CN100490877C - 一种青天葵活性提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种青天葵活性提取物及其制备方法和应用。本发明青天葵活性提取物含有10～90%总黄酮和10～90%总氨基酸。本发明所述的青天葵活性提取物制备方法以青天葵药材为原料，采用水提取法、超临界二氧化碳提取或乙醇提取法工艺提取，经聚酰胺树脂、大孔树脂等方法富集，得到青天葵活性提取物。本发明所述的青天葵活性提取物具有解热、抗炎镇痛、祛痰止咳、保护急性肺损伤、提高细胞免疫力、增强小鼠炭粒廓清功能、增加免疫低下实验动物的脾脏和胸腺重量、抗菌抗病毒等作用。

Description

一种青天葵活性提取物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及青天葵提取物及其制备方法和应用。

技术背景

青天葵来源于兰科植物毛唇芋兰Nerviliae Fordii(Hance)Schltr的地下块茎和全草，分布干广东、广西、四川、云南等地，为广西、广东的特产药材，是我国传统中药，也是我国出口创汇的主要药材。青天葵能润肺止咳，清热解毒，散淤止痛。主治肺痨咯血，肺热咳嗽，口腔炎，咽喉肿痛，瘰疬，疮疡肿毒，跌打损伤。目前近年来青天葵的临床研究多以治疗肺部疾病为主。邱志楠等(青天葵临床新用，广州医学院学报，1995年02期)认为青天葵除了有清热退热外还有化痰祛瘀止痛之功效，配伍当归亦常用于寒性咳嗽的治疗。史莜冰等(天龙茶治疗急性支气管炎的临床观察，现代临床医学生物工程学杂志，1997年02期)以青天葵为主药，配伍龙利叶、款冬花、巴戟等组成天龙茶治疗急性支气管炎，总有效率达95％。青天葵应用于咳、痰、喘之证，祛痰之力大于贝母，平喘之力胜于麻黄，镇咳之效强于款冬花，且有调肺气之功，抗病毒力胜于抗病毒口服液，对体虚邪胜之咳喘患者为首选良药。目前没有对青天葵活性提取物进行报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种青天葵活性提取物。

本发明的另一目的是提供一种青天葵活性提取物的制备方法。

本发明的另一目的是提供一种青天葵活性提取物在制备治疗病毒性呼吸系统疾病药物中的应用。

本发明所指的青天葵，特指兰科植物毛唇芋兰，学名为Nerviliae Fordii(Hance)Schltr的植物的地下块茎和全草。

本发明所述的青天葵活性提取物，含有10％～90％总黄酮和10％～90％总氨基酸。

本发明所述的青天葵活性提取物呈白色至黄棕色粉末。定性鉴别实验显示：茚三酮反应呈阳性，盐酸—镁粉反应呈阳性，Molish反应呈阳性。

本发明所述的总氨基酸含量检测方法采用氨基酸自动分析仪(DIONEX)检测。

本发明所述的总黄酮含量检测方法采用以芦丁为对照品，紫外分光光度法。总黄酮含量检测方法参照药典2005年版，附录VA紫外—可见分光光度法。

本发明所述的青天葵活性提取物，总黄酮含量最好是20％，总氨基酸含量最好是70％。

本发明的所述的青天葵制备方法：将青天葵用醇水混合溶媒进行提取。提取方法可以采用本领域技术人员常用的提取方法。例如可以是浸泡，超声波提取，加热回流提取。本发明所述的醇可以是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇其中一种或两种以上。本发明所述醇最好是乙醇。

本发明所述的青天葵活性提取物的制备方法还可以采用超临界二氧化碳萃取(含2.5％～10％的乙醇夹带剂)，提取物减压蒸发除去溶剂，加石油醚充分脱脂脱色，石油醚不溶解部分经减压蒸发冷冻干燥除去溶剂，得产物。

本发明所述的青天葵活性提取物制备方法，可以采用在青天葵干燥药材中加6～15倍量的乙醇(醇浓度为0～80％)回流提取2～3次，每次0.5～2小时，合并提取液，浓缩，使用大孔吸附树脂、聚酰胺树脂、阴离子交换树脂、阳离子交换树脂提纯得青天葵活性提取物。

本发明所述的青天葵活性提取物制备方法较好是，在青天葵干燥药材，加6～12倍量的乙醇(醇浓度为30～60％)回流2～3次，每次1～2小时，合并提取液，浓缩至无醇味，过大孔吸附树脂，水洗至无色(过柱液和水洗液收集，得备用液)，然后50～80％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，过聚酰胺柱，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，干燥得青天葵总黄酮提取物；取备用液过阳离子交换树脂，水洗至无色，然后50～80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，再过阴离子交换树脂，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，干燥得青天葵总氨基酸提取物；将青天葵总黄酮提取物和青天葵总氨基酸提取物混合青天葵活性提取物。

本发明所述的大孔树脂是非极性大孔树脂，可以是AB—8，DP—100。最好是AB—8。离子交换树脂为阴离子交换树脂和阳离子交换树脂，其中阴离子交换树脂以717强碱型较好、阳离子交换树脂以732强酸型树脂较好。聚酰胺树脂为医药用型，粒度以30～60目较好。

本发明所述的青天葵活性提取物制备方法，可以是首先分别制备青天葵总氨基酸提取物和青天葵总黄酮提取物，然后将青天葵总氨基酸提取物和青天葵总黄酮提取物混合得到。

本发明所述的青天葵总氨基酸提取物制备方法是，在青天葵干燥药材中加10～15倍量水浸泡24～48h，减压浓缩至小体积，加乙醇使沉淀，静置过夜，上清液减压浓缩至无醇味，过阳离子交换树脂，水洗至无色，然后50～80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过阴离子交换树脂，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，干燥得青天葵总氨基酸提取物。

本发明所述的青天葵总黄酮提取物制备方法是，在青天葵干燥药材中加6～12倍量的80％乙醇回流提取2～3次，每次1～2小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，过大孔吸附树脂，水洗至无色，然后50～80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，过聚酰胺柱，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，干燥，即得青天葵总黄酮提取物。

本发明所述的青天葵活性提取物制备方法可以是，首先在青天葵干燥药材中加10～15倍量水浸泡24～48h，减压浓缩至小体积，加乙醇使沉淀，静置过夜，上清液减压浓缩至无醇味，过732阳离子交换树脂，水洗至无色，然后50～80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717阴离子交换树脂，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，干燥得青天葵总氨基酸提取物；在青天葵干燥药材中加6～12倍量的80％乙醇回流提取2～3次，每次1～2小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，过AB—8大孔吸附树脂，水洗至无色，然后50～80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，过聚酰胺柱，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，干燥，即得青天葵总黄酮提取物；将青天葵总氨基酸提取物和青天葵总黄酮提取物混合。

本发明所述的青天葵活性提取物制备方法可以是，在青天葵干燥药材中加10～15倍量水浸泡24～48h，减压浓缩至小体积，加乙醇使沉淀，静置过夜，上清液减压浓缩至无醇味，过732型阳离子交换树脂，水洗至无色，然后50～80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717型阴离子交换树脂，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，备用；水提后的药渣，加6～12倍量的乙醇(醇浓度为80％)回流提取2～3次，每次1～2小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，过大孔吸附树脂，水洗至无色，然后50～80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，过聚酰胺柱，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，与上述备用液混合，干燥得青天葵提取物。

本发明所述的青天葵活性提取物制备方法可以是，在青天葵干燥药材中加6～12倍量的乙醇(醇浓度为80％)回流提取2～3次，每次1～2小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，过AB—8大孔吸附树脂，水洗至无色，然后50～80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，过聚酰胺柱，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，备用；醇提后的药渣，加10～15倍量水浸泡24～48h，减压浓缩至小体积，加乙醇使沉淀，静置过夜，上清液减压浓缩至无醇味，过732阳离子交换树脂，水洗至无色，然后50～80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717阴离子交换树脂，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，与上述备用液混合，干燥得青天葵提取物。

本发明所述的药物组合物含有治疗药效的青天葵活性提取物和药学上可以接受的辅料，该青天葵活性提取物含有10—90％总黄酮和10—90％总氨基酸。

本发明所述的青天葵活性提取物中总黄酮和总氨基酸含量均为质量百分比。

本发明所述倍数是指溶剂体积用量(ml)是药材质量用量(g)的倍数。

本发明所述的乙醇浓度是指体积浓度(v/v)。

本发明所述的药物组合物可按照常规工艺制成符合制剂要求的口服药物剂型如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液等。

本发明所述的药物组合物可按照注射剂制备工艺要求制成注射剂如冻干粉针、注射液等。

本发明所述的青天葵活性提取物和上述药物组合物在制备治疗病毒性呼吸系统疾病药物中的应用。

了更好的理解本发明，下面用本发明药物药理试验及结果来说明其在治疗呼吸道疾病等药物领域中的用途。

本发明所述的青天葵活性提取物的药理活性如下所述。

药效学实验：

1.青天葵活性提取物的抗炎和镇痛作用

(一)小鼠耳肿胀实验

材料及试药：二甲苯(天津市富宇精细化工有限公司，041117)，50ul微量移液管(中外合资上海求精生化试剂仪器有限公司，泸制：02270112)，打孔器

青天葵注射液、青天葵注射用药(总黄酮与总氨基酸混合粉针，FL+AM)、清开灵注射液(2ml/支，广州明兴制药有限公司，040415)、醋酸泼尼松片(5mg/片，浙江仙居制药股份有限公司，050256)、氯化钠注射液(500ml，湖南科伦制药有限公司，041221)

实验动物：NIH小鼠，雌雄各半，18～22g，由广州中医药大学实验动物中心提供。

配药及给药剂量：实验采用尾静脉注射给药，注射剂量为0.1ml/10g，其中泼尼松片则采用口服给药，灌胃(0.4ml/20g)。各药均以氯化钠注射液溶解稀释配制而得。青天葵注射液、青天葵注射用药(总黄酮与总氨基酸混合粉针，FL+AM)给药前过微孔滤膜。

有关药物浓度如下：青天葵注射用药(总黄酮0.51mg/ml，总氨基酸2.17mg/ml)，青天葵注射液(含生药量0.1mg/ml)

耳肿胀实验方法：NIH小鼠50只，随机分组，每组10只，生理盐水组、醋酸泼尼松组、清开灵注射液组、青天葵注射液组、青天葵混合组，醋酸泼尼松组灌胃给药0.2ml/10g，其余各组均尾静脉注射给药0.1ml/10g，连续给药3天，末次给药30min后，将二甲苯涂于小鼠右耳前后两面，50ul/只，1h后将小鼠颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪下两耳，用8mm打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重，计算肿胀抑制率。结果见表1。

肿胀度＝右耳片重量-左耳片重量肿胀率＝(右耳片重量-左耳片重量)/左耳片重量×100％

表1 小鼠耳肿胀预实验结果

表1显示，以清开灵注射液和醋酸泼尼松片为阳性对照，阳性对照组肿胀率小于阴性组。青天葵混合组与生理盐水对照组及清开灵组比较，肿胀率均较低(p<0.05)，提示有抗炎作用，且抗炎作用好于清开灵。青天葵注射液组中小鼠耳肿胀率较低，但统计学无意义(p>0.05)，提示有抗炎作用趋势。

(二)大鼠棉球肉芽肿胀实验

材料及试药：青天葵注射用药(总黄酮与总氨基酸混合粉针)，青天葵总氨基酸注射液(AM)，青天葵总黄酮注射液(FL)，清开灵注射液(广州明兴制药，2ml/支)。

实验动物：SD大鼠，雄性，180～220g，由广州中医药大学实验动物中心提供。

实验方法：取雄性大鼠50只，随机分组，每组10只，分别为对照组、阳性组、青天葵注射药组(FL+AM)、青天葵总氨基酸注射液组(AM)、青天葵总黄酮注射液(FL)组。乌拉坦深麻醉，无菌操作，将高温高压消毒的10mg脱脂棉球分别植入大鼠侧腋窝皮下，棉球形状应和植入部位一样。术后各组大鼠尾静脉注射(0.6ml/只)，阴性对照组给予同体积的生理盐水，连续给药7天，第8天脱臼处死大鼠，取出棉球，置60℃烤箱烤至恒重，减去棉球原重量，即为肉芽肿重量，肉芽肿重量以g表示，比较各组肉芽肿重量。实验结果见表2。

表2 青天葵对大鼠棉球肉芽肿的影响(x±s)

表2结果表明，与空白对照组比较：清开灵阳性对照组、青天葵注射药组(FL+AM)、青天葵总氨基酸注射液组(AM)、青天葵总黄酮注射液(FL)组，均能显著抑制棉球肉芽组织的生长(P均<0.01)，提示各实验组药物对均棉球肉芽组织有较好的抑制作用。与清开灵阳性对照组比较：青天葵注射用药组有显著性差异(P<0.01)，提示青天葵注射用药组的抗炎作用比清开灵阳性对照组强；青天葵总黄酮注射液组(FL)有显著性差异(P<0.05)，提示青天葵总黄酮注射液组的抗炎作用比清开灵阳性对照组弱；青天葵总氨基酸注射液组(AM)无显著，提示青天葵总氨基酸注射液的抗炎作用与清开灵阳性对照组相当；实验结果显示青天葵总黄酮与总氨基酸混合有增强抗炎的协同作用。

(三)大鼠足跖肿胀实验

材料及试药：青天葵注射用药(总黄酮与总氨基酸混合粉针，用氯化钠注射液溶解，浓度为含总黄酮0.48mg/ml、含总氨基酸2.09mg/ml)，清开灵注射液。

实验动物：SD大鼠，雄性，180～220g，由广州中医药大学实验动物中心提供。

实验方法：

取雄性大鼠30只，随机分组，每组10只，分别为生理盐水对照组、阳性组、青天葵注射用药组。尾静脉注射给药(剂量同大鼠棉球肉芽肿实验)，空白对照组给予等容积生理盐水，每天1次，连续给药7天。用改良容积法测量各组大鼠右后足正常体积(在足正下作一清晰标线)，末次给药后在右后足跖皮下注入0.1ml角叉菜胶(浓度为0.2％)，测定致炎后1、2、3、4、5h右后足体积，计算肿胀率和肿胀抑制率。结果见表3、4。

表3 青天葵对大鼠足跖肿胀率的影响(x±s)

表4 青天葵对大鼠足跖肿胀抑制率的影响

表3结果表明，与空白对照组比较：青天葵注射用药组和清开灵注射液组在1、2、3、4、5h均能显著抑制角叉菜胶引起大鼠足跖肿胀(P值均<0.01)，提示各实验组药物均有明显的抗炎作用。与清开灵注射液阳性对照组比较：青天葵注射用药组有显著性差异(P<0.01)，提示青天葵注射用药组对急性炎症的抑制作用强于清开灵注射液。

(四)对小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响

材料及试药：青天葵注射用药(总黄酮+总氨基酸混合粉针，用时氯化钠注射液溶解，浓度为0.48mg/ml+2.09mg/ml)，清开灵注射液。

实验动物；NIH小鼠，雄性，18～22g，由广州中医药大学实验动物中心提供。

实验方法：

取NIH小鼠，体重18～22g，雄性，随机分为三组，每组10只，分别为对照组、阳性组、青天葵注射用药组。尾静脉注射给药，空白对照组给予等容积生理盐水，每天1次，连续给药2次，末次给药后0.5h，各鼠尾静脉注射2％伊文思蓝生理盐水溶液0.1ml/10g体重，立即腹腔注射0.8％醋酸生理盐水溶液0.2ml/只，20min后放血处死小鼠，剖开腹腔，用10ml生理盐水冲洗数次，收集洗液，离心，取上清在分光光度计590nm处测OD值，比较各组间差异。结果见表5。

表5 青天葵对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响(x±s)

表5结果显示，青天葵受试药组、清开灵注射液组与生理盐水组比较，均能抑制醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高(p<0.01)，青天葵受试药组与清开灵注射液组比较，抑制醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高的作用较强(p<0.05)，显示青天葵活性提取物有较好的抑制醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高的作用。

(五)对醋酸所致小鼠疼痛的影响(扭体法)

材料及试药：青天葵活性提取物(稀醇提取物，2mg/ml)，阿司匹林，生理盐水。

实验动物：NIH小鼠，雌雄各半，18～22g，由广州中医药大学实验动物中心提供。

实验方法：

取NIH小鼠，体重18～22g，雌雄各半，随机分为三组，每组10只，分别为生理盐水对照组、阳性组、青天葵活性提取物组。实验时，小鼠先禁食12h，然后灌胃给药，每日1次，连续7日，末次给药后1h腹腔注射0.8％醋酸生理盐水溶液0.2ml/只，观察记录20分钟内小鼠的扭体次数，比较各组差异。结果见表6。

表6 青天葵活性提取物对醋酸所致小鼠疼痛的影响(x±s)

表6结果显示，与生理盐水空白组比较，青天葵活性提取物能显著减少醋酸所致小鼠扭体次数(P<0.01)：阿司匹林亦能显著减少小鼠的扭体次数(P<0.01)，提示青天葵活性提取物有镇痛作用。

(六)对甲醛足跖皮下注射所致小鼠疼痛的影响

材料及试药：青天葵活性提取物(自制，2mg/ml)，阿司匹林，生理盐水。

实验动物：NIH小鼠，雌雄各半，18～22g，由广州中医药大学实验动物中心提供。

实验方法：

取NIH小鼠，体重18～22g，雌雄各半，随机分为三组，每组10只，分别为生理盐水对照组、阳性组、青天葵活性提取物组，小鼠先禁食12h，然后灌胃给药，并于药后1h各鼠左后足跖皮下注射2.5％甲醛生理盐水溶液，立即观察5min内小鼠舔后足的累积时间，比较各组间差异。结果见表7。

表7 青天葵活性提取物对甲醛所致小鼠疼痛的影响(x±s)

表7结果提示，与生理盐水对照组比较，青天葵活性提取物能显著减少甲醛足跖皮下注射所致疼痛小鼠的舔足累积时间(P<0.05)；阿司匹林亦可显著减少甲醛足跖皮下注射所致疼痛小鼠的舔足累积时间(P<0.01)。提示青天葵活性提取物能抑制甲醛所致小鼠疼痛。

2.青天葵活性提取物的增强免疫作用

(一)小鼠炭粒廓清实验

材料及试药：青天葵注射用药(总黄酮与总氨基酸混合粉针)，参麦注射液。0.25％醋酸泼尼松溶液，0.1％碳酸钠(Na₂CO₃)溶液，一得阁墨汁。

实验动物：NIH小鼠，雌雄各半，18～22g，由广州中医药大学实验动物中心提供。

实验方法：

取NIH小鼠，体重18～22g，随机分为4组，生理盐水组，青天葵注射用药组(含总黄酮0.51mg/ml，总氨基酸2.17mg/ml)，参麦注射组，醋酸泼尼松组。除醋酸泼尼松组灌胃给药0.2ml/10g体重外，各组均尾静脉注射给药0.1ml/10g体重。每天给药1次，连续给药5天，末次给药后30分钟，尾静脉注射墨汁(0.1ml/只)，于注射后2分钟和12分钟用毛细管(预先用肝素溶液湿润)分别从眼眶静脉丛取血50ul，溶液5ml的0.1％碳酸钠溶液中，摇匀，置于600nm比色，测定光密度(OD)。小鼠脱颈椎处死，分别称取肝、脾重量，计算廓清指数K或校正廓清指数α。OD₁

$K=\frac{\log {\mathrm{OD}}_1-\log {\mathrm{OD}}_2}{t_2-t_1}$

OD₁、OD₂为不同时间所取血样的光密度，t₂-t₁为取两血样的时间差。结果见下表：

表8 药物对小鼠炭粒廓清的影响

表8结果表明，与空白对照组比较：青天葵注射用药组、参麦注射液组、醋酸泼尼松组，均能显著提高小鼠的吞噬功能(P值均<0.01)，提示各实验组药物均有明显的提高免疫功能的作用。与醋酸泼尼松组比较：青天葵注射用药组、参麦注射液组均有显著性差异(P值均<0.05)，提示青天葵注射用药和参麦注射液均具有提高免疫功能的作用。与参麦注射组比较：青天葵注射用药组无差异(P>0.05)，提示青天葵活性提取物注射用药提高免疫的作用强度与参麦注射液相当。

(二)体液免疫实验

材料：青天葵活性提取物(60％乙醇提取物)，参麦注射液，0.25％醋酸泼尼松溶液。5％生理盐水鸡红细胞混悬液。

实验动物：NIH小鼠，雌雄各半，18～22g，由广州中医药大学实验动物中心提供。

实验方法：

取NIH小鼠，体重18～22g，随机分为4组，生理盐水组，青天葵活性提取物组，参麦注射液组，醋酸泼尼松组。各组小鼠腹腔注射5％生理盐水鸡红细胞混悬液0.2ml进行免疫，然后各组分别灌胃给药0.2ml/10g体重(参麦注射液组则尾静脉注射给药0.1ml/10g体重)，每日给药1次，连续给药7天。末次给药后1小时，各组小鼠眼眶静脉取血，离心，取血清用生理盐水稀释100倍，取稀释血清1ml，与％生理盐水鸡红细胞混悬液0.5ml、10％补体0.5ml混合，在37℃恒温箱中保温30分钟后，0℃冰箱中中止反应。然后离心，取上清液于在540nm处比色，测定光密度(OD)，另设不加血清的空白对照，取其上清液作为比色时调零。以OD读数作为判定血清溶血素的指标，比较各组的差异。结果见表9。

表9 青天葵对小鼠血清溶血素生成水平的影响

表9结果表明，与空白对照组比较：青天葵活性提取物组、参麦注射液组、醋酸泼尼松组，均能显著增加小鼠的红细胞抗体(P值均<0.01)，提示各实验组药物均有明显的提高免疫功能的作用。与醋酸泼尼松组比较：青天葵活性提取物组、参麦注射液组均无显著性差异(P值均>0.05)，提示青天葵注射用药和参麦注射液均具有较高的免疫功能。与参麦注射组比较：青天葵活性提取物组无差异(P>0.05)，提示青天葵活性提取物提高免疫的作用强度与参麦注射液相当。

(三)对小鼠免疫器官重量的影响

材料：青天葵活性提取物(水提物)，参麦注射液，0.25％醋酸泼尼松溶液。

实验动物：NIH小鼠，雌雄各半，14～18g，由广州中医药大学实验动物中心提供。

实验方法：取NIH小鼠，体重14～18g，随机分为4组，生理盐水组，青天葵活性提取物组，参麦注射液组，醋酸泼尼松组。各组分别灌胃给药0.2ml/10g体重(麦注射液组则尾静脉注射给药0.1ml/10g体重)，每日给药1次，连续给药7天。末次给药后2小时，将各组小鼠全部脱颈椎处死，剖取胸腺、脾脏，把其他组织剥离干净，滤纸吸干水分后，称重。计算胸腺重量系数和脾脏重量系数(胸腺重量系数＝胸腺重/体重×100，脾脏重量系数＝脾脏重/体重×100)，结果见表10。

表10 青天葵活性提取物对小鼠免疫器官胸腺、脾脏重量的影响

表10结果表明，与生理盐水对照组比较：青天葵活性提取物组，参麦注射液组，均能显著提高小鼠胸腺系数、脾重系数(P值均<0.01)，提示各实验组药物均有明显的提高免疫功能的作用。与醋酸泼尼松组比较：青天葵活性提取物组，参麦注射液组均有显著性差异(P值均<0.05)，提示青天葵活性提取物和参麦注射液提高免疫功能的作用非常强。参麦注射液组比较：青天葵活性提取物无差异(P>0.05)，提示青天葵活性提取物提高免疫的作用强度与参麦注射液相当。

3青天葵活性提取物的解热作用

材料：青天葵活性提取物(稀醇提取物)，参麦注射液，阿司匹林，酵母混悬液。

实验动物：SD大鼠，雌雄各半，220～250g，由广州中医药大学实验动物中心提供。

实验方法：

取SD大鼠，体重220～250g，肛温37±1℃，随机分为4组，生理盐水组(灌胃，0.5ml/100g)，青天葵活性提取物组(灌胃，5mg/100g)，参麦注射液组(尾静脉注射，0.5ml/100g)，阿司匹林组(灌胃，0.1g/kg)。除生理盐水组外，各组大鼠均皮下注射新配制的15％啤酒酵母混悬液(10ml/kg)，注射后2小时给药，每隔1小时测1次肛温，连续测10小时，自注射酵母后计时，计算各组平均肛温。结果见表11。

表11 青天葵活性提取物对大鼠啤酒酵母致热的降温作用

表11结果表明，与生理盐水对照组比较：青天葵活性提取物组、参麦注射液组、阿司匹林组在各时间点均能显著降低大鼠酵母致热后的体温(P值均<0.05)，提示各实验组药物均有较好的解热作用；与阿司匹林组比较：青天葵活性提取物组、参麦注射液组均无大的差异(P值均>0.05)，提示青天葵活性提取物和参麦注射液的解热作用强度接近于阿司匹林；与参麦注射液组比较：青天葵活性提取物组无统计差异，提示青天葵活性提取物降低酵母致热的大鼠体温的作用强度与参麦注射液相当。

4青天葵活性提取物的祛痰镇咳作用

(一)对小鼠氨水引咳的镇咳作用

材料：青天葵活性提取物(稀醇提取物，2mg/ml)，0.2％磷酸可待因，浓氨水，生理盐水。

实验动物：NIH小鼠，雌雄各半，18～22g，由广州中医药大学实验动物中心提供。

实验方法：

取NIH小鼠，体重18～22g，随机分为3组，生理盐水组，可待因阳性组，青天葵组。阳性组与青天葵组小时灌胃0.2ml/10g，生理盐水组则给予等量生理盐水。每天给药一次，连续5天。末次给药30分钟后，将小鼠放入玻璃钟罩内，打开通过橡皮管与之相连的超声雾化器，将浓氨水均匀地喷入玻璃钟罩内，以53kPa恒压将氨水均匀喷雾15秒，立即取出小鼠，观察记录小鼠的咳嗽潜伏期和3分钟内咳嗽次数(以小鼠腹肌收缩并张大口为咳嗽动作指征)。结果见表12。

表12 青天葵活性提取物对氨水引咳小鼠的止咳作用

表12结果表明，与空白对照组比较：青天葵活性提取物、磷酸可待因均可显著延长氨水所致小鼠咳嗽潜伏期(P<0.01)，且可显著抑制氨水所致小鼠咳嗽(P<0.01)。与磷酸可待因阳性对照组比较：青天葵活性提取物有显著统计差异(P<0.01)，提示青天葵活性提取物的延长小鼠咳嗽潜伏期、抑制小鼠咳嗽的作用较强。

(二)对小鼠的祛痰作用(小鼠气管酚红法)

材料：青天葵活性提取物(稀醇提取物，2mg/ml)，0.5％酚红溶液，5％碳酸氢钠溶液，沐舒坦盐酸氨溴索片(上海勃林格殷格翰药业有限公司)，生理盐水。

实验动物；NIH小鼠，雌雄各半，18～22g，由广州中医药大学实验动物中心提供。

实验方法：

取NIH小鼠，体重18～22g，随机分为3组，生理盐水组，沐舒坦盐酸氨溴索片组，青天葵组。各组小鼠禁食不禁水12小时。青天葵组灌胃给药(0.3ml/10g)，沐舒坦盐酸氨溴索片组给予30mg/kg，生理盐水组则给予等量的生理盐水。每天给药一次，连续4天。末次给药30分钟后，腹腔注射0.5％酚红溶液0.5ml/只。过30分钟后，颈椎脱臼处死小鼠，仰位固定于手术板上，剪开颈前皮肤，分离气管，剥去气管周围组织，剪下自甲状软骨至气管分支处的一段气管，放进盛有3ml生理盐水的试管中冲洗，再加入5％碳酸氢钠溶液0.1ml，2000r/min离心5min，取上清液，分光光度计546nm处测定OD值，根据酚红的标准曲线计算酚红的排泄量。结果见表13。

表13 青天葵活性提取物对小鼠气管酚红排泌量的影响

表13结果表明，与空白对照组比较：青天葵活性提取物、沐舒坦盐酸氨溴索片均能显著提高小鼠气管酚红排泄量(P<0.01)；与沐舒坦盐酸氨溴索比较：青天葵活性提取物组小鼠气管酚红排泄量有统计学差异(P<0.01)；提示青天葵活性提取物有较好的提高小鼠气管酚红排泄量的功能，有较明显的祛痰作用。

5.青天葵活性提取物的抗菌抗病毒作用

(一)体外抗病毒作用(鸡胚外法)

材料：青天葵活性提取物(稀醇提取物，自制)，鸡胚(10日龄莱亨种鸡胚)。流感病毒甲型(PR8、张57-4、京科68-1、沪74-5等株)、流感乙型(Lee株)、流感丙型(1233株)、副流感病毒I型(Sand株)，来自全国流感防治研究中心。

实验方法：

将药液用PH7.0缓冲盐水自1:10开始作倍比稀释，每一稀释度分别注入3-5只鸡胚尿囊腔，0.3ml/只，同时设正常对照鸡胚。每天观察其生长情况，当含药鸡胚不出现死亡的最低浓度则为该药的对鸡胚无毒性界限，进行正式试验时即采用此浓度。

将不同稀释度的药液与病毒液(1血凝单位)等量混匀，对照组以缓冲盐水代替药液。置上述各管于24℃水浴1h，各管试液分别注入3-5只鸡胚尿囊腔，0.3ml/只，35℃孵育48h。在对照组鸡胚存活情况下，收取各存活的鸡胚尿囊液，进行鸡血红细胞凝集试验，能抗抑病毒复制而不出现鸡血红细胞凝集的最低药物浓度，即为该药的最小抗病毒浓度。

结果表明，青天葵活性提取物在鸡胚外具有明显的抗各型流感病毒和I型副流感病毒的作用，其最小抗病毒浓度见表14。

表14 青天葵活性提取物抗流感病毒和I型副流感病毒的最小抗病毒浓度

表14结果提示，青天葵活性提取物对所试病毒均有不同程度的抑制作用，其中对甲型流感病毒、I型副流感病毒抑制作用较强。

(二)体外抗菌作用

材料：青天葵活性提取物，营养肉汤(广东省科学院微生物研究所产品)，沙保氏培养基(本室按常规制备)。

金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、丙型链球菌、绿色链球菌、福氏志贺氏菌、肺炎球菌、卡他球菌、流感杆菌、伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌、绿脓杆菌、肺炎杆菌、大肠杆菌及普通变形杆菌。

实验方法：

取无菌试管11支依次排列，每管各加入肉膏汤1ml，于第1管加入1ml实验药液，混匀，吸取1ml加入第2管，混匀。吸取1ml加入第3管，如此操作，依次加到第10管，混匀，弃去1ml，第11管设为细菌对照管(不加药液)。于上述试管中加入1：2000的供试菌液(8小时培养物)0.05ml，37℃培养24小时，依次取各试管中试验液各1环，转种于兔血琼脂平皿上，37℃培养24小时后，观察结果，判定最小抑菌浓度(MIC)。结果见表15。

表15 青天葵最小抑菌浓度

表15结果显示，青天葵活性提取物对所试菌种均有不同程度的抗菌作用，其中对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、卡他球菌、肺炎球菌和肺炎杆菌等的抑菌作用较强。

6.青天葵活性提取物的抗急性肺损伤作用

材料：青天葵注射用药(总黄酮与总氨基酸混合粉针)，参麦注射液，内毒素(LPS，Sigma)，生理盐水。

实验动物：SD大鼠，雄性，200±20克，40只，由广州中医药大学实验动物中心提供。

实验方法：

取SD大鼠随机分4组，手术试验前尾静脉给药，青天葵注射用药组按(2mg总黄酮+8mg总氨基酸)/kg给药，参麦注射液给药剂量为10mg/kg；生理盐水组和模型组则尾静脉注射生理盐水约1ml(4ml/kg)。各组大鼠手术试验前一天给药1次，生理盐水组和模型组则按4ml/kg注射，禁食12小时。试验时，动物按照45mg/kg体重以戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，分别行气管、右侧颈外静脉、左侧颈总动脉插管，之后各组处理如下：

模型组：自右侧颈外静脉，推注LPS(O111B4)15mg/kg，进行造模。之后推注的生理盐水(4ml/kg)。生理盐水组以等量的生理盐水代替内毒素，于相同时间点，以相同方式给药。治疗组：于右侧颈外静脉，预先给1/3剂量的受试药注射液，随后推注15mg/kg LPS，余2/3量的受试药注射液于造模后推注。对照组：右侧颈外静脉，预先给1/3治疗量的参麦注射液，随后推注15mg/kg LPS，余2/3量的参麦注射液于造模后推注，参麦注射液量为10mg/kg。

各组动物均在注射内毒素同时股静脉注射Evans蓝(50mg/kg)，将动物开胸取出肺脏，剪去周围组织，将肺脏浸泡在甲酰胺溶液中(甲酰胺用量按动物体重20mg/100g)，置45-50℃温箱中温育72h，待组织中色素全部浸出，取出组织，离心，取上清液，光光度计在620nm进行比色，根据OD值来评价肺血管通透性的变化；另一批动物开胸取出肺脏，称湿重后，置烘箱(80℃，20h)烤至恒重，称干重，计算干/湿重比结果见表16。

表16 青天葵注射用药对大鼠肺血管通透性及肺干/湿重比的影响

表16结果显示，与生理盐水空白对照组比较：模型组、青天葵注射用药组、参麦注射液组，OD值均有显著差异(P<0.01)，模型组大鼠肺干/湿重比有差异(P<0.01)，提示造模成功；与模型组比较：青天葵注射用药组、参麦注射液组OD值均可显著降低(P<0.01)，提示能降低大鼠肺血管通透性；大鼠肺干/湿重比有差异(P<0.05)，提示青天葵注射用药、参麦注射液能增大SD大鼠肺干/湿重比。实验结果提示青天葵注射用药和参麦注射液有保护内毒素所致SD大鼠肺损伤的作用。与参麦注射液组比较：青天葵注射用药组无显著统计差异(P>0.05)，提示青天葵活性提取物注射用药保护内毒素所致SD大鼠肺损伤的作用与参麦注射液相当。

本发明所述的青天葵活性提取物具有：抗菌抗病毒作用，抑制多种致病菌、病毒；对大鼠内毒素型急性肺损伤有保护作用；有提高动物免疫力的作用；具有解热作用，能降低大鼠或家兔的体温(内毒素或酵母致发热)；具有抗炎镇痛的作用；具有祛痰镇咳的作用。

本发明所述的青天葵活性提取物制备方法原料丰富，制作工艺简易方便。

附图说明

图1青天葵总黄酮提取物紫外扫描图谱。

图2总氨基酸提取物的氨基酸HLPC指纹图谱。

具体实施方式

所涉及的方法是本领域的技术人员能够掌握和运用的技术手段，但以下实施示例不得理解为任何意义上的对本发明权利要求的限制。

实施例1

青天葵干燥药材1kg，加80％乙醇回流提取2次(第一次10倍量，第二次8倍量)，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过AB-8型大孔吸附树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过聚酰胺柱(30～60目)，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，冷冻干燥，即得青天葵总黄酮提取物。青天葵总黄酮提取物紫外扫描图谱如图1所示。

由图1可见，分别在波长为270nm和360nm处有黄酮类化合物的特征吸收峰。

青天葵干燥药材，粉碎成粗粉，取1kg加10倍量水浸泡24h，减压浓缩至每ml含生药约1g，加乙醇至含醇量为80％，静置过夜，上清液减压浓缩至无醇味，过732强酸型阳离子交换树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717强碱型阴离子交换树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，活性炭脱色，冷冻干燥得青天葵总氨基酸提取物。总氨基酸提取物的氨基酸HLPC指纹图谱如图2所示。

由图2可见，青天葵总氨基酸部位含有18种氨基酸，并且各氨基酸峰的相对峰面积与标准18种氨基酸的峰面积不同，另有除标准18种氨基酸以外的未知氨基酸峰。

在无菌条件下操作，将上述青天葵总黄酮提取物和青天葵总氨基酸提取物按照1：4的比例混合，分装，灭菌消毒，即得青天葵粉针。青天葵活性提取物中总黄酮含量约为18％，总氨基酸的含量约为72％。

实施例2

青天葵干燥药材1kg，加60％乙醇回流提取2次(第一次10倍量，第二次8倍量)，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至浸膏(相对密度1.05～1.25)。加等倍量的糊精、4倍量的淀粉混合均匀，按片剂的要求制成片剂。青天葵活性提取物中总黄酮含量约为4％，总氨基酸约为16％。

实施例3

青天葵干燥药材1kg，加80％乙醇回流提取2次(第一次12倍量，第二次8倍量)，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过AB-8型大孔吸附树脂，水洗至无色，50％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过聚酰胺柱(30～60目)，水洗至无色，80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，干燥得青天葵活性提取物，其中总黄酮含量约为83％。

将上述青天可提取物用注射用水溶解，用10％氢氧化钠溶液调PH值等于9，分装，灭菌消毒，即得青天葵总黄酮注射液。

实施例4

取青天葵干燥药材500g，加水回流提取2次(第一次15倍量，第二次10倍量)，每次1小时，合并提取液，过超滤膜(分子量1000)，浓缩至约1000ml，加乙醇至含醇量为80％，静置过夜，取上清液浓缩至约500ml，加0.1％活性炭煮沸半小时，过滤，滤液过0.2um微孔滤膜，得到青天葵活性提取物，其中总黄酮含量约为12％，和总氨基酸含量约为50％。

将上述青天葵活性提取物加注射用水至1000ml，分装(每瓶100ml)，灭菌消毒，即得青天葵注射液。

实施例5

青天葵干燥药材1kg，加10倍量水浸泡48h，减压浓缩至1000ml，加乙醇使沉淀，静置过夜，上清液减压浓缩至约1000ml，过732强酸型阳离子交换树脂，水洗至无色，然后80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717强碱型阴离子交换树脂，水洗至无色，再用80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，得备用液；

水提后的药渣，加80％乙醇回流提取2次(第一次10倍量，第二次8倍量)，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过DP—100型大孔吸附树脂，水洗至无色，65％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过聚酰胺柱(30～60目)，水洗至无色，60％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，与上述备用液混合，干燥得青天葵活性提取物，呈黄色至黄棕色粉末，定性鉴别实验显示：茚三酮反应呈阳性，盐酸—镁粉反应呈阳性，Molish反应呈阳性，定量检测：氨基酸自动分析仪(DIONEX)检测，总氨基酸含量约为70％；以芦丁为对照品，紫外分光光度法测定总黄酮含量约为16％。青天葵活性提取物加等倍量羧甲基淀粉钠，混匀，干压制粒，装胶囊，得胶囊剂。

实施例6

青天葵干燥药材1kg，加80％乙醇回流提取2次(第一次10倍量，第二次8倍量)，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过AB-8型大孔吸附树脂，水洗至无色，80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过聚酰胺柱(30～60目)，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，得备用液；

醇提后的药渣，加10倍量水浸泡36h，减压浓缩至每ml含生药约1g，加乙醇至含醇量为80％，静置过夜，上清液减压浓缩至无醇味，过732强酸型阳离子交换树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717强碱型阴离子交换树脂，水洗至无色，75％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，与备用液混合，干燥得青天葵活性提取物。氨基酸自动分析仪(DIONEX)检测，总氨基酸含量约为65％；以芦丁为对照品，紫外分光光度法测定总黄酮含量约为18％。青天葵活性提取物加等倍量蔗糖、等倍量糊精及适量淀粉，制成颗粒，干燥，整粒，制成1000g，分装成10克每包。

实施例7

青天葵干燥药材粗粉1kg，超临界二氧化碳流体(内含约5％乙醇为夹带剂)在45℃、20MPa的条件下，提取2小时，所得浸膏为青天葵的超临界二氧化碳萃取提取物。取该提取物，加石油醚(60-90℃)充分脱脂脱色，石油醚不溶部分减压浓缩，冷冻干燥以除尽溶剂，得青天葵活性提取物，粉碎，过100目筛，即得青天葵活性提取物，其中总黄酮含量约为11％，总氨基酸含量约为46％。

实施例8

青天葵干燥药材1kg，加70％乙醇回流提取2次(第一次10倍量，第二次8倍量)，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过AB-8型大孔吸附树脂，水洗至无色，80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过聚酰胺柱(30-60目)，水洗至无色，80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，冷冻干燥，即得青天葵总黄酮提取物。

青天葵干燥药材，粉碎成粗粉，取1kg加10倍量水浸泡24-48h，减压浓缩至每ml含生药约1g，加乙醇至含醇量为80％，静置过夜，上清液减压浓缩至无醇味，过732型阳离子交换树脂，水洗至无色，60％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717型阴离子交换树脂，水洗至无色，50％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，活性炭脱色，冷冻干燥得青天葵总氨基酸提取物。

将上述得到的青天葵总黄酮提取物和青天葵总氨基酸提取物以2：1重量比混合得到青天葵活性提取物，其中总黄酮含量约为58％，总氨基酸含量约为30％。

实施例9

青天葵干燥药材1kg加10倍量水浸泡48h，过滤得水提液和青天葵药渣。将水提取溶液减压浓缩至每ml含生药约1g，加乙醇至含醇量为80％，静置过夜，上清液减压浓缩至无醇味，过732型阳离子交换树脂，水洗至无色，75％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717型阴离子交换树脂，水洗至无色，80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，活性炭脱色，冷冻干燥得青天葵总氨基酸提取物。

将上述水提取后的青天葵药渣干燥，加80％乙醇回流提取2次(第一次10倍量，第二次8倍量)，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过聚酰胺柱(30-60目)，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，冷冻干燥，即得总黄酮提取物。

将上述得到的总黄酮提取物和总氨基酸提取物等量混合，得到青天葵活性提取物，其中总黄酮含量约为41％，总氨基酸含量约为44％。

实施例10

青天葵干燥药材1kg，加80％乙醇回流提取2次(第一次10倍量，第二次8倍量)，每次1小时，过滤，合并两次提取液，得醇提取溶液和青天葵药渣。将醇提取液减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过AB-8型大孔吸附树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，冷冻干燥，即得总黄酮提取物。

将上述醇提取后的青天葵药渣干燥后，10倍量水浸泡48h，过滤得青天葵水提取溶液。将水提取溶液减压浓缩至每ml含生药约1g，加乙醇至含醇量为80％，静置过夜，上清液减压浓缩至无醇味，过732型阳离子交换树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717型阴离子交换树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，活性炭脱色，冷冻干燥得青天葵总氨基酸提取物。

将上述得到的总黄酮提取物和总氨基酸提取物按照4：1混合得到青天葵活性提取物，其中总黄酮含量约为71％，总氨基酸含量约为12％。

实施例11

取青天葵干燥药材500g，加水回流提取2次(第一次10倍量，第二次8倍量)，每次1小时，合并提取液，过超滤膜(分子量1000)，浓缩至约800ml，加乙醇至含醇量为85％，静置过夜，取上清液浓缩至约500ml，加0.2％活性炭脱色，过滤，滤液过0.2um微孔滤膜，减压浓缩，干燥，得青天葵活性提取物。其中总黄酮含量约为10％和总氨基酸含量约为48％。

实施例12

青天葵干燥药材1kg，加80％乙醇回流提取3次(第一次10倍量，第二次6倍量，第三次6倍量)，每次0.5小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过DP-100型大孔吸附树脂，水洗至无色，80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过聚酰胺柱(30～60目)，水洗至无色，80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，干燥，即得青天葵总黄酮提取物。

青天葵干燥药材，粉碎成粗粉，取1kg加15倍量水浸泡40h，减压浓缩至每ml含生药约1g，加乙醇至含醇量为80％，静置过夜，上清液减压浓缩至无醇味，过732强酸型阳离子交换树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717强碱型阴离子交换树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，活性炭脱色，干燥得青天葵总氨基酸提取物。

将上述青天葵总黄酮提取物和青天葵总氨基酸提取物按照重量比1：1混合得青天葵活性提取物，其中总黄酮含量约为39％，总氨基酸的含量约为45％。

实施例13

青天葵干燥药材1kg，加80％乙醇回流提取2次(第一次10倍量，第二次8倍量)，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过AB-8型大孔吸附树脂，水洗至无色，80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过聚酰胺柱(30～60目)，水洗至无色，80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，冷冻干燥，即得青天葵总黄酮提取物。

青天葵干燥药材，粉碎成粗粉，取1kg加10倍量水浸泡24h，减压浓缩至每ml含生药约1g，加乙醇至含醇量为80％，静置过夜，上清液减压浓缩至无醇味，过732强酸型阳离子交换树脂，水洗至无色，65％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717强碱型阴离子交换树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，活性炭脱色，冷冻干燥得青天葵总氨基酸提取物。

将上述青天葵总黄酮提取物和青天葵总氨基酸提取物按照重量比10：1混合得到青天葵活性提取物，其中总黄酮含量约为77％，总氨基酸的含量约为9％。

实施例14

青天葵干燥药材1kg，加15倍量水浸泡48h，减压浓缩至1000ml，加乙醇使沉淀，静置过夜，上清液减压浓缩至约1000ml，过732强酸型阳离子交换树脂，水洗至无色，然后80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717强碱型阴离子交换树脂，水洗至无色，再用80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，干燥得青天葵总氨基酸提取物。

水提后的药渣，加80％乙醇回流提取2次(第一次12倍量，第二次10倍量)，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过DP—100型大孔吸附树脂，水洗至无色，60％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过聚酰胺柱(30～60目)，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，干燥得青天葵总黄酮提取物。

将上述得到得青天葵总黄酮提取物和总氨基酸提取物一重量比1：10混合得到青天葵活性提取物，其中总氨基酸含量约为81％；总黄酮含量为8％。

实施例15

青天葵干燥药材1kg，加80％乙醇回流提取2次(第一次10倍量，第二次8倍量)，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过AB-8型大孔吸附树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过聚酰胺柱(30～60目)，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，干燥得到总黄酮提取物。

醇提后的药渣，加10倍量水浸泡36h，减压浓缩至每ml含生药约1g，加乙醇至含醇量为80％，静置过夜，上清液减压浓缩至无醇味，过732强酸型阳离子交换树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717强碱型阴离子交换树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，干燥得总氨基酸提取物。

将上述总黄酮提取物和总氨基酸提取物以重量比1：5混合得青天葵活性提取物，其中总氨基酸含量约为75％；总黄酮含量约为14％。

实施例16

青天葵干燥药材1kg，加80％乙醇回流提取2次(第一次6倍量，第二次6倍量)，每次2小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过AB-8型大孔吸附树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过聚酰胺柱(30～60目)，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，冷冻干燥，即得青天葵总黄酮提取物。

青天葵干燥药材，粉碎成粗粉，取1kg加12倍量水浸泡24h，减压浓缩至每ml含生药约1g，加乙醇至含醇量为80％，静置过夜，上清液减压浓缩至无醇味，过732强酸型阳离子交换树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717强碱型阴离子交换树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，活性炭脱色，冷冻干燥得青天葵总氨基酸提取物。

在无菌条件下操作，将上述青天葵总黄酮提取物和青天葵总氨基酸提取物按照重量比3：10混合得到青天葵活性提取物，其中总黄酮含量约为20％，总氨基酸含量约为70％。

实施例17

青天葵干燥药材1kg，加15倍量水浸泡48h，减压浓缩至1000ml，加乙醇使沉淀，静置过夜，上清液减压浓缩至约1000ml，过732强酸型阳离子交换树脂，水洗至无色，然后80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717强碱型阴离子交换树脂，水洗至无色，再用80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，干燥得青天葵总氨基酸提取物。

水提后的药渣，加80％乙醇回流提取2次(第一次12倍量，第二次8倍量)，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过DP—100型大孔吸附树脂，水洗至无色，50％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过聚酰胺柱(30～60目)，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，干燥得青天葵总黄酮提取物。

将上述得到得青天葵总黄酮提取物和总氨基酸提取物的重量比3：10混合得到青天葵活性提取物，其中总氨基酸含量为70％；总黄酮含量为20％。

实施例18

青天葵干燥药材1kg，加80％乙醇回流提取2次(第一次6倍量，第二次6倍量)，每次2小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过AB-8型大孔吸附树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，加等倍量水稀释，过聚酰胺柱(30～60目)，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，干燥得到总黄酮提取物。

醇提后的药渣，加12倍量水浸泡36h，减压浓缩至每ml含生药约1g，加乙醇至含醇量为80％，静置过夜，上清液减压浓缩至无醇味，过732强酸型阳离子交换树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717强碱型阴离子交换树脂，水洗至无色，70％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，干燥得到总氨基酸提取物。

将上述总黄酮提取物和总氨基酸提取物以重量比3：10混合得青天葵活性提取物，其中总氨基酸含量约为70％；总黄酮含量约为20％。

实施例19

青天葵干燥药材1kg，加70％乙醇回流提取2次(第一次12倍量，第二次6倍量)，每次0.5小时，合并提取液，减压浓缩至浸膏(相对密度1.05～1.25)。加等倍量的糊精、4倍量的淀粉混合均匀，按片剂的要求制成片剂。青天葵活性提取物中总黄酮含量约为5％，总氨基酸约为15％。

实施例20

青天葵干燥药材1kg，加10％乙醇回流提取2次(第一次10倍量，第二次6倍量)，每次1.5小时，合并提取液，减压浓缩至浸膏(相对密度1.05～1.25)。加等倍量的糊精、4倍量的淀粉混合均匀，按片剂的要求制成片剂。青天葵活性提取物中总黄酮含量约为4％，总氨基酸约为18％。

实施例21

青天葵干燥药材1kg，加50％乙醇回流提取2次(第一次10倍量，第二次8倍量，第三次6倍量)，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至浸膏(相对密度1.05～1.25)。加等倍量蔗糖、等倍量糊精及适量淀粉，制成颗粒，干燥，整粒，制成颗粒剂。青天葵活性提取物中总黄酮含量约为4％，总氨基酸约为16％。

实施例22

青天葵干燥药材1kg，加30％乙醇回流提取2次(第一次10倍量，第二次8倍量)，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至浸膏(相对密度1.05～1.25)。加等倍量的糊精、4倍量的淀粉混合均匀，按片剂的要求制成片剂。青天葵活性提取物中总黄酮含量约为4％，总氨基酸约为16％。

Claims (10)

1、一种青天葵活性提取物，含有质量百分比为10～90％总黄酮和质量百分比为10～90％总氨基酸。

2、权利要求1所述的青天葵活性提取物，其中含有质量百分比为70％总氨基酸和质量百分比为20％总黄酮。

3、一种制备权利要求1或2所述的青天葵活性提取物的方法，青天葵干燥药材中加6～15倍量的10～80％乙醇回流提取2～3次，每次0.5～2小时，合并提取液，浓缩，使用大孔吸附树脂或聚酰胺树脂或阴离子交换树脂或阳离子交换树脂提纯得青天葵活性提取物。

4、权利要求3所述的青天葵活性提取物制备方法，其特征在于在青天葵干燥药材，加6～12倍量的10～70％乙醇回流2～3次，每次1～2小时，合并提取液，浓缩至无醇味，过AB—8大孔吸附树脂，先水洗至无色，收集过柱液和水洗液得备用液；然后再用50～80％乙醇洗脱AB—8大孔吸附树脂至无色，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，过聚酰胺柱，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，干燥得青天葵总黄酮提取物；取备用液过732型阳离子交换树脂，水洗至无色，然后50～80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，再过717型阴离子交换树脂，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，干燥得青天葵总氨基酸提取物；合并得青天葵活性提取物。

5.一种制备权利要求1或2所述的青天葵活性提取物的方法，使用含2.5％～10％的乙醇夹带剂的超临界二氧化碳萃取青天葵，提取物减压蒸发除去溶剂，加石油醚脱脂脱色，石油醚不溶解部分经减压蒸发冷冻干燥除去溶剂，得产物。

6.一种制备权利要求1或2所述的青天葵活性提取物的方法，首先制备青天葵总氨基酸提取物和青天葵总黄酮提取物，然后将青天葵总氨基酸提取物和青天葵总黄酮提取物混合得到；其中

所述的青天葵总氨基酸提取物依据以下方法制备：在青天葵干燥药材中加10～15倍量水浸泡24～48h，减压浓缩至小体积，加80％乙醇使沉淀，静置过夜，上清液减压浓缩至无醇味，过732阳离子交换树脂，水洗至无色，然后50～80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717阴离子交换树脂，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液减压浓缩干燥；

所述的青天葵总黄酮提取物依据以下方法制备：在青天葵干燥药材中加6～12倍量的80％乙醇回流提取2～3次，每次1～2小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，过AB-8大孔吸附树脂，水洗至无色，然后50～8％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，过聚酰胺柱，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩干燥。

7.一种制备权利要求1或2所述的青天葵活性提取物的方法是，在青天葵干燥药材中加10～15倍量水浸泡24～48h，减压浓缩至小体积，加乙醇使沉淀，静置过夜，上清液减压浓缩至无醇味，过732型阳离子交换树脂，水洗至无色，然后50～80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717型阴离子交换树脂，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，备用；水提后的药渣，加6～12倍量的80％乙醇回流提取2～3次，每次1～2小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，过大孔吸附树脂，水洗至无色，然后50～80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，过聚酰胺柱，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，与上述备用液混合，干燥得青天葵提取物。

8.一种制备权利要求1或2所述的青天葵活性提取物的方法是，在青天葵干燥药材中加6～12倍量的80％乙醇回流提取2～3次，每次1～2小时，合并提取液，减压浓缩至无醇味，过AB—8大孔吸附树脂，水洗至无色，然后50～80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，过聚酰胺柱，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味备用；醇提后的药渣，加10～15倍量水浸泡24～48h，减压浓缩至小体积，加乙醇使沉淀，静置过夜，上清液减压浓缩至无醇味，过732阳离子交换树脂，水洗至无色，然后50～80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集醇洗液，减压浓缩至无醇味，过717阴离子交换树脂，水洗至无色，再用50～80％乙醇洗脱至无茚三酮反应，收集乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，与上述备用液混合，干燥得青天葵提取物。

9.一种药物组合物，含有治疗药效的权利要求1或2所述的青天葵活性提取物和药学上可以接受的辅料。

10.权利要求1或2所述的青天葵活性提取物在制备治疗病毒性呼吸系统疾病药物中的应用。

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