CN100376595C - 用于产生透明质酸的含有人参皂甙化合物k的促进剂 - Google Patents

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Abstract

提供一种用于产生透明质酸的含有人参皂甙化合物K的促进剂，更具体地，提供人参皂角苷的主要代谢产物20-氧-β-D-吡喃葡萄糖基-20(S)-原人参萜二醇(化合物K)的一种新的功效，即可提高人体细胞中透明质酸合成酶基因的表达从而促进透明质酸的产生，还提供含有用于产生透明质酸的促进剂作为有效成分的抗衰老试剂。

Description

用于产生透明质酸的含有人参皂甙化合物K的促进剂
技术领域
本发明涉及用于产生透明质酸的含有人参皂甙(ginsenoside)化合物K的促进剂。更具体地，本发明提供了人参皂角苷(ginseng saponin)的主要代谢产物20-氧-β-D-吡喃葡萄糖基-20(S)-原人参萜二醇(20-O-β-D-glucopyranosyl-20(S)-protopanaxadiol)(称为“化合物K”)的一种新的功效，即在人体细胞中提高透明质酸合成酶(HAS)基因的表达，从而促进透明质酸(HA)的产生，并且本发明还提供了用于产生透明质酸的含有化合物K的促进剂。
背景技术
透明质酸是一种非硫酸化的粘多糖，是由重复的葡糖醛酸和N-乙酰葡糖胺残基构成的线性多糖，分子量很大，在200,000-400,000之间。透明质酸是胞外基质的主要结构组分，并涉及水分保持、细胞外间隙的维护、细胞生长因子和营养的储存和扩散，以及细胞增殖、分化和迁移。
有报道称，在哺乳动物中50％或更多的透明质酸存在于皮肤中，特别是存在于表皮的细胞外间隙和真皮的结缔组织中，并且由角质细胞和成纤维细胞合成。另外，透明质酸在人体皮肤中的含量随着年龄的增加而减少，这导致皮肤失去弹性并且保水性降低(Biochem Biophys Acta 279，265-275，Carbohydr Res 159，127-136，Int J Dermatol 33，119-122)。
人的关节囊由外面的纤维层和里面的滑膜组成，其中含有透明质酸和糖蛋白的滑液起关节润滑剂的作用。然而，有报道认为，在骨关节炎(退化性关节炎)中，由于产生的透明质酸减少和由蛋白水解酶引起的破坏的加速，因此关节中透明质酸的含量逐渐降低了。因此，随着关节中透明质酸含量的减少，关节不能吸收或分散震动，因此会加速软骨损伤。因此，1997年，FDA提出注射透明质酸作为缓解骨关节炎疼痛的措施，并沿用至今。然而，最终可能还是提高透明质酸的生物合成更有效。
已报道多种生长因子和反式视黄酸、N-甲基丝氨酸等可提高培养的表皮细胞中透明质酸的生物合成(Biochem.J.258，919-922，Biochem.J.283，165-170，Biochem.J.307 817-821，J.Biol.Chem.272，4787-4794，J InvestDermatol 92，326-332，Biol Pharm Bull 17，361-364，Skin Pharmacol Appl SkinPhysiol 12，276-283)。另外，也有报道称将雌二醇及其衍生物施用到皮肤上可提高透明质酸的生物合成(Steroids 16，1-3，J Invest Dermatol 87，668-673，Skin Pharmacol Appl Skin Physiol 15，175-183)。然而，目前还不完全清楚透明质酸代谢的详细机制，仅知道透明质酸是在质膜的内表面由透明质酸合成酶合成的，并在合成的同时透过所述膜分泌到细胞外间隙(J.Biol.Chem.272，13997-14000)。
目前，在哺乳动物细胞中已鉴定了三种不同的HAS基因：HAS1、HAS2和HAS3，它们高度同源。关于这些基因，有报道认为当培养表皮细胞系的培养基中含有表皮生长因子(EGF)时可提高HAS2基因的表达(J.Biol.Chem.276，20428-20435)。然而，到目前为止，对于细胞和组织中透明质酸的分布以及涉及透明质酸的多种因子和酶如调控透明质酸活性的HAS或因子的研究还不够。
因此，几项连续的研究工作已经注意到了透明质酸的可能性，并且进行了大量研究来寻找透明质酸有效的产生和注射方法以及提高透明质酸生物合成的方法。然而，还没有获得明显的结果。
发明内容
在这些情况下，本发明人进行研究来寻找一种在人体中补充透明质酸的有效方法。结果我们发现，人参皂角苷的主要代谢产物化合物K(20-氧-β-D-吡喃葡萄糖基-20(S)-原人参萜二醇)能提高人体细胞中编码透明质酸合成酶的基因的表达并因此可以促进人体内透明质酸的产生，所述人参皂角苷具有提高免疫、抑制肿瘤血管产生以及抑制癌细胞扩散的功效。也就是说，用化合物K治疗可以促进透明质酸的产生，从而提高人体内透明质酸的含量。这个结果表明化合物K可应用于多种利用透明质酸功效的用途，如改善皮肤弹力和避免皮肤干燥或衰老的护肤作用以及治疗或预防骨关节炎的药用作用。本发明就是根据这一发现而完成的。
因此，本发明的目的是提供化合物K的一种新用途，即提高透明质酸合成酶基因的表达并由此促进透明质酸的产生。
本发明的另一个目的是提供用于产生透明质酸的并含有化合物K作为有效成分的促进剂。
本发明的再一个目的是提供化合物K可应用于多种利用透明质酸功效的用途的可能性，如改善皮肤弹力和避免皮肤干燥或衰老的护肤作用以及治疗或预防骨关节炎的药用作用。
为实现这些目的，本发明提供化合物K的一种新的功效，其中已知该化合物具有提高免疫、抑制肿瘤血管产生以及抑制癌细胞扩散的功效。也就是说，本发明提供化合物K的一种新用途即提高透明质酸合成酶基因的表达并由此促进透明质酸的产生。
下面是本发明的详细描述。
化合物K，即由下列分子式1所代表的20-氧-β-D-吡喃葡萄糖基-20(S)-原人参萜二醇，是人参皂角苷通过人体肠道细菌分解的主要代谢产物(Hasegawa，H.，Sung，J.H.，Matsumiya.S.，Uchiyama.M.，(1996)PlantaMedica 62，453-457)。
【分子式1】
Figure C0382571400061
从人参中获得的人参皂甙及其衍生物为达玛烷系列的三萜化合物，具有如下结构：糖如葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖等通过醚键与原人参萜二醇或原人参萜三醇连接。迄今为止，已经从人参(KOREA INSAM)中总共分离出29种人参皂甙。1964年，Shibata将人参皂角苷的成分命名为“人参皂甙”，所述人参皂甙是指在人参中含有的糖苷。根据在薄层层析(TLC)中分离的展开顺序可将人参皂甙分为人参皂甙-Ro和人参皂甙-Ra、-Rb1、-Rb2、-Rc、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3和-Rh，所述人参皂甙-Ro是齐墩果烷皂角苷家系。已知根据连接于糖苷配基上的人参皂角苷的类型、数目或糖的位置，人参皂角苷可显示出不同的药用功效。已开展了许多关于人参中大量存在并容易分离的主要皂角苷的药用功效方面的研究。然而，只开展了少量关于只在红人参中存在的少量皂角苷或通过人肠道细菌分解的皂角苷代谢产物的药用功效方面的研究。
在人参皂角苷中，化合物K，即20-氧-β-D-吡喃葡萄糖基-20(S)-原人参萜二醇，是由一个糖分子(葡萄糖)连接到原人参萜二醇上而组成的。已知化合物K具有抑制癌细胞增殖、抑制肿瘤细胞增殖以及加强抗癌试剂的抗癌活性的药用功效。特别是，对皂角苷代谢产物的大量研究发现人参皂角苷的药用功效是由通过人肠道细菌分解的代谢产物而不是由皂角苷本身产生的(Chem Pharm Bull 38(10)2859-2861，Bio.Pharm.Bull 25(6)743-747)。
本发明人证实在由化合物K处理的人体表皮和真皮细胞系即角质细胞细胞系HaCaT和成纤维细胞系HDF中，HAS2基因表达提高。也就是说，与没有处理的相比，用化合物K处理24小时可以诱导培养的HaCaT细胞和HDF细胞中的HAS2基因表达分别提高3倍和2.5倍。此外，在24小时培养和48小时培养期间，用1μM化合物K处理的HaCaT细胞的HAS2基因表达分别提高大约3倍和大约5倍。这些结果表明化合物K具有促进人体细胞中HAS2基因表达的功效。同时，证实了通过化合物K的处理可以提高人体细胞培养中透明质酸的含量。
另外，本发明人证实在由化合物K处理的无毛小鼠皮肤中透明质酸的产量提高了。当将化合物K加在膜片上并施用到无毛小鼠的背部皮肤上时，表皮和真皮中的透明质酸产量提高大约3倍。这些结果显示化合物K在生物体中有促进HA产生的功效。
最后，本发明人证实了当将含有化合物K的外用组合物施用到人体皮肤上时会改善皱纹、水合作用、弹性、光滑度和亮度。
在本发明中采用的化合物K可以是用常规方法获得的天然化合物K或合成的化合物K，但不限于此。化合物K可通过下述方法获得：将纯化的人参皂角苷溶解在水性溶剂如蒸馏水或缓冲液中，或者溶解在水性溶剂与有机溶剂的混合物中，然后与从青霉菌(Penicillium)中分离的柚苷酶或从曲霉菌(Aspergillus)中分离的果胶酶中的至少一个反应，但并不限制于该方法。
本发明显示化合物K可提高HAS2基因表达并促进透明质酸产生。相应地，化合物K可以作为一种有效组分加入到利用透明质酸功效的护肤外用组合物中。例如，可以将其加入到用于改善皮肤弹力和避免皮肤干燥或衰老的护肤外用组合物中。另外，可以将其添加到通过给药透明质酸来治疗或预防疾病如骨关节炎的药物中。然而，化合物K的应用并不限制于此。
附图说明
图1是HAS2基因的定量RT-PCR结果，用来鉴定用不同浓度化合物K处理后角质细胞细胞系HaCaT(图1a)和成纤维细胞HDF(图1b)中HAS2mRNA的表达；
图2是HAS1、HAS2和HAS3基因的定量RT-PCR结果，用来鉴定用不同浓度化合物K处理后HaCaT细胞中HAS mRNA的表达；
图3显示化合物K对透明质酸在培养的HaCaT和HDF细胞中的分布的影响。在用1μM化合物K处理后，用免疫细胞化学法(immunocytochemicalmethod)证实透明质酸产量的增加，然后对结果进行定量；
图4显示在由化合物K处理的无毛小鼠的背部皮肤中透明质酸产量的增加，通过免疫组织化学染色法证实；
图5显示用含化合物K的外用组合物处理时，人体皮肤形态的变化。
具体实施方式
将通过下列实施例对本发明做进一步描述，这不应该被认为是限制本发明的范围。另外，对本领域技术人员来说，显然可以在本发明的范围内作出各种各样的变更和变化，而不背离本发明的范围。
实施例1化合物K的制备
将10克人参提取物(红人参、白人参以及人参根毛和人参叶)溶解在2升柠檬酸盐缓冲液中(pH 4.0)。再加入10克柚苷酶(Sigma，St.Louis，MO)、10克果胶酶(Novozyme，Copenhagen，Denmark)，然后将得到的混合物置于38℃水浴中培养48小时。酶促水解完成后，将反应混合物用2升醋酸乙酯进行萃取，然后在真空条件下干燥，获得2.8克残余物质。为了纯化化合物K，对获得的产物进行硅胶柱层析，先用氯仿-甲醇(9∶1)洗脱，然后再用氯仿-甲醇(6∶1)洗脱，获得0.28克纯的化合物K。
实验性实施例1化合物K对人体表皮细胞系HaCaT中HAS2基因表达 的效果
<细胞培养>
自主无限增殖化人体角质细胞系HaCaT由N.E.Fusenig博士(DeutschesKerbsforschungszentrum(DKFZ)，Heidelberg，Germany)提供，人体二倍体成纤维细胞系HDF由S.C.Park博士(Seoul National University，Seoul，Korea)提供。
将细胞培养在DMEM培养基(Dulbecco’s modified Eagle’s medium)中，其中该培养基中添加了10％胎牛血清(HyClone)、碳酸氢钠(3.6克/升)以及抗生素链霉素(100微克/毫升)和青霉素(100单位/毫升)(LifeTechnologies，Inc.)，培养条件为37℃、含5％CO2和95％空气的湿润气体中。每3天更换一次新鲜培养基。在达到最大的细胞密度时，细胞以1∶5的分裂比例重新培养。在用化合物K处理之前48小时，将细胞接种到组织培养瓶中，每75平方厘米含1×105个细胞，然后在含10％胎牛血清的培养基中培养24小时。接着，在无血清培养基中再培养24小时，然后在添加了1-5μM化合物K的新鲜无血清培养基中培养3、6、12、24或48小时。作为对照，细胞在添加了0.01％赋形剂(vehicle)(二甲亚砜，DMSO)的培养基中培养。在对照中，没有观察到DMSO对细胞生长和分化的影响。
<RNA的制备>
将HaCaT细胞和HDF细胞用磷酸盐缓冲液(PBS)(Life Technologies，Inc.)洗涤2次，并根据操作指南用TRIzol试剂(GibcoBRL Life Technologies，Grand Island，NY)分离全部的细胞RNA。用分光光度计测定RNA浓度，用琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性。
<用定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法证实化合物K对HAS1、HAS2和HAS3 mRNA合成的影响>
将定量好的全部RNA进行反转录，然后用HAS1、HAS2和HAS3特异性引物进行RT-PCR。简要地说，在25微升反应混合物中对4微克的全部RNA进行反转录，其中所述反应混合物中含有2.5单位/微升Superscrit II反转录酶(Invitrogen，Carlsbad，CA)、1单位/微升核糖核酸酶(RNase)抑制剂、5mM MgCl2、50mM KCl、10mM Tris-HCl(pH 8.3)、2.5μM寡聚(dT)(oligo(dT))引物和1mM脱氧核糖核苷酸(dNTP)。反应混合物在42℃下温和培养60分钟来进行反转录。然后，通过在85℃加热5分钟使反转录酶失活。
接着，用5微升得到的混合物进行PCR反应。使用Perkin-Elmer Cycler9600(Perkin-Elmer Applied Biosystems，Foster，CA)，在50微升反应混合物中进行每个PCR反应，其中所述的反应混合物含有0.04单位/微升AmpliTaqTMDNA聚合酶(Perkin Elmer，Shelton，Connecticut)、50mM Tris(pH 8.3)、0.25毫克/毫升BSA、3mM MgCl2、0.25mM dNTP以及0.25μM正向或反向PCR引物(表1)，PCR温度形式包括在起始循环之前95℃变性5分钟，然后95℃45秒、60℃45秒、72℃1分钟循环25-35次。PCR产物通过琼脂糖凝胶进行电泳，并用溴化乙锭染色来显现出来。结果显示在图1和图2中。GAPDH是用于标定扩增产物的标准。
表1  用于定量RT-PCR的HAS1、HAS2和HAS3特异性引物的序列
  引物     序列
HAS1 正向 5′-ACCATCGCCTTCGCCCTGCTCATCC-3′
反向 5′-CCCGCTCCACATTGAAGGCTACCCA-3′
HAS2 正向 5′-TTTCTTTATGTGACTCATCTGTCTCACCGG-3′
反向 5′-ATTGTTGGCTACCAGTTTATCCAAAGGG-3′
HAS3 正向 5′-CAGAAGGCTGGACATATAGAGGAGGG-3′
反向 5′-ATTGTTGGCTACCAGTTTATCCAAACG-3′
图1是HAS2基因的定量RT-PCR结果，用于鉴定用不同浓度化合物K处理后角质细胞细胞系HaCaT(图1a)和成纤维细胞HDF(图1b)中HAS2mRNA的表达，并显示出化合物K对HAS2 mRNA水平的影响。在该实验中，在对照中检测到少量的HAS2 mRNA，但在由化合物K处理的HaCaT细胞和HDF细胞中HAS2 mRNA分别提高了3倍和2.5倍。
图2显示化合物K对HaCaT细胞中HAS1、HAS2和HAS3转录的影响。HaCaT细胞在含0μM或1μM化合物K的培养基中培养24小时或48小时，然后从中提取全部RNA。将全部RNA进行反转录并通过循环30次PCR进行扩增。结果，用化合物K处理的HaCaT细胞的HAS2转录在24小时和48小时培养期间分别提高3倍和5倍。然而，化合物K对检测到的少量的HAS1和HAS3 mRNA的水平没有影响。
实验性实施例2化合物K对人体表皮细胞系和真皮细胞系中透明质酸 产生的影响
将HaCaT和HDF细胞用PBS清洗，然后在室温下用含有2％低聚甲醛(体积/体积)和0.5％戊二醛(体积/体积)的固定液(fixative)固定20分钟。固定后，上述细胞用0.1M磷酸钠缓冲液(pH 7.4)洗三次，每次2分钟，然后在室温下用含有1％牛血清清蛋白(重量/体积)的所述相同缓冲液封闭30分钟，所述牛血清清蛋白含有0.1％Triton X-100(体积/体积)。用生物素化的透明质酸结合蛋白(bHABP)(Seikagaku，Tokyo，Japan)的特异性探针进行透明质酸染色。bHABP探针在3％牛血清清蛋白(重量/体积)中稀释到5微克/毫升，然后加到固定的细胞中，并在4℃下培养过夜。清洗后，加入抗生物素蛋白-异硫氰酸荧光素(FITC)。图像用荧光显微镜分析，并在图3中显示。
图3显示化合物K对透明质酸在培养的HaCaT和HDF细胞中的分布的影响。在用1μM化合物K处理(图3b，图3d)或不用化合物K处理(图3a，图3c)时培养HaCaT细胞(图3a，图3b)和HDF细胞(图3c，图3d)。
实验性实施例3化合物K对无毛小鼠皮肤中透明质酸产量的影响
<无毛小鼠及其处理>
从Biogenomics(Seoul，Korea)购买30周大的雄性白化Hos：hr-1小鼠，对常规的啮齿类饲料和水没有限制。在控制条件(24±2℃和55±10％湿度)下，适应1周后，将200毫升在赋形剂(1，3-BG∶乙醇＝7∶3)中的1％(w/v)化合物K溶液施用于小鼠背部，2天施用2次。在最后给药后24小时收集每个皮肤样品。
<在由化合物K处理的皮肤上用透明质酸结合蛋白进行免疫组织化学染色>
用bHABP(Seikagaku)进行透明质酸染色。每个皮肤样品用含2％低聚甲醛和0.5％戊二醛的PBS固定，并包埋、切片。去除石蜡之后，将切片在含0.3％H2O2的甲醇中室温培养30分钟，用PBS清洗，然后在1％牛血清清蛋白中封闭。接着，将切片在含5毫克/毫升bHABP的PBS中于4℃培养，清洗后，用以1/300稀释于PBS中的链霉亲和素-过氧化物酶室温培养30分钟。清洗后，每个载玻片用3，3′-二氨基联苯胺(DAB)四盐酸盐在室温下处理5分钟。用蒸馏水清洗后，用Mayer苏木精(Mayer’s hematoxylin)进行染色。
<对免疫组织化学染色方法获得的图像和数据进行分析>
用ImagePro-Plus(Media Cybernetics，Silver Spring，MD)通过数字图像分析对染过色的载玻片进行定量表征。使用安装了缩微图象摄影机(MicroImage Video Camera)(Boyertown，PA)的Olympus BH-2显微镜来采集图像。从几个载玻片的10个随机图像系列收集参数，如总面积、总染色面积和染色强度，由此获得用于统计比较的平均值。用下列方程式1来确定染色数值。
【方程式1】
染色强度X(总染色面积/总面积)
用SigmaStat(SPSS Inc.，Chicago，IL)进行事后Duncan检验(post-hogDuncan test)的单向方差分析(one-way ANOVA)。数据用平均值±SEM表示。显著性为p＜0.05。
图4显示透明质酸大量沉积在表皮和真皮中，表明透明质酸在由化合物K处理的无毛小鼠皮肤中大量增加。如图4a和图4b中所示，增加的透明质酸主要在用化合物K处理的细胞间真皮乳突层以及小鼠皮肤的活表皮中。图4c是定量图像分析的结果，显示与未被处理的皮肤相比，化合物K处理的小鼠皮肤的表皮和真皮中HA的量分别提高3倍。(p＜0.05)。
上述结果证实用化合物K处理皮肤细胞可提高透明质酸合成酶HAS2基因的表达，从而促进皮肤表皮和真皮中透明质酸的产生。
实验性实施例4护肤功效的评价
<外敷>
为评价含化合物K的美容组合物的功效，对有面部皱纹和细小皱纹(finewrinkle)的49位年龄在31到37岁的健康韩国女性进行临床实验。根据皮肤类型将她们分为三组：正常皮肤、干性皮肤和混合型皮肤，并对她们施用含0.03％化合物K或不含化合物K的两种油-水乳剂。在实验前，用globalphotodamage score对每个志愿者进行面部皱纹和细小皱纹的评价。获得使用前和使用后4周、8周和12周的数值。每个志愿者每天在家在面部皮肤上施用测试样品两次(早上和晚上)，特别是在眼部周围的皱纹上。
<效果评价>
由志愿者和皮肤专业检查员对护肤功效如面部皱纹、细小皱纹、水合、弹性、光滑度、粗糙度和亮度进行评价。用Camscope(DCS-105型)通过光度测定法以及用Skin-Visiometer SV600(Courage&Khazaka，Germany)通过硅复制品的图像分析来确定使用外用样品前后的差别和改善情况。
图5显示由皮肤专业检查员使用global photodamage score的评价结果。将使用前测量的起始数值和使用含或不含化合物K的乳剂12周后测量的数值进行比较，发现化合物K使得面部皱纹和细小皱纹在统计学上显著减少(图5a)。在临床实验中，76％的志愿者使用8周后和92％的志愿者使用12周后给出了正面和肯定的评价(图5b)。
在皮肤复形分析中，发现在使用8周后整体皱纹在统计学上显著地减少。92％的志愿者回答说皮肤光滑度有改善；68％的志愿者回答说皮肤亮度有改善；68％回答说皮肤弹性有改善；94％回答说皮肤粗糙度有改善。88％的志愿者回答说皮肤的保湿能力提高了。
工业适用性
如上所述，人参皂角苷的主要代谢产物化合物K能提高编码透明质酸合成酶2的基因的表达，由此激活生物体中透明质酸的产生。因此，化合物K能用于有效避免皮肤弹性降低、水分保持降低和皮肤衰老。另外，它可利用透明质酸的治疗价值来有效地预防和治疗骨关节炎。
序列表
<110>株式会社太平洋
<120>用于产生透明质酸的合有人参皂甙化合物K的促进剂
<l30>I5075YOL
<150>KR10-2004-0084036
<151>2002-12-26
<160>6
<170>PatentIn 3.1
<210>1
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>用于扩增HAS1基因的PCR扩增引物
<400>1
accatcgcct tcgccctgct catcc         25
<210>2
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>用于扩增HAS1基因的PCR扩增引物
<400>2
cccgctccac attgaaggct accca         25
<210>3
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>用于扩增HAS2基因的PCR扩增引物
<400>3
tttctttatg tgactcatct gtctcaccgg    30
<210>4
<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>用于扩增HAS2基因的PCR扩增引物
<400>4
attgttggct accagtttat ccaaaggg      28
<210>5
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>用于扩增HAS3基因的PCR扩增引物
<400>5
cagaaggctg gacatataga ggaggg        26
<210>6
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>用于扩增HAS3基因的PCR扩增引物
<400>6
attgttggct accagtttat ccaaacg       27

Claims (4)

1.分子式1所表示的20-氧-β-D-吡喃葡萄糖基-20(S)-原人参萜二醇的用途，其中，所述20-氧-β-D-吡喃葡萄糖基-20(S)-原人参萜二醇作为有效成分，用于制备促进产生透明质酸的促进剂
Figure C038257140002C1
【分子式1】
Figure C038257140002C2
2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述20-氧-β-D-吡喃葡萄糖基-20(S)-原人参萜二醇通过提高透明质酸合成酶基因的表达来促进透明质酸的产生。
3.根据权利要求1所述的用途，其中，所述促进剂用作抗骨关节炎试剂。
4.根据权利要求1所述的用途，其中，所述促进剂用作抗衰老试剂。
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