CN100563646C - 一种奥沙利铂脂质体葡萄糖制剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明一种奥沙利铂脂质体葡萄糖制剂及其制备方法、应用涉及一种用作抗肿瘤奥沙利铂脂质体葡萄糖溶液制剂及其制备方法、应用。一种奥沙利铂脂质体葡萄糖制剂由奥沙利铂、氢化磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000制备成的脂质体，并且溶解于葡萄糖溶液中，其中氢化磷脂与奥沙利铂的重量比为1∶1～50，其中氢化磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000之间的重量比为1～5∶0.5～1∶1。制备方法：按处方重量配比称取氢化磷酯、胆固醇、DSPE-PEG2000，混合后加入叔丁醇搅拌溶解，预冷，经过冷冻干燥后，加入4～10%的葡萄糖的奥沙利铂饱和水溶液，在加热的条件下，经乳均机搅拌溶解乳化后，通过均质机、纳米挤出机制备成脂质体溶液，再经过滤柱分离精制，制备成奥沙利铂脂质体葡萄糖溶液。

Description

一种奥沙利铂脂质体葡萄糖制剂的制备方法

技术领域

本发明一种奥沙利铂脂质体葡萄糖制剂及其制备方法、应用涉及一种用作抗肿瘤奥沙利铂脂质体葡萄糖溶液制剂及其制备方法、应用。

背景技术

奥沙利铂作为抗肿瘤的药物顺铂的衍生物，已被广泛用于治疗各种肿瘤。与顺铂相比奥沙利铂有抑制骨髓功能较轻和消化道反应弱，肾脏毒性低，与顺铂无交叉耐药等特点。尽管如此，奥沙利铂作为抗肿瘤药还存在着溶解度低、易被分解破坏、骨髓抑制和肾脏毒性等缺点。

脂质体常被用来降低药物的毒性，增加难溶性药物在血液中的浓度，保持长时间有效的药物浓度，特别是在癌组织中有丰富的血管但发育不完善，200nm以下的脂质体能在血液中长时间循环，容易进入癌组织，达到被动靶向的抗癌效果。

发明内容

本发明针对上述不足之处提供一种奥沙利铂脂质体葡萄糖制剂及其制备方法、应用，通过两层氢化磷酯膜，以纳米粒形式包裹了奥沙利铂，两层膜之间嵌入胆固醇，两层膜表面结合了N-(氨基甲酰基甲氧基聚乙二醇2000)-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)，制备成脂质体。溶解于葡萄糖溶液中，保持了脂质体氢化磷脂两层膜内外的渗透压，维持了脂质体的稳定。粒径在200nm以内的纳米粒，能在血液中保持长时间稳定，长时间有效地进入癌组织，达到被动靶向的抗癌效果，解决了奥沙利铂非脂质体制剂在血液中溶解度低，容易被分解的问题，同时降低了奥沙利铂的副作用，大大提高了奥沙利铂的抗癌疗效。

一种奥沙利铂脂质体葡萄糖制剂及其制备方法、应用是采取以下方案实现：

一种奥沙利铂脂质体葡萄糖制剂，其特征在于由奥沙利铂、氢化磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000制备成的脂质体，并且溶解于葡萄糖溶液中，其中氢化磷脂与奥沙利铂的重量配比为1∶1～50，其中氢化磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000之间的重量配比为1～5∶0.5～1∶1。

所述的葡萄糖的浓度为4～10％。

所述的制剂为注射用溶液或冻干粉针。

一种奥沙利铂脂质体葡萄糖制剂及其制备方法：按处方重量配比称取氢化磷酯、胆固醇、DSPE-PEG2000，混合后加入10倍量的叔丁醇搅拌溶解，预冷到-35℃～-40℃，经过12～24小时的冷冻干燥后，加入10～30倍量的4～10％的葡萄糖的奥沙利铂饱和水溶液，在45℃～60℃加热的条件下，经乳均机搅拌溶解乳化后，通过均质机、纳米挤出机等制备成一定粒径的脂质体溶液，脂质体溶液粒径为50nm～200nm；再经过滤柱等分离精制，制备成奥沙利铂脂质体葡萄糖溶液，根据不同浓缩程度调制脂质体中奥沙利铂的浓度；经过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，滤液分装至西林瓶中，加塞，压塞，包装，制备成注射用溶液。奥沙利铂包封率可高达99％以上，制备成注射用溶液或冻干粉针。

将上述制备成奥沙利铂脂质体葡萄糖溶液分装，半压塞，装盘，送入冻干机中，冷冻至干燥，充N₂，压塞，包装，制备成冻干粉针。

上述制备方法中氢化磷脂与奥沙利铂的重量配比为1∶1～50；氢化磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000之间的重量配比为1～5∶0.5～1∶1。

所述的奥沙利铂浓度为0.5～5mg/ml，且存在于4～10％的葡萄糖溶液。

所述的冷冻至干燥包括预冻和升华干燥，其中预冻过程中冻干机的前箱的预冻温度为-35℃～-40℃，保温，保温期间冻干机的后箱的温度降至-40℃～-50℃；升华干燥过程中，在抽真空条件下，开机以每小时2～4℃升温升华干燥，当制品温度达30～35℃时，保持2～4小时，除去残留水分。

一种奥沙利铂脂质体葡萄糖制剂在制备抗癌药物中的应用。本发明奥沙利铂脂质体葡萄糖制剂的制备方法通过两层氢化磷酯膜，以纳米粒形式包裹了奥沙利铂，两层膜之间嵌入胆固醇，两层膜表面结合了N-(氨基甲酰基甲氧基聚乙二醇2000)-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)，制备成脂质体，溶解于葡萄糖溶液中，保持了脂质体氢化磷脂两层膜内外的渗透压，维持了脂质体的稳定，能在血液中保持长时间稳定，长时间有效地进入癌组织，达到被动靶向的抗癌效果。

本发明的特点

本发明奥沙利铂脂质体葡萄糖制剂能在血液中保持长时间的稳定，保证长时间有效地进入癌组织，大大提高其抗肿瘤的效果，同时降低骨髓抑制和肾脏毒性等副作用，避免因奥沙利铂副作用大而放弃治疗的现象，减少病人的痛苦，延长病人的生命，提高病人的生活质量。

因此，奥沙利铂脂质体葡萄糖制剂通过脂质体对奥沙利铂的包裹，在血液中能长时间保持稳定，长时间有效地进入癌组织，显示出奥沙利铂脂质体极其重要的抗癌价值。

本发明制备的新型奥沙利铂脂质体葡萄糖溶液，粒径在200nm以内，奥沙利铂脂质体的稳定性高，包封率可高达99％以上，奥沙利铂浓度可高达5mg/ml。经静脉注射后，能保持血液中长时间的奥沙利铂有效抗癌浓度，使得奥沙利铂长时间有效地进入癌组织，发挥被动靶向的抗癌作用，大大提高奥沙利铂抗癌效果，同时降低了肾脏毒性、骨髓抑制、胃肠反应等副作用，提高了病人的生活质量。

具体实施方式

实施例1：

(配方1)

氢化磷酯            30g

胆固醇              30g

DSPE-PEG2000        30g

奥沙利铂            7.2g

称取氢化磷酯、胆固醇、DSPE-PEG2000，混合后加入叔丁醇900ml搅拌溶解，预冷到-35℃，经过12小时的冷冻干燥后，加入4％的葡萄糖的奥沙利铂饱和水溶液900ml，在45℃的加热条件下，通过乳均机搅拌溶解乳化，通过均质机、纳米挤出机(装有100～200nm微孔过滤膜)等，制备成脂质体溶液。再经过滤柱等分离精制，制备成奥沙利铂脂质体葡萄糖溶液。经过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，滤液分装至30ml西林瓶中，每瓶25ml，加塞，压塞，包装，制备成注射用溶液。

将上述制备成奥沙利铂脂质体葡萄糖溶液分装，半压塞，装盘，送入冻干机中，冷冻至干燥，充N₂，压塞，包装，制备成冻干粉针。

所述的冷冻至干燥包括预冻和升华干燥，其中预冻过程中冻干机的前箱的预冻温度为-35℃，保温，保温期间冻干机的后箱的温度降至-40℃；升华干燥过程中，在抽真空条件下，开机以每小时2℃升温升华干燥，当制品温度达30℃时，保持2小时，除去残留水分。

实施例2：

(配方2)

氢化磷酯            50g

胆固醇              20g

DSPE-PEG2000        20g

奥沙利铂            14.4g

称取氢化磷酯、胆固醇、DSPE-PEG2000，混合后加入叔丁醇900ml搅拌溶解，预冷到-38℃，经过18小时的冷冻干燥后，加入7％的葡萄糖的奥沙利铂饱和水溶液1800ml，在55℃加热的条件下，通过乳均机搅拌溶解乳化，通过均质机、纳米挤出机(装有100～200nm微孔过滤膜)等，制备成脂质体溶液。再经过滤柱等分离精制，制备成奥沙利铂脂质体葡萄糖溶液。经过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，滤液分装至30ml西林瓶中，每瓶25ml，加塞，压塞，包装，制备成注射用溶液。

将上述制备成奥沙利铂脂质体葡萄糖溶液分装，半压塞，装盘，送入冻干机中，冷冻至干燥，充N₂，压塞，包装，制备成冻干粉针。

所述的冷冻至干燥包括预冻和升华干燥，其中预冻过程中冻干机的前箱的预冻温度为-38℃，保温，保温期间冻干机的后箱的温度降至-45℃；升华干燥过程中，在抽真空条件下，开机以每小时3℃升温升华干燥，当制品温度达32℃时，保持34小时，除去残留水分。

实施例3：

(配方3)

氢化磷酯          50g

胆固醇            5g

DSPE-PEG2000      10g

奥沙利铂          15.6g

称取氢化磷酯、胆固醇、DSPE-PEG2000，混合后加入叔丁醇900ml搅拌溶解，预冷到-40℃，经过24小时的冷冻干燥后，加入10％的葡萄糖的奥沙利铂饱和水溶液1950ml，在60℃加热的条件下，通过乳均机搅拌溶解乳化，通过均质机、纳米挤出机(装有100～200nm微孔过滤膜)等，制备成脂质体溶液。再经过滤柱等分离精制，制备成奥沙利铂脂质体葡萄糖溶液。经过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，滤液分装至30ml西林瓶中，每瓶25ml，加塞，压塞，包装制备成注射用溶液。

将上述制备成奥沙利铂脂质体葡萄糖溶液分装，半压塞，装盘，送入冻干机中，冷冻至干燥，充N₂，压塞，包装，制备成冻干粉针。

所述的冷冻至干燥包括预冻和升华干燥，其中预冻过程中冻干机的前箱的预冻温度为-40℃，保温，保温期间冻干机的后箱的温度降至-50℃；升华干燥过程中，在抽真空条件下，开机以每小时4℃升温升华干燥，当制品温度达35℃时，保持4小时，除去残留水分。

实施例4：

奥沙利铂脂质体的粒度和Zeta电位测定：通过纳米粒度测定仪，测定奥沙利铂脂质体的粒度和Zeta电位。平均粒度为133nm，Zeta电位为-8.85mV。

实施例5：

奥沙利铂脂质体的奥沙利铂总量测定：奥沙利铂脂质体10～50倍稀释后，通过色谱分析法进行奥沙利铂总含量测定。测得浓度为1.045mg/ml。

实施例6：

奥沙利铂脂质体的游离奥沙利铂浓度测定：奥沙利铂脂质体10倍稀释后通过离心分离法，在离心力为300,000g的超速离心后取得上清液，通过色谱分析法测定游离奥沙利铂浓度。与奥沙利铂总量进行比较，计算出奥沙利铂的包封率为99.4％。

实施例7：

氢化磷酯、胆固醇、DSPE-PEG2000的浓度测定：通过蒸发光散射检测仪，定量分析氢化磷酯、胆固醇、DSPE-PEG2000的浓度。测得氢化磷酯为52.23mg/ml，胆固醇为13.74mg/ml，DSPE-PEG2000为17.74mg/ml。

实施例8：

奥沙利铂脂质体的稳定性试验：所制备的奥沙利铂脂质体葡萄糖溶液，分别置于4℃的恒温恒湿箱中长期保存，定期进行粒径、Zeta电位、渗透压、pH值、奥沙利铂总量、包封率、氢化磷酯、胆固醇、DSPE-PEG2000的含量的测定，3个月的粒径、包封率、奥沙利铂含量等主要指标的变动范围均在2％以内，其他项指标的变动范围也均小于6％(见表1)。表明奥沙利铂脂质体稳定性好，并正继续动态观测中。

表1奥沙利铂脂质体注射液的长期试验稳定性结果

实施例9：

(动物实验)

在裸鼠上种植人体乳腺癌(MX-1)，第10天开始静脉注射5mg/Kg药物，分成四组，每组10只雌鼠，每4天静脉注射一次，共四次，第30天解剖白鼠，称得癌组织的重量，进行分析统计。实验结果如表2所示：治疗后，奥沙利铂脂质体组的癌组织的重量是5％葡萄糖对照组的42.5％，充分显示出奥沙利铂脂质体的抗癌效果；奥沙利铂脂质体组的癌组织的重量是奥沙利铂注射液组的一半左右(42.5/81.2＝0.52)，即奥沙利铂脂质体的抗癌效果是奥沙利铂注射液的2倍左右，显示出奥沙利铂脂质体更强的抗癌效果。

表2奥沙利铂脂质体的抗癌效果(癌种：MX-1)

Claims (4)

1、一种奥沙利铂脂质体葡萄糖制剂的制备方法，其特征在于按处方重量配比称取氢化磷酯、胆固醇、DSPE-PEG2000，混合后加入10倍量的叔丁醇搅拌溶解，预冷到-35℃～-40℃，经过12～24小时的冷冻干燥后，加入10～30倍量的4～10％的葡萄糖的奥沙利铂饱和水溶液，在45℃～60℃加热的条件下，经乳均机搅拌溶解乳化后，通过均质机、纳米挤出机制备成一定粒径的脂质体溶液，脂质体溶液粒径为50nm～200nm；再经过滤柱分离精制，制备成奥沙利铂脂质体葡萄糖溶液，根据不同浓缩程度调制脂质体中奥沙利铂的浓度；经过0.22μm微孔滤膜过滤除菌，滤液分装至西林瓶中，加塞，压塞，包装，制备成注射用溶液；

或将上述制备成奥沙利铂脂质体葡萄糖溶液分装，半压塞，装盘，送入冻干机中，冷冻至干燥，充N₂，压塞，包装，制备成冻干粉针；

上述制备方法中氢化磷脂与奥沙利铂的重量配比为1∶1～50；氢化磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000之间的重量配比为1～5∶0.5～1∶1。

2、根据权利要求1所述的一种奥沙利铂脂质体葡萄糖制剂的制备方法，其特征在于所述的冷冻至干燥包括预冻和升华干燥，其中预冻过程中冻干机的前箱的预冻温度为-35℃～-40℃，保温，保温期间冻干机的后箱的温度降至-40℃～-50℃；升华干燥过程中，在抽真空条件下，开机以每小时2～4℃升温升华干燥，当制品温度达30～35℃时，保持2～4小时，除去残留水分。

3、根据权利要求1所述的一种奥沙利铂脂质体葡萄糖制剂的制备方法，其特征在于奥沙利铂浓度为0.5～5mg/ml，且存在于4～10％的葡萄糖溶液。

4、根据权利要求1所述的一种奥沙利铂脂质体葡萄糖制剂的制备方法，其特征在于通过两层氢化磷酯膜，以纳米粒形式包裹了奥沙利铂，两层膜之间嵌入胆固醇，两层膜表面结合了N-(氨基甲酰基甲氧基聚乙二醇2000)-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)，制备成脂质体，溶解于葡萄糖溶液中，保持了脂质体氢化磷脂两层膜内外的渗透压，维持了脂质体的稳定。