CN100363019C - 注射用鹿瓜多肽药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种注射用鹿瓜多肽药物组合物，它含有鹿骨提取物、甜瓜子提取物和一种或多种赋形剂组成，其中鹿骨多肽与甜瓜子多肽的重量比为2∶1至6∶1。本发明还公开了用本发明的方法制备的注射用鹿瓜多肽药物组合物，以及制备注射用鹿瓜多肽药物组合物的方法。本发明的制剂可以用不同产地和不同采集期的鹿骨和甜瓜子为原料，产品质量不受提取工艺条件影响，安全有效，符合国家有关药品标准。
Description
技术领域
本发明涉及注射用鹿瓜多肽药物组合物及其制备方法。更具体地，本发明涉及含有鹿骨多肽和甜瓜子多肽的注射用鹿瓜多肽药物组合物。本发明还涉及注射用鹿瓜多肽药物组合物的制备方法。
背景技术
鹿瓜多肽是用鹿骨和甜瓜子的提取物配制而成，祖国医学认为，鹿骨味甘、微热，具有补虚赢、强筋骨，治风湿四肢疼痛及筋骨冷痹的作用，而甜瓜子有散结，消痛等作用，两者配制用于散寒、祛风湿、镇痛，因而对风湿性关节炎或类风湿性关节炎有治疗作用。
现有技术中已公开了一些有关鹿瓜多肽提取物或其制备工艺。例如，CN1470256A公开了促进骨折愈合和骨关节损伤修复的药物组合物及其制备方法和应用。该专利申请公开的组合物由鹿骨提取物和甜瓜子提取物与一种或多种医药上接受的载体或赋形剂组成的药物组合物；鹿骨提取物和甜瓜子提取物分别是鹿骨和甜瓜子生药原料经过提取得到，鹿骨和甜瓜子生药原料的重量比为1∶4至4∶1。
该专利申请还公开了药物组合物的制备方法，其包括(1)将新鲜鹿骨经预处理后，在鹿骨(400-100Kg)中加等重量的水，于121℃的温度下加热提取3次；合并所得的水提溶液，用2M盐酸调节PH值调到3.2得到酸沉淀后的提取液；加热煮沸酸沉淀后的提取液，过滤除去杂质并离心除去酸沉淀；收集滤液和离心上清后，加入氢氧化钠溶液将PH调到8.5，从而得到所需的鹿骨提取液；(2)在不锈钢容器内，向清洗后甜瓜子(100-400Kg)中加等重量的水，于121℃的温度下加热提取3次；合并水提溶液，用2M盐酸调节PH值调到3.2；加热煮沸酸沉淀后的提取液，离心除去酸沉淀物；收集离心上清后，加入氢氧化钠液PH调到8.3，从而得到所需的甜瓜子提取液；(3)混合步骤(1)和(2)得到的鹿骨提取液和甜瓜子提取液，加热浓缩至原体积的1/3。将该浓缩液的PH调到7.2后，依次使用截流分子量为10,000和8,000的中空纤维柱进行超滤处理，得到的混合液与一种或多种医药上接受的载体或赋形剂制成药物组合物。
此外，CN1579542A公开了一种注射用鹿瓜多肽及其制备工艺。该鹿瓜多肽包括多肽类物质和赋形剂，其中多肽类物质是从鹿科动物骨骼和葫芦科植物甜瓜种子中提取而成，其重量份数为多肽类物质5-100，赋形剂20-90，多肽类物质分子量为3000-10000道尔顿，PH值为3.5-9.0。
该专利申请还公开了鹿瓜多肽的制备工艺，包括(1)按重量分数取鹿骨17500-63000，加3-8倍量的注射用水，热压(80-120℃)提取2-4次。合并提取液，调PH值至3.5-4.5，去沉渣，上清液调碱性PH值至8.5-9.0，去沉渣，上清液调中性PH后，用超滤膜超滤，相对截留分子量为3000-10000道尔顿，从制成鹿骨提取液；(2)按重量分数取甜瓜子3000-10000，加3-8倍量的注射用水，热压(80-120℃)提取2-4次，合并提取液，去沉渣，超滤，相对截留分子量为3000-10000道尔顿，制成甜瓜子提取液；(3)将步骤(1)和(2)的鹿骨和甜瓜子提取液按1-10∶1比例混合，得到鹿瓜多肽溶液；(4)取鹿瓜多肽溶液，加入赋型剂(甘露醇、聚乙二醇、葡聚糖、乳糖、甘氨酸及胶体物质)水溶液，冷冻干燥得到类白色块状物或无定形粉末。
上述技术是以生药原料重量比为配方组成的提取物及其制备方法，由于生药原料鹿骨和甜瓜子存在产地和采集期上的差异，所含有的有效成份差异较大，以生药原料重量比作配方，很难保证生产的每批鹿瓜多肽提取液的有效成份含量一致，从而无法保证所生产的药物质量。
同时，由于很难做到每批提取条件的完全一致，因此即使同一产地、采集期的生药所提有效成份也存在差异，以生药原料重量比为配方组成，很难保证鹿瓜多肽每批制剂的多肽含量一致。
上述技术分别采用8,000的中空纤维柱进行超滤技术或采用10,000超滤膜超滤技术，不能有效去除提取液中的高分子量物质(在药品生产中，分子量大于5800的物质称为高分子量物质)，极易引起变态反应。
鹿骨和甜瓜子提取物含有多种游离氨基酸，其为骨细胞合成BMPs、TGF-β、FGF等骨源性生物因子提供原料，促进骨源性生物因子的合成。但大多数氨基酸在碱性溶液中易析出，而上述技术在提取过程中均采用碱性的pH值，均与国家药品标准不符。
因此，现有技术中迫切需要提供一种有效成份保持稳定的注射用鹿瓜多肽以及相应简化的生产工艺，注射用鹿瓜多肽可以由不同产地和不同采集期的鹿骨和甜瓜子为原料，并且产品质量不受提取工艺条件影响，安全有效，符合国家有关药品生产标准。
发明内容
本发明经过多年努力研究和探索，解决了上述需求，完成了本发明。
本发明提供一种注射用鹿瓜多肽药物组合物，它含有鹿骨提取物、甜瓜子提取物和一种或多种赋形剂，其中鹿骨多肽与甜瓜子多肽的重量比为2∶1至6∶1。
本发明还提供一种注射用鹿瓜多肽药物组合物，它由如下制备方法制备，该方法包括如下步骤：
A)鹿骨提取物溶液的制备：
(1)鹿骨预处理；
(2)将预处理后的净鹿骨粉碎；
(3)在碎鹿骨中加2倍重量以上的注射用水，121℃热压提取滤出获得一次鹿骨提取液；
(4)在一次提取后的鹿骨渣中加入2倍以上重量注射用水，继续在121℃-123℃热压提取，滤出获得二次鹿骨提取液，与步骤(3)获得的一次鹿骨提取液合并制成鹿骨提取液；
(5)将鹿骨提取液离心，收集上清离心液；
(6)将离心液分别进行100KD、10KD、6KD超滤，收集滤出液，减压浓缩至总体积的10％，收取浓缩液，制得鹿骨提取物溶液；
B)甜瓜子提取物溶液的制备：
(1)将干燥成熟甜瓜子漂洗干净；
(2)在净甜瓜子中加入2倍以上重量的注射用水，用胶体磨研磨成甜瓜子匀浆；
(3)将甜瓜子匀浆在121℃热压提取，滤出一次甜瓜子提取液；
(4)在一次提取后的甜瓜子渣中加入2倍以上重量注射用水，继续在121℃-123℃热压提取，滤出二次甜瓜子提取液，与步骤(3)获得的一次甜瓜子提取液合并制成甜瓜子提取液；
(5)将甜瓜子提取液离心，收集上清离心液
(6)将离心液分别进行100KD、10KD、6KD超滤，收集滤出液，减压浓缩至原体积的10％，收取浓缩液，制得甜瓜子提取物溶液；
C)注射用鹿瓜多肽药物组合物的制备：
混合步骤A)制备的鹿骨提取物溶液和步骤B)制备的甜瓜子提取物溶液和一种或多种赋形剂制备药物组合物，通过冷冻干燥技术制成冻干粉针，其中鹿骨多肽与甜瓜子多肽的重量比为2∶1至6∶1。
本发明还提供一种注射用鹿瓜多肽药物组合物的制备方法，其包括如下步骤：
A)鹿骨提取物溶液的制备：
(1)鹿骨预处理；
(2)将预处理后的净鹿骨粉碎；
(3)在碎鹿骨中加2倍以上重量的注射用水，121℃热压提取滤出获得一次鹿骨提取液；
(4)在一次提取后的鹿骨渣中加入2倍以上重量注射用水，继续在121℃-123℃热压提取，滤出获得二次鹿骨提取液，与步骤(3)获得的一次鹿骨提取液合并制成鹿骨提取液；
(5)将鹿骨提取液离心，收集上清离心液；
(6)将离心液分别进行100KD、10KD、6KD超滤，收集滤出液，减压浓缩至总体积的10％，收取浓缩液，制得鹿骨提取物溶液；
B)甜瓜子提取物溶液的制备：
(1)将干燥成熟甜瓜子漂洗干净；
(2)在净甜瓜子中加入2倍以上重量的注射用水，用胶体磨研磨成甜瓜子匀浆；
(3)将甜瓜子匀浆在121℃热压提取，滤出一次甜瓜子提取液；
(4)在一次提取后的甜瓜子渣中加入2倍以上重量注射用水，继续在121℃-123℃热压提取，滤出二次甜瓜子提取液，与步骤(3)获得的一次甜瓜子提取液合并制成甜瓜子提取液；
(5)将甜瓜子提取液离心，收集上清离心液；
(6)将离心液分别进行100KD、10KD、6KD超滤，收集滤出液，减压浓缩至原体积的10％，收取浓缩液，制得甜瓜子提取物溶液；
C)注射用鹿瓜多肽药物组合物的制备：
混合步骤A)制备的鹿骨提取物溶液和步骤B)制备的甜瓜子提取物溶液和一种或多种赋形剂制备药物组合物，通过冷冻干燥技术制成冻干粉针，其中鹿骨多肽与甜瓜子多肽的重量比为2∶1至6∶1。
作为用于本发明的药物组合物中鹿骨提取物和甜瓜子提取物的原料，使用鹿科动物，尤其是梅花鹿(Cervus nippon Temmick)的骨骼和葫芦科植物甜瓜(Cucumis melo L.)的干燥成熟种子，经分别提取后混合，并与一种或多种赋形剂混合制成本发明的药物组合物。
根据本发明的优选实施方案，在注射用鹿瓜多肽药物组合物中，鹿骨多肽与甜瓜子多肽的重量比为2∶1至4∶1。
用作本发明的药物组合物的赋形剂可以是右旋糖酐40、葡萄糖、乳糖、聚乙二醇、葡聚糖、甘氨酸等，考虑到对最终产品中多肽含量检测的影响，其中优选的赋形剂为右旋糖酐40、葡萄糖或乳糖。多肽总量与赋型剂重量比应为1∶5～30。
本发明的注射用鹿瓜多肽药物组合物可用于治疗风湿、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、各种类型骨折、创伤修复及腰腿疼痛等疾病或症状。
虽然不打算受此限制，但我们认为，本发明的药物组合物中的鹿骨多肽是由鹿骨提取的，其中的骨诱导多肽类生物因子可有效促进机体内影响骨形成和吸收的骨源性生长因子的合成，包括骨形态发生蛋白(BMPs)，β-转化生长因子(TGF-β)，成纤维细胞生长因子(FGF)等，从而具有多种生物活性。其主要药理作用有：促进细胞有丝分裂、分化作用、趋化作用和溶骨活性。其中BMPs是一组酸性低分子量糖蛋白，作为一种高效骨诱导物质，BMPs是间充质细胞向骨系细胞分化的最初信号因子，能诱导血管周围游动的间充质细胞转化为不可逆性的骨系细胞，即软骨细胞和成骨细胞，从而促进骨痂形成，诱导新骨形成，促进骨折修复；此外，BMPs还可调节细胞外基质成份的改变，并通过与TGF-β和FGF相互之间的协调作用更好地诱导新骨形成，使骨组织更成熟。TGF-β则是一族具有多种功能的蛋白多肽，对成骨细胞及成软骨细胞有促进分化或降低分化的双重调节作用，与多种因子如细胞外基质和其他分化调节生长因子一起协同参与对细胞分化的调节；TGF-β可促进细胞外基质合成，可以直接刺激成纤维细胞外基质的合成，并对其新合成的基质降解有显著抑制作用；对于成骨细胞，TGF-β可促进其合成I型胶原、骨粘连素和骨桥蛋白；同时，TGF-β对淋巴细胞和巨噬细胞的作用表明，它既能缓解炎性反应的破坏性，又能协助巨噬细胞来源的某些细胞因子在细胞组织修复中发挥作用。FGF是一组肝素黏合多肽，可刺激细胞的趋向移动，增值和分化，增加合成胶原细胞的数量，促进骨胶原蛋白及非胶原蛋白的合成，增加骨钙素的合成。
本发明的药物组合物中的甜瓜子多肽提取物是从葫芦科植物甜瓜的成熟干燥的种子提取的，能降低骨折局部毛细血管通透性，减少炎性渗出，促进局部血运障碍的恢复；同时还能降低全血黏度及红细胞聚集程度，改善骨痂局部的血液循环，为骨细胞提供一个良好的供血环境；另外还能抑制前列腺素的释放，达到止痛效果；在促进骨折早期愈合中，甜瓜子提取物与补充的骨诱导多肽生物因子具有协同作用，促进骨源性生长因子的合成。
此外，本发明的注射用鹿骨多肽药物组合物富含多种游离氨基酸，为骨细胞合成BMPs、TGF-β、FGF等骨源性生物因子提供原料，促进骨源性生物因子的合成，有机钙、磷离子可参与钙磷代谢、维持骨容量。因而可有效治疗风湿、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、各种类型骨折、创伤修复及腰腿疼痛等疾病或症状。
本发明的注射用鹿瓜多肽药物组合物的剂量为：在用于肌肉注射时，一次4-8mg，日剂量为8-16mg，用适量注射用水溶解稀释后肌肉注射；在用于静脉注射时，每日16-24mg，用5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液250-500ml溶解稀释后静脉滴注。准确剂量将由临床医生根据患者的年龄、体重、所治疗的症状、患者身体状况等因素确定，一般10-15日为一疗程。本发明的鹿瓜多肽药物组合物的包装规格有4mg、8mg、16mg、24mg。
在本发明更具体的实施方案中，其提供一种注射用鹿瓜多肽药物组合物的制备方法，其包括如下步骤：
A)鹿骨提取物溶液的制备：
(1)鹿骨在沸水中煮沸30分钟后，除去筋膜及残肉，完成预处理；
(2)将预处理后的净鹿骨粉碎至1cm以下的碎骨；
(3)在碎鹿骨中加2倍重量的注射用水，121℃热压提取2小时，滤出获得一次鹿骨提取液；
(4)在一次提取后的鹿骨渣中加入2倍重量注射用水，继续在121℃-123℃热压提取2小时，滤出获得二次鹿骨提取液，与步骤(3)获得的一次鹿骨提取液合并制成鹿骨提取液，放置过夜；
(5)将鹿骨提取液以4000转/分钟离心15分钟，收集上清离心液；
(6)将离心液分别进行100KD、10KD、6KD超滤，收集滤出液，减压浓缩至总体积的10％，收取浓缩液，用0.22μm滤膜过滤，制得鹿骨提取物溶液；
B)甜瓜子提取物溶液的制备：
(1)将干燥成熟甜瓜子用注射用水漂洗3-4次；
(2)在净甜瓜子中加入2倍重量的注射用水，用胶体磨研磨成甜瓜子匀浆；
(3)将甜瓜子匀浆在121℃热压提取2小时，滤出一次甜瓜子提取液；
(4)在一次提取后的甜瓜子渣中加入2倍重量注射用水，继续在121℃-123℃热压提取2小时，滤出二次甜瓜子提取液，与步骤(3)获得的一次甜瓜子提取液合并制成甜瓜子提取液；
(5)将甜瓜子提取液以4000转/分钟离心15分钟，收集上清离心液；
(6)将离心液分别进行100KD、10KD、6KD超滤，收集滤出液，减压浓缩至原体积的10％，收取浓缩液，用0.22μm滤膜过滤，制得甜瓜子提取物溶液；
C)注射用鹿瓜多肽药物组合物的制备：
混合步骤A)制备的鹿骨提取物溶液和步骤B)制备的甜瓜子提取物溶液和一种或多种赋形剂制备药物组合物，通过冷冻干燥技术制成冻干粉针，其中鹿骨多肽与甜瓜子多肽的重量比为2∶1至4∶1，赋形剂选自右旋糖酐40、葡萄糖或乳糖，多肽总量与赋型剂重量比为1∶5-30。
步骤C)的制备药物组合物的方法是制药技术领域中已知的方法，本领域技术人员将根据所制备的剂型和选择的赋形剂选取准确的具体工艺方法和条件。
如上所述，本发明提供的注射用鹿瓜多肽药物组合物及其制备方法具有如下优点：
(1)以鹿骨多肽和甜瓜子多肽为计算单位，可以保证每批制剂多肽含量一致，批次差异可降至最低，保证产品质量；
(2)以鹿骨多肽和甜瓜子多肽为计算单位，避免了产地、采集期、提取条件差异所出现的最终产品含量差异；
(3)预先粉碎鹿骨和制备甜瓜子匀浆，提高热压提取鹿骨多肽和甜瓜子多肽的提取率；
(4)采用纯粹的热压提取方法，避免酸或碱处理，提高有效成份的提取率；
(5)采用分级超滤的方法，可有效去除提取物中存在的分子量超过5800的高分子量物质，将变态反应的可能性降至最低，提高了产品质量稳定性；
(6)采用右旋糖酐40、葡萄糖或乳糖为赋型剂，能够避免对多肽含量检测所带来的影响。
附图简要说明
附图1是本发明制备鹿瓜多肽药物组合物的工艺流程示意图。
具体实施方式
本发明将借助如下实施例具体说明本发明的技术方案，应理解的是，在说明书上下文中的具体说明并不构成对本发明的限制。本发明的保护范围由权利要求说明。
实施例
实施例1：鹿骨提取物溶液的制备
将鹿骨置于沸水中煮沸30min，取出，剔除筋膜及残肉，得净鹿骨。取净鹿骨，粉碎至小于1cm的碎骨备用。取碎骨30kg，加入60kg注射用水，在121℃热压提取2h，滤出一次提取液；再加入60kg注射用水，121℃热压提取2h，滤出二次提取液，合并滤液，放置过夜。取鹿骨提取液，离心(4000转/分钟、15分钟)，取上清，弃沉淀。取上清液，进行分级超滤，100KD、10KD、6KD，每次取滤过液，弃浓缩液。取滤过液，减压浓缩至总体积的10％，收取浓缩液，调节PH值6.0-6.5，0.22μm滤膜除菌过滤，得鹿骨提取物溶液10L。
经高效液相色谱法、福林酚法测定，存在鹿骨多肽，其含量为6.1mg/ml。
实施例2：甜瓜子提取物溶液的制备
取甜瓜子，置注射用水中，反复漂洗3-4次，空干水份，挑出杂物，得净甜瓜子备用。取净甜瓜子15kg，加30kg注射用水，用胶体磨研磨成甜瓜子匀浆。取甜瓜子匀浆，121℃热压提取2h，滤出一次提取液；再加入30kg注射用水，121℃℃热压继续提取2h，滤出二次提取液，合并滤液，放置过夜。取甜瓜子提取液，离心(4000转/分钟、15分钟)，取上清，弃沉淀。取上清液，进行分级超滤：100KD、10KD、6KD，每次取滤过液，弃浓缩液。取最终滤过液，减压浓缩至总体积的10％，收取浓缩液，调节PH值6.0-6.5，0.22μm滤膜除菌过滤，得甜瓜子提取物溶液约5L。
经分光光度法、福林酚法测定，存在甜瓜子多肽，其含量为4.2mg/ml。
实施例3：药物组合物1
制剂处方：
实施例1的鹿骨提取物溶液 26.7g(按鹿骨多肽计)
实施例2的甜瓜子提取物溶液 13.3g(按甜瓜子多肽计)
20％赋型剂溶液 5000ml
5％NaOH(或5％HCl) 适量
注射用水 加至20000ml
将实施例1制备的鹿骨提取物溶液和实施例2制备的甜瓜子提取物溶液按鹿骨多肽与甜瓜子多肽重量比2∶1比例混合，加入5000ml赋形剂(右旋糖酐40、葡萄糖或乳糖)溶液，用适量5％NaOH或5％HCl调测溶液PH值至5.5-7.0后，补加注射用水至全量，通过罐装、冻干、轧盖等步骤，制成每支4mg的制剂。
实施例4：药物组合物2
制剂处方：
实施例1的鹿骨提取物溶液 30g(按鹿骨多肽计)
实施例2的甜瓜子提取物溶液 10g(按甜瓜子多肽计)
20％赋型剂溶液 5000ml
5％NaOH(或5％HCl) 适量
注射用水 加至20000ml
除鹿骨提取物和甜瓜子提取物的用量不同外，药物组合物如实施例3中所述制备，通过罐装、冻干、轧盖等步骤，制成每支4mg的制剂。
实施例5：药物组合物3
制剂处方：
实施例1的鹿骨提取物溶液 53.4g(按鹿骨多肽计)
实施例2的甜瓜子提取物溶液 26.6g(按甜瓜子多肽计)
20％右旋糖酐40溶液 10000ml
5％NaOH(或5％HCl) 适量
注射用水 加至40000ml
除鹿骨提取物和甜瓜子提取物的用量不同外，药物组合物如实施例3中所述制备，通过罐装、冻干、轧盖等步骤，制成每支8mg的制剂。
实施例6：药物组合物4
制剂处方：
实施例1的鹿骨提取物溶液 64g(按鹿骨多肽计)
实施例2的甜瓜子提取物溶液 16g(按甜瓜子多肽计)
20％右旋糖酐40溶液 10000ml
5％NaOH(或5％HCl) 适量
注射用水 加至40000ml
除鹿骨提取物和甜瓜子提取物的用量不同外，药物组合物如实施例3中所述制备，通过罐装、冻干、轧盖等步骤，制成每支8mg制剂。
实施例7：制剂有效成份测定
1、多肽有效成份确定
(1)取样实施例3的制剂，加水制成每1ml中含多肽类物质2mg的溶液，取2ml，加茚三铜试液1ml，加热，应显蓝紫色。
(2)根据《中国药典2000年版二部附录IV A》中所述的方法，用实施例3的制剂加水制成每1ml中含多肽类物质2mg的溶液，取2ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，照分光光度法测定，在258nm的波长处有最大吸收。
如上结果说明，实施例3制剂的最大吸收鉴别项成立。
2、高分子量物质含量测定
按照《中国药典2000年版二部附录V D》中规定的高效液相色谱法测定。
色谱条件与系统适用性试验：用凝胶色谱柱(TSKgelG2000SW 7.8mm×300mm，5μm)；流动相为三氟醋酸-乙腈-水(0.05∶10∶90)；检测波长为214nm。理论板数按胰岛素峰计算不得低于3000。
对照品溶液的制备：取胰岛素对照品(分子量5800)适量，加流动相制成每1ml中含1mg的溶液，作为对照品溶液。
测试溶液的制备：在实施例3的制剂中加流动相制成每1ml中含多肽1mg的溶液，作为测试溶液。
测定法：取对照品溶液和测试溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，将先于胰岛素峰保留时间的峰视为高分子量物质，按面积归一化法计算，结果显示，测试溶液的高分子物质含量低于2.0％。
3、氨基酸含量测定
用高效液相色谱分别鉴别并定量实施例5制剂中所含游离氨基酸，结果见表A。
表A：注射用鹿瓜多肽游离氨基酸检查结果
| 氨基酸 | μg/ml | 氨基酸 | μg/ml |
| 门冬氨酸 | 229.3 | 胱氨酸 | 131.6 |
| 丝氨酸 | 110.1 | 酪氨酸 | 7.9 |
| 谷氨酸 | 419.6 | 缬氨酸 | 185.5 |
| 甘氨酸 | 414.7 | 蛋氨酸 | 29.0 |
| 组氨酸 | 82.3 | 赖氨酸 | 171.9 |
| 精氨酸 | 432.1 | 异亮氨酸 | 90.2 |
| 苏氨酸 | 92.4 | 亮氨酸 | 196.1 |
| 丙氨酸 | 508.9 | 苯丙氨酸 | 125.8 |
| 脯氨酸 | 109.7 | 色氨酸 | 35.3 |
| 总氨基酸 | 3.23mg/支 | ||
如上结果显示，注射用鹿瓜多肽制剂含有18种游离氨基酸。
实施例8：生产注射用鹿瓜多肽中各批之间多肽总量的差异
本实施例说明在每批投入相同的生药原料，以相同的工艺方法制备多肽提取物时，每批提取物中多肽总量的差异。
用实施例1的方法，投入相同重量的鹿骨，制备鹿骨提取物，其鹿骨多肽总量显示于如下表格B中。
表B：鹿骨提取物溶液成份分析
| 批号 | 投入净鹿骨 | 总体积 | 鹿骨多肽含量 | 多肽总量 |
| 20040301 | 150Kg | 56L | 7.32mg/ml | 409.9g |
| 20040302 | 150Kg | 53L | 5.25mg/ml | 278.3g |
| 20040303 | 150Kg | 62L | 5.33mg/ml | 330.5g |
用实施例2的方法，投入相同重量的甜瓜子，制备甜瓜子提取物，其甜瓜子多肽总量显示于如下表格C中。
表C：甜瓜子提取物溶液成份分析
| 批号 | 投入甜瓜子 | 总体积 | 鹿骨多肽含量 | 多肽总量 |
| 20040301 | 50Kg | 19L | 3.50mg/ml | 66.5g |
| 20040302 | 50Kg | 22L | 4.35mg/ml | 95.7g |
| 20040303 | 50Kg | 23L | 3.54mg/ml | 81.4g |
由表B结果可知，每批投入150Kg鹿骨，鹿骨多肽最大提取量与最小量差异达131g；由表C结果可知，每批投入50Kg甜瓜子，甜瓜子多肽最大提取量与最小量差异达29.2g。
此实施例说明，若按照背景技术用生药重量比进行生产，不仅批间含量很大，而且最终注射用鹿瓜多肽产品中鹿骨多肽与甜瓜子多肽也无确切比例。这就说明，唯有用各自提取物中的鹿骨多肽和甜瓜子多肽有效成份的重量比控制生产注射用鹿瓜多肽药物组合物，才能够保证最终制剂的含量差异最小。如下表D说明用实施例5的方法制备的规格为8mg/支的不同批制剂间有效成份含量说明。
表D：注射用鹿瓜多肽
| 批号 | 外观性状 | 酸度 | 高分子 | 含量mg/支 | ||
| 20040525 | 类白色块状物 | 5.85 | 符合规定 | 8.11 | 8.08 | 8.14 |
| 20040526 | 类白色块状物 | 6.05 | 符合规定 | 8.14 | 8.12 | 8.12 |
| 20040527 | 类白色块状物 | 5.94 | 符合规定 | 8.08 | 8.10 | 8.10 |
如上表数据可以看出，本发明的方法可制备有效成份稳定的制剂，保证了产品质量，符合国家药品标准。
实施例9：本发明的制剂治疗风湿、类风湿性关节炎的效果
从住院病人中随机选择风湿性关节炎21例、类风湿性关节炎8例；临床检查血沉、抗“0”、血中白细胞数、类风湿性因子。
治疗方法：用实施例6的制剂，剂量为每天用注射用鹿瓜多肽16-24mg，用0.9％氯化钠注射液250-500ml溶解稀释后静脉滴注，15日为一疗程，共治疗2个疗程，治疗期间停用其它疗法和药物。
疗效判断标准：
1.显效：关节疼痛及肿胀消失，运动自如无不适感，各项检查均恢复正常者。
2.有效：关节疼痛及肿胀基本消失，但运动尚感不适，或有1～2项检查未恢复正常者。
3.无效：临床症状与治疗前无明显改善者。
治疗效果显示于如下表E中。
表E：本品治疗风湿、类风湿性关节炎临床疗效
| 疗效 | 类 别 | 合计 | ||||
| 风湿性关节炎 | 类风湿性关节炎 | |||||
| 例数 | ％ | 例数 | ％ | 例数 | ％ | |
| 显效有效无效 | 3162 | 14. 376.29.5 | 251 | 25.062.512.5 | 5183 | 17.272.410.4 |
表E的结果显示，本发明的制剂对治疗风湿、类风湿性关节炎具有显著的治疗作用。
实施例10：本发明制剂对促进骨所愈合的结果
随机选择四肢闭合性骨折57例，随机分成治疗组42例，对照组15例。
患者入院后均采用牵引、复位、固定等常规方法，并给予抗生素3天以预防感染。同时对照组给予常规用药，治疗组给予实施例5的注射用鹿瓜多肽16-24mg，用0.9％氯化钠注射液250-500ml溶解稀释后静脉滴注，15日为一疗程。
观察用药后两组患者肿胀消退时间、疼痛减弱时间、骨痂形成时间、骨折愈合时间。结果显示于表F中。
疗效统计：
表F：本发明制剂对消肿、减痛、促进骨折愈合的临床效果
| 组 别 | 疼痛减弱时间(h) | 肿胀消退时间(h) | 骨痂形成时间(d) | 骨折愈合时间(d) |
| 治疗组对照组 | 50.4±11.764.7±13.1 | 102.4±32.3136.2±31.6 | 28.5±8.835.6±10.2 | 78.4±22.491.2±24.1 |
表F表明，注射用鹿瓜多肽制剂具有显著的减缓疼痛、消除肿胀、促进骨折愈合的作用。
Claims (4)
1.一种注射用鹿瓜多肽药物组合物的制备方法，其包括如下步骤：
A)鹿骨提取物溶液的制备：
(1)鹿骨预处理；
(2)将预处理后的净鹿骨粉碎；
(3)在碎鹿骨中加2倍以上重量的注射用水，121℃热压提取滤出获得一次鹿骨提取液；
(4)在一次提取后的鹿骨渣中加入2倍以上重量注射用水，继续在121℃-123℃热压提取，滤出获得二次鹿骨提取液，与步骤(3)获得的一次鹿骨提取液合并制成鹿骨提取液；
(5)将鹿骨提取液离心，收集上清离心液；
(6)将离心液分别进行100KD、10KD、6KD超滤，收集滤出液，减压浓缩至总体积的10％，收取浓缩液，制得鹿骨提取物溶液；
B)甜瓜子提取物溶液的制备：
(1)将干燥成熟甜瓜子漂洗干净；
(2)在净甜瓜子中加入2倍以上重量的注射用水，用胶体磨研磨成甜瓜子匀浆；
(3)将甜瓜子匀浆在121℃热压提取，滤出一次甜瓜子提取液；
(4)在一次提取后的甜瓜子渣中加入2倍以上重量注射用水，继续在121℃-123℃热压提取，滤出二次甜瓜子提取液，与步骤(3)获得的一次甜瓜子提取液合并制成甜瓜子提取液；
(5)将甜瓜子提取液离心，收集上清离心液；
(6)将离心液分别进行100KD、10KD、6KD超滤，收集滤出液，减压浓缩至原体积的10％，收取浓缩液，制得甜瓜子提取物溶液；
C)注射用鹿骨多肽药物组合物的制备：
混合步骤A)制备的鹿骨提取物溶液和步骤B)制备的甜瓜子提取物溶液和一种或多种赋形剂制备药物组合物，通过冷冻干燥技术制成冻干粉针，其中鹿骨多肽与甜瓜子多肽的重量比为2∶1至6∶1。
2.权利要求1所述的制备方法，其中鹿骨多肽与甜瓜子多肽的重量比为2∶1至4∶1。
3.权利要求1或2所述的制备方法，其中赋形剂选自右旋糖酐40、葡萄糖或乳糖。
4.一种注射用鹿瓜多肽药物组合物的制备方法，其包括如下步骤：
A)鹿骨提取物溶液的制备：
(1)鹿骨在沸水中煮沸30分钟后，除去筋膜及残肉，完成预处理；
(2)将预处理后的净鹿骨粉碎至1cm以下的碎骨；
(3)在碎鹿骨中加2倍重量的注射用水，121℃热压提取2小时，滤出获得一次鹿骨提取液；
(4)在一次提取后的鹿骨渣中加入2倍重量注射用水，继续在121℃-123℃热压提取2小时，滤出获得二次鹿骨提取液，与步骤(3)获得的一次鹿骨提取液合并制成鹿骨提取液，放置过夜；
(5)将鹿骨提取液以4000转/分钟离心15分钟，收集上清离心液；
(6)将离心液分别进行100KD、10KD、6KD超滤，收集滤出液，减压浓缩至总体积的10％，收取浓缩液，用0.22μm滤膜过滤，制得鹿骨提取物溶液；
B)甜瓜子提取物溶液的制备：
(1)将干燥成熟甜瓜子用注射用水漂洗3-4次；
(2)在净甜瓜子中加入2倍重量的注射用水，用胶体磨研磨成甜瓜子匀浆；
(3)将甜瓜子匀浆在121℃热压提取2小时，滤出一次甜瓜子提取液；
(4)在一次提取后的甜瓜子渣中加入2倍重量注射用水，继续在121℃-123℃热压提取2小时，滤出二次甜瓜子提取液，与步骤(3)获得的一次甜瓜子提取液合并制成甜瓜子提取液；
(5)将甜瓜子提取液以4000转/分钟离心15分钟，收集上清离心液；
(6)将离心液分别进行100KD、10KD、6KD超滤，收集滤出液，减压浓缩至原体积的10％，收取浓缩液，用0.22μm滤膜过滤，制得甜瓜子提取物溶液；
C)注射用鹿骨多肽药物组合物的制备：
混合步骤A)制备的鹿骨提取物溶液和步骤B)制备的甜瓜子提取物溶液和一种或多种赋形剂制备药物组合物，通过冷冻干燥技术制成冻干粉针，其中鹿骨多肽与甜瓜子多肽的重量比为2∶1至4∶1，赋形剂选自右旋糖酐40、葡萄糖或乳糖，多肽总量与赋形剂的重量比为1∶5-30。
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