CN100999755A - 一种制备异甘草次苷的方法 - Google Patents
一种制备异甘草次苷的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN100999755A CN100999755A CN 200610161301 CN200610161301A CN100999755A CN 100999755 A CN100999755 A CN 100999755A CN 200610161301 CN200610161301 CN 200610161301 CN 200610161301 A CN200610161301 A CN 200610161301A CN 100999755 A CN100999755 A CN 100999755A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- isoglycyrdeuteroside
- reaction
- described method
- alpha
- beta
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- DXDRHHKMWQZJHT-FPYGCLRLSA-N isoliquiritigenin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1\C=C\C(=O)C1=CC=C(O)C=C1O DXDRHHKMWQZJHT-FPYGCLRLSA-N 0.000 title abstract 5
- JBQATDIMBVLPRB-UHFFFAOYSA-N isoliquiritigenin Natural products OC1=CC(O)=CC=C1C1OC2=CC(O)=CC=C2C(=O)C1 JBQATDIMBVLPRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract 5
- 235000008718 isoliquiritigenin Nutrition 0.000 title abstract 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 5
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 claims description 8
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 claims description 8
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 7
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 claims description 7
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 6
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 241000272814 Anser sp. Species 0.000 claims description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 2
- 101001091385 Homo sapiens Kallikrein-6 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100034866 Kallikrein-6 Human genes 0.000 claims description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 claims description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 claims description 2
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 claims description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 2
- 208000012839 conversion disease Diseases 0.000 claims 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims 2
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 claims 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 claims 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims 1
- LPLVUJXQOOQHMX-IOHDZAKGSA-N (2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4s,5s,6s)-2-[[(3s,4ar,6ar,6bs,8as,11s,12as,14ar,14bs)-11-carboxy-4,4,6a,6b,8a,11,14b-heptamethyl-14-oxo-2,3,4a,5,6,7,8,9,10,12,12a,14a-dodecahydro-1h-picen-3-yl]oxy]-6-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-c Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-IOHDZAKGSA-N 0.000 abstract 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 abstract 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 abstract 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 abstract 1
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical class O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- MPDGHEJMBKOTSU-YKLVYJNSSA-N 18beta-glycyrrhetic acid Chemical compound C([C@H]1C2=CC(=O)[C@H]34)[C@@](C)(C(O)=O)CC[C@]1(C)CC[C@@]2(C)[C@]4(C)CC[C@@H]1[C@]3(C)CC[C@H](O)C1(C)C MPDGHEJMBKOTSU-YKLVYJNSSA-N 0.000 description 2
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 2
- YVECGMZCTULTIS-PBXRRBTRSA-N glucal Chemical compound OC[C@H]1OC=C[C@@H](O)[C@@H]1O YVECGMZCTULTIS-PBXRRBTRSA-N 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 235000019605 sweet taste sensations Nutrition 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- NWJZWHGSBTVTGM-UHFFFAOYSA-N 1-[bis(aziridin-1-yl)phosphoryl]-3-phenylurea Chemical compound C1CN1P(=O)(N1CC1)NC(=O)NC1=CC=CC=C1 NWJZWHGSBTVTGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241001411320 Eriogonum inflatum Species 0.000 description 1
- MPDGHEJMBKOTSU-UHFFFAOYSA-N Glycyrrhetinsaeure Natural products C12C(=O)C=C3C4CC(C)(C(O)=O)CCC4(C)CCC3(C)C1(C)CCC1C2(C)CCC(O)C1(C)C MPDGHEJMBKOTSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 229960003720 enoxolone Drugs 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003810 ethyl acetate extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 1
- 150000008131 glucosides Chemical class 0.000 description 1
- HLDYLAJAWSKPFZ-QDPIGISRSA-N glycyrrhetic acid 3-O-glucuronide Chemical compound O([C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HLDYLAJAWSKPFZ-QDPIGISRSA-N 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种制备异甘草次苷的方法,其包括将18α-甘草酸配制成溶液作为生物转化底物,加入酶制剂于适宜的条件下反应,生成异甘草次苷。反应结束后,用正丁醇萃取,大孔吸附树脂分离纯化、重结晶的方法得到高纯度异甘草次苷。该方法用于异甘草次苷的制备,具有工艺操作简单、成本低的特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种制备化合物异甘草次苷的方法。
背景技术
异甘草次苷,又名18α-单葡萄糖醛酸基甘草次酸(3β-D-monoglucuronyl-18α-glycyrrhetinic acid),分子式为C36H54O10,分子量646.8。异甘草次苷是甘草次苷的差向异构体,两者的结构差异在于C-18位氢的构型,结构式如下图:
异甘草次苷是甘草酸的衍生物,由甘草酸C-18位氢差向异构体(18α-甘草酸)水解失去一个葡萄糖醛酸基得到。异甘草次苷具有较强的甜味性能,其甜度为甘草酸的5-6倍,且具有相似的口感。目前,有关异甘草次苷的制备方法尚未有报道。根据其结构特点,异甘草次苷可通过18α-甘草酸在酶催化作用下制备得到或由18α-甘草次酸化学合成得到。
发明内容
本发明的目的是为了提供一种制备异甘草次苷的方法,获得经济实用、工艺简单、高质量的异甘草次苷的制备方法。
为了达到上述目的,本发明提供的异甘草次苷的制备方法,其根据是在β-葡萄糖醛酸苷酶作用下水解18α-甘草酸的两个糖苷间的β-1,2-糖苷键,得到异甘草次苷。其制备方法包括以下连续步骤:
(1)将18α-甘草酸配制成底物溶液,控制其pH值在4-9;
(2)将β-葡萄糖醛酸苷酶加入到生物转化的底物溶液中,适宜的条件下反应生成异甘草次苷;所述的适宜的条件为温度20-70℃,优选范围为40-60℃。所述反应可在常规设备,如三角瓶,烧杯,或者生物反应器中进行。反应时间为0.5-120h,优选值为12-48h。
(3)从第(2)步所得产物中分离出异甘草次苷。
所述第(1)步中18α-甘草酸可以是市售产品或以其它方法得到的,其溶液浓度为0.05-100g/L,优选范围为10-50g/L。所述18α-甘草酸溶液的pH值优选范围为5.5-6.5。所述pH的控制可以通过缓冲溶液控制,或者用无机碱性化合物,如氢氧化钠或氢氧化钾调节pH值。
所述第(2)步中使用的β-葡萄糖醛酸苷酶可以为以下几种:新鲜动物肝脏,如鸡、鸭、鹅等禽类或猪的肝脏为原料得到的粗酶制剂;黑曲霉,酵母,细菌等微生物米源的粗酶;市售的含β-葡萄糖醛酸苷酶的酶产品。
所述第(3)步所述的分离方法可以为常规或已知的分离方法,其步骤为:
(i)将第(2)步所得的产物中不溶性沉淀物除去;
(ii)用有机溶剂萃取所得第(i)步溶液,萃取后除去有机溶剂;
(iii)将第(ii)步所得物用酸或醇重结晶;
所述第(i)步除不溶性物质的方法可以为抽滤或离心后取上清,其离心的条件为8000rpm,15min。
所述第(ii)步中有机溶剂为正丁醇或乙酸乙酯,萃取后溶剂用减压蒸馏除去。
所述第(iii)步中酸可以为乙酸或可用于重结晶异甘草次苷的其他的酸,所述醇可以是甲醇、乙醇或可用于重结晶异甘草次苷的其他的醇。重结晶的方法可以为常规或已知方法,可以进行一次或一次以上,以得到满意的纯度。
本发明以酶法催化18α-甘草酸制备异甘草次苷,过程简单易操作,避免了化学合成中步骤长、成本高等缺点。所得异甘草次苷为新化合物,具有较高的甜味性能以及抗炎、抗过敏、抗癌症等生理活性的物质,有望开发成新型抗肝炎药物,同时在食品工业以及日用化工业也有一定的应用。
下面通过具体实施例对本发明技术内容作进一步描述。
具体实施方式
实施例1
在50mL的具塞三角瓶中,加入10mL的10g/L的18α-甘草酸溶液(pH6.0),再加入1mL由猪肝所得的粗酶液,盖紧磨口瓶塞,在45℃、120r/min的水浴摇床上反应24h。反应结束后,加入相同体积的甲醇,过滤除去不溶性沉淀,HPLC法测定反应液中异甘草次苷含量为73%,18α-甘草酸转化率为85%。
实施例2
采用实施例1中相同的方法,反应结束后调节反应液pH值为2-3, 用正丁醇萃取3-5次,合并有机相,旋转蒸发除去溶剂,得到粗异甘草次苷0.062g,HPLC法测定其纯度为82%。
实施例3
在100mL的具塞三角瓶中,加入20mL的20g/L的18α-甘草酸溶液(pH6.0)以及5mL含黑曲霉的发酵液,50℃、120rpm的水浴摇床中反应48h。反应结束后,将反应液用乙酸乙酯萃取3-5次,合并有机相,旋转蒸发仪除去溶剂,得到异甘草次苷0.23g,HPLC法测定其纯度为86%。
实施例4
在5L的烧杯中,加水4L,18α-甘草酸200g,用NaOH调节pH为6.0,加入由鸭肝所制备的酶粉20g,于55℃在转速为200r/min的搅拌作用下进行酶促反应。反应72h后,甘草酸的转化率为90%。在90℃加热反应液使酶变性,产生大浪絮凝物并过滤除去。滤液用喷雾干燥,得粗异甘草次苷186g,HPLC测定其纯度为78%。
Claims (10)
1.一种制备异甘草次苷的方法,包括以下连续步骤:
(1)将18α-甘草酸配制成水溶液作为生物转化底物;
(2)将含β-葡萄糖醛酸苷酶的酶制剂加入(1)的底物溶液进行转化反应,在反应温度为10-80℃,反应的pH为4-9,反应时间为0.5-120h的条件下,得到含异甘草次苷反应转化液。
2.根据权利要求1所述方法,其特征在于β-葡萄糖醛酸苷酶为由新鲜的动物肝脏,包括鸡、鸭、鹅、猪肝脏组织所制备的粗酶制剂或者由含β-葡萄糖醛酸苷酶的发酵液作为粗酶,其发酵所用微生物包括黑曲酶、米曲霉等或者为市售的含β-葡萄糖醛酸苷酶的酶制剂。
3.根据权利要求1所述方法,其特征在于18α-甘草酸的浓度为0.05-100g/L。
4.根据权利要求3所述方法,其特征在于18α-甘草酸的浓度为10-50g/L。
5.根据权利要求1所述方法,其特征在于反应温度为40-60℃。
6.根据权利要求1所述方法,其特征在于反应的pH为5.5-6.5。
7.根据权利要求1所述方法,其特征在于反应时间为12-48h。
8.根据权利要求1所述方法,其特征在于用有机溶剂萃取法从反应转化液中提取异甘草次苷。
9.根据权利要求8所述方法,其特征在于提取异甘草次苷的步骤为:
(i)将第(2)步所得产物中不溶性沉淀物除去;
(ii)用有机溶剂萃取第(i)步溶液,萃取后除去有机溶剂;
(iii)将第(ii)步所得物用酸或醇重结晶。
10.根据权利要求9所述方法,其特征在于所述第(i)步除不溶性物质的方法为抽滤或离心后取上清;所述第(ii)步中有机溶剂为正丁醇或乙酸乙酯,萃取后溶剂用减压蒸馏除去;所述第(iii)步中酸为乙酸或可用于重结晶异甘草次苷的其他的酸,所述醇是甲醇、乙醇或可用于重结品异甘草次苷的其他的醇,重结晶的方法为常规或已知方法,可以进行一次或一次以上。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 200610161301 CN100999755A (zh) | 2006-12-20 | 2006-12-20 | 一种制备异甘草次苷的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 200610161301 CN100999755A (zh) | 2006-12-20 | 2006-12-20 | 一种制备异甘草次苷的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN100999755A true CN100999755A (zh) | 2007-07-18 |
Family
ID=38258580
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN 200610161301 Pending CN100999755A (zh) | 2006-12-20 | 2006-12-20 | 一种制备异甘草次苷的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN100999755A (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102584930A (zh) * | 2012-01-17 | 2012-07-18 | 北京大学 | 刺囊酸衍生物及其生物转化方法和用途 |
CN109486895A (zh) * | 2018-12-04 | 2019-03-19 | 南京工业大学 | 一种催化拆分制备异甘草酸的方法 |
-
2006
- 2006-12-20 CN CN 200610161301 patent/CN100999755A/zh active Pending
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102584930A (zh) * | 2012-01-17 | 2012-07-18 | 北京大学 | 刺囊酸衍生物及其生物转化方法和用途 |
CN109486895A (zh) * | 2018-12-04 | 2019-03-19 | 南京工业大学 | 一种催化拆分制备异甘草酸的方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102268490B (zh) | 农林废弃物为原料联产木糖、木糖醇和阿拉伯糖清洁工艺 | |
CN101899484B (zh) | 一种京尼平的制备方法 | |
CN103352062B (zh) | 一种制备单葡萄糖醛酸基甘草次酸的方法 | |
JP6861202B2 (ja) | 発酵によるバニリンの改良された製造 | |
CN107418995A (zh) | 一种石榴皮单宁液态发酵制备的鞣花酸及其制备方法 | |
CN100999755A (zh) | 一种制备异甘草次苷的方法 | |
CN112047828B (zh) | 一种生物化学法制备原儿茶酸的方法 | |
CN1165610C (zh) | 一种黑曲霉菌及用其生产香草酸和香草醛的微生物转化方法 | |
CN102250980A (zh) | 一种茶黄素产品的提制工艺 | |
CN105732373B (zh) | 一种制备(r)‑2‑羟基‑4‑苯基丁酸乙酯的方法 | |
CN104480075A (zh) | 一种催化合成丙谷二肽的生物酶及其制备方法和应用 | |
CN101709322B (zh) | 生物催化白桦脂醇合成白桦脂酸的方法 | |
CN101284858A (zh) | 人参二醇组皂苷微生物转化产物及其制备方法 | |
CN111485012B (zh) | 一种甘草发酵制备单葡萄糖醛酸甘草次酸的方法 | |
CN103539657A (zh) | 一种栀子来源的藏红花酸的制备方法 | |
CN103361394A (zh) | 利用微生物转化制备9α-羟基-雄烯二酮的方法 | |
CN1687239A (zh) | 一种番茄红素结晶及其浓缩物的制备方法 | |
CN103305495B (zh) | 一种制备谷氨酸脱羧酶的方法 | |
CN102584920A (zh) | 弗氏链霉菌发酵生产泰乐菌素的培养基及发酵方法 | |
CN109295120A (zh) | 一种利用青霉菌生物转化玉米须获得黄酮的方法 | |
CN108911962A (zh) | 一种从酶解液中高效提取d-泛解酸的方法 | |
CN104561160A (zh) | 生物法制备茶氨酸的方法 | |
CN101624612B (zh) | 固定化扩展青霉脂肪酶催化合成糖苷酯类化合物的方法 | |
CN110305913B (zh) | 一种糖质原料生产四甲基吡嗪的方法 | |
CN104017838A (zh) | 一种2-甲基-l-色氨酸的酶法转化制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Open date: 20070718 |