CN101004408A

CN101004408A - 基质辅助激光解吸质谱样品功能靶盘制备方法

Info

Publication number: CN101004408A
Application number: CN 200710036789
Authority: CN
Inventors: 徐芳; 陆豪杰; 王德举; 杨芃原; 包慧敏
Original assignee: Shanghai Jiaotong University
Current assignee: Shanghai Jiaotong University
Priority date: 2007-01-25
Filing date: 2007-01-25
Publication date: 2007-07-25
Anticipated expiration: 2027-01-25
Also published as: CN100504378C

Abstract

一种生物检测技术领域的基质辅助激光解吸质谱样品功能靶盘制备方法，步骤为：制备骨架结构中固定掺杂有杂原子的纳米沸石分子筛，漂洗，至相应样品悬浮溶液至近中性；取上述样品溶液烘干，高温焙烧，后浸渍于无水处理过的乙酸乙酯中，超声分散；使基质辅助激光解吸质谱不锈钢样品靶盘浸渍于钛酸酯偶联剂：无水乙酸乙酯的溶液中，取出后室温下通风干燥；使杂原子纳米沸石晶体材料悬浮溶液在充分分散，无气泡状态下，点加入到相应不锈钢样品靶盘点样孔内；将样品靶盘在烘箱保温后取出。本发明简便易操作，重复性好，满足大规模、高通量分析鉴定实际样品体系中微量/超微量磷酸化肽，磷酸化蛋白质分子需要。

Description

基质辅助激光解吸质谱样品功能靶盘制备方法

技术领域

本发明涉及一种生物检测技术领域的方法，具体是一种直接富集鉴定低丰度磷酸化肽/磷酸化蛋白质分子的基质辅助激光解吸质谱样品功能靶盘制备方法。

背景技术

蛋白质磷酸化过程是生物体内最普遍、最重要的蛋白质翻译后修饰方式。蛋白质的磷酸化和去磷酸化这一可逆过程参与了高等真核生物细胞信号转导，细胞分化和细胞生长等几乎所有的生命活动过程，并与许多威胁人类健康的重大疾病，如肿瘤等的发生发展密切相关。现代蛋白质组学研究的目的就是在翻译和后修饰水平研究整个基因的表达，从而从一个整体动态的水平上研究蛋白质的组成规律。细胞内所有能被磷酸化的蛋白质构成了磷酸化蛋白质组。

尽管有效识别和鉴定低丰度磷酸化蛋白质分子，可以更好地解析细胞生命活动过程。但迄今为止，动态的磷酸化全谱的分析和大规模，高通量地鉴定低丰度磷酸化蛋白质分子，仍然是生命科学等相关领域急待解决的“瓶颈”问题。传统的32P放射性标记法，具有直接，灵敏性高的特点，但只能对部分可以进行放射性标记的细胞进行检测，同时由于存在放射性污染问题，极大地限制了其进一步的应用。依赖于抗体的免疫印迹检测法则是利用抗磷酸化抗体免疫分离检测磷酸化蛋白质。但目前相对于抗丝氨酸/抗苏氨酸磷酸化抗体，仅抗酪氨酸磷酸化抗体的特异性较好，也最为常用。

基质辅助激光解吸质谱等现代检测技术的快速发展，为低丰度磷酸化蛋白质分子的结构鉴定提供了新的发展机遇。过程中，主要通过分析目标样品酶解混合物中可能存在的磷酸化肽段，以确定相应磷酸化蛋白质分子的存在。但相对于实际生物体系内纷繁复杂的蛋白质组成而言，由于发生磷酸化的蛋白质分子比例十分有限，因此，有效的富集分离过程，及其同基质辅助激光解吸质谱仪间的有机结合，是灵敏鉴定低丰度磷酸化蛋白质分子的一个关键技术途径。

众所周知，固定金属离子亲和色谱法(IMAC)是根据结合于葡聚糖，琼脂糖等软胶基质固定相载体中的金属离子，选择性吸附磷酸基团的特性，从而达到富集磷酸化肽段的目的。

经对现有技术文献检索发现，Jamie等在国际分析化学领域的权威学术期刊-“美国分析化学”(2006，78，1574)上报道：在基质辅助激光解吸质谱仪相应不锈钢样品靶盘表面，交联修饰聚丙烯酸-三乙酸亚硝酸复合物后，通过离子间静电引力作用固定Fe(III)，从而以Fe(III)为金属离子亲和活性位点，直接富集目标样品体系中可能存在的磷酸化肽段，后续利用基质辅助激光解吸质谱研究鉴定相应低丰度磷酸化蛋白质分子的存在。但需要指出的是，上述过程中仍存在：相应的基质辅助激光解吸质谱仪样品靶盘制作过程繁琐，而且通过离子间电荷引力作用固定结合Fe(III)，难以避免实际操作过程中，Fe(III)活性位点流失等问题，直接干扰影响目标磷酸化蛋白质分子的分析鉴定。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种基质辅助激光解吸质谱样品功能靶盘制备方法。本发明利用适宜的无机纳米组装技术，在相应不锈钢材质的MALDI样品靶盘表面特定的点样孔内，逐一均匀地修饰骨架结构中固定掺杂有铁-钛等杂原子活性位点的纳米沸石分子筛晶体材料。相应制备提供的新型基质辅助激光解吸质谱(MALDI)功能样品靶盘，可以有效地克服目前直接富集鉴定低丰度磷酸化蛋白质分子过程中存在的技术难点问题，从而，为高通量、大规模地分析鉴定实际生物体系中低丰度磷酸化蛋白质分子，提供具有实际科学意义的完全创新性的技术途径。

本发明是通过以下技术方案实现的，具体步骤如下：

(1)通过水热合成法制备获得骨架结构中固定掺杂杂原子的纳米沸石分子筛，相应杂原子纳米沸石材料，X射线多晶衍射分析表明特征衍射峰形尖锐，产品结晶度良好。利用去离子水反复漂洗，至相应样品悬浮溶液近中性后，烘干，焙烧，后浸渍于无水处理过的乙酸乙酯中，超声分散以备待用；

所述的(1)中，通过水热合成法制备获得骨架结构中固定掺杂杂原子的纳米沸石分子筛，具体为：

所用硅源为白炭黑；所用有机模板剂为四乙基氢氧化胺或四丙基氢氧化胺，在钛源参与下，加入氯化铁或氯化镓，于413K下水热晶化获得骨架结构中固定掺杂杂原子的纳米沸石分子筛。

(2)取准确体积的上述悬浮溶液，烘干，根据所得纳米沸石分子筛材料的净重量，初步确定该材料悬浮溶液中的初始固/液间比例为0.1克纳米沸石材料/100毫升乙酸乙酯；

所述烘干，温度为100℃。

(3)后通过乙酸乙酯逐级稀释上述(2)得到的材料悬浮溶液至原来的1/10，0000-1/10000倍；

(4)在1∶1体积比组成的乙醇-丙酮有机溶剂中，反复利用超声波清洗器振荡清洗不锈钢材质的MALDI样品靶盘，后利用2mol/L稀盐酸水溶液在30℃水浴加热条件下，完全充分地浸渍相应的MALDI样品靶盘，持续时间为7-8小时，后用二次去离子水反复冲洗MALDI样品靶盘，用洗耳球彻底吹扫样品靶盘表面水份后，100℃烘干，然后将其浸渍于体积比为1∶1000-5∶1000的钛酸酯偶联剂和无水乙酸乙酯的混合溶液中1小时，后取出MALDI样品靶盘，室温下通风干燥，于烘箱中80-100℃保温以加热除去可能存在的低沸点乙酸乙酯。从而，在相应MALDI不锈钢样品靶盘表面均匀涂渍一层钛酸酯偶联剂；

所选择使用的钛酸酯偶联剂包括钛酸正四丁酯、单烷氧基脂肪酸钛酸酯、单烷氧基不饱和脂肪酸钛酸酯中的一种。

(5)在微型点胶机的样品管内，加入上述(3)稀释得到的纳米沸石晶体材料悬浮溶液。即使装有纳米沸石晶体材料悬浮溶液的样品管充分浸没在微型超声波清洗器中，通过超声波充分分散相应纳米沸石晶体材料，并除去溶液中可能存在的细小气泡，然后在保持纳米沸石晶体材料悬浮溶液充分分散的状态下，逐一快速加入到上述(4)中处理得到的MALDI样品靶盘的点样孔内；

所述的(5)中，稀释得到的纳米沸石晶体材料悬浮溶液加入量为1毫升；微型超声波清洗器的容积为100毫升，超声波工作频率为40KHz，浸没温度为30℃。

(6)将上述(5)得到的MALDI样品靶盘平稳置于烘箱中保温后取出，通过MALDI样品靶盘表面均匀修饰的钛酸酯偶联剂，与相应悬浮溶液中杂原子纳米沸石分子筛晶体材料骨架结构中掺杂具有的铁-钛等金属杂原子间相互作用，在MALDI样品靶盘表面均匀修饰骨架结构中固定掺杂有铁-钛等金属杂原子的纳米沸石晶体材料。

所述的(6)中，烘箱预先升温至80-100℃，MALDI样品靶盘在其中保温5小时。

本发明制得的MALDI样品靶盘，可以直接富集鉴定目标样品体系中低丰度磷酸化肽/磷酸化蛋白质分子。

本发明根据已有技术，充分利用骨架结构中固定掺杂有铁-钛等金属活性位点的杂原子纳米沸石分子筛晶体材料所具有的独特优势：外表面丰富可控；孔道丰富均匀，刚性好，物理化学稳定性强；宏观形貌易调变；易衍生化等特殊性质。实验中，通过微观调控相应无机纳米分子筛组装体材料数量、形貌、结构组成等关键影响因素，利用一定的无机纳米组装技术，在MALDI不锈钢样品靶盘表面，均匀的固定修饰厚度适宜的骨架结构中固定掺杂铁-钛等杂原子的纳米沸石分子筛晶体材料。相应制备提供的新型MALDI功能样品靶盘，具有制作过程简单方便，重复性好，可有效满足应用MALDI-MS仪器直接富集鉴定复杂实际样品体系中可能存在的低丰度磷酸化蛋白质分子的需要。

附图说明

图1为本发明实施例采用的装置图

具体实施方式

下面结合附图对本发明的实施例作详细说明：本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

实例1-3：在相应纳米沸石分子筛的合成过程中，通过调变反应物FeCl₃溶液的配比加入量，以得到骨架结构中分别固定掺杂有0.1％，0.5％，1.0％，1.5％，2.0％，2.5％，3.0％，3.5％，4.0％，4.5％一系列不同比例铁金属元素的杂原子纳米沸石晶体材料(晶体尺寸大小约为250-300nm)，后根据发明技术方案(2)-(6)中所述具体技术路线，使合成得到的杂原子纳米沸石晶体材料，均匀修饰于MALDI不锈钢样品靶盘表面，以制备得到表面均匀修饰有骨架结构中掺杂不同比例铁金属原子的纳米沸石分子筛晶体材料的新型MALDI功能样品靶盘。后续利用该种新型MALDI功能样品靶盘，直接富集鉴定β酪蛋白酶解混合物中低丰度、质量数为2061的磷酸化肽的存在。从质谱分析结果，可以发现，实验中选择骨架结构中掺杂有3.5％铁金属原子的纳米沸石材料，而制备得到的MALDI样品功能靶盘，对于β酪蛋白酶解混合物中质量数为2061的磷酸化肽段，可以被有效的富集，背景信号干扰问题得到明显改善。

实例4：在相应纳米沸石分子筛的合成过程中，通过调变反应物GaCl₃溶液的配比加入量，得到骨架结构中分别固定掺杂有0.1％，0.5％，1.0％，1.5％，2.0％，2.5％，3.0％，3.5％，4.0％一系列不同比例镓元素的杂原子纳米沸石晶体材料(晶体尺寸大小约为250-500nm)，后根据发明技术方案(2)-(6)中所述具体技术路线，使骨架结构中固定掺杂有不同比例镓原子作为活性位点的纳米沸石晶体材料，均匀修饰于MALDI不锈钢样品靶盘表面，制备得到MALDI功能样品靶盘，直接富集鉴定β酪蛋白酶解混合物中低丰度、质量数为2061.062的磷酸化肽。相关的实验结果表明，选择骨架结构中固定掺杂3.5％镓原子的纳米沸石晶体材料，而制备得到的MALDI样品功能靶盘，可以有效地直接富集鉴定蛋白酶解混合物中低丰度磷酸化肽段。

实例5：通过调变相应纳米沸石分子筛合成反应混合物中铁源、钛源、镓源等杂原子物质组成比例，得到骨架结构中同时固定掺杂不同比例的铁-钛镓-钛双金属杂原子作为活性位点的纳米沸石晶体材料，根据发明技术方案(2)-(6)中所述具体技术路线，使上述合成得到的纳米沸石分子筛材料均匀修饰于MALDI不锈钢样品靶盘表面，制备得到MALDI功能样品靶盘，直接富集并同时鉴定β酪蛋白酶解混合物中低丰度、质量数为2061.062的磷酸化肽、及其它实际样品体系的蛋白酶解混合物中低丰度磷酸化肽段的存在。

实例6：在相应纳米沸石分子筛的合成过程中，通过改变水热合成反应的温度、反应的时间，而得到一系列不同晶体尺寸大小，骨架结构中固定掺杂有适宜比例的铁、钛原子作为活性位点的纳米沸石晶体材料。相关的实验结果表明，当选择水热合成反应温度为413K，反应时间为72小时的条件下，得到的相应纳米沸石分子筛晶体尺寸范围大约为350-500nm。从而，根据发明技术方案(2)-(6)中所述具体技术路线，使上述合成得到的尺寸范围为350-700nm的纳米沸石分子筛材料，均匀修饰于MALDI不锈钢样品靶盘表面，制备得到MALDI功能样品靶盘，其直接富集鉴定蛋白酶解混合物中低丰度磷酸化肽的效果令人满意。

实例7：根据合成得到的骨架结构中掺杂铁等元素作为活性位点的纳米沸石分子筛材料，利用pH值在8.0-9.0范围的甲酸-甲酸铵缓冲溶液，稀释得到一系列不同固液比例的纳米沸石晶体材料悬浮溶液，加入到MALDI样品靶盘的点样孔内，根据发明技术方案中所述的具体过程，制备得到一系列修饰有不同绝对量纳米沸石晶体材料的MALDI功能样品靶盘。实验结果表明，当使固液比例为0.1克纳米沸石材料/100毫升无水乙酸乙酯的纳米沸石分子筛悬浮溶液，通过无水乙酸乙酯稀释至1/10,0000倍时，相应制备得到的MALDI样品功能靶盘，在200倍放大倍数的偏振显微镜下观察发现，样品靶盘表面修饰的纳米晶体颗粒均匀有序，其直接富集鉴定蛋白酶解混合物中低丰度磷酸化肽段的效果令人满意。

实例8-9：通过控制微型超声波清洗器的水浴加热装置，使完全浸没于其中的盛装在微量自动点胶机的样品管中的相应纳米沸石分子筛材料形成的样品悬浮溶液，分别在25℃，30℃，35℃，40℃，45℃，50℃一系列不同温度条件下，加入到相应的MALDI点样孔内，以根据发明技术方案中所述具体技术路线，制备MALDI功能样品靶盘。实验结果表明，35℃为保证相应纳米沸石晶体材料均匀修饰于MALDI样品靶盘表面的适宜温度。相应得到的MALDI样品靶盘的点样孔内，均匀地修饰有厚度适宜、同时骨架结构中固定掺杂有铁-钛杂原子的纳米沸石晶体材料。

实例9-10：根据发明技术方案(1)-(6)中所述具体技术路线，从图1所示的具体实验装置图，使盛装有适宜浓度的相应纳米沸石分子筛材料悬浮溶液的商品化的微量自动点胶机的样品管，在现放置于相应的微型的超声波清洗器水浴中，在超声波工作频率为40KHz条件下，充分分散相应的纳米沸石晶体悬浮液，以保证加入到MALDI功能样品靶盘点样孔内的纳米晶体悬浮溶液满足：充分分散并完全除去其中可能存在的细小气泡的前提条件，以成功制备得到MALDI功能样品靶盘。

实例11-12：在1∶1比例组成的乙醇-丙酮有机溶剂中，反复利用超声波清洗器振荡清洗不锈钢材质的MALDI样品靶盘，后利用2mol/L稀盐酸水溶液在30℃水浴加热条件下，完全充分地浸渍相应的MALDI样品靶盘，持续时间约为7-8小时，然后取出MALDI样品靶盘，用洗耳球轻轻吹扫其表面可能存在的水份，后用二次去离子水反复冲洗MALDI样品靶盘，用洗耳球彻底吹扫样品靶盘表面水份后，100℃烘干，然后将其浸渍于钛酸酯偶联剂∶无水乙酸乙酯(体积比为1∶1000)的混合溶液中1h，后取出MALDI样品靶盘，室温下通风干燥，于烘箱中90℃保温以加热除去可能存在的低沸点乙酸乙酯；从而，在相应MALDI不锈钢样品靶盘表面均匀涂渍一层钛酸酯偶联剂。后根据实例(1)中第(5)-(6)步骤描述过程，成功地制备得到表面均匀修饰有杂原子纳米晶体材料的MALDI功能样品靶盘；

实例13：在相应纳米沸石分子筛的合成过程中，选择白炭黑为硅源，四乙基氢氧化胺为有机模板剂，在钛源参与下，加入氯化铁/氯化镓，于413K下水热晶化获得骨架结构中固定掺杂杂原子的纳米沸石分子筛；根据发明技术方案(2)-(6)中所述具体技术路线，使上述合成得到的尺寸范围为350-700nm的纳米沸石分子筛材料，均匀修饰于MALDI不锈钢样品靶盘表面，制备得到MALDI功能样品靶盘，其直接富集鉴定蛋白酶解混合物中低丰度磷酸化肽的效果令人满意。

实例14：在相应纳米沸石分子筛的合成过程中，选择白炭黑为硅源，四丙基氢氧化胺为有机模板剂，在钛源参与下，加入氯化铁/氯化镓，于413K下水热晶化获得骨架结构中固定掺杂杂原子的纳米沸石分子筛；根据发明技术方案(2)-(6)中所述具体技术路线，使上述合成得到的尺寸范围为350-700nm的纳米沸石分子筛材料，均匀修饰于MALDI不锈钢样品靶盘表面，制备得到MALDI功能样品靶盘，其直接富集鉴定蛋白酶解混合物中低丰度磷酸化肽的效果令人满意。

实例15：选择钛酸正四丁酯作为钛酸酯偶联剂，预先处理MALDI不锈钢样品靶盘表面。根据发明技术方案(2)-(6)中所述具体技术路线，使相应杂原子纳米沸石分子筛晶体材料，均匀修饰于MALDI不锈钢样品靶盘表面，制备得到MALDI功能样品靶盘，其直接富集鉴定蛋白酶解混合物中低丰度磷酸化肽的效果令人满意。

实例16：选择单烷氧基脂肪酸钛酸酯作为钛酸酯偶联剂，预先处理MALDI不锈钢样品靶盘表面。根据发明技术方案(2)-(6)中所述具体技术路线，使相应杂原子纳米沸石分子筛晶体材料，均匀修饰于MALDI不锈钢样品靶盘表面，制备得到MALDI功能样品靶盘，其直接富集鉴定蛋白酶解混合物中低丰度磷酸化肽的效果令人满意。

实例17：选择单烷氧基不饱和脂肪酸钛酸酯作为钛酸酯偶联剂，预先处理MALDI不锈钢样品靶盘表面。根据发明技术方案(2)-(6)中所述具体技术路线，使相应杂原子纳米沸石分子筛晶体材料，均匀修饰于MALDI不锈钢样品靶盘表面，制备得到MALDI功能样品靶盘，其直接富集鉴定蛋白酶解混合物中低丰度磷酸化肽的效果令人满意。

实例18：根据发明技术方案(1)-(6)中所述具体技术路线，使普通的实验室用烘箱预先升温至80℃后，将MALDI样品靶盘的点样孔内逐一加入相应纳米晶体悬浮溶液，后平稳转移置于烘箱中，持续在80℃下保温5小时后取出，以成功得到表面均匀修饰杂原子纳米晶体材料的MALDI功能样品靶盘。

实例19-20：根据制备得到的MALDI功能样品靶盘，点加蛋白酶解混合肽段，选择DHA为MALDI-TOF-MS过程中使用的基质小分子，利用乙腈-乙酸混合溶液，淋洗除去样品靶盘表面非特异性结合的非磷酸化肽段，以直接富集鉴定鸡卵高磷蛋白、β酪蛋白等蛋白酶解产物中的磷酸化肽，并利用MALDI-TOF-MS鉴定相应蛋白质分子结构中磷酸化位点的存在。

Claims

1、一种基质辅助激光解吸质谱样品功能靶盘制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)通过水热合成法制备获得骨架结构中固定掺杂杂原子的纳米沸石分子筛，利用去离子水反复漂洗，至相应样品悬浮溶液近中性后，烘干，焙烧，后浸渍于无水处理过的乙酸乙酯中，超声分散以备待用；

(2)取上述悬浮溶液烘干，根据所得纳米沸石分子筛材料的净重量，确定该材料悬浮溶液中的初始固/液间比例为0.1克纳米沸石材料/100毫升乙酸乙酯；

(3)利用乙酸乙酯稀释上述(2)得到的材料悬浮溶液至原来的1/10，0000-1/10000倍；

(4)在1∶1体积比组成的乙醇-丙酮有机溶剂中，反复利用超声波清洗器振荡清洗基质辅助激光解吸质谱样品靶盘，后利用盐酸水溶液在水浴条件下浸渍基质辅助激光解吸质谱样品靶盘，取出基质辅助激光解吸质谱样品靶盘后用二次去离子水反复冲洗，用洗耳球吹扫表面水份后，烘干，后浸渍于钛酸酯偶联剂和无水乙酸乙酯的混合溶液中，后取出基质辅助激光解吸质谱样品靶盘，室温下通风干燥，于烘箱中保温除去可能存在的低沸点乙酸乙酯；

(5)在微型点胶机的样品管内，加入上述(3)稀释得到的纳米沸石晶体材料悬浮溶液，使样品管充分浸没在微型超声波清洗器中，通过超声波分散纳米沸石晶体材料，并除去溶液中的细小气泡，然后在保持纳米沸石晶体材料悬浮溶液充分分散的状态下，逐一快速加入到基质辅助激光解吸质谱样品靶盘的点样孔内；

(6)将上述(5)得到的基质辅助激光解吸质谱样品靶盘平稳置于烘箱中保温后取出，通过基质辅助激光解吸质谱样品靶盘表面均匀修饰的钛酸酯偶联剂，与相应悬浮溶液中杂原子纳米沸石分子筛晶体材料骨架结构中掺杂具有的金属杂原子间相互作用，在基质辅助激光解吸质谱样品靶盘表面均匀修饰骨架结构中掺杂有金属杂原子的纳米沸石晶体材料。

2、根据权利要求1所述的一种基质辅助激光解吸质谱样品功能靶盘的制备方法，其特征是，所述的(1)中，通过水热合成法制备获得骨架结构中固定掺杂杂原子的纳米沸石分子筛，具体为：

3、根据权利要求1所述的一种基质辅助激光解吸质谱样品功能靶盘的制备方法，其特征是，所述的(1)中，烘干温度为100℃。

4、根据权利要求1所述的一种基质辅助激光解吸质谱样品功能靶盘的制备方法，其特征是，所述的(1)中，焙烧是指：在550℃焙烧3-4h。

5、根据权利要求1所述的一种基质辅助激光解吸质谱样品功能靶盘制备方法，其特征是，所述的(4)中，利用盐酸水溶液在水浴条件下浸渍基质辅助激光解吸质谱样品靶盘，其中：盐酸水溶液的浓度为2mol/L，水浴温度为30℃，浸渍持续时间为7-8小时。

6、根据权利要求1所述的一种基质辅助激光解吸质谱样品功能靶盘制备方法，其特征是，所述的(4)中，浸渍于钛酸酯偶联剂和无水乙酸乙酯的混合溶液，其中：钛酸酯偶联剂和无水乙酸乙酯的混合溶液中钛酸酯偶联剂和无水乙酸乙酯的体积比为1∶1000-5∶1000；浸渍时间为1小时。

7、根据权利要求1或6所述的一种基质辅助激光解吸质谱样品功能靶盘制备方法，其特征是，所选择使用的钛酸酯偶联剂包括钛酸正四丁酯、单烷氧基脂肪酸钛酸酯、单烷氧基不饱和脂肪酸钛酸酯中的一种。

8、根据权利要求1所述的一种基质辅助激光解吸质谱样品功能靶盘制备方法，其特征是，所述的(4)中，烘干温度为100℃，保温温度为80-100℃。

9、根据权利要求1所述的一种基质辅助激光解吸质谱样品功能靶盘的制备方法，其特征是，所述的(5)中，稀释得到的纳米沸石晶体材料悬浮溶液加入量为1毫升；微型超声波清洗器的容积为100毫升，超声波工作频率为40KHz，浸没温度为30℃。

10、根据权利要求1所述的一种基质辅助激光解吸质谱样品功能靶盘的制备方法，其特征是，所述的(6)中，烘箱预先升温至80-100℃，基质辅助激光解吸质谱样品靶盘在其中保温5小时。