CN100451646C - 一种采用葡聚糖微型凝胶柱测定辣椒素柔性脂质体包封率的方法 - Google Patents

一种采用葡聚糖微型凝胶柱测定辣椒素柔性脂质体包封率的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种采用葡聚糖微型凝胶柱测定辣椒素柔性脂质体包封率的方法。本发明的方法通过先去除葡聚糖微柱中的水；再将辣椒素柔性脂质体加到葡聚糖微柱上，进行离心洗脱脂质体；再分别测定柔性脂质体中辣椒素的总含量浓度(C总)及葡聚糖微柱洗脱后被包封的辣椒素的含量浓度(C包)，将葡聚糖微柱洗脱后被包封的辣椒素的含量浓度(C包)除以柔性脂质体中辣椒素的总含量浓度(C总)得到辣椒素柔性脂质体包封率。本测定包封率的方法不仅测定准确，而且速度快，成本低。

Description

一种采用葡聚糖微型凝胶柱测定辣椒素柔性脂质体包封率的方法
技术领域
本发明涉及药物化学领域，具体的说涉及一种脂质体包封率的测定方法。
背景技术
脂质体包封率是脂质体重要的评价指标，中国药典2000版脂质体制剂的指导原则指出脂质体包封率不得小于80％。脂质体包封率的测定方法很多，包括离心法、透析法、凝胶柱层析法、离子交换树脂法、超滤法等，常用的有离心法、透析法、凝胶柱层析法。离心法需要40000转高速冷冻离心机，粒径越小，所需转速越大，时间越长，如E.Touitou报道，150nm大小的脂质泡囊，采用40000rpm，3h才能将脂质体与未包封的药物分离；白铭等采用4℃，100000rpm超高速离心2h测定辣椒素脂质体包封率。采用透析法，未包封的药物的渗透同样需要数小时，而且可能造成包封药物的渗漏，导致包封率偏低。凝胶柱层析法，多用葡聚糖凝胶分离包封与未包封的药物，由于操作简单常被采用，但应用该方法将脂质体与未包封的药物分离的洗脱时间并没有缩短，一般仍需1至数小时。对于缩短葡聚糖凝胶柱的洗脱时间，Fry和New首先报道了采用葡聚糖微型凝胶柱快速测定脂质体包封率的方法，以后El Maghraby也采用葡聚糖微型凝胶柱快速测定脂质体的包封率，采用葡聚糖微型凝胶柱，不仅洗脱速度快(一般为几分至10几分钟)，而且大大减少葡聚糖凝胶的用量，微柱仅需葡聚糖凝胶约0.5g，而常规柱用量为5-8g。但文献均未叙述采用葡聚糖微型凝胶柱测定辣椒素柔性脂质体包封率的具体方法。
发明内容
本发明的目的在于克服上述脂质体包封率测定方法存在的问题，提供一种采用葡聚糖微型凝胶柱测定辣椒素柔性脂质体包封率的方法，本方法不仅测定准确，而且速度快，成本低。
本发明的采用葡聚糖微型凝胶柱测定辣椒素柔性脂质体包封率的方法，具体包括如下步骤：
(1)去除葡聚糖微柱中的水；葡聚糖微柱中水分不仅影响脂质体的洗脱速度，而且显著影响脂质体(包封药物)与未包封药物的分离；
(2)将辣椒素柔性脂质体加到葡聚糖微柱上；
(3)离心洗脱脂质体；与游离药物比较，脂质体泡囊的直径较大，不能进入葡聚糖凝胶的网眼中，而游离药物由于直径小可进入葡聚糖凝胶的网眼中，因此在洗脱中，脂质体首先被洗脱；
(4)分别测定柔性脂质体中辣椒素的总含量浓度(C总)及葡聚糖微柱洗脱后被包封的辣椒素的含量浓度(C包)，将葡聚糖微柱洗脱后被包封的辣椒素的含量浓度(C包)除以柔性脂质体中辣椒素的总含量浓度(C总)所得的比值即为辣椒素柔性脂质体包封率。包封率＝C包/C总。
上述步骤(1)所述的去除葡聚糖微柱中的水为采用离心机离心去除葡聚糖微柱中的水，离心机转速为1000转每分钟，离心时间为6秒。
上述步骤(3)所述的离心洗脱脂质体为采用离心机离心，一次性洗脱脂质体，所用离心机的转速为2000转每分钟，离心时间为5分钟。
上述步骤(4)所述的测定柔性脂质体中辣椒素的总含量浓度的方法为：吸取辣椒素柔性脂质体，加水和无水乙醇混合作为样品，以空白辅料的水-乙醇为对照，于281nm测定吸收值，根据标准曲线计算浓度，代入回归方程，计算出总含量浓度(C总)；所述的葡聚糖微柱洗脱后被包封的辣椒素的含量浓度的测定方法为：取葡聚糖微柱洗脱液用无水乙醇稀释，于281nm测定吸收值，根据标准曲线计算浓度，代入回归方程，计算出被包封辣椒素的含量浓度(C包)。
本发明的有益效果：本发明采用葡聚糖微型凝胶柱，加上离心机的加速作用，可以使脂质体的洗脱速度大大加速，洗脱时间从1-2h缩短至6min，大大加快了测定包封率的速度；本方法所用微柱仅需葡聚糖凝胶约0.5g，而常规柱用量为5-8g，大大减少葡聚糖凝胶的用量，降低了成本；同时采用本方法所测定的包封率准确，误差小。
具体实施方式
实施例1
先用离心机离心去除葡聚糖微柱中的水，离心机转速为1000转每分钟，离心时间为6秒；再将辣椒素柔性脂质体0.4ml滴加到柱上，用离心机离心洗脱脂质体，离心机转速为2000转每分钟，离心5min，以一次性洗脱脂质体为条件，进行同一批辣椒素柔性脂质体3次重复试验及3个批号的试验(浓度相同)，分别测定柔性脂质体中辣椒素的总含量浓度及葡聚糖微柱洗脱后柔性脂质体中辣椒素(被包封)的含量浓度。
柔性脂质体中辣椒素的总含量浓度测定方法为：吸取辣椒素柔性脂质体0.4ml，加水2ml，用无水乙醇稀释至10ml，以空白辅料的水-乙醇为对照，于281nm测定吸收值，根据标准曲线计算浓度，代入回归方程，计算出总含量浓度(C总)，得3批样品的标示百分含量分别为100.01％，99.34％，99.76％。
葡聚糖微柱洗脱后柔性脂质体中辣椒素(被包封)的含量测定：葡聚糖微柱洗脱液约2ml(含包封辣椒素)，直接用无水乙醇稀释至10ml，于281nm测定吸收值，根据标准曲线计算浓度，代入回归方程，计算出被包封的辣椒素的含量浓度(C包)。
按包封率＝C包/C总计算包封率，结果如表1。三个批号的辣椒素柔性脂质体平均包封率为95.25±0.523％，变异系数为0.549％，重现性好。
表1辣椒素柔性脂质体包封率(％)
Figure C20051003332400061
Figure C20051003332400071

Claims (2)

1、一种采用葡聚糖微型凝胶柱测定辣椒素柔性脂质体包封率的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)采用离心机离心去除葡聚糖微柱中的水，离心机转速为1000转每分钟，离心时间为6秒；
(2)将辣椒素柔性脂质体加到葡聚糖微柱上；
(3)采用离心机离心，一次性洗脱脂质体，所用离心机的转速为2000转每分钟，离心时间为5分钟；
(4)分别测定柔性脂质体中辣椒素的总含量浓度及葡聚糖微柱洗脱后被包封的辣椒素的含量浓度，将葡聚糖微柱洗脱后被包封的辣椒素的含量浓度除以柔性脂质体中辣椒素的总含量浓度所得的比值即为辣椒素柔性脂质体包封率。
2、如权利要求1所述的采用葡聚糖微型凝胶柱测定辣椒素柔性脂质体包封率的方法，其特征在于步骤(4)所述的测定柔性脂质体中辣椒素的总含量浓度的方法为：吸取辣椒素柔性脂质体，加水和无水乙醇混合作为样品，以空白辅料的水-乙醇为对照，于281nm测定吸收值，根据标准曲线计算浓度，代入回归方程，计算出柔性脂质体中辣椒素的总含量浓度；所述的葡聚糖微柱洗脱后被包封的辣椒素的含量浓度的测定方法为：取葡聚糖微柱洗脱液用无水乙醇稀释，于281nm测定吸收值，根据标准曲线计算浓度，代入回归方程，计算出被包封辣椒素的含量浓度。
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