干粉100克；
(2)以水与乙醇体积比为50∶100的比例配制提取液；
(3)按固液比1∶10将余甘子干粉浸泡在提取液中45℃下浸泡4小时，然后放入微波萃取器进行微波辐射10min，功率为750W，微波压力为0.15MPa；
(4)提取液在40℃下抽滤，在压力0.08Mpa下减压蒸馏得粗提物；
(5)将粗提物配制成5g/L溶液，按1克XDA-5大孔树脂加10毫升该溶液，在30℃振荡吸附达到平衡；按1克树脂与20毫升体积浓度为70％乙醇在40℃下解吸4小时；
(6)步骤(5)处理得到的洗脱液在40℃，压力0.08Mpa下减压蒸馏回收乙醇，得到浓缩液，加入相当于浓缩液4倍体积的石油醚，分层后，弃去上层的石油醚相，保留水相；
(7)加入相当于水相5倍体积的乙醚进行萃取，分层后，弃去上层的乙醚相，保留水相；
(8)加入相当于步骤(7)得到的水相5倍体积的乙酸乙酯进行萃取，分层后，弃去下层的水相，保留乙酸乙酯相；
(9)将乙酸乙酯相在40℃，压力0.08Mpa下减压蒸馏至干，回收乙酸乙酯，得到余甘子提取物11.3克，提取物中多酚含量达93％。
测定余甘子提取物的抗氧化性，测定方法如下：
1)取1mL样品液，加入1mM DPPH甲醇溶液1mL，室温放置30min，测定517nm处吸光值。以1mL溶剂替代提取液测定空白吸光值(A空白)。
           DPPH清除率(％)＝(1-A样品/A空白)×100
2)0.5mL样品的甲醇溶液(6∶4v/v)加入亚油酸乳浊液2.5mL，2.5mL磷酸盐缓冲液(0.2M，pH 7.0)，37℃保温4h，取0.1mL加入5mL75％乙醇，0.1mL30％的硫氰酸铵，0.1mL20mM的氯化亚铁的3.5％HCL溶液，室温下放置3min，磷酸盐缓冲液调零，以不加样品提取物为对照，500nm下测定吸光度。
           抗脂质过氧化力(％)＝(1-A样品)/A对照×100
3)以30mL升三氯甲烷-冰乙酸混合溶解样品，再加入1.00mL饱和碘化钾溶液，紧密塞好瓶盖，并轻轻振摇30s，然后于暗处放置3min。取出加75mL双蒸水，摇匀，立即用硫代硫酸钠标准滴定溶液(0.002mol/L)滴定，至淡黄色时，加1mL淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失为终点，取相同量三氯甲烷-冰乙酸溶液、碘化钾溶液、水，按同一方法，用TBHQ、VE做对照试验。采用烘箱法高温(65℃)诱导猪油和花生油(30g)发生过氧化反应，将已添加好抗氧化物(0.02％)的油脂置于恒温干燥箱中，每隔5天测定其过氧化值。过氧化值按下列公式计算：
POV(meq/kg)＝C(V1-V0)×1000/M
V1-用于测定的硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积，mL；
V0-为空白实验消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积，mL；
C-硫代硫酸钠标准滴定溶液的浓度，mol/L；
M-样品质量，g
通过DPPH自由基清除活性，抗脂质过氧化活性，及油脂过氧化能力的测定，对余甘子抗氧化剂的抗氧化性能进行测定，并与天然抗氧化剂维生素C(Vc)、维生素E(VE)和化学合成抗氧化剂特丁基对苯二酚(TBHQ)进行比较。结果见表1～4，其中
表1是实施例1得到的余甘子提取物清除DPPH自由基的活性；
表2是实施例2得到的余甘子提取物对亚油酸体系的脂质过氧化抑制活性；
表3是实施例3得到的余甘子提取物对花生油POV(meq/kg)值的影响(浓度：0.2％)；
表4是实施例4得到的余甘子提取物对猪油POV(meq/kg)值的影响(浓度：0.2％)。结果显示：余甘子提取物清除DPPH自由基的活性是Vc的2倍，是TBHQ的1～2倍；对脂质过氧化的抑制活性是VE的2～8倍，是TBHQ的1～6倍；在花生油中的抗过氧化能力是VE的2～4倍，是TBHQ的1～2倍；在猪油中的抗过氧化能力是VE的2～4倍，是TBHQ的1～2倍。
                表1
  样品   EC50(μg/mL)a
  余甘子提取物维生素CTBHQ   2.1116.1211.59
                        表2
  样品   浓度(μg/mL)   抑制率(％)
余甘子提取物维生素ETBHQ   101001010010100   66.393.538.261.653.592.2
                            表3
  天数   0   5   10   15
  余甘子提取物维生素ETBHQ   2.022.022.02   1.433.362.33   2.944.916.78   4.7815.618.46
                               表4
  天数   0   5   10   15
  余甘子提取物维生素ETBHQ   1.951.951.95   2.652.892.87   3.047.803.94   5.7813.257.75

Claims (5)

1、一种余甘子提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)将余甘子除杂、干燥、粉碎、过筛，制成余甘子干粉；
(2)以水与乙醇体积比为50∶100的比例配制提取液；
(3)按固液比1∶5～10将余甘子干粉浸泡于提取液中，然后放入微波萃取器进行微波辐射5～10min，功率为490～750W，微波压力为0.10～0.15MPa；
(4)抽滤，减压蒸馏得粗提物；
(5)将粗提物配制成2～5g/L溶液，按1克XDA-5大孔树脂加5～10毫升该溶液配制，在15～30℃振荡吸附达到平衡；按1克树脂与8～20毫升体积浓度为70％乙醇在20～40℃进行树脂解吸2～4小时，得洗脱液；
(6)步骤(5)处理得到的洗脱液减压蒸馏，回收乙醇，得到浓缩液，加入相当于浓缩液3～5倍体积的石油醚，分层后，弃去上层的石油醚相，保留水相；
(7)加入相当于水相3～5倍体积的乙醚进行萃取，分层后，弃去上层的乙醚相，保留水相；
(8)加入相当于步骤(7)得到的水相3～5倍体积的乙酸乙酯进行萃取，分层后，弃去下层的水相，保留乙酸乙酯相；
(9)将乙酸乙酯相减压蒸馏至干，回收乙酸乙酯，得余甘子提取物。
2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(3)中，所述浸泡是在35～45℃下浸泡2～4小时。
3、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于步骤(4)、(6)、(9)中，在40℃下抽滤，在压力0.07～0.08Mpa下减压蒸馏。
4、根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中所述的干燥是在45℃通风干燥8小时，粉碎后过60～80目筛。
5、权利要求4所述余甘子提取物在制备食用抗氧化剂中的应用。
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