CN100335075C - 从苦豆子中提取降血脂有效成分的方法及其医药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从苦豆子中提取降血脂有效成分的方法及其医药用途，是将苦豆子种子或地上部位通过有机溶剂萃取得到正丁醇部位，所得到的正丁醇部位含总皂苷类、黄酮及双黄酮类化合物。通过实验证明：正丁醇部位具有降低血清TC，TG的作用，同时具有降低MDA、升高SOD活性的作用。肝脏病理切片证明药物还抑制和逆转了脂肪肝的发展。说明该有效部位能有效治疗外源性高脂血症，并同时具有治疗因高脂血症引发的脂肪肝的作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种从植物苦豆子中提取降血脂有效成分的方法及其医药用途，尤其是对治疗降血脂、脂肪肝及抗氧化的应用。
背景技术
高胆固醇血症引起的动脉粥样硬化(AS)不但是冠心病的主要根源，同样也是脑血管疾病，如脑血栓形成，中风的重要病因。此外人脑细胞内积聚的胆固醇酯还和老年性痴呆症的形成有关。体内胆固醇来源有内源和外源。内源胆固醇由自体合成，外源胆固醇则来源于饮食。内源性胆固醇合成亢进和家族性高胆固醇血症在西方国家比较普遍。在美国，40％以上的成年人的LDL胆固醇含量超过正常水平。但目前欧美市场流行的抑制内源性胆固醇生成药物不能从根本上治疗广义的动脉粥样硬化心脑血管疾病。实验及临床实践表明：许多中药具有治疗内源性及外源性高胆固醇血症的作用。应用有调血脂、抗高血压及抗自由基等作用的中药可阻碍AS发生、发展，保护心血管功能。动物喂饲富含胆固醇的高脂饲料可形成外源性高脂血症病理模型，其病理状态与人类相似。
豆科植物苦豆子(Sophora alopecuroides L.)是广泛分布于西北荒漠地区的药用植物，根据维吾尔药志所述，其浸膏及生物碱的药理作用包括：平喘、镇咳、驱痰、抗菌、抗肿瘤等。同时有文献报道从苦豆子中提取的苦参碱具有降低高血脂症大鼠血清总甘油三酯(TG)的作用。但以苦豆子为原料制备苦豆子总皂苷并制成药物用于治疗高脂血症至今未见报道。
发明内容
本发明目的在于，所述的从苦豆子中提取降血脂有效成分的方法及其医药用途，是将苦豆子种子或地上部位通过有机溶剂萃取得到黄色粉末的提取物正丁醇。所得到的正丁醇部位含总皂苷类、黄酮及双黄酮类化合物。通过动物实验证明：正丁醇部位具有降低血清TC，TG的作用，同时具有降低MDA、升高SOD活性的作用。肝脏病理切片证明药物还抑制和逆转了脂肪肝的发展。说明该正丁醇有效部位能有效治疗外源性高脂血症，并同时具有治疗因高脂血症引发的脂肪肝的作用。
本发明所述的从苦豆子中提取降血脂有效成分的方法及其医药用途包括以下工艺步骤：
取苦豆子的种子或地上部位，用30-95％乙醇提取三次，或用水提取60-95％乙醇沉淀的方法提取，过滤，浓缩；浓缩液用酸水酸化，酸性水溶液用正丁醇萃取，减压浓缩，得到的浸膏用2％的药用活性碳脱色，减压浓缩，干燥得黄颜色粉末的苦豆子有效部位；
苦豆子有效成分包括：总皂苷类、黄酮及双黄酮类化合物；
苦豆子有效成分作为制备治降血脂、脂肪肝及抗氧化的应用；
苦豆子有效成分与其他中药或西药以任意比例混合作为制备治降血脂，抗氧化及脂肪肝的应用；
苦豆子有效成分作为制备保健食品用于高脂血症及脂肪肝的预防或患者恢复期的应用。
本发明所述的从苦豆子中提取降血脂有效成分的方法及其医药新用途的动物实验为：
实验1
根据本发明所述的方法制备的苦豆子正丁醇部位制剂直接用于制备治疗降血脂，抗氧化及脂肪肝的药物应用。
血脂康(北大维信生物制药有限公司)。
总蛋白、MDA及SOD试剂盒(南京建成生物工程有限公司)。
有机溶剂均为国产分析纯。
方法：
高脂模型制备及分组：取雄性Wistar大鼠30只，体重180±1分为4组，除A.空白对照组外其余3组用高脂饲料喂养法(配方：2％胆固醇+0.5％去氧胆酸钠+10％猪油+87.5％基础饲料)制备大鼠高胆固醇血症模型。再将高脂动物按体重随机分为：B.高脂对照组；C.血脂康治疗组(300mg/kg)；D.K-1低剂量组(500mg/kg)；E.K-1高剂量组(1000mg/kg)。各组动物根据体重每天ig相应剂量药物，高脂对照组每天ig生理盐水一次。两周后禁食12小时(不禁水)断尾取血测血清TC，TG和HDL-C。
肝组织MDA及SOD测定：末次取血后将动物断头处死，取大鼠肝左叶0.1g制备10％组织匀浆，台式高速离心机(sigma)2000r/min离心15min，再取上清10000r/min离心10min，所得上清即为肝微粒体sup。总蛋白试剂盒测定蛋白浓度(考马斯亮蓝法)。按试剂盒说明书操作测定MDA及SOD。
肝脏病理学检测：取肝左叶，体积分数10％甲醛固定，常规HE染色，按范建高法将脂肪肝病理分为轻度：光镜下每单位面积见1/3-2/3的肝细胞脂肪变；中度：2/3以上的肝细胞脂肪变；重度：所有肝细胞均发生脂肪变；无：肝小叶结构完好，基本无脂变。
数据分析：所有数据以
x±s表示，t检验进行统计学分析。
结果
药物对血脂的影响：实验证明K-1制剂能有效降低高脂血症大鼠血浆中TC含量，且高剂量组降TC作用明显优于血脂康(15倍临床剂量)。低剂量组无降低TG作用，但高剂量组降TG作用明显。药物对HDL-C的作用无法判断。见表1
表1K-1制剂对高脂血症大鼠血脂影响n＝6
| 组别 | 剂量mg/kg | TC mmol/L | TG mmol/L | HDL-C mmol/L |
| ABCDE | 生理盐水3005001000 | 1.57±0.184.89±0.742.89±0.31··3.03±0.28··1.91±0.17··△△** | 0.76±0.120.92±0.150.52±0.12··0.99±0.120.66±0.12··** | 0.49±0.071.56±0.271.04±0.121.19±0.300.81±0.21 |
··与高脂组相比有非常显著差异P＜0.01。△△与血脂康组相比有非常显著差异P＜0.01。
**与K-1低剂量组相比有非常显著差异P＜0.01。
药物对肝组织MDA及SOD的影响：K-1制剂清除体内脂质过氧化产物LPO的能力比较显著P＜0.01，并随剂量增大效果加强。对SOD的活力有一定提高，但效果并不优于血脂康。
表2K-1制剂对大鼠肝组织内MDA及SOD的影响n＝6
| 组别 | MDA nmol/mgprot | SOD U/mgprot |
| ABCDE | 0.99±0.101.54±0.210.58±0.11··0.69±0.17··0.52±0.28·· | 22.26±3.5918.31±2.4523.29±2.93··21.58±2.65··21.09±2.03·· |
··与高脂组相比有非常显著差异P＜0.01。
药物对肝脂变的影响：肝组织HE染色光镜下观察可以发现，空白组无肝脂变；高脂模型肝脂变达90％以上为重度脂肪肝；K-1低剂量组肝脂变约为60％为中度脂肪肝；K-1高剂量组肝脂变低于40％为轻度脂肪肝。说明苦豆子有效部位有抑制脂肪肝发展并逆转脂肪肝的作用。
实验2
根据本发明所述方法制备苦豆子正丁醇部位与中药芹菜种子以2∶1比例混合制成复合制剂。
血脂康(北大维信生物制药有限公司)。
有机溶剂均为国产分析纯。
方法：
高脂模型制备及分组：取雄性Wistar大鼠32只，体重180±10g，分为4组，除A.空白对照组外其余3组用高脂饲料喂养法(配方：2％胆固醇+0.5％去氧胆酸钠+10％猪油+0.2％甲基硫氧嘧啶+87.3％基础饲料)制备大鼠高胆固醇血症模型。再将高脂动物按体重随机分为：B.血脂康治疗组(300mg/kg)；C.K-2低剂量组(750mg/kg)；D.高脂对照组。各组动物根据体重每天ig相应剂量药物，高脂对照组每天ig生理盐水一次。两周后禁食12小时(不禁水)断尾取血测血清TC，TG和HDL-C。
数据分析：所有数据以
x±s表示，t检验进行统计学分析。
结果
实验证明，苦豆子有效部位与其他中药或西药混合制剂也有降低高脂血症大鼠TC及TG的作用，同时具有升高HDL-C的作用。结果见
表1
表1苦豆子有效部位与中药芹菜种子的复合制剂对高脂血症大鼠血脂影响n＝8
| 组别 | 剂量mg/kg | TGmmol/L | TCmmol/L | HDL-Cmmol/L |
| ABCD | 300750生理盐水 | 0.82±0.090.77±0.130.74±0.070.97±0.15 | 1.67±0.239.83±2.25··5.76±2.19··△△17.64±2.48 | 0.38±0.050.94±0.05··0.93±0.1··0.67±0.16 |
··与高脂对照组相比有非常显著意义P＜0.01.△△与血脂康组相比有显著意义P＜0.01
具体实施方式
实施例1
取苦豆子的种子，用30％乙醇提取三次，过滤，浓缩；浓缩液用酸水酸化，酸性水溶液用正丁醇萃取，减压浓缩，得到的浸膏用2％的药用活性碳脱色，减压浓缩，干燥得黄颜色粉末的苦豆子有效部位；
苦豆子有效成分包括：总皂苷类、黄酮及双黄酮类化合物；
苦豆子有效成分作为制备治降血脂、脂肪肝及抗氧化的应用，或将苦豆子有效成分与其他中药或西药以任意比例混合作为制备治降血脂，抗氧化及脂肪肝的应用，或将苦豆子有效成分作为制备保健食品用于高脂血症及脂肪肝的预防或患者恢复期的应用。
实施例2
取苦豆子的地上部位，用60％甲醇提取三次，过滤，浓缩；浓缩液用酸水酸化，酸性水溶液用正丁醇萃取，减压浓缩，得到的浸膏用2％的药用活性碳脱色，减压浓缩，干燥得黄颜色粉末的苦豆子有效部位；
苦豆子有效成分包括：总皂苷类、黄酮及双黄酮类化合物；
苦豆子有效成分作为制备治降血脂、脂肪肝及抗氧化的应用，或将苦豆子有效成分与其他中药或西药以任意比例混合作为制备治降血脂，抗氧化及脂肪肝的应用，或将苦豆子有效成分作为制备保健食品用于高脂血症及脂肪肝的预防或患者恢复期的应用。
实施例3
取苦豆子的种子，用水提取60-95％乙醇沉淀的方法提取，过滤，浓缩；浓缩液用酸水酸化，酸性水溶液用正丁醇萃取，减压浓缩，得到的浸膏用2％的药用活性碳脱色，减压浓缩，干燥得黄颜色粉末的苦豆子有效部位；
苦豆子有效成分包括：总皂苷类、黄酮及双黄酮类化合物；
苦豆子有效成分作为制备治降血脂、脂肪肝及抗氧化的应用，或将苦豆子有效成分与其他中药或西药以任意比例混合作为制备治降血脂，抗氧化及脂肪肝的应用，或将苦豆子有效成分作为制备保健食品用于高脂血症及脂肪肝的预防或患者恢复期的应用。
Claims (1)
1、一种苦豆子有效部位总皂苷类、黄酮及双黄酮类化合物在制备治疗降血脂、脂肪肝及抗氧化的药物的应用，其特征在于苦豆子有效部位按以下方法制成：
取苦豆子的种子或地上部位，用30％乙醇提取三次，过滤，浓缩；浓缩液用酸水酸化，酸性水溶液用正丁醇萃取，减压浓缩，得到的浸膏用2％的药用活性碳脱色，减压浓缩，干燥得到黄颜色粉末的苦豆子有效部位总皂苷类、黄酮及双黄酮类化合物。
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| 苦豆子中新的双黄酮甙的分离与鉴定 李淑玉等，中草药，第23卷第8期 1992 * |
| 苦豆子的研究进展 杨家新等，天津药学，第10卷第1期 1998 * |
| 苦豆子类生物碱的药理学研究进展 黄秀梅等，中国药事，第16卷第3期 2002 * |
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