CN100362104C - 利用水稻转录因子基因OsNACx提高植物抗旱耐盐能力 - Google Patents

利用水稻转录因子基因OsNACx提高植物抗旱耐盐能力 Download PDF

Info

Publication number
CN100362104C
CN100362104C CNB2004100614086A CN200410061408A CN100362104C CN 100362104 C CN100362104 C CN 100362104C CN B2004100614086 A CNB2004100614086 A CN B2004100614086A CN 200410061408 A CN200410061408 A CN 200410061408A CN 100362104 C CN100362104 C CN 100362104C
Authority
CN
China
Prior art keywords
gene
osnacx
plant
rice
stock solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CNB2004100614086A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1796559A (zh
Inventor
胡红红
熊立仲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Huazhong Agricultural University
Original Assignee
Huazhong Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to CNB2004100614086A priority Critical patent/CN100362104C/zh
Application filed by Huazhong Agricultural University filed Critical Huazhong Agricultural University
Priority to EP05819963A priority patent/EP1835028B1/en
Priority to AT05819963T priority patent/ATE528398T1/de
Priority to BRPI0517493-7A priority patent/BRPI0517493A/pt
Priority to CA2592071A priority patent/CA2592071C/en
Priority to PCT/CN2005/002251 priority patent/WO2006066498A1/zh
Priority to ZA200700577A priority patent/ZA200705777B/xx
Priority to ES05819963T priority patent/ES2372607T3/es
Priority to AU2005318769A priority patent/AU2005318769B2/en
Priority to MX2007007567A priority patent/MX2007007567A/es
Priority to US11/722,298 priority patent/US7834244B2/en
Publication of CN1796559A publication Critical patent/CN1796559A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100362104C publication Critical patent/CN100362104C/zh
Priority to US12/901,974 priority patent/US8378173B2/en
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8273—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for drought, cold, salt resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Cultivation Of Plants (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明涉及植物基因工程技术领域。具体涉及一种水稻DNA片断的分离克隆、功能验证及其应用。所述的DNA片断包含水稻抗逆相关转录因子基因OsNACx，它赋予植物对干旱和盐胁迫的耐受能力。将该DNA片段与其外源调节序列直接转入植物体，转基因植物对干旱和盐胁迫的耐受能力显著增强。

Description

利用水稻转录因子基因OsNACx提高植物抗旱耐盐能力
技术领域
本发明涉及植物生物技术领域。具体涉及一种水稻DNA片段(基因)的分离克隆、功能验证和应用。所述的基因与植物抗旱和耐盐有关。将该基因的完整翻译区(Coding sequence)与花椰菜花叶病毒启动子(CaMV35S)结合后直接转入一般植物体，转基因植株的抗旱和耐盐能力显著提高。
背景技术
植物在生长的过程中会受到诸多环境因素的影响，干旱和盐害往往导致农作物的大规模减产，在许多地区是农业发展的瓶颈。培育抗逆性作物品种一直是农业科学技术研究的主要目标之一。为了抵抗或适应环境不利因素，植物体感受细胞外环境条件的变化并通过多种途径将其传递到细胞内，会诱导表达一些应答基因，产生一些使细胞免受干旱、高盐、低温等胁迫伤害的功能蛋白、渗透调节物质以及传递信号和调控基因表达的转录因子，从而对外界的变化做出相应的反应(Xiong等，Cell signaling during cold，drought and salt stress.Plant Cell.14(suppl)，S165-S183，2002)。而那些功能基因对环境做出反应的过程中能否正确表达受到调控因子的精细调节。转录因子作为一种调控基因，当生物体感受逆境胁迫时，能调控一系列下游基因的表达，从而增强植物体对逆境的耐受能力，达到抵抗不良环境条件胁迫的效果。Kawasaki等(2001)利用表达芯片分析了水稻在高盐胁迫下的早期表达谱，发现有大量的基因能被诱导或抑制，这些基因的诱导表达受到了转录因子的调节参与(Kawasaki S，Borchert C，Deyholos M，Wang H，Brazille S，Kawai K，Galbraith D and Bohnert H J.Gene expression profiles during theinitial phase of salt stress in rice.Plant Cell.2001，13：889-905.)。而在拟南芥中发现AP2/EREBP，Zinc finger，Myb，bZIP类转录因子家族在不同的逆境胁迫下，可诱导表达或被抑制(Shinozaki K等.Monitoring the Expression Pattern of 1300 Arabidopsis Genes underDrought and Cold Stresses by Using a Full-Length cDNA Microarray.Plant Cell.2001，13：61-72.)。因而认为这些转录因子家族在植物对逆境的应答过程中起着非常重要的调控作用。因此分离和鉴定对逆境起核心调控作用的转录因子，并用于作物抗逆境的遗传改良，对育种有着重要的意义。根据已有的拟南芥转录因子的信息，人们已在植物抗性改良方面作了尝试，利用DREB1A和DREB2A培育的转基因拟南芥植株，其低温耐性和干旱，高盐耐性都比野生型强(Liu Q等Two transcription factors，DREB1 and DREB2，with an EREBP/AP2 DNA domains separatetwo cellular signal thansduction pathways in drought-and low-temperature-responsivegene expression，respectively，in Arabidopsis.Plant Cell.1998，10：1391-1406.)。美国Michigan州立大学的Thomashow MF研究小组利用拟南芥CBF1基因，进行遗传转化，也培育出耐寒性增强的植株。
水稻是最重要的粮食作物之一，抗旱或耐盐的水稻对我们来说具有重要的意义。但目前在水稻中还没培育出耐旱或耐盐的转基因植株，因而找出与抗旱或耐盐的转录因子，培育耐旱和耐寒的品种对提高水稻产量具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是从水稻中分离克隆一个包含有抗旱相关转录因子基因完整编码区段的DNA片段，利用这个基因改良水稻或其它植物抗旱的能力。对这个基因进行结构分析其属于植物特异的转录因子NAC家族，因此被命名为OsNACx。
本发明涉及分离和应用一种包含OsNACx基因的DNA片段，该片段赋予植物在干旱等逆境条件下，增强耐受能力。其中，所述片段如序列表SEQ ID NO：1所示，或者基本上相当于SEQ IDNO：1所示的高度同源DNA序列，或者其功能相当于SEQ ID NO：1所示序列的亚片段。
可以采用已经克隆的OsNACx基因作探针，从cDNA和基因组文库中筛选得到本发明的基因或同源基因。同样，也可以采用PCR(polymerase chainreaction)技术，从基因组、mRNA和cDNA中扩增得到本发明的OsNACx基因以及任何感兴趣的一段DNA或与其同源的一段DNA。采用以上技术，可以分离得到包含OsNACx基因的序列，将这一序列与任何一种可以引导外源基因在植物中表达的表达载体转化植株，可获得对干旱，高盐胁迫耐受力得到增强的转基因植株。本发明的基因在构建到植物表达载体中时，在其转录起始核苷酸前加上任何一种强启动子或诱导型启动子。本发明的基因在构建到植物表达载体中时，也可使用增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子和邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的翻译。
携带有本发明OsNACx基因的表达载体可通过使用Ti质粒，植物病毒载体，直接DNA转化，微注射，电穿孔等常规生物技术方法导入植物细胞(Weissbach，1998，Method for PlantMolecular Biology VIII，Academy Press，New York，pp.411-463；Geiserson and Corey，1998，Plant Molecular Biology(2nd Edition)。
可使用包括本发明的OsNACx基因的表达载体转化宿主是包括水稻在内多种植物，培育抗旱，抗盐或抗寒的植物品种。
本发明基因是受逆境诱导表达的，因此其启动子是诱导型启动子，将本发明的启动子区段与任何感兴趣的基因同时连入合适的表达载体，并转化植物宿主，在逆境条件下可诱导表达基因，提高植物对逆境的耐受能力。
下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明。
附图说明
序列表SEQ ID No：1显示的是本发明分离克隆的包含有OsNACx基因编码区和启动子区的DNA片段序列。
图1：OsNACx基因分离和鉴定流程图。
图2：采用ClustalW软件(公开使用软件)将OsNACx基因与NAC类转录因子进行同源性比较结果。
图3：采用GENSCAN(http://genes.mit.edu/GENSCAN.html)基因结构预测软件对OsNACx基因完整序列分析的结果。图中：Gn代表基因编号；Ex代表外显子；Init代表基因起始端外显子；Term代表基因终止端外显子；Prom代表基本启动子；PlyA代表PolyA；S代表DNA链，其中“+”表示分析过程中输入的DNA序列链；Begin代表外显子、启动子或PolyA在输入DNA序列中的起始位置；End代表外显子、启动子或PolyA在输入DNA序列中的终止位置；Len代表外显子、启动子或PolyA的序列长度(bp)；Fr代表翻译阅读框(每条DNA序列有3个翻译阅读框)；I/Ac代表3’剪切位点分值；Do/T代表5’剪切位点分值；CodRg代表翻译区分值；P代表外显子概率；Tscr代表外显子分值。
图4：用Northern杂交检测OsNACx基因在干旱，高盐，低温和ABA等逆境胁迫不同时间点的表达水平。
图5：OsNACx基因在转基因植株中的表达情况，第一道为对照，其余为转基因独立转基因植株。
图6：成株期OsNACx超量表达转基因家系在田间干旱胁迫22天后的生长情况。
图7：幼苗期OsNACx超量表达转基因家系在高盐(200mM)胁迫12天后，转基因各家系的生长情况。图中：A为对照，B为转基因家系T40S19，C为转基因家系T40S24，D为转基因家系T40S26，E为转基因家系T40S8，F为转基因家系T40S25。
图8：OsNACx基因转化酵母细胞后，根据LacZ报告基因的表达情况来检测OsNACx基因的反式激活活性。
图9：OsNACx基因在植物细胞内的亚细胞定位及自身启动子表达。图8A为在荧光显微镜下检测抗性愈伤中OsNACx-GFP的表达情况；图8B为OsNACx-GFP在愈伤细胞中的亚细胞定位，其中(a)为愈伤切片在荧光染料碘化丙啶染色后观察的结果，(b)为绿色荧光下GFP表达的图像，(c)为红绿荧光合成的结果。
图10：是本发明的超量表达载体PCAMBIA1301结构示意图。
图11：是本发明的亚细胞定位载体PCAMBIA1381-EGFP结构示意图。
具体实施方式
本发明的前期工作获得了来源于水稻品种明恢63(一种中国普遍推广应用的一个水稻品种)的cDNA克隆04I24。该cDNA是OsNACx基因的cDNA片断，是一个抗旱相关转录因子。主要依据有以下几个方面：(1)采用cDNA芯片技术分析发现cDNA克隆04I24在水稻品种“中旱5号”(由中国上海农科院提供的一个公开使用的一个水稻品种)干旱胁迫处理15天表达量增加3.5倍。对其进行测序，分析发现其编码产物与OsNAC4同源性高达64％(图2)。鉴于该克隆表达量在干旱处理后的明显差异和其功能特征，认为04I24克隆所代表的基因在干旱下参与调控基因的表达。(2)对其进行逆境条件下的表达谱分析(图4)，发现在胁迫处理的过程中，表达量有明显的提高。(3)，将其全长基因在植株中超量表达，转基因植株的耐旱性和抗高盐能力大大增强(图6和图7)。这些结果都表明OsNACx基因是一个逆境相关调控基因，不仅参与调控抗旱，也参与调控抗高盐和寒冷。
以下实施例进一步定义本发明，并描述了本发明在上述前期工作基础上分离克隆包含有OsNACx基因完整编码区段的DNA片段以及验证OsNACx基因功能的方法(发明流程如图1所示)。根据以下的描述和这些实施例，本领域技术人员可以确定本发明的基本特征，并且在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明做出各种改变和修改，以使其适用各种用途和条件。
实施例1：分离克隆包含有OsNACx基因区段的DNA片段和OsNACx基因
通过水稻品种“中旱5号”(由中国上海农科院提供的一个公开使用的一个水稻品种)的干旱诱导基因表达谱分析，发现了一个受干旱强烈诱导(干旱胁迫后期表达量提高3.5倍以上)的EST(表达序列签)，经序列分析发现，该基因为转录因子家族NAC的一个成员，并且是5’端部分序列。通过查找日本水稻全长数据库(http://cdna01.dna.affrc.go.jp)，找到其所对应的CDNA克隆J012130D02，并将其定位于第三染色体BAC克隆AC135594上。根据BAC克隆AC135594序列，并预测其启动子区域，设计引物PF(5-CAGAATTCAAAGCAACAGTGGAGAGAAAAC，序列特异引物外加接头EcoRI位点)和FR(5-TAGGATCCCCGAGCCATCTCTTGAC，序列特异引物外外加接头BamHI)，将BAC克隆AC135594的9781-12321bp序列从“中旱5号”品种的总DNA中扩增出来。扩增产物就是本发明的序列1-2540bp(图3)。具体步骤为：提取水稻品种“中旱5号”叶片中的总DNA(CTAB法抽提，Zhang等，genetic diversity and differentiation of indica an japonicaricedetected by RFLP analysis，1992，Theor Appl Genet，83，495-499)作为模板进行扩增，反应条件为：94℃预变性3min；94℃ 30sec，55℃ 30sec，72℃ 3min，30个循环；72℃延伸5min。将扩增获得的PCR产物连入pGEM-T载体(购自Promega公司)，筛选阳性克隆并测序(ABI3730测序仪)，获得所需的包含有OsNACx基因区段和预测的自身启动子的DNA片段。该克隆命名为PGEM-NAC-PRO。
采用TRIZOL试剂(购自Invitrogen公司)从干旱胁迫处理的水稻品种“中旱5号”中提取叶片总RNA(提取方法根据上述TRIZOL试剂说明书)，利用反转录酶(购自Invitrogen公司)将其反转录合成cDNA第一链，反应条件为：65℃ 5min，42℃ 50min，70℃ 10min。根据cDNA克隆04I24的序列设计的巢式引物FF(5-TAGGTACCAGAAGCAAGCAAGAAGCGAT，加接头KpnI)和FR(5-TAGGATCCCCGAGCCATCTCTTGAC，外加接头BamHI)将其从反转录产物中扩增出来，反应条件为：94℃预变性2min；94℃ 30sec，55℃ 30sec，72℃ 2min，30个循环；72℃延伸5min。将扩增获得的PCR产物连入pGEM-T载体(购自Promega公司)，筛选阳性克隆并测序，获得所需的全长基因。该克隆命名为PGEM-OsNACx。
实施例2：检测水稻内源基因OsNACx的诱导表达
以水稻品种“中旱5号”为材料，在3叶期分别进行干旱、冷害和高盐胁迫以及ABA处理。干旱处理是用20％的聚乙二醇(商品名为PEG6000，一种)浸泡幼苗根部，0h，0.5h，1h，2h，4h，6h后取样。冷害处理是将幼苗置于4℃生长箱，0h，1h，8h，12h后取样。高盐胁迫是将幼苗根部浸泡在200mM/L NaCl溶液中并在0h，4h，8h，16h后取样。ABA处理是将幼苗根部浸泡在100μM/L ABA溶液中并在0h，0.5h，3h，6h，12h和24h后取样。提取叶片的总RNA(Trizol试剂，Invitrogen)后按《分子克隆》(科学出版社，北京，1999年版)有关实验操作方法进行RNA转膜，并以OsNACx为探针做Northern杂交。结果表明，本发明克隆的基因OsNACx能被干旱、冷害、高盐和ABA诱导表达(如图4所示)，是一个与逆境相关的转录因子。
实施例3，OsNACx基因超量表达载体的构建，转化
根据实施例2的结果，知道本发明基因OsNACx是能被干旱、冷害、高盐和ABA诱导表达的，为了能更好地阐明此基因的功能，申请人将其在水稻中超量表达，从转基因植株的表型来验证。方法是：首先将实施例1中得到的阳性克隆pGEM-OsNACx质粒用BamHI和KpnI双酶切，回收外源片段；同时，用同样的方法酶切携带双烟草花叶病毒启动子35S的的遗传转化载体pD35S1301(pD35S1301是在国际上常用的植物遗传转化载体pCAMBIA1301(来自澳大利亚CAMBIA实验室(Center for the Application of Molecular Biology to International Agriculture)基础上改建的，携带具有组成型和超量表达特征的双烟草花叶病毒启动子35S的农杆菌介导的遗传转化载体)，酶切完毕，用氯仿∶异戊醇(24∶1)抽提，纯化酶切产物。用包含OsNACx基因的酶切片段和酶切的pD35S1301载体(如附图10所示)做连接反应，转化大肠杆菌DH10β(菌株购自Invitrogen公司)。通过酶切筛选阳性克隆，获得转化载体。
通过农杆菌介导的水稻遗传转化体系将其导入到水稻品种中花11(中国水稻研究所提供的一个公开使用的一个水稻品种)中，经过预培养、侵染、共培养、筛选具有潮霉素抗性的愈伤、分化、生根、练苗移栽，得到转基因植株。农杆菌介导的水稻(粳稻亚种)遗传转化体系应用Hiei等人报道的方法(参见：Efficient transformation of rice，Oryza sativa L.，mediated byAgrobacterium and sequence analysis of the boundaries of the T-DNA，1994，Plant Journal6：271-282)基础上进行优化。主要步骤和试剂如下：
(1)试剂和溶液缩写
本发明中培养基所用到的植物激素的缩写表示如下：6-BA(6-BenzylaminoPurine，6-苄基腺嘌呤)；CN(Carbenicillin，羧苄青霉素)；KT(Kinetin，激动素)；NAA(Napthaleneacetic acid，萘乙酸)；IAA(Indole-3-acetic acid，吲哚乙酸)；2，4-D(2，4-Dichlorophenoxyacetic acid，2，4-二氯苯氧乙酸)；AS(Acetosringone，乙酰丁香酮)；CH(Casein Enzymatic Hydrolysate，水解酪蛋白)；HN(Hygromycin B，潮霉素)；DMSO(Dimethyl Sulfoxide，二甲基亚砜)；N6max(N6大量成分溶液)；N6mix(N6微量成分溶液)；MSmax(MS大量成分溶液)；MSmix(MS微量成分溶液)
(2)主要溶液配方
1)N6培养基大量元素母液[以10倍浓缩液(10X)计]的配制：
硝酸钾(KNO3)           28.3g
磷酸二氢钾(KH2PO4)     4.0g
硫酸铵((NH4)2SO4)      4.63g
硫酸镁(MgSO4·7H2O)    1.85g
氯化钙(CaCl2·2H2O)    1.66g
逐一溶解，然后室温下用蒸馏水定容至1000ml。
2)N6培养基微量元素母液[以100倍浓缩液(100X)计]的配制：
碘化钾(KI)             0.08g
硼酸(H3BO3)            0.16g
硫酸锰(MnSO4·4H2O)    0.44g
硫酸锌(ZnSO4·7H2O)    0.15g
室温下溶解并用蒸馏水定容至1000ml。
3)铁盐(Fe2EDTA)贮存液(以100X)计的配制
准备800ml双蒸水并加热至70℃，加入乙二铵四乙酸二钠(Na2EDTA·2H2O)3.73克，充分溶解后在70℃水浴中保持2小时，用蒸馏水定容至1000ml，4℃保存备用。
4)维生素贮存液(以100X计)配制
烟酸(Nicotinic acid)     0.1g
维生素B1(Thiamine HCl)   0.1g
维生素B6(Pyridoxine HCl) 0.1g
甘氨酸(Glycine)          0.2g
肌醇(Inositol)           10g
加蒸馏水定容至1000ml，4℃保存备用。
5)MS培养基大量元素母液(以10X计)的配制
硝酸铵(NH4NO3)    16.5g
硝酸钾            19.0g
磷酸二氢钾        1.7g
硫酸镁            3.7g
氯化钙            4.4g
室温下溶解并用蒸馏水定容至1000ml。
6)MS培养基微量元素母液(以100X计)的配制
碘化钾                 0.083g
硼酸                   0.62g
硫酸锰                 0.86g
钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)  0.025g
硫酸铜(CuSO4·5H2O)    0.0025g
室温下溶解并用蒸馏水定容至1000ml。
7)2，4-D贮存液(以1mg/ml计)的配制：
秤取2，4-D 100mg，用1ml 1N氢氧化钾溶解5分钟，然后加10ml蒸馏水溶解完全后用蒸馏水定容至100ml，于室温下保存。
8)6-BA贮存液(以1mg/ml计)的配制：
秤取6-BA 100mg，用1ml 1N氢氧化钾溶解5分钟，然后加10ml蒸馏水溶解完全后用蒸馏水定容至100ml，室温保存。
9)萘乙酸(NAA)贮存液(以1mg/ml计)的配制：
秤取NAA 100mg，用1ml 1N氢氧化钾溶解5分钟，然后加10ml蒸馏水溶解完全后用蒸馏水定容至100ml，4℃保存备用。
10)吲哚乙酸(IAA)贮存液(以1mg/ml计)的配制：
秤取IAA 100mg，用1ml 1N氢氧化钾溶解5分钟，然后加10ml蒸馏水溶解完全后定容至100ml，4℃保存备在一个大三角瓶中加入300ml蒸馏水和硫酸铁(FeSO4·7H2O)2.78g。在另一个大三角瓶中加入300ml蒸馏水备用。
11)葡萄糖贮存液(以0.5g/ml计)的配制：
秤取葡萄糖125g，然后用蒸馏水溶解定容至250ml，灭菌后4℃保存备用。
12)AS贮存液的配制：
秤取AS 0.392g，DMSO 10ml，分装至1.5ml离心管内，4℃保存备用。
13)1N氢氧化钾贮存液
秤取氢氧化钾5.6g，并用蒸馏水溶解定容至100ml，室温保存备用。
(3)用于水稻遗传转化的培养基配方
1)诱导培养基：
N6max母液(10X)          100ml
N6mix母液(100X)         10ml
Fe2+EDTA贮存液(100X)    10ml
维生素贮存液(100X)    10ml
2，4-D贮存液          2.5ml
脯氨酸(Proline)       0.3g
CH                    0.6g
蔗糖(Sucrose)         30g
Phytagel              3g
加蒸馏水至900ml，1N氢氧化钾调节pH值到5.9，煮沸并定容至1000ml，分装到50ml三角瓶(25ml/瓶)，封口灭菌。
pH＝5.8
2)继代培养基：
N6max母液(10X)        100ml
N6mix母液(100X)       10ml
Fe2+EDTA贮存液(100X)  10ml
维生素贮存液(100X)    10ml
2，4-D贮存液          2.0ml
脯氨酸                0.5g
CH                    0.6g
蔗糖                  30g
Phytagel              3g
加蒸馏水至900ml，1N氢氧化钾调节pH值到5.9，煮沸并定容至1000ml，分装到50ml三角瓶(25ml/瓶)，封口灭菌。
3)预培养基：
N6max母液(10X)        12.5ml
N6mix母液(100X)       1.25ml
Fe2+EDTA贮存液(100X)  2.5ml
维生素贮存液(100X)    2.5ml
2，4-D贮存液          0.75ml
CH                    0.15g
蔗糖                  5g
琼脂粉(Agarose)       1.75g
加蒸馏水至250ml，1N氢氧化钾调节pH值到5.6，封口灭菌。
使用前加热溶解培养基并加入5ml葡萄糖贮存液和250μl AS贮存液，分装倒入培养皿中(25ml/皿)。
pH值＝5.6
4)共培养基：
N6max母液(10X)          12.5ml
N6mix母液(100X)         1.25ml
Fe2+EDTA贮存液(100X)    2.5ml
维生素贮存液(100X)      2.5ml
2，4-D贮存液            0.75ml
CH                      0.2g
蔗糖                    5g
琼脂粉                  1.75g
加蒸馏水至250ml，1N氢氧化钾调节pH值到5.6，封口灭菌。
使用前加热溶解培养基并加入5ml葡萄糖贮存液和250μl AS贮存液，分装倒入培养皿中(25ml/每皿)。
5)悬浮培养基：
N6max母液(10X)        5ml
N6mix母液(100X)       0.5ml
Fe2+EDTA贮存液(100X)  0.5ml
维生素贮存液(100X)    1ml
2，4-D贮存液          0.2ml
CH                    0.08g
蔗糖                  2g
加蒸馏水至100ml，调节pH值到5.4，分装到两个100ml的三角瓶中，封口灭菌。使用前加入1ml葡萄糖贮存液和100μl AS贮存液。
6)选择培养基的通用培养基
N6max母液(10X)          25ml
N6mix母液(100X)         2.5ml
Fe2+EDTA贮存液(100X)    2.5ml
维生素贮存液(100X)      2.5ml
2，4-D贮存液            0.625ml
CH                      0.15g
蔗糖                 7.5g
琼脂粉               1.75g
加蒸馏水至250ml，调节pH值到6.0，封口灭菌。
使用前溶解培养基，加入250μl潮酶素(50mg/ml)和400ppm羧苄青霉素(CN)，分装倒入培养皿中(25ml/皿)。
7)预分化培养基：
N6max母液(10X)          25ml
N6mix母液(100X)         2.5ml
Fe2+EDTA贮存液(100X)    2.5ml
维生素贮存液(100X)      2.5ml
6-BA贮存液              0.5ml
KT贮存液                0.5ml
NAA贮存液               50μl
IAA贮存液               50μl
CH                      0.15g
蔗糖                    7.5g
琼脂粉                  1.75g
加蒸馏水至250ml，1N氢氧化钾调节pH值到5.9，封口灭菌。
使用前溶解培养基，加入250μl潮酶素(50mg/ml)和200ppm羧苄青霉素(CN)，分装倒入培养皿中(25ml/m)。
8)分化培养基：
N6max母液(10X)        100ml
N6mix母液(100X)       10ml
Fe2+EDTA贮存液(100X)  10ml
维生素贮存液(100X)    10ml
6-BA贮存液            2ml
KT贮存液              2ml
NAA贮存液             0.2ml
IAA贮存液             0.2ml
CH                    1g
蔗糖                  30g
Phytagel              3g
加蒸馏水至900ml，1N氢氧化钾调节pH值到6.0。
煮沸并定容至1000ml，分装到50ml三角瓶(50ml/瓶)，封口灭菌。
9)生根培养基：
MSmax母液(10X)        50ml
MSmix母液(100X)       5ml
Fe2+EDTA贮存液(100X)  5ml
维生素贮存液(100X)    5ml
蔗糖                  30g
Phytagel              3g
加蒸馏水至900ml，1N氢氧化钾调节pH值到5.8。
煮沸并定容至1000ml，分装到生根管中(25ml/管)，封口灭菌。
(4)农杆菌介导的遗传转化步骤(对上述培养基的具体应用举例)
3.1愈伤诱导
(1)将成熟的“中花11”水稻种子去壳，然后依次用70％的乙醇处理1分钟，0.15％氯化汞(HgCl2)种子表面消毒15分钟；
(2)用灭菌水洗种子4-5次；
(3)将种子放在以上所述的诱导培养基上；
(4)将接种后的培养基置于黑暗处培养4周，温度25±1℃，得到水稻愈伤组织。
3.2愈伤继代
挑选亮黄色、紧实且相对干燥的胚性愈伤，放于如上所述的继代培养基上黑暗下培养2周，温度25±1℃，得到水稻继代的愈伤组织。
3.3预培养
挑选紧实且相对干燥的水稻胚性愈伤组织，放于如上所述的预培养基上黑暗下培养2周，温度25±1℃。
3.4农杆菌培养
(1)在带有对应抗性选择的LA培养基(一种公开使用的培养基)上预培养农杆菌EHA105(购自Invitrogen公司)48小时(两天)，培养温度28℃；
(2)将农杆菌转移至如上所述的悬浮培养基里，28℃摇床上培养2-3小时。
3.5农杆菌侵染
(1)将预培养的愈伤组织转移至灭菌好的瓶子内；
(2)调节所述的农杆菌的悬浮液至OD6000.8-1.0；
(3)将水稻愈伤组织在农杆菌悬浮液中浸泡30分钟；
(4)将步骤(3)的愈伤组织转移至灭菌好的滤纸上吸干；然后放置在如上所述的共培养基上培养72小时(3天)，培养温度19-20℃。
3.6愈伤组织洗涤和选择培养
(1)用灭菌水洗涤水稻愈伤组织至看不见农杆菌；
(2)将步骤(1)的水稻愈伤组织浸泡在含400ppm羧苄青霉素(CN)的灭菌水中30分钟；
(3)将步骤(2)的水稻愈伤组织转移至灭菌好的滤纸上吸干；
(4)将步骤(3)的水稻愈伤组织转移至如上所述的选择培养基上选择培养2-3次，每次培养2周。(将上述所配制的选择培养基加热融化后，冷却至60℃左右加入适当的潮霉素和羧苄青霉素，第一次选择培养基潮霉素筛选浓度为400mg/l，羧苄青霉素浓度为400ppm；第二次及以后选择培养基潮霉素筛选浓度为250mg/l，羧苄青霉素浓度为250ppm)
3.7分化
(1)将上述在选择培养基得到的水稻抗性愈伤转移至预分化培养基上黑暗处培养5-7周；
(2)将步骤(1)得到的预分化培养的水稻愈伤组织转移至分化培养基上，光照下培养，培养温度26℃，得到转基因水稻植株。
3.8生根
(1)剪掉转基因水稻植株分化时产生的根；
(2)然后将其转移至生根培养基中光照下培养2-3周，培养温度26℃。
3.9移栽
洗掉转基因水稻植株根上的残留培养基，将具有良好根系的幼苗转入温室，同时在最初的几天保持水分湿润。
将获得的转基因水稻植株被命名为T40SN(其中：T40S为载体编号，N表示转化品种为中花11)。本发明总共获得独立转基因水稻植株36株。
实施例4：OsNACx基因转基因T1家系在田间的干旱筛选
为了验证转基因水稻植株的抗旱性是否增强以及是否与转入的OsNACx基因有关，本发明采用Northern杂交技术对部分转基因水稻植株中OsNACx基因的表达进行检测(图5为Northern杂交(方法同实施例2)的结果，并对本发明T1代植株进行了田间抗旱筛选。具体步骤如下：T1代各家系的种子在含有潮霉素的水溶液(50mg/ml)浸种，去除不发芽种子，秧田播种，5叶期插秧苗于抗旱大棚沙田中，每家系种植20单株，分两行。到成株期抽穗前3周断水，图6是断水22天后，转基因家系和对照在田间的干旱筛选情况。实验表明，转基因植株的抗旱性明显高于对照植株，对该两家系进行了相对含水量的检测，实测相对含水量的数据分别为83.9％和85.2％，可见相对含水量差异并不大。该结果说明OsNACx基因的确与干旱相关，其超量表达能提高转基因植物的抗旱性。为了更充分说明本发明基因能提高植物抗旱性，申请人还分析了干旱胁迫后转基因家系的结实率。统计数据表明，超量表达的转基因植株的结实率远高于对照，其结实率从1.8％提高到25％(如表1所示)，而分蘖数和千粒重并没有明显差异，从另一面说明转基因水稻植株的抗性增强确实与转入的OsNACx基因有关。
表1  干旱胁迫后转基因家系和对照的结实率比较
 水稻家系   考察单株数   单株平均结实率(％)   标准差   与对照相比差异显著性
 CKT40S8T40S24T40S25T40S19T40S21     555555     1.7824.0423.9722.9731.8723.34     0.713.393.463.146.062.77     -极显著(p＜0.001)极显著(p＜0.001)极显著(p＜0.001)极显著(p＜0.001)极显著(p＜0.001)
实施例5：OsNACx基因转基因T1家系苗期抗盐筛选
在实施例4中已证明本发明基因OsNACx转基因植株成株期的抗旱性极显著高于对照，为了验证OsNACx转基因植株是否还具有其他的抗逆效果，本实施例中对其进行了苗期的高盐胁迫处理。具体方法如下：T1代转基因超表达植株选用5个家系，在加潮霉素选择下(50mg/ml)浸泡T1代种子，去除不发芽种子，催芽后直播到小圆桶中(试验用的土壤为南方水稻土与粗沙按2∶3混合而成，每圆桶等量均匀沙土加等体积水，水自行渗漏确保土壤的紧实度一致)，试验设三次重复。对健康生长的5叶期的植株进行高盐胁迫(200mM NaCl溶液)直至对照植株全部萎焉死亡，调查植株的成活率(单株绿叶面积在20％以下的植株通常难以继续存活，视为枯死)。图7显示胁迫处理12天后对照植株已全部死亡情况下的各超量表达转基因家系的生长状况，表2是对照植株已全部死亡时调查的各超量表达转基因家系的存活率，各转基因家系的存活率普遍高于80％，表明本发明基因OsNACx转基因植株能显著提高植物的抗高盐性。
表2  高盐胁迫12天后各转基因家系植株的存活率(％)
家系   重复数  存活数/总数  存活率
T40S25     3  21/24  23/27  24/29  85.1±2.4
T40S24     3  20/26  24/28  23/27  82.6±4.9
T40S21     3  18/21  21/24  19/26  82.1±7.9
T40S8     3  25/27  24/28  26/30  88.3±3.7
T40S19     3  21/23  25/27  24/29  88.9±5.3
实施例6：OsNACx基因3’端具有转录活性验证
由于本发明基因为诱导型转录因子，本应具有转录激活功能，在逆境下激活下游基因表达，从而产生抗性。为了验证本发明基因OsNACx是否具有转录激活功能，或具体哪一区域具有这激活功能，本实例利用酵母体系进行了反式激活实验来验证。首先构建了一系列的OsNACx基因和部分缺失突变子到酵母GAL4-DB融合表达载体pDEST32(购自Invitrogen公司)，将其转化酵母细胞Y187(购自CLONTHCH公司)，经β-Galactosidase酶活性实验，酵母是否显蓝色确定报告基因LacZ的表达，从而确定基因是否具有激活功能。实验结果表明OsNACx基因确实具有转录激活功能，其激活功能域位于基因3’端，并且从243到273的氨基酸序列对本基因具有转录激活功能是必不可少的。图8显示了本发明基因OsNACx及其缺失突变体转化酵母细胞后报告基因LacZ的表达情况，其中CK表示空载体pDEST32转化酵母细胞Y187；Full表示OsNACx基因全长融合到pDEST32转化酵母细胞Y187；Mut1表示OsNACx基因1-166AA片断(NAM结构域)融合到pDEST32转化酵母细胞Y187；Mut2表示OsNACx基因182-316AA片断融合到pDEST32转化酵母细胞Y187；Mut3表示OsNACx基因182-273AA片断融合到pDEST32转化酵母细胞Y187；Mut4表示OsNACx基因182-243AA片断融合到pDEST32转化酵母细胞Y187。
具体实施步骤为：
1.将OsNACx基因全长及部分缺失突变子融合到酵母表达载体pDEST32(购自Invitrogen公司)。
根据全长CDNA克隆xx序列按照pDEST32载体的读码框设计基因引物(利用软件primer5.0)，分别为
DBF：5-AGAAGCAAGCAAGAAGCGAT
DBR：5-CCGAGCCATCTCTTGAC
DBM1R：5-TCCGACACAGCACCCAATCATC
DBM3R：5-T ATCGTCGTAGCTCAGGTCCA
DBM4R：5-C TTTCTTGGGCACCATCAT
DBM5R：5-A CGGGAAGGGGTCGTTGTCCA
DBMF：5-CTGTACAACAAGAAGAACG
然后在引物DBF和DBMF的前端加上接头attB1(5-ggggacaagtttgtacaaaaaagcaggct)，在引物DBR，DBM1R，DBM3R，DBM4R和DBM5R前加上接头attB2(5-ggggaccacttt gtacaagaaagctgggt)。这样在反应条件为：94℃预变性3min；94℃ 30sec，55℃ 30sec，72℃ 2min，30个循环；72℃延伸5min的情况下，引物组合DBF和DBR的产物为DBNACF(1-316AA)，DBF和DBM1R的产物为Mut1(1-182AA)，DBMF和DBR的产物为Mut2(182-316AA)，DBMF和DBM3R的产物为Mut3(182-273AA)，DBMF和DBM4R的的产物为Mut4(182-243AA)。将得到的PCR产物经过PEG8000纯化后与中间载体pDONR221(购自Invitrogen公司)进行BP重组反应，反应体系为5ul，PCR产物200ng，pDONR221 50ng，5 X BP Clonase Reaction Buffer 2ul，BP Clonase Mix 2ul，置于25℃5个小时左右，转化大肠杆菌DH10β(购自Invitrogen公司)，筛选阳性克隆，然后将所需阳性克隆质粒通过LR重组反应将其携带的基因片段融合到酵母表达载体pDEST32，步骤为：BP反应阳性质粒100ng，pDEST32 50ng，5 X LR Clonase Buffer 2ul，LR Clonase Mix 2ul，25℃ 5个小时左右，转化大肠杆菌DH10β(购自Invitrogen公司)，筛选阳性克隆。
2.醋酸锂(LiAc)法酵母感受态的制备及转化(CLONTECH，Yeast Protocols Handbook)
1)试剂及其配方
A，YPD medium
20g  Difco peptone
10g  Yeast extract
20g  glucose
用蒸馏水定容至1L，灭菌15分钟
B，SD/Leu medium
6.7g Yeast nitrogen base without amino acids
20g Agar powder
20g glucose
0.69g-Leu DO Supplement(购于CLONTECH公司)
用蒸馏水定容至1L，灭菌15分钟
C，10 TE buffer：0.1M Tris-HCl，10mM EDTA PH7.5，灭菌
D，10 LiAc：1M lithium acetate，PH7.5，灭菌
E，PEG/LiAc solution
    Final Conc.   To prepare 10ml of solution
 PEG4000TE bufferLiAc     40％1X1X   8ml of 50％PEG1ml of 10X TE1ml of 10X LiAc
2)步骤：
A，先用1ml YPD溶液将直径大小为2-3mm的酵母单菌落打散，转移到含有10ml YPD培养基的三角瓶中，
B，在转速为250rpm下，30℃培养16-18小时，使得OD600＞1.5
C，取5ml左右上述菌液到另一含有50mlYPD培养基的三角瓶，检测浓度使OD600＝0.2-0.3D，30℃培养3小时(230rpm)，此时，OD600＝0.4-0.6，如果OD600＜0.4，可能培养有问题
E，将菌液至于50ml离心管，室温1000xg离心5分钟，
F，去掉上清，用灭菌的双蒸水重悬细胞，室温1000xg离心5分钟，
G，去上清，用1ml现配的1x TE/1x LiAc将酵母细胞混匀
H，将200ng融合质粒DNA至于1.5-ml离心管，加入100ul酵母感受态细胞混匀，加入600ul PEG/LiAc，高速离心混匀，30℃培养30min(200rpm)
I，加入70ul DMSO(100％)，轻柔上下颠倒数次，42℃水浴15min后置于冰上2min
J，室温14000rpm离心5秒，去上清，用500ul 1x TE buffer打散细胞。
K，取100ul转化细胞均匀涂于-Leu/SD平皿，在30℃培养箱倒置培养2-4天直至克隆出现。
3，用β-Galactosidase实验中报告基因LacZ表达情况验证OsNACx基因及其缺失突变体的转录活性。
1)试剂及配方
A，Z buffer
Na2HPO4·7H2O    16.1g/L
NaH2PO4·H2O     5.5g/L
KCl              0.75g/L
MgSO4·7H2O      0.246g/L
调节PH到7.0，灭菌
B，X-gal stock solution(20mg/ml)
C，Z buffer/X-gal solution
100ml Z buffer：
0.27ml β-mercaptoethanol
1.67ml X-gal stock solution
2)步骤：
A，将转化的克隆长到1-3mm(30℃，2-4天)
B，将合适大小的圆形无菌Watman滤纸放置于10cm无菌平皿，加入2.5-5ml左右Zbuffer/X-gal solution，将其润湿，忌气泡。
C，用镊子将另一张干净无菌滤纸置于长有克隆的平皿上，轻压滤纸，使克隆粘附到滤纸上
D，当滤纸已湿润，用镊子揭开滤纸，将粘附有克隆的面朝上，放置于液氮10秒后，将其置于室温解冻，这样冻融的目的是使酵母细胞破碎
F，小心将这滤纸克隆面朝上置于先前润湿的滤纸上，忌气泡
G，将滤纸在30℃放置(30min-8hr)，根据蓝色斑出现的情况来判断基因是否具有激活功能。
实施例7，OsNACx基因的启动子功能验证及其亚细胞定位
为了确定OsNACx基因在细胞的表达部位及自身启动子(1-1374bp)的活性，进一步进行了GFP-NLS(核定位信号)融合蛋白构建，即根据GFP的表达情况来确定基因的表达模式。首先参照前人发表的关于拟南芥NAC基因(Miki Fujita，Kazuo Shinozaki et al，A Dehydration-inducedNAC protein，RD26，is involved in a novel ABA-dependent stress-signaling pathway.Plant J(2004)39，863-876)分析该基因的核定位信号(NLS)可能位于79-90AA或116-182AA，根据此序列与GFP融合后在细胞内的表达部位可确定该基因的亚细胞定位。将本发明序列的1-1641bp片段(包括ATG前1374bp和基因1-90AA，即包含启动子区和核定位信号)融合到pCAMBIA1381-GFP载体上，目的在于，一是希望该片段的1-1374bp已包含完整的启动子，可启动基因的表达；二是包含该基因的1-90AA序列(其中已包含核定位信号)，即可根据GFP的表达部位来确定该基因在细胞的表达情况。pCAMBIA1381-EGFP载体是在国际上通用的植物遗传转化载体pCAMBIA1381基础上改建的(如附图11所示)，将其携带的GUS基因换成GFP基因，GFP前不带有任何启动子，pCAMBIA1381载体来自澳大利亚CAMBIA实验室公开使用(Center forthe Application of Molecular Biology to International Agriculture)。
融合基因载体构建的具体方法如下：设计引物PF(5-cagaattcaaagcaacagtggagagaaaac，加接头EcoRI位点)和PR(5-caaagcttgcgtgacccattaggatactt，加入接头HindIII)，以“中旱5号”总DNA或上述实施例1中构建的载体pGEM-NAC-PRO为模板，通过扩增程序(94℃预变性3min；94℃ 30sec，55℃ 30sec，72℃ 2min，30个循环；72℃延伸5min)将其扩增出来，扩增产物通过EcoRI和HindIII双酶切，连入已进行同样双酶切的pCAMBIA1381-EGFP载体。将融合载体p1381-GFP-promoter-NLS用农杆菌介导的遗传转化法转化水稻愈伤(其具体方法同实施例3所述)，在潮霉素(其具体方法同实施例3所述)的选择压力下得到抗性愈伤，在荧光显微镜下观察到GFP表达(如图9A所示)，表明该序列的1-1374bp已包含完整的启动子，可启动基因的表达。为了将其在细胞内定位，将表达的抗性愈伤制成切片，并在共聚焦显微镜下观察GFP在细胞内的表达情况。图9B显示在共聚焦显微镜下GFP只在细胞核中表达，说明1-90AA的序列已包含NLS，可将GFP定位在细胞核，即OsNACx蛋白定位在细胞核。本实例证明本发明序列的1-1374bp片段包含完整的启动子，可诱导基因的表达；而且OsNACx的79-90AA推测就是NLS，可将OsNACx蛋白定位在细胞核内。
EQUENCE LISTING
<110>华中农业大学
<120>利用水稻转录因子基因OsNACx提高植物抗旱耐盐能力
<130>
<141>2004-12-20
<160>1
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>2540
<212>DNA
<213>水稻(Oryza sativa)
<220>
<221>gene
<222>(1)..(2540)
<223>
<220>
<221>Intron
<222>(1848)..(1976)
<223>
<220>
<221>exon
<222>(1977)..(2453)
<223>
<220>
<221>exon
<222>(1374)..(1847)
<223>
<400>1
ccaaagcaac agtggagaga aaactaaaaa aaagagaatg cgttagaata tgtcgtggaa     60
taatgggagg ggataagcga tgctgaggta gcggccgaat cttcccgacg cacgccgaac    120
atgcatgata cgagtatatg atttgatttg atgatttttc tggtgccggt accttgaggt    180
tttttttctg tcctgactcc tgagatgaag gaaaaggctc gatcgatgat gcgatcggcg    240
atgatgagag tggtggttcc aagtaacgtg ggggaaatct cgtctctcgg cgcaatgcta    300
taaacatgcg gatgaccatc accggagtaa gtagagtaat ttagtcgtac ttgtacctac    360
tggaacagtg accacccaac gagcctcaca ttcactgaat catactagtc gtactactac    420
tactacaaca ctggaacgga tagaaaacga taaatgacgc cgcataatcg acaacgcatg    480
ggaccaaact catgcttatc tgctcttgta ctcgtgctta tctcaaatcc acctcatttt    540
acatgcccct ttttgccaca gcaactttcg gtcccatcat ggcatatttg caaacgcaaa    600
atagtttata aataaaattt tttatatgcg tgtttttata gtgatataaa agcaacggtt    660
gaaagataaa tttcgataaa aaaaccttaa aatcagcttt aaatttaaga ttaaaaattt    720
aaattttgac tgataataag tattagcgaa aagatgatgt cctaatttcc ccttttcgct    780
ccaccccatg acgttgtccg acatctaaat actactccta atcaacttgc aacctaagat    840
aatttagtat agtacacgta gtacagcctt tttggagcag taacaaaaga cgcgcgggcc    900
acacgtccgt gcagttgcag ccgccgctgc atccccaccg cgaaaaccac ggcaaaattt    960
agcggcggcc gctgtggccg cctcaccccc ccgcgcctgg ctgtccacag caacgcacgc   1020
acccgcaccc gcaccgccga cccgaccgcg gcgccgagct gtcccaattc tgctgacctc   1080
ggccgtgacg ccatcctcgc acgggtccaa tccccgacgc aggaggtggc ctccttcctc   1140
gaaacccacc acctcaccac cacacgtgcc ccatttcatc ccatctcctc ttcttcccgc   1200
agccgccgac tccgctttga ctcatccccc cgccgccgaa ccttccagac tacctccctc   1260
tatatatccc cccctccgcc cgccatttct ccccattcga gaaatccctc acaacccaca   1320
acattttcaa acaacgcaaa gcagtagcag cagcgagaag caagcaagaa gcg atg      1376
                                                  Met
                                                  1
ggg atg ggg atg agg agg gag agg gac gcg gag gcg gag ctg aac ctg     1424
Gly Met Gly Met Arg Arg Glu Arg Asp Ala Glu Ala Glu Leu Asn Leu
          5                10               15
ccg ccg ggg ttc agg ttc cac ccc acg gac gac gag ctg gtg gag cac     1472
Pro Pro Gly Phe Arg Phe His Pro Thr Asp Asp Glu Leu Val Glu His
       20              25                30
tac ctg tgc agg aag gcg gcg ggg cag cgc ctg ccg gtg ccg atc atc     1520
Tyr Leu Cys Arg Lys Ala Ala Gly Gln Arg Leu Pro Val Pro Ile Ile
   35                40               45
gcc gag gtg gat ctc tac aag ttc gac ccg tgg gat ctg ccc gag cgc      1568
Ala Glu Val Asp Leu Tyr Lys Phe Asp Pro Trp Asp Leu Pro Glu Arg
50               55               60               65
gcg ctg ttc ggc gcc agg gag tgg tac ttc ttc acc ccg cgg gat cgc      1616
Ala Leu Phe Gly Ala Arg Glu Trp Tyr Phe Phe Thr Pro Arg Asp Arg
             70               75               80
aag tat cct aat ggg tca cgc ccc aac cgc gcc gcc ggc aac ggg tac      1664
Lys Tyr Pro Asn Gly Ser Arg Pro Asn Arg Ala Ala Gly Asn Gly Tyr
          85               90               95
tgg aag gcc acc ggc gcc gac aag ccc gtc gcg ccg cgg ggg cgc acg      1712
Trp Lys Ala Thr Gly Ala Asp Lys Pro Val Ala Pro Arg Gly Arg Thr
       100              105              110
ctt ggg atc aag aag gcg ctc gtg ttc tac gcc ggc aag gcg ccg cga      1760
Leu Gly Ile Lys Lys Ala Leu Val Phe Tyr Ala Gly Lys Ala Pro Arg
   115              120               125
ggg gtc aag act gat tgg atc atg cat gag tac cgg ctc gcc gat gct      1808
Gly Val Lys Thr Asp Trp Ile Met His Glu Tyr Arg Leu Ala Asp Ala
130              135              140               145
ggc cgc gcc gcc gcg ggc gcc aag aag gga tct ctc agg gtaagcttag       1857
Gly Arg Ala Ala Ala Gly Ala Lys Lys Gly Ser Leu Arg
             150              155
ctcagattca tccgaattac tagcaatgat ccttgcttcg atcgaagatt attcggtggg    1917
agtgatgatc gataattgga tcgtggtctg atctgatctg gtgtgaattg tttgtgcag     1976
ttg gat gat tgg gtg ctg tgt cgg ctg tac aac aag aag aac gag tgg      2024
Leu Asp Asp Trp Val Leu Cys Arg Leu Tyr Asn Lys Lys Asn Glu Trp
    160             165              170
gag aag atg cag cag ggg aag gag gtg aag gag gag gcg tcc gac atg      2072
Glu Lys Met Gln Gln Gly Lys Glu Val Lys Glu Glu Ala Ser Asp Met
175                  180          185               190
gtt acg tcg cag tcg cac tcg cac acc cac tcg tgg ggc gag acg cgc      2120
Val Thr Ser Gln Ser His Ser His Thr His Ser Trp Gly Glu Thr Arg
             195              200               205
acg ccg gag tcg gag atc gtg gac aac gac ccc ttc ccg gag ctg gac      2168
Thr Pro Glu Ser Glu Ile Val Asp Asn Asp Pro Phe Pro Glu Leu Asp
          210              215              220
tcg ttc ccg gcg ttc cag cct gcg ccg ccg ccg gcg acg gcg atg atg      2216
Ser Phe Pro Ala Phe Gln Pro Ala Pro Pro Pro Ala Thr Ala Met Met
       225              230              235
gtg ccc aag aaa gaa tcg atg gac gac gcc acc gcg gcc gcc gcc gcc      2264
Val Pro Lys Lys Glu Ser Met Asp Asp Ala Thr Ala Ala Ala Ala Ala
    240             245               250
gcc gcc acc atc ccc agg aac aac agc agc ctg ttc gtg gac ctg agc      2312
Ala Ala Thr Ile Pro Arg Asn Asn Ser Ser Leu Phe Val Asp Leu Ser
255              260              265               270
tac gac gat atc cag ggc atg tac agc ggc ctc gac atg ctg ccg ccg      2360
Tyr Asp Asp Ile Gln Gly Met Tyr Ser Gly Leu Asp Met Leu Pro Pro
             275              280               285
ggc gac gac ttc tac tcg tcg ctc ttc gcg tcg ccg cgg gtg aag ggg      2408
Gly Asp Asp Phe Tyr Ser Ser Leu Phe Ala Ser Pro Arg Val Lys Gly
          290              295              300
acg acg cca cgc gcc ggc gcc ggc atg ggc atg gtc ccg ttc tga          2453
Thr Thr Pro Arg Ala Gly Ala Gly Met Gly Met Val Pro Phe
      305               310              315
ggtgacggcg acgcgatcga acaggtggtg atcgatgctg caacgtgtgt aaatatacag    2513
cgccggctgg gtcaagagat ggctcgg                                        2540

Claims (5)

1.一种分离的增加植物对于旱和盐胁迫耐受能力的OsNACx基因，它是SEQ ID NO：1中第1-2540位所示的核苷酸序列。
2.合适启动子连接的权利要求1所述的SEQ ID NO：1中第1374-2540位所示的核苷酸序列。
3.赋予植物对干旱和盐胁迫耐受能力的核苷酸序列，它编码的是SEQ ID NO：1中第1374-2453位编码的氨基酸序列。
4.权利要求1或2所述的核苷酸序列在增加水稻对干旱和盐胁迫耐受能力中的应用。
5.权利要求3所述的氨基酸序列在增加水稻对干旱和盐胁迫耐受能力中的应用。
CNB2004100614086A 2004-12-21 2004-12-21 利用水稻转录因子基因OsNACx提高植物抗旱耐盐能力 Expired - Fee Related CN100362104C (zh)

Priority Applications (12)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB2004100614086A CN100362104C (zh) 2004-12-21 2004-12-21 利用水稻转录因子基因OsNACx提高植物抗旱耐盐能力
AU2005318769A AU2005318769B2 (en) 2004-12-21 2005-12-20 The transcription factor gene OsNACx from rice and use for improving tolerance of plants to drought and salt thereof
BRPI0517493-7A BRPI0517493A (pt) 2004-12-21 2005-12-20 polinucleotìdeo isolado, promotor vetor de expressão, célula hospedeira e uso de um polinucleotìdeo
CA2592071A CA2592071C (en) 2004-12-21 2005-12-20 Transcription factor gene osnacx from rice and use thereof for improving plant tolerance to drought and salt
PCT/CN2005/002251 WO2006066498A1 (fr) 2004-12-21 2005-12-20 Gène du facteur de transcription osnacx issu du riz et application dans l'amélioration de la tolérance des plantes vis-à-vis de la sécheresse et du sel
ZA200700577A ZA200705777B (en) 2004-12-21 2005-12-20 The transcription factor gene osnacx from rice and use for improving tolerance of plants to drought and salt thereof
EP05819963A EP1835028B1 (en) 2004-12-21 2005-12-20 The transcription factor gene osnacx from rice and use for improving tolerance of plants to drought and salt thereof
AT05819963T ATE528398T1 (de) 2004-12-21 2005-12-20 Transkriptionsfaktor-gen osnacx aus reis und verwendung davon zur verbesserung der toleranz von pflanzen gegenüber trockenheit und salz
MX2007007567A MX2007007567A (es) 2004-12-21 2005-12-20 El factor de transcripcion genetico osnacx del arroz y su uso para mejorar la tolerancia de plantas a la seguia y al estres salino.
US11/722,298 US7834244B2 (en) 2004-12-21 2005-12-20 Transcription factor gene OsNACx from rice and use thereof for improving plant tolerance to drought and salt
ES05819963T ES2372607T3 (es) 2004-12-21 2005-12-20 El gen del factor de transcripción osnacx del arroz y su uso para mejorar la tolerancia de las plantas a la sequía y la sal.
US12/901,974 US8378173B2 (en) 2004-12-21 2010-10-11 Transcription factor gene OsNACx from rice and use thereof for improving plant tolerance to drought and salt

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB2004100614086A CN100362104C (zh) 2004-12-21 2004-12-21 利用水稻转录因子基因OsNACx提高植物抗旱耐盐能力

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1796559A CN1796559A (zh) 2006-07-05
CN100362104C true CN100362104C (zh) 2008-01-16

Family

ID=36601382

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB2004100614086A Expired - Fee Related CN100362104C (zh) 2004-12-21 2004-12-21 利用水稻转录因子基因OsNACx提高植物抗旱耐盐能力

Country Status (11)

Country Link
US (2) US7834244B2 (zh)
EP (1) EP1835028B1 (zh)
CN (1) CN100362104C (zh)
AT (1) ATE528398T1 (zh)
AU (1) AU2005318769B2 (zh)
BR (1) BRPI0517493A (zh)
CA (1) CA2592071C (zh)
ES (1) ES2372607T3 (zh)
MX (1) MX2007007567A (zh)
WO (1) WO2006066498A1 (zh)
ZA (1) ZA200705777B (zh)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100362104C (zh) * 2004-12-21 2008-01-16 华中农业大学 利用水稻转录因子基因OsNACx提高植物抗旱耐盐能力
CN100465275C (zh) * 2006-11-09 2009-03-04 华中科技大学 一种植物耐盐基因
CN100526465C (zh) * 2007-03-12 2009-08-12 华中农业大学 利用水稻转录因子基因snac2提高植物耐冷耐盐能力
WO2008154650A2 (en) * 2007-06-12 2008-12-18 The Curators Of The University Of Missouri Drought responsive genes in plants and methods of their use
US20110119792A1 (en) * 2007-06-12 2011-05-19 Nguyen Henry T Genes Controlling Plant Root Growth And Development For Stress Tolerance And Method Of Their Use
US8299318B2 (en) 2007-07-05 2012-10-30 Ceres, Inc. Nucleotide sequences and corresponding polypeptides conferring modulated plant characteristics
CN101139385B (zh) * 2007-07-31 2010-06-09 中国科学院植物研究所 一种植物抗逆性相关蛋白及其编码基因与应用
CA2904851A1 (en) * 2007-10-19 2009-04-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize stress-responsive nac transcription factors and methods of use
US20120198587A1 (en) * 2009-06-30 2012-08-02 The Curators Of The University Of Missouri Soybean transcription factors and other genes and methods of their use
CN102134272A (zh) * 2010-01-26 2011-07-27 中国科学院遗传与发育生物学研究所 一种水稻热胁迫转录因子在培育新品种中的应用
CN102134273A (zh) * 2010-01-26 2011-07-27 中国科学院遗传与发育生物学研究所 一种水稻热胁迫转录因子在育种中的应用
WO2012065219A1 (en) * 2010-11-15 2012-05-24 The State Of Queensland As Represented By The Department Of Employment, Economic Development & Innovation Drought tolerant plants
WO2012158594A2 (en) * 2011-05-13 2012-11-22 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Crop plants with improved water use efficiency and grain yield and methods of marking them
CN106906214B (zh) * 2011-07-15 2021-04-02 纳幕尔杜邦公司 新型植物终止子序列
BR122020026837B1 (pt) 2011-11-02 2021-04-13 Ceres, Inc Método de aumento do rendimento de planta em solo contendo níveis elevados de al3+, método de aumento da tolerância de uma planta
US11268103B2 (en) * 2012-04-20 2022-03-08 Monsanto Technology Llc Transgenic plants with enhanced traits
CN102786599B (zh) * 2012-08-01 2014-01-15 中国农业科学院作物科学研究所 水稻转录因子Os05g39950基因的应用
US9957520B2 (en) 2013-03-13 2018-05-01 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Methods of increasing resistance of crop plants to heat stress and selecting crop plants with increased resistance to heat stress
CN103141279B (zh) * 2013-03-22 2014-03-12 中国科学院武汉植物园 一种低盐诱导处理提高水稻和苜蓿及狗牙根抗旱性的方法
US20160348122A1 (en) * 2013-09-06 2016-12-01 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Wheat fertility gene promoters and methods of use
WO2016000236A1 (en) * 2014-07-03 2016-01-07 Pioneer Overseas Corporation Plants having altered agronomic characteristics under nitrogen limiting conditions and related constructs and methods involving genes encoding nac3/onac067 polypeptides
CN105218653B (zh) * 2015-11-09 2018-12-21 中国科学院植物研究所 一种杂交构树盐胁迫相关的转录因子及其编码基因与应用
CN105254727B (zh) * 2015-11-09 2018-11-13 中国科学院植物研究所 一种杂交构树干旱胁迫相关的转录因子及其编码基因与应用
CN106868021B (zh) * 2017-03-23 2021-03-02 周口师范学院 控制水稻种子大小基因OsNAC1及其应用
CN108887172B (zh) * 2018-07-16 2021-11-12 贵州省旱粮研究所 利用玉米群体Suwan1选育耐瘠自交系的方法
CN112898395B (zh) * 2021-03-16 2022-09-02 华南农业大学 一种耐铝相关基因GmNAC069及其编码蛋白与应用
CN113025627A (zh) * 2021-04-29 2021-06-25 周口师范学院 水稻分蘖控制基因OsMYB27及其在育种上的应用
CN114438103B (zh) * 2022-03-15 2023-05-26 湖北大学 调控水稻对干旱和盐胁迫耐受性的转录因子OsNAC15基因及应用
CN114902960B (zh) * 2022-05-07 2023-05-09 武汉生物工程学院 一种高效诱导烟草种子愈伤组织的方法和培养基
CN117264970B (zh) * 2023-11-07 2024-03-19 中国林业科学研究院华北林业实验中心 胡杨PeHIT54基因在提高植物耐盐性上的用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6677504B2 (en) * 2000-04-07 2004-01-13 Basf Plant Science Gmbh Transcription factor stress-related proteins and methods of use in plants
CN1491960A (zh) * 2002-08-29 2004-04-28 清华大学 水稻dreb类转录因子及其编码基因与应用

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2131040B (en) * 1982-10-20 1986-02-12 Sakura Color Prod Corp Aqueous ink compositions for ball-point pens
US6051757A (en) * 1983-01-14 2000-04-18 Washington University Regeneration of plants containing genetically engineered T-DNA
NL8300698A (nl) * 1983-02-24 1984-09-17 Univ Leiden Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van tweezaadlobbige planten; agrobacterium tumefaciens bacterien en werkwijze voor het produceren daarvan; planten en plantecellen met gewijzigde genetische eigenschappen; werkwijze voor het bereiden van chemische en/of farmaceutische produkten.
US5173410A (en) * 1984-02-15 1992-12-22 Lubrizol Genetics Inc. Transfer vector
US4945050A (en) * 1984-11-13 1990-07-31 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor
US5753475A (en) * 1985-01-17 1998-05-19 Calgene, Inc. Methods and compositions for regulated transcription and expression of heterologous genes
CA1288073C (en) 1985-03-07 1991-08-27 Paul G. Ahlquist Rna transformation vector
ES2121803T3 (es) 1987-05-20 1998-12-16 Novartis Ag Plantas de zea mays y plantas transgenicas de zea mays generadas a partir de protoplastos o celulas derivadas de protoplastos.
US5977438A (en) * 1988-02-26 1999-11-02 Biosource Technologies, Inc. Production of peptides in plants as viral coat protein fusions
US5316931A (en) 1988-02-26 1994-05-31 Biosource Genetics Corp. Plant viral vectors having heterologous subgenomic promoters for systemic expression of foreign genes
US5811653A (en) * 1992-12-30 1998-09-22 Biosource Technologies, Inc. Viral amplification of recombinant messenger RNA in transgenic plants
ES2097746T3 (es) * 1988-03-08 1997-04-16 Ciba Geigy Ag Regeneracion de plantas gramineas de la subfamilia pooideae partiendo de protoplastos.
NL8800725A (nl) * 1988-03-23 1989-10-16 Mogen International N V En Rij Recombinant dna; getransformeerde microorganismen, plantecellen en planten; werkwijze voor het produceren van een polypeptide of eiwit m.b.v. planten of plantecellen; werkwijze voor het produceren van planten met virusresistentie.
US5416011A (en) * 1988-07-22 1995-05-16 Monsanto Company Method for soybean transformation and regeneration
US5501967A (en) * 1989-07-26 1996-03-26 Mogen International, N.V./Rijksuniversiteit Te Leiden Process for the site-directed integration of DNA into the genome of plants
US5451513A (en) * 1990-05-01 1995-09-19 The State University of New Jersey Rutgers Method for stably transforming plastids of multicellular plants
US5187267A (en) * 1990-06-19 1993-02-16 Calgene, Inc. Plant proteins, promoters, coding sequences and use
US5610042A (en) 1991-10-07 1997-03-11 Ciba-Geigy Corporation Methods for stable transformation of wheat
US5576198A (en) 1993-12-14 1996-11-19 Calgene, Inc. Controlled expression of transgenic constructs in plant plastids
US5545817A (en) * 1994-03-11 1996-08-13 Calgene, Inc. Enhanced expression in a plant plastid
US5545818A (en) 1994-03-11 1996-08-13 Calgene Inc. Expression of Bacillus thuringiensis cry proteins in plant plastids
US5981840A (en) * 1997-01-24 1999-11-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods for agrobacterium-mediated transformation
US5866795A (en) * 1997-03-17 1999-02-02 Applied Materials, Inc. Liquid flow rate estimation and verification by direct liquid measurement
US7511190B2 (en) * 1999-11-17 2009-03-31 Mendel Biotechnology, Inc. Polynucleotides and polypeptides in plants
US20110131679A2 (en) * 2000-04-19 2011-06-02 Thomas La Rosa Rice Nucleic Acid Molecules and Other Molecules Associated with Plants and Uses Thereof for Plant Improvement
EP1402037A1 (en) 2001-06-22 2004-03-31 Syngenta Participations AG Plant genes involved in defense against pathogens
WO2003000906A2 (en) 2001-06-22 2003-01-03 Syngenta Participations Ag Plant disease resistance genes
JP3668736B2 (ja) * 2001-08-07 2005-07-06 独立行政法人農業生物資源研究所 塩ストレス耐性を制御する新規イネ遺伝子
KR100571131B1 (ko) * 2001-11-22 2006-04-17 인터내셔널 리서치 센터 포 애그리컬춰럴 사이언스 식물의 전사인자를 코딩하는 유전자
JP2004248638A (ja) 2002-12-26 2004-09-09 Japan International Research Center For Agricultural Services イネ由来のストレス誘導性プロモーター
US7119192B2 (en) * 2002-12-26 2006-10-10 Bio-Oriented Technology Research Advancement Institution Stress-induced promoter derived from rice
CN100460420C (zh) * 2003-05-20 2009-02-11 中国科学院遗传与发育生物学研究所 一种水稻耐低温相关转录因子及其编码基因与应用
CN100362104C (zh) * 2004-12-21 2008-01-16 华中农业大学 利用水稻转录因子基因OsNACx提高植物抗旱耐盐能力

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6677504B2 (en) * 2000-04-07 2004-01-13 Basf Plant Science Gmbh Transcription factor stress-related proteins and methods of use in plants
CN1491960A (zh) * 2002-08-29 2004-04-28 清华大学 水稻dreb类转录因子及其编码基因与应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A RICE TRANSCRIPTION FACTOR OSBHLHI ININVOLVED IN COLD RESPONSE. ZHANG JS ET AL.THEORETICAL AND APPLIED GENETICS,Vol.107 No.8. 2003 *
植物抗旱耐盐基因工程研究及应用前景. 刘国花等.世界农业，第291期. 2003 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20080263722A1 (en) 2008-10-23
CA2592071C (en) 2012-02-28
US20110217776A1 (en) 2011-09-08
EP1835028A1 (en) 2007-09-19
CN1796559A (zh) 2006-07-05
US8378173B2 (en) 2013-02-19
WO2006066498A1 (fr) 2006-06-29
US7834244B2 (en) 2010-11-16
CA2592071A1 (en) 2006-06-29
BRPI0517493A (pt) 2008-10-14
EP1835028A4 (en) 2008-08-06
ATE528398T1 (de) 2011-10-15
MX2007007567A (es) 2008-01-29
ZA200705777B (en) 2009-06-24
EP1835028B1 (en) 2011-10-12
ES2372607T3 (es) 2012-01-24
AU2005318769A1 (en) 2006-06-29
AU2005318769B2 (en) 2011-04-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN100362104C (zh) 利用水稻转录因子基因OsNACx提高植物抗旱耐盐能力
CN100526465C (zh) 利用水稻转录因子基因snac2提高植物耐冷耐盐能力
Verma et al. Functional validation of a novel isoform of Na+/H+ antiporter from Pennisetum glaucum for enhancing salinity tolerance in rice
Chen et al. Expression of sweet potato cysteine protease SPCP2 altered developmental characteristics and stress responses in transgenic Arabidopsis plants
CN101348790B (zh) 利用水稻转录因子OsbZIP23提高植物耐逆境能力
CN111206041B (zh) OsBAK1P基因在控制水稻抗旱性中的应用
MX2008016224A (es) Rendimiento mejorado y tolerancia al estres en plantas transgenicas.
US20140208456A1 (en) Application of OsSRO1c Gene in Controlling Rice Drought Resistance
CN100445384C (zh) 逆境特异诱导双向表达活性的水稻启动子cpip的鉴定和利用
CN101096681A (zh) 利用水稻蛋白激酶基因OsCIPK15提高植物耐盐能力
Liu et al. Over-expression of EjLFY-1 leads to an early flowering habit in strawberry (Fragaria× ananassa) and its asexual progeny
CN101812462B (zh) 水稻GT转录因子家族基因OsGTγ-1在控制水稻耐盐性中的应用
US20150218581A1 (en) Use of OXHS4 Gene in Controlling Rice Drought Resistance
CN102747098B (zh) 改造基因OsbZIP46CA1在控制水稻抗旱性中的应用
US20140373193A1 (en) Use of OsPP18 Gene in Controlling Rice Drought Resistance
CN109112135B (zh) OsREP4基因在控制水稻抗旱性中的应用
CN100415886C (zh) 利用水稻核蛋白基因OsSKIP1促进植物在逆境条件下的生长
CN106636180B (zh) 一种用于得到对盐胁迫高敏感的植物的质粒载体及方法
CN102586246B (zh) 水稻干旱诱导型启动子oxhs4p的鉴定和利用
CN102586247B (zh) 一个逆境诱导型启动子在控制基因在干旱诱导表达中的应用
CN101200724A (zh) 利用水稻蛋白激酶基因OsCIPK03提高植物耐冷能力
CN101831429B (zh) 水稻胚乳特异表达基因的启动子及表达模式鉴定
Gao et al. ZmXa21-L gene encodes a plant receptor-like kinases (RLKs) protein that enhances resistance to bacterial blight in rice
CN112322627B (zh) OsZFP1基因在控制水稻抗旱性中的应用
CN102676536B (zh) OsLIS-L1基因控制水稻株高和花粉育性的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20080116

Termination date: 20181221