CN112322627B - OsZFP1基因在控制水稻抗旱性中的应用 - Google Patents

OsZFP1基因在控制水稻抗旱性中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于植物基因工程技术领域。具体涉及OsZFP1基因在控制水稻抗旱性中的应用。本发明克隆和验证的OsZFP1基因可在水稻抗旱遗传改良中的应用。本发明通过对OsZFP1的CRISPR突变体及超量表达材料进行干旱表型鉴定，克隆到一个参与水稻干旱应答的基因OsZFP1，苗期以及成株期的干旱胁迫试验表明，OsZFP1是水稻干旱应答的正调控因子，证实了该基因的功能及应用途径。

Description

OsZFP1基因在控制水稻抗旱性中的应用
技术领域
本发明涉及水稻基因工程领域。具体涉及分离、克隆和通过功能验证得到一种能够提高干旱耐受能力的水稻OsZFP1基因在水稻抗旱性遗传改良中的应用。本发明采用候选基因筛选的方法，克隆到控制水稻抗旱基因OsZFP1，通过共分离检测表明oszfp1突变体与干旱敏感表型是紧密关联的，证实了该基因的功能及应用途径。
背景技术
植物在生长的过程中会受到诸多环境因素的影响，干旱、冷害和高温会导致农作物的大规模减产，在许多地区是农业发展的瓶颈。培育耐逆性的作物品种一直是农业科学技术研究的主要目标之一。为了抵抗或适应这些不利的因素，植物体感受细胞外环境条件的变化并通过多种途径将其传递到细胞内，会诱导表达一些应答基因，产生一些使细胞免受干旱、高盐、低温等胁迫伤害的功能蛋白和渗透调节物质以适应不利的生长环境(Xiong等,Cell signaling during cold,drought and salt stress.Plant Cell.14(suppl),S165–S183,2002)。而那些功能基因对环境做出反应的过程中能否正确表达受到了调控因子的精细调节。转录因子作为一种调控基因，当生物体感受逆境胁迫时，能调控一系列下游基因的表达，从而增强植物体对逆境的耐受能力，达到抵抗不良环境条件胁迫的效果。大多数类型的转录因子都参与了植物的非生物逆境应答反应，包括AP2/EREBP、bZip、HD-ZIP、MYB、MYC、NAC和Zinc finger类转录因子(Yamaguchi-Shinozaki K,ShinozakiK.Transcriptional regulatory networks in cellular responses and tolerance todehydration and cold stresses.Annu Rev Plant Biol,2006,57:781-803)。通过基因工程，部分逆境应答转录因子已经成功应用于水稻抗逆遗传育种。利用SNAC1培育的转基因水稻植株在大田干旱环境下能提高结实率30％左右，而在正常条件下产量不受影响且没有其他表型变化。转基因植株在营养生长期对干旱和高盐的抗性也显著提高(Hu等.Overexpressing a NAM,ATAF,and CUC(NAC)transcription factor enhances droughtresistance and salt tolerance in rice.Proc Natl Acad Sci USA,2006,103:12987-12992)。这些抗逆转录因子是通过调控大量下游基因的表达来体现其功能。这些下游基因中往往含有参与信号转导和基因表达的调控蛋白，它们又进一步形成次级的调控网络。这些下游基因同样可以用于作物抗逆境的遗传改良。拟南芥中抗高温转录因子DREB2A的下游基因HsfA3同样可以提高转基因超表达植株对高温的抗性(Yoshida等.Functionalanalysis of an Arabidopsis heat-shock transcription factor HsfA3 in thetranscriptional cascade downstream of the DREB2A stress-regulatorysystem.Biochem Biophys Res Commun,2008,368:515-21)。
水稻是重要的粮食作物和模式植物，在极端气候条件频发的今天，培育抗逆性增强的水稻具有重要的意义。本发明涉及的OsZFP1基因属于水稻C2H2锌指蛋白家族，鉴于OsZFP1基因是动物Znf346类C2H2锌指蛋白的同源基因，但该类蛋白在植物中功能报道极少，是否能提高植物的抗逆性目前也尚无相关报道。因此，本发明从水稻中分离出OsZFP1基因，并鉴定它在提高水稻抗逆性方面所发挥的功能，对于培育抗逆境水稻新品种乃至植物抗逆境的遗传改良都将具有非常重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的缺陷，涉及一个C2H2锌指蛋白家族成员OsZFP1基因在控制水稻抗逆境特别是在抗旱性改良中的应用。因为其属于锌指蛋白家族，申请人将该基因命名为OsZFP1。
本发明分离和应用一种包含OsZFP1基因的DNA片段，该片段赋予水稻在干旱条件下抗旱性增强的能力。其中，所述的含有OsZFP1基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，序列长度为987bp，它对应的氨基酸序列如SEQ ID NO：1中1-987位所对应的序列(共328个氨基酸序列)。OsZFP1基因编码的蛋白质序列如SEQ ID NO:2所示。
携带有本发明OsZFP1基因的表达载体可通过使用Ti质粒，植物病毒载体，直接DNA转化，微注射，电穿孔等常规生物技术方法导入植物细胞(Weissbach,1998,Method forPlant Molecular Biology VIII,Academy Press,New York,pp.411-463；Geiserson andCorey,1998,Plant Molecular Biology(2nd Edition))。
可使用包括本发明的OsZFP1基因的表达载体转化宿主，包括水稻在内的多种植物，用于培育抗旱植物新品种。
本发明的基因是受干旱诱导表达的，因此可将本发明的基因与任何感兴趣的干旱诱导启动子结合后连入合适的表达载体，并转化植物宿主，在干旱条件下可诱导表达基因，提高植物的抗旱性。
下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明。
附图说明
图1：水稻oszfp1 CRISPR突变体基因编辑情况。附图标记说明：oszfp1-26，oszfp1-29为2个OsZFP1CRISPR突变体纯合家系。
图2：水稻oszfp1 CRISPR突变体苗期干旱胁迫表型。附图标记说明：oszfp1-26，oszfp1-29为2个OsZFP1 CRISPR突变体纯合家系，以野生型(非转基因)水稻品种中花11(ZH11)作为对照。
图3：水稻OsZFP1 OX超量表达材料成株期盆栽干旱胁迫表型。附图标记说明：OsZFP1-19，OsZFP1-48为2个OsZFP1单拷贝纯合超量表达家系，野生型空育131(KY131)作为对照。
图4：本发明涉及的载体pCAMBIA1301U的图谱。
具体实施方式
对序列表的说明：
序列表SEQ ID NO:1是本发明分离克隆的包含有OsZFP1基因编码区的核苷酸序列，序列长度为987bp,它对应的氨基酸序列为该序列的1-987位所对应的序列，共对应328个氨基酸序列。
序列表SEQ ID NO:2是本发明的OsZFP1基因编码的蛋白质序列。
以下实施例定义了本发明，并描述了本发明在构建osZFP1 CRISPR突变体，克隆包含有OsZFP1基因完整编码区段的DNA片段，以及验证OsZFP1基因功能的方法。根据以下的描述和这些实施例，本领域技术人员可以确定本发明的基本特征，并且在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明做出各种改变和修改，以使其适用不同的用途和条件。
实施例1：分离、克隆OsZFP1基因
以水稻品种日本晴叶片(一个公知公用的水稻品种)cDNA作为模板，使用PCR扩增OsZFP1基因编码的CDS序列。PCR反应条件为：95℃预变性3min；94℃30sec，55℃30sec，72℃1min，33个循环；72℃延伸5min。将扩增获得的PCR产物连入pGEM-T Easy载体(购自Promega公司)，筛选阳性克隆并测序确认，获得OsZFP1 CDS序列。申请人将该克隆命名为pGEM-OsZFP1质粒。
实施例2：OsZFP1基因超量表达载体的构建
超量表达载体构建具体步骤如下：首先将实施例1中得到的阳性克隆pGEM-OsPP15质粒用引物ZFP1-OEF(5’-tacgaacgatagccggtaccATGGACTTCGCCGACGCTCC-3’)和ZFP1-OER(5’-ttgcggactctagaggatccTCATTCCGTCGCATTGAGCT-3’)，扩增出包含OsZFP1全长的DNA片段，反应条件为：94℃预变性3min；94℃30sec，55℃30sec，72℃1min，30个循环；72℃延伸5min。该片段使用Gibson Assembly与经限制性内切酶KpnI和BamHI消化的pCAMBIA1301U载体(图4)进行连接，对载体进行测序确认后可用于遗传转化。
实施例3：构建oszfp1 CRISPR载体的构建和遗传转化
从水稻基因数据库Rice Data(http://www.ricedata.cn/gene/)中获得OsZFP1基因的基因序列。根据CRISPR-P v2.0(http://crispr.hzau.edu.cn/CRISPR2/)挑取两个靶位点。CRISPR突变体株系的载体构建可参照相关文献(谢卡斌等.Boosting CRISPR/Cas9multiplex editing capability with the endogenous tRNA-processingsystem.PNAS.2015,112:3570-3575.)，限于篇幅本说明书不再展开描述。其中在CRISPR-Pv2.0网站中选取的靶位点如下：
靶位点：AATAGTCTTTCCGGCGGCGG
通过农杆菌介导的水稻遗传转化方法(其具体步骤如下所述)，将构建好的CRISPR载体OsZFP1-CRISPR转入到水稻品种“中花11”(中国水稻科学研究所提供的一个公开使用的水稻品种)中，经过预培养、侵染、共培养、筛选具有潮霉素抗性的愈伤、分化、生根、练苗、移栽等常规步骤，得到转基因植株。上述农杆菌介导的水稻(中花11)遗传转化方法(体系)在Hiei等人报道的方法(Hiei等,Efficient transformation of rice,Oryza sativa L.,mediated by Agrobacterium and sequence analysis of the boundaries of the T-DNA,Plant J,6:271-282,1994)基础上改良进行。
本实施例的具体遗传转化步骤如下：
(1)电转化：将最终遗传转化载体，用1800v电压，电转化入农杆菌EHA105菌株，涂到带有对应抗性选择的LA培养基上，筛选出阳性克隆，用于下述转化愈伤。
(2)愈伤组织诱导：将成熟的水稻种子中花11(中国水稻研究所提供的一个公开使用的水稻品种)去壳，然后依次用70％的乙醇处理1分钟，0.15％氯化汞(HgCl2)种子表面消毒15分钟；用灭菌水洗种子4-5次；将该消过毒的种子放在诱导培养基上(成分见后)；将接种后的愈伤组织诱导培养基置于黑暗处培养4周，温度25±1℃。
(3)愈伤继代：挑选亮黄色、紧实且相对干燥的胚性愈伤，放于继代培养基(成分见后)上黑暗下培养2周，温度25±1℃。
(4)预培养：挑选紧实且相对干燥的胚性愈伤，放于预培养基(成分见后)上黑暗下培养2周，温度25±1℃。
(5)农杆菌培养：在带有对应抗性选择的LA培养基上(成分见后)预培养农杆菌EHA105(来源于CAMBIA，商用菌株，携带有本发明的载体)两天，培养温度28℃；将所述的农杆菌转移至悬浮培养基(成分见后)里，28℃摇床上培养2-3小时。
(6)农杆菌侵染：将预培养的愈伤转移至灭菌好的瓶子内；调节农杆菌的悬浮液至OD600 0.8-1.0；将愈伤在农杆菌悬浮液中浸泡30分钟；转移愈伤至灭菌好的滤纸上吸干；然后放置在共培养基(成分见后)上培养3天，培养温度19-20℃。
(7)愈伤洗涤和选择培养：灭菌水洗涤愈伤至看不见农杆菌；浸泡在含400ppm羧苄青霉素(CN)的灭菌水中30分钟；转移愈伤至灭菌好的滤纸上吸干；转移愈伤至选择培养基(成分见后)上选择2-3次，每次2周(第一次筛选羧苄青霉素浓度为400ppm，第二次以后为250ppm，潮霉素浓度250ppm)。
(8)分化：将抗性愈伤转移至预分化培养基(成分见后)上黑暗处培养5-7周；转移预分化培养的愈伤至分化培养基上(成分见后)，光照下培养，温度26℃。
(9)生根：剪掉分化时产生的根；然后将其转移至生根培养基中光照下培养2-3周，温度26℃。
(10)移栽：洗掉根上的残留培养基，将具有良好根系的幼苗转入温室，同时在最初的几天保持水分湿润。
培养基组分及其配方：(1)试剂和溶液缩写：本发明中培养基所用到的植物激素的缩写表示如下：6-BA(6-BenzylaminoPurine，6-苄基腺嘌呤)；CN(Carbenicillin，羧苄青霉素)；KT(Kinetin，激动素)；NAA(Napthalene acetic acid，萘乙酸)；IAA(Indole-3-aceticacid，吲哚乙酸)；2,4-D(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid，2,4-二氯苯氧乙酸)；AS(Acetosringone，乙酰丁香酮)；CH(Casein Enzymatic Hydrolysate，水解酪蛋白)；HN(Hygromycin B，潮霉素)；DMSO(Dimethyl Sulfoxide，二甲基亚砜)；N6max(N6大量成分溶液)；N6mix(N6微量成分溶液)；MSmax(MS大量成分溶液)；MSmix(MS微量成分溶液)。(2)主要溶液配方：
1)N6培养基大量元素母液[10倍浓缩液(10X)]的配制：
Figure BDA0002665405010000041
Figure BDA0002665405010000051
2)N6培养基微量元素母液[100倍浓缩液(100X)]的配制
Figure BDA0002665405010000052
3)铁盐(Fe2EDTA)贮存液(100X)的配制
准备800ml双蒸水并加热至70℃，加入乙二铵四乙酸二钠(Na2EDTA·2H2O)3.73克，充分溶解后在70℃水浴中保持2小时，定容至1000ml，4℃保存备用。
4)维生素贮存液(100X)配制
Figure BDA0002665405010000053
5)MS培养基大量元素母液(10X)的配制
Figure BDA0002665405010000054
6)MS培养基微量元素母液(100X)的配制
Figure BDA0002665405010000055
7)2,4-D贮存液，6-BA贮存液，萘乙酸(NAA)贮存液，吲哚乙酸(IAA)贮存液：1均为mg/ml。
8)葡萄糖贮存液：0.5g/ml。
9)AS贮存液的配制：秤取AS 0.392g，DMSO 10ml。
(3)用于水稻遗传转化的培养基配方
1)愈伤组织诱导培养基
Figure BDA0002665405010000061
加蒸馏水至900ml，1N氢氧化钾调节pH值到5.9，煮沸并定容至1000ml，分装到50ml三角瓶(25ml/瓶)，封口灭菌。
2)继代培养基
Figure BDA0002665405010000062
加蒸馏水至900ml，1N氢氧化钾调节pH值到5.9，煮沸并定容至1000ml，分装到50ml三角瓶(25ml/瓶)，封口灭菌。
3)预培养基
Figure BDA0002665405010000063
Figure BDA0002665405010000071
加蒸馏水至250ml，1N氢氧化钾调节pH值到5.6，封口灭菌。使用前加热溶解培养基并加入5ml葡萄糖贮存液和250μl AS贮存液，分装倒入培养皿中(25ml/皿)。
4)共培养基
Figure BDA0002665405010000072
加蒸馏水至250ml，1N氢氧化钾调节pH值到5.6，封口灭菌。使用前加热溶解培养基并加入5ml葡萄糖贮存液和250μl AS贮存液，分装倒入培养皿中(25ml/每皿)。
5)悬浮培养基
Figure BDA0002665405010000073
加蒸馏水至100ml，调节pH值到5.4，分装到两个100ml的三角瓶中，封口灭菌。使用前加入1ml葡萄糖贮存液和100μl AS贮存液。
6)选择培养基
Figure BDA0002665405010000074
加蒸馏水至250ml，调节pH值到6.0，封口灭菌。使用前溶解培养基，加入250μl HN和400ppm CN，分装倒入培养皿中(25ml/皿)。
7)预分化培养基
Figure BDA0002665405010000081
加蒸馏水至250ml，1N氢氧化钾调节pH值到5.9，封口灭菌。使用前溶解培养基，加入250μl HN和200ppm CN，分装倒入培养皿中(25ml/皿)。
8)分化培养基
Figure BDA0002665405010000082
加蒸馏水至900ml，1N氢氧化钾调节pH值到6.0。煮沸并定容至1000ml，分装到50ml三角瓶(50ml/瓶)，封口灭菌。
9)生根培养基
Figure BDA0002665405010000083
Figure BDA0002665405010000091
加蒸馏水至900ml，1N氢氧化钾调节pH值到5.8。煮沸并定容至1000ml，分装到生根管中(25ml/管)，封口灭菌。
实施例4：鉴定oszfp1 CRISPR突变体苗期干旱胁迫表型
将已鉴定基因型的纯合突变体(oszfp1)和转基因受体野生型中花11(又称ZH11)催芽后直播到小圆桶中。试验用的土壤为中国南方水稻土与粗沙按体积比为2:3混合而成，每圆桶等量均匀沙土加等体积水，水自行渗漏确保土壤的紧实度一致，试验设3次重复。对健康生长的4叶期的植株进行断水干旱胁迫6-10天(具体根据天气情况而定)，然后复水恢复5-7天，拍照并调查植株的存活率。与ZH11对照相比，CRISPR纯合突变体植株表现为干旱敏感表型(图2)。
实施例5：鉴定OsZFP1 OX成株期盆栽干旱胁迫表型
将已鉴定基因型的超量表达材料和转基因受体野生型编号为空育131(KY131)插秧于到大号盆栽圆桶中。试验用的土壤为中国南方水稻土与粗沙按体积比为2:3混合而成，每圆桶等量均匀沙土加等体积水，水自行渗漏确保土壤的紧实度一致，试验设3次重复。对健康生长的成株期的植株进行断水干旱胁迫6-10天(具体根据天气情况而定)，然后复水恢复5-7天，拍照并调查植株的绿叶面积。与KY131对照相比，复水恢复后，超量表达植株表现为抗旱表型，试验结果如图3所示。
序列表
<110> 华中农业大学
<120> OsZFP1基因在控制水稻抗旱性中的应用
<141> 2020-09-03
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 987
<212> DNA
<213> 水稻(Oryza sativa)
<220>
<221> gene
<222> (1)..(987)
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(987)
<400> 1
atg gac ttc gcc gac gct ccg tcg cac gga gac tcg ctg gtg gtg gtg 48
Met Asp Phe Ala Asp Ala Pro Ser His Gly Asp Ser Leu Val Val Val
1 5 10 15
agg gac gcg ctg ctg tcg cag ctc cag cag gat cgc ctc cgg aag gac 96
Arg Asp Ala Leu Leu Ser Gln Leu Gln Gln Asp Arg Leu Arg Lys Asp
20 25 30
atc atc gtc gcc gag ctc gcc aag ata gag cgc gcc atg gct ctg cgc 144
Ile Ile Val Ala Glu Leu Ala Lys Ile Glu Arg Ala Met Ala Leu Arg
35 40 45
gat gtc tcg cag tcg ccg acg ccc cgg cac gcc gcc gcc gcc gcc gcc 192
Asp Val Ser Gln Ser Pro Thr Pro Arg His Ala Ala Ala Ala Ala Ala
50 55 60
gcc gga aag act att aca act gtg gct aca ccg gcc aag aaa cca tcg 240
Ala Gly Lys Thr Ile Thr Thr Val Ala Thr Pro Ala Lys Lys Pro Ser
65 70 75 80
cct tca gag aaa tct gaa ccg gca gtt cag aag tcg atg cca ccc tcg 288
Pro Ser Glu Lys Ser Glu Pro Ala Val Gln Lys Ser Met Pro Pro Ser
85 90 95
gca tgg agc tgc gcc gtg tgc cag gtt cga aca acc agc gag cgc aac 336
Ala Trp Ser Cys Ala Val Cys Gln Val Arg Thr Thr Ser Glu Arg Asn
100 105 110
cta cgt gat cac tgc gga ggt cag aag cac cag tcc aaa gtc gca gca 384
Leu Arg Asp His Cys Gly Gly Gln Lys His Gln Ser Lys Val Ala Ala
115 120 125
ctg gag aag aca acc aag gcc atg gcg aga acg acg gcg aaa cct tct 432
Leu Glu Lys Thr Thr Lys Ala Met Ala Arg Thr Thr Ala Lys Pro Ser
130 135 140
ccc ggt gca gca gca aga tgg ggc tgc agc atc tgc aac atc agc tgc 480
Pro Gly Ala Ala Ala Arg Trp Gly Cys Ser Ile Cys Asn Ile Ser Cys
145 150 155 160
aac ggc gag tgc gat ttc gat acc cac ctg aag ggg aag aag cat caa 528
Asn Gly Glu Cys Asp Phe Asp Thr His Leu Lys Gly Lys Lys His Gln
165 170 175
gcg aac acc cag gcc tta ctg gaa caa aac aag aag agc tca gtg aat 576
Ala Asn Thr Gln Ala Leu Leu Glu Gln Asn Lys Lys Ser Ser Val Asn
180 185 190
cca gag tca cag gga acc aag gcg gcg gca gca aca ctg atc tgc aga 624
Pro Glu Ser Gln Gly Thr Lys Ala Ala Ala Ala Thr Leu Ile Cys Arg
195 200 205
gtt tgc caa gct aag ttc acc tgt cag tca gac ttg cag agc cat ctc 672
Val Cys Gln Ala Lys Phe Thr Cys Gln Ser Asp Leu Gln Ser His Leu
210 215 220
aag gtc atg aag cac cag ctg aat ctc cgg gca cca tct tca gat ggc 720
Lys Val Met Lys His Gln Leu Asn Leu Arg Ala Pro Ser Ser Asp Gly
225 230 235 240
tct agc ttc acc agt gca acc tcg gag agt ttg agt ttg gaa ttg tat 768
Ser Ser Phe Thr Ser Ala Thr Ser Glu Ser Leu Ser Leu Glu Leu Tyr
245 250 255
tct tgc aag gtt tgc agc gtg aag tgc acc ttc gag agg atg ctc gcg 816
Ser Cys Lys Val Cys Ser Val Lys Cys Thr Phe Glu Arg Met Leu Ala
260 265 270
tac cat ctc act ggg aag aag cac ctg aaa cag gag aat ttg cag ttg 864
Tyr His Leu Thr Gly Lys Lys His Leu Lys Gln Glu Asn Leu Gln Leu
275 280 285
tcc tgc gag atc tgc aaa ctg cag tgc aac agc gag aaa gtg ctc tct 912
Ser Cys Glu Ile Cys Lys Leu Gln Cys Asn Ser Glu Lys Val Leu Ser
290 295 300
gac cat cgt tat ggg aag aag cac cag gcg aag ctc gag aaa gtg ctt 960
Asp His Arg Tyr Gly Lys Lys His Gln Ala Lys Leu Glu Lys Val Leu
305 310 315 320
cag gca aag ctc aat gcg acg gaa tga 987
Gln Ala Lys Leu Asn Ala Thr Glu
325
<210> 2
<211> 328
<212> PRT
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 2
Met Asp Phe Ala Asp Ala Pro Ser His Gly Asp Ser Leu Val Val Val
1 5 10 15
Arg Asp Ala Leu Leu Ser Gln Leu Gln Gln Asp Arg Leu Arg Lys Asp
20 25 30
Ile Ile Val Ala Glu Leu Ala Lys Ile Glu Arg Ala Met Ala Leu Arg
35 40 45
Asp Val Ser Gln Ser Pro Thr Pro Arg His Ala Ala Ala Ala Ala Ala
50 55 60
Ala Gly Lys Thr Ile Thr Thr Val Ala Thr Pro Ala Lys Lys Pro Ser
65 70 75 80
Pro Ser Glu Lys Ser Glu Pro Ala Val Gln Lys Ser Met Pro Pro Ser
85 90 95
Ala Trp Ser Cys Ala Val Cys Gln Val Arg Thr Thr Ser Glu Arg Asn
100 105 110
Leu Arg Asp His Cys Gly Gly Gln Lys His Gln Ser Lys Val Ala Ala
115 120 125
Leu Glu Lys Thr Thr Lys Ala Met Ala Arg Thr Thr Ala Lys Pro Ser
130 135 140
Pro Gly Ala Ala Ala Arg Trp Gly Cys Ser Ile Cys Asn Ile Ser Cys
145 150 155 160
Asn Gly Glu Cys Asp Phe Asp Thr His Leu Lys Gly Lys Lys His Gln
165 170 175
Ala Asn Thr Gln Ala Leu Leu Glu Gln Asn Lys Lys Ser Ser Val Asn
180 185 190
Pro Glu Ser Gln Gly Thr Lys Ala Ala Ala Ala Thr Leu Ile Cys Arg
195 200 205
Val Cys Gln Ala Lys Phe Thr Cys Gln Ser Asp Leu Gln Ser His Leu
210 215 220
Lys Val Met Lys His Gln Leu Asn Leu Arg Ala Pro Ser Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Ser Phe Thr Ser Ala Thr Ser Glu Ser Leu Ser Leu Glu Leu Tyr
245 250 255
Ser Cys Lys Val Cys Ser Val Lys Cys Thr Phe Glu Arg Met Leu Ala
260 265 270
Tyr His Leu Thr Gly Lys Lys His Leu Lys Gln Glu Asn Leu Gln Leu
275 280 285
Ser Cys Glu Ile Cys Lys Leu Gln Cys Asn Ser Glu Lys Val Leu Ser
290 295 300
Asp His Arg Tyr Gly Lys Lys His Gln Ala Lys Leu Glu Lys Val Leu
305 310 315 320
Gln Ala Lys Leu Asn Ala Thr Glu
325

Claims (2)

1.一种超量表达的OsZFP1基因在提高水稻对干旱胁迫耐受能力中的应用，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ NO：1所述序列的1-987位碱基所示。
2.一种超量表达的OsZFP1基因在提高水稻对干旱胁迫耐受能力中的应用，其特征在于，所述基因编码的蛋白质序列如SEQ NO：2所示。
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