CN115671186B - 一种外用治疗骨质增生的复合植物提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种外用治疗骨质增生的复合植物提取物的制备方法，本发明以曼陀罗果实、蓖麻叶为原料，通过水提、酶解、加热回流和萃取提取曼陀罗果实、蓖麻叶中对治疗骨质增生的有效成分，提高本发明中药复合植物提取物的治疗效果。
Description
技术领域
本发明涉及治疗骨质增生的复合植物提取物领域，特别涉及一种外用治疗骨质增生的复合植物提取物及其制备方法。
背景技术
骨质增生是一种以关节软骨损害和周围骨质增生为主，并累及整个关节周围组织的最常见的关节疾病，属于人体组织的退行性改变，会出现关节软骨退变、断裂、缺损，甚至整个关节面的损害，表现为关节疼痛、僵硬、肥大、活动受限，好发于膝、髋、颈椎和腰椎等负重关节，通常是持久、顽固、难以终止或逆转的，因此，导致上述疾病的发病、进展、复发等各项指标居高不降，成为医学界公认的一大难题。
曼陀罗为茄科野生直立木质一年生草本植物，其叶、花、籽均可入药，味辛性温，有大毒。其功效主要为以下几方面：一是平喘止咳、麻醉止痛以及解痉止搐的功效，临床上可用于哮喘咳嗽、风湿痹痛、癫痫以及外科麻醉等；二是改善睡眠，捣碎的叶子包含诱导睡眠的化合物，可以帮助人尽快进入梦乡，失眠的人可以在床上放一些这种植物叶子；三是用于风湿病和关节炎的治疗，用新鲜叶子，花朵和种子捣成糊糊敷在相关部位就能有效缓解疼痛。
蓖麻全株可入药，有祛湿通络、消肿、拔毒之效。种子含蓖麻毒素，如需内服需要进行加热。蓖麻油在工业上用途广，在医药上作缓泻剂；种子含蓖麻毒蛋白及蓖麻碱，若误食种子过量后，将导致中毒死亡。蓖麻叶具有清热解毒，消肿止痛，消炎杀菌，消肿利尿的功效。
在目前现有的技术中，针对风湿以及骨质增生的治疗，西医治疗常以消炎止痛、激素、封闭、紫外线照射、牵引、手术等方法进行治疗。其缺点是治标不治本，治疗时间长，疗效差，费用大，且手术危险性极高。中医治疗则多采用内服中药，以舒筋活络、活血化瘀等方法，效果不明显，或者初服有效随后则无作用，疗效不持久，复发率高。而且内服中药不方便，有的中药对胃有刺激，产生不良的副作用，因此，本发明提出一种外用复合植物提取物，作用在患处，达到治疗骨质增生的效果。
发明内容
鉴以此，本发明提出一种外用治疗骨质增生的复合植物提取物及其制备方法，解决上述问题。
一种外用治疗骨质增生的复合植物提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将曼陀罗果实烘干，粉碎，制得曼陀罗果实粉末；
(2)将蓖麻叶冷冻后粉碎，制得蓖麻叶粉末；
(3)将曼陀罗果实粉末和蓖麻叶粉末混合，制得混合粉末，使用pH值为4.5-5.5的水溶液浸泡，再加入纤维素酶和半纤维素酶浸泡，收集浸泡液；
(4)将浸泡液加热回流提取，收集滤液，浓缩；
(5)将浓缩后的滤液调节pH值至7-8，使用氯仿进行萃取，收集萃取液，制得提取物。
进一步的，按重量份计，原料中曼陀罗果实30-60份，蓖麻鲜叶40-70份。
进一步的，步骤(3)中，所述水溶液和混合粉末质量比为4-6:1。
进一步的，步骤(3)中，所述纤维素酶和半纤维素酶总用量为混合粉末质量的1％-2％。
进一步的，所述纤维素酶和半纤维素酶质量比为0.8-1.2:0.8-1.2。
进一步的，所述将曼陀罗果实粉末和蓖麻叶粉末混合，制得混合粉末，使用pH值为4.5-5.5的水溶液浸泡50-70min，再加入纤维素酶和半纤维素酶浸泡50-70min，提取次数为1-2次，收集浸泡液。
进一步的，步骤(1)中，所述烘干为使用60℃-80℃干燥3-4h，步骤(2)中，所述冷冻为采用-3～-5℃冷冻2-3h。
进一步的，步骤(4)中，所述加热回流时间为1-2h，所述浓缩至滤液含水量为25-30％。
进一步的，步骤(4)中，所述浓缩后的滤液和氯仿质量比为1：0.8-1.2。
进一步的，步骤(5)中，使用0.1-1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值。
进一步的，步骤(3)中，使用0.1-1mol/L的盐酸溶液调节pH值为4-5。
本发明的有益效果为：
本发明中以曼陀罗果实和蓖麻叶为原料制备外用治疗骨质增生的复合植物提取物，本发明中通过水提、酶解、回流提取，氯仿萃取的方法，提取曼陀罗果实和蓖麻叶中治疗骨质增生的有效成分，提高复合植物提取物对骨质增生的治疗效果。
具体实施方式
为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1外用治疗骨质增生的复合植物提取物的制备方法
(1)按重量份计，称取曼陀罗果实50份，蓖麻鲜叶50份。
(2)将曼陀罗果实使用70℃干燥3.5h，粉碎至50目，制得曼陀罗果实粉末；
(3)将蓖麻叶采用-4℃冷冻2.5h后粉碎，过50目筛，制得蓖麻叶粉末；
(4)将曼陀罗果实粉末和蓖麻叶粉末混合，制得混合粉末，使用pH值为5的水溶液浸泡60min，所述水溶液和混合粉末质量比为5:1，再加入质量比为1:1纤维素酶和半纤维素酶浸泡60min，所述纤维素酶和半纤维素酶总用量为混合粉末质量的1.5％，提取次数为2次，合并浸泡液；
(5)将浸泡液加热回流提取1.5h，收集滤液，浓缩至滤液含水量为28％；
(6)将浓缩后的滤液使用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至7，使用氯仿进行萃取，所述浓缩后的滤液和氯仿质量比为1：1，收集萃取液，制得提取物。
实施例2外用治疗骨质增生的复合植物提取物的制备方法
(1)按重量份计，称取曼陀罗果实30份，蓖麻鲜叶40份。
(2)将曼陀罗果实使用60℃干燥3h，粉碎至50目，制得曼陀罗果实粉末；
(3)将蓖麻叶采用-3℃冷冻2h后粉碎，过50目筛，制得蓖麻叶粉末；
(4)将曼陀罗果实粉末和蓖麻叶粉末混合，制得混合粉末，使用pH值为4.5的水溶液浸泡50min，所述水溶液和混合粉末质量比为4:1，再加入质量比为0.8:1纤维素酶和半纤维素酶浸泡50min，所述纤维素酶和半纤维素酶总用量为混合粉末质量的1％，收集浸泡液；
(5)将浸泡液加热回流提取1h，收集滤液，浓缩至滤液含水量为25％；
(6)将浓缩后的滤液使用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至8，使用氯仿进行萃取，所述浓缩后的滤液和氯仿质量比为1：0.8，收集萃取液，制得提取物。
实施例3外用治疗骨质增生的复合植物提取物的制备方法
(1)按重量份计，称取曼陀罗果实60份，蓖麻鲜叶70份。
(2)将曼陀罗果实使用80℃干燥4h，粉碎至50目，制得曼陀罗果实粉末；
(3)将蓖麻叶采用-5℃冷冻3h后粉碎，过50目筛，制得蓖麻叶粉末；
(4)将曼陀罗果实粉末和蓖麻叶粉末混合，制得混合粉末，使用pH值为5.5的水溶液浸泡70min，所述水溶液和混合粉末质量比为6:1，再加入质量比为1.2:0.8纤维素酶和半纤维素酶浸泡70min，所述纤维素酶和半纤维素酶总用量为混合粉末质量的2％，收集浸泡液；
(5)将浸泡液加热回流提取2h，收集滤液，浓缩至滤液含水量为30％；
(6)将浓缩后的滤液使用0.1-1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至7，使用氯仿进行萃取，所述浓缩后的滤液和氯仿质量比为1：1.2，收集萃取液，制得提取物。
对比例1
(1)按重量份计，称取曼陀罗果实50份，蓖麻鲜叶50份。
(2)将曼陀罗果实使用70℃干燥3.5h，粉碎至50目，制得曼陀罗果实粉末；
(3)将蓖麻叶采用-4℃冷冻2.5h后粉碎，过50目筛，制得蓖麻叶粉末；
(4)将曼陀罗果实粉末和蓖麻叶粉末混合，制得混合粉末，加水浸泡60min，所述水溶液和混合粉末质量比为5:1，再加入质量比为1:1纤维素酶和半纤维素酶浸泡60min，所述纤维素酶和半纤维素酶总用量为混合粉末质量的1.5％，提取次数为2次，合并浸泡液；
(5)将浸泡液加热回流提取1.5h，收集滤液，浓缩至滤液含水量为28％；
(6)将浓缩后的滤液使用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至7，使用氯仿进行萃取，所述浓缩后的滤液和氯仿质量比为1：1，收集萃取液，制得提取物。
对比例2
(1)按重量份计，称取曼陀罗果实50份，蓖麻鲜叶50份。
(2)将曼陀罗果实使用70℃干燥3.5h，粉碎至50目，制得曼陀罗果实粉末；
(3)将蓖麻叶采用-4℃冷冻2.5h后粉碎，过50目筛，制得蓖麻叶粉末；
(4)将曼陀罗果实粉末和蓖麻叶粉末混合，制得混合粉末，使用pH值为5的水溶液浸泡60min，所述水溶液和混合粉末质量比为5:1，重复提取两次，收集浸泡液；
(5)将浸泡液加热回流提取1.5h，收集滤液，浓缩至滤液含水量为28％；
(6)将浓缩后的滤液使用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至7，使用氯仿进行萃取，所述浓缩后的滤液和氯仿质量比为1：1，收集萃取液，制得提取物。
对比例3
(1)按重量份计，称取曼陀罗果实50份，蓖麻鲜叶50份。
(2)将曼陀罗果实粉碎至50目，制得曼陀罗果实粉；
(3)将蓖麻叶采用-4℃冷冻2.5h后粉碎，过50目筛，制得蓖麻叶粉末；
(4)将曼陀罗果实粉和蓖麻叶粉末混合，制得混合粉末，使用pH值为5的水溶液浸泡60min，所述水溶液和混合粉末质量比为5:1，再加入质量比为1:1纤维素酶和半纤维素酶浸泡60min，所述纤维素酶和半纤维素酶总用量为混合粉末质量的1.5％，提取次数为2次，合并浸泡液；
(5)将浸泡液加热回流提取1.5h，收集滤液，浓缩至滤液含水量为28％；
(6)将浓缩后的滤液使用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至7，使用氯仿进行萃取，所述浓缩后的滤液和氯仿质量比为1：1，收集萃取液，制得提取物。
对比例4
按重量份计，称取曼陀罗果实50份，蓖麻鲜叶50份。将曼陀罗果实和蓖麻鲜叶粉碎，制得中草药包。
对比例5
(1)按重量份计，称取曼陀罗果实50份，蓖麻鲜叶50份。
(2)将曼陀罗果实使用70℃干燥3.5h，粉碎至50目，制得曼陀罗果实粉末；
(3)将蓖麻叶采用-4℃冷冻2.5h后粉碎，过50目筛，制得蓖麻叶粉末；
(4)将曼陀罗果实粉末和蓖麻叶粉末混合，制得混合粉末，使用pH值为5的水溶液浸泡60min，所述水溶液和混合粉末质量比为5:1，再加入质量比为1:1纤维素酶和半纤维素酶浸泡60min，所述纤维素酶和半纤维素酶总用量为混合粉末质量的1.5％，提取次数为2次，合并浸泡液；
(5)将浸泡液加热回流提取1.5h，收集滤液，浓缩至滤液含水量为28％，制得提取物。
试验例1
将实施例1-3和对比例1-5制得的提取物进行东莨菪碱和蓖麻碱含量测定。
东莨菪碱采用高效液相色谱仪进行检测，色谱条件为：
色谱柱：Sym-metrix ODS-H(4.6mm×250mm,5μm)；
流动相：乙腈-0.1％三氟乙酸(14:86)；
检测波长：252nm；
流速：1.0mL/min；
柱温：25℃；
进样量：10μL。
蓖麻碱采用高效液相色谱仪进行检测，色谱条件为：
色谱柱：C18(4.6mm×250mm,5μm)；
流动相：乙腈-水(15:85)；
检测波长：252nm；
流速：1.0mL/min；
柱温：25℃；
进样量：10μL。
表1有效成分含量检测结果
| 组别 | 东莨菪碱(mg/g) | 蓖麻碱(μg/ml) |
| 实施例1 | 0.3943 | 52.94 |
| 实施例2 | 0.3704 | 50.75 |
| 实施例3 | 0.3817 | 51.18 |
| 对比例1 | 0.1384 | 45.75 |
| 对比例2 | 0.1796 | 46.47 |
| 对比例3 | 0.1027 | 43.64 |
| 对比例4 | 0.2513 | 48.67 |
| 对比例5 | 0.1756 | 47.57 |
本发明中通过酸性水溶液水提，纤维素酶和半纤维素酶酶解、回流提取、氯仿萃取提取原料中的有效成分。结合试验例1临床试验结果分析，本发明的制备方法能够有效提取曼陀罗果实和蓖麻中治疗骨质增生的有效成分，提高本发明中药复合植物提取物的治疗效果。
典型病例：
病例1：
患者：王某，性别：女，年龄：57岁，地址：海南澄迈县库云镇，病症：右脚脚后跟骨质增生，痛感强烈，久坐后，站起来就疼痛，走10分钟后不痛，走30分钟左右痛感强烈。搬重物走路痛感强烈，病程1年以上，已经影响正常行走。使用本发明实施例1制成喷剂，1个疗程后，痛感消失，可正常行走。
病例2：
患者：杨某，性别：男，年龄：45岁，地址：海南省海口市，病症：颈椎骨质增生，增生压迫神经疼痛多年，颈椎处疼痛导致肩膀处疼痛，左右手无法正常抬高，疼痛感已经影响睡眠和正常生活。使用本发明实施例1制成喷剂，1个疗程后，痛感消失，可正常睡眠和生活。
病例3：
患者：宁某，性别：女，年龄：47岁，地址：海南省海口市，病症：腰椎骨质增生，增生压迫腰椎神经，疼痛多年，影响站立，需要弯腰行走，不能干重农活，躺着不适感大大减少，在药店买各类药贴，效果不明显。使用本发明实施例1制成喷剂，1个疗程后，痛感消失，可以正常行走、生活和干适量重活。
病例4：
患者：戴某，性别：男，年龄：63岁，地址：海南省儋州市，病症：膝关节骨质增生，疼痛多年，屈膝难度大，屈膝久坐后膝盖疼痛难忍，行走10分钟以上膝盖痛感强烈，影响正常生活，未就医，使用本发明实施例1制成喷剂，1个疗程后，痛感消失，可正常行走。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种外用治疗骨质增生的复合植物提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将曼陀罗果实烘干，粉碎，制得曼陀罗果实粉末，所述烘干为使用60℃-80℃干燥3-4h；
（2）将蓖麻叶冷冻后粉碎，制得蓖麻叶粉末，所述冷冻为采用-3~-5℃冷冻2-3h；
（3）将曼陀罗果实粉末和蓖麻叶粉末混合，制得混合粉末，使用pH值为4.5-5.5的水溶液浸泡50-70min，所述水溶液和混合粉末质量比为4-6:1，再加入纤维素酶和半纤维素酶泡50-70min，提取次数为1-2次，收集浸泡液，所述纤维素酶和半纤维素酶总用量为混合粉末质量的1%-2%，所述纤维素酶和半纤维素酶质量比为0.8-1.2:0.8-1.2；
（4）将浸泡液加热回流提取，加热回流时间为1-2h，收集滤液，浓缩至滤液含水量为25-30%；
（5）将浓缩后的滤液调节pH值至7-8，使用氯仿进行萃取，所述浓缩后的滤液和氯仿质量比为1：0.8-1.2，收集萃取液，制得复合植物提取物；
按重量份计，曼陀罗果实30-60份，蓖麻叶40-70份。
2.如权利要求1所述的外用治疗骨质增生的复合植物提取物的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，使用0.1-1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值。
3.如权利要求1所述的外用治疗骨质增生的复合植物提取物的制备方法，其特征在于，复合植物提取物制成膏剂、喷剂。
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