CN101015614A - 九味补血口服液的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种九味补血口服液的质量控制方法，针对现有技术的不足，改进了制剂中陈皮的定性鉴别方法，新增加了人参与绞股蓝、黄芪的薄层色谱鉴别方法，增加了药物含量测定方法步骤，采用高效液相色谱法测定九味补血口服液成品中当归阿魏酸的含量。本发明的九味补血口服液的质量控制方法，提高了质量控制的专属性和有效性，有利于实现对九味补血口服液成品质量的有效控制。

Description

九味补血口服液的质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种九味补血口服液的质量控制方法。

背景技术

九味补血口服液是一种广泛用于治疗贫血的中药制剂，该产品质量标准收载于国家药品监督管理局标准(试行)WS-5877(B-0877)-2002。本品由人参、黄芪和绞股蓝等九味药材制成，原标准中只制订有对当归、甘草、陈皮的鉴别方法，无含量测定方法，由于被鉴别的药味较少，对药物含量也没有定量检测，不利于控制成品的质量。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种加强对九味补血口服液成品进行质量控制的方法。

本发明以如下技术方案解决上述技术问题：在已有的分别鉴别当归、甘草的基础上，改进陈皮的定性鉴别方法，增加对人参与绞股蓝、黄芪的薄层色谱鉴别方法，增加对当归药物含量的测定方法。

对陈皮的鉴别：

取九味补血口服液20ml，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次20ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取陈皮对照药材0.6g，加65％乙醇15ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液10～20μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸(100∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点。

对人参和绞股蓝的鉴别：

取九味补血口服液30ml，加三氯甲烷30ml，振摇提取，分取上层溶液，用水饱和的正丁醇振摇提取3次(30ml，30ml，20ml)，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次，每次50ml，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次50ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加10％乙醇5ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，用水50ml洗脱，弃去水洗脱液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参对照药材0.8g和绞股蓝对照药材2g，分别加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤渣挥干溶剂，加水0.5ml湿润后，加水饱和的正丁醇10ml，超声处理30分钟，分取上清液，加氨试液三倍量，摇匀，放置，分取上层液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。再取人参皂苷Rb1、Rg1对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述溶液各1～2μl，分别点于同-以0.5％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

对黄芪的鉴别：

取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述对照品溶液及与鉴别人参和绞股蓝相同的供试品溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以[正丁醇∶乙酸乙酯∶水(4∶1∶5)上层溶液]-甲醇(10∶1)为展开剂，置氨气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

当归含量测定的步骤：

参照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VI D)操作进行：

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液(15∶85)为流动相；检测波长为316nm；理论板数按阿魏酸峰计算应不低于5000。

对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备精密量取九味补血口服液5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每支含当归以阿魏酸(C₁₀H₁₀O₄)计，不得少于80μg。

本发明的九味补血口服液的质量控制方法，改进了原有方法中对陈皮的定性鉴别方法，新增加了鉴别人参与绞股蓝、黄芪的薄层色谱鉴别方法，还增加了对药物含量测定的步骤，采用高效液相色谱法测定九味补血口服液成品当归中有效成分阿魏酸的含量，提高了质量控制的专属性和有效性，有利于实现对九味补血口服液成品质量的有效控制。

具体实施方式

在原有的对九味补血口服液成品进行质量控制的检测过程中，对陈皮的鉴别因供试品溶液没有经过提纯处理而过于粘稠，造成点样比较困难，且含杂质较多，使检测存在专属性不高的缺陷；而且，由于没有对人参与绞股蓝、黄芪的检测和鉴别，使对九味补血口服液的质量控制不够完善。因此，本发明改进了对陈皮鉴别的步骤，增加了对人参与绞股蓝、黄芪的薄层色谱鉴别和测定当归中有效成分阿魏酸的含量步骤，实现对九味补血口服液成品质量的有效控制。

实施例1

取本公司市售的九味补血口服液产品，按本发明确定的鉴别方法进行检测：

鉴别陈皮：

取九味补血口服液20ml，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次20ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取陈皮对照药材0.6g，加65％乙醇15ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液10～20μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸(100∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点。

鉴别人参、绞股蓝：

取九味补血口服液30ml，加三氯甲烷30ml，振摇提取，分取上层溶液，用水饱和的正丁醇振摇提取3次(30ml，30ml，20ml)，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次，每次50ml，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次50ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加10％乙醇5ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，用水50ml洗脱，弃去水洗脱液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参对照药材0.8g和绞股蓝对照药材2g，分别加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤渣挥干溶剂，加水0.5ml湿润后，加水饱和的正丁醇10ml，超声处理30分钟，分取上清液，加氨试液三倍量，摇匀，放置，分取上层液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。再取人参皂苷Rb1、Rg1对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述溶液各1～2μl，分别点于同一以0.5％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

鉴别黄芪：

取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述对照品溶液及与鉴别人参和绞股蓝相同的供试品溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以[正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)上层溶液]-甲醇(10∶1)为展开剂，置氨气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。测定结果表明产品中含有陈皮、人参、绞股蓝、黄芪，说明本发明的方法有效。

实施例2

取本公司市售品、自制样品三批，按本发明确定的含量测定项，用高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VI D)测定，具体操作如下：

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液(15∶85)为流动相；检测波长为316nm；理论板数按阿魏酸峰计算应不低于5000。

对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备精密量取九味补血口服液5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每支含当归以阿魏酸(C₁₀H₁₀O₄)计，不得少于80μg。  测定结果表明，产品中每支所含阿魏酸均不少于80μg，符合规定要求，说明本发明的方法有效。

Claims (3)

1、一种九味补血口服液的质量控制方法，分别鉴别当归、甘草和陈皮，其特征是改进陈皮的定性鉴别方法，增加对人参与绞股蓝、黄芪的薄层色谱鉴别和对药物当归含量的测定。

2.如权利要求1所述的九味补血口服液的质量控制方法，其特征是：

对陈皮的鉴别：取九味补血口服液20ml，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次20ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取陈皮对照药材0.6g，加65％乙醇15ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B规定的薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10～20μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸＝100∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点；

对人参和绞股蓝的鉴别：

取九味补血口服液30ml，加三氯甲烷30ml，振摇提取，分取上层溶液，分别用30ml，30ml，20ml水饱和的正丁醇振摇提取3次，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次，每次50ml，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次50ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加10％乙醇5ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱，用水50ml洗脱，弃去水洗脱液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参对照药材0.8g和绞股蓝对照药材2g，分别加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤渣挥干溶剂，加水0.5ml湿润后，加水饱和的正丁醇10ml，超声处理30分钟，分取上清液，加氨试液三倍量，摇匀，放置，分取上层液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；再取人参皂苷Rb1、Rg1对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照前述薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～2μl，分别点于同一以0.5％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝13∶7∶2 10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

对黄芪的鉴别：

取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照上述薄层色谱法试验，吸取上述对照品溶液及与鉴别人参和绞股蓝相同的供试品溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙酸乙酯-水＝4∶1∶5上层溶液-甲醇＝10∶1为展开剂，置氨气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

对当归中阿魏酸含量的测定：

按照中国药典2005版一部附录VID规定的高效液相色谱法操作进行：

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸溶液＝15∶85为流动相；检测波长为316nm；理论板数按阿魏酸峰计算应不低于5000；

对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备精密量取本品5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

供试品溶液的制备精密量取九味补血口服液5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

3.如权利要求2所述的九味补血口服液的质量控制方法，其特征是本品每支含当归以阿魏酸(C₁₀H₁₀O₄)计，不得少于80μg。