CN100462361C

CN100462361C - 芒柄花素-3′-磺酸钠、樱黄素-3′-磺酸钠及其制备方法和药物用途

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Publication number: CN100462361C
Application number: CNB2007100173265A
Authority: CN
Inventors: 张尊听; 王春燕; 田振军; 王秋亚; 刘辉; 郑建斌; 索志荣
Original assignee: Shaanxi Normal University
Current assignee: Shaanxi Normal University
Priority date: 2007-01-31
Filing date: 2007-01-31
Publication date: 2009-02-18
Anticipated expiration: 2027-01-31
Also published as: CN101020684A

Abstract

本发明属于杂环化合物技术领域，具体涉及到杂环不氢化的含六节环，有一个氧原子作为仅有环杂原子，与苯环稠合有芳环仅连在位置2的杂环化合物。本发明提供了新化合物芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠及其一种制备方法，其工艺包括：在溶剂中加入反应物芒柄花素或樱黄素，再加入磺化剂，反应物与磺化剂进行化学反应，得到本发明化合物与未反应物的混合物，用常规分离方法并使其纯化，得到本发明的化合物纯品。还提供了一种治疗高脂血症和脂肪肝症的药物和组合物，其中有治疗有效量的芒柄花素-3′-磺酸钠或樱黄素-3′-磺酸钠和药学上可接受的载体；以及芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠在制备治疗高脂血症和脂肪肝症的药物中的应用。

Description

芒柄花素-3′-磺酸钠、樱黄素-3′-磺酸钠及其制备方法和药物用途

技术领域

本发明属于杂环化合物技术领域，具体涉及到杂环不氢化的含六节环，有一个氧原子作为仅有环杂原子，与苯环稠合有芳环仅连在位置2的杂环化合物。

背景技术

异黄酮类化合物是天然产物中活性成分之一，具有较高的药用价值，芒柄花素和樱黄素均属于异黄酮类化合物。芒柄花素广泛分布于豌豆、豇豆、大豆、刺果甘草、野葛根和红三叶草等食用及药用植物中，具有明显的降血脂、抗肿瘤、抗脂质过氧化、抗骨质疏松、抑制螺杆菌等活性；樱黄素主要存在于红车轴草、鸡血藤等植物中，具有抗肿瘤、降血脂、治疗骨质疏松，改善妇女更年期症状等用途。芒柄花素和樱黄素异黄酮类化合物，因水溶性和脂溶性都很低，在作为药物时生物利用度低、显效慢，并且只能制成口服药剂。为此，本发明将芒柄花素和樱黄素磺化，给它们的分子结构中引入磺酸基增加水溶性，以改善芒柄花素和樱黄素在临床使用时的效果。

发明内容

本发明的目的在于克服上述芒柄花素和樱黄素的缺点，提供两种水溶性高的具有药用价值的新化合物：芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠。

本发明的另一个目的在于提供一种制备上述两个化合物的方法。

本发明的进一步目的在于提供一种治疗高脂血症和脂肪肝症的药物和组合物。

本发明的第四个目的在于提供一种上述化合物和组合物在制备治疗高脂血症和脂肪肝症的药物中的应用。

本发明芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠的化学名称分别为7-羟基-4′-甲氧基异黄酮-3′-磺酸钠和4′，5-二羟基-7-甲氧基异黄酮-3′-磺酸钠，它们的化学结构分别用下述式(1)和式(2)表示：

式(1)，芒柄花素-3′-磺酸钠：R₁＝R₂＝H R₃＝CH₃

式(2)，樱黄素-3′-磺酸钠：R₁＝CH₃R₂＝OH R₃＝H

采用化学反应制备本发明的芒柄花素-3′-磺酸钠的方法如下：

(1)在反应釜中加入溶剂和下式(3)芒柄花素，搅拌下使芒柄花素完全溶解在溶剂中，再加入磺化剂，使芒柄花素与磺化剂进行化学反应，所用芒柄花素与磺化剂的摩尔比为1：1～1：10，用调温装置使反应液的温度为20～100℃，反应5分钟～10小时，得芒柄花素-3′-磺酸与未反应物的混合物。

式(3) 芒柄花素

(2)将(1)反应后的混合物冷却至室温，加入反应物总体积1～5倍量10～20％的氯化钠溶液，充分搅拌，静置生成沉淀，用常规分离方法，将式(1)化合物分离出来，得到粗品，再加入粗品量的1～5倍量10～20％的氯化钠溶液使其纯化，得到化合物式(1)的纯品。

式(3) 式(1)

以樱黄素为先导化合物制备本发明的樱黄素-3′-磺酸钠的方法如下：

(1)反应釜中加入溶剂和式(4)樱黄素，搅拌下使樱黄素完全溶解在溶剂中，再加入磺化剂，使樱黄素与磺化剂进行化学反应，所用樱黄素与磺化剂的摩尔比为1：1～1：10，用

式(4)樱黄素

调温装置使反应液的温度为20～100℃，反应5分钟～10小时，得樱黄素-3′-磺酸与未反应物的混合物。

(2)将(1)反应后的混合物冷却至室温，加入反应物总体积1～5倍量10～20％的氯化钠溶液，充分搅拌，静置生成沉淀，用常规分离方法，将化合物分离出来，得到粗品，再加入粗品量的1～5倍量10～20％氯化钠溶液使其纯化，得到化合物式(2)纯品。

式(4) 式(2)

本发明芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠的制备方法中，化学反应所用的溶剂是70～98％的浓硫酸，所用的磺化剂可以是浓硫酸或氯磺酸或发烟硫酸或三氧化硫。

本发明芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠的制备方法中，磺化反应的优选温度为20～100℃，反应的优选时间为30分钟～8小时。

本发明芒柄花素-3′-磺酸钠的制备方法中，化学反应的最佳温度为40℃，化学反应的最佳时间为2小时；樱黄素-3′-磺酸钠的制备方法中，化学反应的最佳温度为50℃，化学反应的最佳时间为2.5小时。

本发明的药物组合物含有治疗有效量的上述式(1)或式(2)为活性成分，以及含有一种或多种药学上可接受的载体。

本发明的化合物和药物组合物可用于制备治疗高脂血症和脂肪肝症的药物中的应用。

本发明有效成分芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠制备治疗高脂血症和脂肪肝症的药物用常规药用制剂的形式来使用；所述的常规药用制剂含作为活性成分的芒柄花素-3′-磺酸钠或樱黄素-3′-磺酸钠，该活性成分在制剂中与药学上可接受的载体如适宜于胃肠内和胃肠外给药的有机或无机的固体或液体赋形剂混合。该药用制剂可以是固体形式如片剂、颗粒集、粉剂、胶囊剂；也可以是液体形式如注射剂、悬浮剂、糖浆剂和乳剂等。

上述制剂中可含有辅助物质、稳定剂、润湿剂和其它常用的添加剂，如乳糖、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸、硬脂酸镁、石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、花生油、橄榄油、可可脂、乙二醇、葡萄糖、盐酸普鲁卡因、盐酸利多卡因和抗坏血酸等。

上述制剂可按照各种制剂常规的制备工艺制成。

本发明的药物组合物优选含有重量比为0.1～99.5％的活性成分，最优选含有重量比为0.5～95％的活性成分。

本发明的活性成分芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠制成各种剂型的口服药物，成人口服，药物中芒柄花素-3′-磺酸钠或樱黄素-3′-磺酸钠的含量应为每天150mg，一日三次，每次药物中芒柄花素-3′-磺酸钠或樱黄素-3′-磺酸钠的含量为50mg，14天为一个疗程，治疗2～3个疗程。成人肌肉注射，药物中芒柄花素-3′-磺酸钠或樱黄素-3′-磺酸钠含量应为每天80mg，一日两次，14天为一个疗程，治疗2个疗程；静脉点滴，成人用量，药物中芒柄花素-3′-磺酸钠或樱黄素-3′-磺酸钠的含量应为每天80mg，一日一次，14天为一个疗程，治疗2个疗程。口服药物或注射药物，儿童用药酌情减量。

发明人将本发明的活性成分芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠委托试验单位进行了药效试验。试验结果表明本发明的活性成分芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠可以显著降低高脂大鼠血清和肝脏中胆固醇含量，减轻肝细胞脂滴堆积，降低肝酶活性，保护由血管紧张素(Ang II)升高引起的血管内皮损伤和心血管疾病，具有较好的降脂护肝作用和保护血管内皮的功能。若将芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠用于临床试验，预期将会有较好的治疗效果。本发明的制备方法采用亲电取代反应法，具有工艺简便，所用的设备简单、产品的收率高和生产成本低等优点。

附图说明

图1是本发明芒柄花素-3′-磺酸钠的红外光谱图。

图2是本发明芒柄花素-3′-磺酸钠的氢核磁共振图。

图3是本发明芒柄花素-3′-磺酸钠的碳核磁共振图。

图4是本发明樱黄素-3′-磺酸钠的红外光谱图。

图5是本发明樱黄素-3′-磺酸钠的氢核磁共振图。

在图1和图4中，横坐标为波数，纵坐标为吸收率。在图2、图3和图4中，横坐标为化学位移，单位为ppm，纵坐标为峰高度。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。

一、芒柄花素-3′-磺酸钠制备实施例

实施例1

在本实施例中，先将芒柄花素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂80％硫酸直到使芒柄花素充分溶解，再加入磺化剂浓硫酸，芒柄花素与磺化剂摩尔比为1：5，用搅拌机搅拌后，用调温装置使反应液的温度为60℃，反应6小时，得到芒柄花素-3′-磺酸和未反应原料的混合物，冷却至室温，加入反应物总体积5倍的10％的氯化钠水溶液，充分搅拌，静置析出白色沉淀，过滤，得到芒柄花素-3′-磺酸钠粗品；用重结晶法在芒柄花素-3′-磺酸钠粗品中加入5倍量的10％氯化钠水溶液进行纯化，得到芒柄花素-3′-磺酸钠精品(产率89％)。采用本实施例制备的芒柄花素-3′-磺酸钠，经测试，其理化性能如下：

白色针状晶体，熔点为305℃(分解)；在水中的溶解度为8.6％，易溶于水。

参见图1，本实施例的芒柄花素-3′-磺酸钠分子结构经红外光谱仪测试结果如下：

IR v(cm^-1，KBr)：3440，1635，1498，1265，1192，1095，1022，828，725，629。

参见图2，本实施例的芒柄花素-3′-磺酸钠的H用核磁共振仪测试结果如下：

¹H NMR[DSMO/TMS，δ(ppm)]：8.31(s，1H，H-C₂)，7.98(d，1H，J＝8.7Hz，H-C₅)，7.88(d，1H，J＝1.8Hz，H-C₂′)，7.49(dd，1H，J＝8.6Hz，J＝1.8Hz，H-C₆′)，7.04(d，1H，J＝8.6Hz，H-C₅′)，6.96(d，1H，J＝8.7Hz，H-C₆)，6.90(s，1H，H-C₈)，3.80(s，3H，H₃CO-C₄′)。

参见图3，本实施例的芒柄花素-3′-磺酸钠的C用核磁共振仪测试结果如下：

¹³C NMR[DSMO/TMS，δ(ppm)]：175.07(C-4)，163.15(C-7)，157.93(C-8a)，156.30(C-2)，153.66(C-4′)，134.88(C-3′)，131.69(C-5)，129.45(C-1′)，127.66(C-3)，123.62(C-6′)，123.48(C-4a)，116.95(C-6)，115.74(C-2′)，112.20(C-5′)，102.65(C-8)，56.31(CH₃)。

实施例2

在本实施例中，先将芒柄花素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂70％硫酸直到使芒柄花素充分溶解，再加入磺化剂浓硫酸，芒柄花素与磺化剂的摩尔比为1：8，用搅拌机搅拌后，用调温装置使反应液的温度为100℃，反应5分钟，得到芒柄花素-3′-磺酸与未反应物的混合物，冷却至室温，加5倍体积10％氯化钠水溶液，放置，得到白色芒柄花素-3′-磺酸钠沉淀，随后分离芒柄花素-3′-磺酸钠，并使其纯化，分离和纯化所用原料为反应物总体积1倍的20％氯化钠水溶液，其它工艺过程与实施例1相同。

实施例3

在本实施例中，先将芒柄花素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂85％硫酸直到使芒柄花素充分溶解，再加入磺化剂浓硫酸，芒柄花素与浓硫酸的摩尔比为1：3，用搅拌机搅拌后，用调温装置使反应液的温度为20℃，反应10小时，得到芒柄花素-3′-磺酸与未反应物的混合物，加5倍体积10％氯化钠水溶液，放置，得到白色芒柄花素-3′-磺酸钠沉淀，随后分离芒柄花素-3′-磺酸钠，并使其纯化，分离和纯化所用原料及配比与实施例1相同。

实施例4

在本实施例中，先将芒柄花素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂98％硫酸直到使芒柄花素充分溶解，再加入磺化剂浓硫酸，芒柄花素与浓硫酸的摩尔比为1：1，用搅拌机搅拌后，用调温装置使反应液的温度为80℃，反应30分钟，得到芒柄花素-3′-磺酸与未反应物的混合物，冷却至室温，加5倍体积10％氯化钠水溶液，放置，得到白色芒柄花素-3′-磺酸钠沉淀，随后分离芒柄花素-3′-磺酸钠并使其纯化，分离和纯化所用原料及配比与实施例1相同。

实施例5

在本实施例中，先将芒柄花素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂75％硫酸直到使芒柄花素充分溶解，再通入磺化剂三氧化硫，芒柄花素与三氧化硫摩尔比为1：3，用搅拌机搅拌后，用调温装置使反应液的温度为20℃，反应8小时，得到芒柄花素-3′-磺酸与未反应物的混合物，冷却至室温，加5倍体积10％氯化钠水溶液，放置，得到白色芒柄花素-3′-磺酸钠沉淀，随后分离芒柄花素-3′-磺酸钠并使其纯化，分离和纯化所用原料及配比与实施例1相同。

实施例6

在本实施例中，先将芒柄花素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂75％硫酸直到使芒柄花素充分溶解，再加入磺化剂发烟硫酸，芒柄花素与发烟硫酸的摩尔比为1：2，用搅拌机搅拌后，升温至50～55℃，反应1小时，得到芒柄花素-3′-磺酸与未反应物的混合物，冷却至室温，加10％氯化钠水溶液，得到芒柄花素-3′-磺酸钠粗品，并使其纯化。分离和纯化所用原料以及配比和操作与实施例1相同。

实施例7

在本实施例中，先将芒柄花素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂75％硫酸直到使芒柄花素充分溶解，然后滴加磺化剂氯磺酸，芒柄花素与氯磺酸的摩尔比为1：1。滴加完后，用搅拌机搅拌后，升温至45～50℃，反应2小时，将反应物的混合物冷却至室温，加10％氯化钠水溶液加热后并冷却，得到芒柄花素-3′-磺酸钠粗品，并使其纯化。分离和纯化所用原料以及配比和操作与实施例1相同。

二、樱黄素-3′-磺酸钠制备实施例

实施例8

在本实施例中，先将樱黄素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂80％硫酸直到使樱黄素充分溶解，再加入磺化剂浓硫酸，樱黄素与浓硫酸的摩尔比为1：5，用搅拌机搅拌后，用调温装置使反应液的温度为60℃，反应2小时，得到樱黄素-3′-磺酸和未反应原料的混合物，冷却至室温，加入反应物总体积5倍的10％氯化钠水溶液，充分搅拌，静置析出白色沉淀，过滤，得到樱黄素-3′-磺酸钠粗品；用重结晶法在樱黄素-3′-磺酸钠粗品中加入5倍量的10％氯化钠水溶液进行纯化，得到樱黄素-3′-磺酸钠精品(产率79.8％)。

采用本实施例制备的樱黄素-3′-磺酸钠，经测试，其理化性能如下：

白色针状晶体，熔点为280℃(分解)；在水中的溶解度为7.5％，易溶于水。

参见图4，本实施例的樱黄素-3′-磺酸钠分子结构经红外光谱仪测试结果如下：

IR v(cm^-1，KBr)：3157，1661，1613，1577，1504，1440，1263，1192，1094，1036，901，827，630。

参见图5，本实施例的樱黄素-3′-磺酸钠的H用核磁共振仪测试结果如下：

¹H NMR[DSMO/TMS，δ(ppm)]：12.92(s，1H，HO-C₅)，10.66(s，1H，HO-C₄′)，8.46(s，IH，H-C₂)，7.71(s，1H，H-C₂′)，7.41(d，1H，J＝6.0Hz，H-C₆′)，6.85(d，1H，J＝6.0Hz，H-C₅′)，6.69(s，IH，H-C₈)，6.43(s，1H，H-C₆)，3.87(s，3H，H₃CO-C₇)。

实施例9

在本实施例中，先将樱黄素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂75％硫酸直到使樱黄素充分溶解，再加入磺化剂浓硫酸，樱黄素与浓硫酸的摩尔比为1：8，用调温装置使反应液的温度为100℃，反应10分钟，得到樱黄素-3′-磺酸与未反应物的混合物，冷却至室温，加5倍体积10％氯化钠水溶液，放置，得到白色樱黄素-3′-磺酸钠沉淀，随后分离樱黄素-3′-磺酸钠，并使其纯化，分离和纯化所用原料为反应物总体积1倍的20％氯化钠水溶液，其它工艺过程与实施例8相同。

实施例10

先将樱黄素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂85％硫酸直到使樱黄素充分溶解，再加入磺化剂浓硫酸，樱黄素与浓硫酸的摩尔比为1：3，用搅拌机搅拌后，用调温装置使反应液的温度为20℃，反应10小时，得到樱黄素-3′-磺酸与未反应物的混合物，加5倍体积10％氯化钠水溶液，放置，得到白色樱黄素-3′-磺酸钠沉淀，随后分离樱黄素-3′-磺酸钠，并使其纯化，分离和纯化所用原料及配比与实施例8相同。

实施例11

在本实施例中，先将樱黄素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂85％硫酸直到使樱黄素充分溶解，再通入磺化剂三氧化硫，樱黄素与三氧化硫的摩尔比为1：3，用搅拌机搅拌后，用调温装置使反应液的温度为40℃，反应7小时，得到樱黄素-3′-磺酸与未反应物的混合物，冷却至室温，加5倍体积10％氯化钠水溶液，放置，得到白色樱黄素-3′-磺酸钠沉淀，随后分离樱黄素-3′-磺酸钠并使其纯化，分离和纯化所用原料及配比与实施例8相同。

实施例12

在本实施例中，先将樱黄素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂80％硫酸直到使樱黄素充分溶解，再通入磺化剂发烟硫酸，樱黄素和发烟硫酸的摩尔比为1：4。用搅拌机搅拌后，升温至50～55℃，反应1小时，得到樱黄素-3′-磺酸与未反应物的混合物，冷却至室温，加10％氯化钠水溶液，得到樱黄素-3′-磺酸钠粗品，并使其纯化。分离和纯化所用原料以及配比和操作与实施例8相同。

实施例13

在本实施例中，先将樱黄素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂90％硫酸直到使樱黄素充分溶解，再加入磺化剂氯磺酸，樱黄素与氯磺酸的摩尔比为1：1。滴加完后，用搅拌机搅拌后，升温至45～50℃，反应2小时，将反应物的混合物冷却至室温，加10％氯化钠水溶液并加热，得到樱黄素-3′-磺酸钠粗品。分离和纯化所用原料以及配比和操作与实施例8相同。

实施例14

在本实施例中，先将樱黄素加入反应釜中，用搅拌机搅拌并逐渐加入溶剂98％硫酸直到使樱黄素充分溶解，再加入磺化剂浓硫酸，樱黄素与浓硫酸的摩尔比为1：2。滴加完后，升温至55～60℃，反应1小时，得到樱黄素-3′-磺酸与未反应物的混合物，冷却至室温，加10％氯化钠水溶液并加热，得到樱黄素-3′-磺酸钠粗品。分离和纯化所用原料以及配比和操作与实施例8相同。

三、芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠制剂实施例

实施例15

以制备本发明芒柄花素-3′-磺酸钠或樱黄素-3′-磺酸钠片剂1000片为例所用的原料和辅料配比如下：

芒柄花素-3′-磺酸钠或

樱黄素-3′-磺酸钠 50g

淀粉 250g

淀粉浆(10％) 85g

硬脂酸镁 15g

采用常规片剂的制备工艺制成，每片重0.4g，每片芒柄花素-3′-磺酸钠或樱黄素-3′-磺酸钠的含量为50mg。用法：成人一日三次，每次1片口服，儿童酌情减量。

实施例16

以制备本发明芒柄花素-3′-磺酸钠或樱黄素-3′-磺酸钠散剂1000袋为例所用的原料和辅料配比如下：

芒柄花素-3′-磺酸钠或

樱黄素-3′-磺酸钠 40g

乳糖 2800g

淀粉浆(10％) 60g

采用常规散剂的制备工艺制成，每袋重3g，含芒柄花素-3′-磺酸钠或樱黄素-3′-磺酸钠40mg。用法：成人一日三次，每次1袋口服，儿童酌情减量。

实施例17

以制备本发明芒柄花素-3′-磺酸钠或樱黄素-3′-磺酸钠1000ml注射剂为例，所用的原料和辅料配比如下：

芒柄花素-3′-磺酸钠或

樱黄素-3′-磺酸钠 50g

注射用水加至1000ml

采用常规法注射剂的制备工艺制成，每瓶2ml，含芒柄花素-3′-磺酸钠或樱黄素-3′-磺酸钠100mg。用法：肌肉注射，一日两次，每次1支，静脉点滴，一日一次，每次2支。

发明人将本发明的有效成分芒柄花素-3′-磺酸钠或樱黄素-3′-磺酸钠委托试验单位进行了药效试验，例举下列实验内容及其试验结果，证明用本发明制备的药物治疗高脂血症和脂肪肝症的有效性。

1 实验动物及分组：

选用SD雄性大鼠60只，实验动物购自陕西省中医研究院实验动物中心(动物质量合格证号：陕医动证字08-004号)。8周龄，体重180g～220g。动物室内温度20℃～29℃，相对湿度40％～55％。大鼠自由饮水、进食，分笼饲养，每笼5只。实验动物购回正常喂养1周后，随机分为6组，即正常对照组(A)、模型组(B)、正常对照组加芒柄花素-3′-磺酸钠(C)、模型组加芒柄花素-3′-磺酸钠(D)、模型组加樱黄素-3′-磺酸钠(E)和模型组加辛伐他汀(F)，每组10只。

2 模型复制及标本制作

A组和C组喂普通饲料；其余各组均喂高脂饲料。高脂饲料配方：大鼠标准饲料中添加1.0％胆固醇，0.35％胆酸钠，5.0％猪油，0.61％丙基硫氧嘧啶；前3天按70万IU/kg的总剂量分3次给予维生素D灌胃。从第4周开始A、B、C三组每只每天灌服生理盐水2ml，D、E二组每只每天灌服芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠13.5mg，用蒸馏水稀释为2ml灌喂。F组每只每天灌服辛伐他汀1.8mg，用蒸馏水稀释为2ml灌喂。实验期间大鼠自由进水摄食，第8周末禁食12小时，次日麻醉大鼠，腹主动脉取血，制备血清和血浆立即送检。迅速切取肝组织用冰生理盐水冲洗，滤纸吸干后，中性甲醛固定，常规石蜡包埋、切片、HE染色，光镜下观察肝组织形态学变化。

3 主要仪器及检测方法

血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肝谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)和谷氨酰氨基转移酶(GGT)为东芝Toshiba-TBA-120FR全自动生化分析仪检测，采用一步酶法、二步酶法和胆固醇酯酶氧化酶法；血管紧张素(Ang II)，内皮素(ET)，γ-放射免疫计数器测定，采用同位素沉淀法。整个检测过程由西安市第二人民医院专业人员完成。

4 统计学处理

数据采用均数±标准差表示，统计学处理采用SPSS 12.0统计软件包分析。T检验，显著性水平采用P<0.05和P<0.01水平。

5结果与分析

(1)肝组织形态学变化

光镜下观察，正常组大鼠肝细胞基本无异常变化，肝细胞内无脂滴堆积，模型组肝组织增大，颜色发白发黄。肝细胞存在不同程度水肿和坏死，多数肝细胞内可见大量的脂滴脂泡，肝小叶结构紊乱，肝细胞空泡样变性、融合。芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠组肝细胞内脂滴和脂泡减少，和模型组比较有明显改善，颜色也趋于正常对照组。

(2)芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠对大鼠肾脏脂肪垫、睾丸脂肪垫重、肝指数的影响

表1 各组大鼠肾脏脂肪垫、睾丸脂肪垫重、肝指数测定结果比较

^*p<0.01，^**p<0.05，与正常对照组(A)比较；#p<0.05，与模型组(B组)比较

从表1可知，D、E组大鼠肾脏脂肪垫和睾丸脂肪垫重显著低于B组，D组肝指数显著性低于B组，说明芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠有降低脂肪作用。

(3)芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠对大鼠血清和肝脏脂质的影响

表2 各组大鼠血清TC、TG、HDL-c和LDL-c测定结果比较

表3 各组大鼠肝脏匀浆液TC和TG测定结果比较

由表1-2可见，大鼠连续给予高脂饲料后，B组血清中TC、TG、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)含量明显增加，高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)明显降低，说明高血脂模型已经形成，给予芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠后与B组相比，D、E组TC降低(p<0.01)，HDL-C升高(p<0.05)，LDL-C降低(p<0.05)。表明芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠对高脂大鼠血脂具有明显的降脂效果。

(4)芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠对大鼠血清AngII和ET的影响

表4 各组大鼠血清血管紧张素(AngII)和内皮素(ET)测定结果比较

ET和Ang II均是机体内强烈的缩血管物质，在维持血管的正常功能和动脉硬化过程中发挥重要作用。ET与Ang II两者之间存在相互促进的正反馈调节机制。Ang II可刺激血管内皮细胞分泌ET进入血液，使血液中ET含量增加。文献报道，高脂膳食大鼠血浆Ang II明显升高，表4中高脂模型结果与文献报道一致。芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠作用后，D、E组与B组比较，血清Ang II和ET都显著降低(p<0.05)。表明芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠可显著降低Ang II引起的ET浓度的增高，对Ang II引起的血管内皮细胞损伤有保护作用。

(5)芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠对大鼠肝酶活性的影响

表5 各组大鼠肝酶活性测定结果比较

谷丙转氨酶和谷草转氨酶的增高是肝脏功能受到损害的间接表现，也是传统判定肝功能损害的指标之一。本实验的模型组谷丙转氨酶和谷草转氨酶明显增高，加芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠后与模型组比较，D、E两组ALT和AST显著降低(p<0.05)，趋向正常。说明芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠具有较好的护肝作用。

6 结论

芒柄花素和樱黄素在化学结构上同属于异黄酮类化合物。黄酮类物质广泛存在于自然界，多具艳丽的色泽，在植物体内大部分与糖结合成苷，一部分以游离形式存在。现代医学研究发现，很多用于治疗心脏病、脑血栓和前列腺疾病的有效药物，活血化瘀、清热、解毒、消炎的药物中均含有丰富的黄酮类化合物。黄酮类化合物有多种多样生理活性，其中包括抗氧化、清除自由基、抗癌、抗菌、抗病毒、降血脂、降血糖和免疫调节等功能。目前国内外对黄酮类物质的降血脂作用机理和作用效果研究较多。本实验模型为高胆固醇血症，研究结果显示，芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠具有如下功能：(1)较好的降低高胆固醇作用，并且芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠之间降胆固醇作用无明显差异。(2)降低肝脏匀浆脂质(TC和TG)和肝酶(ALT和AST)活性，使其趋于正常。(3)降低血清Ang II和ET水平，保护由Ang II升高引起的血管内皮损伤和心血管疾病。因此认为，芒柄花素-3′-磺酸钠和樱黄素-3′-磺酸钠具有较好的降脂护肝作用和保护血管内皮的功能。

Claims

1.一种下述式(1)或式(2)化合物：

式(1)：R₁＝R₂＝H R₃＝CH₃

式(2)：R₁＝CH₃ R₂＝OH R₃＝H。

2.一种权利要求1中式(1)或式(2)化合物的制备方法，该方法包括以下步骤：

(1)反应釜中加入溶剂和下式(3)芒柄花素或式(4)樱黄素，芒柄花素或樱黄素

式(3)：R₁＝R₂＝H R₃＝CH₃

式(4)：R₁＝CH₃ R₂＝OHR₃＝H

溶解在溶剂中，再加入磺化剂，芒柄花素或樱黄素与磺化剂进行化学反应，所用芒柄花素或樱黄素与磺化剂的摩尔比为1：1～1：10，用调温装置使反应液的温度为20～100℃，反应5分钟～10小时，得芒柄花素-3＇-磺酸或樱黄素-3＇-磺酸与未反应物的混合物；

(2)将(1)反应后的混合物冷却至室温，倒入总体积为反应混合物1～5倍量10～20％的氯化钠溶液，充分搅拌，静置生成沉淀，用常规分离方法，将权利要求1中式(1)或式(2)的化合物分离出来，得到粗品，再加入粗品量的1～5倍量10～20％氯化钠溶液使其纯化，得到权利要求1中式(1)或式(2)的化合物纯品，

式(3)：R₁＝R₂＝H R₃＝CH₃ 式(1)：R₁＝R₂＝H R₃＝CH₃

式(4)：R₁＝CH₃ R₂＝OH R₃＝H 式(2)：R₁＝CH₃ R₂＝OH R₃＝H。

3.按照权利要求2所述的权利要求1中式(1)或式(2)化合物的制备方法，其中式(3)或式(4)化合物分别与磺化剂的反应温度为40℃和50℃，化学反应时间分别为2小时和2.5小时。

4.按照权利要求2所述的权利要求1中式(1)或式(2)化合物的制备方法，其特征在于：所说的溶剂为70～98％硫酸；所说的磺化剂为浓硫酸或氯磺酸或发烟硫酸或三氧化硫。

5.一种治疗高脂血症和脂肪肝症的药物组合物，其中有治疗有效量的权利要求1中式(1)或式(2)化合物和药学上可接受的载体。

6.权利要求1中式(1)或式(2)化合物在制备治疗高脂血症和脂肪肝症的药物中的应用。