CN100999755A - 一种制备异甘草次苷的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种制备异甘草次苷的方法，其包括将18α－甘草酸配制成溶液作为生物转化底物，加入酶制剂于适宜的条件下反应，生成异甘草次苷。反应结束后，用正丁醇萃取，大孔吸附树脂分离纯化、重结晶的方法得到高纯度异甘草次苷。该方法用于异甘草次苷的制备，具有工艺操作简单、成本低的特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种制备化合物异甘草次苷的方法。
背景技术
异甘草次苷，又名18α-单葡萄糖醛酸基甘草次酸(3β-D-monoglucuronyl-18α-glycyrrhetinic acid)，分子式为C36H54O10，分子量646.8。异甘草次苷是甘草次苷的差向异构体，两者的结构差异在于C-18位氢的构型，结构式如下图：
异甘草次苷是甘草酸的衍生物，由甘草酸C-18位氢差向异构体(18α-甘草酸)水解失去一个葡萄糖醛酸基得到。异甘草次苷具有较强的甜味性能，其甜度为甘草酸的5-6倍，且具有相似的口感。目前，有关异甘草次苷的制备方法尚未有报道。根据其结构特点，异甘草次苷可通过18α-甘草酸在酶催化作用下制备得到或由18α-甘草次酸化学合成得到。
发明内容
本发明的目的是为了提供一种制备异甘草次苷的方法，获得经济实用、工艺简单、高质量的异甘草次苷的制备方法。
为了达到上述目的，本发明提供的异甘草次苷的制备方法，其根据是在β-葡萄糖醛酸苷酶作用下水解18α-甘草酸的两个糖苷间的β-1，2-糖苷键，得到异甘草次苷。其制备方法包括以下连续步骤：
(1)将18α-甘草酸配制成底物溶液，控制其pH值在4-9；
(2)将β-葡萄糖醛酸苷酶加入到生物转化的底物溶液中，适宜的条件下反应生成异甘草次苷；所述的适宜的条件为温度20-70℃，优选范围为40-60℃。所述反应可在常规设备，如三角瓶，烧杯，或者生物反应器中进行。反应时间为0.5-120h，优选值为12-48h。
(3)从第(2)步所得产物中分离出异甘草次苷。
所述第(1)步中18α-甘草酸可以是市售产品或以其它方法得到的，其溶液浓度为0.05-100g/L，优选范围为10-50g/L。所述18α-甘草酸溶液的pH值优选范围为5.5-6.5。所述pH的控制可以通过缓冲溶液控制，或者用无机碱性化合物，如氢氧化钠或氢氧化钾调节pH值。
所述第(2)步中使用的β-葡萄糖醛酸苷酶可以为以下几种：新鲜动物肝脏，如鸡、鸭、鹅等禽类或猪的肝脏为原料得到的粗酶制剂；黑曲霉，酵母，细菌等微生物米源的粗酶；市售的含β-葡萄糖醛酸苷酶的酶产品。
所述第(3)步所述的分离方法可以为常规或已知的分离方法，其步骤为：
(i)将第(2)步所得的产物中不溶性沉淀物除去；
(ii)用有机溶剂萃取所得第(i)步溶液，萃取后除去有机溶剂；
(iii)将第(ii)步所得物用酸或醇重结晶；
所述第(i)步除不溶性物质的方法可以为抽滤或离心后取上清，其离心的条件为8000rpm，15min。
所述第(ii)步中有机溶剂为正丁醇或乙酸乙酯，萃取后溶剂用减压蒸馏除去。
所述第(iii)步中酸可以为乙酸或可用于重结晶异甘草次苷的其他的酸，所述醇可以是甲醇、乙醇或可用于重结晶异甘草次苷的其他的醇。重结晶的方法可以为常规或已知方法，可以进行一次或一次以上，以得到满意的纯度。
本发明以酶法催化18α-甘草酸制备异甘草次苷，过程简单易操作，避免了化学合成中步骤长、成本高等缺点。所得异甘草次苷为新化合物，具有较高的甜味性能以及抗炎、抗过敏、抗癌症等生理活性的物质，有望开发成新型抗肝炎药物，同时在食品工业以及日用化工业也有一定的应用。
下面通过具体实施例对本发明技术内容作进一步描述。
具体实施方式
实施例1
在50mL的具塞三角瓶中，加入10mL的10g/L的18α-甘草酸溶液(pH6.0)，再加入1mL由猪肝所得的粗酶液，盖紧磨口瓶塞，在45℃、120r/min的水浴摇床上反应24h。反应结束后，加入相同体积的甲醇，过滤除去不溶性沉淀，HPLC法测定反应液中异甘草次苷含量为73％，18α-甘草酸转化率为85％。
实施例2
采用实施例1中相同的方法，反应结束后调节反应液pH值为2-3， 用正丁醇萃取3-5次，合并有机相，旋转蒸发除去溶剂，得到粗异甘草次苷0.062g，HPLC法测定其纯度为82％。
实施例3
在100mL的具塞三角瓶中，加入20mL的20g/L的18α-甘草酸溶液(pH6.0)以及5mL含黑曲霉的发酵液，50℃、120rpm的水浴摇床中反应48h。反应结束后，将反应液用乙酸乙酯萃取3-5次，合并有机相，旋转蒸发仪除去溶剂，得到异甘草次苷0.23g，HPLC法测定其纯度为86％。
实施例4
在5L的烧杯中，加水4L，18α-甘草酸200g，用NaOH调节pH为6.0，加入由鸭肝所制备的酶粉20g，于55℃在转速为200r/min的搅拌作用下进行酶促反应。反应72h后，甘草酸的转化率为90％。在90℃加热反应液使酶变性，产生大浪絮凝物并过滤除去。滤液用喷雾干燥，得粗异甘草次苷186g，HPLC测定其纯度为78％。
Claims (10)
1.一种制备异甘草次苷的方法，包括以下连续步骤：
(1)将18α-甘草酸配制成水溶液作为生物转化底物；
(2)将含β-葡萄糖醛酸苷酶的酶制剂加入(1)的底物溶液进行转化反应，在反应温度为10-80℃，反应的pH为4-9，反应时间为0.5-120h的条件下，得到含异甘草次苷反应转化液。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于β-葡萄糖醛酸苷酶为由新鲜的动物肝脏，包括鸡、鸭、鹅、猪肝脏组织所制备的粗酶制剂或者由含β-葡萄糖醛酸苷酶的发酵液作为粗酶，其发酵所用微生物包括黑曲酶、米曲霉等或者为市售的含β-葡萄糖醛酸苷酶的酶制剂。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于18α-甘草酸的浓度为0.05-100g/L。
4.根据权利要求3所述方法，其特征在于18α-甘草酸的浓度为10-50g/L。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于反应温度为40-60℃。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于反应的pH为5.5-6.5。
7.根据权利要求1所述方法，其特征在于反应时间为12-48h。
8.根据权利要求1所述方法，其特征在于用有机溶剂萃取法从反应转化液中提取异甘草次苷。
9.根据权利要求8所述方法，其特征在于提取异甘草次苷的步骤为：
(i)将第(2)步所得产物中不溶性沉淀物除去；
(ii)用有机溶剂萃取第(i)步溶液，萃取后除去有机溶剂；
(iii)将第(ii)步所得物用酸或醇重结晶。
10.根据权利要求9所述方法，其特征在于所述第(i)步除不溶性物质的方法为抽滤或离心后取上清；所述第(ii)步中有机溶剂为正丁醇或乙酸乙酯，萃取后溶剂用减压蒸馏除去；所述第(iii)步中酸为乙酸或可用于重结晶异甘草次苷的其他的酸，所述醇是甲醇、乙醇或可用于重结品异甘草次苷的其他的醇，重结晶的方法为常规或已知方法，可以进行一次或一次以上。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102584930A (zh) * | 2012-01-17 | 2012-07-18 | 北京大学 | 刺囊酸衍生物及其生物转化方法和用途 |
| CN109486895A (zh) * | 2018-12-04 | 2019-03-19 | 南京工业大学 | 一种催化拆分制备异甘草酸的方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Open date: 20070718 |