CN100366238C - 一种注射用多烯磷脂酰胆碱冻干粉针剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种多烯磷脂酰胆碱冻干粉针剂及其制备方法，其特征是该制剂含有多烯磷脂酰胆碱和增溶剂，增溶剂是脱/去氧胆酸钠、脱/去氢胆酸钠、胆酸钠中的一种，增溶剂与多烯磷脂酰胆碱的重量比为0.5～1.5∶1。

Description

一种注射用多烯磷脂酰胆碱冻干粉针剂及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体地说涉及一种注射用多烯磷脂酰胆碱冻干粉针剂及其制备方法。

技术背景

多烯磷脂酰胆碱(Polyene Phosphatidyl choline)是卵磷脂的甘油三酯骨架上不饱和脂肪酸键含有花生四烯酸(AA)和二十二碳六烯酸(DHA)的磷脂酰胆碱，为一种人体内不能合成的必需磷脂，含有大量的不饱和脂肪酸(主要为亚油酸、亚麻酸和油酸等)。其对肝脏有很好的保护作用以及对受损的肝细胞有修复再生作用，是一种肝细胞膜保护剂，能治疗多种肝脏疾病：如肝炎、慢性肝炎、肝坏死、肝硬化、肝昏迷(包括前驱肝昏迷)、脂肪肝(也见于糖尿病人)等，此药为目前疗效最为肯定的一个保肝药物。此外其还可用于治疗胆汁阻塞、中毒；预防胆结石复发；手术前后的治疗，尤其是肝胆手术、妊娠中毒。

目前多烯磷脂酰胆碱有胶囊等口服剂型，服用方便但起效慢，口服6小时后血药浓度才能达到峰值，不能满足急重患者的需求。公开号为CN1602878A的中国专利公开了一种多烯磷脂酰胆碱注射液的制备方法，其注射液中加入了大量的胆酸类增溶剂和防腐剂苯甲醇，使得此产品禁用于新生儿和早产儿，且易使患者发生过敏反应。另一方面多烯磷脂酰胆碱注射液稳定性差，贮藏温度必须低于8℃，给药品贮存、运输，给药等带来不便，也带来了用药安全的隐患。因此，临床迫切需要一种质量低或无过敏反应、质量稳定可靠、给药安全、使用方便且起效快的多烯磷脂酰胆碱注射制剂。

发明内容

本发明的目的在于提供多烯磷脂酰胆碱冻干粉针剂及其制备方法。

本发明的另一个目的在于提供多烯磷脂酰胆碱冻干粉针剂在治疗肝脏疾病：如肝炎、慢性肝炎、肝坏死、肝硬化、肝昏迷、脂肪肝中的用途。

在溶液配制过程中，我们着重对增溶剂的选择和增溶剂的用量做了研究。因多烯磷脂酰胆碱不易溶于水，需加入增溶剂，我们尝试了多种增溶剂，包括：去氧胆酸钠、去氢胆酸钠、胆酸钠、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、泊洛沙姆188、山梨酯类等可用于静脉注射的增溶剂。实验结果表明：胆酸类增溶剂的增溶效果最好。

由于增溶剂用量太大会产生刺激性等不良反应，且随着增溶剂量的增加，给冻干工艺带来困难，为控制冻干制剂中固体添加物的量以及保证用药安全，通过实验得到在保证冻干前溶液配制过程中多烯磷脂酰胆碱充分溶解的前提下，所添加的增溶剂与多烯磷脂酰胆碱的重量比为0.5～2.5∶1，但在随后的动物实验中我们进一步发现，增溶剂用量过大可能会产生刺激、过敏等问题。我们分别用增溶剂与多烯磷脂酰胆碱重量比为0.5、1.5、2.0、2.5的溶液，按照药品审评中心《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究指导原则》(2005年3月19-21页)进行过敏性试验、局部刺激性、血管刺激性和溶血性试验，其中我们选用了去氧胆酸钠、去氢胆酸钠、胆酸钠这三个增溶效果较好的增溶剂，结果表明增溶剂与多烯磷脂酰胆碱重量比为0.5、1.5时为阴性，当增溶剂与多烯磷脂酰胆碱的重量比超过1.5∶1时，会有明显的过敏反应，因此合适的增溶剂与多烯磷脂酰胆碱的重量比为0.5～1.5∶1。另外增溶剂水溶液有一定的粘度，其用量的增加会给冻干过程带来困难，且冻干制剂中固体添加物的量需要控制，还有增溶剂用量尽量要少但溶解这一步不能太慢，结合这几方面的考虑，优选的增溶剂与多烯磷脂酰胆碱的重量比为0.7～1.2∶1。

另外，在添加了增溶剂后，溶液粘性变大，对冻干过程不利，影响冻干产品的外观，为克服冻干过程存在的困难，保证冻干制品的外观和质量，可以进一步加入冻干赋形剂。所用的冻干赋形剂为甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖、水解明胶、海藻糖、葡聚糖、右旋糖酐、甘氨酸、甘氨酸钠、丙氨酸、白蛋白、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、山梨醇、麦芽糖、环糊精、枸橼酸、枸橼酸钠的一种或一种以上的混合物。通过对比实验发现，其中甘露醇、葡萄糖、乳糖、水解明胶、蔗糖作为赋形剂能够得到白色疏松、均匀一致、整体性好、含水量低、复水性好的冻干粉，因此冻干赋形剂优选甘露醇、葡萄糖、乳糖、水解明胶、蔗糖中的一种或一种以上的混合物。冻干赋形剂与多烯磷脂酰胆碱的重量比为0.1～4∶1，优选的冻干赋形剂与多烯磷脂酰胆碱的重量比为0.3～2∶1。

本发明的注射用多烯磷脂酰胆碱冻干粉针剂由溶液配制、去除热原、分装和冻干四个基本步骤制备而成。

1)溶液配制：取最终制备量3/5～9/10体积的注射用水，在氮气保护下加入多烯磷脂酰胆碱、增溶剂，充分搅拌使其完全溶解；

2)去除热原：在氮气保护下加入上述溶液体积0.05％0.3％的活性炭，搅拌15～30分钟，过滤脱炭，再补加注射用水至足量，用0.22微米微孔滤膜或G₆垂熔玻璃滤器滤过，取滤液为中间体；

3)分装：中间体经检查合格后，在氮气保护下分装于西林瓶中，半压盖；

4)冻干：分装半压盖完毕后进入冻干箱开始预冻，预冻方法包括慢冻法和速冻法，预冻温度低于中间体共晶点5～10℃以下，冻结完全后开启冷凝器制冷，冷凝器温度降至-40℃以下时，开启真空泵，真空度迅速降低到10Pa左右，升华开始，对搁板加热，控制加热速度为2～5℃/h，当制品温度达到中间体共晶点以下5～10℃时，停止对搁板加热而保温升华，直至观察到制品冰层消失且箱内压力恢复时开始加热进入再干燥阶段，控制加热速度为4～10℃/h，加热至制品所允许的最高温度40℃时不再加热而保温干燥，干燥至各层搁板和制品的温度趋于一致后，再保温干燥3～6小时，最终做压力升高试验判断干燥终点，干燥完毕后，通入干燥高纯氮气，箱内压塞，出箱，锁铝盖；以上制备过程中从膜滤或G₆垂熔玻璃滤器过滤到分装和冻干全无菌操作。

实验证明活性炭对多烯磷脂酰胆碱没有吸附，将多烯磷脂酰胆碱和辅料一起进行活性炭处理简化了工艺步骤，同时也完全能保证最终制品热源或细菌内毒素符合要求。

本发明的注射用多烯磷脂酰胆碱冻干粉为白色或类白色块状物，色泽均匀一致。对其进行酸碱度检查、溶液澄清度与颜色检查、可见异物检查、不溶性微粒检查、无菌检查、细菌内毒素检查，结果均符合中国药典2005版的规定。

对本发明的注射用多烯磷脂酰胆碱冻干粉进行了稳定性考察：将其分别置于光照强度为45001x±5001x的照射条件下和高温40℃条件下，于第5天和第10天取样，按稳定性重点考察项目进行检测。与0天相比较，各项指标均未发生明显变化，表明本发明的注射用多烯磷脂酰胆碱冻干粉针剂具有良好的稳定性。

我们对本发明的注射用多烯磷脂酰胆碱冻干粉针剂进行了初步的动物实验，结果证明其对肝脏疾病，如肝炎、慢性肝炎、肝坏死、肝硬化、肝昏迷、脂肪肝具有良好的效果。

令人惊奇的是我们使用了三种胆酸类增溶剂去氧胆酸钠、去氢胆酸钠、胆酸钠制备的样品进行了对比实验，加入了去氧胆酸钠样品相比于使用其它胆酸类增溶剂的试样和普通注射剂型具有更加良好的疗效，这表明去氧胆酸钠与多烯磷脂酰胆碱产生保肝协同作用，因此更适合于多烯磷脂酰胆碱注射剂的制备。

本发明的多烯磷脂酰胆碱冻干粉针剂在制备过程中使用无菌低温操作，避免了高温灭菌对活性成分造成的破坏；不加入苯甲醇及其它易引起过敏的添加剂，提高了用药的安全性；其加入的胆酸类增溶剂不仅改善了多烯磷脂酰胆碱的溶解性更增强了多烯磷脂酰胆碱的药物活性，其在优选的用量条件下不仅保证了良好的增溶效果更将可能的过敏反应等副作用减至最低；克服了普通注射剂型中活性成分稳定性差的技术问题，无需低温贮藏，得到了在安全性、质量稳定性和药用活性方面与现有技术相比有显著提高的注射用多烯磷脂酰胆碱冻干粉针剂。

具体实施方式

下面以本发明的实施例为基础详细说明本发明，但本发明不局限于此。

实施例1：

制剂配方：

配方	每瓶(g)	1000瓶(g)
			多烯磷脂酰胆碱	0.2325	232.5
去氧胆酸钠	0.1628	162.8
			注射用水加至	4ml	4000ml

单次制备1000瓶的制备方法如下：

1)溶液配制(在氮气保护下完成)

将多烯磷脂酰胆碱和去氧胆酸钠加入到最终制备量4/5注射用水中，并充分搅拌至溶解分散均匀。

2)去除热原(在氮气保护下完成)

加入3.5g活性炭搅拌15分钟，用抽滤漏斗铺两层滤纸过滤脱炭。取滤液补加注射用水至足量，过0.22μm滤膜，得中间体。

3)分装(在氮气保护下完成)

中间体经检查合格后，根据中间体含量分装于西林瓶中，半压盖。

4)冻干

测取中间体的共晶点为-25℃。分装半压盖完毕后，进箱冻干。预冻温度-35℃，达到预冻温度后维持2.5小时，完全冻结。开启冷凝器制冷，冷凝器温度降至-40℃以下时，开启真空泵，真空度迅速降低到10Pa左右。升华开始，对搁板加热升温，升温速率为2℃/小时，搁板升温至-15℃保温升华。随着固体冰升华进行，箱内压力上升，样品水层逐渐降低。待样品水层消失，压力恢复，升华阶段基本结束。进入再干燥阶段，对搁板加热，以8℃/小时的升温速率升温至样品允许最高温度40℃，保温干燥，当各层搁板、样品温度基本上一致时，再保温干燥4小时，做压力升高试验判断干燥终点，终点达到后，结束整个干燥过程。通入干燥高纯氮气，箱内压塞。停机出箱。锁铝盖。

实施例2：

制剂配方：

配方	每瓶(g)	1000瓶(g)
			多烯磷脂酰胆碱	0.2325	232.5
去氧胆酸钠	0.1163	116.3
			乳糖	0.465	465
注射用水加至	4ml	4000ml

单次制备1000瓶的制备方法如下：

1)溶液配制(在氮气保护下完成)

将多烯磷脂酰胆碱、去氧胆酸钠和乳糖加入到最终制备量7/10注射用水中，并充分搅拌至溶解分散均匀。

2)去除热原(在氮气保护下完成)

加入4g活性炭搅拌20分钟，用抽滤漏斗铺两层滤纸过滤脱炭。取滤液补加注射用水至足量，过0.22μm滤膜，得中间体。

3)分装(在氮气保护下完成)

中间体经检查合格后，根据中间体含量分装于西林瓶中，半压盖。

4)冻干

测取中间体的共晶点为-28℃。冻干过程同实施例1，主要冻干工艺参数为：预冻温度-40℃，预冻达温后维持时间2.5h，升华阶段冷凝器温度-50℃，真空度5-10Pa，搁板温度上限-18℃，升温速率3℃/h。再干燥阶段搁板温度上限40℃，升温速率6℃/h。保温干燥3小时。

实施例3：

制剂配方：

配方	每瓶(g)	1000瓶(g)
			多烯磷脂酰胆碱	0.2325	232.5
胆酸钠	0.2790	279.0
			葡萄糖	0.070	70
注射用水加至	4ml	4000ml

单次制备1000瓶的制备方法如下：

1)溶液配制(在氮气保护下完成)

将多烯磷脂酰胆碱、胆酸钠和葡萄糖加入到最终制备量3/5注射用水中，并充分搅拌至溶解分散均匀。

2)去除热原(在氮气保护下完成)

加入7.2g活性炭搅拌30分钟，用抽滤漏斗铺两层滤纸过滤脱炭。取滤液补加注射用水至足量，用G₆垂熔玻璃滤器过滤，得中间体。

3)分装(在氮气保护下完成)

中间体经检查合格后，根据中间体含量分装于西林瓶中，半压盖。

4)冻干：

测取中间体的共晶点为-31℃。冻干过程同实施例1，主要冻干工艺参数为：预冻温度-40℃，预冻达温后维持时间2.5h，升华阶段冷凝器温度-50℃，真空度5-10Pa，搁板温度上限-21℃，升温速率5℃/h。再干燥阶段搁板温度上限40℃，升温速率8℃/h。保温干燥5小时。

实施例4：

制剂配方：

配方	每瓶(g)	1000瓶(g)
			多烯磷脂酰胆碱	0.2325	232.5
去氢胆酸钠	0.1628	162.8
			甘露醇	0.160	160
注射用水加至	3.5ml	3500ml

单次制备1000瓶的制备方法如下：

1)溶液配制(在氮气保护下完成)

将多烯磷脂酰胆碱、去氢胆酸钠和甘露醇加入到最终制备量3/4注射用水中，并充分搅拌至溶解分散均匀。

2)去除热原(在氮气保护下完成)

加入3g活性炭搅拌20分钟，用抽滤漏斗铺两层滤纸过滤脱炭。取滤液补加注射用水至足量，过0.22μm滤膜，得中间体。

3)分装(在氮气保护下完成)

中间体经检查合格后，根据中间体含量分装于西林瓶中，半压盖。

4)冻干

测取中间体的共晶点为-19℃。冻干过程同实施例1，主要冻干工艺参数为：预冻温度-30℃，预冻达温后维持时间2h，升华阶段冷凝器温度-50℃，真空度5-10Pa，搁板温度上限-10℃，升温速率3℃/h。再干燥阶段搁板温度上限40℃，升温速率6℃/h。保温干燥4小时。

实施例5：

制剂配方：

配方	每瓶(g)	1000瓶(g)
			多烯磷脂酰胆碱	0.2325	232.5
去氧胆酸钠	0.140	140
			蔗糖	0.930	930

注射用水加至

4ml

4000ml

单次制备1000瓶的制备方法如下：

1)溶液配制(在氮气保护下完成)

将多烯磷脂酰胆碱、去氧胆酸钠和蔗糖加入到最终制备量3/4注射用水中，并充分搅拌至溶解分散均匀。

2)去除热原(在氮气保护下完成)

加入6g活性搅拌25分钟，用抽滤漏斗铺两层滤纸过滤脱炭。取滤液补加注射用水至足量，过0.22μm滤膜，得中间体。

3)分装(在氮气保护下完成)

中间体经检查合格后，根据中间体含量分装于西林瓶中，半压盖。

4)冻干

测取中间体的共晶点为-22℃。冻干过程同实施例1，主要冻干工艺参数为：预冻温度-35℃，预冻达温后维持时间2h，升华阶段冷凝器温度-50℃，真空度5-10Pa，搁板温度上限-12℃，升温速率2℃/h。再干燥阶段搁板温度上限40℃，升温速率4℃/h。保温干燥3小时。

实施例6：

制剂配方：

配方	每瓶(g)	1000瓶(g)
			多烯磷脂酰胆碱	0.2325	232.5
胆酸钠	0.300	300
			乳糖	0.100	100
甘露醇	0.200	200
			注射用水加至	4ml	4000ml

单次制备1000瓶的制备方法如下：

1)溶液配制(在氮气保护下完成)

将多烯磷脂酰胆碱、胆酸钠、乳糖和甘露醇加入到最终制备量4/5注射用水中，并充分搅拌至溶解分散均匀。

2)去除热原(在氮气保护下完成)

加入3g活性炭搅拌20分钟，用抽滤漏斗铺两层滤纸过滤脱炭。取滤液补加注射用水至足量，过0.22μm滤膜，得中间体。

3)分装(在氮气保护下完成)

中间体经检查合格后，根据中间体含量分装于西林瓶中，半压盖。

4)冻干

测取中间体的共晶点为-24℃。冻干过程同实施例1，主要冻干工艺参数为：预冻温度-35℃，预冻达温后维持时间2h，升华阶段冷凝器温度-50℃，真空度5-10Pa，搁板温度上限-14℃，升温速率4℃/h。再干燥阶段搁板温度上限40℃，升温速率8℃/h。保温干燥5小时。

实施例7：

制剂配方：

配方	每瓶(g)	1000瓶(g)
			多烯磷脂酰胆碱	0.2325	232.5
去氧胆酸钠	0.200	200
			水解明胶	0.100	100
甘露醇	0.200	200
			乳糖	0.100	100
注射用水加至	3.5ml	3500ml

制备方法如下：

1)溶液配制(在氮气保护下完成)

将多烯磷脂酰胆碱、去氧胆酸钠、水解明胶、甘露醇和乳糖加入到最终制备量9/10注射用水中，并充分搅拌至溶解分散均匀。

2)去除热原(在氮气保护下完成)

加入6g活性炭搅拌20分钟，用抽滤漏斗铺两层滤纸过滤脱炭。取滤液补加注射用水至足量，过0.22μm滤膜，得中间体。

3)分装(在氮气保护下完成)

中间体经检查合格后，根据中间体含量分装于西林瓶中，半压盖。

4)冻干

测取中间体的共晶点为-21℃。冻干过程同实施例1，主要冻干工艺参数为：预冻温度-35℃，预冻达温后维持时间2h，升华阶段冷凝器温度-50℃，真空度5-10Pa，搁板温度上限-11℃，升温速率3℃/h。再干燥阶段搁板温度上限40℃，升温速率10℃/h。保温干燥5小时。

实施例8：

制剂配方：

配方	每瓶(g)	1000瓶(g)
			多烯磷脂酰胆碱	0.2325	232.5
去氢胆酸钠	0.2500	250
			磷酸二氢钠	0.0232	23.2
注射用水加至	4ml	4000ml

单次制备1000瓶的制备方法如下：

1)溶液配制(在氮气保护下完成)

将多烯磷脂酰胆碱、去氢胆酸钠和磷酸二氢钠加入到最终制备量3/4注射用水中，并充分搅拌至溶解分散均匀。

2)去除热原(在氮气保护下完成)

加入1.5g活性炭搅拌15分钟，用抽滤漏斗铺两层滤纸过滤脱炭。取滤液补加注射用水至足量，过0.22μm滤膜，得中间体。

3)分装(在氮气保护下完成)

中间体经检查合格后，根据中间体含量分装于西林瓶中，半压盖。

4)冻干

测取中间体的共晶点为-22℃。冻干过程同实施例1，主要冻干工艺参数为：预冻温度-35℃，预冻达温后维持时间2h，升华阶段冷凝器温度-50℃，真空度5-10Pa，搁板温度上限-12℃，升温速率4℃/h。再干燥阶段搁板温度上限40℃，升温速率5℃/h。保温干燥4小时。

实施例9：

制剂配方：

配方	每瓶(g)	1000瓶(g)
			多烯磷脂酰胆碱	0.2325	232.5
胆酸钠	0.2200	220
			磷酸氢二钠	0.0920	92
磷酸二氢钠	0.0080	8
			注射用水加至	3.5ml	3500ml

单次制备1000瓶的制备方法如下：

1)溶液配制(在氮气保护下完成)

将多烯磷脂酰胆碱、胆酸钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠加入到最终制备量4/5注射用水中，并充分搅拌至溶解分散均匀。

2)去除热原(在氮气保护下完成)

加入6g活性炭搅拌20分钟，用抽滤漏斗铺两层滤纸过滤脱炭。取滤液补加注射用水至足量，过0.22μm滤膜，得中间体。

3)分装(在氮气保护下完成)

中间体经检查合格后，根据中间体含量分装于西林瓶中，半压盖。

4)冻干

测取中间体的共晶点为-21℃。冻干过程同实施例1，主要冻干工艺参数为：预冻温度-35℃，预冻达温后维持时间2h，升华阶段冷凝器温度-50℃，真空度5-10Pa，搁板温度上限-11℃，升温速率3℃/h。再干燥阶段搁板温度上限40℃，升温速率8℃/h。保温干燥5小时。

实施例10：

去氧胆酸钠的安全性实验

一、过敏性试验：

1、试验材料

(1)受试物：分别用增溶剂与多烯磷脂酰胆碱重量比为0.5、1.5、2.0、2.5的去氧胆酸钠配制溶液(无菌操作)，溶液标号分别为①、②、③、④。试验时，取溶液5ml，加入5％葡萄糖注射液稀释4倍成11.625mg/ml液，作为受试物低剂量组，取溶液5ml，作为受试物高剂量组。

(2)阴性对照物：5％葡萄糖注射液，批号：0503111，由南京正大天晴制药有限公司提供。阳性对照物：牛血清白蛋白，批号：140619-200415，由中国药品生物制品检定所提供。试验时用5％葡萄糖注射液配成15mg/ml的溶液。

(3)动物：健康豚鼠96，体300～400g，雌雄各半，由南京新学人科技开发有限公司提供，动物合格证编号：苏动质SCXK(苏)2002-00028。

2、试验方法

对于每一个样品溶液，分别取豚鼠12只，随机分成2组，每组6只，2组分别给予受试物低剂量组、受试物高剂量组，再取12只豚鼠也随机分成2组，每组6只，分别给予牛血清白蛋白和5％葡萄糖注射液，按无菌操作方法，隔日腹腔注射上述四种试液，每只注射体积为0.5ml，计注射5次，致敏期间每日观察动物症状，初次，最后一次致敏测每组动物的体重。在末次注射后第10日，测定每组动物的体重，然后由静脉注射上述药品进行攻击，每只注射体积为2ml(一次致敏剂量的4倍)，在注射后30分钟内，观察是否出现过敏反应。并按表1症状详细观察每只豚鼠的反应，根据症状的出现及消失时间，持续观察3小时，最后按表2的反应分类，判断是否产生过敏反应。并计算出豚鼠的过敏反应率。

表1：豚鼠过敏反应症状

0正常1躁动2竖毛3颤抖4抓鼻5喷嚏6咳嗽7呼吸急促8排尿9排粪10流泪

11呼吸困难12鼾音13紫癜14步态不稳15跳跃16喘息17痉挛18旋转19潮式呼吸20死亡

表2：反应分类

01-41-101-1920

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过敏反应阴性过敏反应弱阳性过敏反应阳性过敏反应强阳性过敏反应极强阳性

3、试验结果

四种不同去氧胆酸钠用量配制成的多烯磷脂酰胆碱冻干溶液的过敏试验结果包括过敏反应症状、过敏反应分类及过敏发生率见表3：

表3不同去氧胆酸钠用量的过敏试验结果

	阳性对照组	阴性对照组	①(0.5∶1)		②(1.5∶1)		③(2.0∶1)		④(2.5∶1)
											低剂量组	高剂量组	低剂量组	高剂量组	低剂量组	高剂量组	低剂量组	高剂量组
			过敏反应症状	30分钟内，出现不安、抓鼻、咳嗽、呼吸急促、排尿、呼吸困难、步态不稳、喘息、侧卧、潮式呼吸和死亡等	正常	正常	正常	正常	正常	30分钟内出现躁动、竖毛、呼吸急促等并持续至观察结束									30分钟内出现躁动、咳嗽、呼吸困难、步态不稳等并持续至观察结束	30分钟内出现躁动、咳嗽、呼吸困难、步态不稳、痉挛等并持续至观察结束	30分钟内出现躁动、咳嗽、呼吸困难、步态不稳、痉挛等并持续至观察结束
过敏反应分类	极强阳性	阴性									阴性	阴性	阴性	阴性	阳性	强阳性	强阳性	强阳性
			过敏反应率(％)	100	0	0	0	0	0	83									100	100	100

溶液①和②的低剂量组、高剂量组和阴性对照组豚鼠在注射后30分钟至3小时内，过敏反应症状为正常，反应分类为过敏反应阴性，过敏反应率均为0％。而注射牛血清白蛋白、溶液③和④的低剂量组、高剂量组后30分钟内，6只豚鼠分别出现不安、抓鼻、咳嗽、呼吸急促、排尿、呼吸困难、步态不稳、喘息、侧卧、潮式呼吸和死亡等过敏反应症状，其中溶液③低剂量组反应分类为过敏反应阳性，溶液③的高剂量组和溶液④低、高剂量组反应分类为过敏反应强阳性，牛血清白蛋白反应分类为过敏反应极强阳性。三者过敏反应率分别为83％、100％、100％。

二、局部刺激性、血管刺激性和溶血性试验

再按照药品审评中心《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究指导原则二》(2005年3月第19-21页)，对溶液①、②、③、④进行局部刺激性、血管刺激性和溶血性试验，结果均为阴性。

以上试验结果表明：对于去氧胆酸钠，增溶剂与多烯磷脂酰胆碱重量比为0.5～1.5是安全的。

实施例11：

去氢胆酸钠和胆酸钠的安全性实验

分别用与多烯磷脂酰胆碱重量比为0.5∶1、1.5∶1和2.0∶1的去氢胆酸钠以及胆酸钠配制多烯磷脂酰胆碱冻干溶液(无菌操作)，按照药品审评中心《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究指导原则》(2005年3月19-21页)进行过敏性试验、局部刺激性、血管刺激性和溶血性试验，结果见表4。

表4去氢胆酸钠和胆酸钠不同用量的安全情况

过敏性局部刺激性血管刺激性	去氢胆酸钠与多烯磷脂酰胆碱的重量比			胆酸钠与多烯磷脂酰胆碱的重量比
							0.5∶1高低剂量组均阴性阴性阴性	1.5∶1高低剂量组均阴性阴性阴性	2.0∶1高低剂量组均阳性阴性阴性	0.5∶1高低剂量组均阴性阴性阴性	1.5∶1高低剂量组均阴性阴性阴性	2.0∶1高低剂量组均阳性阴性阴性
	溶血性	阴性	阴性	阴性	阴性	阴性							阴性

由表4所列试验结果可以看出：增溶剂去氢胆酸钠和胆酸钠与多烯磷脂酰胆碱重量比为0.5～1.5∶1也是其安全用量范围。

Claims (9)

1.一种注射用冻干粉针，其特征在于含有多烯磷脂酰胆碱和去氧胆酸钠，其中多烯磷脂酰胆碱和去氧胆酸钠的重量比为1∶0.6-0.86。

2.权利要求1所述注射用冻干粉针，其中多烯磷脂酰胆碱和去氧胆酸钠的重量比为1∶0.7-0.86。

3.权利要求1或2所述的注射用冻干粉针，该制剂可进一步含有冻干赋型剂。

4.权利要求3所述的注射用冻干粉针，其中冻干赋型剂可为甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖、水解明胶、海藻糖、葡聚糖、右旋糖酐、甘氨酸、甘氨酸钠、丙氨酸、白蛋白、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、山梨醇、麦芽糖、环糊精、枸橼酸、枸橼酸钠中的一种或一种以上的混合物。

5.权利要求4所述的注射用冻干粉针，其中冻干赋型剂选自甘露醇、葡萄糖、乳糖、水解明胶、蔗糖中的一种或一种以上的混合物。

6.权利要求3所述的注射用冻干粉针，其中多烯磷脂酰胆碱与冻干赋型剂重量比为1∶0.1-4。

7.权利要求3所述的注射用冻干粉针，其中多烯磷脂酰胆碱与冻干赋型剂重量比为1∶0.3-2。

8.权利要求1或2所述的注射用冻干粉针的制备方法，至少包括以下四个步骤：

1)溶液配制：取最终制备量3/5-9/10体积的注射用水，在氮气保护下加入多烯磷脂酰胆碱、去氧胆酸钠，充分搅拌使其完全溶解；

2)去除热原：在氮气保护下加入上述溶液体积0.05％-0.3％的活性炭，搅拌15-30分钟，过滤脱炭，再补加注射用水至足量，用0.22微米微孔滤膜或G₆垂熔玻璃滤器滤过，取滤液为中间体；

3)分装：中间体经检查合格后，在氮气保护下分装于西林瓶中，半压盖；

4)冻干。

9.权利要求8的制备方法，其溶液配制过程中还可以加入冻干赋型剂。