CN100351232C - 抗肥胖剂 - Google Patents

Abstract

本发明的课题在于提供抗肥胖剂、或用于抗肥胖的食品饮料、食品饮料添加剂、饲料或饲料添加剂。为解决该课题，本发明提供了作为有效成分含有羟脯氨酸、羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其在药理学上允许的盐的抗肥胖剂以及用于抗肥胖的食品饮料、食品饮料添加剂、饲料和饲料添加剂。

Description

抗肥胖剂

技术领域

本发明涉及抗肥胖剂(anti-obesity agent)以及用于抗肥胖的食品饮料、食品饮料添加剂、饲料和饲料添加剂。

背景技术

到目前为止，已知有如Mazindol这样的抑制摄食中枢性的抗肥胖剂、曲美(Sibutramine)这样的中枢性地增强腹内饱感和抑制食欲的抗肥胖剂、Orlistat这样的抑制胃、小肠吸收脂肪的抗肥胖剂等。可是因为能够长期使用的药物很少，所以随着今后对抗肥胖剂的需求的增加，对增加抗肥胖剂的选择性的需求也有所增加。

羟脯氨酸作为胶原中的主要构成氨基酸广泛存在于自然界中。除了它的N-酰基化物用作消炎药物之外，还被用作碳青霉烯类抗生素物质或降血压药物、抗哮喘药物、末梢循环改善药物、阻止血液凝固药物等多种药物的合成原料，从该物质还具有保湿的功能特性考虑，还用于化妆品(バイオサイエンスとインダストリ一，1998年，第56卷，第1号，p.11-16)。此外，还用作果汁饮料或清凉饮料水、普通食品的味感调整或风味改善的食品添加剂，也可以用作香料的原料(第7版，食品添加剂法定解释说明书，广川书店，1998年，p.D-1114-1115)。

已知羟脯氨酸具有抑制肌肤老化作用和改善肤质作用(国际公开第00/51561号小册子、特开2002-80321号公报)、消炎作用、抗风湿作用、镇痛作用和创伤治愈作用(特开平8-337526号公报)等药理作用，不过没有关于抗肥胖作用的报告。

发明内容

本发明的目的是提供抗肥胖剂或用于抗肥胖的食品饮料、食品饮料添加剂、饲料或饲料添加剂

本发明涉及下述(1)～(7)：

(1)一种抗肥胖剂，其中含有作为有效成分的羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其在药理学上允许的盐。

(2)用于抗肥胖的食品饮料或食品饮料添加剂，其中作为有效成分含有羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其在药理学上允许的盐。

(3)用于抗肥胖的饲料或饲料添加剂，其中作为有效成分含有羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其在药理学上允许的盐。

(4)抑制肥胖的方法，其特征是，给予羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其在药理学上允许的盐。

(5)羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其在药理学上允许的盐在制造抗肥胖剂中的应用。

(6)羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其在药理学上允许的盐在制造用于抗肥胖的食品饮料或食品饮料添加剂中的应用。

(7)羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其在药理学上允许的盐在制造用于抗肥胖的饲料或饲料添加剂中的应用。

具体实施方式

羟脯氨酸作为胶原中的主要构成氨基酸成分以及弹性蛋白的构成氨基酸广泛存在于自然界中。因为脯氨酸有D型或L型，羟基的位置可以在3位或4位，以及其立体构象有顺式和反式之分，所以天然存在的羟脯氨酸已知有8种立体结构。具体可列举：顺式-4-羟基-L-脯氨酸、顺式-4-羟基-D-脯氨酸、顺式-3-羟基-L-脯氨酸、顺式-3-羟基-D-脯氨酸、反式-4-羟基-L-脯氨酸、反式-4-羟基-D-脯氨酸、反式-3-羟基-L-脯氨酸和反式-3-羟基-D-脯氨酸等。

在本发明中，可以使用任何一种羟脯氨酸，优选使用反式-4-羟基-L-脯氨酸。

可以按照常规方法酸水解来自猪或牛等动物的胶原，纯化获取羟脯氨酸，优选用微生物制造的羟脯氨酸。

作为微生物，可以使用选自属于淀粉霉( Amycolatopsis)属、指孢囊菌( Dactylosporangium)属和链霉菌( Streptomyces)属的微生物或已导入来自上述微生物的脯氨酸3位水解酶或脯氨酸4位水解酶基因的微生物。可以按照Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Second Edition，Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons(1987-1997)等中记载的方法，向微生物中导入来自属于淀粉霉属、指孢囊菌属和链霉菌属的微生物的脯氨酸3位水解酶或脯氨酸4位水解酶基因。

例如，可以用从属于淀粉霉属或指孢囊菌属的微生物中分离出的脯氨酸4位水解酶(特开平7-313179号公报)制造反式-4-羟基-L-脯氨酸，或也可以用从属于链霉菌属的微生物中分离的脯氨酸3位水解酶(特开平7-322885号公报)制造顺式-3-羟基-L-脯氨酸(Bioindustrial， 14，31(1997))。

本发明所用的羟脯氨酸的N-酰基化衍生物，可以是上述各种羟脯氨酸的立体异构体的N-酰基化衍生物。作为该N-酰基化衍生物，没有特别的限制，优选碳原子数2～23、更优选碳原子数2～12、特别优选碳原子数2～6的酰基，具体可以列举：乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、己酰基、庚酰基、辛酰基、癸酰基、二十烷酰基、三十烷酰基等。

可以按照例如：国际公开第00/51561号小册子等中记载的公知的方法，从羟脯氨酸出发制造羟脯氨酸的N-酰基化衍生物。

可以用结晶、层析等常用的纯化方法纯化得到的羟脯氨酸的N-酰基化衍生物。

作为羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物的药理学上允许的盐，可列举：钠盐、钾盐等碱金属盐；镁盐、钙盐等碱土类金属盐；铵、四甲基铵等铵盐；加成吗啉、哌啶基等有机胺的加成盐等。

本发明的抗肥胖剂是作为有效成分含有单独或混合羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其盐的、或与任意其他用于治疗的有效成分的混合物的制剂。

可将有效成分与药理学上允许的一种或一种以上的载体一起混合，按照在制剂学技术领域公知的任意方法制造该制剂。

希望制剂的给予方式使用在治疗时最能发挥效果的方式，可列举：口服给药或例如：经脉内、腹膜内以及皮下给药等非口服给药，但优选口服给药。

作为给药的剂型可以采用，例如：片剂、散剂、颗粒剂、丸剂、悬浊剂、乳剂、浸出剂、煎剂、胶囊、糖浆、液体制剂、酏剂、提取剂、酊剂、流体提取剂等口服剂、注射剂、点滴剂、膏剂、栓剂等非口服剂中的任何一种，优选作为口服剂使用。

制备口服剂时，可以使用赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、分散剂、悬浊剂、乳化剂、稀释剂、缓冲剂、抗氧化剂、细菌抑制剂等添加剂。

可以添加下述物质制造适于口服给药的制剂，例如：糖浆这种液体制剂可以添加水、蔗糖、山梨糖醇、果糖等糖类；聚乙二醇、丙二醇等二醇类；芝麻油、橄榄油、大豆油等油类；P-羟基苯甲酸酯类等防腐剂；对羟基苯甲酸甲酯等对羟基苯甲酸衍生物、苯甲酸钠等保存剂；草莓香料、薄荷香料类等，进行制剂。

而且，可以添加下述物质适于口服给药制剂，例如：片剂、散剂以及颗粒剂等，可以添加乳糖、白糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇等糖类；马铃薯、小麦、玉米等淀粉；碳酸钙、硫酸钙、碳酸氢钠、氯化钠等无机物；结晶纤维素、甘草粉末、龙胆粉末等植物粉末等赋形剂；淀粉、琼脂、明胶、结晶纤维素、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、碳酸钙、碳酸氢钠、藻酸钠等崩解剂；硬脂酸镁、滑石、加氢植物油、聚乙二醇、硅油等润滑剂；聚乙烯醇、羟丙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、明胶、淀粉糊精液等粘合剂；脂肪酸酯等表面活性剂、甘油等塑型剂等，进行制剂。

可以使用含有下述物质的载体制备适于非口服给药的制剂，例如：优选含有与接收制剂者的血液等张力的羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其盐的灭菌的水性制剂。例如：注射剂时，使用盐溶液、葡萄糖溶液或盐溶液和葡萄糖溶液的混合物组成的载体等制备注射用溶液。

而且，在这些非口服制剂中，可以添加口服制剂中列举的稀释剂、防腐剂、香料类、赋形剂、崩解剂、润滑剂、粘合剂、表面活性剂、塑型剂等中的一种或多种上述辅助成分。

本发明的制剂的给药剂量和给药次数，根据给药方式、患者的年龄、体重、治疗对应症状的性质或严重程度而有所不同，通常，成人每天给药1次至数次，给予5mg～5000mg、优选50mg～5000mg的羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其盐。

给药周期没有特别的限定，通常为1天～1年，优选2周～3个月。

并且，本发明的制剂不仅可以用于人，也可以用于人以外的动物(下面，略称为非人动物)。

作为非人动物可列举：哺乳类、鸟类、爬虫类、两栖类、鱼类等人以外的动物。

对非人动物的给药时的给药剂量，根据动物的年龄、种类、症状的性质或严重程度而有所不同，通常每1kg体重每天给药一次到数次，给予0.5mg～500mg、优选5mg～500mg的羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其盐。

给药周期没有特别的限定，通常为1天～1年，优选2周～3个月。

用与本发明的制剂同样的方法，制备作为有效成分含有羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其盐的食品饮料添加剂。

根据需要，混合或溶解其他食品饮料添加剂加工、制造成如：粉末、颗粒、散丸、片剂、各种液体制剂的形式的本发明的食品饮料添加剂。

除了在食品饮料中添加羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其盐、或本发明的食品饮料添加剂之外，可按照一般的食品饮料的制造方法加工、制造本发明的食品饮料。

此外，本发明的食品饮料可采用如下方法进行制造。如：流动层制粒、搅拌制粒、挤压制粒、转动制粒、气流制粒、压缩成型制粒、分解破碎制粒、喷雾制粒、喷射制粒等制粒方法；盘式包覆、流动层包覆、干法包覆等包覆方法；粉状干燥、过剩水蒸汽法、发泡法、微波加热法等膨化方法；挤压制粒机或挤塑机等挤压方法进行制造。

作为本发明的食品饮料可以是下述任何一种形式，例如：果汁类、清凉饮料水、茶类、乳酸菌饮料、发酵乳、冷点、黄油、奶酪、酸乳、加工乳、脱脂乳等乳制品；火腿、香肠、汉堡等畜肉制品；鱼糕、鱼卷、油炸鱼丸等鱼肉制品；蛋卷、鸡蛋豆腐等鸡蛋制品；饼干、果冻、口香糖、糖果、零食点心等点心类；面包类、面类、腌制物类、熏制品、晾干物、煮制物、盐制保藏品、汤类、调味料等。

而且，本发明的食品饮料还可以是下述形式，例如：粉末状食品、片层状食品、瓶装食品、罐装食品、袋装食品、胶囊粒状食品、片剂状食品、流动食品、饮料剂等。

本发明的食品饮料可以用做具有抗肥胖作用的健康饮料食品或功能性饮料食品。

在本发明的食品饮料或食品饮料添加剂中还可以添加用于一般食品饮料的添加剂，例如：食品添加剂手册(日本食品添加剂协会，平成9年1月6日发行)中记载的甜味剂、着色剂、保存剂、增粘稳定剂、防氧化剂、发色剂、漂白剂、防霉菌剂、胶基质、苦味剂、酶、光泽剂、酸味剂、调味剂、乳化剂、强化剂、制造用剂、香料、香辛料提取物等。

可根据食品饮料的种类、期望摄取该食品饮料产生的效果等适当选择向本发明的食品饮料中加入的羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其盐、或食品饮料添加剂的添加量。通常添加使之含有0.1重量％～100重量％、优选1.0重量％～100重量％的羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其盐。

根据摄取方式、摄取者的年龄、体重等差异，通常成人每天，一次或数次口服给予，即摄取本发明的食品饮料，其中含5mg～5000mg、优选50mg～5000mg的羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其盐。

摄取周期没有特别限制，通常为1天～1年，优选2周～3个月。

用与本发明的食品饮料添加剂相同的方法，制备作为效成分含有羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其盐的饲料添加剂。根据需要，混合或溶解其他饲料添加剂，加工、制造成例如：粉末、颗粒、散丸、片剂、各种液体制剂形式的本发明的饲料添加剂。

除了在非人动物用的饲料中添加羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其盐、或本发明的饲料添加剂之外，可以用一般的饲料制造方法加工、制造本发明的饲料。

作为非人动物用的饲料，可以是哺乳类、鸟类、爬虫类、两栖类或鱼类等任何一种非人动物用的饲料，可列举：狗、猫、鼠等宠物用的饲料，牛、猪等家畜用的饲料，鸡、七面鸟等家禽用的饲料，鲷鱼、鲥鱼等养殖鱼用的饲料等。

作为添加羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其盐、或本发明的饲料添加剂的饲料，可列举：谷物类、糠类、植物油残渣类、动物饲料原料、其他的饲料原料、纯化品等。

谷物类可列举：高梁、小麦、大麦、燕麦、黑麦、黑米、荞麦、谷子、黍、稗子、玉米、大豆等。

糠类可列举：米糠、脱脂米糠、麸皮、粉末、小麦胚芽、麦糠、片、玉米糠、玉米胚芽等。

植物油残渣类可列举：大豆油残渣、黄豆粉、亚麻籽油残渣、棉籽油残渣、花生油残渣、红花油残渣、椰子油残渣、棕榈油残渣、芝麻油残渣、向日葵油残渣、菜籽油残渣、木棉油残渣、芥末油残渣等。

动物饲料原料可列举：鱼粉(北洋粉、输入粉、ホ一ルミ一ル、沿岸粉)、鱼汁、肉粉、肉骨粉、血粉、分解毛、骨粉、家畜用处理副产品、羽毛粉、蚕蛹、脱脂乳粉、酪蛋白、干燥乳清等。

其他的饲料原料可列举：植物茎叶类(紫苜蓿、ヘイキユ一ブ、紫苜蓿叶子粉、刺槐粉末等)、玉米加工工业副产品(玉米粉、玉米饲料、玉米渣(ステ一プリカ一)等)、淀粉加工品(淀粉等)、砂糖、发酵工业产品(酵母、啤酒残渣、麦芽根、酒糟、酱油残渣等)、农业制造副产品(柑桔加工残渣、豆腐残渣、咖啡残渣、可可残渣等)、蕃薯树、蚕豆、银菊粉、海藻、磷虾类、蓝藻类、绿藻、矿物等。

纯化品可列举：蛋白质(酪蛋白、白蛋白等)、氨基酸、糖类(淀粉、纤维素、蔗糖、葡萄糖等)、矿物质、维生素等。

本发明的饲料可采用如下方法进行制造。如：流动层制粒、搅拌制粒、挤压制粒、转动制粒、气流制粒、压缩成形制粒、分解破碎制粒、喷雾制粒、喷射制粒等制粒方法；盘式包覆、流动层包覆、干法包覆等包覆方法；粉状干燥、过剩水蒸汽法、发泡法、微波加热法等膨化方法；挤压制粒机或挤塑机等挤压方法进行制造。

本发明的饲料可用作抗肥胖饲料。

根据饲料的种类、期望摄取该饲料得到的效果适当选择向本发明的饲料中添加的羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其盐、或饲料添加剂的量，通常添加使之含有0.1重量％～100重量％、优选1.0重量％～100重量的羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其盐。

让非人动物摄取本发明的饲料时，根据摄取形式、摄取动物的种类、该动物的年龄、体重等而有所不同，通常每1kg体重每天，一次或数次口服给予，即摄取0.5mg～500mg、优选5mg～500mg的羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其盐。

摄取周期没有特别限制，通常为1天～1年，优选2周～3个月。

用上述方法，通过给予人或非人动物羟脯氨酸或羟脯氨酸的N-酰基化衍生物或其盐可以抑制该人或该非人动物的肥胖。

以下说明本发明的最佳实施方式

实施例1

将15只发生2型糖尿病肥胖的动物模型KK-Ay/Ta Jcl小鼠(日本クレア社、雄性、6周龄)按照每组5只分成3组，定为第1组～第3组。

让第1组～第3组的小鼠自由摄食、饮水。让第1组的小鼠摄取市售的饲料CE-2(日本クレア社制造)。让第2组的小鼠摄取添加1重量％的反式-4-羟基-L-脯氨酸(协和发酵工业社制造，以下略称为羟脯氨酸)的CE-2。让第3组小鼠摄取添加1重量％的反式-N-乙酰-4-羟基-L-脯氨酸(协和发酵工业社制造，以下略称为N-乙酰羟脯氨酸)的CE-2。

测定实验开始当天和第17天后的体重以及从实验开始当天到第17天后的摄食量。对每个个体计算实验期间的总摄食量相对应的实验期间增加的体重，以此作为肥胖发展的指标。数值用平均值±标准误差(n＝5)表示，通过t检验计算统计学的可信度(p值)。

上述计算结果如表1所示。

         表1

增加的体重/摄食量(％)
		第1组第2组第3组	8.1±0.65.8±0.44.2±0.6*

*：相对第1组，p＜0.05

从表1可知，与第1组每单位摄食量对应的体重增加相比，第3组的每单位摄食量对应的体重增加有意义地表现出低值。而且，第2组的每单位摄食量对应的体重增加与第1组的每单位摄食量对应的体重增加相比，也有表现出低值的趋势。通过该结果可以确定羟脯氨酸以及N-乙酰羟脯氨酸具有抗肥胖作用。

实施例2

向表2记载的配合的组合物中加入水至1000ml，制造用于抗肥胖的清凉饮料水(分成10瓶)。

      表2

组成	含量
		羟脯氨酸维生素C维生素B1维生素B2维生素B6液体糖柠檬酸香料	5g1g5mg10mg25mg150g3g1g

实施例3

提取表3记载的配合的组合物使水体积为1000ml，制造用于抗肥胖的荼饮料1000ml。

     表3

组成	含量
		羟脯氨酸茶叶	5g15g

实施例4

按照表4记载的配合制造用于抗肥胖的口香糖(30个的量)。

           表4

组成	含量
		羟脯氨酸胶基质砂糖饴糖香料	1.5g25g63g10g1g

实施例5

按照表5记载的配合制造用于抗肥胖的糖果(20个的量)。

        表5

组成	含量
		羟脯氨酸砂糖饴糖香料	1g80g20g0.1g

实施例6

按照表6记载的处方，用常规方法制造用于抗肥胖的片剂(每片200mg)。

             表6

组成	含量
		羟脯氨酸乳糖玉米淀粉合成硅酸铝羧甲基纤维素钙硬脂酸镁	50mg90mg30mg12mg15mg3mg

实施例7

按照表7记载的处方，用常规方法制造用于抗肥胖的散剂(每包550mg)。

         表7

组成	含量
		N-乙酰羟脯氨酸乳糖玉米淀粉	50mg300mg200mg

实施例8

按照表8记载的处方，制造用于抗肥胖的硬胶囊(每个胶囊160mg)。

      表8

组成	含量
		羟脯氨酸乳糖玉米淀粉羟丙基纤维素	50mg60mg30mg20mg

向50mg羟脯氨酸中添加60mg乳糖和30mg玉米淀粉，混合，向其中添加含20mg羟丙基纤维素的水溶液，混炼。然后，用挤压造粒机按照常规方法制造颗粒。将该颗粒填充到明胶硬胶囊中，制造硬胶囊。

实施例9

按照表9记载的处方制造用于抗肥胖的软胶囊(每个胶囊170mg)。

       表9

组成	含量
		N-乙酰羟脯氨酸大豆油	50mg120mg

向120mg大豆油中添加50mg N-乙酰羟脯氨酸，混合。然后用旋转模式自动成型机按照常规方法，将其填充到软胶囊中，制造软胶囊。

产业上的可利用性

根据本发明，提供了作为有效成分含有羟脯氨酸或N-酰基化羟脯氨酸衍生物以及其药理学上允许的盐的抗肥胖剂、用于抗肥胖的食品饮料、食品饮料添加剂、饲料或饲料添加剂。

Claims (3)

1.反式-4-羟基-L-脯氨酸或反式-4-羟基-L-脯氨酸的N-酰基化衍生物或其在药理学上允许的盐在制造抗肥胖剂中的应用，其中，酰基化衍生物中的酰基为碳原子数2～23的酰基。

2.反式-4-羟基-L-脯氨酸或反式-4-羟基-L-脯氨酸的N-酰基化衍生物或其在药理学上允许的盐在制造用于抗肥胖的食品饮料或食品饮料添加剂中的应用，其中，酰基化衍生物中的酰基为碳原子数2～23的酰基。

3.反式-4-羟基-L-脯氨酸或反式-4-羟基-L-脯氨酸的N-酰基化衍生物或其在药理学上允许的盐在制造用于抗肥胖的饲料或饲料添加剂中的应用，其中，酰基化衍生物中的酰基为碳原子数2～23的酰基。