CN100404529C - 2,4-二(三氟乙氧基)吡啶化合物以及含有该化合物的药物 - Google Patents

2,4-二(三氟乙氧基)吡啶化合物以及含有该化合物的药物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及通式(1)(式中、X1表示氟原子或氢原子)，所示的2，4-二(三氟乙氧基)吡啶化合物或其盐、以及以其为有効成分的药物。其显示了对人肝脏微粒体的抗代谢性，良好的口服吸收性，具有优良的ACAT抑制活性。

Description

2，4-二(三氟乙氧基)吡啶化合物以及含有该化合物的药物
技术领域
本发明涉及口服对酰基CoA胆固醇酰基转移酶(ACAT)具有强抑制作用、对高脂血症、各种动脉硬化症等有预防及治疗作用的2，4-二(三氟乙氧基)吡啶化合物以及含有该化合物的药物及其制造中间体。
背景技术
酰基CoA胆固醇酰基转移酶(ACAT)是促进由胆固醇合成胆固醇酯的酶，是对胆固醇的代谢和在消化道内的吸收具有重要作用的酶。虽然目前作为抗高血脂症药物、抗动脉硬化药物的大多数ACAT抑制剂是作用于小肠和肝脏的ACAT酶来促进血中胆固醇的降低的，但是它有引发肠道出血、肠管障碍、腹泻和肝损伤的副作用的问题。
最近的研究表明，通过抑制在形成动脉硬化病灶中起重要作用的巨噬细胞的泡沫化，可期待动脉硬化病灶自身的萎缩。即在粥样动脉硬化的病灶中观察到泡沫化的巨噬细胞(胆固醇酯作为脂肪滴在细胞内储存)，该巨噬细胞的泡沫化与病变的进展密切相关。另外，在动脉硬化的病变部位，血管壁中存在的ACAT活性亢进，由于胆固醇酯储存在血管壁中，因此血管壁的ACAT活性和动脉硬化症密切相关(非专利文献1)。
因此，由血管壁中的ACAT抑制剂引起的对胆固醇酯化的抑制，与游离胆固醇向血管壁的细胞内的储存相关，由于被储存的游离胆固醇通过高密度脂蛋白(HDL)从细胞内游离出来转送至肝脏(由HDL形成的逆转运)被代谢，因此可期待动脉硬化病变部位的胆固醇酯的储存被抑制(非专利文献2)。这样抑制血管壁中存在的ACAT的ACAT抑制剂被认为具有直接的抗动脉硬化作用。
首先，本发明者认为选择性地抑制血管壁中存在的ACAT，就可以成为比抑制巨噬细胞泡沫化的药物副作用更小的动脉硬化症的预防·治疗剂，经过认真的研究结果发现，下面的通式(A)
Figure C20048001916800041
(式中，Ar是可具有取代基的芳香基，
是表示可具有取代基的苯、吡啶、环己烷或者萘的2价残基，X表示NH、氧原子或者硫原子，Y表示硫原子，Z表示单键等，l表示0～15的整数，m表示2或3的整数，n表示1～3的整数)
表示的化合物、其盐或者它们的溶剂化物作为高脂血症以及动脉硬化症的预防·治疗剂有用，是可选择性抑制血管中存在的ACAT的化合物(专利文献1)。
非专利文献1：Exp.Mol.Pathol.44，329-339(1986)
非专利文献1：Biochim.Biophys.Acta.2001 15，1530(1)：111-122
专利文献1：国际公开第98/54153号小册子
发明的揭示
发明要解决的课题
专利文献1记载的化合物中，确认了下式(B)所示的化合物及其盐具有高水溶性和强ACAT抑制作用，对各种动物模型均具有显著的药效。但是，以化合物(B)为代表的专利文献1中记载的化合物，虽然以在动物实验中的ACAT抑制作用为根据的药效均优良，然而在使用人肝脏微粒体的体外试验中，发现代谢迅速，原型的残存率低。这些事实表明人体中这些化合物的血浓度还是未知的。今年，从药物相互作用的观点来看，由于抗代谢性越高的化合物可成为安全性更高的药物，因此希望出现在人肝脏微粒体中具有更高抗代谢性的化合物。
但是，化合物(B)具有多个一般在有机体内易受代谢的官能基，由于这些官能基被认为对药理活性的表现具有重要作用，因此维持ACAT抑制作用且提高代谢稳定性的难度是非常大的。
Figure C20048001916800051
解决课题的方法
因此，本发明者为发现能改善对人肝脏微粒体的抗代谢性、口服吸收良好、且可得到高血浓度的化合物而进行了各种研究，结果意外发现下式(1)所示的2，4-二(三氟乙氧基)吡啶化合物与化合物(B)相比虽然水溶性较低，但是却显示了较高的血浓度(Cmax)和较大的血浓度时间曲线下面积(AUC)，以及良好的口服吸收性。另外，由于其还显示了优良的ACAT抑制活性，因此是作为高脂血症以及动脉硬化症的预防·治疗剂有用的化合物，从而完成了本发明。
即，本发明提供了下述通式(1)
(式中，X1表示氟原子或氢原子)
所示的2，4-二(三氟乙氧基)吡啶化合物或其盐及其制造方法。
另外，本发明提供了下述通式(2)
Figure C20048001916800053
(式中，X1表示氟原子或氢原子)
所示的哌嗪化合物或其盐。
另外，本发明提供了下述通式(4)
Figure C20048001916800061
(式中，R1表示氢原子、氯乙酰基、溴乙酰基或碘乙酰基)
所示的吡啶化合物或其盐。
另外，本发明提供了2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基-3-硝基吡啶。
另外，本发明提供了N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]-2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙酰胺。
另外，本发明提供了由上述通式(1)所示化合物或其盐为有效成分的药物。
另外，本发明提供了上述通式(1)所示化合物或其盐在药物制备中的应用。
本发明还提供了动脉硬化症的处置方法，该方法的特征在于，将有效量的上述通式(1)所示的化合物或盐给药。
发明的效果
本发明化合物(1)选择性地抑制血管壁中存在的ACAT，具有优良的人肝脏微粒体代谢稳定性，显示良好的口服吸收性，作为高脂血症以及动脉硬化症的预防或者治疗药有用。
附图的简单说明
[图1]是显示化合物(1a)、(1b)以及化合物(B)盐酸盐对人肝脏微粒体代谢的稳定性的图。
实施发明的最佳方式
本发明化合物(1)在结构上的特征是，在苯并咪唑环上具有1个或2个氟原子，并且在吡啶环上具有2个2，2，2-三氟乙氧基。这种特殊的化学结构在专利文献1中完全没有记载。
本发明包含以下两种化合物以及它们的盐。
作为本发明化合物(1)的盐，可例举盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐等无机酸盐，以及甲磺酸盐、马来酸盐、富马酸盐、枸橼酸盐、丁酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、抗坏血酸盐、苹果酸盐、扁桃酸盐、水杨酸盐、泛酸盐、鞣酸盐、乙二磺酸盐、苯磺酸盐、p-甲苯磺酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、三氟醋酸盐、双羟萘酸盐、葡糖酸盐等有机酸盐。
另外，本发明化合物(1)或其盐也可以是溶剂化物的状态。溶剂化物是加成了在制造、精制等时用到的溶剂、例如水、醇等的化合物，只要是对ACAT抑制作用等没有不良影响的物质，就没有特别的限制。作为溶剂化物较好为水合物。
本发明化合物(1)例如可通过以下制造方法制得。
Figure C20048001916800081
(式中，R表示保护基团，Y表示烷基或芳磺酰基，X1表示氢原子或氟原子，X2表示氯原子、溴原子或碘原子)
即，使2，4-二氯-6-甲基-3-硝基吡啶(5)与2，2，2-三氟乙醇反应得到化合物(6)，还原该硝基得到化合物(7)，再通过使其与卤代乙酸或其反应性衍生物反应得到化合物(3)。
另一方面，使保护氨基的哌嗪乙醇类(8)磺酰化得到化合物(9)，使该化合物(9)与硫醇衍生物(10a)反应得到化合物(11)。再于磷化物存在下，使化合物(8)与硫醇衍生物(10a)或(10b)反应也可得到化合物(11)。通过使该化合物(11)的保护基(R)脱离可得到化合物(2)。
使以上得到的化合物(2)与化合物(3)反应可得到本发明化合物(1)。
因此，上述化合物(2)、下述化合物(4)以及上述化合物(2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基-3-硝基吡啶(6))作为本发明化合物(1)的制造中间体有用。
Figure C20048001916800091
(式中、R1表示氢原子、氯乙酰基、溴乙酰基或碘乙酰基)
以下将逐个说明上述各反应工序。
2，4-二氯-6-甲基-3-硝基吡啶(5)与2，2，2-三氟乙醇的反应是在作为溶剂的2，2，2-三氟乙醇中或2，2，2-三氟乙醇和二甲基甲酰胺(DMF)、四氢呋喃(THF)、二甲亚砜(DMSO)等的混合溶剂中，在碳酸钾、碳酸钠等碳酸碱金属，氢氧化钾、氢氧化钠等氢氧化碱金属或氢化钠、氢化钾、氢化锂等氢化碱金属等碱存在下，在室温到回流温度下维持5小时～24小时，较好的是在回流温度下维持15～20小时而进行。
化合物(6)的还原较好为，1)由连二亚硫酸钠、硫化钠、硫化氢钠、硫化氢等含硫还原剂引起的反应，2)由锌、铁、氯化亚锡等金属还原剂引起的还原反应，或3)氢气氛下的催化还原反应。由含硫还原剂引起的反应，例如可通过在异丙醇、乙醇、THF等溶剂中溶解化合物(6)，在80℃添加含硫还原剂的水溶液反应10分钟～2小时来进行。由金属还原剂引起的反应，例如可通过在乙醇、异丙醇等醇溶剂、醋酸以及它们的含水溶剂中溶解化合物(6)，在0～100℃反应30分钟至24小时来进行。反应可根据必要添加盐酸、硫酸等酸。另外，催化还原反应通过在二噁烷、醋酸、甲醇、乙醇、异丙醇等单一或混合溶剂中溶解化合物(6)，在拉奈镍、钯碳、氢氧化钯、钯黑等催化剂存在下，于氢气氛下，在0～50℃反应30分钟～12小时，较好为在室温下反应30分钟～3小时来进行。
作为与化合物(7)反应的卤代乙酸，可例举氯乙酸、溴乙酸、碘乙酸。作为卤代乙酸的反应性衍生物，可例举卤代乙酰卤、卤代乙酸酐等。较好为使化合物(7)和卤代乙酰卤反应。化合物(7)和卤代乙酰卤的反应，可通过例如在二氯甲烷、氯仿、醋酸乙酯、乙腈、甲苯等溶剂中，在N，N-二甲替苯胺、三乙胺、吡啶、4-二甲基氨基吡啶、4-吡咯烷吡啶等碱的存在下，于0～50℃反应10分钟～5小时，较好为在0℃反应10～60分钟而进行。
由哌嗪乙醇类(8)到化合物(11)的合成可采用利用烷基或芳磺酰化反应的路线a和利用磷化物引起反应的路线b。
路线a中，哌嗪乙醇类(8)的烷基或芳磺酰化反应是通过在DMF、THF、醋酸乙酯、乙腈等溶剂中，于三乙胺、吡啶、N，N-二异丙基乙胺、N，N-二甲替苯胺、4-二甲基氨基吡啶等碱的存在下，使用甲磺酰氯、苯磺酰氯、p-甲苯磺酰氯等磺酰氯作为烷基或芳磺酰化剂，在0～50℃反应30分钟～3小时反应来进行。
在此，作为哌嗪乙醇类(8)的氨基的保护基(R)可使用在肽合成中所用的各种保护基。作为较好的保护基可例举苄氧基羰基、2，2，2-三氯乙氧基羰基、叔丁氧基羰基等烷氧基羰基以及甲酰基等。
化合物(9)和化合物(10a)的反应通过在DMF、DMSO、乙腈等溶剂中，于碳酸钾、碳酸钠等碱以及18-冠醚-6等催化剂的存在下，在室温～100℃反应1～5小时，较好为在50～80℃反应1～2小时来进行。
路线b是通过在磷化物存在下，使哌嗪乙醇类(8)和硫醇衍生物(10a)或(10b)反应来进行。
作为磷化物，可例举在光延反应中所用的膦试剂，该膦试剂和偶氮系试剂或马来酸二甲酯、N，N，N’，N’-四甲基富马酰胺等丁二酸试剂形成的磷试剂，鏻内鎓盐试剂等。
作为该路线b的较好方式，可例举1)在膦试剂和偶氮系试剂或马来酸二甲酯、N，N，N’，N’-四甲基富马酰胺等丁二酸试剂存在下，使硫醇衍生物(10a)反应的方法(A法)；2)在鏻内鎓盐试剂存在下，使硫醇衍生物(10a)反应的方法(B法)；3)在膦试剂的存在下，使硫醇衍生物(10b)反应的方法(C法)。
<A法>
A法可通过在反应溶剂中溶解化合物(8)、硫醇衍生物(10a)以及膦试剂，在其中添加偶氮系试剂或丁二酸试剂，在氩气或氮气氛下，于0℃～100℃，较好为室温～80℃反应2小时～24小时来进行。
作为本反应中所用的膦试剂，可例举三甲基膦、三乙基膦、三丙基膦、三异丙基膦、三丁基膦、三异丁基膦、三环己基膦等三烷基膦以及三苯膦、二苯膦基聚苯乙烯等三芳基膦，其中较好为三甲基膦、三丁基膦、三苯膦。
作为偶氮系试剂，可例举偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)、1，1’-偶氮二(N，N-二甲基甲酰胺)(TMAD)、1，1’-(偶氮二羰基)二哌啶(ADDP)、1，1’-偶氮二(N，N-二异丙基甲酰胺)(TIPA)、1，6-二甲基-1，5，7-六氢-1，4，6，7-四肿-2，5-二酮(1，6-dimethyl-1，5，7-hexahydro-1，4，6，7-tetrazocin-2，5-dione，DHTD)等，特好为偶氮二羧酸二乙酯。
作为反应溶剂可使用DMF、THF、二噁烷、乙腈、硝基甲烷、丙酮、醋酸乙酯、苯、氯苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷等，其中较好为DMF、THF、二噁烷、乙腈。特好为DMF、THF。
<B法>
B法可通过在反应溶剂中溶解化合物(8)、硫醇衍生物(10a)以及鏻内鎓盐试剂，在氩气或氮气氛下，于室温～120℃较好为80℃～100℃反应2小时～12小时来进行。
作为本反应中所用的鏻内鎓盐试剂，可例举烷酰基亚甲基三烷基正膦、烷酰基亚甲基三芳基正膦、烷氧基羰基亚甲基三烷基正膦、烷氧基羰基亚甲基三芳基正膦、氰基亚甲基三烷基正膦、氰基亚甲基三芳基正膦等。在此，作为三烷基可例举三甲基、三乙基、三丙基、三异丙基、三丁基、三异丁基、三环己基等，作为三芳基可例举三苯基、二苯基聚乙烯等。
另外，本反应也可以使用通过在反应溶剂中添加化合物(8)、硫醇衍生物(10a)、碱以及卤化鏻试剂，在反应系中生成鏻内鎓盐试剂的方法。
作为在该情况下使用的卤化鏻试剂，可例举卤化(氰基甲基)三烷基鏻、卤化(氰基甲基)三芳基鏻、卤化(烷基羰基甲基)三烷基鏻、卤化(烷基羰基甲基)三芳基鏻、卤化(烷氧基羰基甲基)三烷基鏻、卤化(烷氧基羰基甲基)三芳基鏻等。
上述卤化鏻试剂中，卤化(氰基甲基)三烷基鏻、卤化(氰基甲基)三芳基鏻可通过使相应的卤代乙腈和相应的三烷基膦或三芳基膦反应而调制(テトラヘドロン、57卷、5451-5454頁、2001年)，其它的卤化鏻试剂可通过使相应的烷酰基卤代甲基、烷氧基羰基卤代甲基与相应的三烷基膦或三芳基膦同样进行反应而调制。
作为在此所用的三烷基膦以及三芳基膦，可例举与A法所示相同的物质，其中较好为三甲基膦、三丁基膦、三苯基膦，特好为三甲基膦。
作为上述烷酰基卤代甲基的烷酰基，较好为甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基等，其中较好为乙酰基、丙酰基，作为烷氧基羰基卤代甲基的烷氧基，可例举甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等，其中较好为甲氧基、乙氧基、丁氧基。
另外，作为卤原子较好为氯、溴、碘。
作为碱可例举三乙胺、N，N-二异丙基乙胺、1，4-二氮杂二环[2，2，2]辛烷(DABCO)、1，8-二氮杂二环[5，4，0]十一碳-7-烯(DBU)、1，5-二氮杂二环[4，3，0]九碳-5-烯(DBU)等有机碱，碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、碳酸锂、二异丙基胺基锂、六甲基硅氮化钾(potassium hexamethyldisilazide)等无机碱，其中较好为N，N-二异丙基乙胺、碳酸钾、二异丙基胺基锂、六甲基硅氮化钾，特好为N，N-二异丙基乙胺、碳酸钾。
作为反应溶剂，较好为二噁烷、THF、甲苯、苯、DMF、DMSO、乙腈、丙腈等，特好为丙腈。
<C法>
C法通过在与A法相同的反应溶剂中溶解化合物(8)、硫醇衍生物(10b)以及膦试剂，在氩气或氮气氛下，于室温～100℃较好为60℃～100℃反应2小时～48小时来进行。
本反应中所用的膦试剂是与A法所示相同的三烷基膦以及三芳基膦，具体可例举三甲基膦、三乙基膦、三丙基膦、三异丙基膦、三丁基膦、三异丁基膦、三环己基膦、三苯基膦、二苯膦基聚苯乙烯等，其中较好为三甲基膦、三丁基膦、三苯基膦，特好为三甲基膦、三苯基膦。
另外，硫醇衍生物(10a)可通过上述专利文献1中记载的方法或以此为基础的方法而制造。硫醇衍生物(10b)可由该硫醇衍生物(10a)容易地制得。
化合物(11)的脱保护反应可通过与保护基相对应的已知方法，例如加水分解、还原反应等来进行。
以上所得的化合物(2)和化合物(3)的反应通过于碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸氢钠等碱的存在下，在单一的DMF、THF、乙腈或它们的含水溶剂中，于室温～50℃反应5小时～30小时，较好为在室温下反应10～20小时来进行。
另外，本发明化合物(1)也可通过下述反应式所示的方法制得，即，使1-(2-羟乙基)哌嗪(12)和卤代乙酰胺化合物(3)反应得到化合物(13)，再于磷化合物存在下使化合物(13)与硫醇衍生物(10a)或(10b)反应而得。
Figure C20048001916800121
(式中、X1与上述相同)
化合物(12)和化合物(3)的反应是以由化合物(2)合成化合物(1)的方法为基准进行的。
化合物(13)与硫醇衍生物(10a)或(10b)的反应是以化合物(8)和硫醇衍生物(10a)或(10b)的反应为基准进行的。
因此，上述化合物(N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]-2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙酰胺(13))作为本发明化合物(1)的制造中间体有用。
所得的本发明化合物(1)的分离精制方法可通过适宜组合洗涤、萃取、重结晶、各种色谱法等来进行。另外，转化至前述酸加成盐的变换可通过常用方法进行。
探讨在体外对人肝脏微粒体的代谢时，如图1所示，30分中后原型的残存率相对于化合物(B)盐酸盐的16％，化合物(1a)为27％，化合物(1b)显示62％的较高值。由此可以理解本发明化合物(1)对人肝脏微粒体的抗代谢性被大幅改善。
另外，研究对水的溶解度时，如表3所示，相对于化合物(B)盐酸盐，本发明化合物(1)的溶解度大幅下降。由此可见本发明化合物(1)的口服吸収性成为问题。
但是，使用雌雄大鼠进行口服实验时，相对于化合物(B)盐酸盐，本发明化合物(1)却意外地显示了较高的值，血浓度(Cmax)为化合物(B)盐酸盐的2～3倍，药时曲线下总面积(AUC)为化合物(B)盐酸盐的2～4倍。由此确认，与化合物(B)盐酸盐相比，本发明化合物(1)显示了较高的口服吸收性。
此外，体外ACAT抑制活性如表1所示，本发明化合物(1)显示与化合物(B)盐酸盐相同强度的抑制活性。
从以上的结果可知，由于本发明化合物(1)显示与化合物(B)相同强度的ACAT抑制活性，与化合物(B)相比显示了较高的人肝脏微粒体抵抗性以及较高的口服吸收性，因此，本发明化合物(1)作为高脂血症以及动脉硬化症的预防·治疗剂有用。
本发明化合物(1)通过其优良的ACAT抑制作用，可成为高脂血症、动脉硬化症、颈部以及脑动脉硬化症、脑血管障碍、局部缺血性心脏疾病、局部缺血性肠疾病、冠状动脉硬化症、肾硬化症、动脉硬化性肾硬化症、恶性肾硬化症、急性肠道膜血管闭塞症、慢性肠管绞痛、局部缺血性大肠炎、大动脉瘤、闭塞性动脉硬化症(ASO)等的预防以及治疗药。
使用本发明化合物(1)作为药物时，可单独使用本发明化合物(1)或其盐，或者可使用在药学上允许的赋形剂、粘合剂、稀释剂等载体，制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉末剂、注射剂、栓剂等剂型。这些制剂可通过公知的方法制造。例如制成口服制剂时，可通过将本发明化合物(1)与淀粉、甘露醇、乳糖等赋形剂，羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素等粘合剂，结晶纤维素、羧甲基纤维素钙等崩解剂，滑石粉、硬酯酸酸镁等润滑剂，轻质硅酸酐等流动性提高剂等适当组合形成的处方来制造。
本发明的药物可以经口服或非口服给药，较好为口服给药。
本发明的药物的给药量根据患者的体重、年龄、性别、症状等不同而不同，本发明化合物(1)的通常成人1日的给药量为1～500mg，较好为5～200mg，较好为分1～3次给药。
实施例
以下，将例举实施例更详细地说明本发明，但本发明技术的范围并不限于实施例。
制造例1
5，6-二氟-2-巯基苯并咪唑的制造：
在醋酸(100mL)以及浓盐酸(2.3mL)中溶解4，5-二氟-2-硝基苯胺(5.75g，33.03mmol)，一边在冰浴中剧烈搅拌一般在10分钟之内加入锌粉(6.91g，105.6mmol)。在相同温度下搅拌20分钟后、再于室温搅拌130分钟。在相同的温度下再在5分钟内加入锌粉(1.20g，18.35mmol)，于相同温度下搅拌30分钟。减压浓缩反应液，在饱和碳酸氢钠水中中和所得残渣，用硅藻土进行过滤。用氯仿萃取滤液，再用饱和食盐水洗涤有机层。用无水硫酸钠干燥后减压浓缩，得到褐色油状物质(4.73g)。
在乙醇(200mL)中溶解该褐色油状物质，添加O-乙基黄原酸钾(15.75g，98.25mmol)，加热回流14小时。减压浓缩反应液，在醋酸乙酯-1mol/L盐酸中萃取所得残渣，用饱和食盐水清洗有机层。用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，通过氯仿-己烷使所得残渣结晶化，得到呈淡褐色粉末的5，6-二氟-2-巯基苯并咪唑(5.58g，计算収率为91％)。
制造例2
1-叔丁氧基羰基-4-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪的制造：
在1-叔丁氧基羰基-4-(2-羟乙基)哌嗪(7.40g，32.13mmol)的THF(100mL)溶液中，于冰冷却搅拌下依次加入三乙胺(4.36g，43.09mmol)、4-二甲基氨基吡啶(200mg，1.64mmol)以及甲磺酰氯(7.40g，38.76mmol)。升温至室温后搅拌50分钟。过滤反应液，减压浓缩滤液，在DMF(200mL)中溶解所得残渣，在室温下依次添加5，6-二氟-2-巯基苯并咪唑(5.00g，26.86mmol)、碳酸钾(8.64g，62.51mmol)以及18-冠醚-6(500mg，1.92mmol)，于80℃搅拌90分钟。减压浓缩反应液后，用硅胶柱色谱法(硅胶200g，己烷∶丙酮＝8∶1～1∶1)精制所得残渣。用丙酮-乙醚-己烷使其结晶化，得到1-叔丁氧基羰基-4-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪(7.26g，収率68％)的无色结晶。
mp192.3-193.0℃
IR(KBr)：3061，2976，2836，1672，1475，1427(cm-1).
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.50(9H，s)，2.51-2.68(4H，m)，2.94(2H，t，J＝5.4Hz)，3.28(2H，t，J＝5.4Hz)，3.45-3.65(4H，m)，6.85-7.62(2H，m).
实施例1
1-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪·3三氟醋酸盐的制造：
于冰冷却搅拌下，用15分钟在三氟醋酸(50mL)中添加、溶解1-叔丁氧基羰基-4-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪(7.26g，18.22mmol)。在冰冷却下搅拌10分钟后，向反应液中添加乙醚(100mL)以及己烷(100mL)，过滤分离所生成的结晶。用乙醇-乙醚对所得结晶进行重结晶，得到呈淡黄色粉末的1-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪·3三氟醋酸盐(9.58g，収率82％)。
mp141.2-142.9℃
IR(KBr)：3417，3026，2749，2483，1671，1484(cm-1).
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：2.78-3.26(10H，m)，3.49(2H，t，J＝7.2Hz)，7.51(2H，t，J＝9.0Hz)，8.76(2H，m).
制造例3
1-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]-4-甲酰基哌嗪的制造：
在丙腈(50mL)中溶解1-甲酰基-4-(2-羟乙基)哌嗪(1.11g，7.0mmol)、5，6-二氟-2-巯基苯并咪唑(1.30g，7.0mmol)、二异丙基乙胺(3.62g，28.0mmol)，添加氰基甲基三甲基碘化鏻(6.80g，28.0mmol)，在氩气氛下于92℃搅拌1小时。放冷后，注入水(100mL)，用氯仿(100mL×3)萃取。用饱和食盐水洗浄有机层，再用无水硫酸钠干燥后，减压下浓缩。用丙酮-乙醚使所得粗生成物结晶化，得到呈黄色结晶性粉末的1-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]-4-甲酰基哌嗪1.78g(収率78％)。
mp197.0-198.0℃
IR(KBr)cm-1：3441，2825，1648，1476，1431，1363.
1H-NMR(DMSO-d6)：δ2.38(2H，t，J＝5.1Hz)，2.44(2H，t，J＝5.0Hz)，2.69(2H，t，J＝7.0Hz)，3.23-3.38(4H，m)，3.41(2H，t，J＝7.0Hz)，7，38-7.58(2H，m)，7.97(1H，s)，12.8(1H s).
MS(m/z)：326(M+)，140(100).
实施例2
1-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪的制造：
在甲醇(20mL)中溶解1-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]-4-甲酰基哌嗪(1.70g，5.2mmol)，添加12N盐酸(2mL)，在室温搅拌18小时，减压浓缩反应液，加入饱和氨-甲醇溶液在室温搅拌5分钟。将减压浓缩溶剂所得的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿∶饱和氨-甲醇＝100∶3)精制，得到呈褐色油状物的1-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪1.40g(収率90％)。
IR(KBr)cm-1：2925，2853，1664，1602，1478，1435，1364.
1H-NMR(CDCl3)：δ2.61-2.82(4H，m)，3.00(2H，t，J＝4.8Hz)，3.10(4H，t，J＝4.8Hz)，3.16(2H，t，J＝4.8Hz)，7.16-7.42(2H，m).
MS(m/z)：298(M+)，70(100).
制造例4
2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基-3-硝基吡啶的制造：
在2，2，2-三氟乙醇(250mL)中溶解2，4-二氯-6-甲基-3-硝基吡啶(30g，144.9mmol)，添加碳酸钾(50g，361.8mmol)，加热回流21小时。用水稀释反应液，用氯仿萃取。用饱和食盐水洗浄有机层，在用无水硫酸钠干燥后、经减压浓缩得到呈淡黄色固体的2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基-3-硝基吡啶(45.40g，収率94％)。
mp72.8-73.2℃
IR(KBr)：3432，3111，2975，1610，1585，1535(cm-1).
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.50(3H，s)，4.49(2H，q，J＝7.7Hz)，4.85(2H，q，J＝8.3Hz)，6.53(1H，s).
元素分析C10H8F6N2O4
计算值：C，35.94；H，2.41；N，8.38，
实测值：C，35.94；H，2.45；N，8.49.
实施例3
3-氨基-2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶的制造：
搅拌下，于80℃在2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基-3-硝基吡啶(45.00g，134.7mmol)的异丙醇(300mL)溶液中添加连二亚硫酸钠(78.00g，448.0mmol)的水(300mL)溶液，反应开始15分钟后再添加连二亚硫酸钠(16.50g，94.8mmol)的水(51mL)溶液，再于反应开始25分钟后添加连二亚硫酸钠(11.10g，63.8mmol)的水(51mL)溶液，再搅拌10分钟。反应结束后向反应液中添加4mol/L硫酸水溶液(201mL)，在90℃搅拌30分钟。放冷后在冰冷却下加入28％氨水(360mL)，搅拌30分钟。用水稀释反应液，用氯仿萃取。用饱和食盐水洗浄有机层，再用无水硫酸钠干燥后减压浓缩。用己烷对所得结晶进行重结晶，得到呈黄色针状晶的3-氨基-2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶(32.91g，収率80％)。
mp53.5-53.8℃
IR(KBr)：3453，3314，2968，1603，1505，1456(cm-1).
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.34(3H，s)，3.66(2H，br.s)，4.39(2H，q，J＝8.0Hz)，4.79(2H，q，J＝8.6Hz)，6.35(1H，s).
元素分析C10H10F6N2O2·0.55H2O
计算值：C，38.24；H，3.56；N，8.92，
实测值：C，37.96；H，3.19；N，8.94.
实施例4
2-溴-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺的制造：
在3-氨基-2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶(42.29g，139.0mmol)的二氯甲烷(600mL)溶液中加入N，N-二甲替苯胺(20.46g，168.8mmol)，在冰冷却搅拌下，加入溴乙酰溴(28.73g，142.3mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液，搅拌10分钟。用水稀释反应液，用氯仿萃取。用饱和食盐水洗浄有机层，再用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩。所得结晶用氯仿-己烷重结晶，得到呈无色针状晶的2-溴-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(50.25g，収率85％)。
mp152.8-154.0℃
IR(KBr)：3250，3053，1677，1597，1541，1456(cm-1).
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.43(3H，s)，4.02(2H，s)，4.42(2H，q，J＝7.9Hz)，4.78(2H，q，J＝8.5Hz)，6.47(1H，s)，7.49(1H，br s).
元素分析C12H11BrF6N2O3
计算值：C，33.90；H，2.61；N，6.59，
实测值：C，34.13；H，2.66；N，6.65.
实施例5
2-[4-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪-1-基]-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(化合物1b)的制造：
在冰冷却以及搅拌下，在1-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪·3三氟醋酸盐(4.00g，6.25mmol)以及碳酸钾(31.26mmol)的乙腈(100mL)以及水(30mL)的混合溶液中，在15分钟内加入2-溴-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(2.20g，5.22mmol)。返回室温搅拌15小时后用水稀释反应液，用氯仿萃取。用饱和食盐水洗浄有机层，用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩。用硅胶柱色谱法精制所得残渣(硅胶150g，己烷∶丙酮＝4∶1～2∶1～1∶1)。用氯仿-己烷重结晶所得结晶，得到呈无色晶体的2-[4-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪-1-基]-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(3.04g，収率91％)。
mp191-192℃
IR(KBr)：3275，1686，1604，1591，1509(cm-1).
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：2.38(3H，s)，2.42-2.62(8H，m)，2.67(2H，t，J＝6.7Hz)，3.30(2H，s)，3.40(2H，t，J＝6.7Hz)，4.82(2H，q，J＝8.8Hz)，4.90(2H，q，J＝8.8Hz)，6.91(1H，s)，7.47(2H，m)，8.77(1H，s)，12.82(1H，br.s).
元素分析C25H26F8N6O3S
计算值：C，46.73；H，4.08；N，13.08
实测值：C，46.55；H，4.12；N，12.94
制造例5
5-氟-2-巯基苯并咪唑的制造：
在甲醇(100mL)中溶解4-氟-2-硝基苯胺(8.00g，51.22mmol)，添加10％钯-碳粉末(0.80g)，在氢气氛下于室温搅拌4小时。过滤反应溶液，减压浓缩滤液用柱色谱法精制所得残渣(硅胶150g，己烷∶醋酸乙酯＝1∶4)，得到褐色油状物质(5.67g，収率88％)。
在乙醇(150mL)中溶解该褐色油状物质(5.64g，44.72mmol)，加入O-乙基黄原酸钾(8.60g，53.65mmol)，加热回流3小时。再加入O-乙基黄原酸钾(1.43g，8.92mmol)，加热回流2小时。减压浓缩反应液，用柱色谱法精制所得残渣(硅胶150g，己烷∶醋酸乙酯＝2∶1)，得到呈褐色粉末的5-氟-2-巯基苯并咪唑(5.93g，収率79％)。
制造例6
1-叔丁氧基羰基-4-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪的制造：
在THF(36mL)中溶解1-叔丁氧基羰基-4-(2-羟乙基)哌嗪(6.00g，26.05mmol)，加入三乙胺(3.43g，33.90mmol)、4-二甲基氨基吡啶(159mg，1.30mmol)后，在冰冷却下滴入甲磺酰氯(3.58g，31.25mmol)的THF(9mL)溶液。搅拌1小时后过滤反应液，减压浓缩滤液，在DMF(90mL)中溶解所得残渣。在室温一边搅拌，一边依次加入5-氟-2-巯基苯并咪唑(4.82g，28.66mmol)、碳酸钾(5.40g，39.07mmol)以及18-冠醚-6(688mg，2.60mmol)，在80℃搅拌2小时。减压浓缩反应液，在所得残渣中加入水，再用醋酸乙酯萃取，用水、饱和食盐水洗浄有机层。用无水硫酸钠干燥后，用硅胶柱色谱法(硅胶150g，己烷∶醋酸乙酯＝2∶1～1∶1～1∶2)精制减压浓缩所得残渣，得到1-叔丁氧基羰基-4-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪(7.28g，収率73％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.49(9H，s)，2.63(4H，t，J＝4.9Hz)，2.94(2H，t，J＝5.9Hz)，3.29(2H，t，J＝5.9Hz)，3.58(4H，t，J＝4.9Hz)，6.93(1H，td，J＝9.2，2.5Hz)，7.19(1H，dd，J＝9.2，2.5Hz)，7.40(1H，dd，J＝9.2，4.9Hz).
实施例6
1-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪·3三氟醋酸盐的制造：
在冰冷却并搅拌下，于30分钟之内，在三氟醋酸(17mL)中加入、溶解1-叔丁氧基羰基-4-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪(6.50g，17.08mmol)。返回至室温搅拌30分钟后，加入乙醚以及己烷，过滤分离所生成的固形物。用乙醚将其洗浄，得到呈褐色粉末1-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪·3三氟醋酸盐(10.50g，収率99％)。
mp127.7-129.3℃
IR(KBr)：3143，3032，2731，1789，1747，1660(cm-1).
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：3.29-3.47(8H，m)，3.48(2H，t，J＝6.6Hz)，3.62(2H，t，J＝6.6Hz)，7.03(1H，t，J＝9.0Hz)，7.32(1H，d，J＝9.0Hz)，7.48(1H，dd，J＝9.0，4.4Hz)，9.36(2H，br)，13.76(3H，br).
制造例7
1-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]-4-甲酰基哌嗪的制造：
在丙腈(50mL)中溶解1-甲酰基-4-(2-羟乙基)哌嗪(1.20g，7.6mmol)、5-氟-2-巯基苯并咪唑(1.28g，7.6mmol)、二异丙基乙胺(3.93g，30.4mmol)，加入碘化氰基甲基三甲基鏻(7.39g，30.4mmol)，在氩气氛下于92℃搅拌1小时。放冷后注入水(100mL)，用氯仿(100mL×3)萃取。用饱和食盐水洗浄有机层，用无水硫酸钠干燥后，减压下浓缩。由丙酮-乙醚使所得粗生成物结晶化，得到呈褐色结晶性粉末的1-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]-4-甲酰基哌嗪1.87g(収率80％)。
mp173.0-175.0℃
IR(KBr)cm-1：3435，3051，2953，2825，1648，1503，1446.
1H-NMR(DMSO-d6)：δ2.38(2H，t，J＝5.2Hz)，2.44(2H，t，J＝5.0Hz)，2.70(2H，t，J＝7.0Hz)，3.22-3.38(4H，m)，3.42(2H，t，J＝7.0Hz)，6.87-6.98(1H，m)，7.23(1H，br s)，7.39(1H，br s)，7.97(1H，s)，12.6(1H s).
MS(m/z)：308(M+)，140(100).
实施例7
1-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪的制造：
在甲醇(20mL)中溶解1-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]-4-甲酰基哌嗪(1.80g，5.8mmol)，添加12N盐酸(2mL)，在室温下搅拌18小时。减压下浓缩反应液，在室温下于5分钟之内，在搅拌下加入饱和氨-甲醇溶液。在减压下除去溶剂，用硅胶柱色谱法(氯仿∶饱和氨-甲醇＝100∶3)精制所得残渣，得到呈褐色油状物的1-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪1.33g(収率81％)。
IR(KBr)cm-1：3059，2947，2815，1626，1602，1482，1444，1408.
1H-NMR(DMSO-d6)：δ2.30-2.45(4H，m)，2.62(2H，t，J＝6.8Hz)，2.67(4H，t，J＝4.8Hz)，3.39(2H，t，J＝6.8Hz)，6.90-6.98(1H，m)，7.23(1H，dd，J＝9.5，2.5Hz)，7.39(1H，dd，J＝8.8，4.9Hz).
MS(m/z)：280(M+)，70(100).
实施例8
2-[4-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪-1-基]-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(化合物1a)的制造：
在1-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪·3三氟醋酸盐(6.92g，11.12mmol)以及2-溴-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(4.50g，10.59mmol)的乙腈(90mL)悬浊液中缓缓加入碳酸钾(5.85g，42.33mmol)。室温下搅拌5小时后，在反应液中加入水(100mL)再用醋酸乙酯萃取，用饱和食盐水清洗有机层。用无水硫酸钠干燥后，用硅胶柱色谱法精制减压浓缩所得残渣(氯仿∶甲醇＝50∶1)。用丙酮-乙醚对所得结晶进行重结晶，得到呈淡褐色棱晶的2-[4-[2-(5-氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪-1-基]-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(4.72g，収率71％)。
mp182.0-182.7℃
IR(KBr)：3282，2824，1509，1413，1272，1166(cm-1).
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.41(3H，s)，2.66-2.91(8H，m)，2.97(2H，t，J＝5.1Hz)，3.25(2H，t，J＝5.1Hz)，3.29(2H，s)，4.41(2H，q，J＝8.0Hz)，4.75(2H，q，J＝8.5Hz)，6.45(1H，s)，6.93(1H，td，J＝9.0，2.3Hz)，7.10-7.56(2H，m)，8.28(1H，s)，13.14(1H，br.s)
元素分析C25H27F7N6O3S
计算值：C，48.08；H，4.36；N，13.46
实测值：C，47.98；H，4.38；N，13.31
实施例9
N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]-2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙酰胺的制造
在1-(2-羟乙基)哌嗪(1.95g，15.0mmol)和2-溴-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基-3-吡啶-3-基]乙酰胺(5.00g，12.5mmol)的乙腈(30ml)溶液中添加碳酸钾(2.25g，16.3mmol)，在室温搅拌5小时。用水稀释反应液，用醋酸乙酯萃取。用水、饱和食盐水依次洗浄有机层，用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩。用硅胶柱色谱法(展开溶剂：氨饱和甲醇/氯仿＝1/20)精制所得残渣，得到呈无色晶体的N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]-2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙酰胺5.40g(収率91％)。
1H-NMR(CDCl3)δ：2.42(3H，s)，2.48-2.82(8H，m)，2.57(2H，t，J＝5.3Hz)，3.17(2H，s)，3.63(2H，t，J＝5.3Hz)，4.41(2H，q，J＝8.0Hz)，4.75(2H，q，J＝8.5Hz)，6.47(1H，s)，8.38(1H，br s).
实施例10
2-[4-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪-1-基]-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(化合物1b)的制造：
于氩气氛、冰冷却下，在N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]-2-[4-[2-羟基乙基]哌嗪-1-基]乙酰胺(4.0g，8.43mmol)、5，6-二氟-2-巯基苯并咪唑(5.8g，31.2mmol)以及三苯基膦(7.8g，29.7mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(170mL)溶液中，滴加偶氮二羧酸二乙酯(40％w/v甲苯溶液，11.0mL，25.3mmol)，在相同温度下搅拌1.5小时。在反应液中，添加醋酸乙酯以及1mol/L盐酸，分离水层，再用1mol/L盐酸萃取有机层。合并水层，用1mol/L氢氧化钠水溶液调至碱性，用醋酸乙酯萃取。用水以及饱和食盐水依次洗浄有机层，用无水硫酸钠干燥后，减压除去。用硅胶柱色谱法(展开溶剂；氯仿∶氨饱和甲醇＝100∶3)精制所得残渣，得到呈无色晶体的2-[4-[2-(5，6-二氟苯并咪唑-2-基硫代)乙基]哌嗪-1-基]-N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]乙酰胺(4.9g、収率90.1％)。
试验例1 J774A细胞中的ACAT抑制活性试验
在24孔板中接种J774细胞(2×105细胞/孔)，用500μL的DMEM(10％FBS)培养24小时。换培养基后添加25-羟基胆固醇(10μg/mL)以及ACAT抑制剂(终浓度0，10-9～10-5mol/L)培养18小时。用0.9％氯化钠洗浄后，用己烷-异丙醇(3∶2)250μL萃取脂质。用己烷-异丙醇(3∶2)250μL再次萃取脂质，除去萃取溶剂后，用荧光酶法定量胆固醇酯(CE)。另外，对脂质萃取后的细胞进行蛋白质定量(micro BCA法)，求出相当于1mg蛋白质的CE量。由相对于空白的被验物质的CE生成比算出IC50(抑制50％CE生成的药物浓度)。试验中N＝4。
结果如表1所示，确认化合物(1a)以及(1b)具有强ACAT抑制活性。
【表1】
  ACAT抑制活性：J774A细胞：IC<sub>50</sub>(nM)
  化合物(1a)   87
  化合物(1b)   75
  化合物(B)·HCl   59
试验例2 人肝脏微粒体代谢稳定性试验
按照下表2，在0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.4)中添加NRS(NADPH生成系)试液、16％人血清白蛋白，再在其中添加供试化合物(100μM)的乙腈(0.01mL)溶液。在37℃温浴中预培养5分钟后，添加人肝脏微粒体(POOLED HUMAN LIVER MICROSOMES、Lot.No.20GENTEST公司)，37℃温浴中进行反应30分钟。在反应开始0以及30分后分取反应液0.25mL，进行萃取操作＊，用HPLC测定检体量。30分后的检体的残存率按照(30分后的峰面积/0分的峰面积)×100算出。
其结果如图1所示，确认与化合物(B)盐酸盐相比，化合物(1a)以及化合物(1b)对人肝脏微粒体的代谢的稳定性显著提高。
【表2】
人肝脏微粒体反应液的组成(1mL)
  人肝脏微粒体(POOLED)：0.05mL中含有蛋白质1mg   0.05mL
  NRS(NADPH生成系)试液：0.25mL中含有β-烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸氧化型2mgD-葡萄糖6-磷酸2钠2mg葡萄糖6-磷酸脱氢酶0.8単位 0.25mL
  16％人血清白蛋白   0.25mL
  0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.4)   0.44mL
  检体(100μM)的乙腈溶液   0.01mL
  合计   1mL
＊萃取操作
在各样品中添加甘氨酸缓冲液(pH10)1.0mL、内标物质0.1mL以及叔丁基甲基醚5.0mL，振荡10分钟，在2500转下离心分离10分钟，分取有机层。
试验例3 溶解性试验(日本药典I液)
将各供试化合物溶解于乙腈中调制100μM的溶液，将该溶液加入到日本药典I液中制成1000ng/mL的溶液。搅拌该溶液10分钟后，用注射器吸取1mL，通过孔径0.2μm的滤膜(HLC-DISK 13水系·溶剂系 关东化学株式会社)。使用0.5mL滤液，进行萃取操作＊，用HPLC测定检体量。
结果如表3所示，化合物(1a)以及化合物(1b)的溶解度较化合物(B)盐酸盐的低。从溶解度预想本发明化合物的口服吸收性较低。
【表3】
＊萃取操作
与人肝脏微粒体代谢稳定性试验相同。
试验例4 大鼠口服试验
在0.01N盐酸溶液中溶解供试化合物，口服给予雄性或雌性SD大鼠10mg/5mL/kg。分别在给药后30、60、120、180、240、360分钟采血0.25mL。所采血液在4℃、9,000g的条件下进行离心分离5分钟，得到血浆。所得血浆直至进行测定时始终保存在-30℃，进行萃取操作＊，用LC/MS/MS法测定化合物的血浆中浓度。其结果如表4所示，与化合物(B)盐酸盐相比，化合物(1a)以及化合物(1b)显示了较高的Cmax和较高的药时曲线下AUC值，由此确认了具有比化合物(B)盐酸盐更好的口服吸收性。
【表4】
Figure C20048001916800241
(10mg/kg·p.o.)
＊萃取操作
与人肝脏微粒体代谢稳定性试验相同。
与专利文献1记载的化合物(B)相比，本发明化合物(1)显示了优良的人肝脏微粒体代谢稳定性，保持了强大的ACAT抑制活性。虽然与化合物(B)盐酸盐相比，本发明化合物(1)对水的溶解性较差，但是在雄雌大鼠的口服试验中显示了良好的口服吸收性。由此，可期待出现对人的良好的生物学利用率。

Claims (4)

1.通式(1)
Figure C2004800191680002C1
所示的2，4-二(三氟乙氧基)吡啶化合物或其药学中允许的盐，式中，X1表示氟原子或氢原子。
2.权利要求1所述的化合物或其药学中允许的盐的制造方法，其特征在于，使通式(2)
所示的的哌嗪化合物与通式(3)
所示的吡啶化合物反应，式中、X1表示氟原子或氢原子，X2表示氯原子、溴原子或碘原子。
3.N-[2，4-二(2，2，2-三氟乙氧基)-6-甲基吡啶-3-基]-2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙酰胺。
4.作为高血脂症和/或动脉硬化症的预防或治疗剂的药物组合物，其特征在于，含有权利要求1所述的化合物或其药学中允许的盐以及药学中允许的载体。
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