CN100589812C - 冬虫夏草菌丝体抽提物的分离物及经口摄取用组合物 - Google Patents

冬虫夏草菌丝体抽提物的分离物及经口摄取用组合物 Download PDF

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Abstract

本发明的目的是提供含有冬虫夏草中所含的有效成分的分离物。另外，提供用于免疫激活的有效手段，及对癌症有效的预防手段或治疗手段，还提供在健康食品的制造中有用的组合物。本发明提供通过向冬虫夏草菌丝体热水抽提而得的抽提液中加入乙醇所得到的沉淀部分。进而提供含有该沉淀部分的经口摄取用组合物。另外通过本发明提供含有经口摄取用组合物的饮食品、免疫激活剂、抗癌剂等，该经口摄取用组合物的特征为，具有抗癌作用、预防癌症作用或免疫激活作用。进而通过本发明，还提供上述经口摄取用组合物的有效制造方法。

Description

冬虫夏草菌丝体抽提物的分离物及经口摄取用组合物
技术领域
本发明涉及具有药理效果的源自冬虫夏草的分离物及该分离物的制造方法。本发明进一步涉及含有该分离物的经口摄取组合物、医药组合物、饮食品组合物，或具有免疫激活效果的和/或用于预防或治疗癌症的医药品、医药外部品、饮食品等。
背景技术
冬虫夏草是由昆虫等生成的菌的总称，处于子囊菌类·麦角菌目·麦角菌科的一属。其中中华虫草(Cordyceps sinensis(Berkely)Saccardo)寄生于鳞翅类蝙蝠蛾的幼虫上，是分布于中国、西藏、尼泊尔、喜马拉雅的高山地带、海拔3000～4000米的荒草原上的菌。在中国自古以来就作为长生不老、强精壮骨的中药而倍受珍视、传承下来。近年来，通过研究知道了冬虫夏草中所含的成分具有各种各样的生理活性，对于免疫激活效果、抗肿瘤活性、降低血糖值作用、降血压作用及血管扩张作用进行了报道(参照非专利文献1～6)。关注这样的生理活性，为了有效地摄取有效成分也作出了尝试(参照专利文献1)，但是对于抽提物中的有效成分的含量及活性方面还很难说非常充分。
另外，随着近年来培养技术的进步，可以生产出与天然物几乎相同的冬虫夏草的菌丝体培养物。因而与过去利用的子实体的部分相比，冬虫夏草的菌丝体更适合作为在工业生产上的原料。因此，利用该菌丝体培养物，用于高效抽提含有冬虫夏草的有效成分的部分的方法正被探求。
专利文献1：特开平11-228440号公报
非专利文献1：Biol.Pharm.Bull.，第22卷(第9号)，第966-970页，1990年
非专利文献2：Jpn.J.Pharmacol.，第79卷，第505-508页，1999年
非专利文献3：J.Kanazawa Med.Univ.，第16卷，第46-54页，1991年
非专利文献4：Biol.Pharm.Bull.，第16卷(第12号)，第1291-1293页，1993年
非专利文献5：Phytochemistry，第51卷，第891-898页，1999年
非专利文献6：Life Science，第66卷(第14号)，第1369-1376页，2000年
发明内容
本发明人为解决所述问题进行了精心的研究，结果发现特异性地具有生理活性的冬虫夏草菌丝体的分离物的调制方法。
本发明的目的是提供具有免疫激活效果和/或预防或治疗癌症的效果的源自冬虫夏草菌丝体的分离物，及含有该分离物的经口摄取用组合物，以及含有该经口摄取组合物的饮食品、免疫激活剂、抗癌剂及癌症预防剂。
即通过本发明的一个侧面，可以提供沉淀部分，该沉淀部分是通过在热水抽提冬虫夏草菌丝体而得的抽提液中加入乙醇而得到的。在此加入的乙醇的量，可以是例如相对于上述抽提液的容积比为0.5～2.0倍的量。
通过本发明的其他侧面，在上述抽提液中加入相对于所述抽提液的容积比为0.5～2.0倍量的乙醇，去除生成的沉淀部分，将上清液作为得到的抽提液，向其中进一步加入使得该抽提液含有的乙醇量按容积比计为70％～90％的量的乙醇，从而提供所得到的沉淀部分。
通过本发明的其他侧面提供沉淀部分，所述沉淀部分是在冬虫夏草菌丝体的热水抽提液和/或该抽提液中加入一定量的乙醇，得到去除了生成的沉淀部分的上清液，在加入乙醇之前对其进行浓缩，然后再向其中加入乙醇，从而得到的沉淀。通过本发明的其他侧面提供，作为预处理将用乙醇进行加热抽提而得的残渣作为上述冬虫夏草菌丝体，通过在经热水抽提而得的抽提液中加入乙醇而得到的沉淀部分。进而，通过本发明的其他侧面提供以含有具有10万或更高的分子量的多糖类为特征的上述沉淀部分。进而通过本发明的其他侧面，提供以对于哺乳类具有促进干扰素-γ(IFN-γ)或肿瘤坏死因子-α(TNF-α)产生的活性为特征的上述沉淀部分。
通过本发明的其他侧面，提供通过将上述沉淀部分进一步用透析进行分子量分离而得到的分子量为10万或更高的部分。
通过本发明的其他侧面，提供含有上述沉淀部分或分子量为10万或更高的部分的经口摄取用组合物。通过本发明的其他侧面，还提供含有上述经口摄取用组合物的饮食品。进而，通过本发明的其他侧面，提供含有上述经口摄取用组合物的免疫激活剂。进一步地，通过本发明的其他侧面，提供含有上述经口摄取用组合物的抗癌剂或癌症预防剂。
通过本发明的进一步的其他的侧面，还提供上述部分的制造方法，该方法含有以下工序，
a)将冬虫夏草菌丝体在85～100℃下用水进行加热抽提，得到抽提液的工序；
b)在抽提液中加入相对于所述抽提液的容积比为0.5～2.0倍量的乙醇，回收产生的沉淀的工序。
进一步通过本发明的其他的侧面，还提供上述部分的制造方法，该方法含有以下工序，
a)将冬虫夏草菌丝体在85～100℃下用水进行加热抽提，得到抽提液的工序；
b)在抽提液中加入相对于所述抽提液的容积比为0.5～2.0倍量的乙醇，将产生的沉淀去除、回收上清液的工序；
c)通过进一步在所述上清液中加入使得上清液含有的乙醇量按容积比计为70％～90％的量的乙醇，从而回收得到的沉淀的工序。
以下进一步具体说明本发明
本发明中的冬虫夏草是指子囊菌类·麦角菌目·麦角菌科的一属，例如中华虫草(Cordyceps sinensis(Berkely)Saccardo)。
本发明中的冬虫夏草菌丝体可以是由培养生产的物质，也可以是由自然获取的物质，例如可以使用培养物的干燥粉末等。
本发明中进行的热水抽提，例如在液体温度70～120℃下进行。优选温度为85～100℃，更优选90～95℃。抽提时间例如为1小时～24小时，优选2～12小时，更优选3～7小时。热水抽提可以多次进行，例如1～4次，优选进行2～3次。用于抽提的水的pH值没有特别的限定，例如可以使用蒸馏水进行。
由上述热水抽提而得的抽提液，可以原样使用，但为了降低使用的乙醇的量并高效地得到分离物，可以浓缩该抽提液后使用。浓缩率没有特别的限定，例如可以是容积比为80～20％，优选60％～25％，进一步优选50％～30％。另外，该浓缩可以在常压下或减压下的任一条件下进行，但优选在减压下进行。
向抽提液中加入乙醇的量没有特别的限定，例如可以是相对于浓缩后的抽提液的容积比为0.5～2.0倍的量，优选0.8～1.2倍，不浓缩时亦然。得到的沉淀部分可以用该技术领域周知的方法进行精制，例如可以通过将其溶解于水中后加入乙醇而得到沉淀部分的操作再进行一次或多次来进行精制。
另外，在上述抽提液中加入一定量的乙醇，将生成的沉淀部分回收后，在作为上清液而得到的抽提液中，通过进一步加入乙醇进而可以得到沉淀部分。作为该上清液而得的抽提液，可以原样使用，也可以浓缩后使用。浓缩率没有特别的限定，例如可以是容积比为80～20％，优选60％～25％，进一步优选50％～30％。另外，该浓缩可以在常压下或减压下的任一条件下进行，但优选在减压下进行。另外，最初加入的乙醇的量没有特别的限定，例如可以是相对于浓缩后的抽提液的容积比为0.5～2.0倍的量，优选0.8～1.2倍。第二次加入乙醇后抽提液中所含乙醇的量没有特别的限定，例如可以是容积比为70％～90％，优选75％～85％。例如加入相对于抽提液的容积比为0.5～2.0倍的乙醇，在回收生成的沉淀部分后的上清液中，例如进行减压浓缩除去乙醇后，加入容积比为3.0～5.0倍的乙醇，也可以得到沉淀部分。
本发明中的经口摄取组合物例如包括饮食品组合物及医药组合物等。
为得到有效成分含量高的分离物，在本发明中对于进行热水抽提的冬虫夏草菌丝体而言，可以进行预处理。该预处理没有特别的限定，可例举出使用碳原子数为1～4的醇或该醇水溶液的加热抽提等，优选使用乙醇。加热时的温度为例如液体温度70～120℃，优选80～100℃，更优选90～95℃。抽提时间为例如1小时～24小时，优选2～12小时，更优选3～7小时。乙醇抽提可以进行多次，例如1～4次，优选2～3次。也可以使用不同的溶剂来多次进行，例如可以使用95～99.5％的乙醇进行抽提后，将其残渣用容积比为60～80％的乙醇水溶液进行抽提，将其残渣作为进行热水抽提的原料而使用。
本发明中得到的沉淀部分，作为其成分可含有例如多糖类等。该多糖类没有特别的限定，是由天然存在的单糖类所构成的物质，在其分子中的1个或2个或更多个部位可以接受酰化、磷酸化等的修饰，或通过蛋白质、核酸结合的修饰。该多糖类的分子量没有特别的限定，例如可以是10万～200万。本发明的沉淀部分的糖含量，可以用本技术领域的技术人员周知的方法进行测定，例如可以用苯酚硫酸法等。本发明的含糖量没有特别的限定，例如用D-葡萄糖换算为40～90重量％，优选50～80重量％，进而优选60～80重量％。
上述沉淀部分，例如通过透析等方法可以分离为例如分子量小于5万的部分、分子量为5万或更高而小于10万的部分、分子量为10万或更高的部分。
本发明的免疫激活剂，由于具有促进哺乳类中干扰素-γ和/或肿瘤坏死因子-α产生的作用，因而对于需要免疫激活的被试验者，可以作为预防药和/或治疗药而使用。另外，本发明的抗癌剂因为显示出有意义的抗肿瘤效果，所以可以成为对癌症有效的预防药及治疗药。因此，本发明的免疫激活剂及抗癌剂可以作为医药组合物的有效成分而使用。该医药组合物可以含有一般所使用的各种成分，例如可以含有1种或更多种的在药学上容许的赋形剂、稀释剂、湿润剂、乳化剂、分散剂、辅助剂、防腐剂、缓冲剂、粘合剂、稳定剂等。
本发明的免疫激活剂及抗癌剂的给药量，可以根据患者的体形、年龄、身体状况、病情程度、发病后的经过时间等适当选择，例如，一般的使用量为1～5000mg/日/成人。
另外，本发明的经口摄取组合物可以原样作为功能性食品而使用，还可以作为医药外部品、饮食品等的成分、食品添加物等而使用。通过这种使用，使本发明的具有免疫激活效果及抗肿瘤效果的经口摄取组合物可以日常性地及持续性地摄取，可以通过有效的免疫激活来改善体质、治疗癌症及预防癌症的发生。本发明的经口摄取组合物作为食品材料而使用的例子，可以举出具有免疫激活效果或治疗癌症效果或预防癌症效果的功能性食品、健康食品、一般食品(果汁、点心、加工食品等)、营养辅助食品(营养饮料等)。
本发明的经口摄取组合物由于具有免疫激活作用和/或抗肿瘤作用，因而本发明提供了用于免疫激活的有效手段及对于癌症的有效的预防手段或治疗手段，还提供在健康食品的制造中有用的组合物。
附图说明
图1为显示通过用人末梢血的in vitro试验来测定热水抽提部分(HWE)、50％乙醇沉淀部分(50％EP)、80％乙醇沉淀部分(80％EP)、乙醇萃取物(Et Ext)、70％乙醇萃取物(70Et Ext)的IFN-γ的产生量促进活性的结果的图。
图2为显示通过用人末梢血的in vitro试验来测定热水抽提部分(HWE)、50％乙醇沉淀部分(50％EP)、80％乙醇沉淀部分(80％EP)、乙醇萃取物(Et Ext)、70％乙醇萃取物(70Et Ext)的TNF-α的产生量促进活性的结果的图。
图3为显示通过用人末梢血的in vitro试验来测定用透析的分子量分离而得到的分子量为10万或更高的部分(M1)、分子量为5万或更高而小于10万的部分(M2)及分子量小于5万的部分(M3)、热水抽提部分(HWE)及50％乙醇沉淀部分(50％EP)的IFN-γ的产生量促进活性的结果的图。
图4为显示通过用人末梢血的in vitro试验来测定用透析的分子量分离而得到的分子量为10万或更高的部分(M1)、分子量为5万或更高而小于10万的部分(M2)及分子量小于5万的部分(M3)、热水抽提部分(HWE)及50％乙醇沉淀部分(50％EP)的TNF-α的产生量促进活性的结果的图。
图5为通过给予鼠热水抽提部分(HWE)、50％乙醇沉淀部分(50％EP)、80％乙醇沉淀部分(80％EP)而显示出的肿瘤体积变化的图。
具体实施方式
以下，就本发明的优选的实施例作进一步详细的说明，但本发明并不限于这些实施例。
[实施例1]中华虫草菌丝体的分离物的调制
在本发明的实施中，成为原料的中华虫草菌丝体培养物的粉末可以使用例如中国市售的“发酵虫草菌粉”(商品名：CORBRIN CAPSULE，制造公司：杭州中美华东制药有限公司)。
将原料冬虫夏草菌丝体粉末用99.5％的乙醇在90～95℃下抽提6小时。乙醇量为每1g菌丝体用2mL。滤过残渣，再次将残渣用该方法抽提，用过滤分开抽提液和残渣。将2次抽提所得到的抽提液合起来进行减压浓缩，得到用原料换算为15.0％(重量比)的粘稠的浓褐色液体乙醇萃取物(Et Ext)。接着将残渣用70％的乙醇水溶液(体积比)在90～95℃下抽提6小时。70％的乙醇的量为每1g残渣用2mL。滤过残渣，再次用此方法抽提残渣，用过滤分开抽提液和残渣。将2次抽提所得的抽提液合起来进行减压浓缩，直至体积变为约40％，通过冷冻干燥得到用原料换算为45.8％(重量比)的浓褐色粉末70％乙醇萃取物(70％Et Ext)。接着将残渣用蒸馏水在90～95℃下抽提6小时。蒸馏水量为每1g残渣用4mL。滤过残渣，再次用此方法抽提残渣，用过滤分开抽提液和残渣。将2次抽提而得的抽提液合起来进行减压浓缩，直至体积为约40％，添加体积比为等量的99.5％的乙醇，静置于冷且暗的地方一晚。通过离心分离回收沉淀物，使其溶解于蒸馏水中并冷冻，经冷冻干燥得到用原料换算为17.9％(重量比)的吸湿性高的浓茶色粉末50％乙醇沉淀部分(50％EP)。将上清进行减压浓缩直至体积为约40％后，添加体积比为4倍量的99.5％乙醇，静置于冷且暗的地方一晚。通过离心分离回收沉淀物，使其溶解于蒸馏水中并冷冻，经冷冻干燥得到用原料换算为6.0％(重量比)的茶色粉末80％乙醇沉淀部分(80％EP)。
将50％乙醇沉淀部分溶解于蒸馏水中，用Spectrum公司制Spectra/Por(注册商标)CE Membrane MWCO：100000对蒸馏水进行透析。溶解50％乙醇沉淀部分的蒸馏水的量为每1g沉淀部分用50mL。通过冷冻干燥透析内液得到用原料换算为10.0％(重量比)的分子量为10万或更高的部分(M1)。将透析外液减压浓缩，用Spectrum公司制Spectra/Por(注册商标)6Membrane MWCO：50000对蒸馏水进行透析。通过冷冻干燥透析内液得到用原料换算为3.94％(重量比)的、分子量为5万或更高而小于10万的部分(M2)。将透析外液减压浓缩，通过冷冻干燥得到用原料换算为3.45％(重量比)的、分子量小于5万的部分(M3)。
对于M1部分，用苯酚硫酸法对含糖量作定量，结果M1部分的含糖量用D(+)-葡萄糖换算为69.9％。在此，苯酚硫酸法是用一般的方法而进行的(例如参照“新实验化学讲座20生物化学[II]”，1085页，日本化学会编，1978年10月20日发行，丸善株式会社)
[制造例1]热水抽提物的调制例
实施例中的作为比较对照用的热水抽提物，用以下的方法进行调制。将冬虫夏草菌丝体粉末用蒸馏水在90～95℃下边搅拌边抽提4小时。蒸馏水量为每1g菌丝体用20mL。滤过残渣，通过减压浓缩滤液后冷冻干燥而得到有吸湿性的茶褐色粉末热水抽提物(HWE)。
[实施例2]使用人末梢血测定免疫激活效果
在48孔细胞培养用板上，添加从人采集的末梢血500μL和与末梢血等量的RPMI1640培养基。添加被检测物质使其最终浓度为200μg/mL，在37℃、5％CO2的条件下培养24小时。回收培养上清，使用利用酶联免疫测定法(ELISA)的测定试剂盒(BIOSOURCE公司制)分别对干扰素-γ(IFN-γ)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作定量测定。试剂盒的使用方法和定量结果的解析方法按照试剂盒所附的操作说明书而行。
对于在实施例1中调制的50％乙醇沉淀部分(50％EP)、80％乙醇沉淀部分(80％EP)、乙醇萃取物(Et Ext)、70％乙醇萃取物(70％Et Ext)以及制造例1中调制的热水抽提物(HWE)，测定IFN-γ产生量及TNF-α产生量，结果分别显示于图1及图2中。由该测定结果可知，与HWE、Et Ext及70％Et Ext相比，50％EP及80％EP无论是对于IFN-γ还是对于TNF-α都有显著的促进产生量的效果，确认了在使用源自人的末梢血的试验系中本发明的分离物的效果。另外，也明确了50％EP与80％EP相比具有更高的促进效果。
对于在实施例1中调制的50％乙醇沉淀部分(50％EP)的分子量分离物M1(分子量为10万或更高的部分)、M2(分子量为5万或更高而小于10万的部分)以及M3(分子量小于5万的部分)，测定IFN-γ及TNF-α产生量，结果分别显示于图3及图4中。由该测定结果可知，无论是对于IFN-γ产生量还是对于TNF-α产生量，M1都具有超过50％EP的促进产生量的效果。另外，确认了该促进产生量的活性只集中于M1(分子量为10万或更高的部分)，50％EP的促进IFN-γ及TNF-α的产生量活性，与分子量为10万或更高的化合物有很深的关系。
[实施例3]使用患癌鼠测定抗肿瘤效果
从日本SLC株式会社购入6周龄的杂交群S1c:BDF1雄鼠32只，以8只为一组分成4组，将4只放入一个笼子中驯养1周。对7周龄的鼠于右腋下的皮下接种1×106cell/mouse的鼠的肿瘤Sarcoma180。另外，在接种前先剃掉接种部位的体毛，使得对于肿瘤的附着及成长的观察更正确地进行。肿瘤的成长是用数码游标卡尺测量肿瘤的短径和长径，算出肿瘤的大小(长径×短径2/2mm3)。4组分别为对照组(control组)、热水抽提物组(HWE组)、50％乙醇沉淀部分组(50％EP组)和80％乙醇沉淀部分组(80％EP组)，各组从接种肿瘤日开始每天上午10点用探针经口给予被检测物质。给予量为，control组每10g体重给予生理盐水0.1mL，HWE组使HWE溶解于生理盐水中成为250mg/kg而给予，50％EP组使50％EP溶解于生理盐水中成为44.8mg/kg而给予，80％EP组使80％EP溶解于生理盐水中成为15.0mg/kg而给予。
第7日及第10日的肿瘤体积的测定结果示于图5中。由该测定结果可以确认，在in vivo的试验系中本发明的分离物具有抗肿瘤活性。进而，给予量为HWE的1/5或更低的50％EP明示出超过HWE的抗肿瘤效果，同时该结果也支持了实施例2的结果。
[实施例4]A431细胞增殖抑制试验
将A431细胞(人扁平上皮癌细胞株；从大日本制药而得)悬浊于含有10％FBS的Dulbecco’s改变的Eagle培养基(SIGMA公司制)中，使其成为4×104个/mL，分别以50μL(2×103个/孔)添加到96孔微培养板(住友BAKELITE制)的各孔中。培养6小时后(37℃、5％CO2)，将含有作为被检测物质的、各自为2000μg/ml的HWE、70％Et Ext、50％EP、80％EP及10％FBS的培养基分别以50μL添加到各孔中(终浓度为1000μg/ml)。将添加有50μL的含有200μM的Genistein的培养基的物质作为阳性对照。培养4天后，向各孔中分别添加Cell counting kit-8(和光纯药)5μL，60分钟后测定吸光度(波长450nm)。根据与不含有被检测物质的体系的比较来算出抑制率。
试验结果示于以下的表1中。在该试验结果中，所有的被检测物质都显示出抑制细胞增殖的效果，其中特别是80％EP的抑制率显著地高。
表1
Figure C20048002021500141
[实施例5]A431细胞损害性试验
将A431细胞(人扁平上皮癌细胞株；从大日本制药而得)悬浊于含有10％FBS的Dulbecco’s改变的Eagle培养基(SIGMA公司制)中，使其成为5×105个/mL，分别以100μL(5×104个/孔)添加到96孔微培养板(住友BAKELITE制)的各孔中。培养24小时后(37℃、5％CO2)，用分别含有1000μg/mL HWE、70％Et Ext、50％EP、80％EP的无血清培养基进行交换。培养48小时后，在各孔中分别添加5μL的Cell counting kit-8(和光纯药)，测定30分钟后的吸光度(波长450nm)。根据与不含有被检测物质的体系的比较来算出生存率。
试验结果示于以下的表2中。在该试验结果中，HWE及70％Et Ext显示出一些细胞毒性，与此相对，本发明的分离物50％EP及80％EP对A431细胞的生存率未显示出任何影响。由此，确认了在实施例4中50％EP及80％EP所显示的细胞增殖抑制效果不是因细胞损害性所致的。
表2
Figure C20048002021500142

Claims (15)

1.一种中华虫草的菌丝体提取物，其特征为，是在将中华虫草的菌丝体经热水抽提而得的抽提液中，通过加入相对于抽提液的容积比为0.5～2.0倍量的乙醇而得到的沉淀部分。
2.一种中华虫草的菌丝体提取物，其特征为，是以去除了权利要求1所述的沉淀部分后的上清液作为所得到的抽提液，通过向其中进一步加入使得该抽提液含有的乙醇量按容积比计为70％～90％的量的乙醇而得到的物质。
3.权利要求1或2所述的中华虫草的菌丝体提取物，其特征为，所述抽提液是在加入乙醇之前通过浓缩而得到的物质。
4.权利要求1或2所述的中华虫草的菌丝体提取物，其中，所述菌丝体是作为前处理而用乙醇进行加热抽提后的残渣。
5.权利要求1或2所述的中华虫草的菌丝体提取物，其特征为，含有具有10万或更高的分子量的多糖类。
6.权利要求1或2所述的中华虫草的菌丝体提取物，其特征为，对于哺乳动物，具有促进干扰素-γ或肿瘤坏死因子-α产生的活性。
7.一种中华虫草的菌丝体提取物，其特征为，是将权利要求1所述的沉淀部分进一步通过透析进行分子量分离而得到的分子量为10万或更高的物质。
8.权利要求7所述的中华虫草的菌丝体提取物，其特征为，含糖量用D-葡萄糖换算为60～80重量％。
9.经口摄取用组合物，其特征为，含有权利要求1～8中任一项所述的中华虫草的菌丝体提取物。
10.饮食品，其特征为，含有权利要求9所述的经口摄取用组合物。
11.权利要求10所述的饮食品，其特征为，具有抗癌作用、预防癌症作用或免疫激活作用。
12.免疫激活剂，其特征为，含有权利要求9所述的经口摄取用组合物。
13.抗癌剂，其特征为，含有权利要求9所述的经口摄取用组合物。
14.权利要求1～8中任一项所述的中华虫草的菌丝体提取物的制造方法，其特征为，含有下述工序，
a)将冬虫夏草菌丝体在85～100℃下用水进行加热抽提，得到抽提液的工序；
b)在抽提液中加入相对于所述抽提液的容积比为0.5～2.0倍量的乙醇，回收产生的沉淀的工序。
15.权利要求2～8中任一项所述的中华虫草的菌丝体提取物的制造方法，其特征为，含有下述工序，
a)将冬虫夏草菌丝体在85～100℃下用水进行加热抽提，得到抽提液的工序；
b)在抽提液中加入相对于所述抽提液的容积比为0.5～2.0倍量的乙醇，将产生的沉淀去除、回收上清液的工序；
c)在所述上清液中进一步加入使得所述上清液含有的乙醇量按容积比计为70％～90％的量的乙醇，回收由此得到的沉淀的工序。
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