ES2352098T3 - Derivado de fenoxi-pirrolidina y su uso y composiciones. - Google Patents

Abstract

El compuesto 2-(4-hidroximetil)fenoxi)-1-(3-(2-trifluorometil)fenoxi)pirrolidin-1-il)etanona.

Description

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CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a derivados de fenoxi-pirrolidina y sus composiciones y usos, en particular derivados de fenoxi-pirrolidina para usar como inhibidores de la estearoil-CoA desaturasa (SCD1).

FUNDAMENTO

La estearoil-CoA desaturasa (SCD1) es una enzima microsómica que cataliza en los mamíferos la biosíntesis de novo de ácidos grasos monoinsaturados partiendo de sustratos de acil graso-CoA. Específicamente, la SCD1 introduce un doble enlace cis en la posición C9-C10 de ácidos grasos saturados tales como el palmitoil-CoA (16:0) y el estearolil-CoA (18:0). Los ácidos grasos monoinsaturados que resultan, el palmitoleoil-CoA (16:1) y el oleoil-CoA (18:1) son, a su vez, sustratos para incorporar en una diversidad de lípidos, tales como fosfolípidos, ésteres de colesterol y triglicéridos. Los ácidos grados monoinsaturados son también mediadores de otros diversos procesos tales como la transducción de señales y la diferenciación celular. La composición de los lípidos tiene una considerable importancia fisiológica. Como el componente fundamental de las membranas celulares, la composición de los fosfolípidos determina en último lugar la fluidez de la membrana, al tiempo que la composición de los ésteres de colesterol y los triglicéridos pueden tener impacto en el metabolismo de las lipoproteínas y en la adiposidad. Estudios en ratones sugieren, además, que la actividad de la SCD1 es importante para mantener el funcionamiento normal de la piel y los párpados, como resultado de su papel principal en la síntesis de lípidos dentro de las glándulas sebáceas y de las glándulas de Meibomio., Miyazaki, J.Nutr., 131:2260-2268 (2001). La expresión de SCD1 ha sido confirmada por inmunohistoquímica en las glándulas sebáceas del cuero cabelludo humano y por RT-PCR en la línea celular de las glándulas sebáceas inmortalizada SZ95.

La piel es un órgano rico en lípidos compuesto por tres capas principales: el “stratum corneum”, la epidermis y la dermis. El “stratum corneum” es la capa externa y su función principal es servir de barrera al medio ambiente externo. Para hacer disminuir la permeabilidad al agua del “stratum corneum” y proteger a la piel del agrietamiento, las glándulas sebáceas secretan una sustancia oleosa denominada sebo que está distribuida sobre la superficie de la piel. El sebo es secretado también por las glándulas de Meibomio (o glándulas tarsales), un tipo especial de glándulas sebáceas situadas a lo largo del borde de los párpados, que evita la evaporación de la película de lágrimas del ojo. El sebo es una mezcla compleja de lípidos que comprende, en general, ácidos grasos libres, triglicéridos, ésteres de colesterol, ésteres céreos y escualeno; no obstante, su composición exacta varía de una especie a otra. El sebo es producido en las células acinosas de las glándulas sebáceas y se acumula a medida que envejecen estas células. Una vez alcanzada la maduración, las células acinosas lisan liberando sebo en el conducto lumenal de modo que puede depositarse sobre la superficie de la piel.

En los seres humanos, las glándulas sebáceas están presentes en todas las zonas de la piel, excepto en las palmas de las manos y en las plantas de los pies. La máxima concentración de estas glándulas ocurre en el cuero cabelludo y en la cara. A pesar de las funciones importantes que desempeña el sebo, muchos individuos experimentan una producción excesiva de sebo, asociada con una incidencia aumentada de estados dermatológicos tales como el acné o la dermatitis seborreica. Incluso en individuos sin acné, la producción excesiva de sebo desvirtúa el aspecto cosmético de la piel y del cabello haciendo que la piel tenga aspecto brillante, grasiento o aceitoso y que el cabello parezca lacio y sucio. La disminución de la producción de sebo puede aliviar la piel y el cabello aceitosos de los individuos que experimentan estos estados.

Los tratamientos actuales para regular la producción de sebo en exceso son menos que óptimos,. Se ha puesto de manifiesto que la isotretinoína, un retinoide no aromático, suprime la producción de sebo hasta en un 90% pero también está asociada con defectos graves de nacimiento y otros diversos efectos secundarios potencialmente importantes. Así pues, la isotretinoína solamente se utiliza para el tratamiento del acné grave y no simplemente para reducir la secreción de sebo con fines cosméticos. Otros retinoides aromáticos, tales como el etretinato, se usan para el tratamiento del acné pero no reducen la síntesis del sebo., Christos C. Zouboulis, J. Clin. Derm., 22:360-366 (2004).

Por consiguiente, el medio más práctico para aliviar la producción excesiva de sebo es el lavado frecuente de la superficie de la piel. Si bien el lavado frecuente retira desde la piel el sebo en exceso, este efecto es temporal y no hace nada por disminuir la producción de sebo. En efecto, el lavado frecuente o el lavado con productos ásperos pueden deshidratar la piel y, en realidad, estimulan a las glándulas sebáceas para aumentar la producción de sebo en lugar de disminuirla.

SUMARIO

La presente invención proporciona un inhibidor de la estearoil-CoA desaturasa, representado por la Fórmula I, y sus sales, solvatos e hidratos. Al compuesto puede hacerse referencia también como la (S)-2-(4(hidroximetil)fenoxi)-1-(3-(2-(trifluorometil)fenoxi)pirrolidín-1-il)etanona.

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En otro aspecto, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de Fórmula I, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, o

15 un solvato o un hidrato de dicho compuesto o sal y un portador, vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método de tratamiento en un mamífero, de un estado dermatológico o cosmético mediado por la estearoil-CoA desaturasa, que comprende administrar a dicho mamífero

20 necesitado de tal tratamiento, una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de Fórmula I, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, o un hidrato o un solvato de dicho compuesto o dicha sal. Según algunas realizaciones, el compuesto de Fórmula I o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, o un hidrato o un solvato de dicho compuesto o

25 dicha sal, se administra por vía tópica para el tratamiento, alivio o prevención de sebo en exceso, piel aceitosa, cabello aceitoso y acné. En otras realizaciones, el compuesto se administra por vía oral.

Otros aspectos de la invención proporcionan un artículo de fabricación o kit que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de 30 Fórmula I, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, o un solvato o un

hidrato de dicho compuesto o dicha sal, envasado para distribuir al por menor, asociado con instrucciones que aconsejan al consumidor sobre como usar el compuesto para aliviar un estado asociado con la producción y/o secreción excesiva de sebo.

El compuesto de Fórmula I y sus composiciones farmacéuticas son útiles para el tratamiento de estados dermatológicos o cosméticos que cursan por medio de la estearoil-CoA desaturasa. Tales estados dermatológicos o cosméticos incluyen, aun cuando no se limita a ellos, la producción excesiva de sebo, el acné, la piel aceitosa. el cabello aceitoso, la piel con brillo o de aspecto grasiento, y la dermatitis seborreica,

El compuesto de Fórmula I y sus composiciones farmacéuticas son útiles también para hacer disminuir la cantidad de sebo producido y/o secretado por las glándulas sebáceas de un ser humano.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

La exposición que sigue proporciona detalles adicionales, no limitativos, del compuesto de Fórmula I y otros aspectos de la invención. Los encabezados dentro de este documento se utilizan solamente para facilitar su revisión por el lector y no deben ser considerados, en modo alguno, como limitativos de la invención o las reivindicaciones.

Definiciones

Tal como se utilizan en esta solicitud de patente, incluyendo las reivindicaciones, los términos y expresiones que siguen tienen los significados definidos más adelante, a menos que específicamente se indique de otro modo.

Las frases “compuesto de Fórmula I”, “compuesto de la invención” y “compuesto” se usan indistintamente en toda la solicitud de patente y deben ser tratados como sinónimos.

A menos que se establezca de otro modo expresamente, las frases “compuesto de Fórmula I”, “compuesto de la invención” y “compuesto” se refieren a la (S)-2-(4-(hidroximetil)fenoxi)-1-(3-(2-(trifluorometil)fenoxi)pirrolidín-1l)etanona así como a todas sus sales, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables.

La frase “farmacéuticamente aceptable” indica que el portador, vehículo, diluyente, excipiente, solvato sal o profármaco designado es, en general, química y/o físicamente compatible con los otros ingredientes que comprende una formulación, y que es fisiológicamente compatible con el receptor de la misma.

Los términos “trato(s)”, “tratar”, “tratado” y “tratamiento” tal como se usan en esta memoria, incluyen usos y/o resultados preventivos (por ejemplo, profilácticos), de mejoramiento, paliativos y curativos. Los términos “preventivo”

o “profiláctico” se usan indistintamente y aluden a un tratamiento anterior a la iniciación de uno o más síntomas de un estado particular de enfermedad. Más específicamente, esos términos se refieren al tratamiento de pacientes que son asintomáticos, es decir, en los que no son evidentes o detectables con facilidad estados particulares de enfermedad y que dan por resultado la prevención, supresión o el retraso sustancial de la iniciación de uno o más síntomas de una condición o un estado particular de enfermedad. Un tratamiento de mejoramiento es uno que mejora y/o aminora la gravedad de uno o más síntomas de una condición o estado particular de enfermedad. Los antibióticos tales como la tetraciclina, son ejemplo de un tratamiento preventivo del acné. La tetraciclina evita brotes futuros, eliminando las bacterias responsables de los brotes de acné.

Las frases “terapéutico” y “cantidad terapéuticamente eficaz”, tal como se utilizan en esta memoria, denotan, respectivamente, un efecto y una cantidad de un compuesto, composición o medicamento que (a) trata una enfermedad, estado o trastorno particular; (b) atenúa, mejora o elimina uno o más síntomas o complicaciones que surgen de una enfermedad, estado o trastorno particular; y (c) evita o retrasa la iniciación de uno o más síntomas o complicaciones asociadas con una enfermedad, estado o trastorno particular. Ha de entenderse que el término “terapéutico” y la expresión “cantidad terapéuticamente eficaz” incluye uno cualquiera de los efectos (a)-(c) citados,

o bien solo o en combinación con cualquiera de los otros (a)-(c).

Los términos “mamífero”, “paciente” y “sujeto” se refieren a animales de sangre caliente tales como, por ejemplo, cobayas, ratones, ratas, jerbos, gatos, conejos, perros, monos, chimpancés y seres humanos.

El compuesto de Fórmula I posee un centro asimétrico y por tanto puede existir en configuraciones estereoisómeras diferentes. Por consiguiente, el compuesto de Fórmula I puede presentarse como un enantiómero individual (puro) así como una mezcla de enantiómeros. El alcance de la presente invención incluye tanto enantiómeros individuales como sus mezclas en todas proporciones. El alcance de la presente invención incluye, además, todas las formas tautómeras (“tautómeros”) del compuesto de Fórmula I, y todas sus mezclas en cualquier proporción. Podrá apreciarse por los expertos en la técnica, que un compuesto individual puede poner de manifiesto más de un tipo de isomería.

El compuesto de Fórmula I puede ser resuelto en los enantiómeros puros por métodos conocidos por los expertos en la técnica, por ejemplo, mediante la formación de sales diastereoisómeras que pueden separarse, por ejemplo, por cristalización, formación de derivados o complejos diastereoisómeros que pueden separarse, por ejemplo, por cristalización, cromatografía gas-líquido o cromatografía líquida, reacción selectiva de un enantiómero con un reactivo específico del enantiómero, por ejemplo, esterificación enzimática; o cromatografía gas-líquido o cromatografía líquida en un ambiente quiral , por ejemplo, sobre un soporte quiral con un ligando quiral de unión o en presencia de un disolvente quiral. Podrá apreciarse que cuando el estereoisómero deseado es convertido en otra entidad química mediante uno de los procedimientos operatorios de separación descritos, se requiere una etapa adicional para liberar la forma enantiomérica deseada. Alternativamente, pueden sintetizarse estereoisómeros específicos usando un material de partida ópticamente activo, por síntesis asimétrica, usando reactivos, sustratos, catalizadores o disolventes, ópticamente activos, o convirtiendo un estereoisómero en el otro mediante transformación o inversión asimétrica.

El compuesto de la presente invención puede existir en forma sin solvatar así como en una diversidad de formas solvatadas con disolventes farmacéuticamente aceptables tales como agua, etanol y semejantes. En general, las formas solvatadas se consideran equivalentes a las formas sin solvatar, para los fines de la presente invención. Ha de entenderse que los disolventes farmacéuticamente aceptables incluyen, además, disolventes sustituidos isotópicamente tales como D2O d6-DMSO, y semejantes. El término “solvato” se usa en esta memoria para describir un complejo que comprende el compuesto de la invención y una o más moléculas de un disolvente farmacéuticamente aceptable, con inclusión del agua. Por tanto, todas las formas de hidratos del compuesto están incluidas en el término “solvato”. Ha de entenderse que la presente invención incluye formas sin solvatar, formas solvatadas y mezclas de formas solvatadas en cualquier proporción.

El compuesto de la presente invención y/o sus sales y/o sus solvatos, pueden existir como sólidos amorfos o pueden existir en uno o más estados cristalinos, es decir, polimorfos. Los polimorfos del compuesto de Fórmula I están incluidos en la presente invención y pueden prepararse por cristalización en diversas condiciones diferentes tales como, por ejemplo, usando disolventes diferentes, o mezclas de diferentes disolventes; cristalización a temperaturas diferentes; y usando durante la cristalización modos diversos de enfriamiento que varían desde muy rápido a muy lento. También pueden obtenerse polimorfos por calentamiento o por fusión de un compuesto de Fórmula I seguido de enfriamiento gradual o rápido. La presencia de polimorfos puede determinarse mediante espectroscopía de NMR de sólidos, espectroscopía IR, calorimetría diferencial de barrido, difracción de rayos X de polvos, u otras técnicas. Ha de entenderse que la totalidad de tales formas cristalinas y amorfas del compuesto de Fórmula I, y sus sales y solvatos, están contenidas por la invención y las reivindicaciones

La presente invención incluye también todas las variaciones isotópicamente marcadas, farmacéuticamente aceptables, del compuesto de Fórmula I. Tales variaciones isotópicamente marcadas, son compuestos que poseen la misma estructura y fórmula molecular que el compuesto de Fórmula I pero en las que uno o más átomos han sido reemplazados por átomos que tienen una masa atómica o un número másico diferente de la masa atómica o número másico que se encuentran habitualmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en el compuesto de la presente invención incluyen isótopos del hidrógeno, el carbono, el flúor, el nitrógeno y el oxígeno, tales como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 18F, 13N, 15N, 15O, 17O, y 18O, respectivamente.

Ciertas variaciones isotópicamente marcadas del compuesto de la invención, por ejemplo, las que incorporan un isótopo radiactivo tal como 3H y 14C, son útiles para estudios de fármacos y/o de distribución en tejidos sustrato. El tritio, es decir, 3H, y el carbono 14, es decir 14C, son particularmente preferidos debido a su facilidad de preparación y detección. Además, la sustitución con isótopos más pesados tales como el deuterio, es decir, 2H, puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas que resultan de mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, aumento de la semivida, o de menores necesidades de dosificación, in vivo, y por tanto pueden preferirse en algunos casos. Los compuestos de Fórmula I y sus profármacos, isotópicamente marcados, pueden prepararse, en general, llevando a cabo los procedimientos operatorios descritos en los Esquemas y/o en los Ejemplos, sustituyendo un reactivo no marcado isotópicamente por un reactivo marcado isotópicamente, que puede obtenerse con facilidad.

El compuesto de Fórmula I puede aislarse y usarse per se o en forma de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables. La frase “sales farmacéuticamente aceptables” incluyen sales inorgánicas y orgánicas de dicho compuesto, farmacéuticamente aceptables. Estas sales pueden prepararse in situ durante la fase final de aislamiento y/o purificación de un compuesto (o profármaco), o haciendo reaccionar por separado el compuesto (o profármaco) con un ácido orgánico o inorgánico adecuado y aislando la sal así formada. Una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de Fórmula I, puede prepararse fácilmente mediante métodos convencionales tales como combinando el compuesto de Fórmula I y el ácido o base deseado en un medio acuoso, no acuoso o parcialmente acuoso, según sea apropiado. La sal resultante puede recuperarse mediante diversos métodos estándar, tales como filtración, precipitación desde una solución seguida de filtración, por evaporación del disolvente, o, en el caso de soluciones acuosas, por liofilización. El grado de ionización de la sal puede variar desde completamente ionizada a casi sin ionizar. La totalidad de tales sales están dentro del alcance de esta invención.

El término “sales” está destinado a aludir a sales farmacéuticamente aceptables y a sales adecuadas para usar en procesos industriales, tales como la preparación del compuesto o de los intermedios correspondiente. Esas sales pueden existir en forma sustancialmente solvatada o en forma sustancialmente sin solvatar, o sus mezclas. Ha de entenderse que todas tales formas están dentro del alcance de la presente invención.

Las sales representativas incluyen, aun cuando no se limita a ellas, acetato, aspartato, benzoato, besilato, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, borato, camsilato, citrato, edisilato, esilato, formiato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hexafluorofosfato, hibenzato, hidrocloruro/cloruro, hidrobromuro/bromuro, hidroyoduro/yoduro, isetionato, lactato, malato, maleato, malonato, mesilato, metilsulfato, naftilato, 2-napsilato, nicotinato, nitrato, orotato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/hidrogenofosfato/dihidrogenofosfato, sacarato, estearato, succinato, tartrato, tosilato, trifluoroacetato y semejantes. Otros ejemplos de sales representativas incluyen cationes de metales alcalinos y alcalinotérreos tales como sodio, litio, potasio, calcio, magnesio y semejantes, así como cationes no tóxicos de amonio, amonio cuaternario y de aminas, pero no limitados a, amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, lisina, arginina, benzatina, colina, trometamina, diolamina, glicocola, meglumina, olamina y semejantes. La invención incluye, además, mezclas de sales diferentes.

El compuesto de Fórmula I puede ser administrado como un profármaco. El término “profármaco” hace referencia a un compuesto que es transformado in vivo dando lugar a un compuesto de Fórmula I o una sal o solvato del compuesto, farmacéuticamente aceptable. La transformación puede ocurrir mediante mecanismos diversos, tales como por hidrólisis en la sangre. Un profármaco del compuesto de Fórmula I puede formarse de un modo convencional según métodos conocidos en la técnica. Una discusión a fondo de profármacos se proporciona en la publicación de T. Higuchi y V. Stella, Prodrugs as Novel Delivery Systems, vol. 14 de la Serie de Simposios de la A.C.S., y en Bioreversible Carriers in Drug Design, compilador Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, ambos de los cuales son incorporados en esta memoria como referencia bibliográfica.

Síntesis

En general, el compuesto de Fórmula I puede prepararse usando diversos métodos conocidos en las técnicas químicas, en particular a la luz de la descripción contenida en esta memoria, en combinación con el conocimiento del técnico experimentado. Diversos materiales de partida, intermedios y reactivos pueden adquirirse de fuentes comerciales o pueden prepararse según métodos de la bibliografía científica o sus adaptaciones. Aun cuando puede utilizarse en la práctica o en ensayos otros reactivos, compuestos o métodos, métodos generalizados de preparación del compuesto de Fórmula I están ilustrados mediante las descripciones y Esquemas de reacción que siguen. Otros procedimientos de preparación del compuesto de Fórmula I, están descritos en la sección experimental. Los métodos aquí descritos, con inclusión de los esbozados en los Esquemas, descripciones y Ejemplos, están descritos con fines ilustrativos y no han de ser considerados en modo alguno como limitaciones. Diversos cambios y modificaciones serán evidentes para los expertos en la técnica dado el beneficio de la presente descripción, y se

considera que están dentro del alcance de la presente descripción, definida adicionalmente en las reivindicaciones que se acompañan. Aun cuando realizaciones específicas de diversos aspectos de la invención serán descritos con referencia a los Esquemas, Preparaciones y/o

5 Ejemplos, ha de entenderse que tales realizaciones son a título de ejemplo y que son simplemente ilustrativas de un número pequeño de las muchas realizaciones posibles que pueden representar aplicaciones de los principios de la presente descripción.

10 ESQUEMA 1

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En la reacción 1., el compuesto de Fórmula I puede prepararse mediante la

15 reducción del correspondiente aldehído 2. La reducción se lleva a cabo según procedimientos operatorios conocidos en la técnica. Típicamente, se trata el aldehído 2 con un agente reductor tal como borohidruro de sodio, en el seno de un disolvente polar tal como metanol. Se deja agitar la mezcla durante un período de tiempo apropiado, tal como entre aproximadamente 1 hora y

20 aproximadamente 4 horas, a una temperatura adecuada, tal como temperatura ambiente, aproximadamente. Alternativamente, el aldehído 2 puede ser reducido al alcohol correspondiente usando hidrógeno gaseoso y un catalizador metálico apropiado tal como níquel. La reacción de hidrogenación se lleva a cabo, típicamente, en el seno de un disolvente polar tal como tetrahidrofurano

25 (THF), a temperatura ambiente.

En la reacción 2., puede prepararse el aldehído 2 condensando la fenoxi-pirrolidina 4 con el ácido formil-fenoxi-acético 3. La reacción de condensación puede efectuarse usando cianofosfato de dietilo (DECP) en presencia de una base orgánica, tal como, por ejemplo, trietilamina (TEA) en el

5 seno de un disolvente aprótico, tal como, por ejemplo, diclorometano. Típicamente, 4 y 3 se combinan junto con la base a una temperatura adecuada, tal como temperatura ambiente. Después se añade gota a gota el DECP a la mezcla de reacción. Se agita la mezcla de reacción durante un período de tiempo apropiado, tal como entre aproximadamente 12 horas y

10 aproximadamente 24 horas. Alternativamente, la reacción de condensación puede realizarse combinando 4 y 3 en presencia de 1-hidroxibenzotriazol (HOBT), 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDAC) y trietilamina (TEA) en el seno de un disolvente o mezcla de disolventes polar, tal como acetato de etilo y agua, durante un período de tiempo apropiado, tal como 4 horas,

15 aproximadamente. Una preparación alternativa del compuesto de Fórmula I se muestra en el Esquema II. Esquema II

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Como se muestra en el Esquema II, el compuesto de Fórmula I puede prepararse condensando directamente la fenoxi-pirrolidina 4 con el alcohol bencílico 9, empleando procedimientos operatorios estándar de acoplamiento

25 de activación con ácido, conocidos en la técnica. El ácido formil-fenoxi-acético 3 (Esquema I) y el alcohol bencílico 9 (Esquema II), pueden adquirirse de fuentes comerciales conocidas u obtenerse usando procedimientos operatorios conocidos en la técnica La preparación de la fenoxi-pirrolidina 4 se describe en el Esquema III.

30

Esquema III

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En la reacción 1. puede prepararse la fenoxi-pirrolidina 4 por separación del grupo “P” de protección del nitrógeno partiendo de la correspondiente fenoxi-pirrolidina protegida en el N, 5, según procedimientos estándar de

10 desprotección. Por ejemplo, cuando P representa terc-butoxicarbonilo, la reacción de desprotección puede efectuarse usando un ácido tal como el ácido p-toluenosulfónico (TsOH) o ácido trifluoroacético (TFA) o una solución ácida tal como HCl en dioxano. La reacción se lleva a cabo, típicamente, en el seno de un disolvente polar tal como, por ejemplo, éter dietílico, o mezclas de

15 disolventes, y se deja agitar durante un período de tiempo apropiado tal como entre aproximadamente 4 horas y aproximadamente 24 horas, a una temperatura apropiada tal como, por ejemplo, temperatura ambiente. En algunos casos la desprotección de 5 con TFA puede conducir a la formación de un producto secundario (presente en 15%, aproximadamente) en el que P

20 representa trifluorometilcarbonilo. El tratamiento de la impureza con carbonato de litio en el seno de acetato de etilo húmedo, proporciona la fenoxi-pirrolidina

4.

En la reacción 2. la fenoxi-pirrolidina protegida en el N, 5, puede prepararse mediante sustitución nucleófila según procedimientos operatorios

conocidos en la técnica. Típicamente, la reacción de sustitución se efectúa combinando el mesilato 7 y el trifluorometilfenol 6 junto con un exceso de una base, tal como hidruro de sodio, t-butóxido de potasio, carbonato potásico, carbonato de cesio, etc., en el seno de un disolvente aprótico tal como 5 tetrahidrofurano, N,N-dimetilformamida, etc., bajo atmósfera inerte. (típicamente nitrógeno), a una temperatura adecuada tal como 65ºC, aproximadamente. Se deja agitar la mezcla de reacción durante un período de tiempo apropiado, tal como entre 4 horas aproximadamente y aproximadamente 24 horas. El trifluorometilfenol 6 es conocido en la técnica y

10 puede adquirirse de fuentes comerciales conocidas. En la reacción 3., puede prepararse el mesilato 7 partiendo de la correspondiente hidroxi-pirrolidina protegida en el N, 8, según procedimientos operatorios estándar, tales como usando cloruro de mesilo (cloruro de metanosulfonilo) en presencia de una base tal como trietilamina. La pirrolidina

15 protegida en el N, 8, en la que P representa el grupo protector del N, tercbutoxicarbonilo (BOC), es conocida en la técnica y puede obtenerse de fuentes comerciales conocidas. Alternativamente, la pirrolidina protegida en el N, 8, puede prepararse a partir de 3-hidroxipirrolidina usando procedimientos operatorios estándar conocidos en la técnica.

20 Las secuencias de las reacciones antes descritas, pueden llevarse a cabo, asimismo, usando como material de partida una pirrolidina protegida en el N, racémica, según indica el Esquema IV.

Esquema IV

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El material de partida racémico, que corresponde a la pirrolidina protegida en el N, 8, en que P representa un grupo protector del nitrógeno tal 30 como BOC, puede adquirirse también de fuentes comerciales conocidas.

Los productos intermedios anteriormente descritos pueden ser recuperados por extracción, evaporación u otros procedimientos conocidos en la técnica. Los materiales crudos pueden purificarse opcionalmente luego por cromatografía, HPLC, recristalización, trituración, destilación u otros procedimientos conocidos en la técnica.

Como podría apreciarse por los expertos en la técnica, algunos de los métodos útiles para preparar tales compuestos, según se ha discutido antes, pueden requerir la protección de una funcionalidad particular, por ejemplo, prevenir la interferencia por tal funcionalidad en reacciones en otros lugares dentro de la molécula o preservar la integridad de tal funcionalidad. La necesidad y el tipo de tal protección se determina con facilidad por los expertos en la técnica y varían dependiendo, por ejemplo, de la naturaleza de la funcionalidad y de las condiciones del método de preparación seleccionado. Métodos de introducción y de separación de grupos protectores son bien conocidos por los expertos de conocimiento ordinario en la técnica y están descritos en la publicación de Greene y Wutz, Protective Groups in Organic Synthesis, 3ª Edición, John Wiley and Sons, (1999).

De modo semejante, podría apreciarse por los expertos en la técnica que los procedimientos operatorios estándar a que se hace referencia en los Esquemas I a IV anteriores, son aquellos que pueden encontrarse en libros de referencia tales como, por ejemplo, la serie titulada Compendium of Organic Synthetic Methods, (Wiley-Intescience) y Comprehensive Organic Transformations por Richard Larock. Reactivos y materiales de partida alternativos, así como métodos para optimizar o adaptar los procedimientos operatorios descritos en esta memoria, también podrían determinarse fácilmente por los expertos en la técnica.

Usos médicos y cosméticos

Se ha descubierto que el compuesto de Fórmula I es un inhibidor de la estearoil-CoA desaturasa y puede ser útil en el tratamiento y alivio de estados dermatológicos y cosméticos asociados con la producción y secreción excesiva de sebo. Más específicamente, el compuesto de Fórmula I puede usarse para tratar, aliviar y prevenir estados dermatológicos y cosméticos tales como acné, piel aceitosa, cabello aceitoso, piel grasienta o brillante y dermatitis seborreica. Como un regulador enzimático fundamental de la lipogénesis, se piensa que la perturbación de la actividad de SCD1 desempeña un papel importante en una amplia variedad de enfermedades, tales como la obesidad, la aterosclerosis, el cáncer y las diabetes. Por ejemplo, la deleción como blanco del gen de SCD1 en ratones ha ilustrado la importancia de la SCD1 en la homeostasia de los lípidos y la regulación del peso corporal. Ntambi, J.M. y Miyazaki, M., Curr. Opin. Lipidol. 14, 255-261 (2003) y Dobryzn A. Ntambi, J.M., Obes. Rev., 6, 156-174 (2005). Otros estudios de ratones “noqueados” con SCD1 han correlacionado las deficiencias de SCD1 con un aumento del gasto energético, adiposidad corporal reducida, aumento de sensibilidad a la insulina y resistencia a la obesidad inducida por la dieta. Dobrzyn, A., Ntambi, J.M., Trends Cardiovasc. Med., 14, 77-81 (2004). Otros estudios han puesto de manifiesto una correlación positiva entre la actividad de SCD1 y los triglicéridos plasmáticos en seres humanos con hipertrigliceridemia. Attie, A.D. et al., J. Lipid Res., 43, 1899-1907 (2002). Otros estudios sugieren que la expresión y la actividad elevadas de SCD1 contribuyen a una distribución anormal de los ácidos grasos en la musculatura esquelética de personas fuertemente obesas. Hulver, M.W. et al., Cell Metab. 2, 251-261 (2005).

La conexión entre la inhibición de SCD1 y la producción reducida de sebo ha sido demostrada también en estudios llevados a cabo con ratones “noqueados” con SCD1 y ratones que carecen de SCD1 funcional como resultado de una mutación espontánea (ratón que no produce sebo, asébico). El ratón asébico se caracteriza por poseer glándulas sebáceas rudimentarias, epidermis escamosa y pelo delgado. Zheng, Y. et al., Nature Genetocs, 23:268270 (1999). Además de estas características del ratón asébico, el ratón “noqueado” con SCD1 manifestaba también atrofia de los sebocitos, pérdida o disminución de la producción de sebo y ojos secos. Miyazaki, M. et al., Journal of Nutrition, 131(9):2260-2268 (2001). Más importantemente, se observó que los ratones noqueados eran deficientes en triglicéridos y ésteres de colesterol, dos componentes fundamentales del sebo, y que estas deficiencias no se corregían alimentando a los ratones con dietas altas en oleato y /o palmitoleato. En los seres humanos, los niveles aumentados de producción y secreción de sebo favorecen el crecimiento de la Propionibacterium acnes que, a su vez, contribuye a la inflamación, proliferación de queratinocitos y a la formación de lesiones que caracterizan el acné. Sidiropoulos M., University of Toronto Medical Journal, 83(2), 93-95 (2006). Por consiguiente, la inhibición de la actividad de SCD1 para hacer disminuir o suprimir así la síntesis de sebo en las glándulas sebáceas, ejerce el efecto terapéutico deseado en sujetos aquejados de estados asociados con la producción excesiva de sebo tales como el acné, piel aceitosa, cabello aceitoso o piel de aspecto grasienta, con brillos, y dermatitis seborreica.

Formulaciones

El compuesto de la presente invención está destinado a uso farmacéutico, dermatológico y cosmético, y puede ser formulado como una composición farmacéutica y administrado a un mamífero, tal como un paciente humano, en una diversidad de formas adaptadas a la vía de administración elegida, es decir, oralmente, tópicamente o subcutáneamente. Ha de entenderse que la invención no está limitada por la vía de administración elegida. El compuesto puede administrarse aislado o en mezcla con uno o más de otros agentes terapéuticos.

Si se desea, el compuesto puede administrarse directamente sin excipiente alguno. No obstante, en una realización típica, el compuesto de la invención se administra como una formulación en asociación con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. El término “excipiente” tal como se usa en esta memoria se refiere a cualquier ingrediente de una formulación distinto del compuesto de la invención, tal como vehículos, portadores, diluyentes, agentes conservantes y semejantes. Tal como aquí se usa, el término excipiente se utiliza indistintamente con los términos “vehículo” y “portador”. La elección del excipiente o excipientes dependerá en gran manera de factores tales como el modo particular de administración, el efecto del excipiente o excipientes sobre la solubilidad y la estabilidad, y la naturaleza de la forma farmacéutica. Tal como se usa en esta memoria, los términos “formulación” y “composición” se usan indistintamente. Según algunas realizaciones, el compuesto se formula con un excipiente dermatológico o cosmético. En esta solicitud de patente las expresiones “excipiente dermatológico” y “excipiente cosmético” se usan indistintamente y se refieren, en general, a ingredientes o formulaciones adecuadas para administración directa a la piel o al cabello.

En una realización típica, el compuesto se administra por vía tópica. La administración tópica es especialmente apropiada para el tratamiento del acné, el sebo en exceso, la piel o el cabello aceitosos y la piel de aspecto brillante o grasiento. Tal como se usa aquí, “tópica” se refiere a la aplicación directa de los compuestos (y excipiente opcional) a la piel y/o el cabello. La composición tópica según la presente invención puede tener la forma de soluciones, lociones, bálsamos, cremas, pomadas, liposomas, pulverizaciones, geles, espumas, barras rodadoras o cualquier otra formulación usada rutinariamente en dermatología.

En otra realización típica, el compuesto se administra por vía oral. Para su administración oral, el compuesto puede formularse en forma de preparaciones sólidas o líquidas tales como cápsulas, píldoras, comprimidos, trociscos, masas fundidas, polvos, suspensiones o emulsiones. Formas farmacéuticas unitarias, sólidas, pueden ser cápsulas de gelatina del tipo ordinario que contienen, por ejemplo, tensioactivos, lubricantes y cargas inertes tales como lactosa, sacarosa y almidón de maíz, o pueden consistir en preparados de cesión prolongada.

En algunas realizaciones, el compuesto de Fórmula I se comprime con bases de comprimidos convencionales tales como lactosa, sacarosa y almidón de maíz, en mezcla con aglutinantes, tales como goma arábiga, almidón de maíz o gelatina, agentes de desintegración tales como fécula de patata o ácido algínico, y lubricantes tales como ácido esteárico o estearato magnésico. Los preparados líquidos se obtienen disolviendo el ingrediente activo en un disolvente acuoso o no acuoso, farmacéuticamente aceptable, que puede contener también agentes de suspensión, agentes edulcorantes, agentes saborizantes y agentes conservantes, según se conoce en la técnica.

En otra realización, el compuesto se administra por vía parenteral Para administración parenteral, el compuesto puede administrarse o bien como una solución o bien como una suspensión. Son ejemplos de vehículos farmacéuticamente aceptables, el agua, soluciones salinas, soluciones de dextrosa, soluciones de fructosa, etanol o aceites de origen animal, vegetal o sintético. El vehículo farmacéutico puede contener también agentes conservantes, sustancias tampón, etc., como es bien conocido en la técnica. Cuando el compuesto se administra por vía intratecal, puede disolverse también en fluido cerebroespinal, según se conoce en la técnica.

En otras realizaciones, las composiciones de la invención pueden comprender también formulaciones sólidas o semisólidas, adecuadas para usar como jabones, geles o barras de limpieza. Estas composiciones se preparan según los métodos habituales y pueden contener, opcionalmente, excipientes adicionales tales como humectantes, colorantes, perfumes y semejantes.

El compuesto puede formularse, asimismo, para aplicar al cabello, en forma de soluciones acuosas, alcohólicas o hidroalcohólicas, o en forma de cremas, geles, emulsiones o espumas, o, alternativamente, en forma de composiciones de aerosoles que comprenden también un agente propulsor puesto bajo presión. La composición según la invención puede ser también una composición para el cuidado del cabello y, en particular, un champú, una loción de fijación del cabello, una loción de tratamiento, una crema o gel de estilización, una composición de coloración, una loción o un gel para evitar la caída del cabello, etc. Las cantidades de los excipientes de las diversas composiciones según la invención, son las empleadas convencionalmente en los ámbitos de acción considerados.

Composiciones farmacéuticas adecuadas para la distribución de compuestos de la presente invención y métodos para su preparación, serán evidentes con facilidad para los expertos en la técnica. Tales composiciones y tales métodos para su preparación pueden encontrarse, por ejemplo, en la publicación Remington’s Pharmaceutical Sciences,19ª Edición (Mack Publishing Company, 1995).

Dosificación

Las dosis y los regímenes de dosificación del compuesto de la invención, pueden ajustarse para proporcionar la respuesta óptima deseada según métodos y prácticas que son bien conocidos en las técnicas terapéuticas. Por ejemplo, puede administrarse una dosis única en forma de bolo o pueden administrarse varias dosis divididas a lo largo del tiempo. La dosis, asimismo, puede ser reducida o aumentada proporcionalmente según las exigencias de la situación terapéutica. El régimen de dosificación apropiado, la cantidad de cada dosis administrada y/o los intervalos entre dosis, dependerán de diversos factores que incluyen: el compuesto, el tipo de composición farmacéutica, las características del sujeto necesitado de tratamiento y la gravedad del estado que se está tratando.

La dosis del compuesto puede variar, pero como pauta general para administración dermatológica, el compuesto estará presente en una formulación dermatológicamente aceptable, en una cantidad desde aproximadamente 0,01 a 50% p/p y más típicamente, desde aproximadamente 0,1 a 10% p/p. En algunas realizaciones, la formulación puede aplicarse a la zona afectada desde 1 a 4 veces al día. Una “formulación dermatológicamente aceptable” es una que puede aplicarse a la piel o al cabello y que permite que el fármaco se difunda hasta el sitio de acción.

La dosis del compuesto puede variar, pero como pauta general para la dosificación por vía oral, el compuesto estará presente en una formulación adecuada para administrar por vía oral, en una cantidad desde aproximadamente 0,1 mg hasta aproximadamente 1,0 gramo. En algunas realizaciones, el compuesto se administra por vía oral una vez al día. En otras realizaciones, el compuesto se administra por vía oral más de una vez al día. Tal como se emplea en esta memoria, la frase “administración por vía oral” significa tomada por boca.

Puede esperarse, también, que el técnico experimentado pueda determinar fácilmente la dosis máxima tolerable, la cantidad terapéuticamente eficaz que proporciona a un paciente un beneficio terapéutico detectable, y los requisitos temporales para administrar cada agente y proporcionar al paciente un beneficio terapéutico detectable. Por consiguiente, si bien ciertas dosis y ciertos regímenes de administración son puestos de ejemplo en esta memoria, estos ejemplos no limitan en modo alguno la dosis y el régimen de administración que puede proporcionarse a un paciente al poner en práctica la presente invención. La determinación de las dosificaciones óptimas para un paciente particular es bien conocida por los expertos en la técnica.

Ciertos ejemplos no limitativos de vehículos farmacéuticamente aceptables, adecuados para la administración tópica, incluyen propilenglicol:transcutanol:etanol (20:20:60, v/v/v) y propilenglicol:etanol (30:70, v/v). En algunas realizaciones, el compuesto de Fórmula I puede estar presente en concentraciones de entre 1,5% (p/v), aproximadamente, a 2,0% (p/v), aproximadamente.

Administración conjunta

En realizaciones adicionales de la invención, el compuesto es administrado conjuntamente con otros agentes al objeto de intensificar o complementar el efecto terapéutico deseado o minimizar los efectos secundarios potenciales. A continuación se describen ejemplos no limitativos de tales realizaciones.

Inicialmente fueron evaluados inhibidores de la acil-CoA-colesterol aciltransferasa (ACAT) para el tratamiento del colesterol sérico elevado. Después se descubrió que estos compuestos hacen disminuir la producción de sebo (Patente de EE.UU. No. 6.133.326). Cualquiera de tales inhibidores de ACAT puede ser administrado conjuntamente con el compuesto de Fórmula I para hacer disminuir la producción de sebo, aliviar la piel aceitosa, etc.

Se han utilizado antibióticos tales como la tetraciclina y la clindamicina, para aliviar el acné. El antibiótico erradica el microorganismo, Propionbacterium acnes, lo que conduce a la reducción del acné del paciente. El compuesto de Fórmula I puede ser administrado conjuntamente con cualquier antibiótico adecuado para el tratamiento del acné.

Ciertos retinoides se emplean para tratar el acné pero no reducen eficazmente la producción de sebo. En una realización de la invención, el compuesto de Fórmula I se administra conjuntamente con un retinoide con objeto de hacer disminuir la producción de sebo y tratar el acné o la seborrea. Los retinoides de ejemplo, adecuados para la administración conjunta, incluyen, a un cuando no se limita a ellos, etretinato, tretinoína y aliretinoína.

Se ha indicado que los estrógenos y la progesterona, cada uno de ellos, hacen disminuir la producción de sebo. Estos compuestos o cualquier agonista sintético de tales compuestos, puede ser administrado conjuntamente con el compuesto de Fórmula I con objeto de disminuir la producción de sebo.

Tal como se usa en esta solicitud de patente, las expresiones “administrado conjuntamente” o “administración conjunta” aluden a un régimen de dosificación en el que el compuesto de Fórmula I es administrado con un segundo agente terapéutico, que posee, típicamente, un mecanismo de acción diferente, para favorecer el resultado deseado. Ha de entenderse que la “administración conjunta” no está limitada por la vía o vías de administración y puede referirse a dosificación simultánea, dosificación en momentos diferentes durante un solo día, o incluso dosificación en días diferentes. Los compuestos pueden ser administrados por separado o pueden combinarse en una formulación única (es decir, una combinación fija).

En otra realización, las formulaciones medicinales y cosméticas que contienen el compuesto y cualesquiera agentes terapéuticos adicionales, será envasada, típicamente, para distribución al por menor (es decir, un artículo de fabricación o un kit). Tales artículos pueden marcarse y envasarse de modo que instruyan al paciente sobre como usar el producto. Tales instrucciones incluirán el estado a tratar, la duración del tratamiento, el plan de administración, etc.

El compuesto de Fórmula I puede mezclarse también con cualquier excipiente inerte y utilizarse en ensayos de laboratorio con objeto de determinar la concentración de los compuestos en el suero, orina, etc., del paciente, según se conoce en la técnica. El compuesto puede usarse también como una herramienta de investigación.

Si bien la invención ha sido descrita en conexión con realizaciones especificas de la misma, ha de entenderse que es capaz de modificaciones adicionales y esta solicitud de patente está destinada a cubrir cualesquiera variaciones, usos o adaptaciones de la invención que siguen, en general, los principios de la invención e incluir tales desviaciones de la presente descripción incluidas dentro de la práctica conocida o de la práctica habitual dentro de la técnica a que se refiere la invención. Los ejemplos y datos biológicos que siguen son presentados con objeto de ilustrar adicionalmente la invención Esta descripción no debe ser interpretada, en modo alguno, como limitación de la invención.

En las discusiones que siguen, se han empleado las abreviaturas siguientes: THF (tetrahidrofurano), DMF (N,N-dimetilformamida), BOC (tercbutoxicarbonilo), DEPC (cianofosfato de dietilo), TEA (trietilamina), HOBT (1-hidroxibenzotriazol), EDAC (1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida) y EtOH (etanol).

EJEMPLOS Ejemplo 1A

(S)-2-(4-(hidroximetil)fenoxi)-1-(3-(2-(trifluorometil)fenoxi)pirrolidin-1il)etanona

Etapa 1: Una mezcla de R-1-BOC-3-hidroxi-pirrolidina (1,0 g, 5,34 mmol) y trietilamina (0,89 ml, 6,41 mmol), en el seno de THF (20 ml), se enfrió en un baño de hielo. A esta mezcla se añadió cloruro de metanosulfonilo (0,46 ml, 5,87 mmol). La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 4 horas. La reacción se apagó con la adición de agua y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (2X). Los extractos orgánicos fueron reunidos, lavados con solución saturada de NaCl, secados cobre MgSO4 anhidro, filtrados y concentrados, obteniendo 1,42 g de un aceite claro que se usó sin purificación adicional.

1H NMR � (ppm) (CDCl3) 1,48 (9H, s), 2,05-2,30 (2H, m), 3,05 (3H, s), 3,40-3,75 (4H, m), 5,27 (1H, ancho)

Etapa 2: El producto de la Etapa 1 se combinó con 2-(trifluorometil)fenol (868 mg, 5,35 mmol) y carbonato de cesio (2,620 g, 8,03 mmol), en el seno de DMF (15 ml). La mezcla resultante se calentó a 65ºC y se dejo en agitación durante la noche. Se añadió agua y la mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo (2X). Los extractos orgánicos fueron reunidos, secados sobre MgSO4, filtrados y concentrados, obteniendo 1,77 g de un aceite amarillo que se usó sin purificación adicional.

1H NMR � (ppm) (CDCl3) 1,50 (9H, s), 2,02-2,30 (2H, m), 3,40-3,70 (4H, m), 5,01 (1H, ancho), 6,90-7,10 (2H, m), 7,40-7,70 (2H, m).

EM (M+1-100)= 232.

Etapa 3: El producto de la Etapa 2 (1,77 g, 5,15 mmol) se disolvió en éter dietílico (20 ml). A esta disolución se añadió HCl 4M en dioxano (5,0 ml) y la mezcla de reacción se dejó agitar durante la noche, El precipitado resultante se recogió por filtración y se lavó con éter dietílico, obteniendo 0,86 g de un sólido blanco que se usó sin purificación adicional.

1H NMR � (ppm) (CDCl3) 2,30-2,42 (2H, ancho), 3,40-4,20 (4H, m), 5,18 (1H, ancho), 6,90-7,10 (2H, m), 7,40-7,60 (2H, m).

EM (M+1) = 232.

Etapa 4: El producto de la Etapa 3 (2,00 g, 8,65 mmol) se combinó con ácido 2-(4-formilfenoxi)acético (1,42 g, 7,86 mmol) y trietilamina (2,85 ml, 20,4 mmol) en el seno de diclorometano (40 ml). A esta mezcla se añadió DEPC (1,55 ml, 10,2 mmol), gota a gota, a lo largo de cinco minutos. La mezcla de reacción se agitó luego durante dieciocho horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró al 50% de su volumen y se purificó por cromatografía líquida de alta presión usando un gradiente de elución de acetato de etilo/hexanos de 5%-100% obteniendo 1,83 g de un aceite incoloro claro.

1H NMR � (ppm) (CDCl3) 2,41-2,08 (2H, m), 3,69-3,94 (4H, m), 4,61-4,66 (2H, m), 5,06 (1H, m), 6,89-7,58 (7H, m), 9,90 (1H, s).

EM (M+1)=394.

Etapa 5: El producto de la Etapa 4 (1,83 g, 4,65 mmol) se disolvió en metanol (25 ml). A esta solución se añadió borohidruro de sodio (968 mg, 2,56 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente después de lo cual se añadieron 5,0 ml de NaOH 2N y la mezcla de reacción se agitó durante un período adicional de 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó luego con 100 ml de acetato de etilo, 20 ml de solución saturada de NaCl y se agitó 5 minutos. Se separó la capa orgánica y la capa acuosa se lavó con acetato de etilo (2X, 30 ml). Se reunieron las capas orgánicas, se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se concentró. El material crudo obtenido de este modo se purificó por cromatografía líquida de media presión obteniendo una goma de color amarillo pálido que se disolvió en 10 ml de diclorometano y se trituró con heptano, obteniendo el compuesto del epígrafe en forma de un sólido blanco. Este sólido se recogió por filtración y se secó a 50ºC durante 18 horas

1H NMR � (ppm) (CDCl3) 1,64 (1H, s), 2,41-2,08 (2H, m), 3,69-3,94 (4H, m), 4,61-4,66 (4H, m), 5,06 (1H, m), 6,89-7,58 (7H, m).

EM (M+1) = 396

[ � ]20 D = 122,3 (c 5,3, MeOH)

HPLC quiral: tiempo de retención:12,62 minutos (condiciones: columnaquiralcel OJ, nº 0500CE-KJ010, 4,6x250 mm, disolvente: EtOH/Heptano 25/75, caudal: 0,9 ml/min).

Ejemplo 1B

Este ejemplo ilustra una preparación alternativa del compuesto de la invención.

Etapa 1: (S)-3-(2-(trifluorometil)fenoxi)pirrolidina (200 g, 0,579 mol) que contenía, aproximadamente, 15% de (S)-2,2,2-trifluoro-1-(3-(2-(trifluorometil)fenoxi)pirrolidin-1-il)etanona, se combinó con Li2CO3 (85,61 g, 1,16 mol) en el seno de acetato de etilo (500 ml) y agua (100 ml). La mezcla de reacción resultante se agitó durante 2 horas y luego se sometió a reparto entre agua y acetato de etilo. Se separó la capa orgánica y se lavó con agua (2X) usándola en la etapa siguiente sin concentrar ni aislar el producto.

Etapa 2: La capa orgánica con producto procedente de la Etapa 1, se trató con ácido (4-formilfenoxi)acético (95,0 g, 0,527 mol) en presencia de HOBT (71,17 g, 0,527 mol) y EDAC (131,24 g, 0,685 mol). A la suspensión resultante se añadió TEA (100 ml, 0,717 mol) y agua (50 ml) después de lo cual la temperatura de la reacción, exotérmica, alcanzó 37ºC La mezcla se agitó luego a temperatura ambiente durante 3 horas después de lo cual la mezcla de reacción se sometió a reparto con agua. La capa orgánica se lavó luego del modo siguiente: agua (1X), solución acuosa de HCl 1,0M (1X), solución acuosa saturada de NaHCO3 (1X), solución acuosa de HCl 1,0 M (1X), y solución acuosa saturada de NaHCO3 (1X). Después se añadió gel de sílice (150 g) a la capa orgánica y la mezcla se agitó durante 5-10 minutos antes de filtrar. La capa orgánica se usó luego en la etapa de reacción siguiente sin concentrar ni aislar el producto.

Etapa 3; La solución de acetato de etilo del producto procedente de la Etapa 2, se añadió a un agitador de Parr SS con un volumen de operación de 1600 ml. A esto se añadió níquel (100 g) que se había lavado con metanol y THF para retirar el agua antes de añadirle. La mezcla de reacción resultante se purgó con nitrógeno (3X), después se purgó con hidrógeno (5X) y después se presurizó a 344 kPa con hidrógeno gaseoso. La mezcla se agitó a temperatura ambiente bajo una presión de 344 kPa cuidado de que la temperatura de la reacción no excediera de 45ºC. La reacción se monitorizó mediante la absorción de hidrógeno, volviendo a presurizar el recipiente de reacción según fuera necesario. Una vez que cesó la absorción de H2, la mezcla de reacción se filtró para separar el níquel. Después el níquel se lavó con THF para disolver el producto que hubiera precipitado. La fase orgánica se combinó y se filtró a través de una almohadilla de celita antes de concentrar hasta aproximadamente 200 ml. Al concentrado se añadió heptanos (aproximadamente 650 ml) y la mezcla se agitó hasta que precipitó producto. Los sólidos se recogieron luego por filtración y se lavó con acetato de etilo obteniendo producto crudo (171 g). El material así obtenido se mezcló luego con 800 ml de acetato de etilo y se calentó a 80ºC hasta que se disolvió todo el sólido. La solución se agitó después a temperatura ambiente hasta que cristalizó el producto. Cuando la solución alcanzó 30ºC aproximadamente, se filtró el sólido, se lavó con acetato de etilo y se secó en vacío a 50ºC durante 16 horas obteniendo (S)-2-(4-(hidroximetil)fenoxi)-1-(3-(2-(trifluorometil)fenoxi)pirrolidin-1-il)etanona.

Ejemplo 1C

Este ejemplo ilustra la preparación del enantiómero opuesto del compuesto de la invención, a saber, (R)-2-(4-(hidroximetil)fenoxi)-1-(3-(2(trifluorometil)fenoxi)pirrolidin-1-il)etanona.

Una mezcla del producto de la Etapa 3 (700 mg. 2,62 mmol) del Ejemplo 1A, ácido 2-(4-hidroximetil)fenoxi)acético (855 mg, 4,7 mmol), HOBT 376 mg, 2,78 mmol), EDAC.HCl (621 mg, 3,24 mmol), y 4-metilmorfolina (3 g, 30 mmol) en el seno de cloruro de metileno (20 ml) ,se agitó durante 18 horas a 23ºC. La mezcla de reacción se diluyó con cloruro de metileno (20 ml) y se lavó con agua (30 ml) así como con solución al 5% de ácido cítrico (30 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró. La recristalización posterior en acetato de etilo/heptano proporcionó el producto deseado (Ejemplo 1C, 645 mg, rendimiento, 76,1%)

1H NMR � (ppm) (CDCl3) 1,58 (1H, s), 2,43-2,08 (2H, m), 3,6-3,94 (4H, m), 4,61-4,66 (4H, m), 5,06 (1H, m), 6,89-7,58 (m, 7H).

EM (M+1) = 396

HPLC quiral: tiempo de retención: 15,17 minutos (condiciones: columnaquiralcel OJ, nº 0500CE-KJ010, 4,6x250 mm, disolvente:EtOH/Heptano 25/75, caudal:0,9 ml/min).

Ensayo farmacológico Ensayo Microsómico en la Rata

Se empleó el ensayo microsómico en la rata, que figura seguidamente, para demostrar la actividad inhibitoria del compuesto de Fórmula I contra la estearoil-CoA desaturasa (SCD1). Según se describe más adelante, el ensayo mide la conversión de estearoil-CoA marcada en oleoil-CoA, usando CL/EM/EM.

Con objeto de aumentar la actividad de SCD1 en los microsomas del hígado de la rata, ratas Sprague Dawley se mantuvieron en ayuno durante 40 horas. Después, la dieta de ayuno se reemplazó con una comida ad líbitum deficiente en ácidos grasos libres, durante 48 horas. Después las ratas fueron eutanizadas usando asfixia con CO2 y se separaron sus hígados. Los hígados se pesaron, se desmenuzaron y se colocaron en solución tampón de homogeneización (KCl 0,15 mM, sacarosa 0,25 mM, Tris-HCl 50 mM, pH 7,5, EDTA 5 mM, GSH 1,5 mM) sobre hielo. Se aislaron los microsomas por homogeneización con un politrón y varias etapas de centrifugación. Después de la centrifugación final, el glóbulo que resulta se volvió a suspender en solución tampón de homogeneización y se determinó la concentración proteínica. Se guardaron partes alícuotas a -80ºC hasta usarlas.

Se dejaron reaccionar microsomas de hígado de rata con estearoilcoenzima A marcada con D3 en presencia del compuesto de Fórmula I para ensayar la aptitud del compuesto para inhibir la conversión de la estearoilcoenzima A en oleoil-coenzima A. La reacción se terminó usando acetonitrilo. Se extrajeron los ácidos grasos libres por saponificación de las muestras con KOH 2M, a 70ºC. Después, se acidificaron las muestras con ácido fórmico y finalmente se sometió a extracción con cloroformo. Se hizo pasar la capa orgánica y se evaporó bajo nitrógeno gaseoso. Las muestras fueron reconstituidas en el seno de metanol/agua (9:1), con 2 µg/ml de ácido heptadecanoico añadido como patrón interno, y se analizaron por CL/EM/EM. La aptitud para inhibir la conversión de estearoil-CoA en oleoil-CoA, se expresa como una IC50.

Usando el ensayo descrito, el compuesto de Fórmula I inhibió la actividad de SCD1 con una IC50 de 5,8 nM en presencia de sustrato 40 µM (2x Km). Este valor es la media de varios ensayos (N=3)

Ensayo en Adipocitos Humanos

Se piensa que el papel de la SCD1 es similar en los adipocitos y en los sebocitos. La aptitud del compuesto para inhibir la enzima SCD1 en células humanas intactas se determinó usando el ensayo “Human AdipoRed” descrito a continuación. Las células fueron recibidas como pre-adipocitos y luego diferenciadas durante 5 días en un formato de placa de 384 pocillos. El compuesto se añadió en varias concentraciones durante 6 días. La producción de triglicéridos fue determinada luego mediante un único colorante que se une específicamente a los triglicéridos secretados. La aptitud para inhibir la producción de triglicéridos se expresa como una IC50.

Procedimiento operatorio experimental para el Ensayo en Adipocitos Humanos

Pre-adipocitos subcutáneos preservados por frío (Nº de catálogo: PT5001 Suministrador: Cambrex Bio Science) fueron descongelados brevemente en 37ºC y centrifugados a 1000 rpm durante 5 minutos. Los pre-adipocitos fueron resuspendidos en 30 ml de medio de crecimiento (GM, Nº de catálogo: PT-8202, Cambrex Bio Science) y diluidos a una concentración final de 75.000 células/ml. 40 µl de células se depositaron después en placa, en los pocillos de placas de ensayo de poliestireno BD Falcon de 384 pocillos, a la densidad de

3.000 células (40 µl) por pocillo.

Al cabo de 3 días, las células fueron inducidas a diferenciación añadiendo 40 µl de Medio de Diferenciación 2X (DM, Nº de Catálogo: PT-9502 Cambrex Bio Science) a cada pocillo.

Después de una diferenciación de 5 días, las células fueron tratadas con 2 µl del compuesto partiendo de una placa de compuesto de 96 pocillos, por duplicado, por Biomek FX. Después de 6 días de tratamiento con compuesto, las placas de 384 pocillos que contenían adipocitos diferenciados se lavaron dos veces con DPBS y se sometieron a tinción con 1,5 µl de reactivo AdipoRed (Nº de Catálogo: PT-7009, Cambrex Bio Science), durante 15 minutos, a temperatura ambiente. La acumulación de triglicéridos intracelulares se cuantificó luego midiendo la fluorescencia en 572 nm en un lector de microplacas SpectraMax M5.

Usando el ensayo descrito se determinó que el compuesto de la invención tiene una IC50 de 6,8 nM. Este valor es la media de varios ensayos (N=6).

Modelo en Oreja de Hámster

El modelo de oreja de hámster es un modelo validado de animal para ensayar si los compuestos son capaces de modular la función de las glándulas sebáceas y la secreción de sebo. Luderschmidt et al., Arch. Derm. Res. 258, 185-191 (1977). Este modelo usa hámsters Sirios, machos, cuyas orejas contienen glándulas sebáceas. El compuesto de la invención fue examinado en este modelo según el procedimiento operatorio descrito a continuación. En estos estudios, se administra tópicamente a los hámsters dosis dos veces al día, (BID) durante 2 semanas, 5 días por semana (Lunes a Viernes). Cada dosis consistía en 25 µl de vehículo testigo o artículo de ensayo formulado, que se aplicó uniformemente a � 3 cm2 de las superficies ventrales de ambas orejas, la derecha y la izquierda. Después de sacrificar, se tomaron porciones de la piel para efectuar el análisis de lípidos, histología y concentraciones en la piel del compuesto de ensayo.

Modelo de animal para determinar la Inhibición de la producción de sebo

Hámsters Sirios, machos, de 9 a 10 semanas de edad fueron introducidos en el medio ambiente del laboratorio y aclimatados durante 2 semanas antes de usarlos en el estudio. Cada grupo consistía en 5 animales y se ensayó en paralelo con vehículo y testigos positivos. Antes de la administración, una cantidad suficiente de cada compuesto se disolvió en 1 ml de un disolvente que consistía en etanol, transcutanol y propilenglicol (60/20/20, v/v/v) consiguiendo una concentración final de 3,0% (p/v).

Se administró a los animales tópicamente, dosis dos veces al día, cinco días a la semana, durante 2 semanas. Cada dosis consistía en 25 µl vehículo testigo o de fármaco. Las dosis fueron aplicadas a las superficies ventrales de ambas orejas, derecha e izquierda. Todos los animales fueron sacrificados aproximadamente 18-24 horas después de la dosis final. Se recogieron las orejas derechas de todos los animales y se usaron para realizar el análisis de sebo.

Las orejas fueron preparadas del modo siguiente para su análisis por HPLC: se tomó un fragmento distal de 8 mm, obtenido por biopsia, justamente por encima de la marca “V” anatómica de la oreja, para normalizar la zona de muestra. El fragmento se apartó. La superficie ventral de la biopsia (la zona en donde se aplicó directamente la dosis tópica a las glándulas sebáceas) fue retenida para ensayo y la superficie dorsal del fragmento de la biopsia fue desechado.

Las muestras de tejido fueron insufladas con N2 gaseoso y mantenidas a –80ºC bajo nitrógeno hasta su análisis por HPLC. Además de las muestras de orejas, una parte alícuota de cada fármaco y de vehículo (al menos 250 µl)) se mantuvo también a –80ºC para incluir en el análisis de HPLC.

El análisis de HPLC se llevó a cabo sobre un extracto de la muestra de tejido. Muestras de tejido se pusieron en contacto con 3 ml de disolvente (una mezcla 4:1 de 2,2,4-trimetilpentano y alcohol isopropílico). La mezcla se agitó durante 15 minutos y se mantuvo durante la noche a temperatura ambiente, protegida de la luz. La mañana siguiente se añadió a la muestra 1 mililitro de agua y se agitó durante 15 minutos. La muestra se centrifugó luego a 1500 rpm, aproximadamente, durante 15 minutos. Dos ml de la fase orgánica (capa superior) se pasaron a un vial de vidrio, se secó a 37ºC, bajo nitrógeno, durante 1 hora aproximadamente y después se liofilizó durante 48 horas aproximadamente. Las muestras se sacaron luego del liofilizador y cada vial se reconstituyó con 600 µl de disolvente A (trimetilpentano/tetrahidrofurano (99:1)). Las muestras se taparon de nuevo y se sometieron a agitación con formación de vórtice durante 5 minutos.

200 µl de cada una de las muestras fueron transferidos a un vial de HPLC de 200 µl, previamente marcado, con 200 µl de inserciones de vidrio. Los viales de HPLC se colocaron en la bandeja de muestreo automático de la unidad de HPLC de la serie 1100 de Agilent. El sistema de HPLC Agilent 1100 consistía en un muestreador automático termostatizado, una bomba cuaternaria, un calentador de la columna, y un módulo de interfaz A/D. Todos los componentes estaban regulados por el soporte lógico (software) Agilent ChemStation. Una columna analítica de 4,6x100 mm Spherisorb S3W de Waters, se mantuvo a 30ºC mediante la unidad Agilent de calentamiento de la columna. El muestreador automático de HPLC se programó para mantener la temperatura de la muestra en 20ºC durante toda la operación.

5 10 µl de cada muestra se inyectaron por triplicado en la columna. Se utilizaron dos disolventes para obtener el gradiente de disolventes. El Disolvente A era una mezcla de trimetilpentano y tetrahidrofurano (99:1). El Disolvente B era acetato de etilo, El gradiente utilizado se describe en la tabla que sigue.

10

Tiempo (minutos)

Disolvente A (%) Disolvente B (%) Caudal (ml/min)

0

99 1 2

2

96 4

2

6

60 40 2

7

5 95 2

10

5 95 2

10,1

99 1 2

El Detector Evaporativo de Difusión Luminosa (ELSD) Sedex 75 se hizo operar a 45ºC con una ganancia de 5 y una presión de N2 mantenida en 0,31 15 MPa. La señal analógica obtenida por el instrumento se envió al módulo de interfaz A/D de Agilent donde se convirtió en una salida digital. La conversión se basó en un punto de fijación de 10000 mAU/volt y la velocidad de los datos se fijó en 10Hz (0,03 min). La salida digital resultante se cargó después al software ChemStation de Agilent para la integración del área del pico. Los

20 resultados se indican como la reducción de la producción de ésteres de colesterol (CE) y de ésteres céreos (WE), en comparación con el vehículo testigo. Un valor negativo refleja un aumento de sebo, mientras que un valor positivo refleja una disminución. Usando este ensayo, se determinó que el tratamiento con el compuesto

25 de ensayo (dosificado al 1,5% en un vehículo de propilenglicol/transcutanol/etanol, (20/20/60), p/v) dio por resultado una reducción de 62% de CE y una reducción de 82% de WE, un mecanismo biomarcador de la producción de sebo en el modelo de hámster, y una reducción del tamaño de las glándulas sebáceas. Después se llevó a cabo un experimento de respuesta a la dosis para determinar la ED50 del compuesto. Para este estudio el compuesto de ensayo fue formulado en propilenglicol:etanol (30:70), (p/v) resultando en una disminución dependiente de la dosis de la producción tanto de CE como de WE. También fueron observados histológicamente cambios en relación con la dosis, del tamaño y el número de las glándulas sebáceas. Se determinó que la ED50 basada en la reducción de WE, para el compuesto de Fórmula I, era 0,3% (0,025 mg/cm2) para una aplicación tópica BID de dos semanas.

Claims (8)

1.-El compuesto 2-(4-hidroximetil)fenoxi)-1-(3-(2-trifluorometil)fenoxi)

pirrolidin-1-il)etanona.

2.-El compuesto ( R )-2-(4-(hidroximetil)fenoxi-1-(3-(2-trifluorometil)fe

noxi)pirrolidin-1-il)etanona.

3.-El compuesto de fórmula I

imagen1

10

o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. 4.-Un compuesto según la reivindicación 3, para tratar, mejorar o prevenir un estado seleccionado entre acné, piel aceitosa, cabello aceitoso, piel 15 con brillos, piel de aspecto grasiento, cabello de aspecto grasiento o dermatitis seborreica. 5.-Un compuesto según la reivindicación 3, para inhibir la actividad de la estearoil-CoA desaturasa. 6.-Un compuesto según la reivindicación 3, para inhibir la síntesis de 20 sebo.

7.-Un compuesto según la reivindicación 3, para inhibir la síntesis de ésteres de colesterol y ésteres céreos en las glándulas sebáceas de un mamífero.

8.-El uso de un compuesto según la reivindicación 3, para fabricar un 25 medicamento para tratar o aliviar un estado asociado con la producción excesiva de sebo. 9.-El uso de un compuesto según la reivindicación 3, para fabricar un medicamento para inhibir la síntesis de sebo. 10.-Un compuesto según la reivindicación 3, para el tratamiento o 30 prevención del acné.

11.-Una composición farmacéutica que comprende:

el compuesto (S)-2-(4-(hidroximetil)fenoxi)-1-(3-(2-(trifluorometil)fenoxi)pirrolidin-1-il)etanona, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto; y

5 un portador, vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. 12.-Una composición farmacéutica según la reivindicación 11, que comprende, además, un segundo agente terapéutico . 13.-La composición según las reivindicaciones 11 ó 12, en donde dicha 10 composición es adecuada para aplicar a la piel o al cabello. 14.-La composición según las reivindicaciones 11 ó 12, en donde dicha composición es adecuada para ingestión. 15.-El compuesto (S)-2-(4-(hidroximetil)fenoxi)-1-(3-(2-(trifluorometil)fenoxi)pirrolidin-1-il)etanona, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho

15 compuesto, solo o en combinación con un segundo agente terapéutico, para tratar o aliviar un estado asociado con la produccióon excesiva de sebo en un mamífero.

16.-Un compuesto según la reivindicación 15, en el que el estado está seleccionado entre acné, piel aceitosa, cabello aceitoso, piel con brillos, piel de 20 aspecto grasiento, cabello de aspecto grasiento, o dermatitis seborreíca.

17.-El compuesto (S)-2-(4-(hidroximetil)fenoxi)-1-(3-(2-(trifluorometil)fenoxi)pirrolidin-1-il)etanona, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto, solo o en combinación con un segundo agente terapéutico, para inhibir la actividad de la estearoil-CoA desaturasa en un mamífero.